專利名稱：免疫調(diào)節(jié)雜環(huán)化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新穎的雜環(huán)化合物、其制備方法、含有它們的組合物和臨床治療從免疫調(diào)節(jié)受益的醫(yī)學(xué)病癥的方法和用途，這些醫(yī)學(xué)病癥是，例如自身免疫疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、糖尿病、哮喘、移植、系統(tǒng)性紅斑狼瘡和銀屑病。本發(fā)明更特別涉及新穎的、用于免疫抑制的雜環(huán)化合物，它們是能抑制CD80和CD28相互作用的CD80拮抗劑。
背景技術(shù)：
免疫系統(tǒng)擁有在免疫應(yīng)答之中和之后通過各種調(diào)節(jié)機(jī)制控制在淋巴細(xì)胞的激活和失活之間的體內(nèi)穩(wěn)態(tài)的能力。特異地抑制和/或關(guān)閉免疫應(yīng)答是其中的一種機(jī)制。那么，當(dāng)MHC分子將抗原呈遞到T-細(xì)胞受體時(shí)，只有存在輔助刺激信號(hào)才能合適地激活T-細(xì)胞。不存在這些輔助信號(hào)時(shí)，淋巴細(xì)胞不會(huì)激活，同時(shí)既會(huì)誘導(dǎo)稱為無反應(yīng)性或耐受性的功能性失活，T-細(xì)胞也會(huì)由程序性細(xì)胞凋亡而特異性地消除。
一種這樣的輔助刺激信號(hào)參與在特化的呈抗原細(xì)胞上的CD80與在T-細(xì)胞上的CD28之間的相互作用，該信號(hào)已證實(shí)對全T-細(xì)胞激活是必需的(Lenschow等著。(1996)Annu.Rev.Immunol.，14，233-258)。因此，需要提供可抑制這種CD80/CD28相互作用的化合物。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供結(jié)構(gòu)式(I)所示的化合物或其藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑化物 其中R1和R3獨(dú)立代表H、F、Cl、Br、-NO2和-CN；任選被F或Cl取代的C1-C6烷基；或任選被F取代的C1-C6烷氧基；R4代表羧酸基團(tuán)(-COOH)或其酯、或-C(＝O)NR6R7、-NR7C(＝O)R6、-NR7C(＝O)OR6、-NHC(＝O)NR7R6或-NHC(＝S)NR7R6，其中R6代表H，或結(jié)構(gòu)式為-(Alk)m-Q的基團(tuán)，其中m是0或1，Alk是任選取代的二價(jià)直鏈或支鏈C1-C12亞烷基，或C2-C12亞烯基，或C2-C12亞炔基或二價(jià)的C3-C12的碳環(huán)基團(tuán)，任何這些基團(tuán)可含有一個(gè)或多個(gè)-O-、-S-或-N(R8)-鍵，其中R8代表H或C1-C4烷基、C3-C4鏈烯基、C3-C4炔基或C3-C6環(huán)烷基；Q代表H或-NR9R10，其中R9和R10獨(dú)立地代表H、C1-C4烷基、C3-C4鏈烯基、C3-C4炔基、C3-C6環(huán)烷基、酯基團(tuán)，可任選取代的碳環(huán)或雜環(huán)基團(tuán)；或當(dāng)R9和R10與其所連接的N相連時(shí)形成一個(gè)可任選取代的環(huán)；R7代表H或C1-6烷基，或當(dāng)R6、R7與它們所連接的一個(gè)或幾個(gè)原子相連時(shí)形成具有5、6或7個(gè)環(huán)原子的可任選取代的單環(huán)雜環(huán)；X代表一根鍵或結(jié)構(gòu)式為-(Z)n-(Alk)-或-(Alk)-(Z)n-的二價(jià)基團(tuán)，其中Z代表-O-、-S-或-NH-，Alk見與R6有關(guān)的定義，n是0或1。
化合物(I)可以互變體的形式存在，例如(I1)和(I2) 在下文中，本發(fā)明的化合物可代表和指(I)的任何互變體形式，同時(shí)應(yīng)理解為結(jié)構(gòu)(I)的任何和所有互變體形式，特別是(I1)和(I2)均包括在本發(fā)明中。
通用結(jié)構(gòu)式(I)所示的化合物是CD80拮抗劑。它們抑制CD80和CD28之間相互作用從而抑制了T細(xì)胞激活，因此調(diào)節(jié)了免疫應(yīng)答。
因此本發(fā)明也包括(i)用于治療從免疫調(diào)節(jié)受益的醫(yī)學(xué)病癥，特別是用于免疫抑制的結(jié)構(gòu)式(I)所示的化合物或其藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)上可接受的鹽。
(ii)結(jié)構(gòu)式(I)所示的化合物或其藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)上可接受的鹽在制造用于治療從免疫調(diào)節(jié)受益的醫(yī)學(xué)病癥，特別是用于免疫抑制的藥物中的用途。
(iii)在包括人類的哺乳動(dòng)物中免疫調(diào)節(jié)，特別是免疫抑制的方法，包括向需要這種治療的哺乳動(dòng)物施加免疫調(diào)節(jié)有效劑量的結(jié)構(gòu)式(I)所示的化合物或其藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)上可接受的鹽。
(iv)包括結(jié)構(gòu)式(I)所示的化合物或其藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)上可接受的賦形劑或載體的藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)組合物。
從免疫調(diào)節(jié)受益的病癥包括急性彌散性腦脊髓炎腎上腺機(jī)能不全變應(yīng)性脈管炎和肉芽腫病淀粉樣變性病(Amylodosis)強(qiáng)直性脊柱炎哮喘自身免疫阿狄森病自身免疫脫發(fā)自身免疫慢性活動(dòng)型肝炎自身免疫溶血性貧血自身免疫Neutrogena自身免疫血小板減少紫癜(thrombocytopenic purpura)貝切特氏病小腦變性慢性活動(dòng)型肝炎慢性炎性脫髓鞘多神經(jīng)根神經(jīng)病慢性單克隆丙種蛋白神經(jīng)病典型結(jié)節(jié)性動(dòng)脈周圍炎先天性腎上腺增生寒冰病杜林病糖尿病伊頓-蘭伯特肌無力綜合癥腦脊髓炎后天性大皰性表皮松懈癥結(jié)節(jié)性紅斑谷蛋白敏感性腸道病古德帕斯徹氏綜合癥傳染性神經(jīng)元炎淋巴瘤樣甲狀腺炎甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)原發(fā)性血色素沉著癥膜性腎小球腎炎分離中樞神經(jīng)系統(tǒng)脈管炎(Isolated vasculitis of the central nervoussystem)Kawasaki氏病(Kawasaki’s disease)最小變化腎病(Minimal change renal disease)混雜性脈管炎(Miscellaneous