專利名稱：一種無(wú)機(jī)、有機(jī)復(fù)合蛋白、多肽類藥物緩釋微球及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種新型的無(wú)機(jī)、有機(jī)復(fù)合蛋白、多肽類藥物緩釋微球及其制備，主要涉及醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
隨著生物技術(shù)的高速發(fā)展，多肽、蛋白質(zhì)類藥物不斷涌現(xiàn)。目前已有35種重要治療藥物上市，生物技術(shù)與生物制藥企業(yè)的發(fā)展也日益全球化。生物技術(shù)藥物研究的重點(diǎn)是應(yīng)用DNA重組技術(shù)開發(fā)可應(yīng)用于臨床的多肽、蛋白、酶、激素、疫苗、細(xì)胞生長(zhǎng)因子及單克隆抗體等。但這些藥物在胃腸道內(nèi)穩(wěn)定性差，易變性，易被消化酶降解，不易吸收。影響了它們口服給藥的生物利用度，目前蛋白質(zhì)類藥物大多采用注射方式給藥，因此如何減少注射次數(shù)/提高藥效成為蛋白、多肽類藥物注射給藥面臨的一個(gè)主要問(wèn)題。目前多肽、蛋白質(zhì)類藥物常用的劑型是注射用溶液劑或凍干粉針劑，多肽類藥物在血液中的半衰期一般很短，靜脈注射后很快就被清除或降解，因此需要經(jīng)常給藥，給病人帶來(lái)較多不便。因此，開展多肽、蛋白質(zhì)類生物大分子藥物緩擇或控釋制劑的研究已成為該類藥物制劑研究的熱點(diǎn)。目前研究最多的是微粒遞釋系統(tǒng)，即采用生物可降解聚合物為囊材包裹多肽、蛋白質(zhì)藥物制成微球制劑，使其在體內(nèi)達(dá)到緩擇或控程目的。聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)以其良好的生物相容性及生物降解性被美國(guó)FDA批準(zhǔn)為藥用高分子材料?，F(xiàn)已有數(shù)個(gè)多肽類藥物長(zhǎng)效注射微球產(chǎn)品批準(zhǔn)上市，如曲普瑞林、丙氨瑞林、醋酸戈舍瑞林、奧曲肽此類微球制劑能使藥物延長(zhǎng)釋放達(dá)1個(gè)月，甚至3個(gè)月。因此，以生物可降解聚合物為囊材的微囊化技術(shù)是開發(fā)研制多肽緩、控釋劑型的有效途徑，頗具發(fā)展前景。目前國(guó)內(nèi)、外將蛋白、多肽類藥物制成緩釋微球的研究報(bào)道較多(Manish Diwan et al,International Journal of Pharmaceutics, 252(1-2), 111-122 ；Jintian He et al, International Journal of Pharmaceutics, 416(1)，69—76;)又例如在中國(guó)發(fā)明專禾lj(公開號(hào)CN101536984A)-注射用重組人血管內(nèi)皮抑制素多孔緩釋微球及其制備方法中公開了一種以可生物降解乳酸-羥基乙酸聚合物為基質(zhì)的，包括重組人血管內(nèi)皮抑制素和致孔劑的注射用多孔緩釋微球及其制備方法，該方法可以使重組人血管內(nèi)皮抑制素在體內(nèi)緩慢釋放，并且可以通過(guò)致孔劑造成的表面多孔結(jié)構(gòu)達(dá)到藥物的完全釋放目的。但由于微球釋放過(guò)程中聚乳酸類材料降解產(chǎn)生的低PH值微觀環(huán)境，使蛋白類藥物降解、失活。能夠成功保持蛋白類藥物在微球制備工藝及體外釋放過(guò)程中的生物學(xué)活性并進(jìn)行體內(nèi)研究的報(bào)道很少，目前唯一上市的蛋白類緩釋注射微球是美國(guó)Genentech，Inc公司采用低溫噴霧提取法開發(fā)的重組人生長(zhǎng)激素PLGA微球(Nutropin Depot )。