專利名稱：：與egr－1增強(qiáng)子元件有關(guān)的疾病的治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明描述了篩選化合物的方法，該化合物用于調(diào)節(jié)APOA1蛋白的表達(dá)和調(diào)節(jié)egr-1和/或egr-1共有序列元件的活性以影響相關(guān)基因的表達(dá)從而實(shí)現(xiàn)疾病的治療。
背景技術(shù)：
：心血管疾病是用于標(biāo)識(shí)心臟和血管的一組疾病的一般性術(shù)語(yǔ)，其中疾病包括高血壓、冠心病、腦血管疾病、外周血管病、心力衰竭、風(fēng)濕性心臟病、先天性心臟病和心肌疾病。產(chǎn)生心血管疾病的主導(dǎo)原因是動(dòng)脈粥樣硬化，動(dòng)脈壁的脂質(zhì)堆積增加。血中膽固醇水平的增加與發(fā)展為動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)性高度相關(guān)，因此人們已經(jīng)進(jìn)行了大量的醫(yī)學(xué)研究以開(kāi)發(fā)出能降低血液膽固醇的療法。動(dòng)脈粥樣硬化與內(nèi)皮功能紊亂有關(guān)，它是一種脈管系統(tǒng)內(nèi)層的正常功能被損害的疾病，這促成了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病，它還是許多其它心血管疾病例如心絞痛、心肌梗塞和腦血管疾病的重要危險(xiǎn)因素。內(nèi)皮功能紊亂的標(biāo)志包括血管氧化應(yīng)激和血管收縮增強(qiáng)，以及血中膽固醇水平增加，它們都相互促進(jìn)以加速心血管疾病的發(fā)展。為了最順利地破壞疾病的發(fā)展，因此需要對(duì)抗心血管疾病的多個(gè)病因危險(xiǎn)因素的改進(jìn)的治療方案。白藜蘆醇(反式-3，5，4’-三羥基茋)是在某些植物和漿果中發(fā)現(xiàn)的天然多酚，其中包括紅葡萄、覆盆子、桑椹、花生和一些其它植物。已有暗示說(shuō)存在于紅葡萄酒中的白藜蘆醇、其代謝物和相關(guān)多酚可能成為稱做“法國(guó)奇異現(xiàn)象(FrenchParadox)”的流行病學(xué)觀察的原因。這個(gè)奇異現(xiàn)象(paradox)涉及在法國(guó)人中發(fā)現(xiàn)了心血管疾病(CVD)的發(fā)病率低，盡管與北美人相比其消耗的食物包含與之相當(dāng)?shù)母吆康娘柡椭?。北美人飲食中飽和脂肪的含量是發(fā)生缺血性心臟病的主要原因。然而在法國(guó)，同等飲食所伴隨的缺血性心臟病的發(fā)病率等于北美人的1/3。已經(jīng)推測(cè)出，白藜蘆醇可以有助于該奇異現(xiàn)象，這來(lái)自于其作為抗氧化劑的潛在作用和其它仍然未知的作用機(jī)理。白藜蘆醇和相關(guān)的化合物被發(fā)現(xiàn)在自然中大量存在，一個(gè)最公知的來(lái)源是紅葡萄皮，其每克皮能包含50-100μg(Jang，M.等Science275218(1997))。白藜蘆醇能在許多紅葡萄酒中找到，并且也能在商業(yè)制劑中獲得。部分地講，白藜蘆醇的作用可以來(lái)自于其可能的抗氧化性，這能抑制低密度脂蛋白(LDL)顆粒的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，從而預(yù)防被氧化LDL的細(xì)胞毒性。被氧化LDL數(shù)量的增加是發(fā)展為CVD的危險(xiǎn)因素(Frankel，E.N.等Lancet3411103(1993)；Chanvitayapongs，S.等Neuroreport81499(1997))。CVD發(fā)病中的血小板凝集出現(xiàn)在包括最終動(dòng)脈血栓損傷的疾病的早期和晚期。這通常是導(dǎo)致局部缺血或心肌梗塞的最終事件。這樣，白藜蘆醇抑制這種血小板活性的能力就被認(rèn)為可能有助于預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化(Rotondo，S.etal.BritJPharmacol1231691(1998)；Soleas，G.J.etal.ClinBiochem3091(1997))和最終的損傷。白藜蘆醇的這些作用可以部分地包含消耗適度量紅葡萄酒所產(chǎn)生的心臟保護(hù)作用。膽固醇代謝鑒于膽固醇的不溶性，其在血液中通過(guò)稱為脂蛋白的脂質(zhì)與蛋白的復(fù)合物來(lái)被運(yùn)送。低密度脂蛋白(LDL)被認(rèn)為負(fù)責(zé)從肝向體內(nèi)其它組織中輸送膽固醇，并由此被通俗地稱為″壞膽固醇″。LDL顆粒由中密度脂蛋白(IDL)轉(zhuǎn)化而來(lái)，其中中密度脂蛋白本身由除去極低密度脂蛋白(VLDL)的甘油三酯而產(chǎn)生。VLDL在肝中由甘油三酯和一些載脂蛋白合成，然后它們從那直接分泌到血液中。高密度脂蛋白(HDL)被認(rèn)為是將膽固醇從肝外組織運(yùn)送到肝中的主要載體分子，其在肝中被分解代謝，然后在稱為膽固醇的逆行轉(zhuǎn)運(yùn)(RCT)過(guò)程中被清除，因此就為HDL獲得了“好膽固醇”的綽號(hào)。在肝內(nèi)進(jìn)行的清除過(guò)程中，膽固醇被轉(zhuǎn)化為膽汁酸，然后被排出體內(nèi)。目前對(duì)高脂血癥的治療目前被認(rèn)可的降低膽固醇的藥物通過(guò)攻擊正常膽固醇代謝途徑中的一些不同點(diǎn)來(lái)提供治療益處。結(jié)合膽汁酸的樹(shù)脂，例如消膽胺，能吸收膽汁酸并排出體外，致使增加膽固醇向膽汁酸的轉(zhuǎn)化，從而降低血中的膽固醇。樹(shù)脂降低血清膽固醇的最大量?jī)H為20％，產(chǎn)生胃腸副作用，并不能與其它藥物共同給予，因?yàn)闃?shù)脂將結(jié)合這種其它的藥物并使其排出。煙酸能抑制脂蛋白合成并降低VLDL顆粒的生成，其中VLDL顆粒是生成LDL所需的物質(zhì)。當(dāng)以提高HDL水平所需的高的濃度給藥時(shí)，會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的副作用例如潮紅。貝特類(lèi)，例如氯貝丁酯和非諾貝特，被認(rèn)為能激活屬于核激素受體的過(guò)氧化物酶體增生物激活受體(PPAR)家族的轉(zhuǎn)錄因子。這些轉(zhuǎn)錄因子能上調(diào)涉及生成HDL的基因并下調(diào)涉及生成LDL的基因。貝特類(lèi)被用于治療高脂血癥，因?yàn)樗鼈兡芡ㄟ^(guò)降低VLDL部分來(lái)減少血清甘油三酯。然而，它們沒(méi)有被美國(guó)認(rèn)可用于治療血膽固醇過(guò)多，因?yàn)榛颊叩闹|(zhì)反應(yīng)是不同的，并且在患有冠心病的患者中沒(méi)有觀察到產(chǎn)生功效。同樣，使用貝特類(lèi)會(huì)伴隨嚴(yán)重的副作用，例如胃腸癌、膽囊疾病和增加非冠脈死亡率的發(fā)病率。斯特汀，也就是已知的HMGCoA還原酶抑制劑，能通過(guò)阻斷肝膽固醇合成的限速酶來(lái)降低VLDL、LDL和IDL膽固醇。斯特汀僅能微小地增加HDL的水平，眾多的肝和腎機(jī)能障礙副作用已經(jīng)伴隨著這些藥物的使用而出現(xiàn)。依澤替米貝是在新一類(lèi)的心血管治療劑中被認(rèn)可的第一個(gè)藥物，起通過(guò)抑制腸內(nèi)膽固醇的攝取而發(fā)揮作用。依澤替米貝能降低LDL但不明顯增加HDL水平，并且不處理體內(nèi)合成的膽固醇和血液循環(huán)中或粥樣硬化斑塊中存在的膽固醇。已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)能影響膽固醇吸收的其它化合物包括膽汁酸結(jié)合劑消膽胺和植物甾醇類(lèi)。盡管開(kāi)發(fā)了這些治療方法，但是還沒(méi)有實(shí)現(xiàn)增加HDL的血液水平，目前所有被認(rèn)可的藥物都因?yàn)楦弊饔煤凸πФ拗屏似渲委熜Ч?。因此，需要改進(jìn)治療方法以切實(shí)提高HDL并由此增加膽固醇逆向運(yùn)輸?shù)乃俣纫越档脱械哪懝檀妓?。?nèi)皮機(jī)能障礙和動(dòng)脈粥樣硬化內(nèi)皮功能損傷出現(xiàn)在發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化的初期，事實(shí)上在脂質(zhì)沉積前是可檢測(cè)的。內(nèi)皮機(jī)能障礙的癥狀特征是血管收縮并會(huì)導(dǎo)致高血壓，它是其它心血管疾病例如中風(fēng)和心肌梗塞的已知危險(xiǎn)因素。研究工作已經(jīng)將動(dòng)脈粥樣硬化患者中減小的內(nèi)皮功能與一氧化氮(NO)，能誘導(dǎo)血管舒張的信號(hào)分子，的生物利用度降低有原因地聯(lián)系起來(lái)。NO生物利用度的降低也能激活在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病中發(fā)揮作用的其它機(jī)制。例如，已知NO能抑制血小板凝集，它是作為動(dòng)脈粥樣硬化特征的脂質(zhì)沉積發(fā)展中的必須步驟。同樣，NO是能抑制白細(xì)胞粘連的重要的內(nèi)源性媒介物，其中白細(xì)胞粘連是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展中的主要步驟并且很可能是高脂血癥患者中血管氧化應(yīng)激提高的結(jié)果。粘連的白細(xì)胞通過(guò)釋放大量的反應(yīng)性氧種類(lèi)而進(jìn)一步提高了氧化應(yīng)激。提高的血管氧化應(yīng)激和血膽固醇過(guò)多已經(jīng)分別被鑒定為是致使NO生物利用度降低的原因。提高的氧化作用也能產(chǎn)生自由基介導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化，這是形成動(dòng)脈粥樣硬化損傷的另一個(gè)誘因?？傊?，似乎存在陽(yáng)性反饋回路，其中這三個(gè)主要因素，血膽固醇過(guò)多、血管氧化應(yīng)激和NO生物利用度降低，每一個(gè)都能增加其它因素的程度和病理嚴(yán)重性。作為抗氧化劑和前-載脂蛋白A1劑的白藜蘆醇白藜蘆醇降低心血管疾病發(fā)病率的機(jī)制仍然是許多爭(zhēng)論的主題，還有一些爭(zhēng)論性假說(shuō)。白藜蘆醇已經(jīng)被證明是有效的抗氧化劑，這暗示了其能降低LDL顆粒的過(guò)氧化水平，并繼而抑制了動(dòng)脈粥樣硬化生成。白藜蘆醇也已經(jīng)被暗示是白細(xì)胞粘連和血小板凝集的抑制劑。此外，白藜蘆醇作為潛在的抗癌治療劑被研究，因?yàn)槠渚哂兴龅恼{(diào)節(jié)p21和p53活性水平的能力。白藜蘆醇已經(jīng)被證明是抗炎劑，提出的機(jī)制包括抑制環(huán)加氧酶-1酶(美國(guó)專利6,541,045；Jayatilake，G.S.等.JNatProd561805(1993)；美國(guó)專利6,414,037)和抑制蛋白激酶(美國(guó)專利申請(qǐng)0030171429)。因此，白藜蘆醇可能有被作為止痛劑、退熱劑而被治療性使用以治療關(guān)節(jié)炎病、哮喘病、牛皮癬(psonaticdisorders)、胃腸疾病、眼科疾病、肺部炎性疾病、癌癥的可能性，或用于治療與血管疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病和細(xì)菌、真菌和病毒感染有關(guān)的疾病。白藜蘆醇最近被記載為是激活sirtuin的化合物，并被暗示能通過(guò)直接與SirTl作用來(lái)提高壽命，這會(huì)導(dǎo)致p53下調(diào)。白藜蘆醇還已知能對(duì)抗芳烴受體并激動(dòng)雌激素受體，并且還被記載能通過(guò)激活ERK1/2通路并通過(guò)提高轉(zhuǎn)錄因子egr-1的活性來(lái)調(diào)節(jié)活性。最近已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇能提高載脂蛋白A1的轉(zhuǎn)錄，推定通過(guò)位點(diǎn)S(SiteS)，ApoA-1基因啟動(dòng)子區(qū)中的核苷酸序列，來(lái)介導(dǎo)(Taylor等.JMolEndocrin25207(2000))。發(fā)明總述本發(fā)明的目的是提供更加明確的對(duì)白藜蘆醇作用機(jī)理的理解并提供開(kāi)發(fā)具有類(lèi)似有益作用的白藜蘆醇類(lèi)似物的基礎(chǔ)。本發(fā)明的另一個(gè)目的是為旨在提高APOA1和/或HDL水平的進(jìn)一步藥物開(kāi)發(fā)提供分子靶標(biāo)。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供能提高egr-1啟動(dòng)子活性的新化合物。根據(jù)本發(fā)明的不同方面和原理，在此提供了用于測(cè)定和鑒定化合物的新工具和試劑，該化合物能通過(guò)促進(jìn)APOA1基因表達(dá)而提高HDL水平。與APOA1基因相關(guān)并且具體位于有關(guān)啟動(dòng)子區(qū)內(nèi)的各個(gè)區(qū)域都已經(jīng)被確定了，這似乎對(duì)控制基因的活性至關(guān)重要。多酚化合物例如白藜蘆醇已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)能提高基因的活性。細(xì)胞系也已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)并生成，它們能用作鑒定上調(diào)APOA1基因表達(dá)的其它這類(lèi)化合物的篩選工具，其中化合物包括白藜蘆醇模擬物和類(lèi)似物。類(lèi)似地，這種工具能被有利地使用以篩選出合成化合物或營(yíng)養(yǎng)藥物(neutraceuticals)用于確定能對(duì)APOA1的表達(dá)提供類(lèi)似益處的那些化合物。本發(fā)明一方面提供了通過(guò)給予治療有效量的用于選擇性促進(jìn)腸和肝細(xì)胞中APOA1表達(dá)的活化劑以提高個(gè)體血漿中HDL/APOA1水平的方法。這種活化劑在腸細(xì)胞內(nèi)作用于DNA，具體是作用于跨躍了基因-190到-170的DNA基序。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇或其類(lèi)似物能用作這種活化劑。這種化合物的最優(yōu)選實(shí)施方案也將包含藥學(xué)上可接受的載體例如緩沖劑或本領(lǐng)域已知的其它賦形劑。本發(fā)明另一方面提供了促進(jìn)APOA1表達(dá)的新方法，尤其是在腸細(xì)胞中。本發(fā)明另一方面提供了用于確定可能對(duì)白藜蘆醇敏感的其它基因或在此提供的新化合物種類(lèi)的方法，其包含在雜交條件下孵育這種基因以及APOA1啟動(dòng)子中基序的互補(bǔ)序列，其通過(guò)白藜蘆醇起作用，然后測(cè)定基序啟動(dòng)子互補(bǔ)序列雜交的存在。本發(fā)明另一方面提供了篩選并確定可以在哺乳動(dòng)物中提高循環(huán)的APOA1/HDL水平的合成化合物或neutraceuticals的方法。用于篩選或確定侯選化合物的優(yōu)選步驟包括將合成化合物或neutraceuticals暴露于永久性轉(zhuǎn)染的細(xì)胞HepG2或CaCo2細(xì)胞系中以篩選并測(cè)定APOA1基因轉(zhuǎn)錄和/或APOA1蛋白水平的提高，由此這種提高的轉(zhuǎn)錄水平或APOA1蛋白水平就能確定能提高循環(huán)的HDL水平的化合物或neutraceuticals。用于提高APOA1表達(dá)的其它化合物能被類(lèi)似地確定，將這種化合物與包含全部或被截短的APOA1啟動(dòng)子序列的永久性轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系孵育，并測(cè)定APOA1表達(dá)的提高。如此被確定的化合物，特別是具有藥學(xué)上可接受的載體的，將能提供很好的臨床優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明另一方面提供了一類(lèi)新化合物和用其進(jìn)行治療的方法，其中化合物可以用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列的結(jié)合，由此調(diào)節(jié)與癌癥有關(guān)的基因例如p21和p53的表達(dá)，并因此能夠治療癌癥。此外，這個(gè)方法能被延伸為用于治療與基因有關(guān)的其它疾病狀況，其中所述基因至少部分地被egr-1或egr-1啟動(dòng)子樣序列所控制，如以下更詳細(xì)地描述的那樣。本發(fā)明另一方面提供了一類(lèi)新化合物和用其進(jìn)行治療的方法，其中化合物可以用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列的結(jié)合，由此調(diào)節(jié)與壽命有關(guān)的基因例如sirtuins的表達(dá)，并因此能夠延長(zhǎng)受治個(gè)體的壽命。本發(fā)明的再一方面是提供了一類(lèi)新化合物和用其進(jìn)行治療的方法，其中化合物可以用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列的結(jié)合，由此調(diào)節(jié)與癌癥有關(guān)的基因例如p21和p53的表達(dá)，并因此能夠治療癌癥。此外，這個(gè)方法能被延伸為用于治療與基因有關(guān)的其它疾病狀況，其中所述基因至少部分地被egr-1或egr-1啟動(dòng)子樣序列所控制，如以下更詳細(xì)地描述的那樣。本發(fā)明另一方面提供了一類(lèi)新化合物和用其進(jìn)行治療的方法，其中化合物可以用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列的結(jié)合，由此調(diào)節(jié)與壽命有關(guān)的基因例如sirtuins的表達(dá)，并因此能夠延長(zhǎng)受治個(gè)體的壽命。本發(fā)明提供的化合物以說(shuō)明性的化學(xué)結(jié)構(gòu)表示，但本發(fā)明的范圍并不限于以下所列化合物。當(dāng)使用術(shù)語(yǔ)“硝基氧”時(shí)，其指的是硝酸酯基團(tuán)-ONO2。當(dāng)使用術(shù)語(yǔ)“羥基”或“羥基”時(shí)，其指的是基團(tuán)-OH。當(dāng)使用術(shù)語(yǔ)“反向酯”時(shí)，其指的是基團(tuán)。更特別的是，本發(fā)明提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的化合物，其包含含有以下結(jié)構(gòu)的茋化合物其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R10中至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；并且其中OCOR指的是R是R11或R12其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2，以及其中X可以是單、雙或三鍵。更特別的是，本發(fā)明提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的化合物，其包含含有以下結(jié)構(gòu)的類(lèi)黃酮化合物其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R13和R14可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R10或R13或R14中至少一個(gè)是是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2；其中X可以是O、CR13或NR13；Y可以是CO[仍然保持6原子環(huán)結(jié)構(gòu)的酮]、CR14或NR14；以及Z可以是單或雙鍵。