專利名稱：注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種多烯磷脂酰膽堿制劑，尤其涉及注射用多烯磷脂酰膽堿制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
多烯磷脂酰膽堿(Polyene Phosphatidyl choline)是從大豆中提取的高度純化的1，2-二亞油酰磷脂酰膽堿，又稱之為必需磷脂(essentialphospholipids，EPL)，本品目前由德國利寶益(Lipoid)公司進口，產(chǎn)品質(zhì)量符合注射用標(biāo)準(zhǔn)。多烯磷脂酰膽堿是細胞膜的主要組成部分，其在化學(xué)結(jié)構(gòu)上與重要的內(nèi)源性磷脂一致。主要進入肝細胞，并以完整的分子與肝細胞膜及細胞器膜相結(jié)合，調(diào)節(jié)細胞膜的形態(tài)和功能，對已破壞的肝細胞膜結(jié)構(gòu)進行修復(fù)，增加膜的流動性和穩(wěn)定性，糾正酶的細胞外逸脫，維持細胞內(nèi)酶的活性，使受損的肝功能和酶活力恢復(fù)正常，起到保護肝細胞的作用。其次多烯磷脂酰膽堿作為脂蛋白的主要成分可影響脂類代謝、促進細胞可溶性質(zhì)粒形成，加速體內(nèi)脂肪分解、減少脂肪在體內(nèi)積聚，所含有多不飽和膽堿，能阻止肝細胞內(nèi)線粒體酶活性下降和增加漿膜中的膜蛋白酶活性、有效阻止肝細胞變性及炎癥纖維化。因而臨床上用于治療各類急慢性肝炎、肝硬化和肝中毒等，為目前療效最為肯定的一個保肝藥物。
目前，市售的多烯磷脂酰膽堿制劑為注射液。多烯磷脂酰膽堿注射液貯藏溫度低，要求在8℃以下，貯藏不便，此外運輸包裝也不方便。凍干劑型能克服這些缺點，具有穩(wěn)定性好，運輸方便的優(yōu)點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是公開一種注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑及其制備方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷。
本發(fā)明的多烯磷脂酰膽堿凍干劑，以重量百分計，多烯磷脂酰膽堿為30％～60％，藥用輔料為40％～70％；所說的藥用輔料包括增溶劑和骨架支持劑；藥用輔料中，增溶劑的重量用量為40～60％，骨架支持劑的重量用量為0～10％；增溶劑是十分重要的，因為多烯磷脂酰膽堿難溶于水，需要增溶劑增大其水中的溶解度，增溶劑可選自去氧膽酸、去氧膽酸鈉、去氫膽酸鈉、膽酸鈉或甘氨膽酸中的一種；所說的骨架支持劑選自甘露醇、山梨醇、尿素、葡萄糖、乳糖、蔗糖、右旋糖酐、聚乙烯吡咯酮或甘氨酸中的一種或其混合物，優(yōu)選甘露醇。
為了提高制劑的抗氧化穩(wěn)定性，可添加抗氧化劑，所說的抗氧化劑選自維生素C、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、叔丁基-4-羥基茴香醚(BHA)、2，6-二特丁基對甲酚(BHT)中的一種或其混合物，抗氧化劑用量為0.02～1.0％。
為了提高制劑的防腐性，可添加防腐劑，所說的防腐劑選自苯甲醇、三氯叔丁醇、羥苯酯美、山梨酸中的一種或其混合物，防腐劑用量為0.5～1.0％。
本發(fā)明凍干劑的規(guī)格為每瓶含活性化合物多烯磷脂酰膽堿232.5mg。
本發(fā)明的多烯磷脂酰膽堿凍干劑的制備方法包括如下步驟將增溶劑溶解于水，獲得增溶劑水溶液，用2mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值為7.5～9.5，然后依次加入多烯磷脂酰膽堿、抗氧劑、防腐劑和骨架支持劑，攪拌使其溶解，再加水至規(guī)定體積，使溶液中多烯磷脂酰膽堿的濃度為0.0465g/ml，加入活性炭攪拌靜置30分鐘，過濾，灌裝，冷凍干燥去除水分，即得多烯磷脂酰膽堿凍干劑。
本發(fā)明的有益效果是十分顯著的，由穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明，本發(fā)明的制劑具有良好的穩(wěn)定性，可明顯提高制劑的貯藏溫度，貯藏溫度可達25℃；并且方法簡單易行，制品質(zhì)量穩(wěn)定可靠。
具體實施例方式
實施例1將50g去氧膽酸溶解于700ml注射用水，攪拌至均質(zhì)，用2mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8.5，加入46.5g多烯磷脂酰膽堿、0.8g苯甲醇、2g亞硫酸氫鈉、5g甘露醇，攪拌溶解，用2mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8.5，加水定容至1000ml，加入0.2g活性炭攪拌靜置30分鐘左右，過濾、灌裝，采用本領(lǐng)域公知的方法冷凍干燥，即得。
實施例2將50g去氧膽酸溶解于700ml注射用水，攪拌至均質(zhì)，用2mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.5，加入46.5g多烯磷脂酰膽堿、0.8g苯甲醇、0.2g BHT、5g山梨醇，攪拌溶解，用2mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.5，加水定容至1000ml，加入0.2g活性炭攪拌靜置30分鐘左右，過濾、灌裝，采用本領(lǐng)域公知的方法冷凍干燥，即得。