vasculitides)混合結(jié)締組織病傳導(dǎo)阻滯的多病灶運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病(Multifocal motor neuropathy with conductionblock)多發(fā)性硬化重癥肌無力視性眼陣攣/肌陣攣綜合癥類天皰瘡天皰瘡惡性貧血多肌炎/皮肌炎傳染后關(guān)節(jié)炎(Post-infective arthritides)原發(fā)性肝硬化銀屑病反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎萊特氏病視網(wǎng)膜病類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎硬化性膽管炎Sjgren氏綜合癥全身強(qiáng)直綜合癥亞急性甲狀腺炎系統(tǒng)性紅斑狼瘡系統(tǒng)性壞死性血管炎系統(tǒng)性硬皮病大動(dòng)脈炎顳動(dòng)脈炎血栓閉塞性血管炎I型和II型自身免疫多腺綜合癥潰瘍性結(jié)腸炎眼色素層炎韋格納肉芽腫病用在文中的術(shù)語“酯”指-COOR形式的基團(tuán)，其中R是名義上從醇類ROH衍生出的基團(tuán)。酯基團(tuán)的例子包括生理學(xué)上可水解的酯，例如甲酯，乙酯，正和異丙酯、正-、仲-和叔-丁酯和芐基酯。
用在文中的術(shù)語“亞烷基”指有兩個(gè)未滿足化合價(jià)的直鏈或支鏈的烷基鏈，例如-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH(CH3)CH2-、-CH(CH2CH3)CH2CH2CH2-和-C(CH3)3。
用在文中的術(shù)語“亞烯基”指有兩個(gè)未滿足化合價(jià)的直鏈或支鏈的鏈烯基鏈，例如-CH＝CH-、-CH2CH＝CH-、-C(CH3)＝CH-和-CH(CH2CH3)CH＝CHCH2-。
用在文中的術(shù)語“亞炔基”指有兩個(gè)未滿足化合價(jià)的直鏈或支鏈的炔基鏈，例如-C≡C-、-CH2C≡C-和-CH(CH2CH3)C≡CCH2-。
除非在文中有其它特定的說明，文中應(yīng)用于任何部分的術(shù)語“取代”指以至少1種選自下組的取代基取代例如(C1-C6)烷基、(C1-C6)鏈烯基、(C2-C6)炔基、氟取代的(C1-C6)烷基、氟取代的(C1-C6)鏈烯基、氟取代的(C2-C6)炔基、(C1-C6)烷氧基和氟取代的(C1-C6)烷氧基(包括在特定情況下環(huán)在相鄰的環(huán)C原子上被亞烷二氧基取代，例如亞甲二氧基或亞乙二氧基)、(C1-C6)烷硫基、苯基、芐基、苯氧基、芐氧基、羥基、巰基、氨基、氟代、氯代、溴代、氰基、硝基、氧代、-COOH、-SO2OH、-CONH2、-SO2NH2、-CORA、-COORA、-SO2ORA、-NHCORA、-NHSO2RA、-CONHRA、-SO2NHRA、-NHRA、-NRARB、-CONRARB或-SO2NRARB，其中RA和RB是獨(dú)立的(C1-C6)烷基或(C2-C6)烷氧基團(tuán)或5-7個(gè)環(huán)成員的單環(huán)碳環(huán)或雜環(huán)基團(tuán)，或是當(dāng)RA和RB與和其相連的氮原子結(jié)合起來時(shí)形成環(huán)。當(dāng)“取代”指用苯基、芐基、酚基或芐氧基取代時(shí)，其苯環(huán)自身可由除苯基、芐基、苯氧基或芐氧基之外的任何前述的基團(tuán)取代。
用在文中的術(shù)語“芳基”指單-、雙-或三環(huán)碳環(huán)芳香基團(tuán)，也指兩個(gè)這種基團(tuán)共價(jià)相連的。這種基團(tuán)的例子是苯基，聯(lián)苯基和萘基。
用在文中的非限定術(shù)語“碳環(huán)基”或“碳環(huán)的”包括芳基、環(huán)烷基和環(huán)烯基并指環(huán)原子均為碳的環(huán)系統(tǒng)(單環(huán)的、二環(huán)的、三環(huán)的或橋連的)。
用在文中的非限定術(shù)語“環(huán)烷基”指在環(huán)碳原子之間僅含有單鍵的碳環(huán)的環(huán)系統(tǒng)。
用在文中的非限定術(shù)語“環(huán)烯基”指在一對環(huán)碳原子之間至少含有一根雙鍵的碳環(huán)的環(huán)系統(tǒng)。
用在文中的術(shù)語“雜芳基”指含有一個(gè)或多個(gè)選自S、N和O的雜原子的單-、雙-或三環(huán)的芳基。這種基團(tuán)的例子是噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、異噻唑基、苯并異噻唑基、吡唑基、噁唑基、苯并噁唑基、異噁唑基、苯并異噁唑基、異噻唑基、三唑基、苯并三唑基、噻二唑基(thiadiazolyl)、噁二唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吲哚基和吲唑基。
用在文中的術(shù)語“雜環(huán)基”或“雜環(huán)的”包括上述定義的“雜芳基”和特別是指含有一個(gè)或多個(gè)選自S、N和O的雜原子的單-、雙-或三環(huán)的橋連的非芳香基，同時(shí)也指由單環(huán)非芳香基組成的基團(tuán)，該單環(huán)非芳香基含有一個(gè)或多個(gè)這種雜原子并且與另一個(gè)這種基團(tuán)或單環(huán)碳環(huán)基團(tuán)共價(jià)相連。這種基團(tuán)的例子是吡咯基、呋喃基(furanyl)、四氫呋喃基、噻吩基、哌啶基、咪唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、噻二唑基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、嘧啶基、嗎啉基、呱嗪基、吲哚基、嗎啉基、苯并呋喃基、吡喃基、四氫吡喃基、奎寧環(huán)基、異噁唑基、苯并咪唑基、亞甲二氧基苯基、亞乙二氧基苯基、馬來酰亞氨基(maleimido)和琥珀酰亞氨基。
一些本發(fā)明的化合物因?yàn)榇嬖诓粚ΨQ碳原子而含有一個(gè)或多個(gè)手性中心。不對稱碳原子的存在使得在每個(gè)手性中心出現(xiàn)有R或S立體化學(xué)的立體異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體。本發(fā)明包括所有這些立體異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體及其混合物。