然而使用這種方法需要相應(yīng)的設(shè)備，樣品需要量大，成本高，難于推廣，并且這種方法只能改善保持蛋白在緩釋微球制備過(guò)程中活性的保持，還不能實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期釋放過(guò)程的蛋白的活性保持，美國(guó)Genentech，Inc 公司已經(jīng)于2004年停止該產(chǎn)品的生產(chǎn)和銷售。目前國(guó)內(nèi)、外也有向聚乳酸類生物降解微球中加上Mg(OH)2等堿性顆粒的研究。有研究發(fā)現(xiàn)在聚乳酸類生物降解微球中加上Mg(OH)2等堿性顆粒.模型藥物BSA的聚集情況得到改善，蛋白失活情況得到了改善(Zhu G et al,Pharm Res. 2000 Mar; 17(3) :351-357 ； Kang J et al,Biomaterials. 2002 Jan； 23 (1) 239-45.)。但在常規(guī)向 PLGA 生物降解微球中加入Mg(OH)2顆粒的制備方法中Mg(OH)2不能全程中和PLGA的降解產(chǎn)物乳酸，只能在微球釋放前期起到維持蛋白類藥物穩(wěn)定的作用，在微球釋放的中后期，蛋白類藥物還是會(huì)由于處在低PH值的環(huán)境中而易于降解、失活。并且由于不同型號(hào)的聚乳酸類生物材料具有不同的降解速度，常規(guī)加入Mg(OH)2顆粒的方法，不能同步中和不同型號(hào)的聚乳酸類生物材料的降解所產(chǎn)生的低PH微觀環(huán)境。這樣常規(guī)向PLGA生物降解微球中加入Mg(OH)2顆粒的制備方法還是難于保持蛋白、多肽類藥物在儲(chǔ)存和釋放過(guò)程中的穩(wěn)定性。生物活性玻璃(Bioglass)是20世紀(jì)60年代由Larry Hench教授發(fā)明的基于 Na2O-CaO-SiO2為主體的透明生物活性材料，在其植入體內(nèi)后，接觸體液后，可以在材料界面誘發(fā)特殊的生理響應(yīng)，緩慢形成具有堿性基團(tuán)的碳酸羥基磷灰石(速率受Na2O-CaO-S^2 比例影響)，可引起組織間特殊生物反應(yīng)從而導(dǎo)致移植材料與骨組織之間的成骨，能夠幫助骨組織以更快的速度再生和修復(fù)。經(jīng)過(guò)20多年的前期基礎(chǔ)及性能的完善，在90年代經(jīng)美國(guó)食品及藥品監(jiān)督管理局(FDA)正式批準(zhǔn)應(yīng)用于骨、齒科臨床，用于修復(fù)因各種原因?qū)е碌墓侨睋p，并取得良好的治療效果。目前國(guó)內(nèi)、外生物活性玻璃作為一種重要的醫(yī)學(xué)材料已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。但目前尚未有將生物活性玻璃應(yīng)用于蛋白類緩釋注射微球制備的研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為了提高蛋白、多肽類藥物在儲(chǔ)存和釋放過(guò)程中的穩(wěn)定性采用的技術(shù)方案是采用乳化溶劑揮干的方法制備生物活性玻璃復(fù)合的蛋白多肽類聚乳酸類緩釋微球體系。并在傳統(tǒng)微球制備方法的基礎(chǔ)上，添加生物活性玻璃，通過(guò)調(diào)整生物活性玻璃的組成的比例，達(dá)到與PLGA近似于同步的降解速率，通過(guò)碳酸羥基磷灰石的緩慢形成來(lái)中和PLGA緩慢降解過(guò)程中產(chǎn)生的低PH，從而同步提高蛋白、多肽類藥物在微球儲(chǔ)存和釋放過(guò)程中的穩(wěn)定性。本發(fā)明主要包括主藥(蛋白或多肽類藥物)、生物活性玻璃、表面活性劑，聚乳酸類生物醫(yī)學(xué)材料等其它輔料組成。