更特別的是，本發(fā)明提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的化合物，其包含含有以下結(jié)構(gòu)的異類(lèi)黃酮化合物其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R13和R14可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R10或R13或R14中至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12。其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2；其中X可以是O、CR13或NR13；Y可以是CO[仍然保持6原子環(huán)結(jié)構(gòu)的酮]、CR14或NR14；以及Z可以是單或雙鍵。更特別的是，本發(fā)明提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的化合物，其包含含有以下結(jié)構(gòu)的查耳酮化合物其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R13可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R10或R13中至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，且人選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2；其中X可以是單或雙鍵；Y可以是單或雙鍵；以及Z可以是CO[酮]、CR13或NR13；前提是X和Y不都為雙鍵，如果Z是CO那么Y就不是雙鍵。更特別的是，本發(fā)明提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的化合物，其包含含有以下結(jié)構(gòu)的多酚化合物其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R10中至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2，以及其中X可以是C、S、(CO)、SO、AKA酮、(SO.sub.2)N、(CO)C、(CO)N、(CO)O、C-N[單鍵]、C＝N[雙鍵]、C-O、N-O、N-N[單鍵]或N＝N[雙鍵]。附圖簡(jiǎn)述圖1顯示了轉(zhuǎn)染測(cè)定中構(gòu)建體的示意性譜圖；圖2顯示了在被pA1.474-Luc轉(zhuǎn)染的CaCo2細(xì)胞中白藜蘆醇(0、2.5、5、7.5和10μM)對(duì)APOA1啟動(dòng)子活性水平的影響；圖3顯示了在被報(bào)告構(gòu)建體pA1.474-Luc轉(zhuǎn)染的CaCo2細(xì)胞中，白藜蘆醇(5μM)對(duì)APOA1水平產(chǎn)生影響的時(shí)程；圖4顯示了在被不同報(bào)告構(gòu)建體轉(zhuǎn)染的CaCo2細(xì)胞中進(jìn)行的研究，其中包含逐漸減小的較小APOA1啟動(dòng)子片段并被5μM白藜蘆醇處理16小時(shí)；圖5顯示了APOA1蛋白的蛋白印跡分析；圖6顯示了HepG2細(xì)胞被pA1.474-Luc短暫地轉(zhuǎn)染然后用不同劑量白藜蘆醇處理16小時(shí)后的結(jié)果；圖7顯示了來(lái)自被pAI.474-Luc和可商購(gòu)的新霉素抗性基因永久性轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞的數(shù)據(jù)。來(lái)自這個(gè)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞用于選擇新霉素的耐藥性；圖8顯示了在被pAl.474-Luc轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞中APOA1啟動(dòng)子對(duì)白藜蘆醇的響應(yīng)的時(shí)程，其中加入了10μM白藜蘆醇，然后在加入后的4、8、16和24小時(shí)時(shí)采集；以及圖9顯示了在用5或10μM白藜蘆醇處理或沒(méi)有用其處理的HepG2細(xì)胞的用過(guò)的介質(zhì)中測(cè)定APOA1蛋白含量的蛋白印跡分析。發(fā)明詳述和最佳方式根據(jù)本發(fā)明的原理，本發(fā)明一方面提供了用于增加egr-1啟動(dòng)子和具有egr-1共有序列的這些啟動(dòng)子，并由此促進(jìn)APOA1表達(dá)的方法，并描述了關(guān)于使用白藜蘆醇以促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄的步驟和可能的機(jī)理。理解可能的作用將導(dǎo)致對(duì)于具有提高的治療效果的衍生物和類(lèi)似物的改進(jìn)的開(kāi)發(fā)或研究。從流行病學(xué)研究中可以清楚地看出，心血管疾病(CVD)與許多參數(shù)都有關(guān)，但最重要的一個(gè)是HDL/APOA1的低水平。用于提高APOA1/HDL的方法應(yīng)該能降低CVD的危險(xiǎn)。而對(duì)APOA1基因活性進(jìn)行的激素調(diào)節(jié)可能是控制基因表達(dá)的一個(gè)方法，所帶來(lái)的不利缺點(diǎn)是不能使用提高濃度的激素，例如甲狀腺激素來(lái)上調(diào)基因的活性。超過(guò)正常水平的甲狀腺激素水平對(duì)人產(chǎn)生毒性，因此不能用于提高APOA1基因的活性。因此，期望的是使用能促進(jìn)APOA1基因活性但沒(méi)有伴隨毒性作用的模擬物或類(lèi)似物。本發(fā)明提供的化合物包括白藜蘆醇類(lèi)似物、白藜蘆醇類(lèi)似物以及具有附加部分的白藜蘆醇類(lèi)似物，在給予患者時(shí)該附加部分能釋放一氧化氮。這種化合物包括但不限于白藜蘆醇類(lèi)似物，其中提供一氧化氮的部分屬于有機(jī)硝酸酯、烷氧基硝酸酯、二醇二氮烯(diazeniumdiolate)、硫代硝基氧(thionitroxy)和化學(xué)結(jié)構(gòu)類(lèi)似的種類(lèi)。有機(jī)硝酸酯(“硝基氧(nitroxy)”)基團(tuán)可以通過(guò)使用已知的硝化劑例如濃縮的硝酸、硝酸和硫酸的混合物，或硝酸/醋酸酐的混合物而被加入到化合物上。烷氧基硝基氧基團(tuán)可以通過(guò)使用例如美國(guó)專利5,861,246教導(dǎo)的方法而被加入到化合物上。二醇二氮烯(Diazeniumdolate)可以通過(guò)各種方法合成，包括例如美國(guó)專利4,954,526、5,039,705、5,155,137、5,405,919和6,232,336教導(dǎo)的方法，在此將其全部并入作為參考。提供一氧化氮的部分可以通過(guò)共價(jià)或離子鍵而被有利地附著在白藜蘆醇或其衍生物或類(lèi)似物上。優(yōu)選的是，提供一氧化氮的一個(gè)部分或多個(gè)部分通過(guò)一個(gè)或多個(gè)共價(jià)鍵而被附著。附著在白藜蘆醇或其類(lèi)似物或衍生物上的提供一氧化氮的部分可以附著在白藜蘆醇分子的任意部分上。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供一氧化氮的部分取代了一個(gè)或多個(gè)羥基。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，取代發(fā)生在白藜蘆醇例如天然的白藜蘆醇上。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，取代是用有機(jī)硝酸酯基替代羥基。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，提供一氧化氮的部分已經(jīng)取代了白藜蘆醇或白藜蘆醇類(lèi)似物或其衍生物的所有三個(gè)羥基。為清楚起見(jiàn)，在此注明，-190至-170的區(qū)域被稱為″位置S(sites)″，″雌二醇通過(guò)啟動(dòng)子位置B降低大鼠載脂蛋白A1的轉(zhuǎn)錄″Taylor等，JournalofMolecularEndocrinology，25(2)207-19(2000)。本文引用的-190至-170的序列被認(rèn)為可以與位置S互換，大鼠和人APOA1啟動(dòng)子區(qū)域的位置S序列在這個(gè)范圍內(nèi)有一個(gè)堿基不同。大鼠APOAI-190至-170的啟動(dòng)子區(qū)域被認(rèn)為包含核苷酸序列"TGCAGCCCCCGCAGCTTCCTG″。與位置S有顯著同源性的人APOA1基序被認(rèn)為是含有核苷酸序列″TGCAGCCCCCGCAGCTTGCTG″。這兩個(gè)序列的區(qū)別在于一個(gè)單核苷酸，其中在大鼠中是C，在人中是G。人的序列在Higuchi等1988，JBC，263(34)18530-6(genbankaccessionM20656)中被注明，大鼠的序列在Daietal.1990，EJB，190(2)305-10(genbankaccessionX54210)中被注明?；虻倪@個(gè)區(qū)別是一種顛換突變。盡管不囿于任何特定的理論，但是白藜蘆醇在腸和肝譜系的細(xì)胞中激活A(yù)POAI的表達(dá)是通過(guò)包含于位置S內(nèi)的共有序列介導(dǎo)的。在位置S中發(fā)現(xiàn)的序列″AGCCCCCGC″已經(jīng)被記載為″Egr-1反應(yīng)元件″共有序列。這個(gè)基序包含在人APOA1啟動(dòng)子的-196到-174核苷酸范圍內(nèi)(Kilbourne等1995，JBC，270(12)7004-10)。再有，不囿于任何特定的理論，發(fā)現(xiàn)包含在位置S內(nèi)的這個(gè)AGCCCCCGC元件是一種序列，白藜蘆醇通過(guò)該序列介導(dǎo)其活性，但并不排除其它可能的所需元件。白藜蘆醇介導(dǎo)APOA1的表達(dá)，這誘導(dǎo)了肝細(xì)胞和腸細(xì)胞內(nèi)的活性。這被認(rèn)為是通過(guò)位置S而進(jìn)行的，其中位置S部分地包含AGCCCCCGC元件。白藜蘆醇通過(guò)腸和肝譜系的細(xì)胞中的AGCCCCCGC元件來(lái)介導(dǎo)活性。據(jù)信，含有位置S或AGCCCCCGC元件的約任意8個(gè)相連堿基的核苷酸序列在當(dāng)與異種啟動(dòng)子可操作連接時(shí)是作為增強(qiáng)子元件起作用，以便調(diào)節(jié)報(bào)告基因的表達(dá)。例如，包含-190至-170(或-196至-174)區(qū)域的被分離核苷酸，其與啟動(dòng)子可操作相連(例如胸苷激酶(TK)啟動(dòng)子)，與報(bào)告基因可操作相連(例如熒光素酶，CAT，或載脂蛋白A-1本身)，在表達(dá)系統(tǒng)中(例如CaCo2、HepG2或其它真核細(xì)胞，或其細(xì)胞或核提取物)，當(dāng)其與化合物接觸時(shí)能誘導(dǎo)報(bào)告基因表達(dá)的適度調(diào)節(jié)，其中化合物的生物活性是通過(guò)位置S或″AGCCCCCGC″元件介導(dǎo)的。具有這種生物活性的化合物實(shí)例包括白藜蘆醇、白藜蘆醇衍生物、白藜蘆醇樣多酚和其它的多酚(天然或合成的)。然后這種化合物能發(fā)揮作用以影響egr-1和/或egr-1共有序列元件，然后其能依次調(diào)節(jié)與這種增強(qiáng)元件有關(guān)的基因的表達(dá)。因此，于是這個(gè)方法能用于實(shí)現(xiàn)治療與基因有關(guān)的疾病或其它生理狀況，其中基因至少部分地被egr-1或egr-1啟動(dòng)子樣序列控制，如以下更詳細(xì)描述的那樣。構(gòu)建這種核苷酸的步驟，用這種核苷酸轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞以及測(cè)定報(bào)告基因的表達(dá)，通過(guò)已知的規(guī)程進(jìn)行，例如Molecularcloningalaboratorymanual，byTomManiatisandShortProtocolsinMolecularBiology，5thEdition，F(xiàn)rederickM.Ausubeletal.(Editor)中記載的規(guī)程。本文涉及這種分離的核苷酸，用這種分離的核苷酸轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，使用這種細(xì)胞或其提取物進(jìn)行篩選的方法，以及通過(guò)這種篩選方法來(lái)確定的化合物。這些分離(重組)的核酸，用其轉(zhuǎn)染的真核細(xì)胞，使用所述細(xì)胞或其提取物進(jìn)行篩選的方法，以及使用所述篩選方法來(lái)確定的化合物，能用于治療增殖性疾病例如癌癥?？赏ㄟ^(guò)本文提供的篩選方法確定的化合物的實(shí)例包含生物活性白藜蘆醇、白藜蘆醇衍生物、白藜蘆醇樣多酚和其它的多酚(天然或合成的)。使用EGR-1和EGR-1共有序列的效應(yīng)子進(jìn)行治療的方法盡管在以下的描述中，為一致性起見(jiàn)，我們使用了短語(yǔ)″e(cuò)gr-1共有序列元件″，但是應(yīng)該能理解我們還意旨這個(gè)短語(yǔ)包括介導(dǎo)機(jī)制，其通過(guò)egr-1位置(site)發(fā)揮作用，不是僅那些其效應(yīng)限于共有序列的。因此，egr-1活性的激活或抑制應(yīng)被理解為不僅包括通過(guò)egr-1共有序列元件介導(dǎo)的作用，而且還包括直接作用于除共有序列外的egr-1或與egr-1有關(guān)的元件的活性調(diào)節(jié)。Egr-1是結(jié)合egr-1共有序列元件的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，其涉及于由損傷或應(yīng)激誘導(dǎo)的事件至效應(yīng)子基因的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)(cellularsignalling)的調(diào)節(jié)，其中一些有助于受損組織的修復(fù)或細(xì)胞凋亡，其它的一些與由誘發(fā)性一些損傷產(chǎn)生的疾病的病理生理學(xué)和發(fā)病機(jī)理相關(guān)聯(lián)?？赡芨淖兪录?events)的活化的應(yīng)激物或損傷，該事件的活化通過(guò)egr-1共有序列元件介導(dǎo)，包括切應(yīng)力、紫外線誘導(dǎo)的損傷、缺氧、自由基氧種類(lèi)、血管緊張素II、血小板衍生生長(zhǎng)因子、酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF-1)和其它機(jī)械及非機(jī)械損傷和應(yīng)激。一旦被激活，egr-1就能改變(通過(guò)提高或降低)眾多下游基因的轉(zhuǎn)錄，包括PDGF-A、PDGF-B、FGF-2、載脂蛋白A1、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)、TNF-α、組織因子、尿激酶型纖維蛋白酶原激活劑(u-PA)、白介素-2(IL-2)、細(xì)胞內(nèi)粘連分子-1(ICAM-1)、銅-鋅超氧化物歧化酶基因(SODI)、p53、血小板反應(yīng)蛋白、CD44和5-脂加氧酶(5-LO)，以及過(guò)氧化物酶體增生物激活的受體-I(PPAR-1)。顯然，這些基因中的許多基因都是值得關(guān)注的治療靶標(biāo)，例如M-CSF，用于與白細(xì)胞增殖有關(guān)的疾病，載脂蛋白A1、PPAR和5-LO，用于與膽固醇有關(guān)的疾病，ICAM-1，用于與細(xì)胞粘連有關(guān)的疾病包括癌癥，SOD1，用于與過(guò)或低氧化有關(guān)的疾病，和對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是很顯然的其它的基因。Egr-1在目標(biāo)基因的反式激活中的參與，被位于目標(biāo)基因啟動(dòng)子區(qū)域的egr-1共有序列的數(shù)目、位置和同源程度所影響，被其它反式激活因子的鄰近的DNA結(jié)合基序影響，被與其它活化劑和/或抑制物的直接相互作用所影響，其中出現(xiàn)egr-1激活的細(xì)胞類(lèi)型，以及被egr-1的磷酸化狀態(tài)所影響。因此，調(diào)節(jié)egr-1的表達(dá)能激活或抑制目標(biāo)基因。能實(shí)現(xiàn)EGR-1表達(dá)的調(diào)節(jié)的化合物本發(fā)明提供的化合物包括白藜蘆醇類(lèi)似物，其它的茋類(lèi)、其它的多酚和類(lèi)黃酮，其附著了能在給予患者時(shí)釋放一氧化氮的部分。這種化合物包括但不限于白藜蘆醇類(lèi)似物、其它的茋類(lèi)、其它的多酚和類(lèi)黃酮，其中提供一氧化氮的部分屬于有機(jī)硝酸酯、烷氧硝酸酯(alkoxynitrate)、二醇二氮烯、硫代硝基氧，和化學(xué)結(jié)構(gòu)類(lèi)似的種類(lèi)。不需要理解本發(fā)明化合物的改變的準(zhǔn)確機(jī)理就能去實(shí)施本發(fā)明。本文公開(kāi)的機(jī)理是非限制性的，并僅用于對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更好的說(shuō)明。盡管不囿于理論，但是白藜蘆醇仍被認(rèn)為能產(chǎn)生先前記載的作用，這是由于其分子結(jié)構(gòu)，由至少一個(gè)芳香環(huán)結(jié)構(gòu)構(gòu)成的活性的和必須的核心，其芳環(huán)上具有至少一個(gè)羥基。天然生成的白藜蘆醇本身具體包含兩個(gè)芳環(huán)，其中一個(gè)環(huán)的3和5位上有兩個(gè)羥基，另一個(gè)環(huán)的4’位有一個(gè)羥基，這兩個(gè)芳環(huán)通過(guò)兩個(gè)碳原子相連，其中這兩個(gè)碳原子間有一個(gè)雙鍵。這一大類(lèi)物質(zhì)的其它化合物被認(rèn)為具有相同的能力并能產(chǎn)生與白藜蘆醇一樣的結(jié)果，其中所述的類(lèi)是這樣的化合物，其含有至少一個(gè)芳環(huán)結(jié)構(gòu)，環(huán)上具有至少一個(gè)羥基。因此，包含兩個(gè)芳環(huán)的茋類(lèi)，其中芳環(huán)通過(guò)兩個(gè)碳原子相連；其它的多酚，例如含有兩個(gè)或更多個(gè)芳環(huán)的物質(zhì)，優(yōu)選兩個(gè)芳環(huán)，其通過(guò)一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)原子相連，所述原子獨(dú)立地選自氮、碳、氧和硫，其可以獨(dú)立地被側(cè)基例如酮氧取代或不被取代；類(lèi)黃酮，例如但不限于天然存在的類(lèi)黃酮，其例如但不限于柚皮素、槲皮素、piceatannol、紫鉚因、漆樹(shù)黃酮、異甘草素和hesperitin，都是具有與白藜蘆醇相似性質(zhì)的化合物。因此，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)用于預(yù)防或治療疾病、狀況或病癥時(shí)，尤其是但不限于與膽固醇、心血管疾病、高血壓、氧化損傷、血脂障礙、載脂蛋白A1或apoB的調(diào)節(jié)有關(guān)的疾病、狀況或病癥，或修飾或調(diào)節(jié)膽固醇代謝的其它方面例如抑制HMGCoA還原酶，提高PPAR活性，抑制ACAT，提高ABCA-1活性，提高HDL或降低LDL或甘油三酯時(shí)，這些化合物中的任何一個(gè)都可被認(rèn)為在功能上可與白藜蘆醇互換。