本發(fā)明的成鹽化合物的鹽包括生理學(xué)可接受的酸加成鹽和堿鹽(base salts)。合適的酸加成鹽由可形成無毒鹽的酸制得。例子包括乙酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、重碳酸鹽/碳酸鹽、重硫酸鹽/硫酸鹽、硼酸鹽、右旋樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、乙二苯磺酸鹽、乙苯磺酸鹽(esylate)、甲酸鹽、延胡索酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、六氟磷酸鹽、羥苯酰苯酸鹽、鹽酸鹽/氯化物、氫溴酸鹽/溴化物、氫碘酸/碘化物、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、萘酸鹽(naphthylate)、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、乳清酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、糖二酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽和三氟乙酸鹽。合適的堿鹽由可形成無毒性的鹽的堿制得。其例子包括鋁鹽、精氨酸、雙芐基乙撐二胺、鈣鹽、膽堿、二乙胺、二乙醇胺、甘氨酸、賴氨酸、鎂鹽、甲基葡胺、乙醇胺、鉀鹽、鈉鹽、緩血酸胺和鋅鹽。
方法本發(fā)明的，其中R4代表酰氨基團(tuán)-C(＝O)NR6R7的化合物可通過合適的胺類HNR6R7和結(jié)構(gòu)式(II)所示的化合物反應(yīng)使羧酸基團(tuán)酰胺化來制備 R1，R3，X，R6和R7見上述與結(jié)構(gòu)式(I)有關(guān)的定義。
化合物(II)(即本發(fā)明的化合物(I)中的R4是羧酸基團(tuán))可通過結(jié)構(gòu)式(III)所示的化合物與結(jié)構(gòu)式(IV)所示的肼反應(yīng)來制備 該反應(yīng)可能導(dǎo)致產(chǎn)生位置異構(gòu)物(IIA)和(IIB)的混合物 所需要的異構(gòu)物(IIA)可從該混合物中分離出。
R4是酯或酰胺基團(tuán)的化合物(I)也可通過中間體(III)與合適的肼(IVA)反應(yīng)來制備 其中R4是酯或酰胺基團(tuán)。同樣，該反應(yīng)也會(huì)導(dǎo)致要將所需的酯或酰胺異構(gòu)體(I)分離出的羧酸(IIA)和(IIB)的酯或酰胺類似物的混合物。此外，羧酸化合物(II)可簡單地酯化或酰胺化。
R4是“逆酰胺”基團(tuán)-NR7C(＝O)R6的化合物(I)的制備可通過羧酸(II)經(jīng)Curtius重排(見Ninomiya，K.；Shioiri，T.；Yamada，S.Tetrahedron(1974)，30(14)，2151-7)成異氰酸酯(V)
然后將異氰酸酯基團(tuán)水解成氨基，再用例如酰氯Cl-C(＝O)R6使氨基?；Ｔ赗7不是氫的情況下，R7取代基可在異氰酸酯還原步驟或?；襟E之后導(dǎo)入。
在另一條得到本發(fā)明的“逆酰胺”(R4＝-NR7C(＝O)R6)化合物的途徑中，異氰酸酯部份被硝基取代的結(jié)構(gòu)如(V)所示的化合物被還原成對應(yīng)的胺，然后酰化得到所需的逆酰胺。
R4是脲基團(tuán)-NHC(＝O)NHR6或硫脲基團(tuán)-NHC(＝S)NHR6的化合物(I)的可通過將異氰酸酯(V)或相應(yīng)的異硫氰酸酯與合適的胺類H2NR6反應(yīng)來制備。
R4是氨基甲酸酯基團(tuán)-NR7C(＝O)OR6的化合物(I)的可通過將異氰酸酯與合適的醇類R6OH反應(yīng)來制備。
制備本發(fā)明的化合物(I)和中間體(例如(III))的詳細(xì)合成方法見文中的實(shí)施例。
在本發(fā)明的化合物中基團(tuán)R4X-優(yōu)選在苯環(huán)的4號(hào)位置。
X可以是，例如單鍵或-CH2-或-CH2CH2-。優(yōu)選單鍵。
R3可以是，例如H、F、Cl、甲基、甲氧基或亞甲二氧基。當(dāng)前優(yōu)選R3是H。
R1可以是，例如H、F、Cl、甲基、甲氧基或亞甲二氧基。當(dāng)前優(yōu)選R1是H或氟，特別是在3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基環(huán)系統(tǒng)上的6號(hào)位置。
R4代表羧酸基團(tuán)(-COOH)或其酯，或是上述定義的-C(＝O)NR6R7、-NR7C(＝O)R6、-NR7C(＝O)OR6或-NHC(＝O)NHR6。
當(dāng)R4是酯基團(tuán)時(shí)，其例子包括結(jié)構(gòu)式為-COOR的那些，其中R是甲基、乙基、n-或異丙基、n-、仲或叔丁基或芐基。
當(dāng)存在R6時(shí)，其代表H或結(jié)構(gòu)式為-(Alk)m-Q的基團(tuán)，其中m，Alk和Q如上述定義。當(dāng)m是1時(shí)，Alk可以是，例如直鏈或支鏈的C1-C6亞烷基團(tuán)，例如-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-和-CH2CH(CH3)CH2-。Alk也可以是，例如二價(jià)的亞環(huán)丙基、亞環(huán)戊基或亞環(huán)己基基團(tuán)。Alk基團(tuán)可被，例如OH、氧代、CF3、甲氧基或乙氧基任選取代。Alk基團(tuán)可任選含有一雜原子，例如以醚、硫醚或氨基鏈的形式。
Q基團(tuán)可以代表，例如H；-NR9R10其中R9和R10可以相同或不同并選自H、甲基、乙基、正-或異丙基或叔丁基；酯基團(tuán)，例如甲酯、乙酯或芐酯；或是可任選取代的芳基、芳氧基、環(huán)烷基、環(huán)烯基或雜環(huán)基團(tuán)，例如苯基、苯氧基、環(huán)戊基、環(huán)己基、呋喃基、噻吩基、奎寧環(huán)基、哌啶基或哌嗪基。
當(dāng)存在R7時(shí)，其代表H或C1-C6烷基，例如甲基、乙基、正-或異丙基、正-、仲或叔丁基；或當(dāng)R6和R7與它們所連接的一個(gè)或幾個(gè)原子相連時(shí)形成具有5、6或7個(gè)環(huán)原子的可任選取代的單環(huán)雜環(huán)。
特別優(yōu)選以下這些情況，R4代表-C(＝O)NR6R7或-NHC(＝O)NR7R6，其中R7是H，R6代表結(jié)構(gòu)式為-(Alk)m-Q的基團(tuán)，其中m是1，二價(jià)基團(tuán)Alk含有3或4個(gè)碳原子并且是未取代的，Q代表NR9R10，其中R9和R10獨(dú)立代表H、C1-C4烷基、C3-C4鏈烯基、C3-C4炔基、C3-C6環(huán)烷基、酯基團(tuán)、可任選取代的碳環(huán)或雜環(huán)基團(tuán)；或當(dāng)將其與和其相連的氮原子結(jié)合時(shí)形成一可任選取代的環(huán)。
特別優(yōu)選如結(jié)構(gòu)式(IC)所示的本發(fā)明化合物的亞類 其中X和R4如上所述。在該亞類中，R4X-基團(tuán)可以在苯環(huán)的4號(hào)位置。該亞類特別包括X是單鍵并且R4是-C(＝O)NR6R7，其中R6和R7如上所述的化合物。例如，在這樣的化合物中R6可以是奎寧環(huán)基而R7是H。
具體的本發(fā)明化合物包括在本文實(shí)施例中的那些化合物。
優(yōu)選的本發(fā)明化合物是結(jié)構(gòu)式(A)所示的4-(6-氟-3-氧代-1，3-二氫-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)-N-(2，2-二氟-乙基)-苯甲酰胺