其中按重量份計(jì)，蛋白或多肽類藥物5 30份，聚乳酸類生物降解材料30 90份，生物活性玻璃5 50份。所述的蛋白、多肽類藥物，包括但不局限于以下蛋白、多肽類藥物溶菌酶、牛胰島素、人胰島素、骨膠原形成蛋白(BMP)，血管生長(zhǎng)因子(VEGF)、醋酸奧曲肽、降鈣素、重組人生長(zhǎng)激素、醋酸亮丙瑞林、重組人干擾素等。本發(fā)明所選用聚乳酸類生物醫(yī)學(xué)材料作為緩釋材料，包括聚乳酸(PLA)或者 PLGA0表面活性劑選自吐溫40、60，80或者司盤40、60，80。生物活性玻璃的SiO2: CaO: P2O5摩爾比可在26704 70 15 15之間； 本專利還提供制備上述蛋白、多肽類藥物緩釋微球的制劑的方法，包括如下步驟
(1)生物活性玻璃的制備 1)取一定量的濃硝酸與乙醇混合均勻，得到溶液1 ；2)溶液1加入正硅酸乙酯，IOOOrmp預(yù)水解30min，得到溶液2；
3)向溶液2中再加入P2O5，IOOOrmp攪拌30min,得到溶液3；
4)向溶液3中加入四水硝酸鈣，IOOOrmp攪拌lh，充分溶解形成清澈溶膠；
5)將步驟4)中制備好的溶膠倒入燒杯，置60°C烘箱中72h，形成凝膠；
6)將步驟5)中得到的凝膠在130°C干燥72h；
7)將步驟6)所得凝膠球磨、篩分，并將所得的干凝膠粉在700°C煅燒得到生物活性； (2)蛋白、多肽緩釋微球的制備
1)將蛋白、多肽類藥物溶解于水或者緩沖液中，備用；
2)將生物活性玻璃加入到步驟1的水相中，渦旋混勻，作為內(nèi)水相；
3)將聚乳酸類生物材料用有機(jī)溶劑溶解，并加上SpanSO混勻作為有機(jī)相，備用；所述的有機(jī)溶劑包括二氯甲烷、丙酮或乙酸乙酯等；
4 )將步驟2)的內(nèi)水相加入到步驟3)的有機(jī)相中，使內(nèi)水相和有機(jī)相混勻，然后在 2000rpm磁力攪拌下得到初乳；
5)將上述初乳，加入到一定量的l%-^)(w/v)的聚乙烯醇水溶液中，在4000-6000rpm 的轉(zhuǎn)速下高速攪拌2min，得到復(fù)乳；
6)將復(fù)乳加入到0.1%-0. 3% (w/v)的聚乙烯醇溶液中，在20-40° C的溫度下，在 2000-4000rpm的轉(zhuǎn)速下攪拌3_5小時(shí)后揮干有機(jī)溶劑，離心收集微球，用注射用水洗滌，冷凍干燥，制得蛋白、多肽類藥物緩釋微球。對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在制備生物活性玻璃時(shí)，能根據(jù)原料的量來(lái)調(diào)節(jié)生物活性玻璃中SiO2: CaO: P2O5的比例。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是在采用乳化溶劑揮干的方法制備蛋白類、多肽類藥物緩釋微球制備過(guò)程中，復(fù)合無(wú)機(jī)生物醫(yī)學(xué)材料-生物活性玻璃，通過(guò)調(diào)整生物活性玻璃的組成的比例，達(dá)到與聚乳酸類生物降解材料近似于同步的降解速率，通過(guò)碳酸羥基磷灰石的緩慢形成來(lái)中和聚乳酸類生物降解材料緩慢降解過(guò)程中產(chǎn)生的低PH，從而同步提高蛋白、多肽類藥物在微球儲(chǔ)存和釋放過(guò)程中的穩(wěn)定性。


