專利名稱：人參皂苷Rh1的醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切地說是人參皂苷Rh1(ginsenoside Rh1)的醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
人參藥用在我國已有數(shù)千年的歷史，其具有多種生理和藥理作用，如抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、改善微循環(huán)、平穩(wěn)血壓、調(diào)節(jié)血糖、降血脂、安神、抗衰老、抗緊張、調(diào)節(jié)消化機(jī)能、預(yù)防消化道潰瘍、提高生命質(zhì)量、增強(qiáng)記憶及學(xué)習(xí)能力等。
目前公認(rèn)人參皂苷是人參的有效部位，其中的Rg1作為有效成分之一，含量較高，活性強(qiáng)，作用廣。但是，天然人參皂苷被腸道吸收的能力極差，難以入血發(fā)揮藥效作用，從而影響了人參皂苷的新藥開發(fā)及產(chǎn)業(yè)化。
近年研究表明，人和大鼠口服人參皂苷后，在人腸道內(nèi)代謝途徑為Rg1→Rh1→原人參三醇(Ppt)，在大鼠腸道內(nèi)的代謝途徑為Rg1→Rh1/F1(ginsenoside F1)→原人參三醇(Ppt)。其中F1為Rh1的同分異構(gòu)體。說明Rg1經(jīng)腸內(nèi)菌代謝后，兩個(gè)中間產(chǎn)物(Rh1及F1)被吸收入血產(chǎn)生藥理作用。
王毅等研究結(jié)果顯示Rh1能提高巨噬細(xì)胞的吞噬能力和促進(jìn)NO的釋放，且Rh1能促進(jìn)脾細(xì)胞增殖、下調(diào)刀豆素(ConA)誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖。研究者認(rèn)為Rh1調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用可能與其在體內(nèi)直接激活T細(xì)胞增殖、抑制活化狀態(tài)的T細(xì)胞、并提高巨噬細(xì)胞吞噬及釋放NO的能力等有關(guān)，其中Rh1對(duì)T細(xì)胞的作用更強(qiáng)王毅，姜艷，王本祥.人參皂苷Rg1及其腸內(nèi)菌代謝產(chǎn)物Rh1對(duì)小鼠免疫細(xì)胞功能的影響.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2002，37(12)927。
王毅等觀察人參皂苷Rh1對(duì)DC刺激T細(xì)胞增殖的影響結(jié)果表明人參皂苷Rh1可不同程度地增強(qiáng)DC刺激T細(xì)胞增殖及LPAK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，Rh1作用與其劑量范圍及細(xì)胞比例密切相關(guān)王毅，郝鈺，邱全瑛.人參皂苷Rg1及Rh1對(duì)樹突狀細(xì)胞刺激T細(xì)胞增殖及LPAK抗腫瘤活性的影響.中國免疫學(xué)雜志，2003，19(4)248。
張有為等研究人參皂苷對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖的抑制作用結(jié)果表明在5μmol/L濃度下，人參皂苷Rh1較明顯地抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖張有為，竇德強(qiáng)，陳英杰，等.人參皂苷對(duì)人體骨肉瘤細(xì)胞U2OS增殖的影響.中草藥，2001，32(3)232-236。而關(guān)于人參皂苷Rh1的其余藥理作用皆未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于明確提出了人參皂苷Rh1的醫(yī)藥用途。
本發(fā)明提供了人參皂苷Rh1在制備治療癡呆綜合征藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了人參皂苷Rh1在制備治療阿爾茨海默病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了人參皂苷Rh1在制備治療或預(yù)防血管性癡呆藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了人參皂苷Rh1在制備治療帕金森氏病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了人參皂苷Rh1在制備治療貧血藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