或其藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)可接受的鹽，水合物或溶劑化物。
另一個(gè)優(yōu)選的本發(fā)明化合物是結(jié)構(gòu)式(B)所示的N-[3-(叔丁基-甲基-氨基)-丁基]-4-(6-氟-3-氧代-1，3-二氫-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)-苯甲酰胺 或其藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)可接受的鹽，水合物或溶劑化物。
如上所述，本發(fā)明包括含有結(jié)構(gòu)式(I)所示的化合物或其藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)上可接受的賦形劑或載體的藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)的組合物。在這樣的組合物中，要了解任何特定病人的具體劑量水平取決于一系列因素，包括所用的具體化合物的活性、年齡、體重、總的健康狀況、性別、飲食情況、給藥時(shí)間、給藥途徑、排出率、藥物的組合情況和要接受治療的特定疾病的起因和嚴(yán)重性。最優(yōu)化的劑量水平和給藥頻率通過臨床試驗(yàn)確定。
本發(fā)明涉及的化合物可以任何與其藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)一致的途徑制備給藥?？诜o藥的組合物的形式可以是藥片、膠囊、粉末、顆粒、錠劑、液體或凝膠制劑，例如口服的、局部的或無菌非腸道的溶液或懸浮液。用于口服的藥片和膠囊可以是單劑形式，并且可以含有常規(guī)的賦形劑，例如粘合劑(例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠或聚乙烯吡咯烷酮)；填充劑(例如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸鈣、山梨醇或甘油)；壓片潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石粉、聚乙二醇或二氧化硅)；崩解劑(例如馬鈴薯淀粉)或可接受的潤濕劑(例如月桂基硫酸鈉)。藥片可以用常規(guī)藥學(xué)實(shí)踐中公知的方法包衣?？诜囊后w制劑的形式可以是，例如水或油的懸浮液、溶液、乳劑、糖漿或酏劑，或是制成干粉在使用前用水或其它的合適載體重新配制。這樣的液體制劑可含有常規(guī)的添加劑，例如懸浮劑(例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、葡萄糖糖漿、明膠氫化的可食用油脂)；乳化劑(例如卵磷脂、山梨聚糖單油酸酯或阿拉伯膠)；非水載體(可以含有可食用的油)例如杏仁油、分餾的椰油、油酯(例如甘油、丙二醇或乙醇)；防腐劑(例如甲基或丙基p-羥基苯甲酸酯或山梨酸)，并且如果需要可以加入常規(guī)的調(diào)味劑或染色劑。
為局部應(yīng)用于皮膚，該藥物可以制成霜?jiǎng)?、洗劑或軟膏劑。用于藥物的霜?jiǎng)┗蜍浉鄤┦潜绢I(lǐng)域公知的常規(guī)制劑，例如描述于藥學(xué)標(biāo)準(zhǔn)教科書(例如英國藥典)中的。
為局部應(yīng)用于眼睛，該藥物可在合適的無菌水或非水載體中配制成溶液或懸浮液。其中也可以包括添加劑，例如緩沖液(例如偏亞硫酸氫鈉或依地酸二鈉)，防腐劑，包括殺菌劑和殺真菌劑(例如苯基乙酸汞或苯基硝酸汞、氯化芐烷銨或雙氯苯雙胍己烷)和增稠劑，例如羥丙甲纖維素。
活性成份也可在無菌介質(zhì)中以腸胃外給藥。取決于載體和所使用的濃度，藥物既可懸浮又可溶解在載體中。有利的是，佐劑(例如局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑)也可溶解在載體中。
本發(fā)明的具體上述方式描述于以下非限制性實(shí)施例中以下是用于試驗(yàn)描述的縮寫DMF 二甲基甲酰胺DMA 二甲基乙酰胺DMSO 二甲基亞砜HBTU O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基六氟磷酸脲鎓HPLC 高效液相色譜LCMS 液相質(zhì)譜NMR 核磁共振光譜實(shí)施例1步驟1制備(苯腙)丙二酸
二羥丙二酸鈉一水合物(5.00g，27.8mmol)溶解在1M的鹽酸(50ml)中得到無色的混濁溶液。將苯肼(3.00g，2.72ml，27.8mmol)于室溫滴加入攪拌的混合物中。90分鐘后過濾收集形成的黃色沉淀并以水洗滌(50ml)。濾餅用乙酸乙酯/己烷[1∶1]研碎，過濾，然后減壓干燥。分離得到黃色粉末狀的標(biāo)題化合物(4.74g，22.7mmol，82％)。LCMSm/z 207[M-H]+。
此外，產(chǎn)品也可以用乙酸乙酯(2×250ml)從液相中萃取，有機(jī)相以硫酸鎂干燥，過濾并減壓除去溶劑。
步驟2制備(苯基亞肼基)丙二酰氯 (苯基亞肼基)丙二酸(1.00g，4.80mmol)在惰性氣體中與無水氯仿(15ml)混合得到黃色的懸浮液。于室溫?cái)嚢杌旌衔锊⒎峙尤胛迓然?2.19g，10.5mmol)。反應(yīng)混合物加熱回流1.5小時(shí)得到綠色溶液?；旌衔锢鋮s至室溫并以己烷(15ml)稀釋。過濾收集形成的綠色沉淀物，并減壓干燥。分離到綠色粉末狀的標(biāo)題化合物(645mg，2.63mmol，53％)。
步驟3制備4-羥基噌啉-3-羧酸甲酯 (苯基亞肼基)丙二酰氯(2.45g，0.01mmol)在惰性氣體中與1，2-二氯乙烷(15ml)混合得到黃色的懸浮液。滴加四氯化鈦(1.89g，1.09ml)形成棕色溶液?；旌衔锛訜峄亓鬟^夜后，冷卻至室溫并滴加甲醇(15ml)終止反應(yīng)。繼續(xù)攪拌30分鐘，減壓除去揮發(fā)物。加入水(100ml)，所得到的懸浮液以正-丁醇(2×50ml)萃取。合并的有機(jī)相用水洗(2×20ml)并減壓濃縮。分離到綠色固體狀的標(biāo)題化合物(1.04g，5.10mmol，51％)。LCMSm/z 205[M+H]+。
步驟4制備4-氯噌啉-3-羧酸甲酯 在惰性氣體中，將亞硫酰氯(8.15g，5ml)滴加入4-羥基噌啉-3-羧酸甲酯(0.50g，2.45mmol)?；旌衔锛尤牖亓?.5小時(shí)，冷卻至室溫，減壓除去剩余的亞硫酰氯。向殘留物中加入甲苯(5ml)?；旌衔镉谑覝?cái)嚢柽^夜。過濾收集固體并減壓干燥。分離到棕色固體狀的標(biāo)題化合物(248mg，1.11mmol，45％)。LCMSm/z 223[M+H]+。