圖1是根據(jù)實(shí)施例1制備的溶菌酶無(wú)機(jī)、有機(jī)復(fù)合緩釋微球的體外釋放曲線圖。圖2是根據(jù)實(shí)施例1制備的溶菌酶無(wú)機(jī)、有機(jī)復(fù)合緩釋微球的體外釋放過(guò)程中的活性保持測(cè)定圖。圖3是根據(jù)實(shí)施例1制備的重組人干擾素?zé)o機(jī)、有機(jī)復(fù)合緩釋微球的體外釋放過(guò)程中樣品的UV⑶圖譜。圖4是根據(jù)實(shí)施例1制備的重組人干擾素?zé)o機(jī)、有機(jī)復(fù)合緩釋微球的體外釋放過(guò)程中樣品的FIlR圖譜。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明通過(guò)以下實(shí)施實(shí)例作更詳細(xì)的描述，但不能將其解釋為限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例一1溶菌酶無(wú)機(jī)、有機(jī)復(fù)合緩釋微球的制備
1.1生物活性玻璃的制備取7ml濃硝酸，加入53g乙醇，所得溶液中加入10. 84g正硅酸乙酯，IOOOrmp預(yù)水解 30min，再加入P2O5L 14g，IOOOrmp攪拌30min，加入33g四水硝酸鈣，IOOOrmp攪拌lh，充分溶解形成清澈凝膠。將制備好的溶膠倒入燒杯，置60°C烘箱中72h，形成凝膠，然后在130°C 干燥72h，將凝膠球磨、篩分，并將所得的干凝膠粉在700°C煅燒池，粉碎得生物活性玻璃微粉。該步驟制備后生物活性玻璃的組成和成分比例為；SiO2: CaO: P2O5摩爾比 =26:70:4
1. 2緩釋微球的制備
精密精密稱取20mg溶菌酶溶于Iml蒸餾水中，配制成20mg/ml的溶菌酶溶液，精密稱取50mgPLGA和量取120 μ L司盤80加入到Iml CH2Cl2，加入100 μ L溶菌酶溶液，渦旋30 秒，將所得溶液和30mg生物玻璃加入到IOml的10%(w/v)的PVA溶液中，渦旋30秒，再加入到90ml 0. 3%(w/v)的PVA溶液中，磁力攪拌池。將所得溶液離心，冷凍干燥Mh，得緩釋微球粉末。2溶菌酶無(wú)機(jī)、有機(jī)復(fù)合緩釋微球的質(zhì)量評(píng)價(jià) 2.1包封率，含量，收率的計(jì)算與平均粒徑的考察
精密稱取含藥微球約10mg，加入5. Oml 0. lmol/L NaOH(含有0.5% SDS)，37 0C水浴振蕩Mh，使微球完全溶解，鹽酸調(diào)節(jié)pH至中性，取上清液采用BCA Kit法進(jìn)行蛋白含量測(cè)定，并計(jì)算載藥量和包封率。其中藥物含量為1. 14%(w/w)。微球產(chǎn)率為90. 2%(w/w)。微球體積平均粒徑為80 μ m。2.2溶出度的測(cè)定與溶出過(guò)程中穩(wěn)定性的考察
精密稱取含藥微球20mg置于5ml 10 mmol/L pH7. 4緩沖液(含0. 02%疊氮鈉作為抑菌劑，0. 02% F-68潤(rùn)濕劑)作為釋放介質(zhì)，置于恒溫水浴搖床中，在100 rpm振蕩速度、37 °C±0.5 °C溫度條件下進(jìn)行微球的體外釋放度測(cè)定。用BCA Kit法測(cè)定上清液中蛋白的濃度，計(jì)算累計(jì)釋藥百分?jǐn)?shù)。并同時(shí)取上清液作為供試品溶液，照溶菌酶效價(jià)測(cè)定項(xiàng)下的方法(衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)二部，第六冊(cè))，依法測(cè)定上清液中溶菌酶的活性。結(jié)果見(jiàn)附圖1 2。實(shí)施例二
1重組人干擾素?zé)o機(jī)、有機(jī)復(fù)合緩釋微球的制備
1. 1生物活性玻璃的制備取7ml濃硝酸，加入53g乙醇，所得溶液中加入29. 17g正硅酸乙酯，IOOOrmp預(yù)水解 30min，再加入 P2O5 4. 26g, IOOOrmp 攪拌 30min,加入 7. 08g 四水硝酸鈣，IOOOrmp 攪拌 Ih, 充分溶解形成清澈凝膠。將制備好的溶膠倒入燒杯，置60°C烘箱中72h，形成凝膠，然后在 130°C干燥72h，將凝膠球磨、篩分，并將所得的干凝膠粉在70(TC煅燒池，粉碎得生物活性玻璃微粉。該步驟制備后生物活性玻璃的組成和成分比例為SiO2 CaO P2O5摩爾比 =70:15:15