了人參皂苷Rh1在制備治療再生障礙性貧血藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了人參皂苷Rh1在制備治療白血病藥物中的應(yīng)用本發(fā)明提供了人參皂苷Rh1在制備治療或預(yù)防缺血性腦中風(fēng)的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了人參皂苷Rh1在制備治療或預(yù)防腦缺血/再灌注損傷的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了人參皂苷Rh1在制備治療或預(yù)防心肌缺血的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了人參皂苷Rh1在制備治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了人參皂苷Rh1在制備治療自內(nèi)障的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供的藥物可以以口服或注射途徑給藥，注射給藥可以為靜脈注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射或瘤體內(nèi)注射?？诜苿┛梢詾槠瑒?、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、滴丸、軟膠囊、懸浮液、溶液、糖漿；注射用制劑可以為凍干粉針、注射用靜脈乳劑、注射液、輸液。口服制劑優(yōu)選為片劑、膠囊劑、顆粒劑；注射用制劑優(yōu)選凍干粉針、注射用靜脈乳劑。
本發(fā)明所提供的各種藥物劑型均可以以藥學(xué)常規(guī)方法制備而成。
本發(fā)明通過下列實(shí)施方式證明了人參皂苷RH1的用途，但不限于此。
具體實(shí)施例方式試驗(yàn)例1人參皂苷Rh1對(duì)AD模型大鼠學(xué)習(xí)記憶力的影響1.Aβ1-40誘導(dǎo)大鼠AD樣病變模型的制備及分組應(yīng)用凝聚態(tài)β淀粉樣肽1～40片段(Aβ1-40)注入大鼠海馬內(nèi)建立AD樣病變的動(dòng)物模型。具體如下SD雄性大鼠共50只，清潔2級(jí)，體重250～300g。SD大鼠經(jīng)麻醉后于立體定位儀下以Aβ1-40行雙側(cè)海馬內(nèi)注射，每側(cè)各1μl(預(yù)先將Aβ1-40溶于無菌生理鹽水10μg/μl，用前37℃下孵育1周)。注射部位為前囟后3.5mm，腦正中線旁開2.0mm，其深度為2.7mm。
大鼠隨機(jī)分為5組(1)Aβ1-40處理模型組；(2)人參皂苷Rh1低劑量治療組(2.5mg/kg)；(3)人參皂苷Rh1中劑量治療組(5mg/kg)；(4)人參皂苷Rh1高劑量治療組(10mg/kg)；(5)假手術(shù)對(duì)照組即海馬內(nèi)注射等量生理鹽水。
給藥方法各組動(dòng)物于造模前一周開始腹腔注射給藥，每天1次，連續(xù)3周。迷宮訓(xùn)練期間，于訓(xùn)練前0.5h給藥。
2.觀察指標(biāo)與方法空間學(xué)習(xí)記憶力測試采用Morris水迷宮法。平臺(tái)設(shè)于迷宮東北象限正中，水平面高出平臺(tái)1.5cm，水溫保持在19℃～20℃，大鼠連續(xù)訓(xùn)練5d，每天2次，設(shè)定最長游動(dòng)時(shí)間為70s，以秒表記時(shí)，記錄大鼠找到平臺(tái)所需時(shí)間(潛伏期，EL)。
3.結(jié)果對(duì)AD大鼠空間學(xué)習(xí)記憶力的影響隨訓(xùn)練天數(shù)增加，各組大鼠平均EL逐漸縮短。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠EL明顯延長，第4天開始差異顯著(P＜0.05)，說明造模成功。與模型組比，人參皂苷Rh12.5mg/kg組大鼠于第4天開始EL明顯縮短，5mg/kg組則于第3天開始EL明顯縮短，10mg/kg組則于第2天即開始EL明顯縮短，皆差異顯著；10mg/kg組第5天則有極顯著性差異。表明人參皂苷Rh1各劑量組均能顯著改善Aβ1-40誘導(dǎo)的大鼠空間學(xué)習(xí)記憶障礙，且呈劑量依賴性。詳見表1。
表1 人參皂苷Rh1對(duì)實(shí)驗(yàn)性AD模型大鼠空間辨別學(xué)習(xí)記憶能力的影響

注與AD模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