步驟5制備4-(3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)苯甲酸 將4-肼基苯甲酸(68.4mg，0.45mmol)于室溫與乙醇(5ml)混合得到奶油色的懸浮液。加入4-氯噌啉-3-羧酸甲酯(100mg，0.45mmol)，化合物加熱至40-50℃1個(gè)小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。向殘留物中加入乙酸乙酯(10ml)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時(shí)。過濾收集固體并減壓干燥。分離到棕色粉末狀的標(biāo)題化合物(120mg，0.39mmol，86％)。LCMSm/z 307[M+H]+.NMR[DMSO-d6]δ＝7.69-7.77(m，1Haryl)；7.81-7.90(m，2Haryl)；8.05(d，J＝8.85，2Haryl)；8.20(d，J＝7.92Hz，1Haryl)；8.33(d，J＝8.85Hz，2Haryl)；14.64(s，NH)。
此外，反應(yīng)也可于室溫進(jìn)行。在這種情況下，需要更長、2-3小時(shí)的反應(yīng)時(shí)間。
實(shí)施例2制備N-[(二甲基氨基)丙基]-4-(3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)苯甲酰胺
4-(3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)苯甲酸(25mg，0.08mmol)與DMF(1ml)混合。在加入HBTU(30.3mg，0.08mmol)之后加入二異丙基乙胺(21mg，28μl，0.16mmol)和3-二甲基氨基丙胺(8.2mg，10.0μl，0.09mmol)?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?小時(shí)。產(chǎn)物用制備型HPLC純化。分離到紅色固體狀的標(biāo)題化合物(12.6mg，0.032mmol，40％)。LCMSm/z 391[M+H]+。
實(shí)施例3制備N-芐基-4-(3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)苯甲酰胺 將4-(3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)苯甲酰胺(52mg，0.17mmol)與DMF(2ml)混合。在加入HBTU(64.5mg，0.17mmol)之后加入二異丙基乙胺(22mg，29μl，0.17mmol)和苯甲基胺(18.2mg，18.6μl，0.17mmol)?；旌衔镉谑覝?cái)嚢?小時(shí)。產(chǎn)物用制備型HPLC純化。分離到紅色固體狀的標(biāo)題化合物(6.6mg，0.02mmol，10％)。LCMSm/z 396[M+H]+。
實(shí)施例4步驟1制備4-(3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)苯甲酰氯
將亞硫酰氯(90ml)加入4-(3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)苯甲酸(2.36g，7.70mmol)?；旌衔镌诘?dú)庵屑訜峄亓?小時(shí)。得到暗紅色溶液，冷卻至室溫并減壓除去剩余的亞硫酰氯。向殘留物中加入甲苯(30ml)并于室溫在氮?dú)庵袛嚢杌旌衔镏敝脸恋硗耆?。過濾收集固體并以甲苯洗滌(2×30)。分離到紅色固體狀的標(biāo)題化合物(2.20g，6.77mmol，88％)。LCMSm/z 321[M+H]+(樣品在甲醇中形成甲酯)。
步驟2制備N-[(環(huán)己基氨基)丙基]-4-(3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)苯甲酰胺 4-(3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)苯甲酰氯(97mg，0.30mmol)溶解在無水DMA(2ml)中。在)加入二異丙基乙胺(39mg，53μl，0.60mmol)后加入N-環(huán)己基-1，3-丙二胺(52mg，0.60mmol?；旌衔飻嚢?0分鐘后以正-丁醇萃取(2×20ml)。合并的有機(jī)相以水洗滌并減壓濃縮直至觀察到有沉淀。加入己烷(20ml)和乙酸乙酯(10ml)，過濾收集固體并減壓干燥。分離到暗紅色粉末狀的產(chǎn)物(82mg，0.18mmol，62％)。LCMSm/z 445[M+H]+。
實(shí)施例5步驟1制備[(2-氟苯基)亞肼基]丙二酸
二羥丙二酸鈉一水合物(2.21g，12.3mmol)溶解在1M的鹽酸(50ml)中得到無色的混濁溶液。將鹽酸2-氟-苯肼(2.00g，12.3mmol)于室溫分批加入攪拌的混合物中。形成了黃色沉淀，混合物以水(50ml)稀釋并繼續(xù)攪拌過夜。加入乙酸乙酯(150ml)，各相劇烈混合直至固體溶解。分離各相并用乙酸乙酯洗滌水相(50ml)。合并的有機(jī)相用硫酸鎂干燥，過濾并減壓除去溶劑。分離到黃色粉末狀的標(biāo)題化合物(2.55g，11.7mmol)。LCMSm/z 227[M-H]+。
步驟2制備[(2-氟苯基)亞肼基]丙二酰氯 在惰性氣體中將(2-氟苯基亞肼基)丙二酸(1.33g，5.88mmol)于無水氯仿(20ml)混合得到黃色懸浮液。懸浮液于室溫?cái)嚢璨⒎峙尤胛迓然?2.69g，12.9mmol)。反應(yīng)混合物加熱回流2小時(shí)得到暗黃色溶液?；旌衔锢鋮s至室溫并減壓濃縮直至產(chǎn)生沉淀。過濾收集固體，并以己烷(30ml)洗滌固體，然后減壓干燥。分離到黃色粉末狀的標(biāo)題化合物(760mg，2.89mmol)。
步驟3制備8-氟-4-羥基噌啉-3-羧酸甲酯 在惰性氣體中將(2-氟苯基亞肼基)丙二酰氯(19.4g，74mmol)與1，2-二氯乙烷(100ml)混合得到黃色懸浮液。滴加四氯化鈦(13.9g，8.08ml，74mmol)形成棕色溶液。混合物加熱回流過夜。再加入四氯化鈦(13.9g，8.08ml，74mmol)并繼續(xù)加熱24小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至0-5℃并滴加甲醇(50ml)終止反應(yīng)。繼續(xù)于室溫?cái)嚢?小時(shí)并減壓除去揮發(fā)物。加入水(300ml)，所得到的懸浮液以乙酸乙酯(3×100ml)萃取。合并的有機(jī)相以硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。分離到黃色固體(12g粗產(chǎn)品)。LCMSm/z223[M+H]+。
步驟4制備4-(6-氟-3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)苯甲酸 上一步驟所得的8-氟-4-羥基噌啉-3-羧酸甲酯粗品(1.00g，4.95mmol)溶解于亞硫酰氯(50ml)。溶液加熱回流2-3小時(shí)直至觀察不到有氣體冒出。反應(yīng)混合物冷卻至室溫并減壓除去剩余的亞硫酰氯。中間體粗品用甲苯(3×25ml)共沸蒸餾。得到暗棕色固體，并以乙醇(25ml)溶解。加入4-肼基苯甲酸(640mg，4.21mmol)，混合物于室溫?cái)嚢柽^夜。過濾收集固體，與1M的HCl(100ml)混合，過濾，以己烷(50ml)洗滌并減壓干燥。得到棕色固體(890mg的粗品)。LCMSm/z[M+H]+325。