1. 2緩釋微球的制備
精密精密稱取ang重組人干擾素溶于Iml蒸餾水中，配制成ang/ml的重組人干擾
6素溶液，精密稱取50mgPLA和量取100 μ L司盤80加入到Iml CH2Cl2,加入100 μ L重組人干擾素溶液，渦旋30秒，將所得溶液和40mg生物玻璃加入到IOml的10%(w/v)的PVA溶液中，渦旋30秒，再加入到90ml 0. 3%(w/v)的PVA溶液中，磁力攪拌3h。將所得溶液離心，冷凍干燥Mh，得緩釋微球粉末。2重組人干擾素?zé)o機(jī)、有機(jī)復(fù)合緩釋微球的質(zhì)量評(píng)價(jià)
2. 1微球的粒徑分布采用激光光散射儀(CoulterL S-230 Particle Size Analyzer, Miami, USA)測(cè)定微球平均粒徑及粒徑分布。2. 2微球表面形態(tài)學(xué)觀察微球的表面形態(tài)使用掃描電子顯微鏡進(jìn)行觀察。2.3微球的載藥量和包封率的測(cè)定精密稱取含藥微球約10mg，加入5. Oml 0. lmol/L NaOH (含有0. 5%(w/v) SDS)，37冗水浴振蕩Mh，使微球完全溶解，鹽酸調(diào)節(jié)pH 至中性，取上清液采用BCA Kit法進(jìn)行蛋白含量測(cè)定，并計(jì)算載藥量和包封率。2.4微球的體外藥物釋放精密稱取含藥微球20mg置于5ml 10 mmol/L pH7.4緩沖液(含0. 02%疊氮鈉作為抑菌劑，0. 02% F-68潤(rùn)濕劑)作為釋放介質(zhì)，置于恒溫水浴搖床中，在100 rpm振蕩速度、37 °C±0.5 ° C溫度條件下進(jìn)行微球的體外釋放度測(cè)定。用BCA Kit法測(cè)定上清液中重組人干擾素的濃度，計(jì)算累計(jì)釋藥百分?jǐn)?shù)。采用FIlR和UV⑶考重組人干擾素的2級(jí)與3級(jí)空間立體結(jié)構(gòu)的保持。結(jié)果見(jiàn)附圖3 4。實(shí)施例三與實(shí)施例一基本相同，不同之處在于生物玻璃的制備如下
1)取7ml濃硝酸，加入53g乙醇；
2)所得溶液中加入24.17g正硅酸乙酯，IOOOrmp預(yù)水解30min ；
3)再加入P2O5L 7g，IOOOrmp 攪拌 30min ；
4)加入17g四水硝酸鈣，IOOOrmp攪拌lh，充分溶解形成清澈凝膠；
5)將制備好的溶膠倒入燒杯，置60°C烘箱中72h，形成凝膠；
6)然后在130°C干燥72h；
7)將凝膠球磨、篩分，并將所得的干凝膠粉在700°C煅燒池；得到SiO2:CaO: P2O5摩爾比為58:36:6的生物玻璃。如上所述，本發(fā)明的包含蛋白、多肽類藥物的的無(wú)機(jī)、有機(jī)物復(fù)合緩釋微球可以實(shí)現(xiàn)蛋白、多肽類藥物在儲(chǔ)存與釋放過(guò)程中的活性保持。雖然已經(jīng)根據(jù)上述特定的實(shí)施方案敘述了本發(fā)明，但應(yīng)該承認(rèn)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可能對(duì)本發(fā)明做出各種修飾和轉(zhuǎn)變，而這些修飾和轉(zhuǎn)變同樣屬于所附權(quán)利要求書所定義的本發(fā)明的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種無(wú)機(jī)、有機(jī)物復(fù)合的蛋白、多肽類藥物緩釋微球，其特征在于，按重量份計(jì)，包括蛋白或多肽類藥物5 30份，聚乳酸類生物降解材料30 90份，生物活性玻璃5 50 份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩釋微球，其特征在于，所述蛋白或多肽類藥物是溶菌酶、牛胰島素、人胰島素、骨膠原形成蛋白，血管生長(zhǎng)因子、醋酸奧曲肽、降鈣素、重組人生長(zhǎng)激素、 醋酸亮丙瑞林或重組人干擾素。