試驗(yàn)例2人參皂苷Rh1對(duì)血管性癡呆模型大鼠學(xué)習(xí)記憶力的影響1.造模方法本研究采用永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈(2-VO)法制作慢性腦灌注不足VaD動(dòng)物模型，大鼠術(shù)前12h禁食、4h禁水。用10％水合氯醛(0.35ml/100g)腹腔注射麻醉，必要時(shí)補(bǔ)充注射，保證手術(shù)期間有自主呼吸。待翻正反射消失后，仰臥固定木制手術(shù)臺(tái)上。頸前部去毛，酒精、碘酒消毒后，沿腹側(cè)頸正中切開，依次鈍性分離皮下脂肪、胸骨舌骨肌和胸鎖乳頭肌，再分別分離暴露左、右側(cè)頸總動(dòng)脈及氣管(注意勿傷及迷走神經(jīng))，套以“0”號(hào)絲線雙重結(jié)扎，然后逐層縫合肌肉、皮膚。其中控制麻醉深度、保持體溫恒定是造模成功的關(guān)鍵。術(shù)后動(dòng)物送至有通風(fēng)設(shè)備動(dòng)物房飼養(yǎng)。假手術(shù)組動(dòng)物同法行頸前皮膚切開，分離皮下脂肪、肌肉等組織，分離、暴露但不結(jié)扎頸總動(dòng)脈，逐層縫合切口。術(shù)畢給予注射用青霉素鈉水溶液適量局部涂敷，放入籠中飼養(yǎng)，每日肌注青霉素鈉20萬U/只，連用3d(如出現(xiàn)感染者可延長至1周)，防治感染。
2.動(dòng)物分組及給藥方法同試驗(yàn)例1。
3.觀察指標(biāo)與方法同試驗(yàn)例1。
4.結(jié)果對(duì)AD大鼠空問學(xué)習(xí)記憶力的影響隨訓(xùn)練天數(shù)增加，各組大鼠平均EL逐漸縮短。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠EL明顯延長，第4天開始差異顯著(P＜0.05)，說明造模成功。與模型組比，人參皂苷Rh12.5mg/kg組大鼠于第4天開始EL明顯縮短，5mg/kg組則于第3天開始EL明顯縮短，10mg/kg組則于第2天即開始EL明顯縮短，皆差異顯著(P＜0.05)；10mg/kg組第4天開始即有極顯著性差異(P＜0.001)。表明人參皂苷Rh1各劑量組均能顯著改善實(shí)驗(yàn)性VD大鼠空間學(xué)習(xí)記憶障礙，且呈劑量依賴性。詳見表2。
表2 人參皂苷Rh1對(duì)實(shí)驗(yàn)性VD模型大鼠空間辨別學(xué)習(xí)記憶能力的影響

注與AD模型組比較，*P＜0.05；P＜0.001。
試驗(yàn)例3人參皂苷Rh1對(duì)帕金森氏病(PD)大鼠的影響1.造模方法120只體重200～300gSD大鼠，隨機(jī)分出10只作正常對(duì)照組，10只作假手術(shù)組(注射等量含2g/L維生素C的生理鹽水)，其余100只進(jìn)行造模。造模方法如下戊巴比妥鈉按體重50mg/kg腹腔注射麻醉并固定于立體定位儀，顱骨鉆孔，6-羥基多巴(6-OHDA)8μg溶于2μL生理鹽水(其中含2g/L維生素C)，微量注射于一側(cè)黑質(zhì)或/和內(nèi)側(cè)前腦束，注射完畢留針5min再緩慢拔出，封閉傷口。腹腔注射青霉素10萬u/kg，換藥，每日1次，7日后拆線。術(shù)后2周用0.01％阿樸嗎啡腹腔注射(1ml/只)，觀察記錄每5min向健側(cè)旋轉(zhuǎn)次數(shù)及40min旋轉(zhuǎn)的總次數(shù)，旋轉(zhuǎn)次數(shù)≥7圈/min(280圈/40min)者為陽性。每周1次，連續(xù)4周陽性者為合格的PD模型大鼠。假手術(shù)組大鼠未出現(xiàn)旋轉(zhuǎn)行為。
2.動(dòng)物分組及給藥方法
將造模成功的60只PD大鼠隨機(jī)分為4組，每組15只，具體如下(1)模型組；(2)人參皂苷Rh1低劑量組(2.5mg/kg)；(3)人參皂苷Rh1中劑量組(5mg/kg)；(4)人參皂苷Rh1高劑量組(10mg/kg)。
給藥方法腹腔注射給藥，每天1次，連續(xù)3周。
3.觀察指標(biāo)與方法分別于給藥第1、2、3周末用鹽酸阿撲嗎啡誘導(dǎo)檢測PD大鼠的旋轉(zhuǎn)行為。
4.結(jié)果人參皂苷RH1對(duì)治療前后大鼠旋轉(zhuǎn)行為的影響表3顯示模型組大鼠旋轉(zhuǎn)圈數(shù)不斷增加，與治療前比較2周后即有顯著性差異(P＜0.01)；中、高劑量人參皂苷Rh1治療后第2周即可改善PD大鼠的旋轉(zhuǎn)行為，使旋轉(zhuǎn)圈數(shù)減少(與模型組比較，P＜0.05或P＜0.01)；低劑量Rh1治療3周后比模型組的旋轉(zhuǎn)圈數(shù)減少(P＜0.01)。
表3 各組大鼠治療前后旋轉(zhuǎn)行為比較