實(shí)施例6步驟1制備4-(6-氟-3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)苯甲酰氯 上一步驟所得的4-(6-氟-3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)苯甲酸粗品(1.45g)溶解在亞硫酰氯(50ml)中?；旌衔锛訜嶂?0℃2-3個(gè)小時(shí)直至觀察不到有氣體冒出?；旌衔锢鋮s至室溫并減壓除去剩余的亞硫酰氯。殘留物與甲苯(2×20ml)一起共沸蒸餾得到固體。過濾收集固體，用甲苯洗滌并減壓干燥。分離到黃色粉末狀的產(chǎn)物(670mg，1.95mmol)。LCMSm/z[M+H]+339(樣品溶解于甲醇形成甲酯)。
步驟2制備4-(6-氟-3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)-N-(吡咯烷-1-基-丁基)苯甲酰胺
將4-(6-氟-3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)苯甲酰氯(100mg，0.29mmol)溶解于無水DMA(2ml)中。加入二異丙基乙胺(75mg，101μl，0.58mmol)之后加入吡咯烷(41mg)?；旌衔镉谑覝?cái)嚢柽^夜。加入水(5ml)和n-丁醇(5ml)。分離各相。有機(jī)相以水(2×5ml)洗滌。減壓除去揮發(fā)物。分離到棕色粉末狀的產(chǎn)物(50mg，0.11mmol，37％)。LCMSm/z[M+H]+463。
實(shí)施例7制備4-(6-氟-3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)-N-(1，2，2，6，6-五甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺 將4-(6-氟-3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)苯甲酰氯(100mg，0.29mmol)溶解于無水DMA(2ml)中。加入二異丙基乙胺(75mg，101μl，0.58mmol)之后加入4-氨基-1，2，2，6，6-五甲基哌啶(49mg，0.29mmol)?；旌衔飻嚢柽^夜。加入水(5ml)和正-丁醇(5ml)。分離各相。有機(jī)相以水(2×5ml)洗滌并減壓濃縮溶液。分離到暗紅色固體狀的標(biāo)題化合物(50mg，0.105mmol，36％)。LCMSm/z[M+H]+477。
實(shí)施例8步驟1制備2-(4-硝基苯基)-1，2-二氫-3H-吡唑并[4，3-c]噌啉-3-酮
在惰性氣體中將亞硫酰氯(326mg，200ml)滴加入4-羥基噌啉-3-羧酸甲酯(10.0g，49mmol)中?；旌衔锛訜峄亓?.5小時(shí)，冷卻至室溫并減壓除去剩余的亞硫酰氯。向殘留物中加入甲苯(100ml)并減壓除去之。再次加入甲苯(100ml)重復(fù)此過程。得到棕色的半固體物質(zhì)并溶解于乙醇(200ml)。分批加入4-硝基苯肼(5.99g，39.2mmol)。混合物于室溫?cái)嚢柽^夜?；旌衔锛訜嶂?0-45℃1小時(shí)，然后冷卻至室溫。過濾收集固體，固體與乙醇(100ml)一起研碎并減壓干燥。分離到棕色固體狀的標(biāo)題化合物(8.42g，27.4mmol，70％)。LCMSm/z 308[M+H]+。
步驟2制備2-(4-氨基苯基)-1，2-二氫-3H-吡唑并[4，3-c]噌啉-3-酮 將2-(4-硝基苯基)-1，2-二氫-3H-吡唑并[4，3-c]噌啉-3-酮(11.4g，37.2mmol)懸浮于乙醇(100ml)和水(100ml)的混合液中。加入鐵粉(11.1g，200mmol)和氯化銨(5.34g，100mmol)?；旌衔锛訜嶂?0℃過夜，冷卻至室溫并用碳酸鉀堿化至pH9-10。用Celite襯墊過濾除去固體。濾液以正-丁醇(2×200ml)萃取。合并的有機(jī)相減壓濃縮得到暗紅色固體。固體與甲醇(100ml)一起研碎，過濾并減壓干燥。分離到暗紅色粉末狀的標(biāo)題化合物(5.58g，20.1mmol，57％)。LCMSm/z 278[M+H]+。
步驟3制備N-[3-(二甲基氨基)丙基]-N-[4-(3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)苯基]脲
在0-5℃，將2-(4-氨基苯基)-1，2-二氫-3H-吡唑并[4，3-c]噌啉-3-酮(44mg，0.16mmol)于氮?dú)庵袘腋≡诩妆?0.5ml)中。加入DMA(0.5ml)之后加入N，N’-羰基二咪唑(26mg，0.16mmol)?；旌衔镌?-5℃攪拌1小時(shí)，然后與3-二甲基氨基丙胺(18mg，0.18mmol)的甲苯(0.5ml)溶液混合。繼續(xù)攪拌1小時(shí)，并用制備型HPLC純化產(chǎn)物。分離到暗紅色粉末狀的標(biāo)題化合物(2.6mg，6μmol，4％)。LCMSm/z 406[M+H]+。
實(shí)施例9制備4-(3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)苯甲酸乙酯 標(biāo)題化合物同實(shí)施例1中步驟5的方法制備，其中用4-肼基苯甲酸乙酯替代其母體酸。MSMH+＝335.2結(jié)果BIAcore生物分子相互作用分析的使用生物素化的人CD80(hCD80-BT)是膜結(jié)合受體分子的重組可溶性形式，它與CD28結(jié)合啟動(dòng)T細(xì)胞激活。人們廣泛地研究了CD80與CD28之間的相互作用(Collins等著，2002)。生物素化的人HLA-A2-tax是膜結(jié)合受體分子的重組可溶性形式，用在本實(shí)施例中作為對照蛋白，并且不期望它與本發(fā)明化合物相互作用。
BIAcore S51TM系統(tǒng)用于篩選上述實(shí)施例1-4的化合物。一系列S傳感器芯片CM5接在BIAcore S51TM上。使用標(biāo)準(zhǔn)的胺偶合方法將抗生物素蛋白鏈菌素偶合到羧甲基表面上。芯片表面用0.2M EDC/0.05M NHS激活，接著與抗生物素蛋白鏈菌素(0.25mg/ml，在10mM乙酸鈉中，pH5.0)結(jié)合，未占據(jù)的位點(diǎn)用1M乙二胺飽和。
BIAcore S51傳感器芯片有兩個(gè)分開的、用于固定蛋白質(zhì)的傳感器位點(diǎn)。hCD80-BT固定在抗生物素蛋白鏈菌素覆蓋的一個(gè)傳感器位點(diǎn)的表面直至觀察到的應(yīng)答為約3000RU。與化合物非特異結(jié)合的對照蛋白固定在第二個(gè)傳感器位點(diǎn)上。用于這些試驗(yàn)的對照蛋白是生物素化的、人類HLA蛋白的可溶性形式。
在運(yùn)行緩沖液(10mM，pH7.4，150mMNaCl，0.005％P20；5％DMSO)中配制一系列化合物的稀釋溶液(1000nm-0.05nm)。
BIAcore S51TM使用運(yùn)行緩沖液以流速30μl/分鐘運(yùn)行。注射入化合物和用于校正溶劑效應(yīng)影響的數(shù)據(jù)的DMSO標(biāo)準(zhǔn)溶液。自動(dòng)記錄數(shù)據(jù)并使用BIAcore S51評(píng)估軟件分析。