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩釋微球，其特征在于，所述生物活性玻璃的組成成分為 SiO2 ； CaO 和 P2O5 ；SiO2: CaO: P2O5 摩爾比在洸70 4 70 15 15。
4.一種無(wú)機(jī)、有機(jī)物復(fù)合的蛋白、多肽類藥物緩釋微球的制備方法，包括以下步驟(1)生物活性玻璃制備1)取一定量的濃硝酸與乙醇混合均勻，得到溶液1；2)溶液1加入正硅酸乙酯，IOOOrmp預(yù)水解30min，得到溶液2；3)向溶液2中再加入P2O5，IOOOrmp攪拌30min,得到溶液3；4)向溶液3中加入四水硝酸鈣，IOOOrmp攪拌lh，充分溶解形成清澈溶膠；5)將步驟4中制備好的溶膠倒入燒杯，置60°C烘箱中72h，形成凝膠；6)將步驟5)中得到的凝膠在130°C干燥72h；7)將步驟6)所得凝膠球磨、篩分，并將所得的干凝膠粉在700°C煅燒得到生物活性；(2)蛋白、多肽緩釋微球的制備1)將蛋白、多肽類藥物溶解于水或者緩沖液中，備用；2)將生物活性玻璃加入到步驟1)的水相中，渦旋混勻，作為內(nèi)水相；3)將聚乳酸類生物材料用有機(jī)溶劑溶解，并加上司盤80混勻作為有機(jī)相，備用；4 )將步驟2)的內(nèi)水相加入到步驟3)的有機(jī)相中，使內(nèi)水相和有機(jī)相混勻，然后在 2000rpm磁力攪拌下得到初乳；5)將上述初乳，加入到一定量的的聚乙烯醇水溶液中，在 4000-6000rpm的轉(zhuǎn)速下高速攪拌2min，得到復(fù)乳；6)將復(fù)乳加入到0.1%-0. 3%(w/v)的聚乙烯醇溶液中，在20-40° C的溫度下，在 2000-4000rpm的轉(zhuǎn)速下攪拌3_5小時(shí)后揮干有機(jī)溶劑，離心收集微球，用注射用水洗滌，冷凍干燥，制得蛋白、多肽類藥物緩釋微球。
5.根據(jù)權(quán)利要求書4所述的制備方法，其特征在于步驟3)中所述的有機(jī)溶劑是二氯甲烷、丙酮或乙酸乙酯。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新型的無(wú)機(jī)、有機(jī)物復(fù)合的蛋白、多肽類藥物緩釋微球及其制備方法，屬于藥學(xué)領(lǐng)域。所述緩釋微球主要由聚乳酸類生物降解材料、生物玻璃和主藥組成。按重量份計(jì)，包括蛋白或多肽類藥物5～30份，聚乳酸類生物降解材料30～90份，生物活性玻璃5～50份。本發(fā)明采用乳化溶劑揮干的方法制備蛋白類、多肽類藥物緩釋微球制備過(guò)程中，復(fù)合無(wú)機(jī)生物醫(yī)學(xué)材料-生物活性玻璃，通過(guò)調(diào)整生物活性玻璃的組成的比例，達(dá)到與聚乳酸類生物降解材料近似于同步的降解速率，通過(guò)碳酸羥基磷灰石的緩慢形成來(lái)中和聚乳酸類生物降解材料緩慢降解過(guò)程中產(chǎn)生的低pH，從而同步提高蛋白、多肽類藥物在微球儲(chǔ)存和釋放過(guò)程中的穩(wěn)定性。
文檔編號(hào)A61K47/34GK102525940SQ20111038938
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2011年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月30日
發(fā)明者劉宏飛, 師雙雙, 趙欣 申請(qǐng)人:江蘇大學(xué)