注#與治療前比較，P＜0.05；##P＜0.01；*與模型組比較，P＜0.05；**P＜0.01。
試驗(yàn)例4人參皂苷RH1對(duì)免疫誘導(dǎo)再生障礙性貧血(AA)小鼠的影響1.免疫誘導(dǎo)AA小鼠模型的建立取DBA/2小鼠，斷頸處死，常規(guī)消毒，無菌取出胸腺及頸部、頜下、腋窩、腹股溝、腸系膜等處淋巴結(jié)，加少量生理鹽水，輕輕磨碎后過濾，使成單細(xì)胞懸液，臺(tái)盼藍(lán)鑒定細(xì)胞活性，活性細(xì)胞達(dá)98％。計(jì)數(shù)后配成所需濃度備用。雌性Balb/c小鼠，經(jīng)60Co6.0Gyγ射線亞致死量全身照射。4h內(nèi)由尾靜脈輸入取自DBA/2小鼠胸腺淋巴結(jié)混合細(xì)胞，輸細(xì)胞量為每只1×106/0.2ml。
2.分組與給藥將Balb/c小鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，具體如下(1)正常對(duì)照組即未經(jīng)照射組，給予腹腔注射無菌生理鹽水，10ml·kg-1·d-1，每天1次，連續(xù)12d。(2)模型對(duì)照組于制模當(dāng)天即給予腹腔注射無菌生理鹽水，10ml·kg-1·d-1，每天1次，連續(xù)12d。(3)人參皂苷Rh1低劑量組(5mg/kg)；(4)人參皂苷Rh1中劑量組(10mg/kg)；(5)人參皂苷Rh1高劑量組(20mg/kg)；于制模當(dāng)天即給予人參皂苷Rh1腹腔注射，每天1次，連續(xù)12d。(6)丙酸睪丸酮組于制模當(dāng)天即給予腹腔注射丙酸睪丸酮，10ml·kg-1·d-1。所有小鼠均給予每升含紅霉素250mg及慶大霉素320萬U無菌水喂養(yǎng)。
3.觀察指標(biāo)與方法3.1小鼠外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)，骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)于制模第12d，每只小鼠經(jīng)尾靜脈采血，按常規(guī)方法計(jì)數(shù)外周血細(xì)胞(白細(xì)胞、血小板、血紅蛋白、網(wǎng)織紅細(xì)胞)后，斷頸處死，取右側(cè)股骨，用PBS沖出骨髓細(xì)胞，計(jì)數(shù)，即為1根股骨中的骨髓有核細(xì)胞(BMNC)。
3.2骨髓CD34+細(xì)胞檢測將沖出的BMNC用4％甲醛固定，加入10μlCD34+RPE單抗，4℃孵育30min，用PBS2ml洗2次后加入1mlPBS，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測CD34+細(xì)胞。
4.結(jié)果實(shí)驗(yàn)各組小鼠血細(xì)胞計(jì)數(shù)、骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)均顯著低于正常對(duì)照組(P＜0.01)，但人參皂苷RH1中、高劑量組及丙酸睪丸酮組較模型對(duì)照組明顯增加(P＜0.01)。模型對(duì)照組BMNC上CD34+細(xì)胞抗原的表達(dá)水平明顯低于正常對(duì)照組(P＜0.01)，而人參皂苷Rh1中、高劑量組及丙酸睪丸酮組較模型對(duì)照組明顯增加(P＜0.05和P＜0.01)，且與正常對(duì)照組之間無顯著性差異(P＞0.05)。但人參皂苷Rh1小劑量組與模型對(duì)照組比較無顯著差異(P＞0.05)。詳見表4-5。
表4 各組小鼠血細(xì)胞計(jì)數(shù)(x±s)

注與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與丙酸睪丸酮組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。
表5 小鼠骨髓有核細(xì)胞數(shù)及CD34+抗原表達(dá)的變化(x±s)

注與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與丙酸睪丸酮組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。