沒(méi)有附著用于提供一氧化氮部分的類(lèi)黃酮也已經(jīng)在之前被教導(dǎo)具有潛在的降低血清膽固醇的活性，例如美國(guó)專利5,877,208、6,455,577、5,763,414、5,792,461、6,165,984和6,133,241的教導(dǎo)。類(lèi)似地，當(dāng)用于調(diào)節(jié)位置S、AGCCCCCGC元件的轉(zhuǎn)錄時(shí)，或當(dāng)用于抑制白細(xì)胞粘附或血小板凝集，或用于抑制COX-1時(shí)，所述茋、多酚、異類(lèi)黃酮、查耳酮和類(lèi)黃酮中的任何一個(gè)都可以被認(rèn)為在功能上能與白藜蘆醇互換。這并非意味著所有的化合物在這些功能或能力的每一種的活性水平方面，或體內(nèi)毒性或功效方面，或生物利用度方面都是一樣的。這些化合物表明，在一個(gè)簡(jiǎn)單實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，它們是易于本領(lǐng)域技術(shù)人員操作的且不需要過(guò)度的實(shí)驗(yàn)，其中一些相對(duì)于其它而言提供了改進(jìn)的能力或功能，因此相對(duì)于其它物質(zhì)它們是優(yōu)選的治療劑。同樣，已知酚羥基(phenolichydroxylgroups)，例如發(fā)現(xiàn)于本發(fā)明改進(jìn)的基礎(chǔ)化合物中的酚羥基，易于進(jìn)行有助于排泄的葡糖醛酸化(glucoronidation)和硫酸化反應(yīng)。通過(guò)用其它化學(xué)基團(tuán)，例如硝酸酯(也稱有機(jī)硝酸酯或ONO.sub.2)基團(tuán)、烷氧基硝基氧或反向酯硝基氧(硝基氧基團(tuán)也稱硝基氧代基團(tuán))阻斷酚羥基而針對(duì)這些反應(yīng)進(jìn)行的保護(hù)進(jìn)一步延長(zhǎng)分子的體內(nèi)半衰期并延遲排泄。作為一個(gè)實(shí)例，白藜蘆醇，其包含三個(gè)推定為非常重要的且有治療活性的羥基，可以通過(guò)用硝酸酯(也就是已知的硝酸酯、硝基氧基團(tuán)或ONO.sub.2，有時(shí)也稱硝基氧，但不應(yīng)與NO.sub.2混淆)、烷氧基硝基氧基團(tuán)或反向酯硝基氧基(reverseesternitrooxygroups)取代羥基而被保護(hù)，其中它們?cè)隗w內(nèi)隨時(shí)間而被羥基取代以重新形成活性化合物，白藜蘆醇。由于提供一氧化氮的基團(tuán)在一段時(shí)間內(nèi)被羥基一次取代一個(gè)，并且含有一個(gè)或兩個(gè)提供一氧化氮基團(tuán)的白藜蘆醇分子仍然有部分活性，所以白藜蘆醇活性的體內(nèi)有效半衰期就被延長(zhǎng)了。這種方案能進(jìn)一步允許使用相對(duì)于母體物質(zhì)，羥化物形式的白藜蘆醇，而言劑量更低的硝酸酯形式的白藜蘆醇，這就降低了患者中的副作用。顯然，對(duì)于本發(fā)明涉及的其它茋類(lèi)、多酚、異類(lèi)黃酮、查耳酮和類(lèi)黃酮來(lái)說(shuō)，這種方法也將是有效的，因?yàn)樗鼈円脖徽J(rèn)為含有一個(gè)或多個(gè)羥基，其可以形成分子活性部位的必需部分。本發(fā)明提供了除上述茋類(lèi)、多酚、異類(lèi)黃酮、查耳酮和類(lèi)黃酮以外的化合物的硝基氧衍生物的合成、組合物和治療方法；其中合成了可以是硝基氧衍生物的所述化合物，并且其包含芳環(huán)或雜芳環(huán)，一個(gè)或多個(gè)羥基，并且已知能調(diào)節(jié)血清膽固醇的水平。包含芳環(huán)或雜芳環(huán)、一個(gè)或多個(gè)羥基且已知能調(diào)節(jié)血清膽固醇水平的這類(lèi)化合物的一個(gè)實(shí)例包含HMGCoA還原酶抑制劑，也就是已知的他汀類(lèi)藥物?？缮藤?gòu)的他汀類(lèi)藥物，其硝基氧衍生物由本發(fā)明提供，包含阿伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀和羅蘇伐他汀。兩個(gè)其它的化合物，其落在了包含芳環(huán)或雜芳環(huán)、一個(gè)或多個(gè)羥基且已知能調(diào)節(jié)血清膽固醇水平的說(shuō)明內(nèi)，是依澤替米貝和煙酸。因此，依澤替米貝和煙酸的硝基氧衍生物也由本發(fā)明提供。合成茋類(lèi)、多酚、類(lèi)黃酮、他汀類(lèi)和依澤替米貝的提供一氧化氮的衍生物的方法有機(jī)硝酸酯(也稱硝基氧、硝酸酯、ONO.sub.2，有時(shí)也稱“硝基氧”，但不能與NO.sub.2混淆)基團(tuán)可以通過(guò)使用已知的方法加入到化合物上，例如Hakimelahi的方法，其中硝基氧基團(tuán)取代了母體分子上存在的羥基(Hakimelahi等1984.Helv.Chim.Acta.67906-915)。烷氧基硝基氧基團(tuán)可以通過(guò)使用例如美國(guó)專利5,861,426教導(dǎo)的方法加入到化合物上。二醇二氮烯可以通過(guò)各種方法合成，包括例如美國(guó)專利4,954,526、5,039,705、5,155,137、5,405,919和6,232,336教導(dǎo)的方法，在此將其全部并入本文作為參考。提供一氧化氮的部分可以被有利地通過(guò)共價(jià)或離子鍵附著在茋?yán)绨邹继J醇，多酚或類(lèi)黃酮例如柚皮素，或本發(fā)明記載和提供的其它化合物上，例如他汀類(lèi)成員，或它們的衍生物或類(lèi)似物上。優(yōu)選的是，提供一氧化氮的部分通過(guò)一個(gè)或多個(gè)共價(jià)鍵被附著。提供一氧化氮的部分可以被有利地附著在分子的任何部分上。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供一氧化氮的部分取代了一個(gè)或多個(gè)羥基。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，有機(jī)硝酸酯基團(tuán)取代了羥基的位置。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，附著在酯或反向酯上的有機(jī)硝酸酯基團(tuán)取代了羥基的位置。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，提供一氧化氮的部分已經(jīng)取代了茋?yán)绨邹继J醇，多酚，或類(lèi)黃酮例如柚皮素，或本發(fā)明記載或提供的其它化合物，例如他汀類(lèi)任何成員上的所有的羥基，或它們的衍生物或類(lèi)似物上的羥基。對(duì)本發(fā)明的所有化合物來(lái)說(shuō)，也考慮并提供了用以下基團(tuán)取代羥基氟離子、氯離子、溴離子、CF.sub.3基團(tuán)、CCl.sub.3基團(tuán)、CBr.sub.3、1到18個(gè)碳原子的烷基鏈，其是任選被取代的，任選是分支的，或1到18個(gè)碳原子的烷氧基鏈，其是任選被取代的，任選是分支的；因?yàn)檫@種對(duì)母體化合物的修飾是很普遍的，已知能提高藥物的穩(wěn)定性而不會(huì)改變作用機(jī)理，并易于由本領(lǐng)域技術(shù)人員完成。對(duì)本發(fā)明的所有化合物來(lái)說(shuō)，還考慮并提供了化合物的乙?；苌?，因?yàn)檫@種對(duì)母體化合物的修飾是很普遍的，已知能改進(jìn)藥物的有益效果而不會(huì)改變作用機(jī)理，并且易于由本領(lǐng)域技術(shù)人員完成。乙?；苌锇?、反向酯(reverseesters)、附著了提供一氧化氮部分(包括但不限于硝基氧基團(tuán))的酯和附著了提供一氧化氮部分(包括但不限于硝基氧基團(tuán))的反向酯。對(duì)本發(fā)明的所有化合物來(lái)說(shuō)，還考慮并提供了化合物的磷酸化衍生物，因?yàn)檫@種對(duì)母體化合物的修飾是很普遍的，已知能改進(jìn)藥物的有益效果而不會(huì)改變作用機(jī)理，并且易于由本領(lǐng)域技術(shù)人員完成。在此還考慮了本發(fā)明考慮的化合物的葡萄糖醛酸酯衍生物(glucoronidatedderivatives)，因?yàn)槠咸烟侨┧狨セ求w內(nèi)天然存在的一個(gè)過(guò)程，作為茋類(lèi)、其它多酚和類(lèi)黃酮代謝的一部分。一旦向患者提供，本發(fā)明的許多化合物都將在體內(nèi)被修飾，并且因此在體內(nèi)以葡萄糖醛酸酯化的形式存在。因此，在給藥前，本發(fā)明化合物綴合葡萄糖醛酸(glucoronicacid)將不防礙化合物的功能或治療功效，如體內(nèi)研究所確定的那樣。因此，附著了額外糖部分的本發(fā)明化合物被認(rèn)為在功能上可與母體化合物可比，并因此由本發(fā)明來(lái)提供。本發(fā)明考慮的任何茋、多酚或類(lèi)黃酮衍生化合物的葡萄糖醛酸酯化都可以通過(guò)使用例如人肝微粒體按照Otake的方法而實(shí)現(xiàn)(Otake等DrugMetabDisp30576(2002))。類(lèi)似地，本文還考慮了本發(fā)明考慮的化合物的硫酸化衍生物，因?yàn)榱蛩峄求w內(nèi)天然存在的一個(gè)過(guò)程，作為茋類(lèi)、其它多酚和類(lèi)黃酮代謝的一部分。一旦提供給患者，本發(fā)明的某些化合物都將在體內(nèi)被修飾，并且因此在體內(nèi)以硫酸化的形式存在。因此硫酸化不會(huì)防礙化合物的功能或治療用途，如體內(nèi)研究所確定的那樣。因此，本發(fā)明的化合物，其已經(jīng)經(jīng)過(guò)了硫酸化反應(yīng)，被認(rèn)為在功能上能與母體化合物可比，并因此由本發(fā)明來(lái)提供。本發(fā)明考慮的任何茋、多酚或類(lèi)黃酮衍生化合物的硫酸化都可以通過(guò)使用例如Varin的離子-空氣提取法而實(shí)現(xiàn)(Varin等AnalBiochem161176(1987))。本文記載的化合物的鹽，包括那些對(duì)于藥物制劑優(yōu)選的，也由本發(fā)明提供。本發(fā)明考慮的化合物為清楚起見(jiàn)，本發(fā)明提供的化合物作為說(shuō)明性的化學(xué)結(jié)構(gòu)表示，但是本發(fā)明的范圍并不限于以下列出的化合物。當(dāng)使用術(shù)語(yǔ)“硝基氧”時(shí)，其指的是硝酸酯基團(tuán)-ONO2。當(dāng)使用術(shù)語(yǔ)“羥基”或“羥基”時(shí)，其指的是基團(tuán)-OH。當(dāng)使用術(shù)語(yǔ)“反向酯(reverseester)”時(shí)，其指的是基團(tuán)其中O-鍵是連接類(lèi)黃酮、茋或多酚結(jié)構(gòu)的母體化合物的，R是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子。當(dāng)使用術(shù)語(yǔ)“反向酯硝基氧”時(shí)，其指的是基團(tuán)其中O-鍵是連接類(lèi)黃酮、茋或多酚結(jié)構(gòu)的母體化合物的，R是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2。本發(fā)明提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的化合物，其具有共通的茋結(jié)構(gòu)其能被進(jìn)一步細(xì)分為以下結(jié)構(gòu)其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R10中至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12，其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2。本發(fā)明還提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的化合物，其具有以下共通的結(jié)構(gòu)其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R10中至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12。其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2其中X和Y可以各自獨(dú)立地為C、N、O，前提是如果X或Y是C那么另一個(gè)就不是C。本發(fā)明還提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的化合物，其具有以下共通的結(jié)構(gòu)其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R10中至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2。本發(fā)明還提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的化合物，其具有以下共通的多酚結(jié)構(gòu)其能被進(jìn)一步細(xì)分為以下結(jié)構(gòu)其中X是C或S其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸軛體]，前提是R1-R10中至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2。本發(fā)明還提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的化合物，其具有以下共通的類(lèi)黃酮結(jié)構(gòu)其能被進(jìn)一步細(xì)分為以下結(jié)構(gòu)本發(fā)明還提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的化合物，其具有以下共通的異類(lèi)黃酮(isoflavonoid)結(jié)構(gòu)其能被進(jìn)一步細(xì)分為以下結(jié)構(gòu)其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R15和R16可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R13、R14、OR13、OR14、OCOR13、OCOR14、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R12或R15或R16中至少一個(gè)是硝基氧、R14、OR14或OCOR14；以及其中OCOR指的是R是R13或R14其中R13是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R14是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2；其中X可以是O、CR15或NR15；Y可以是CO[仍然保持6原子環(huán)結(jié)構(gòu)的酮]、CR16或NR16；以及Z可以是單或雙鍵。本發(fā)明還提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的化合物，其具有以下共通的查耳酮結(jié)構(gòu)其中一些結(jié)構(gòu)由以下結(jié)構(gòu)表示其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R13、R12、OR13、OR12、OCOR13、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R11中至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R12或R13其中R13是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2；以及其中X可以是單或雙鍵；Y可以是單或雙鍵；以及Z可以是CO[酮]、CR11或NR11。本發(fā)明還提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的具有以下通式的化合物其中R1、R2、R3、R4可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R4中至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2。本發(fā)明還提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的化合物，其含有其中R1是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R12其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2。本發(fā)明還提供了化合物其中R1是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R12其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2。本發(fā)明還提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的具有以下通式的化合物其中R1、R2、R3可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R3中至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2。本發(fā)明還提供了以下通式化合物其中R1、R2、R3可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R3中至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2。本發(fā)明還提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的具有以下通式的化合物其中R1、R2、R3可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]、前提是R1-R3中至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2。本發(fā)明還提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的具有以下通式的化合物其中R1、R2、R3可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R3中至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2。本發(fā)明還提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的具有以下通式的化合物其中R1、R2可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是中R1-R2至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2。本發(fā)明還提供了用于提高轉(zhuǎn)錄因子與egr-1樣啟動(dòng)子序列結(jié)合的化合物，其含有其中R1是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R12其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2。合成茋類(lèi)、多酚和類(lèi)黃酮的提供NO的衍生物的方法對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)顯而易見(jiàn)的是，存在許多用于合成茋類(lèi)例如白藜蘆醇、多酚或類(lèi)黃酮例如柚皮素，或其它的抗氧化劑、降低血清膽固醇或激活膽固醇的逆行轉(zhuǎn)運(yùn)或提高HDL的化合物的提供一氧化氮的衍生物或類(lèi)似物。盡管存在已知的方法，但是在此之前卻沒(méi)有記載或合成過(guò)這種化合物的多種方法。