專利名稱：5,10－亞甲基四氫葉酸在癌癥治療中的用途的制作方法
本申請(qǐng)要求以下美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)2004年4月2日提交的序號(hào)為60/558,889的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)，題目為“用5，10-亞甲基四氫葉酸治療癌癥的方法”的，指定Mark Cantwell和Joan Robbins為發(fā)明人；2004年11月4日提交的序號(hào)為60/625,479的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)，題目為“用5，10-亞甲基四氫葉酸治療癌癥的方法”指定Mark Cantwell和JoanRobbins為發(fā)明人；2005年3月4日提交的序號(hào)為60/658,745的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)，題目為“用5，10-亞甲基四氫葉酸聯(lián)合治療癌癥的方法”，指定Mark Cantwell和Joan Robbins為發(fā)明人。
背景技術(shù)：
癌癥是公共健康關(guān)注的主要問(wèn)題。在美國(guó)，每年僅結(jié)腸直腸癌引起大約50,000人死亡。每年在診斷出的近130,000例結(jié)腸直腸癌中，幾乎一半的患者出現(xiàn)或者發(fā)展為腫瘤轉(zhuǎn)移性疾病，對(duì)此化學(xué)治療是唯一的治療方法。迫切尋求新的有效的基于藥物的療法來(lái)不僅治療結(jié)腸直腸癌，而且治療其它癌癥，例如乳腺癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、膀胱癌、子宮頸癌、頭頸癌、肺癌、卵巢癌和前列腺癌。
抗癌藥物5-氟尿嘧啶(5-FU)在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為胸苷酸合成酶(TS)(核酸生物合成所必需的酶)的抑制劑，F(xiàn)dUMP。5-FU通常用于治療癌癥，如結(jié)腸直腸癌和乳腺癌、以及頭頸癌、胰腺癌、胃癌和非小細(xì)胞肺癌。5-FU通常與亞葉酸(FA，甲酰四氫葉酸(leucovorin))一起使用，亞葉酸在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)化為還原形式的葉酸(5，10-亞甲基四氫葉酸或5，10-亞甲基四氫葉酸的聚谷氨酸鹽)，該還原形式的葉酸是胸苷酸合成酶的輔因子。人們發(fā)現(xiàn)與5-FU的單獨(dú)應(yīng)用相比，5-FU與甲酰四氫葉酸的組合具有增加的抗腫瘤作用。5-FU和5-FU與甲酰四氫葉酸的組合可與其它抗癌劑聯(lián)合使用，以改進(jìn)患有再發(fā)性結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、胃癌或其它癌癥患者的存活能力。
5，10-亞甲基四氫葉酸(“5，10-CH2-THFA”)是還原的葉酸，其直接或者在轉(zhuǎn)化為其聚谷氨酸鹽后，作為胸苷酸合成酶的輔因子起作用與5-FU相關(guān)的毒性包括口腔炎、粘膜炎、胃腸道癥狀和血液毒性，特別是中性粒細(xì)胞減少、血小板減少和白細(xì)胞減少。毒性可對(duì)患者可利用的治療產(chǎn)生限制，或者通過(guò)對(duì)抗癌劑的劑量進(jìn)行限制，或者通過(guò)對(duì)癌癥患者治療中臨床醫(yī)師可利用的手段進(jìn)行限制。因此亟需開(kāi)發(fā)具有減少的毒性并有效地延長(zhǎng)患者存活能力的改進(jìn)的抗癌藥物方案。
發(fā)明的簡(jiǎn)要概述本發(fā)明提供了5，10-亞甲基四氫葉酸(“5，10-CH2-THFA”)在癌癥治療中的新用途，與當(dāng)前的形式相比，其為患者提供了減少的毒性和更高的有效性。