試驗(yàn)例5人參皂苷Rh1對(duì)大鼠局部腦缺血損傷的影響1.分組與實(shí)驗(yàn)方法Wistar大鼠隨機(jī)分為(1)假手術(shù)組(等容量溶劑)，(2)模型對(duì)照組(等容量溶劑)，(3)尼莫地平組(Nim，1.5mg/kg)，(4)人參皂苷RH1低劑量組(2.5mg/kg)；(5)人參皂苷RH1中劑量組(5mg/kg)；(6)人參皂苷RH1高劑量組(10mg/kg)。每組10只。禁食12小時(shí)后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈，夾閉頸內(nèi)、頸總動(dòng)脈，頸外動(dòng)脈近心端及遠(yuǎn)心端結(jié)扎，中間剪斷。將頸外動(dòng)脈游離端拉至與頸內(nèi)動(dòng)脈成一條直線，將栓線(選用直徑0.24mm尼龍線，長度5.0cm)由頸外動(dòng)脈插入至顱內(nèi)，遇輕微阻力時(shí)停止，插入深度約為2cm。結(jié)扎頸外動(dòng)脈開口，并打開頸總動(dòng)脈動(dòng)脈夾，消毒縫合傷口，造成左側(cè)大腦中動(dòng)脈缺血模型；假手術(shù)組僅進(jìn)行右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈的分離(以上實(shí)驗(yàn)均在23℃～25℃進(jìn)行)。術(shù)后各組動(dòng)物靜脈注射相應(yīng)藥物(給藥體積1ml/200g)。24小時(shí)后按文獻(xiàn)劉小光，徐理納，一種能評(píng)價(jià)溶栓和抗溶栓的大鼠腦中動(dòng)脈模型，藥學(xué)學(xué)報(bào)，1995，30662所述方法及標(biāo)準(zhǔn)觀察并記錄大鼠的行為障礙(A)提鼠尾觀察前肢屈曲情況，如雙前肢對(duì)稱伸向地面，計(jì)為0分，如手術(shù)對(duì)側(cè)前肢出現(xiàn)腕屈曲計(jì)為1分，肘屈曲計(jì)為2分，肩內(nèi)旋計(jì)為3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩內(nèi)旋者，計(jì)為4分。(B)將動(dòng)物置于平地面上，分別推雙肩向?qū)?cè)移動(dòng)，檢查阻力。如雙側(cè)阻力對(duì)等且有力，計(jì)為0分，如向手術(shù)對(duì)側(cè)推動(dòng)時(shí)阻力下降者，根據(jù)下降程度不同分為輕、中、重三度，分別計(jì)為1，2和3分。(C)將動(dòng)物雙前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察雙前肢的肌張力。雙前肢肌張力對(duì)等且有力者計(jì)為0分。同樣根據(jù)手術(shù)對(duì)側(cè)肌張力下降程度不同計(jì)為1，2和3分。(D)動(dòng)物有不停地向一側(cè)轉(zhuǎn)圈者，計(jì)為1分。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分，滿分為11分，分?jǐn)?shù)越高，表示動(dòng)物行為障礙越嚴(yán)重。
行為評(píng)分后處死大鼠，取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，冠狀切成5片，腦片用紅四氮唑(TTC)染色，正常組織經(jīng)染色后呈紅色，梗塞組織呈白色，染色后照相，用中國航空航天大學(xué)病理圖像分析軟件求梗塞面積比。數(shù)據(jù)用X±s表示，以組間t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
2.結(jié)果如表8所示，缺血24小時(shí)后，大鼠表現(xiàn)出明顯的行為障礙，大鼠腦組織也出現(xiàn)明顯的灶狀缺血區(qū)，達(dá)到全腦的25％左右；給予不同劑量的人參皂苷Rh1，動(dòng)物行為障礙有不同程度的減輕，大鼠腦缺血區(qū)也有明顯好轉(zhuǎn)，且呈劑量依賴性。
表8 人參皂苷RH1對(duì)大鼠局部腦缺血損傷的影響(n＝10，X±s)

注與模型對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
試驗(yàn)例6人參皂苷Rh1對(duì)大鼠腦缺血/再灌注損傷的影響1.分組及實(shí)驗(yàn)方法分組同前。禁食12小時(shí)后，按實(shí)驗(yàn)例7所述方法造成左側(cè)大腦中動(dòng)脈缺血；術(shù)后10min各組動(dòng)物靜脈注射相應(yīng)藥物(給藥體積1ml/200g)。缺血2小時(shí)后，抽出尼龍線，造成大鼠腦缺血/再灌注損傷；再灌22小時(shí)后，按按實(shí)驗(yàn)例1所述方法進(jìn)行行為評(píng)分、腦片染色。數(shù)據(jù)用X±s表示，以組間t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