優(yōu)選的是，這種化合物能是茋類(lèi)例如白藜蘆醇、多酚或類(lèi)黃酮例如柚皮素，或其它的抗氧化劑、降低血清膽固醇或激活膽固醇的逆行轉(zhuǎn)運(yùn)或提高HDL的化合物的類(lèi)似物或衍生物，它們結(jié)合了提供一氧化氮的部分。最優(yōu)選的是，這種化合物能是茋類(lèi)例如白藜蘆醇、多酚或類(lèi)黃酮例如柚皮素，或其它的抗氧化劑、降低血清膽固醇或激活膽固醇的逆行轉(zhuǎn)運(yùn)或提高HDL的化合物的類(lèi)似物或衍生物，它們具有一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2基團(tuán)，這也稱為硝酸酯、有機(jī)硝酸酯或硝基氧基團(tuán)，它們?nèi)〈四阁w化合物的羥基。本發(fā)明提供的化合物實(shí)例是白藜蘆醇，其中有機(jī)硝酸酯基團(tuán)取代了存在于天然存在的白藜蘆醇上的三個(gè)羥基。這個(gè)化合物將被稱為3，4’，5三硝基氧反式茋，或白藜蘆醇三硝酸酯，或使用IUPAC命名法，1，3-二-硝基氧-5-[2-(4-硝基氧-苯基)-乙烯基)-苯。本發(fā)明所提供化合物的另一個(gè)實(shí)例是柚皮素，其中有機(jī)硝酸酯基團(tuán)取代了存在于天然存在的柚皮素上的三個(gè)羥基。這個(gè)化合物將被稱為柚皮素三硝酸酯，或使用IUPAC命名法，5，7-二-硝基氧-2-(4-硝基氧-苯基)-色滿-4-酮。本發(fā)明所提供化合物的另一個(gè)實(shí)例是柚皮素的反向酯硝基氧類(lèi)似物，其有三個(gè)被取代的羥基，它是5-硝基氧-戊酸4-[5，7-二-(5-硝基氧-戊酰氧(pentanoyloxy))-4-氧-色滿-2-基]-苯基酯。盡管不限于這些在此明確記載的化合物，但是本發(fā)明的實(shí)施例部分還是提供了更多的實(shí)例。反應(yīng)中使用的反式-白藜蘆醇的原材料能從商業(yè)上獲得，Bio-StatLimited(Stockport，U.K.)或SigmaChemicalCo.(St.Louis，MO，USA)，其分離自葡萄酒，使用Goldberg等(1995)Am.J.Enol.Vitic.46(2)159-165的步驟?；蛘呤牵词?白藜蘆醇可以根據(jù)Toppo的方法如美國(guó)專利6,048,903的教導(dǎo)來(lái)合成，或由適宜的被取代酚依據(jù)Wittig反應(yīng)合成，其中Wittig反應(yīng)被Waterhouse由Moreno-Manas和Pleixats的方法修飾而來(lái)。用作合成反應(yīng)成分的柚皮素是天然存在的化合物，其易于從許多化學(xué)來(lái)源得到，或者是，可使用已知的方法不需要過(guò)度的實(shí)驗(yàn)而從天然來(lái)源例如柑橘汁中分離。給藥對(duì)治療上述狀況來(lái)說(shuō)，可以使用該化合物本身，但更優(yōu)選的是與可接受的載體或賦形劑一起以藥學(xué)上可接受制劑的形式提供。這些制劑包括適于口服、直腸、局部、頰和非胃腸道(例如皮下、肌內(nèi)、皮內(nèi)或靜脈內(nèi))給藥的形式，盡管在任何給定情形中，最適宜的給藥形式將取決于受治狀況的程度和嚴(yán)重性以及所用特定化合物的性質(zhì)。適于口服給藥的制劑可以存在于不連續(xù)的元件內(nèi)例如膠囊、扁囊劑、錠劑或片劑，每個(gè)中均包含預(yù)定量的化合物粉末或顆粒；作為位于水性或非水性液體中的溶液或混懸液；或作為水包油或油包水乳劑。如所指出的，這種制劑可以通過(guò)任何適宜的藥學(xué)方法制備，其包括將活性化合物和載體或賦形劑(其可以由一個(gè)或多個(gè)助劑組成)結(jié)合的步驟。就與制劑的其它成分的相容性來(lái)說(shuō)，載體必須是可以被接受的，且必須對(duì)接受者無(wú)害。載體可以是固體或液體，或兩者，優(yōu)選與化合物配制成單位劑量的制劑，例如片劑，其可以包含0.05％到95％重量的活性化合物。也可以存在其它的藥理活性物質(zhì)，這包括其它的化合物。本發(fā)明的制劑可以通過(guò)任何已知的制藥技術(shù)來(lái)制備，其基本上由將各種成分混合而組成。對(duì)于固體組合物，常規(guī)的無(wú)毒固態(tài)載體包括例如藥學(xué)級(jí)的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石粉、纖維素、葡萄糖、蔗糖、碳酸鎂等。在藥理學(xué)上可給予的液態(tài)組合物能通過(guò)例如在賦形劑中將本文記載的活性化合物與任選的藥學(xué)輔劑溶解、分散等，賦形劑例如有水、鹽水、葡萄糖水溶液、甘油、乙醇等，由此形成溶液或混懸液。通常，適宜的制劑可以通過(guò)以下方法而被有利地制備，將活性化合物與液態(tài)或被細(xì)分的固態(tài)載體或它們二者均勻且充分地混合，然后，如果需要的話，成形產(chǎn)品。例如，片劑可以通過(guò)壓制或模制化合物的粉末或顆粒來(lái)制備，任選具有一種或多種輔助成分。壓制片可以通過(guò)在適宜的機(jī)器中壓制以能自由流動(dòng)的形式存在的化合物，例如粉末或顆粒形式來(lái)制備，其任選與粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑和/或表面活性劑/分散劑混合。模制片可以通過(guò)在適宜的機(jī)器中將粉末狀的被惰性液態(tài)稀釋劑潤(rùn)濕的化合物模制來(lái)形成。適于頰(舌下)給藥的制劑包括糖錠劑，其含有位于矯味基質(zhì)中的化合物，基質(zhì)通常是蔗糖和atacia或西黃蓍膠，以及軟錠劑(pastilles)，其含有位于惰性基質(zhì)例如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠中的化合物。適于非胃腸道給藥的本發(fā)明制劑包含化合物的滅菌水性制劑，其與預(yù)期的接受者的血液大致等滲。這些制劑經(jīng)靜脈內(nèi)給予，盡管也可以通過(guò)皮下、肌內(nèi)或皮內(nèi)注射給藥。這種制劑可以通過(guò)將化合物與水混合，并使得到的溶液滅菌并與血液等滲來(lái)方便地制備。根據(jù)本發(fā)明的可注射組合物一般將包含0.1到5％w/w的活性化合物。適于直腸給藥的制劑以單位劑量的栓劑形式存在。這些可以通過(guò)以下方法制備，將化合物與一個(gè)或多個(gè)常規(guī)的固態(tài)載體例如可可脂混合，然后成形得到的混合物。適于局部應(yīng)用到皮膚上的制劑優(yōu)選是以下形式軟膏、乳劑、洗劑、糊劑、凝膠、噴霧、氣霧劑或油?？捎玫妮d體和賦形劑包括凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、乙醇，以及它們中兩個(gè)或多個(gè)的組合?；钚曰衔镆话愕拇嬖跐舛葹椋M合物的0.1到15％w/w，例如0.5到2％?；钚曰衔锏慕o藥量將當(dāng)然取決于受治者、受治者的體重、給藥方式和處方醫(yī)師的判斷。在本發(fā)明的方法中，給藥方案一般將包括每天或半天給予一次(semi-daily)感知(perceived)劑量為1ug到1000mg的膠囊化化合物。膠囊化易于接近作用部分并允許同時(shí)給予在理論上產(chǎn)生協(xié)同效果的活性成分。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的給藥方案，醫(yī)師將能很容易地確定最佳劑量并將能很容易地對(duì)給藥進(jìn)行修飾以實(shí)現(xiàn)這種劑量。實(shí)施例以下實(shí)施例的提出有助于理解本發(fā)明，并不應(yīng)該被認(rèn)為是對(duì)在此描述和主張的本發(fā)明的具體限定。本發(fā)明的這種變化，其將在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)，包括目前已知的或后來(lái)開(kāi)發(fā)的等價(jià)化合物的取代，包括改變制劑或較小地改動(dòng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，這都被認(rèn)為落入本發(fā)明所包括的范圍內(nèi)。對(duì)于本文提供的所有實(shí)施例，除非另有指明，單數(shù)或復(fù)數(shù)形式的術(shù)語(yǔ)″該化合物″將指本發(fā)明提供的任意化合物。有代表性的化合物包括3，4′，5三硝基氧反式茋、3，4′，5三(硝基氧)乙氧基反式茋和反式白藜蘆醇的二醇二氮烯衍生物，其中連接兩個(gè)苯環(huán)的一個(gè)或兩個(gè)碳原子被附著了二醇二氮烯基團(tuán)的氮原子取代，但這并不限制實(shí)施例的范圍。本文所列的所有實(shí)施例都使用以下步驟和方法進(jìn)行，參考以下內(nèi)容，另有說(shuō)明的除外。細(xì)胞培養(yǎng)人肝胚細(xì)胞瘤細(xì)胞(HepG2)和腸細(xì)胞(CaCo2)獲自AmericanTypeCultureCollection(Rockville，MD)。細(xì)胞在最低基礎(chǔ)培養(yǎng)基(MEM)(Gibco)中生長(zhǎng)，培養(yǎng)基中添加了2mM谷氨酰胺、MEM維生素溶液和10％胎牛血清(FBS)(對(duì)于HepG2)以及20％FBS(Gibco)(對(duì)于CaCo2細(xì)胞)。所有的細(xì)胞均在95％空氣/5％CO2氣氛中孵育。質(zhì)粒用于研究的質(zhì)粒包含人APOA1啟動(dòng)子的-474、-375、-325、-235、-190至-170，融合于載體pGL3(Promega)中的螢火蟲(chóng)熒光素酶基因上。啟動(dòng)子DNA的插入由核苷酸序列分析驗(yàn)證。質(zhì)粒DNA由包含所需克隆的細(xì)菌制備，并使用Qiagen試劑盒根據(jù)廠商的說(shuō)明書(shū)分離，并用于轉(zhuǎn)染研究或生成穩(wěn)定的細(xì)胞系。細(xì)胞處理CaCo2或HepG2細(xì)胞在已知成分培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，用于啟動(dòng)子測(cè)定研究，并用感興趣的報(bào)告構(gòu)建體轉(zhuǎn)染。然后將細(xì)胞留在無(wú)血清培養(yǎng)基中8-12小時(shí)，然后將白藜蘆醇加入到培養(yǎng)基中得到如附例所述的試劑終濃度。將細(xì)胞暴露在試劑中經(jīng)過(guò)一段變化的時(shí)間，收集然后測(cè)定令人感興趣的參數(shù)，APOA1蛋白或啟動(dòng)子活性。瞬時(shí)/水久性轉(zhuǎn)染對(duì)于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，將細(xì)胞接種到六孔板中并生長(zhǎng)到30-40％的融合。然后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，使用5μl的Superfect(Qiagen)和最多1微克的感興趣質(zhì)粒，位于含100μl不含血清和抗生素的MEM中。該溶液在室溫下孵育10分鐘。然后從待轉(zhuǎn)柒的細(xì)胞中除去培養(yǎng)基，在應(yīng)用到細(xì)胞中以前，將1ml的培養(yǎng)基加入到DNA-Superfect混合物中。然后在37℃/5％CO2中將細(xì)胞暴露在DNA中2小時(shí)，然后除去包含DNA的培養(yǎng)基，用不含血清的MEM取而代之，在采集前生長(zhǎng)過(guò)夜。HepG2細(xì)胞也使用共轉(zhuǎn)染法被474-熒光素酶永久性轉(zhuǎn)染。HepG2細(xì)胞在MEM(Gibco)和10％胎牛血清(Gibco)中生長(zhǎng)，然后與474-Luc和攜帶新霉素耐藥性的另一個(gè)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染。然后將400-600μg每ml的新霉素加入到培養(yǎng)基中，在新霉素處理后存活的細(xì)胞檢測(cè)Luc-活性，當(dāng)存在時(shí)其表示細(xì)胞已經(jīng)被永久性轉(zhuǎn)染。制備用于熒光素酶和β-半乳糖苷酶試驗(yàn)的細(xì)胞溶解產(chǎn)物用感興趣的CAT質(zhì)粒(見(jiàn)上)與0.5μg的勞氏肉瘤病毒-β-半乳糖苷酶(RSV-beta-Gal)轉(zhuǎn)染細(xì)胞以監(jiān)測(cè)被細(xì)胞攝取的DNA的效率。然后在用白藜蘆醇(Calbiochem)處理一段不同的時(shí)間前，將所有的細(xì)胞留在有很少血清的介質(zhì)中12小時(shí)。然后使用可商購(gòu)的報(bào)告溶解緩沖液(Promega)溶解收集到的細(xì)胞，并在13,000rpm下收集5分鐘的細(xì)胞碎片。將上清液的等分試樣用于測(cè)定β-半乳糖苷酶的活性(Promega)，并使用BradfordAssay(Bio-Rad試劑)確定總蛋白質(zhì)。熒光素酶活性的測(cè)定用感興趣的熒光素酶質(zhì)粒(見(jiàn)上)轉(zhuǎn)染細(xì)胞，并整晚都留在有很少血清的介質(zhì)中以進(jìn)行恢復(fù)。然后用不同濃度的白藜蘆醇處理這些細(xì)胞或被熒光素酶啟動(dòng)子永久性轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，處理所述的時(shí)間段。如上，RSV-beta-Gal被共轉(zhuǎn)染作為對(duì)照以對(duì)DNA的攝取進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。然后收集細(xì)胞并混懸在報(bào)告溶解緩沖液(Promega)中。10μl這種溶解產(chǎn)物的等分試樣被用于確定熒光素酶的活性，5μl用于確定總蛋白質(zhì)(BradfordAssay，Bio-Rad試劑)。然后確定熒光素酶的活性并以相對(duì)于該樣品蛋白質(zhì)的濃度表示。WESTERNBLOTTING在不同的時(shí)間點(diǎn)從未被處理和被處理的HepG2/CaCo2培養(yǎng)皿中收集介質(zhì)或細(xì)胞，需要的話貯存在-80℃。對(duì)于其中收集了介質(zhì)以用于western印跡法的實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)，來(lái)自這些皿中的細(xì)胞被胰蛋白酶化(Gibco)，并使用100μl的細(xì)胞樣品通過(guò)考馬斯藍(lán)染色(coomasiebluestaining)計(jì)算存活/死亡細(xì)胞比例來(lái)確定死亡細(xì)胞的百分比。然后剩下的細(xì)胞用于測(cè)定總DNA的含量，使用Maniatis記載的方法(CloningManual)。然后利用每個(gè)皿中的DNA含量和存活/死亡細(xì)胞的比例對(duì)被聚丙烯酰胺凝膠電泳分離的介質(zhì)量進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。對(duì)于要求全細(xì)胞溶解產(chǎn)物western印跡法的實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)，收集細(xì)胞并用報(bào)告溶解試劑(Promega)進(jìn)行溶解，細(xì)胞碎片在13,000rpm下旋轉(zhuǎn)5分鐘。然后取上清液的等分試樣用于確定每個(gè)樣品中的蛋白量，使用Bradford測(cè)定法(Bio-Rad試劑)。然后用聚丙烯酰胺凝膠電泳從每個(gè)樣品中分離等量的蛋白質(zhì)，如同對(duì)介質(zhì)進(jìn)行的那樣。然后將凝膠轉(zhuǎn)移到硝化纖維膜(Hybond，AmershamPharmaciaBiotech)上，然后用抗人APOA1的單克隆抗體(Calbiochem)進(jìn)行探查。APOA1的免疫熒光標(biāo)記HepG2和CaCo2細(xì)胞在蓋玻片上生長(zhǎng)。生長(zhǎng)CaCo2細(xì)胞的蓋玻片也用纖維結(jié)合素(Calbiochem)包裹。用不同量的乙醇或白藜蘆醇處理24或48小時(shí)后，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定并在室溫下用溶液滲透十分鐘，其中溶液包含位于PEM緩沖液(160mmol/LPIPES，10mmol/L依他酸(EGTA)，4mmol/LMgC12，pH6.9)中的3.7％甲醛、0.25％戊二醛和0.25％triton-X的混合物。用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌三次后，用還原劑硼氫化鈉(1mg/ml，位于PBS中)處理細(xì)胞，3×5分鐘。然后再次在PBS中洗滌。用PBS將小鼠單克隆抗-APOA1抗體(Calbiochem)稀釋到1∶50，并加到每個(gè)蓋玻片上，并在潮濕的室內(nèi)于室溫下孵育60分鐘。洗滌后，用PBS將結(jié)合FITC的二抗(山羊抗小鼠IgG，JacksonImmunoResearch)稀釋到1∶200，并加到蓋玻片上于室溫下進(jìn)行45-60分鐘。然后用PBS對(duì)細(xì)胞進(jìn)行最后的洗滌并使用封固劑將其封固在載玻片上，其中封固劑包含位于PBS中的P-苯二胺和50％甘油。使用Zeiss熒光顯微鏡(Zeiss，Dusseldorf，Germany)，F(xiàn)ITC激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)為488和520nm，觀察細(xì)胞中被FITC標(biāo)記的ApoA1肽。使用安放在顯微鏡上的柯達(dá)數(shù)字照相機(jī)進(jìn)行拍照以取得照片。對(duì)于被處理和未被處理的細(xì)胞來(lái)說(shuō)，曝光時(shí)間是一樣的。最后的放大率是250X。實(shí)施例1制備1，3-二-硝基氧-5-[2-(4-硝基氧-苯基)-乙烯基)-苯。在25℃向位于5ml干燥THF中的1mmol5-[(E)-2-(4-羥基-苯基)-乙烯基]-苯-1，3-二醇(異名白藜蘆醇；3，4’，5三羥基反式茋)溶液內(nèi)加入3mmol的SOCl(NO.sub.3)或SO(NO.sub.