專利名稱：用于口服給藥的蛋白多肽類復(fù)合物納米粒及其制法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切地說它是一種用于口服給藥的蛋白多肽類復(fù)合物納米粒及其制法背景技術(shù)隨著生物技術(shù)的迅速發(fā)展，生物技術(shù)藥品(主要是蛋白多肽類藥物)越來越多，而且將成為未來藥品的主流之一。長期以來該類藥物臨床上主要以注射劑(水針和粉針)為主，但長期頻繁注射給藥會給病人帶來許多不便和痛苦。因此國內(nèi)外醫(yī)藥工作者一直致力于蛋白多肽類藥物的非注射給藥途徑的研究，其中口服給藥一直是最易為病人所接受的給藥途徑。目前蛋白多肽類藥物制劑面臨地主要問題是半衰期很短，而且穩(wěn)定性差；分子量較大，脂溶性小，難以通過胃腸道生物粘膜；易被消化道中的各種蛋白水解酶降解而失去生物活性。近年來出現(xiàn)了許多新型的蛋白多肽類藥物的載體，如脂質(zhì)體、乳劑、微球(囊)、納米粒(囊)等，其中以聚合物為基質(zhì)的納米載體越來越引起人們的關(guān)注。在人和動物小腸中存在著與免疫有關(guān)的特定組織區(qū)域，稱Peyer結(jié)，該區(qū)域占整個腸道粘膜的25％左右，其特點(diǎn)是能讓淋巴因子和一些顆粒進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)。研究表明在小腸Peyer結(jié)的囊泡中有一種M細(xì)胞，溶酶體相對較少，有利于完整大分子和顆粒的穿膜運(yùn)輸。納米粒由于粒徑較小，表面積增大，與生物膜的粘著性提高，進(jìn)入腸道后便會大量聚集于Peyer結(jié)，攜帶生物大分子以完整形式透過生物粘膜，從而提高口服藥物的生物利用度。
國內(nèi)外藥學(xué)工作者采用各種方法將水溶性多肽大分子載入納米材料以提高口服生物利用度，但仍沒有突破性進(jìn)展。眾多文獻(xiàn)報道納米尺度的脂質(zhì)體可以顯著提高胰島素的口服生物利用度(Degim Z.The effect ofvarious liposome formulations on insulin penetration across Caco-2 cellmonolayer.Life Sci.2004 Oct 22；75(23)2819-27.Spangler RS.Insulinadministration via liposomes.Diabetes Care.1990 Sep；13(9)911-22.)，但由于磷脂雙分子層膜的不穩(wěn)定性，導(dǎo)致藥物包裹率很低，且長期放置容易聚集和泄露；新近出現(xiàn)的以高熔點(diǎn)脂質(zhì)材料為載體的固體脂質(zhì)納米粒彌補(bǔ)了脂質(zhì)體的膜不穩(wěn)定性，但制備過程需要高溫、高剪切力等劇烈條件，且其疏水性使水溶性蛋白類藥物包裹率(＜60％)較低(Almeida.Peptide-loadedsolid lipid nanoparticles(SLN)influence of production parameters.Int JPharm.1997 April 28；149(2)255-6.)。中國專利CN1253018A、CN1562356A、和CN1579546均采用生物可降解的PLGA(乳酸-羥基乙酸共聚物)等高分子材料為載體制成包裹胰島素的聚合物納米粒，但仍存在藥物包裹率低及蛋白質(zhì)在聚合物材料中的長期不穩(wěn)定性問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的正是為了克服上述已有技術(shù)存在的若干缺陷，提供一種適合于蛋白質(zhì)、多肽類口服給藥的聚合物脂質(zhì)復(fù)合物納米粒及其制備方法。首先使水溶性多肽類藥物與兩親性的脂質(zhì)材料形成緊密的復(fù)合物，然后采用液相中乳化溶劑擴(kuò)散法將蛋白-脂質(zhì)復(fù)合物包裹入聚合物材料中，揮發(fā)溶劑后形成粒徑在10～500nm范圍的微粒。