CD80與內(nèi)源性蛋白配體(CD28)之間的相互作用是高度特異的，但是相對較弱的，其KD是4750nM，截?cái)嗦蚀笥?.2s-1。實(shí)施例2，3，4，6和7的化合物對CD80相對CD28有較高的親和力和較長的停留時(shí)間，其KDs小于100nM并且截?cái)嗦蕿?×10-2，這意味著這些噌啉能有效地與內(nèi)源性配體競爭。未觀察到這些噌啉與對照蛋白相互作用。
參考文獻(xiàn)Collins AV等.(2002)Immunity 17，201-210“The interaction property ofcostimulatory molecules revisited”。
對人類Jurkat T細(xì)胞生產(chǎn)白介素-2(IL-2)的抑制作用方法人類Raji細(xì)胞以每孔2×105的濃度分散在96-孔圓底微滴定板的RPMI-1640培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基添加了10％的小牛血清、1％青霉素/鏈霉素和1％谷氨酰胺(RPMI培養(yǎng)基)。要檢測的化合物(溶解在100％的DMSO中)在RPMI培養(yǎng)基中稀釋8倍達(dá)到所期望的終濃度然后加入孔中達(dá)到所需要的終濃度并且總體積為每孔200μl。于37℃孵育20分鐘之后，Jurkat T細(xì)胞以每孔2×105的濃度加入。CD3的單克隆抗體(UCHT1，R&D系統(tǒng))以終濃度1μg/ml加入培養(yǎng)基，在指明處，還要以2.5μg/ml的濃度加入CD28的單克隆抗體(CD28.2，BD-Pharmingen)。細(xì)胞于37℃孵育5小時(shí)，然后將這些板離心并按照生產(chǎn)商的建議使用IL-2Eli-pair試劑盒(DIACLINEResearch，Besancon，F(xiàn)rance)對收集的上清液進(jìn)行IL-2ELISA試驗(yàn)。
例如，實(shí)施例2的化合物(AV1142005)在30μM有65％的抑制活性。
均相時(shí)間分辨熒光試驗(yàn)上述的實(shí)施例進(jìn)行無細(xì)胞的均相時(shí)間分辨熒光(HTRF)試驗(yàn)測試來確定其作為CD80-CD28相互作用的抑制劑的活性。
在試驗(yàn)中，銪和別藻藍(lán)蛋白(APC)與CD28和CD80間接相連(通過抗體銜接物)形成復(fù)合物，該復(fù)合物使銪和APC靠近來產(chǎn)生信號(hào)。該復(fù)合物包括以下6種蛋白熒光標(biāo)記1，銜接物抗體1，CD28融合蛋白，CD80融合蛋白，銜接物抗體2和熒光標(biāo)記2。下表更詳細(xì)地描述了這些試劑。
在復(fù)合物的形成中，銪和APC靠近并產(chǎn)生信號(hào)。
通過用小鼠Fab片段(C215)替代CD80-小鼠的Fab片段融合蛋白(1.9μg/ml)來測量非特異性相互作用。試驗(yàn)在黑色384孔板中進(jìn)行，終體積為30μl。試驗(yàn)緩沖液為50mM的Tris-HCl，150mM的NaCl，pH7.8，并含有在使用前加入的0.1％的BSA(w/v)。
濃度為100μM-1.7nM的化合物加入上述試劑。反應(yīng)于室溫孵育4小時(shí)。使用Wallac Victor1420多功能計(jì)數(shù)儀進(jìn)行雙重測量。第一次測量激發(fā)340nm，發(fā)射665nm，滯后50μs，窗口時(shí)間200μs。第二次測量激發(fā)340那么，發(fā)射615nm，滯后50μs，窗口時(shí)間200μs。計(jì)數(shù)值做熒光交叉、終止和背景的自動(dòng)校正。所測試的化合物的EC50活性記錄為EC50*＝＞10μM，**＝1-10μM，***＝＜1μM.
實(shí)施例1-8的化合物在上述HTRF試驗(yàn)中有以下活性
實(shí)施例1*實(shí)施例2***實(shí)施例3***實(shí)施例4***實(shí)施例5*實(shí)施例6***實(shí)施例7***實(shí)施例8***實(shí)施例9**附加試驗(yàn)本發(fā)明化合物的其它例子用與上述實(shí)施例1-8中的類似的方法合成。合成的化合物的結(jié)構(gòu)和其在上述HTRF試驗(yàn)中的活性列于下表。
表






























以下是上述化合物在人類Jurkat T細(xì)胞產(chǎn)生白介素-2(IL-2)的抑制試驗(yàn)中的測試結(jié)果的例子
權(quán)利要求
1.如結(jié)構(gòu)式(I)所示的化合物或其藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)上可接受的鹽、水合物或溶劑化物 其中，R1和R3獨(dú)立代表H、F、Cl、Br、-NO2和-CN；任選被F或Cl取代的C1-C6烷基；或任選被F取代的C1-C6烷氧基；R4代表羧酸基團(tuán)(-COOH)或其酯、或-C(＝O)NR6R7、-NR7C(＝O)R6、-NR7C(＝O)OR6、-NHC(＝O)NR7R6或-NHC(＝S)NR7R6，其中R6代表H，或結(jié)構(gòu)式為-(Alk)m-Q的基團(tuán)，其中m是0或1，Alk是任選取代的二價(jià)直鏈或支鏈C1-C12亞烷基或C2-C12亞烯基或C2-C12亞炔基或二價(jià)的C3-C12碳環(huán)基團(tuán)，這些基團(tuán)均可含有一個(gè)或多個(gè)-O-，-S-或-N(R8)-鍵，其中R8代表H或C1-C4烷基、C3-C4鏈烯基、C3-C4炔基或C3-C6環(huán)烷基；Q代表H、-NR9R10，其中R9和R10獨(dú)立地代表H、C1-C4烷基、C3-C4鏈烯基、C3-C4炔基、C3-C6環(huán)烷基、、酯基團(tuán)，可任選取代的碳環(huán)或雜環(huán)基團(tuán)；或者，R9和R10與其所連接的N相連時(shí)形成一個(gè)可任選取代的環(huán)；R7代表H或C1-6烷基，或者，R6和R7與它們所連接的一個(gè)或幾個(gè)原子相連時(shí)形成具有5、6或7個(gè)環(huán)原子的可任選取代的單環(huán)雜環(huán)；X代表一根鍵或結(jié)構(gòu)式為-(Z)n-(Alk)-或-(Alk)-(Z)n-的二價(jià)基團(tuán)，其中Z代表-O-、-S-或-NH-，Alk見與R6有關(guān)的定義，n是0或1。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述基團(tuán)R4X-是在苯環(huán)的4號(hào)位置。
3.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中，X是鍵。
4.如以上權(quán)利要求中任一所述的化合物，其中，R3是氫。
5.如以上權(quán)利要求中任一所述的化合物，其中，R1是氫或氟。
6.如以上權(quán)利要求中任一所述的化合物，其中，R4代表-C(＝O)NR6R7，其中R6和R7如權(quán)利要求1所定義。
7.如以上權(quán)利要求中任一所述的化合物，其中，R4代表-NHC(＝O)NR7R6，其中R6和R7如權(quán)利要求1所定義。