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品(1，3-二-硝基氧-5-[(E)-2-(4-硝基氧-苯基)-乙烯基)-苯)和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例2制備piceatannol四硝酸酯在25℃向位于5ml干燥THF中的1mmol1，2-苯二醇，4-(2-(3，5-二羥基苯基)乙烯基)-(E)-(異名piceatannol)溶液內(nèi)加入4mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品(piceatannol四硝酸酯)和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例3制備紫鉚因四硝酸酯在25℃向位于5ml干燥THF中的1mmol3，4，2’，4’-四羥基查耳酮(異名紫鉚因)溶液內(nèi)加入4mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品紫鉚因四硝酸酯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例4制備異甘草素三硝酸酯在25C向位于5ml干燥THF中的1mmol4，2’，4’-三羥基查耳酮(異名異甘草素)溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品異甘草素(isoliquiritienin)三硝酸酯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例5制備漆樹(shù)黃酮四硝酸酯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol3，7，3’，4’-四羥基黃酮(異名漆樹(shù)黃酮)溶液內(nèi)加入4mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品漆樹(shù)黃酮四硝酸酯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例6制備槲皮素五硝酸酯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol3，5，7，3’，4’-五羥基黃酮(異名槲皮素)溶液內(nèi)加入5mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品槲皮素五硝酸酯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例7制備N(xiāo)-(3，5-二-硝基氧-苯基)-N’-(4-硝基氧-苯基)-肼在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol5-[N’-(4-羥基-苯基)-肼基]-苯-1，3-二醇溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品N-(3，5-二-硝基氧-苯基)-N’-(4-硝基氧-苯基)-肼和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例8制備1，3-二-硝基氧-5-(4-硝基氧-苯基二硫烷基(disulfanyl))-苯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol5-(4-羥基-苯基二硫烷基)-苯-1，3-二醇溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品1，3-二-硝基氧-5-(4-硝基氧-苯基disulfanyl)-苯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例9制備1，3-二-硝基氧-5-(4-硝基氧-苯基過(guò)氧)-苯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol5-(4-羥基-苯基過(guò)氧)-苯-1，3-二醇溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品1，3-二-硝基氧-5-(4-硝基氧-苯基過(guò)氧)-苯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例10制備1，3-二-硝基氧-5-(4-硝基氧-苯基硫烷基(sulfanyl)甲基)-苯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol5-(4-羥基-苯基硫烷基甲基)-苯-1，3-二醇溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品1，3-二-硝基氧-5-(4-硝基氧-苯基硫烷基甲基)-苯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例11制備N(xiāo)-(3，5-二-硝基氧-苯基-O-(4-硝基氧-苯基)-羥基胺在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol5-(4-羥基-苯氧基氨基)-苯-1，3-二醇溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品N-(3，5-二-硝基氧-苯基-O-(4-硝基氧-苯基)-羥基胺和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例12制備芐基-(4-硝基氧-苯基)-胺在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol4-芐基氨基-苯酚溶液內(nèi)加入1mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)被硝化的產(chǎn)物芐基-(4-硝基氧-苯基)-胺進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例13制備2-(亞水楊基氨基)苯酚二硝酸酯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol2-(亞水楊基氨基)苯酚溶液內(nèi)加入2mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品2-(亞水楊基氨基)苯酚二硝酸酯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例14制備(2，4-二-硝基氧-苯基)-(2-硝基氧-苯基)-二氮烯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol4-(2-羥基-苯偶氮基)-苯-1，3-二醇(異名1，3-苯二醇，4-((2-羥基苯基)偶氮)-)溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品2，4-二-硝基氧-苯基)-(2-硝基氧-苯基)-二氮烯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例15制備二-(2，2’-硝基氧-苯基)-二氮烯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol二-(2，2’-羥基-苯基)-二氮烯(異名1-羥基-2-(2-羥基苯偶氮基)苯)溶液內(nèi)加入2mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品二-(2，2’-硝基氧-苯基)-二氮烯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例16制備N(xiāo)-(3-硝基氧-苯基)-苯磺酰胺在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmolN-(3-羥基-苯基)-苯磺酰胺(異名N-(3-羥基苯基)苯磺酰胺)溶液內(nèi)加入1mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)被硝化的產(chǎn)物N-(3-硝基氧-苯基)-苯磺酰胺進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例17制備N(xiāo)-(4-硝基氧-苯基)-苯磺酰胺在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmolN-(4-羥基-苯基)-苯磺酰胺(異名N-(4-羥基苯基)苯磺酰胺)溶液內(nèi)加入1mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)被硝化的產(chǎn)物N-(4-硝基氧-苯基)-苯磺酰胺進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例18制備3，3’，4，5’-四硝基氧二芐基在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol3，3’，4，5’-四羥基二芐基溶液內(nèi)加入4mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品3，3’，4，5’-四硝基氧二芐基和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例19制備1-芐基氧-2-硝基氧-苯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol2-芐基氧-苯酚溶液內(nèi)加入1mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)被硝化的產(chǎn)物1-芐基氧-2-硝基氧-苯進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例20制備苯甲酸3-硝基氧-苯基酯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol苯甲酸3-羥基-苯基酯(異名間苯二酚單苯甲酸酯)溶液內(nèi)加入1mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)被硝化的產(chǎn)物苯甲酸3-硝基氧-苯基酯進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例21制備2-硝基氧-苯甲酸苯基酯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol2-羥基-苯甲酸苯基酯(異名苯基水楊酸酯)溶液內(nèi)加入1mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)被硝化的產(chǎn)物2-硝基氧-苯甲酸苯基酯進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例22制備2-硝基氧-N-(4-硝基氧-苯基)-苯甲酰胺在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol2-羥基-N-(4-羥基-苯基)-苯甲酰胺(異名柳胺酚)溶液內(nèi)加入2mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品2-硝基氧-N-(4-硝基氧-苯基)-苯甲酰胺和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例23制備2-硝基氧-N-(3-硝基氧-苯基)-苯甲酰胺在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol2-羥基-N-(3-羥基-苯基)-苯甲酰胺溶液內(nèi)加入2mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)。完全被硝化的產(chǎn)品2-硝基氧-N-(3-硝基氧-苯基)-苯甲酰胺和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例24制備3，4，5-tris-硝基氧-N-苯基-苯甲酰胺在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol3，4，5-三羥基-N-((Z)-1-亞甲基-丁-2-烯基)-苯甲酰胺(異名棓酰苯胺)溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品3，4，5-三-硝基氧-N-苯基-苯甲酰胺和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例25制備1-(2，4-二-硝基氧-苯基)-2-苯基-乙醇酮(ethanone)在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol1-(2，4-羥基-苯基)-2-苯基-乙醇酮(異名芐基2，4-二羥基苯基酮)溶液中加入2mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品1-(2，4-二-硝基氧-苯基)-2-苯基-乙醇酮和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例26制備1，2-二-硝基氧-3-苯氧基-苯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol3-苯氧基-苯-1，2-二醇溶液內(nèi)加入2mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品1，2-二-硝基氧-3-苯氧基-苯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例27制備1，2-二-硝基氧-3-(2-硝基氧-苯氧基)-苯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol3-(2-羥基-苯氧基)-苯-1，2-二醇溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品1，2-二-硝基氧-3-(2-硝基氧-苯氧基)-苯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例28制備1-硝基氧-2-苯氧基-苯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol2-苯氧基-苯酚溶液內(nèi)加入1mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)被硝化的產(chǎn)物1-硝基氧-2-苯氧基-苯進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例29制備5，5亞磺?；g苯二酚四硝酸酯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol5，5亞磺?；g苯二酚溶液內(nèi)加入4mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.Sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品5，5亞磺?；g苯二酚四硝酸酯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例30制備1，3-苯二醇4，4’-硫雙四硝酸酯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol1，3-苯二醇4，4’-硫二(thiobis)溶液內(nèi)加入4mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品1，3-苯二醇4，4’-硫二四硝酸酯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例31制備苯酚2，2’硫二二硝酸酯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol苯酚2，2’硫二溶液內(nèi)加入2mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品苯酚2，2’硫二二硝酸酯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例32制備1-芐基-2，4-二-硝基氧-苯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol4-芐基-苯-1，3-二醇(異名1，3苯二醇3-苯基甲基)溶液內(nèi)加入2mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品1-芐基-2，4-二-硝基氧-苯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例33制備2-芐基-1，4-二-硝基氧-苯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol2-芐基-苯-1，4-二醇(異名1，4苯二醇4-苯基甲基)溶液內(nèi)加入2mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品2-芐基-1，4-二-硝基氧-苯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例34制備(2，3，4-三-硝基氧-苯基)-(3，4，5-三-硝基氧-苯基)-甲酮在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol(2，3，4-三羥基-苯基)-(3，4，5-三羥基-苯基)-甲酮(異名依昔苯酮)溶液內(nèi)加入6mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品(2，3，4-三-硝基氧-苯基)-(3，4，5-三-硝基氧-苯基)-甲酮和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例35制備(2-硝基氧-苯基)-苯基-胺在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol2-苯基氨基-苯酚溶液內(nèi)加入1mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)被硝化的產(chǎn)物(2-硝基氧-苯基)-苯基-胺進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例36制備2-(3，5-二-硝基氧-苯基)-6-硝基氧-4H-色烯(chromene)在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol5-(6-羥基-4H-色烯-2-基)-苯-1，3-二醇溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品2-(3，5-二-硝基氧-苯基)-6-硝基氧-4H-色烯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例37制備2-(3，5-二-硝基氧-苯基)-6-硝基氧-1，4-二氫-萘在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol5-(6-羥基-1，4-二氫-萘-2-基)-苯-1，3-二醇溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品2-(3，5-二-硝基氧-苯基)-6-硝基氧-1，4-二氫-萘和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例38制備2-(3，5-二-硝基氧-苯基)-6-硝基氧-1，2，3，4-四氫-萘在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol5-(6-羥基-1，2，3，4-四氫-萘-2-基)-苯-1，3-二醇溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品2-(3，5-二-硝基氧-苯基)-6-硝基氧-1，2，3，4-四氫-萘和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例39制備5，7-二-硝基氧-2-(4-硝基氧-苯基)-色滿-4-酮在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol5，7-二羥基-2-(4-羥基-苯基)-色滿-4-酮(異名柚皮素)溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品5，7-二-硝基氧-2-(4-硝基氧-苯基)-色滿-4-酮和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例40制備5，7-二-硝基氧-2-(4-硝基氧-苯基)-色烯-4-酮在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol5，7-二羥基-2-(4-羥基-苯基)-色烯-4-酮(異名芹黃素)溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品5，7-二-硝基氧-2-(4-硝基氧-苯基)-色烯-4-酮和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例41制備5，7-二-硝基氧-3-(4-硝基氧-苯基)-色烯-4-酮在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol5，7-二羥基-3-(4-羥基-苯基)-色烯-4-酮(異名染料木黃酮)溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品5，7-二-