實施例3將25g去氧膽酸溶解700ml注射用水，攪拌至均質(zhì)，用2mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至9.5，加入46.5g多烯磷脂酰膽堿、0.8g苯甲醇、2g亞硫酸氫鈉、5g甘露醇，攪拌溶解，用2mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至9.5；加水定容至1000ml，加入0.2g活性炭攪拌靜置30分鐘左右，過濾、灌裝，采用本領(lǐng)域公知的方法冷凍干燥，即得。
實施例4將50g甘氨膽酸溶解于700ml注射用水，攪拌至均質(zhì)，用2.0mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8.5，加入46.5g多烯磷脂酰膽堿、0.8g苯甲醇、2g亞硫酸氫鈉、5g甘露醇，攪拌溶解，用2.0mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8.5，加水定容至1000ml，加入活性炭攪拌靜置30分鐘左右，過濾、灌裝，采用本領(lǐng)域公知的方法冷凍干燥，即得。
實施例5采用實施例1的制劑，在溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置12個月，進行長期穩(wěn)定性考察，結(jié)果見表1。
表1 多烯磷脂酰膽堿凍干劑穩(wěn)定性試驗結(jié)果 結(jié)論以上結(jié)果表明，12月與0月比較，凍干制劑的各項指標(biāo)均無明顯變化，而注射液的有關(guān)物質(zhì)增加，含量下降較多，說明多烯磷脂酰膽堿凍干劑比多烯磷脂酰膽堿注射液的質(zhì)量更穩(wěn)定，貯藏溫度可以從注射液的2-8℃提高到25℃。
實施例6采用實施例1的制劑進行的全身過敏性、溶血性和血管刺激性試驗。
一、注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑全身過敏性試驗1、試驗方法將豚鼠40只，雌雄各半，隨即分為4組，每組10只，各組分別給予注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑232.5mg(溶于5ml注射用水)、進口多烯磷脂酰膽堿注射液5ml232.5mg(上市產(chǎn)品)、卵蛋白和5％葡萄糖注射液。隔日腹腔注射一次，每次0.5ml，共三次，以達到致敏效果。每組各取5只豚鼠，于首次注射后的第14天分別腹腔注射多烯磷脂酰膽堿注射液5ml232.5mg(上市產(chǎn)品)、卵蛋白和5％葡萄糖注射液各1ml，攻擊一次；其余豚鼠于首次注射后第21天同樣攻擊一次。每次攻擊后，立即觀察豚鼠有無用爪搔鼻、噴嚏、豎毛、抽搐、呼吸困難、環(huán)轉(zhuǎn)運動、休克和死亡等過敏現(xiàn)象。如無上述癥狀發(fā)生，則表明該藥無致敏作用。
2、結(jié)果在每次攻擊注射后，卵蛋白組豚鼠，均出現(xiàn)噴嚏、豎毛、無目的環(huán)轉(zhuǎn)運動、抽搐、呼吸困難和第二天死亡的現(xiàn)象；注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑、進口多烯磷脂酰膽堿注射液(上市產(chǎn)品)和5％葡萄糖注射液豚鼠一樣，均未出現(xiàn)明顯的上述過敏現(xiàn)象。
3、結(jié)論注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑全身過敏性試驗表明，該藥無致敏作用，臨床注射使用是安全的。
二、注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑溶血試驗1、試驗方法從兔耳靜脈取血數(shù)毫升，放入盛有玻璃珠的三角瓶中振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血液，加約10倍量的氯化鈉注射液，搖勻，離心(2000轉(zhuǎn)/min)，除去上清液，沉淀的紅細胞再用氯化鈉注射液如法洗滌3次，至上清液不顯紅色為止。將得紅細胞用氯化鈉注射液配成2％(ml/ml)的混懸液備用。
取試管12支，按下表配比量依次加入2％的紅細胞混懸液和氯化鈉注射液(或蒸餾水)，混勻后，于37℃恒溫箱放置0.5hr。然后加入不同量的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑232.5mg(溶于5ml注射用水)、進口多烯磷脂酰膽堿注射液5ml232.5mg(上市產(chǎn)品)，搖勻后，置37℃恒溫箱中。第6管作為陰性對照，加氯化鈉注射液；第7管作為完全溶血(或陽性)對照，也不加受試藥液，但用蒸餾水代替氯化鈉注射液，分別于37℃恒溫后15min、30min、45min、1hr、2hr、3hr、4hr各觀察一次。


2、結(jié)果判斷如果溶液呈透明紅色，即表示溶血；如果紅細胞全部下沉，上層溶液無色透明，且振搖后均勻分散，表示不溶血；如果溶液中有棕紅色或紅棕色絮狀沉淀，表示有紅細胞凝聚作用。
(1)一般以0.3ml注射劑(第3管)在2hr內(nèi)不產(chǎn)生溶血作用者，認為可供注射用。