2.結(jié)果如表9所示，缺血2小時(shí)再灌22小時(shí)后，大鼠表現(xiàn)出明顯的行為障礙，大鼠腦組織也出現(xiàn)明顯的灶狀缺血區(qū)，達(dá)到全腦的25％左右；給予不同劑量的人參皂苷Rh1，動(dòng)物行為障礙有不同程度的減輕，大鼠腦缺血區(qū)也有明顯好轉(zhuǎn)，且呈劑量依賴性。
表9 人參皂苷Rh1對(duì)大鼠腦缺血/再灌注損傷的影響(n＝10，X±s)


注與模型對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
試驗(yàn)例7人參皂苷Rh1對(duì)大鼠心肌缺血的影響1.分組及實(shí)驗(yàn)方法分組同前。禁食12小時(shí)后，ip烏拉坦(1.2g/kg)麻醉，測肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖。剪去左胸前皮毛，碘酒及酒精消毒，沿胸骨左緣1cm處，剪開胸壁肌肉及二條肋骨，迅速打開胸腔，暴露心臟，在動(dòng)脈圓錐與左心耳之間結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈，立即將心臟放回，排擠出胸腔空氣，用止血鉗閉合胸腔，造成大鼠急性心肌缺血模型。術(shù)后各組動(dòng)物靜脈滴注(用輸液泵注射)相應(yīng)藥物(給藥體積3ml，30min滴完)。記錄術(shù)后0，2，6h心電圖，隨后取出心臟，以冷生理鹽水洗凈后，-20℃冰箱冷凍過夜。次日，將冷凍的心臟由結(jié)扎處至心尖部等厚切成5片，浸入新鮮配制的0.5％N-BT磷酸緩沖液(pH 7.4)中。37℃水浴振搖10～15min。用濾紙吸干切片表面的染色液，分離染色部分和未染色部分，稱重，記算梗死面積。心肌梗死百分比(％)＝梗死部分重量/(非梗死部分重量+梗死部分重量)×100％。
3.結(jié)果如表10所示，不同劑量的人參皂苷Rh1均明顯減少結(jié)扎冠狀動(dòng)脈所致大鼠急性心肌缺血引起的心肌梗死面積，并可降低由心肌缺血造成的肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點(diǎn)的升高。人參皂苷RH1對(duì)心肌具有保護(hù)作用，能降低缺血引起的心肌損傷。
表10 人參皂苷Rh1對(duì)大鼠心肌缺血損傷的影響(n＝10，X±s)

注與模型對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01試驗(yàn)例8人參皂苷Rh1對(duì)實(shí)驗(yàn)性兔膝骨關(guān)節(jié)炎的影響
1.動(dòng)物模型的建立以切斷兔前后交叉韌帶方法造模。以3％戊巴比妥30mg/kg靜脈麻醉，隨機(jī)取左、右膝內(nèi)側(cè)髕腱旁直切口1-2cm，沿髕腱旁切開關(guān)節(jié)囊向內(nèi)側(cè)推離髕骨造成脫位。屈曲膝關(guān)節(jié)，直視下可見膝交叉韌帶，用眼科剪小心剪斷交叉韌帶，避免損傷關(guān)節(jié)面軟骨。行前后抽屜實(shí)驗(yàn)證實(shí)交叉韌帶完全切斷，沖洗關(guān)節(jié)腔積血、積屑，逐層縫合傷口，無菌包扎固定。術(shù)后4d肌注青霉素4×106U/d，以預(yù)防感染。
2.分組與給藥健康新西蘭兔60只，雌雄不限，兔齡6-8個(gè)月，平均體重(2.7±0.5)kg。全部動(dòng)物由暨南大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。動(dòng)物隨機(jī)分為6組，每組10只。具體如下(1)假手術(shù)組。(2)模型組于制模當(dāng)天即給予無菌生理鹽水10ml灌胃，每天1次，連續(xù)10周。(3)人參皂苷Rh1低劑量組(1.25mg/kg)；(4)人參皂苷Rh1中劑量組(2.5mg/kg)；(5)人參皂苷Rh1高劑量組(5mg/kg)；于制模當(dāng)天即給予人參皂苷Rh1灌胃，每天1次，連續(xù)10周。(6)硫酸氨基葡萄糖膠囊(40mg/kg)；加蒸餾水稀釋成溶液，于制模當(dāng)天即給予灌胃，每天1次，連續(xù)10周。
3.觀察指標(biāo)與方法3.1X線給藥10周后攝兔膝關(guān)節(jié)前后位CR片觀察膝關(guān)節(jié)X線表現(xiàn)。