硝基氧-3-(4-硝基氧-苯基)-色烯-4-酮和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例42制備2-(3，4-二-硝基氧-苯基)-3，4，5，7-四-硝基氧-色滿在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol2-(3，4-二羥基-苯基)-色滿-3，4，5，7-四醇(異名白矢車(chē)菊素)溶液內(nèi)加入6mmolSOCl(NO.SUB.3)或O(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品2-(3，4-二-硝基氧-苯基)-3，4，5，7-四-硝基氧-色滿和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例43制備6-羥基-7-硝基氧-3-(4-硝基氧-苯基)-色滿-4-酮在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol6，7-二羥基-3-(4-羥基-苯基)-色滿-4-酮(異名6，7，4’-三羥基異黃烷酮)溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品6-羥基-7-硝基氧-3-(4-硝基氧-苯基)-色滿-4-酮和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例44制備QuracolB四硝酸酯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmolQuracolB溶液內(nèi)加入4mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品QuracolB四硝酸酯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例45制備1-(4-羥基-2，6-二-硝基氧-苯基)-3-(4-硝基氧-苯基)-丙-1-酮在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol3-(4-羥基-苯基)-1-(2，4，6-三羥基-苯基)-丙-1-酮(異名根皮素)溶液內(nèi)加入4mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品1-(4-羥基-2，6-二-硝基氧-苯基)-3-(4-硝基氧-苯基)-丙-1-酮和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例46制備1-硝基氧-4-((Z)-3-苯基-烯丙基)-苯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol4-((Z)-3-苯基-烯丙基)-苯酚(異名4(-3-苯基-2-丙烯基)-，(E)-苯酚)溶液內(nèi)加入1mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)被硝化的產(chǎn)物1-硝基氧-4-((Z)-3-苯基-烯丙基)-苯進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例47制備1-硝基氧-4-((E)-3-苯基-丙烯基)-苯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol4-((E)-3-苯基-丙烯基)-苯酚溶液內(nèi)加入1mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)被硝化的產(chǎn)物1-硝基氧-4-((E)-3-苯基-丙烯基)-苯進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例48制備5，6，7-三-硝基氧-2-苯基-色烯-4-酮在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol5，6，7-三羥基-2-苯基-色烯-4-酮(異名黃芩黃素)溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品5，6，7-三-硝基氧-2-苯基-色烯-4-酮和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例49制備蘆丁四硝酸酯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol2-(3，4-二羥基-苯基)-5，7-二羥基-3-[(2S，3R，5S，6R)-3，4，5-三羥基-6-((2R，3R，4R，5R，6S)-3，4，5-三羥基-6-甲基-四氫-吡喃-2-基氧甲基)-四氫-吡喃-2-基氧]-色烯-4-酮(異名蘆丁)溶液內(nèi)加入4mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品2-(3，4-二-硝基氧-苯基)-5，7-二-硝基氧-3-[(2S，3R，5S，6R)-3，4，5-三羥基-6-((2R，3R，4R，5R，6S)-3，4，5-三羥基-6-甲基-四氫-吡喃-2-基氧甲基)-四氫-吡喃-2-基氧]-色烯-4-酮(蘆丁四硝酸酯)和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例50制備5-羥基-2-(4-羥基苯基)-7-(2-O-α-L-吡喃鼠李糖基-β-D-吡喃葡糖基氧)-4-色滿酮(chromanon)二硝酸酯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol5-羥基-2-(4-羥基苯基)-7-(2-O-α-L-吡喃鼠李糖基-β-D-吡喃葡糖基氧)-4-色滿酮(chromanon)(異名柑桔苷)溶液內(nèi)加入2mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品5-羥基-2-(4-羥基苯基)-7-(2-O-α-L-吡喃鼠李糖基-β-D-吡喃葡糖基氧)-4-色滿酮二硝酸酯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例51制備(E)-(3S，5R)-7-[3-(4-氟-苯基)-1-異丙基-1H-吲哚-2-基]-1，3，5-三-硝基氧-庚-6-烯-1-酮在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol(E)-(3S，5R)-7-[3-(4-氟-苯基)-1-異丙基-1H-吲哚-2-基]-3，5-二羥基-庚-6-烯酸(異名氟伐他汀，Novartis)溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品(E)-(3S，5R)-7-[3-(4-氟-苯基)-1-異丙基-1H-吲哚-2-基]-1，3，5-三-硝基氧-庚-6-烯-1-酮和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例52制備5-(4-氟-苯基)-2-異丙基-4-苯基-1-((3R，5R)-3，5，7-三-硝基氧-7-氧-庚基)-1H-吡咯-1-基]-3-羧酸苯基酰胺在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol(3R，5R)-7-[2-(4-氟-苯基)-5-異丙基-3-苯基-4-苯基氨基甲酰基-吡咯-1-基]-3，5-二羥基-庚酸(異名阿伐他汀；Parke-Davis)溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品5-(4-氟-苯基)-2-異丙基-4-苯基-1-((3R，5R)-3，5，7-三-硝基氧-7-氧-庚基)-1H-吡咯-1-基]-3-羧酸苯基酰胺和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例53制備(E)-(3R，5S)-7-[4-(4-氟-苯基)-2，6-二異丙基-5-甲氧基甲基-吡啶-3-基]-1，3，5-三-硝基氧-庚-6-烯-1-酮在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol(E)-(3R，5S)-7-[4-(4-氟-苯基)-2，6-二異丙基-5-甲氧基甲基-吡啶-3-基]-3，5-二羥基-庚-6-烯酸(異名西立伐他汀；Bayer)溶液內(nèi)加入3mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品(E)-(3R，5S)-7-[4-(4-氟-苯基)-2，6-二異丙基-5-甲氧基甲基-吡啶-3-基]-1，3，5-三-硝基氧-庚-6-烯-1-酮和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例54制備(S)-2-甲基-丁酸(1S，3S，7S，8S，8aR)-7-甲基-3-硝基氧-8-((4R，6R)-3，5，7-三-硝基氧-7-氧-庚基)-1，2，3，7，8，8a-六氫-萘(napthalen)-1-基酯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol(2R，4R)-3，5-二羥基-7-[(1S，2S，6S，8S，8aR)-6-羥基-2-甲基-8-((S)-2-甲基-丁酰氧)-1，2，6，7，8，8a-六氫-萘-1-基]-庚酸(異名普伐他??；Bristol-MyersSquibb)溶液內(nèi)加入4mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品(S)-2-甲基-丁酸(1S，3S，7S，8S，8aR)-7-甲基-3-硝基氧-8-((4R，6R)-3，5，7-三-硝基氧-7-氧-庚基)-1，2，3，7，8，8a-六氫-萘-1-基酯和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任何一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例55制備2，2-二甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-3，7-二甲基-8-[2-((2R，4R)-4-硝基氧-6-氧-四氫-吡喃-2-基)-乙基]-1，2，3，7，8，8a-六氫-萘-1-基酯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol2，2-二甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-8-[2-((2R，4R)-4-羥基-6-氧-四氫-吡喃-2-基)-乙基]-3，7-二甲基-1，2，3，7，8，8a-六氫-萘-1-基酯(異名辛伐他汀；Merck)溶液內(nèi)加入1mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)被硝化的產(chǎn)物2，2-二甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-3，7-二甲基-8-[2-((2R，4R)-4-硝基氧-6-氧-四氫-吡喃-2-基)-乙基]-1，2，3，7，8，8a-六氫-萘-1-基酯進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例56制備(S)-2-甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-3，7-二甲基-8-[2-((2R，4R)-4-硝基氧-6-氧-四氫-吡喃-2-基)-乙基]-1，2，3，7，8，8a-六氫-萘-1-基酯在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol(S)-2-甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-8-[2-((2R，4R)-4-羥基-6-氧-四氫-吡喃-2-基)-乙基]-3，7-二甲基-1，2，3，7，8，8a-六氫-萘-1-基酯(異名洛伐他??；Merck)溶液內(nèi)加入1mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)被硝化的產(chǎn)物(S)-2-甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-3，7-二甲基-8-[2-((2R，4R)-4-硝基氧-6-氧-四氫-吡喃-2-基)-乙基]-1，2，3，7，8，8a-六氫-萘-1-基酯進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例57制備N(xiāo)-[4-(4-氟-苯基)-6-異丙基-5-((E)-(3R，5R)-3，5，7-三-硝基氧-7-氧-庚-1-烯基(enyl))-嘧啶-2-基]-N-甲基-甲烷磺酰胺在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol(E)-(3R，5R)-7-[4-(4-氟-苯基)-6-異丙基-2-(甲烷磺?；?甲基-氨基)-嘧啶-5-基]-3，5-二羥基-庚-6-烯酸(異名羅蘇伐他??；Astra-Zeneca)溶液內(nèi)加入1mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)被硝化的產(chǎn)物N-[4-(4-氟-苯基)-6-異丙基-5-((E)-(3R，5R)-3，5，7-三-硝基氧-7-氧-庚-1-烯基)-嘧啶-2-基]-N-甲基-甲烷磺酰胺進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例58制備硝基氧-吡啶-3-基-甲酮在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol煙酸(異名煙酸)溶液內(nèi)加入1mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)被硝化的產(chǎn)物硝基氧-吡啶-3-基-甲酮進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例59制備(S)-1-(4-氟-苯基)-3-[(S)-3-(4-氟-苯基)-3-硝基氧-丙基]-4-(4-硝基氧-苯基)-吖丁啶(azetidin)-2-酮在25℃下向位于5ml干燥THF中的1mmol(S)-1-(4-氟-苯基)-3-[(S)-3-(4-氟-苯基)-3-羥基-丙基]-4-(4-羥基-苯基)-吖丁啶-2-酮(異名依澤替米貝；Merck)溶液內(nèi)加入2mmolSOCl(NO.SUB.3)或SO(NO.SUB.3).sub.2。1小時(shí)后，加入Et.sub.2O(乙醚)并用水洗滌該溶液，干燥并蒸發(fā)。對(duì)完全被硝化的產(chǎn)品(S)-1-(4-氟-苯基)-3-[(S)-3-(4-氟-苯基)-3-硝基氧-丙基]-4-(4-硝基氧-苯基)-吖丁啶-2-酮和部分被硝化的產(chǎn)品(其中任一個(gè)羥基都獨(dú)立地被ONO.sub.2基團(tuán)取代)進(jìn)行純化并在硅膠上經(jīng)色譜法分離。實(shí)施例60對(duì)本發(fā)明化合物進(jìn)行葡萄糖醛酸酯化的方法本實(shí)施例描述了制備被葡萄糖醛酸酯化的(glucoronidated)本發(fā)明化合物的方法。在這個(gè)具體的實(shí)施例中，于37℃下，將位于終體積為500μl的具有10mMMgCl2的50mMTrisHCl緩沖液(pH7.8)中的如實(shí)施例1制備的白藜蘆醇二硝酸酯形式，3，4’-硝基氧-5-羥基白藜蘆醇(50-1000μM)和10μl人腸的、25μl結(jié)腸的或10μl肝的微粒體(分別為200、400、200μg蛋白)、20μl重組UDP-葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶(400μg蛋白)預(yù)孵育5分鐘。通過(guò)加入1mM5′-二磷酸基葡萄糖醛酸開(kāi)始反應(yīng)。反應(yīng)混合物在37℃下孵育60分鐘。在冰上冷卻樣品并使用oasisHydrophilic-LipophilicBalance1ccC18萃取柱柱身(WatersCorp，Milford，MA)進(jìn)行固相萃取。柱身用1-ml甲醇洗滌并用1-ml水平衡。裝入0.5ml樣品后，用5％甲醇洗滌柱身并用2ml100％甲醇洗脫。甲醇洗出液在N2氣下于40℃干燥，并將樣品再次溶解在250μlHPCL分析的流動(dòng)相中。實(shí)施例61對(duì)本發(fā)明化合物進(jìn)行硫酸化的方法本實(shí)施例描述了制備被硫酸化的本發(fā)明化合物的方法。在這個(gè)具體的實(shí)施例中，使用先前描述的離子對(duì)提取法(Varinetal.1987.Anal.Biochem.161176-180)通過(guò)磺基轉(zhuǎn)移酶對(duì)如實(shí)施例1制備的白藜蘆醇的二硝酸酯化形式，3，4’-硝基氧-5-羥基白藜蘆醇進(jìn)行硫酸化。典型的反應(yīng)混合物包含0.1到200μM3，4’-硝基氧-5-羥基白藜蘆醇、1μM[35S]PAPS和2.5μl集合的(pooled)人肝細(xì)胞液(50μg蛋白)、2.5μl人空腸細(xì)胞液(30μg)、Caco-2細(xì)胞液(225μg)或0.25μl重組磺基轉(zhuǎn)移酶，其位于33mMTris-HCl緩沖液中，pH7.4，具有8mM二硫蘇糖醇和0.0625％牛血清白蛋白，總體積為100μl。樣品在.37℃下孵育30分鐘，反應(yīng)通過(guò)加入10μl2.5％醋酸、20μl0.1μM四丁銨氫硫酸酯和500μl乙酸乙酯來(lái)終止。經(jīng)過(guò)混合并離心后，在加入生物可降解的計(jì)數(shù)閃爍體后(AmershamBiosciences，Piscataway，NJ)，對(duì)400μl的乙酸乙酯萃取物進(jìn)行液體閃爍計(jì)數(shù)。實(shí)施例62用白藜蘆醇處理CaCo2細(xì)胞，來(lái)自腸。本研究確定了白藜蘆醇對(duì)CaCo2細(xì)胞，腸細(xì)胞系，中的APOAI基因是否有作用。細(xì)胞在ATCC推薦的條件下生長(zhǎng)，該條件簡(jiǎn)要地概括在方法部分中。這個(gè)最初的研究使用組織學(xué)分析檢驗(yàn)了白藜蘆醇提高APOA1表達(dá)的潛在作用。細(xì)胞用5或10μM的白藜蘆醇處理，然后使用可商購(gòu)的人APOA1抗體針對(duì)APOAI的富集度進(jìn)行染色(沒(méi)有給出數(shù)據(jù))。在不存在(未處理)和存在白藜蘆醇(5和10μM)的情況下，使用相差以及對(duì)APOA1蛋白的免疫組化染色來(lái)檢驗(yàn)CaCo2細(xì)胞。白藜蘆醇使得暴露于5和10μM試劑中處理36小時(shí)后的APOA1信號(hào)富集度增多。在存在白藜蘆醇的情況下，APOA1蛋白表達(dá)水平的增加也被證實(shí)了。結(jié)果顯示，5和10μM的白藜蘆醇都能提高來(lái)自APOA1蛋白細(xì)胞內(nèi)容物的熒光。接下來(lái)，將CaCo2細(xì)胞暴露于不同濃度的白藜蘆醇中，從0到15μM。使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，使用報(bào)告構(gòu)建體，pAI.474-Luc(見(jiàn)圖，圖1)，以及監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)染效率的pRSV-β-半乳糖苷酶對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。pAI.474-Luc是一種我們已經(jīng)使用常規(guī)的分子生物學(xué)技術(shù)生成的構(gòu)建體，其包含人APOAI啟動(dòng)子的-474至-7，其融合在報(bào)告子螢火蟲(chóng)熒光素酶(Luc)上。將白藜蘆醇溶解在DMSO中，然后加入到培養(yǎng)基中得到在0至15μM內(nèi)變化的終濃度。用不同濃度的白藜蘆醇處理細(xì)胞16小時(shí)。