8.如權(quán)利要求7所述的化合物，其中，R6是奎寧環(huán)基。
9.如以上權(quán)利要求中任一所述的化合物，其中，R6代表結(jié)構(gòu)式為-(Alk)m-Q的基團(tuán)，其中m是0或1，二價(jià)基團(tuán)Alk含有3或4個(gè)碳原子并且是未取代的，Q代表-NR9R10，其中R9和R10獨(dú)立地代表H，C1-C4烷基，C3-C4鏈烯基，C3-C4炔基，C3-C6的環(huán)烷基，酯基團(tuán)，可任選取代的碳環(huán)或雜環(huán)基團(tuán)；或當(dāng)R9和R10與其所連接的N相連時(shí)形成可任選取代的環(huán)。
10.如權(quán)利要求6到8中任一所述的化合物，其中，R7是氫。
11.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中，Q代表H、-CF3、-OH、-SH、-NR8R8，其中每個(gè)R8獨(dú)立地代表H、C1-C4烷基、C3-C4鏈烯基、C3-C4炔基、C3-C6環(huán)烷基、酯基團(tuán)，可任選取代的芳基、芳氧基、環(huán)烷基、環(huán)鏈烯基或雜環(huán)基團(tuán)；或當(dāng)R8和其所連接的N相連時(shí)形成環(huán)；R7代表H或C1-6烷基，或當(dāng)R6和R7與它們所連接的一個(gè)或幾個(gè)原子相連時(shí)形成具有5、6或7個(gè)環(huán)原子的單環(huán)雜環(huán)。
12.如權(quán)利要求11所述的化合物，其中，R4是羧酸基團(tuán)(-COOH)或結(jié)構(gòu)式為-COOR的酯基團(tuán)，其中R是甲基、乙基、正-或異丙基、正-、仲或叔丁基或芐基。
13.如權(quán)利要求11或12所述的化合物，其中，所述R6代表結(jié)構(gòu)式為-(Alk)m-Q的基團(tuán)，其中m是1，Alk是-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、和-CH2CH(CH3)CH2-，或者是二價(jià)的亞環(huán)丙基、亞環(huán)戊基或亞環(huán)己基基團(tuán)，可被OH、氧代、CF3、甲氧基或乙氧基任選取代，Q基團(tuán)代表H；-NR8R8其中每個(gè)R8可以相同或不同并選自H、甲基、乙基、正-或異丙基或叔丁基；甲酯、乙酯或芐酯；或是可任選取代苯基、苯氧基、環(huán)戊基、環(huán)己基、呋喃基、噻吩基、哌啶基或哌嗪基。
14.如權(quán)利要求11-13中任一所述的化合物，其中，R7代表甲基、乙基、正-或異丙基、正-、仲或叔丁基；或當(dāng)R6和R7與它們所連接的一個(gè)或幾個(gè)原子相連時(shí)形成具有5、6或7個(gè)環(huán)原子的單環(huán)雜環(huán)。
15.如權(quán)利要求11到14任一所述的化合物，其中，R1是H、F、Cl、甲基、甲氧基或亞甲二氧基。
16.如權(quán)利要求11到14任一所述的化合物，其中，R1是氟，并在3-氧代-1，3-二氫-2H-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基環(huán)系統(tǒng)中的6號(hào)位置上。
17.如權(quán)利要求11到16任一所述的化合物，其中，R3是H、F、Cl、甲基、甲氧基或亞甲二氧基。
18.如權(quán)利要求11到17任一所述的化合物，其中，X是鍵，或-CH2-或-CH2CH2-基團(tuán)。
19.如結(jié)構(gòu)式(IC)所示的化合物或其藥學(xué)上或獸醫(yī)學(xué)上了接受的鹽、水合物或溶劑化物 其中，X和R4如權(quán)利要求3、7-10或11-18中任一所述。
20.如權(quán)利要求18所述的化合物，其中，所述基團(tuán)R4X-在苯環(huán)的4號(hào)位置上。
21.如權(quán)利要求19或20所述的化合物，其中，X是鍵，R4是-C(＝O)NR6R7，其中R6和R7各自如權(quán)利要求11，13或14所述。
22.如結(jié)構(gòu)式(A)所示的化合物4-(6-氟-3-氧代-1，3-二氫-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)-N-(2，2-二氟-乙基)-苯甲酰胺 或其藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)可接受的鹽，水合物或溶劑化物。
23.如結(jié)構(gòu)式(B)所示的化合物N-[3-(叔丁基-甲基-氨基)-丁基]-4-(6-氟-3-氧代-1，3-二氫-吡唑并[4，3-c]噌啉-2-基)-苯甲酰胺 或其藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)可接受的鹽，水合物或溶劑化物。
24.一種藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)組合物，其中，所述組合物包含如權(quán)利要求1-23中任一項(xiàng)所述的化合物和藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)上可接受的賦形劑或載體。
25.如權(quán)利要求1-23中任一項(xiàng)所述用于治療從免疫調(diào)節(jié)中受益的病癥的化合物。
26.如權(quán)利要求1-23中任一項(xiàng)所述的化合物在生產(chǎn)用于治療從免疫調(diào)節(jié)中受益的病癥的藥物中的用途。
27.在包括人類在內(nèi)的哺乳動(dòng)物中進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)的方法，其中，所述方法包括向需要這種治療的哺乳動(dòng)物施加免疫調(diào)節(jié)有效劑量的如權(quán)利要求1到23任一項(xiàng)所述的化合物。
28.如權(quán)利要求25所述用途的化合物、如權(quán)利要求26所述的用途或如權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述免疫調(diào)節(jié)是免疫抑制。
29.如權(quán)利要求25所述用途的化合物、如權(quán)利要求26所述的用途或如權(quán)利要求27所述的方法，其中，所述病癥是自身免疫疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、糖尿病、哮喘、移植、系統(tǒng)性紅斑狼瘡和銀屑病。
全文摘要
結(jié)構(gòu)式(I)所示的化合物是CD80的抑制劑并可用于免疫調(diào)節(jié)治療，其中R
文檔編號(hào)A61P17/00GK1761664SQ200480006886
公開日2006年4月19日 申請日期2004年3月10日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月14日
發(fā)明者I·R·馬修斯 申請人:阿維德克斯有限公司