所制得的納米粒對水溶性的多肽類藥物具有較高的包封率(＞90％)；兩親性脂質(zhì)材料與蛋白多肽類大分子形成復(fù)合物，脂溶性增加更有利于胃腸道粘膜的吸收，提高口服生物利用度；蛋白質(zhì)是以無水反膠束形式分散于聚合物微粒中，水分的去除更有利于蛋白質(zhì)分子在制備和長期貯存過程中的穩(wěn)定性。
本發(fā)明目的實(shí)現(xiàn)方案，即聚合物脂質(zhì)復(fù)合物納米粒的制備如下將一定量的蛋白多肽類藥物和兩親性脂質(zhì)材料共溶于非水溶劑I中，通過一定方式除去非水溶劑I形成蛋白-脂質(zhì)復(fù)合物。將復(fù)合物與適宜聚合物材料共溶于非水溶劑II中，攪拌至澄清后，傾入含有適量親水性乳化劑的水溶液中，隨著非水溶劑II不斷擴(kuò)散到水中，聚合物析出并聚結(jié)在蛋白-脂質(zhì)復(fù)合物的周圍形成納米級的球形顆粒。室溫下攪拌至溶劑揮發(fā)完全后，得到藍(lán)色乳光的納米混懸液。該混懸液可以進(jìn)一步通過冷凍或噴霧干燥制成粉末，以供壓片或添入膠囊。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是在兩親性脂質(zhì)材料的介導(dǎo)下可以將水溶性的蛋白多肽類藥物包裹進(jìn)高分子納米載體中，包封率大于90％，載藥量可達(dá)到3％～10％。載體粒徑10～500nm，有利于大分子的透粘膜吸收。制備過程溫和，不需要高溫和高速剪切力等劇烈條件，可保證多肽類藥物的生物活性。


圖1是實(shí)施例3中制得的含有胰島素的聚乳酸共沉脂質(zhì)復(fù)合物納米粒的電鏡照片；圖2是實(shí)施例4中制得的含有胰島素的丙烯酸樹脂共沉脂質(zhì)復(fù)合物納米粒的電鏡照片。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1減壓蒸發(fā)法制備胰島素-磷脂復(fù)合物取50mg豬胰島素粉末和1000mg注射用大豆卵磷脂溶于5ml酸性乙醇溶液中，400r/min攪拌至形成澄清溶液。將此溶液于35℃減壓蒸發(fā)2小時，然后通入氮?dú)庠俣雀稍?5分鐘，得到復(fù)合胰島素的金黃色磷脂膜。
實(shí)施例2冷凍干燥法制備胰島素-磷脂復(fù)合物取30mg胰島素和800mg注射用大豆卵磷脂共溶于5ml二甲亞砜中，400r/min攪拌至形成澄清溶液。將此溶液冷凍干燥12小時得到干燥的白色疏松粉末。
實(shí)施例3含有胰島素的聚乳酸共沉脂質(zhì)復(fù)合物納米粒的制備將分子量為10000的DL-聚乳酸500mg溶于5ml二氯甲烷-丙酮混合溶劑(兩者比例為1∶5)，攪拌均勻。取實(shí)施例1中制得的50mg含有胰島素的磷脂膜加入聚合物溶液中，攪拌至澄清。將上述溶液傾入到含有2％聚乙烯醇的水溶液中，400r/min室溫攪拌6h，揮干溶劑后，得到藍(lán)色乳光的納米混懸液。電鏡照片見圖1。測得包封率為92％。
實(shí)施例4含有胰島素的丙烯酸樹脂共沉脂質(zhì)復(fù)合物納米粒的制備將丙烯酸樹脂Eudragit S100 500mg溶于5ml無水乙醇中，攪拌均勻。取實(shí)施例2中制得的40mg胰島素-磷脂復(fù)合物凍干粉末加入聚合物溶液中，400r/min攪拌至澄清。將上述溶液傾入到含有0.5％泊洛沙姆407的水溶液中，2500r/min室溫攪拌6h，揮干溶劑后，得到藍(lán)色乳光的納米混懸液。電鏡照片見圖2。測得包封率為94％。
權(quán)利要求