在處理結(jié)束時(shí)，收集細(xì)胞并測(cè)定Luc活性。這些值都被標(biāo)準(zhǔn)化為溶解產(chǎn)物蛋白的濃度和3-半乳糖苷酶的活性。結(jié)果(圖2)顯示，在5到7.5μM的白藜蘆醇濃度范圍內(nèi)，白藜蘆醇刺激的APOA1啟動(dòng)子活性最大為2.5倍。然而，先前的研究顯示，對(duì)APOA1啟動(dòng)子的活性產(chǎn)生最大刺激的白藜蘆醇濃度為5-7.5μM，但作用的持續(xù)時(shí)間不清楚。為了解決這一點(diǎn)，我們進(jìn)行了和上面相同的實(shí)驗(yàn)，以用來(lái)評(píng)價(jià)白藜蘆醇誘導(dǎo)APOA1啟動(dòng)子的動(dòng)力學(xué)。在4到24小時(shí)內(nèi)的所選時(shí)間點(diǎn)上用5μM的白藜蘆醇處理被pA1.474-Luc轉(zhuǎn)染的CaCo2細(xì)胞。這個(gè)構(gòu)建體pA1.474-Luc包含融合在報(bào)告基因螢火蟲(chóng)熒光素酶(Luc)上的跨躍了-474至-7的大鼠APOA1啟動(dòng)子DNA。在給予白藜蘆醇后的4、8、16和24小時(shí)觀察到顯著的作用，但是最大的刺激出現(xiàn)在暴露于化合物后的16小時(shí)。結(jié)果(圖3)顯示，白藜蘆醇對(duì)APOA1啟動(dòng)子刺激作用的最佳時(shí)間點(diǎn)出現(xiàn)在約16小時(shí)。來(lái)自這些研究的信息表明，白藜蘆醇能刺激APOA1基因在CaCo2細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄，且白藜蘆醇產(chǎn)生最大效果的時(shí)間在其暴露后的約16小時(shí)。實(shí)施例63白藜蘆醇的作用需要跨躍-190至-170核苷酸的DNA片段。因?yàn)橐呀?jīng)發(fā)現(xiàn)，上述研究中使用的pA1.474-Luc能介導(dǎo)白藜蘆醇的作用，而且這個(gè)構(gòu)建體包含跨躍-474至-7的人APOA1DNA片段，因此我們假定，啟動(dòng)子DNA的這個(gè)區(qū)段中的一個(gè)基序或多個(gè)基序介導(dǎo)了化合物的作用。為了鑒別潛在的基序，我們將包含越來(lái)越少量的APOA1DNA的分離的構(gòu)建體融合到Luc基因上。在CaCo2細(xì)胞中通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染測(cè)定法測(cè)試每個(gè)構(gòu)建體的活性，然后用5μM白藜蘆醇處理一段最低的時(shí)間，16小時(shí)。結(jié)果(圖4)顯示，全長(zhǎng)(-474至-7)啟動(dòng)子產(chǎn)生了2.5倍的誘導(dǎo)。每列底部的數(shù)字表示片段的5′位，3′端對(duì)于所有缺失克隆在-7是相同的。例如，左側(cè)的列顯示了在分別存在和不存在白藜蘆醇的情況下-474至-7片段的活性。這些結(jié)果說(shuō)明，除去啟動(dòng)子-190至-171的DNA破壞了對(duì)白藜蘆醇的響應(yīng)。從母體啟動(dòng)子除去-235或-190至-7片段的DNA對(duì)白藜蘆醇誘導(dǎo)2.5倍提高的啟動(dòng)子活性的能力沒(méi)有影響。相反，啟動(dòng)子(promoted)剩余的-170至-7片段的進(jìn)一步刪除能破壞白藜蘆醇對(duì)啟動(dòng)子的誘導(dǎo)。我們發(fā)現(xiàn)，APOAIDNA上對(duì)白藜蘆醇有響應(yīng)的基序必須跨躍-190至-170的核苷酸。實(shí)施例64白藜蘆醇增加CaCO2細(xì)胞中分泌的APOA1蛋白。這個(gè)實(shí)驗(yàn)是為了確定白藜蘆醇在CaCo2細(xì)胞中刺激啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性是否能提高APOA1蛋白的豐度，其最終對(duì)該基因的抗動(dòng)脈粥樣硬化活性負(fù)責(zé)。白藜蘆醇提高了pA1.474-Luc構(gòu)建體中APOAI啟動(dòng)子的活性，該構(gòu)建體是一種通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染而加入到CaCo2細(xì)胞中的轉(zhuǎn)基因，但是還不知道其是否能影響CaCo2細(xì)胞的內(nèi)源性APOAI基因的活性。對(duì)這些研究來(lái)說(shuō)，按常規(guī)方法對(duì)CaCo2細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)并暴露在包含5或10p，M濃度白藜蘆醇的介質(zhì)中36小時(shí)。將細(xì)胞更長(zhǎng)時(shí)間暴露在白藜蘆醇中以使得APOA1蛋白有足夠的時(shí)間從CaCo2細(xì)胞中分泌到介質(zhì)內(nèi)，并進(jìn)行檢測(cè)。暴露于細(xì)胞36小時(shí)的用過(guò)的介質(zhì)，使用蛋白印跡分析其APOAI蛋白的含量。結(jié)果(圖5)顯示，在用白藜蘆醇處理的細(xì)胞的用過(guò)的介質(zhì)中，APOAI蛋白的豐度有明顯提高，但是在缺少白藜蘆醇的介質(zhì)中APOAI較少。這些研究的結(jié)果顯示，白藜蘆醇的抗動(dòng)脈粥樣硬化性質(zhì)增加了APOAI基因的表達(dá)。APOAI基因表達(dá)的增加增進(jìn)了RCT并由此促進(jìn)了體內(nèi)膽固醇的清除。CaCo2細(xì)胞中的數(shù)據(jù)是很顯著的，我們已經(jīng)意外地1)首次確定白藜蘆醇對(duì)腸細(xì)胞APOAI的作用。2)確定白藜蘆醇影響APOAI基因的轉(zhuǎn)錄。3)確定白藜蘆醇在細(xì)胞中對(duì)APOAI產(chǎn)生作用所需的時(shí)間。4)確定白藜蘆醇治療性改變APOA1基因表達(dá)的濃度范圍。5)確定在CaCo2細(xì)胞中介導(dǎo)白藜蘆醇作用的DNA基序。6)顯示白藜蘆醇的一個(gè)作用是提高APOA1蛋白的豐度。這個(gè)信息對(duì)于利用白藜蘆醇或能增加APOA1的其它類(lèi)似藥劑的用途將是有用的，通過(guò)1)設(shè)計(jì)可以釋放到腸內(nèi)的白藜蘆醇制劑。2)設(shè)計(jì)定時(shí)釋放白藜蘆醇或這類(lèi)藥劑的制劑，以確保其將能在16小時(shí)這個(gè)最低限度的時(shí)間內(nèi)位于腸道中。3)設(shè)計(jì)以前未知的保持治療劑量的白藜蘆醇或這類(lèi)藥劑的存在的制劑。4)說(shuō)明使用不同的報(bào)告構(gòu)建體和細(xì)胞系來(lái)評(píng)價(jià)白藜蘆醇或這類(lèi)藥劑的作用并將其進(jìn)行擴(kuò)展以用來(lái)篩選與白藜蘆醇作用類(lèi)似的天然或合成的多酚或其它藥劑。實(shí)施例65用白藜蘆醇處理來(lái)自肝的HepG2細(xì)胞。由于APOA1基因在肝和小腸中均有表達(dá)，因此以下研究檢驗(yàn)了白藜蘆醇影響肝細(xì)胞基因表達(dá)的能力。第一組研究檢驗(yàn)了白藜蘆醇提高APOA1豐度的潛在能力并使用組織學(xué)分析法評(píng)價(jià)了這個(gè)可能性。細(xì)胞在ATCC推薦的條件下生長(zhǎng)，并簡(jiǎn)單概述在方法部分中。最初的研究使用了組織學(xué)分析法檢驗(yàn)了白藜蘆醇提高APOA1表達(dá)的潛在作用。用5或10μM的白藜蘆醇處理細(xì)胞，然后使用可商購(gòu)的人APOA1抗體對(duì)APOA1的豐度進(jìn)行染色。在用白藜蘆醇處理或未處理后，在相差或熒光顯微術(shù)下觀察HepG2細(xì)胞，并對(duì)其APOA1蛋白的含量進(jìn)行免疫染色。結(jié)果顯示，用5或10μM的白藜蘆醇處理后，APOA1信號(hào)的熒光增強(qiáng)了。為了評(píng)價(jià)HepG2細(xì)胞中啟動(dòng)子的活性，我們使用常規(guī)的分子生物學(xué)技術(shù)(如后面的記載)將報(bào)告構(gòu)建體pAI474-Luc插入到人肝癌HepG2細(xì)胞中，連同pRSV-β-半乳糖苷酶用于對(duì)轉(zhuǎn)染效率的監(jiān)測(cè)。將被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞暴露在0到100μM不同濃度的白藜蘆醇中16小時(shí)。收集細(xì)胞并用于分析Luc的活性。用0、5、10、25、50、75和100μM白藜蘆醇處理的細(xì)胞顯示了劑量應(yīng)答關(guān)系，其峰值劑量位于5至10μM中，但是在50μM及以上卻變?yōu)橐种?。這些數(shù)據(jù)已經(jīng)被β-半乳糖(控制轉(zhuǎn)染效率的共轉(zhuǎn)染報(bào)告子)標(biāo)準(zhǔn)化，并以相對(duì)于蛋白水平表示。用不同的3批細(xì)胞重復(fù)該實(shí)驗(yàn)3次。所得數(shù)值已經(jīng)被相對(duì)于蛋白和6-半乳糖苷酶而標(biāo)準(zhǔn)化了。結(jié)果(圖6)顯示，用5至10pM的白藜蘆醇處理后，活性增加到3倍。然而，進(jìn)一步提高白藜蘆醇的濃度卻不能進(jìn)一步提高報(bào)告構(gòu)建體的Luc-活性，事實(shí)上，15、25、50、75或100μM的化合物濃度與顯著的提高沒(méi)有關(guān)系，卻導(dǎo)致了Luc-活性的50％降低。為了驗(yàn)證這些觀察結(jié)果，我們生成了一種細(xì)胞系，其包含永久性插入細(xì)胞中的pAI.474-Luc。這些被永久性轉(zhuǎn)染的細(xì)胞用于測(cè)定對(duì)0-20μM濃度范圍內(nèi)的白藜蘆醇的反應(yīng)。對(duì)新霉素耐藥且具有Luc-活性的細(xì)胞被保留下來(lái)用于研究，因?yàn)樗鼈儼琾AI.474-Luc和新霉素耐藥標(biāo)記。用白藜蘆醇(0至25μM)處理這些細(xì)胞。為了生成被永久性轉(zhuǎn)柒的細(xì)胞，我們將474-Luc和攜帶新霉素耐藥性的另一質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染。在新霉素中生長(zhǎng)的能力是成功轉(zhuǎn)染的標(biāo)記。觀察到了對(duì)白藜蘆醇的劑量響應(yīng)作用，這與瞬時(shí)轉(zhuǎn)柒細(xì)胞的結(jié)果相似。結(jié)果(圖7)顯示，永久性轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的Luc-活性以劑量依賴的方式提高，用10μM白藜蘆醇處理后，最多增加4倍。pAI.474-Luc的時(shí)程在對(duì)固定濃度白藜蘆醇的響應(yīng)中得以測(cè)定。在這個(gè)研究中，HepG2細(xì)胞被pA1.474-Luc瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，然后暴露于10p.M白藜蘆醇(resveratrol)中。在4、8、16和24小時(shí)收集細(xì)胞。于細(xì)胞內(nèi)評(píng)價(jià)Luc-活性，結(jié)果顯示，對(duì)啟動(dòng)子的最大刺激開(kāi)始于16小時(shí)并延長(zhǎng)至24小時(shí)。白藜蘆醇的這個(gè)最大作用與在CaCo2細(xì)胞中于處理后的16小時(shí)觀察到的最大增加是類(lèi)似的(圖8)。實(shí)施例66白藜蘆醇提高HepG2細(xì)胞中分泌的APOA1蛋白。為了確定白藜蘆醇在HepG2細(xì)胞中對(duì)APOAI啟動(dòng)子的刺激是否也能提高蛋白的豐度，我們?cè)谟没衔锾幚砗笤u(píng)價(jià)了分泌到介質(zhì)中的APOAI。白藜蘆醇提高了pAI.474-Luc構(gòu)建體中APOAI啟動(dòng)子的活性，該構(gòu)建體是通過(guò)瞬時(shí)或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染而導(dǎo)入到HepG2細(xì)胞中的轉(zhuǎn)基因。按常規(guī)方法對(duì)HepG2細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，并暴露在包含5或10p，M濃度白藜蘆醇的介質(zhì)中36小時(shí)。暴露于細(xì)胞中36小時(shí)的用過(guò)的介質(zhì)(spentmedia)，使用蛋白印跡分析測(cè)定APOA1蛋白的含量。結(jié)果(圖9)顯示，在用白藜蘆醇處理的細(xì)胞的用過(guò)的介質(zhì)中，APOA1蛋白的豐度顯著增加，而在缺乏白藜蘆醇的介質(zhì)中則較低。這些實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，白藜蘆醇也令人意想不到地且有利地提高了來(lái)自肝的HepG2細(xì)胞中APOA1基因的表達(dá)。因此，篩選實(shí)驗(yàn)的優(yōu)選實(shí)施方案將有利地包含永久性轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞系，其包含pA1.474-標(biāo)記，其中優(yōu)選的標(biāo)記是Luc。這種細(xì)胞能用于篩選能提高APOA1表達(dá)或轉(zhuǎn)染的化合物或藥劑。實(shí)驗(yàn)顯示治療性應(yīng)用這種化合物的優(yōu)選時(shí)間段以及如何初步確定優(yōu)選的治療濃度。當(dāng)然，將能很容易地意識(shí)到，需要進(jìn)行常規(guī)的臨床試驗(yàn)以根據(jù)其目的而改進(jìn)治療方案。我們已經(jīng)觀察到白藜蘆醇對(duì)APOA1基因表達(dá)的有利作用。使用人細(xì)胞系HepG2和CaCo2發(fā)現(xiàn)，在暴露于5-10μM濃度范圍內(nèi)的白藜蘆醇的這兩類(lèi)細(xì)胞中，APOA1蛋白的水平和啟動(dòng)子的活性都增加了。同樣重要的是，將細(xì)胞暴露于超過(guò)這個(gè)范圍的濃度時(shí)，對(duì)APOA1基因的表達(dá)有不利作用。此外，我們發(fā)現(xiàn)，對(duì)響應(yīng)于單次暴露于白藜蘆醇的基因活性，在16-24小時(shí)具有最大的對(duì)基因轉(zhuǎn)錄的作用，但是，直至暴露后36小時(shí)仍可檢測(cè)到的蛋白水平，上述發(fā)現(xiàn)也是一個(gè)新的信息，它能指導(dǎo)我們確定將細(xì)胞暴露于白藜蘆醇中用于治療作用所需的時(shí)間長(zhǎng)度。來(lái)自腸細(xì)胞的CaCo2對(duì)白藜蘆醇有響應(yīng)這一事實(shí)也是新的。這個(gè)事實(shí)是至關(guān)重要的，因?yàn)榘邹继J醇在進(jìn)入肝前將首先與腸細(xì)胞接觸，因此白藜蘆醇對(duì)腸細(xì)胞的作用和效果也就似乎比肝細(xì)胞更加重要，因?yàn)橄暮螅邹继J醇的濃度可能絕達(dá)不到對(duì)肝細(xì)胞產(chǎn)生充分刺激的血液中的水平。除了這些基本觀察外，我們還在實(shí)驗(yàn)中測(cè)試了白藜蘆醇刺激APOA1基因轉(zhuǎn)錄的機(jī)理，其中實(shí)驗(yàn)使用了啟動(dòng)子的缺失構(gòu)建體。這些研究顯示，白藜蘆醇在CaCo2細(xì)胞中通過(guò)DNA的-190至-170片段發(fā)揮作用，但是在肝細(xì)胞中的效果可以歸功于相同或不同的部位的相互作用。這是至關(guān)重要的，因?yàn)闉榱耸褂冒邹继J醇衍生物或類(lèi)似物在腸細(xì)胞中產(chǎn)生有益作用，是可以與在肝中不同的。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，將永久性轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞用作篩選系統(tǒng)以在其它基因中篩選對(duì)白藜蘆醇敏感的啟動(dòng)子序列。用缺失構(gòu)建體永久性轉(zhuǎn)染的HepG2或CaCo2細(xì)胞能提供在基因中篩選對(duì)白藜蘆醇敏感的啟動(dòng)子序列，以及篩選營(yíng)養(yǎng)藥物和藥物以確定可以調(diào)節(jié)APOA1表達(dá)的物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的基礎(chǔ)。實(shí)施例67測(cè)定ApoA-1蛋白的表達(dá)這個(gè)研究測(cè)定了化合物在CaCo2細(xì)胞(腸細(xì)胞系)中，或HepG2細(xì)胞(肝癌細(xì)胞系)中對(duì)APOA1基因的作用。用化合物對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理，然后在處理36小時(shí)后使用可商購(gòu)的人APOA1抗體對(duì)APOA1的豐度進(jìn)行染色。實(shí)施例68測(cè)定對(duì)ApoA-1啟動(dòng)子的誘導(dǎo)將CaCo2或HepG2細(xì)胞暴露在不同濃度的化合物中。使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，用報(bào)告構(gòu)建體pAI.474-Luc對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，還使用了pRSV-β-半乳糖苷酶作為對(duì)轉(zhuǎn)染效率的監(jiān)測(cè)。pA1.474-Luc是使用常規(guī)的分子生物學(xué)技術(shù)生成的構(gòu)建體，其包含融合在報(bào)告子螢火蟲(chóng)熒光素酶(Luc)上的人APOAI啟動(dòng)子的-474至-7(美國(guó)專利申請(qǐng)10/222,013)。將化合物溶解在DMSO中，然后加到培養(yǎng)介質(zhì)中16小時(shí)。在處理結(jié)束時(shí)，收集細(xì)胞并測(cè)定Luc-活性。數(shù)值標(biāo)準(zhǔn)化為溶解產(chǎn)物蛋白的濃度和β-半乳糖苷酶的活性。將暴露于細(xì)胞中36小時(shí)的用過(guò)的介質(zhì)，可以使用蛋白印跡分析測(cè)定APOA1蛋白的含量。實(shí)施例69測(cè)定對(duì)AGCCCCCGC元件的誘導(dǎo)將CaCo2或HepG2細(xì)胞暴露在不同濃度的化合物中。使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，用報(bào)告構(gòu)建體轉(zhuǎn)染細(xì)胞，其中報(bào)告構(gòu)建體包含AGCCCCCGC元件，可操作地聯(lián)接到啟動(dòng)子上(例如胸苷激酶(TK)啟動(dòng)子)，可操作地聯(lián)接到報(bào)告基因上(例如熒光素酶、CAT或載脂蛋白A1本身)，還使用了pRSV-β-半乳糖苷酶作為對(duì)轉(zhuǎn)染效率的監(jiān)測(cè)，如美國(guó)專利申請(qǐng)10/222,013的教導(dǎo)。將化合物溶解在DMSO中，然后加入到培養(yǎng)介質(zhì)中16小時(shí)。處理結(jié)束時(shí)，收集細(xì)胞并測(cè)定報(bào)告基因的活性。數(shù)值標(biāo)準(zhǔn)化為溶解產(chǎn)物蛋白的濃度和β-半乳糖苷酶的活性。實(shí)施例70使用egr-1效應(yīng)子治療生育力狀況通過(guò)敲除小鼠實(shí)驗(yàn)已知Egr-1對(duì)于充分表達(dá)促黃體生成激素-β是需要的，缺失egr-1將導(dǎo)致純合敲除小鼠的生殖力喪失。因此，由egr-1共有序列元件介導(dǎo)的活性調(diào)節(jié)代表了對(duì)人或哺乳動(dòng)物進(jìn)行治療以抑制生育力或者，相反地，在生育力下降的個(gè)體中對(duì)其進(jìn)行促進(jìn)的潛在機(jī)理。