3.2骨內(nèi)壓采用腦壓計(jì)測量骨內(nèi)壓。在靜脈全麻下，把兔仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上，在兔左或右脛骨結(jié)節(jié)上約5mm處內(nèi)側(cè)平坦骨面將骨穿針頭垂直穿入髓腔，拔出針芯，快速將帶有細(xì)長針頭、充有0.1％肝素鈉生理鹽水的注射管向骨穿針內(nèi)芯管注射充滿，再將裝有肝素鈉生理鹽水的細(xì)塑料管經(jīng)三通管連接到骨穿針和腦壓計(jì)，觀察10min，指針穩(wěn)定后，記錄數(shù)據(jù)。所得數(shù)據(jù)(單位mmH2O)經(jīng)公式換算成kPa。
3.3血清SOD、NO含量測定給藥10周后自兔耳緣靜脈取血5ml測血清SOD、NO含量。
4.結(jié)果4.1X線觀察假手術(shù)組膝關(guān)節(jié)內(nèi)外側(cè)間隙均勻一致，股骨髁、脛骨平臺(tái)關(guān)節(jié)面輪廓清晰、光整；模型組膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)間隙明顯變窄，外側(cè)間隙增大，膝關(guān)節(jié)失穩(wěn)，股骨內(nèi)髁、脛骨平臺(tái)關(guān)節(jié)面不光整；人參皂苷RH1各劑量組及硫酸氨基葡萄糖組膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)間隙變窄，外側(cè)間隙稍寬，但與模型組比較，股骨內(nèi)髁、脛骨平臺(tái)關(guān)節(jié)面尚光整。
4.2骨內(nèi)壓結(jié)果表明模型組、人參皂苷Rh1組、硫酸氨基葡萄糖組皆與假手術(shù)組對(duì)比有顯著性差異，說明造模成功。人參皂苷Rh1組中、高劑量組、硫酸氨基葡萄糖組與模型組比較有顯著性差異，說明人參皂苷Rh1中、高劑量及硫酸氨基葡萄糖組皆可降低兔膝關(guān)節(jié)炎模型骨內(nèi)壓，兩者比較無顯著性差異。詳見表11。
表11 人參皂苷RH1對(duì)兔膝關(guān)節(jié)炎模型骨內(nèi)壓的影響(n＝10，X±s)

注與模型對(duì)照組比較*P＜0.05；與硫酸氨基葡萄糖組比較#P＜0.05。
4.3血清SOD、NO含量測定用黃嘌呤氧化酶法測定SOD含量，用硝酸還原酶法測定NO含量，結(jié)果顯示模型組血清中SOD含量明顯下降，人參皂苷Rh1組及硫酸氨基葡萄糖組SOD活性升高，說明人參皂苷RH1與硫酸氨基葡萄糖均可提高SOD活性。血清NO測定，模型組血清中NO含量明顯升高，人參皂苷Rh1組及硫酸氨基葡萄糖組NO含量降低(表12)。
表12 人參皂苷Rh1對(duì)膝關(guān)節(jié)炎模型兔血清SOD、NO的影響(n＝10，X±s)

注與模型對(duì)照組比較*P＜0.05；與硫酸氨基葡萄糖組比較#P＜0.05。
5.結(jié)論上述結(jié)果表明人參皂苷Rh1能降低骨內(nèi)壓、提高SOD含量，抑制氧自由基對(duì)軟骨細(xì)胞及基質(zhì)的損害，從而起到防止并延緩關(guān)節(jié)軟骨的退行性改變，抑制滑膜炎癥以起到防治骨關(guān)節(jié)炎的作用。
試驗(yàn)例9人參皂苷Rh1對(duì)大鼠D-半乳糖性白內(nèi)障的影響1.動(dòng)物模型的建立每日給予除正常組大鼠外各組大鼠腹腔緩慢注入80％半乳糖溶液(20mg/kg)，共14天。
2.分組與給藥選用1％阿托品散瞳檢查晶狀體透明的健康Wistar大鼠48只，雌雄各半，鼠齡22天(提前三天斷乳)，體重40～50g。動(dòng)物隨機(jī)分為6組，每組8只。具體如下(1)正常組。給予腹腔注射生理鹽水。(2)模型組于制模當(dāng)天即給予無菌生理鹽水腹腔注射，每天1次，連續(xù)14天。(3)人參皂苷Rh1低劑量組(2.5mg/kg)；(4)人參皂苷Rh1中劑量組(5mg/kg)；(5)人參皂苷RH1高劑量組(10mg/kg)；于制模當(dāng)天即給予人參皂苷Rh1腹腔注射，每天1次，連續(xù)14天。(6)維生素E(1.3ml/100g)；于制模當(dāng)天即給予腹腔注射，每天1次，連續(xù)14天。
3.觀察指標(biāo)與方法3.1裂隙燈顯微鏡檢查1％阿托品滴眼液散瞳，每日用裂隙燈檢查雙眼晶狀體混濁情況，記錄下其出現(xiàn)I級(jí)混濁的時(shí)間，末次給藥12小時(shí)后記錄各組大鼠晶狀體混濁情況。
裂隙燈下晶狀體檢查分級(jí)晶狀體混濁程度按下列標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)。0期(無混濁)晶狀體透明清亮；I期(輕度混濁)僅赤道部有空泡；II期(明顯混濁)空泡擴(kuò)展到中央；III期(皮質(zhì)混濁)皮質(zhì)呈現(xiàn)不規(guī)則條紋或劍竹狀向前極放射的混濁灶，逐漸形成彌漫性灰色→灰白色混濁，晶狀體核心尚透明；IV期(核混濁)晶狀體除皮質(zhì)混濁外晶狀體核密度增高，色灰或灰白或白色；V期(完全混濁)整個(gè)晶狀體呈完全性白內(nèi)障。