1.用于口服給藥的蛋白多肽類復(fù)合物納米粒，其特征在于將水溶性蛋白多肽類藥物與兩親性的脂質(zhì)材料共溶于非水溶劑I中，除去溶劑形成蛋白-脂質(zhì)復(fù)合物，然后將復(fù)合物與適宜聚合物材料共溶于非水溶劑II中，采用液相中乳化溶劑擴(kuò)散法將該復(fù)合物包裹入聚合物材料中，揮發(fā)溶劑后形成粒徑在10～500nm范圍的微粒。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于口服給藥的蛋白多肽類復(fù)合物納米粒，其特征在于復(fù)合物形成所用的兩親性脂質(zhì)材料為大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酸等。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于口服給藥的蛋白多肽類復(fù)合物納米粒，其特征在于所用的聚合物材料為生物可降解型聚乳酸、聚己內(nèi)酯、乳酸和羥基乙酸、己內(nèi)酯的二元或三元共聚物、聚乳酸和聚乙二醇的嵌段共聚物、聚己內(nèi)酯和聚乙二醇的嵌段共聚物、乳酸和己內(nèi)酯及羥基乙酸的二元或三元共聚物與聚乙二醇的嵌段共聚物、聚富馬酸酐、聚原酸酯、聚氨基酸類；也可為非生物可降解型丙烯酸樹脂、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素酞酸酯、羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯、聚乙烯酰胺、聚苯乙烯等。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于口服給藥的蛋白多肽類復(fù)合物納米粒，其特征在于所包裹的蛋白多肽類藥物為胰島素、降鈣素、干擾素、紅細(xì)胞生成素、生長激素、生長激素釋放因子、降纖酶、尿激酶、蜂毒肽、蛛蛛肽、組織纖溶酶原激活劑、LHRU及其類似物、超氧化物歧化酶等。
5.一種如權(quán)利要求1所述的用于口服給藥的蛋白多肽類復(fù)合物納米粒的制備方法，其特征在于該納米粒是將蛋白多肽類藥物和兩親性脂質(zhì)材料共溶于非水溶劑I中，將此溶液于35℃減壓蒸發(fā)2小時，然后通入氮?dú)庠俣雀稍?5分鐘或?qū)⒋巳芤豪鋬龈稍?2小時得到干燥的白色疏松粉末，形成蛋白-脂質(zhì)復(fù)合物，然后將復(fù)合物與適宜聚合物材料共溶于非水溶劑II中，攪拌至澄清后，傾入含有適量親水性乳化劑的水溶液中，室溫攪拌，揮干溶劑，隨著非水溶劑II不斷擴(kuò)散到水中，聚合物析出并聚結(jié)在蛋白-脂質(zhì)復(fù)合物的周圍形成納米級的球形顆粒。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的用于口服給藥的蛋白多肽類復(fù)合物納米粒，其特征在于制備蛋白-脂質(zhì)復(fù)合物所用的非水溶劑I為乙醇、二甲亞砜、二甲基甲酰胺；非水溶劑II為乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿的單獨(dú)或混合溶劑；乳化劑為泊洛沙姆、聚乙烯醇、吐溫80、聚氧乙烯氫化蓖麻油、海藻酸鈉、明膠、蔗糖脂肪酸酯、十二烷基硫酸鈉。
全文摘要
本發(fā)明是一種用于口服給藥的蛋白多肽類復(fù)合物納米粒，包封率大于90％，載藥量可達(dá)到3％～10％。制備過程溫和，不需要高溫和高速剪切力等劇烈條件，可保證多肽類藥物的生物活性。將水溶性蛋白多肽類藥物與兩親性的脂質(zhì)材料共溶于非水溶劑I中，除去溶劑形成蛋白－脂質(zhì)復(fù)合物，然后將復(fù)合物與適宜聚合物材料共溶于非水溶劑II中，采用液相中乳化溶劑擴(kuò)散法將該復(fù)合物包裹入聚合物材料中，揮發(fā)溶劑后形成粒徑在10～500nm范圍的微粒。非水溶劑I為乙醇、二甲亞砜等；非水溶劑II為乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿的單獨(dú)或混合溶劑；乳化劑為泊洛沙姆、聚乙烯醇、聚氧乙烯氫化蓖麻油等。本發(fā)明適合制備成口服給藥制劑。
文檔編號A61P3/10GK1771912SQ20051011838
公開日2006年5月17日 申請日期2005年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月30日
發(fā)明者崔福德, 石凱 申請人:沈陽藥科大學(xué)