(2)如有紅細胞凝聚的現(xiàn)象，可按下法進一步判定是真凝聚還是假凝聚。若凝聚物在試管振搖后又能均勻分散，或?qū)⒛畚锓旁谳d玻片上，在蓋玻片邊緣滴加2滴氯化鈉注射液，在顯微鏡下觀察，凝聚紅細胞能被沖散者為假凝聚，供試品可供臨床使用。若凝聚物不被搖散或在玻片上不被沖散者為真凝聚，供試品不宜供臨床使用。
3、結(jié)果在本試驗中，陰性對照管(6管)為陰性，紅細胞全部下沉，上層溶液無色透明，且振搖后均勻分散，即不溶血；完全溶血對照管(7管)為陽性，溶液呈透明紅色，即溶血。各給藥管(包括第3管)在4hr內(nèi)均與陰性對照管一致，即不溶血。
4、結(jié)論本試驗結(jié)果表明注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑無溶血作用，可供臨床注射用。
三、注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑血管刺激性試驗1、試驗方法注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑232.5mg(溶于5ml注射用水)臨床最大用量為8瓶/天，根據(jù)人和動物間按體表面積折算的等效劑量比值表，確定多烯磷脂酰膽堿兔給藥劑量為1.9ml/kg；空白對照組給予5％葡萄糖注射液，給藥容積為1.9ml/kg。
取日本大耳白兔4只，隨機分為2組，每日一次，從兔耳緣靜脈緩慢推注一定量的受試藥和5％葡萄糖注射液，連續(xù)三天后，先肉眼觀察命脈注射局部有無充血、水腫、發(fā)紫、壞死等刺激現(xiàn)象，然后解剖動物左右兩側(cè)耳緣靜脈血管作病理切片觀察。
2、結(jié)果注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑和空白對照組兔耳緣靜脈注射局部均無充血、水腫、發(fā)紫、壞死等刺激現(xiàn)象。病理檢查組織切片顯示空白對照組靜脈血管壁及周圍組織結(jié)構(gòu)正常；給藥組靜脈血管壁及周圍組織結(jié)構(gòu)正常，未見炎細胞浸潤及變性、水腫、壞死。
3、結(jié)論本試驗表明注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑臨床用藥量對血管無顯著刺激反應(yīng)。
權(quán)利要求
1.注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑，其特征在于，以重量百分計，多烯磷脂酰膽堿為30％～60％，藥用輔料為40％～70％；所說的藥用輔料包括增溶劑和骨架支持劑；增溶劑可自去氧膽酸、去氧膽酸鈉、去氫膽酸鈉、膽酸鈉或甘氨膽酸中的一種；骨架支持劑選自甘露醇、山梨醇、尿素、葡萄糖、乳糖、蔗糖、右旋糖酐、聚乙烯吡咯酮或甘氨酸中的一種或其混合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑，其特征在于，骨架支持劑為甘露醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑，其特征在于，藥用輔料中，增溶劑的重量用量40～60％，骨架支持劑的重量用量為0～10％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑，其特征在于，制劑中添加抗氧化劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑，其特征在于，所說的抗氧化劑選自維生素C、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、叔丁基-4-羥基茴香醚(BHA)、2，6-二特丁基對甲酚(BHT)中的一種或其混合物，抗氧化劑用量為0.02～1.0％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑，其特征在于，制劑中添加防腐劑，所說的防腐劑選自苯甲醇、三氯叔丁醇、羥苯酯美、山梨酸中的一種或其混合物，防腐劑用量為0.5～1.0％。
7.根據(jù)權(quán)利要求1～6任一項所述的注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟將增溶劑溶解于水，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值為7.5～9.5，然后依次加入多烯磷脂酰膽堿、抗氧劑、防腐劑和骨架支持劑，攪拌使其溶解，再加水至規(guī)定體積，加入活性炭攪拌靜置30分鐘，過濾，灌裝，即得多烯磷脂酰膽堿凍干劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種注射用多烯磷脂酰膽堿凍干劑及其制備方法。以重量百分計，多烯磷脂酰膽堿為30％～60％，藥用輔料為40％～70％。由穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明，本發(fā)明的制劑具有良好的穩(wěn)定性，可明顯提高制劑的貯藏溫度，貯藏溫度可達25℃；并且方法簡單易行，制品質(zhì)量穩(wěn)定可靠。
文檔編號A61P1/16GK1820757SQ20051005745
公開日2006年8月23日 申請日期2005年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月21日
發(fā)明者張旭, 龍泉, 李靜, 賈琳 申請人:重慶藥友制藥有限責(zé)任公司