實(shí)施例71使用egr-1效應(yīng)子治療癌癥Egr-1通過(guò)反向激活轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)來(lái)抑制轉(zhuǎn)化。TGF-β本身被各種癌癥抑制，因此，由egr-1共有序列元件介導(dǎo)的活性調(diào)節(jié)代表了在人或哺乳動(dòng)物中治療癌癥和其它增殖性疾病的潛在機(jī)理。實(shí)施例72使用作用于p21的egr-1效應(yīng)子治療癌癥Egr-1與p21(也就是已知的CIP1和Waft)協(xié)同用于抑制轉(zhuǎn)化。這代表egr-1與癌癥和其它增殖性疾病有關(guān)的另一種途徑，因此，由egr-1共有序列元件介導(dǎo)的活性調(diào)節(jié)代表了在人或哺乳動(dòng)物中治療癌癥或類(lèi)似的增殖性疾病的潛在機(jī)理。實(shí)施例73使用作用于p53的egr-I效應(yīng)子治療癌癥Egr-1通過(guò)反向激活p53而引起細(xì)胞周期停滯或程序性細(xì)胞死亡，這取決于細(xì)胞受損的嚴(yán)重程度。由egr-1共有序列元件介導(dǎo)的活性調(diào)節(jié)代表了在人或哺乳動(dòng)物中治療疾病的潛在機(jī)理，其中該疾病與p53活化水平的變化有關(guān)，例如癌癥。在一些情況下，細(xì)胞周期誘導(dǎo)的停滯可能會(huì)允許受損細(xì)胞對(duì)損傷有響應(yīng)并進(jìn)行修復(fù)，這表示由egr-1共有序列元件介導(dǎo)的活性調(diào)節(jié)所實(shí)現(xiàn)的治療作用的另一個(gè)可能作用機(jī)理。實(shí)施例74使用egr-1效應(yīng)子治療前列腺癌Egr-1在前列腺腫瘤細(xì)胞中過(guò)度表達(dá)，其已經(jīng)在功能上與癌癥狀態(tài)的維持相關(guān)聯(lián)。因此，由egr-1共有序列元件介導(dǎo)的活性調(diào)節(jié)代表了治療前列腺癌的潛在機(jī)理。實(shí)施例75使用egr-1效應(yīng)子治療血管疾病Egr-1能提高FGF-2的活性水平，這依次增加了血管生成和狹窄。因此，由egr-1共有序列元件介導(dǎo)的活性調(diào)節(jié)就代表了下調(diào)血管生成的潛在治療方法，作為對(duì)癌癥的治療?；蛘呤?，由egr-1共有序列元件介導(dǎo)的活性調(diào)節(jié)代表了下調(diào)狹窄的潛在治療方法，其中狹窄與許多血管疾病有關(guān)，包括動(dòng)脈粥樣硬化、腦血管疾病和血管成形術(shù)后的再狹窄。相反，由egr-1共有序列元件介導(dǎo)的活性調(diào)節(jié)代表了上調(diào)血管生成對(duì)缺血性組織進(jìn)行治療的潛在治療方法，例如對(duì)傷口愈合的治療介入。實(shí)施例76使用egr-1效應(yīng)子治療炎癥和肺部疾病Egr-1的活化促進(jìn)了炎癥介質(zhì)例如存在于肺部疾病包括肺氣腫和哮喘中的炎癥介質(zhì)的持續(xù)表達(dá)。因此，由egr-1共有序列元件介導(dǎo)的活性調(diào)節(jié)代表了治療肺部疾病例如肺氣腫、哮喘、囊性纖維化和慢性閉塞性肺部疾病的潛在治療方法。序列表<110>ResverlogixCorp<120>與EGR-1增強(qiáng)子元件有關(guān)的疾病的治療<130>A899425WO<140>PCT/CA2004/001818<141>2004-1008<150>60/510,669<151>2003-10-10<150>60/510,342<151>2003-10-10<150>10/762,796<151>2004-01-22<150>10/807,800<151>2001-03-24<160>3<170>PatentInVer.3.3<210>1<211>21<212>DNA<213>RATAPOAI位置″S″<400>1tgcagcccccgcagcttcctg21<210>2<211>21<212>DNA<213>HUMANAPOAI位置″S″<400>2tgcagcccccgcagcttgctg21<210>3<211>9<212>DNA<213>EGR-1反應(yīng)元件共有序列<400>3agcccccgc9權(quán)利要求1.能調(diào)節(jié)由egr-1響應(yīng)元件共有序列引起的轉(zhuǎn)錄和基因表達(dá)狀態(tài)的化合物在制備用于治療與基因表達(dá)狀態(tài)有關(guān)的疾病或健康狀況的藥物中的用途，其中基因的表達(dá)狀態(tài)與egr-1響應(yīng)元件共有序列有關(guān)。2.權(quán)利要求1的用途，其中所述的化合物包含選自以下的化合物白藜蘆醇、3，4′，5三硝基氧反式茋和3，4′，5三(硝基氧)乙氧基反式茋，上述任意物質(zhì)的類(lèi)似物以及上述任意物質(zhì)的藥學(xué)上可接受的鹽。3.權(quán)利要求1的用途，其中所述的疾病選自癌癥和其它增殖性疾病、血管疾病、需要治療介入的傷口、炎癥和肺部疾病。4.權(quán)利要求3的用途，其中所述的肺部疾病選自肺氣腫、哮喘、囊性纖維化、慢性閉塞性肺部疾病、CVD、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓和/或再狹窄。5.權(quán)利要求3的用途，其中所述的與癌癥有關(guān)的疾病選自與p53水平改變有關(guān)的細(xì)胞周期停滯或程序性細(xì)胞死亡疾病，以及與FGF-2活性水平改變有關(guān)的血管生成和狹窄。6.權(quán)利要求1的用途，其中所述的健康狀況選自生育力和不育、血管疾病、需要治療介入的傷口、炎癥和肺部疾病。7.權(quán)利要求6的用途，其中所述的血管疾病包含動(dòng)脈粥樣硬化、腦血管疾病、血管成形術(shù)后的再狹窄或局部缺血。8.權(quán)利要求1的用途，其中所述的egr-1響應(yīng)元件共有序列與反向激活轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)有關(guān)。9.權(quán)利要求的用途，其中所述的疾病選自癌癥和其它的增殖性疾病。10.權(quán)利要求1的用途，其中所述的egr-1響應(yīng)元件共有序列與促黃體生成激素有關(guān)。11.權(quán)利要求10的用途，其中所述的健康狀況是下降的生育力。12.能調(diào)節(jié)由egr-1響應(yīng)元件共有序列引起的轉(zhuǎn)錄和p21表達(dá)狀態(tài)的化合物在制備用于治療選自癌癥、其它的增殖性疾病和對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化易感性的疾病或健康狀況的藥物中的用途。13.能調(diào)節(jié)由egr-1響應(yīng)元件共有序列引起的轉(zhuǎn)錄和p53表達(dá)狀態(tài)的化合物在制備用于治療需要治療的健康狀況的藥物中的用途，其中健康狀況選自被誘導(dǎo)的細(xì)胞周期停滯、細(xì)胞損傷和對(duì)細(xì)胞修復(fù)的需要。14.能調(diào)節(jié)由egr-1響應(yīng)元件共有序列引起的轉(zhuǎn)錄和FGF-2表達(dá)狀態(tài)的化合物在制備用于治療需要治療的健康狀況的藥物中的用途，其中健康狀況選自血管生成和狹窄。15.權(quán)利要求1的用途，其中所述的化合物包含白藜蘆醇、3，4′，5三硝基氧反式茋和3，4′，5三(硝基氧)乙氧基反式茋或其類(lèi)似物。16.鑒定能調(diào)節(jié)與egr-1響應(yīng)元件共有序列有關(guān)的基因表達(dá)的化合物的方法，其包含提供表達(dá)系統(tǒng)，該系統(tǒng)含有細(xì)胞或細(xì)胞提取物，和可操作地聯(lián)接到啟動(dòng)子和基因上的egr-1響應(yīng)元件，所述基因的表達(dá)能被調(diào)節(jié)和測(cè)定，以及確定所述化合物在所述表達(dá)系統(tǒng)中是否能誘導(dǎo)表達(dá)的調(diào)節(jié)。17.權(quán)利要求16的方法，其中所述的egr-1響應(yīng)元件共有序列包含AGCCCCCGC。18.由權(quán)利要求17的方法鑒定的化合物在制備用于治療疾病或健康狀況的藥物中的用途。19.權(quán)利要求18的用途，其中所述的化合物包含具有可貢獻(xiàn)的一氧化氮組分(donatablenitricoxidecomponent)和清除自由基的抗氧化分子的化合物。20.權(quán)利要求19的用途，其中所述的化合物包含白藜蘆醇及其類(lèi)似物，其包含至少一個(gè)提供一氧化氮的部分，其取代了所述白藜蘆醇的至少一個(gè)天然存在的羥基。21.權(quán)利要求20的用途，其中化合物選自3，4′，5三硝基氧反式茋和3，4′，5三(硝基氧)乙氧基反式茋。22.權(quán)利要求20的用途，其中所述的類(lèi)似物選自被OCxNO2取代的化合物。23.權(quán)利要求22的用途，其中所述的類(lèi)似物是二醇二氮烯類(lèi)似物。24.權(quán)利要求20的用途，其中所述白藜蘆醇的至少一個(gè)天然存在的羥基被硫或氮取代。25.鑒定能調(diào)節(jié)由egr-1或egr-1共有序列元件引起的轉(zhuǎn)錄的化合物的方法，其包含以下步驟提供測(cè)試系統(tǒng)，該系統(tǒng)含有egr-1或egr-1共有序列元件，其可操作地聯(lián)接到能表達(dá)可檢測(cè)產(chǎn)物的基因上，測(cè)定可檢測(cè)產(chǎn)物的參比水平，將所述的測(cè)試系統(tǒng)與待測(cè)化合物相接觸并隨后測(cè)定可檢測(cè)產(chǎn)物的水平，將所述的檢測(cè)水平與參比水平比較并由此確定所述化合物是否是egr-1或egr-1共有序列元件的效應(yīng)子。26.能調(diào)節(jié)與egr-1響應(yīng)元件共有序列有關(guān)的基因表達(dá)的化合物，其含有可貢獻(xiàn)的一氧化氮組分和清除自由基的抗氧化分子。27.權(quán)利要求26的化合物，其包含含有以下結(jié)構(gòu)的類(lèi)黃酮化合物其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R13和R14可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R10或R13或R14中的至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2；以及其中X可以是O、CR13或NR13；Y可以是CO[仍然保持6原子環(huán)結(jié)構(gòu)的酮]、CR14或NR14；以及Z可以是單或雙鍵。28.藥物組合物，其含有與藥學(xué)上可接受載體組合的權(quán)利要求27的類(lèi)黃酮化合物。29.根據(jù)權(quán)利要求28的類(lèi)黃酮化合物在制備用于治療疾病或健康狀況的藥物中的用途，其中疾病或健康狀況與和egr-1響應(yīng)元件共有序列相關(guān)的基因的表達(dá)狀態(tài)有關(guān)。30.權(quán)利要求29的用途，其中所述的疾病選自癌癥和其它的增殖性疾病、血管疾病、需要治療介入的傷口、炎癥和肺部疾病。31.權(quán)利要求30的用途，其中所述的肺部疾病選自肺氣腫、哮喘、囊性纖維化、慢性閉塞性肺部疾病、CVD、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓和/或再狹窄。32.權(quán)利要求30的用途，其中所述的與癌癥有關(guān)的疾病選自與p53水平改變有關(guān)的細(xì)胞周期停滯或程序性細(xì)胞死亡疾病，以及與FGF-2活性水平改變有關(guān)的血管生成和狹窄。33.權(quán)利要求26的化合物，其包含含有以下結(jié)構(gòu)的異類(lèi)黃酮化合物其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R13和R14可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R10或R13或R14中至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2；以及其中X可以是O、CR13或NR13；Y可以是CO[仍然保持6原子環(huán)結(jié)構(gòu)的酮]、CR14或NR14；以及Z可以是單或雙鍵。34.藥物組合物，其含有與藥學(xué)上可接受載體組合的權(quán)利要求33的異類(lèi)黃酮化合物。35.根據(jù)權(quán)利要求34的異類(lèi)黃酮化合物在制備用于治療疾病或健康狀況的藥物中的用途，其中疾病或健康狀況與和egr-1響應(yīng)元件共有序列相關(guān)的基因表達(dá)狀態(tài)有關(guān)。36.權(quán)利要求35的用途，其中所述的疾病選自癌癥和其它的增殖性疾病、血管疾病、需要治療介入的傷口、炎癥和肺部疾病。37.權(quán)利要求36的用途，其中所述的肺部疾病選自肺氣腫、哮喘、囊性纖維化、慢性閉塞性肺部疾病、CVD、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓和/或再狹窄。38.權(quán)利要求36的用途，其中所述的與癌癥有關(guān)的疾病選自與p53水平改變有關(guān)的細(xì)胞周期停滯或程序性細(xì)胞死亡疾病，以及與FGF-2活性水平改變有關(guān)的血管生成和狹窄。39.權(quán)利要求26的化合物，其包含含有以下結(jié)構(gòu)的茋化合物其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R10中至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2以及其中X可以是單、雙或三鍵。40.藥物組合物，其含有與藥學(xué)上可接受載體組合的權(quán)利要求39的茋化合物。41.根據(jù)權(quán)利要求40的茋化合物在制備用于治療疾病或健康狀況的藥物中的用途，其中疾病或健康狀況與和egr-1響應(yīng)元件共有序列相關(guān)的基因的表達(dá)狀態(tài)有關(guān)。42.權(quán)利要求41的用途，其中所述的疾病選自癌癥和其它的增殖性疾病、血管疾病、需要治療介入的傷口、炎癥和肺部疾病。43.權(quán)利要求42的用途，其中所述的肺部疾病選自肺氣腫、哮喘、囊性纖維化、慢性閉塞性肺部疾病、CVD、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓和/或再狹窄。44.權(quán)利要求42的用途，其中所述的與癌癥有關(guān)的疾病選自與p53水平改變有關(guān)的細(xì)胞周期停滯或程序性細(xì)胞死亡疾病，以及與FGF-2活性水平改變有關(guān)的血管生成和狹窄。45.權(quán)利要求26的化合物，其包含含有以下結(jié)構(gòu)的查耳酮化合物其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R13和R14可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)、碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R10或R13或R14中至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2；其中X可以是單或雙鍵。Y可以是單或雙鍵Z可以是CO[酮]、CR13或NR13。46.藥物組合物，其含有與藥學(xué)上可接受載體組合的權(quán)利要求45的查耳酮化合物。47.根據(jù)權(quán)利要求46的查耳酮化合物在制備用于治療疾病或健康狀況的藥物中的用途，其中疾病或健康狀況與和egr-1響應(yīng)元件共有序列相關(guān)的基因表達(dá)狀態(tài)有關(guān)。48.權(quán)利要求47的用途，其中所述的疾病選自癌癥和其它的增殖性疾病、血管疾病、需要治療介入的傷口、炎癥和肺部疾病。49.權(quán)利要求48的用途，其中所述的肺部疾病選自肺氣腫、哮喘、囊性纖維化、慢性閉塞性肺部疾病、CVD、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓和/或再狹窄。50.權(quán)利要求48的用途，其中所述的與癌癥有關(guān)的疾病選自與p53水平改變有關(guān)的細(xì)胞周期停滯或程序性細(xì)胞死亡疾病，以及與FGF-2活性水平改變有關(guān)的血管生成和狹窄。51.權(quán)利要求26的化合物，其包含含有以下結(jié)構(gòu)的多酚化合物其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10可以各自獨(dú)立地為氫、羥基[OH]、羥烷基、氨基烷基、溴化物(Br)碘化物(I)、硝基氧[ONO.sub.2]、甲氧基[OCH.sub.3]、乙氧基[OCH.sub2CH.sub.3]、氟化物[F]、氯化物[Cl]、CF.sub.3、CCl.sub.3、磷酸酯、R11、R12、OR11、OR12、OCOR11、OCOR12、O-硫酸酯[硫酸酯共軛體]、或O-葡萄糖醛酸酯[葡萄糖醛(AKA葡糖醛)酸共軛體]，前提是R1-R10中至少一個(gè)是硝基氧、R12、OR12或OCOR12；以及其中OCOR指的是R是R11或R12其中R11是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的且任選是分支的，并且可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，以及其中R12是C1-18、芳基、雜芳基或其衍生物，其中所述的衍生物是任選被取代的，任選是分支的，可以具有一個(gè)或多個(gè)被S、N或O取代的C原子，并且任選包含一個(gè)或多個(gè)ONO.sub.2；以及其中X可以是C、S、(CO)、SO、AKA酮、(SO.sub.2)N、(CO)C、(CO)N、(CO)O、C-N[單鍵]、C＝N[雙鍵]、C-O、N-O、N-N[單鍵]或N＝N[雙鍵]。52.藥物組合物，其含有與藥學(xué)上可接受載體組合的權(quán)利要求51的多酚化合物。53.根據(jù)權(quán)利要求52的多酚化合物在制備用于治療疾病或健康狀況的藥物中的用途，其中疾病或健康狀況與和egr-1響應(yīng)元件共有序列相關(guān)的基因表達(dá)狀態(tài)有關(guān)。54.權(quán)利要求53的用途，其中所述的疾病選自癌癥和其它的增殖性疾病、血管疾病、需要治療介入的傷口、炎癥和肺部疾病。55.權(quán)利要求54的用途，其中所述的肺部疾病選自肺氣腫、哮喘、囊性纖維化、慢性閉塞性肺部疾病、CVD、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓和/或再狹窄。56.權(quán)利要求54的用途，其中所述的與癌癥有關(guān)的疾病選自與p53水平改變有關(guān)的細(xì)胞周期停滯或程序性細(xì)胞死亡疾病，和與FGF-2活性水平改變有關(guān)的血管生成和狹窄。全文摘要提供了通過(guò)給予患者能調(diào)節(jié)egr－1和/或egr－1響應(yīng)元件共有序列并由此改變基因表達(dá)狀況的化合物來(lái)治療有健康狀況的患者的化合物和方法，其中健康狀況與所述基因的表達(dá)狀態(tài)有關(guān)，例如生育力疾病、癌癥、增殖性疾病、血管疾病、需要治療介入的傷口、炎癥和肺部疾病。還記載了用于篩選化合物以確定egr－1和/或egr－1共有序列元件效應(yīng)子的方法，以及治療患者的方法，其通過(guò)給予這種效應(yīng)子來(lái)調(diào)節(jié)egr－1和/或egr－1共有序列以由此改變與其有關(guān)的基因表達(dá)以依次治療與這種基因表達(dá)有關(guān)的疾病或其它生理狀況。文檔編號(hào)A61K31/44GK1925862SQ200480036875公開(kāi)日2007年3月7日申請(qǐng)日期2004年10月8日優(yōu)先權(quán)日2003年10月10日發(fā)明者黃昌榮,J·塔克,D·R·邁卡弗里申請(qǐng)人:雷斯弗洛吉克斯公司