3.2晶狀體及血清SOD、MDA測定實(shí)驗(yàn)第14天給藥后12小時(shí)，裂隙燈顯微鏡檢查后，各組大鼠乙醚麻醉，摘眼球，眼眶取血。摘除之眼球，以冰生理鹽水漂洗后，仔細(xì)從后路剖開眼球，除去眼球壁及玻璃體，剝離懸韌帶，冰盤上小心分離晶狀體。以每只大鼠的晶狀體為一個(gè)標(biāo)本，用4℃蒸餾水沖洗后，濾紙吸干，分析天平稱重，按W/V＝1∶9加入生理鹽水中，于冰浴下研磨10min，高速冷凍離心(3000r/min)10～15min后，取其上清液即為10％晶狀體勻漿，同時(shí)低溫離心血液取血清，立即送檢測定。
4.結(jié)果4.1人參皂苷Rh1對(duì)大鼠晶狀體混濁發(fā)生時(shí)間的影響人參皂苷Rh1與維生素E皆可延長晶狀體發(fā)生混濁的時(shí)間，與模型組比較有顯著性差異，且人參皂苷Rh1大劑量優(yōu)于維生素E療效，兩者比較有顯著性差異(表13)。
表13 各組大鼠晶狀體混濁發(fā)生時(shí)間情況(X±s)

注與模型對(duì)照組比較*P＜0.05；與維生素E組比較#P＜0.05。
表14 各組大鼠晶狀體混濁情況

4.2各組大鼠晶狀體及血清SOD活性及MDA的含量變化情況(見表15)表15 各組大鼠晶狀體及血清SOD活性及MDA的含量變化情況(X±s)


注與模型對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與維生素E組比較#P＜0.05，##P＜0.01。
5.結(jié)論人參皂苷Rh1能明顯延緩白內(nèi)障的形成，減輕晶狀體混濁程度，降低MDA含量，提高SOD活性，且都不同程度優(yōu)于維生素E。
權(quán)利要求
1.人參皂苷Rh1的醫(yī)藥用途。其特征在于人參皂苷Rh1的促智、神經(jīng)保護(hù)、抗腦缺血、刺激骨髓造血、抗軟骨退變、防治白內(nèi)障作用，可期望成為癡呆綜合征、帕金森氏病、缺血性心腦血管病、貧血、骨關(guān)節(jié)炎、白內(nèi)障的治療藥物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促智作用，其特征在于促智作用可以包括促進(jìn)正常人的學(xué)習(xí)記憶、改善腦功能障礙所致的學(xué)習(xí)記憶損傷及癡呆綜合征患者改善記憶等。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的神經(jīng)保護(hù)作用，其特征在于人參皂苷Rh1能保護(hù)大腦皮質(zhì)神經(jīng)元、有肯定的抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡作用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的癡呆綜合征，其特征在于癡呆綜合征包括阿爾茨海默病、血管性癡呆等。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的貧血，其特征在于貧血包括再生障礙性貧血、白血病等。
6.根據(jù)權(quán)利要求1任一所述的應(yīng)用，其給藥方式可以以口服或注射途徑給藥，注射給藥可以為靜脈注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射或瘤體內(nèi)注射?？诜苿┛梢詾槠瑒?、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、滴丸、軟膠囊、懸浮液、溶液、糖漿；注射用制劑可以為凍干粉針、注射用靜脈乳劑、注射液、輸液?？诜苿﹥?yōu)選為片劑、膠囊劑、顆粒劑；注射用制劑優(yōu)選凍干粉針、注射用靜脈乳劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及人參皂苷Rh1的醫(yī)藥用途。人參皂苷Rh1具有促智、神經(jīng)保護(hù)、抗腦缺血、抗腫瘤、刺激骨髓造血、抗軟骨退變、防治白內(nèi)障作用，可期望成為癡呆綜合征、帕金森氏病、缺血性心腦血管病、貧血、腫瘤、骨關(guān)節(jié)炎、白內(nèi)障的治療藥物。其給藥方式可以為口服或注射途徑給藥。
文檔編號(hào)A61K9/19GK1883491SQ20051003535
公開日2006年12月27日 申請(qǐng)日期2005年6月20日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月20日
發(fā)明者吳巍 申請(qǐng)人:?？诰G科南藥研究開發(fā)有限公司