本發(fā)明是根據(jù)以下驚人的結(jié)果5，10-CH2-THFA在增加5-FU在減少腫瘤生長(zhǎng)率并增加存活能力方面的有效性的同時(shí)，還減少5-FU對(duì)患者的毒性。如本發(fā)明所公開(kāi)的，與單獨(dú)用5-FU或者用5-FU與甲酰四氫葉酸(亞葉酸；FA)聯(lián)合治療相比，用5，10-CH2-THFA和5-FU的治療減少腫瘤生長(zhǎng)率并增加患有腫瘤的動(dòng)物的存活能力，同時(shí)證實(shí)比上述兩種治療方法的任一種方法具有更低的毒性。
本發(fā)明還根據(jù)以下發(fā)現(xiàn)與單一形式的治療或包括使用5-FU和甲酰四氫葉酸的可選擇的聯(lián)合治療相比，用5，10-CH2-THFA和5-FU與另外的抗癌藥物治療患有腫瘤的動(dòng)物也可改進(jìn)結(jié)果。
一方面，本發(fā)明提供了用包括5-氟尿嘧啶(5-FU)或5-FU的類似物或前藥；5，10-CH2-THFA；以及一種或多種另外的抗癌藥物的組合化學(xué)療法治療癌癥患者的方法。所述的一種或多種另外的抗癌藥物可以是一種或多種任何類型的化學(xué)治療劑，包括但不限于包括特異性結(jié)合成員、蛋白、核酸、脂類、類固醇、大分子、小分子或金屬的化學(xué)治療劑。所述的一種或多種抗癌藥物可包括一種或多種烷化劑、抗代謝物、有絲分裂抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、微管破壞藥物、核酸合成抑制劑、激酶抑制劑、激素阻斷藥物、蛋白體抑制劑、血管生成抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎藥物、細(xì)胞因子、細(xì)胞因子抑制劑、受體-結(jié)合藥物或5-FU調(diào)節(jié)劑。所述方法包括以5-FU或其類似物或其前藥、5，10-CH2-THFA和至少一種另外的抗癌藥物對(duì)患有癌癥的患者給藥。
本發(fā)明的第二方面提供了治療癌癥的組合物，所述組合物包含5-FU或其類似物或其前藥、5，10-CH2-THFA和至少一種另外的抗癌藥物。所述的一種或多種另外的抗癌藥物可以是一種或多種任何類型的化學(xué)治療劑，包括但不限于包括特異性結(jié)合成員、蛋白、核酸、脂類、類固醇、大分子、小分子或金屬的化學(xué)治療劑。所述的一種或多種抗癌藥物可包括一種或多種烷化劑、抗代謝物、有絲分裂抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、微管破壞藥物、核酸生物合成抑制劑、激酶抑制劑、激素阻斷藥物、蛋白體抑制劑、血管生成抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎藥物、細(xì)胞因子、細(xì)胞因子抑制劑、受體-結(jié)合藥物或5-FU調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明的多藥組合物可以一種或多種制劑的形式提供。
本發(fā)明的第三方面為5，10-CH2-THFA與5-FU或其類似物或其前藥和至少一種另外的化學(xué)治療劑的組合在制備用于治療癌癥的組合物中的用途，其中所述至少一種另外的化學(xué)治療劑選自烷化劑、抗代謝物、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、微管破壞藥物、核酸生物合成抑制劑、激酶抑制劑、激素阻斷藥物、蛋白體抑制劑、血管生成抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎藥物、細(xì)胞因子、細(xì)胞因子抑制劑、受體-結(jié)合藥物或5-FU調(diào)節(jié)劑。所述用途包括將所述藥物組合物制造為以單一制劑或多種制劑。
在第四方面中，本發(fā)明提供了通過(guò)同時(shí)以5，10-CH2-THFA給藥來(lái)減少癌癥藥物治療方案對(duì)癌癥患者的毒性的方法，該藥物治療方案包括以5-FU或5-FU的類似物或前藥對(duì)癌癥患者給藥。
在此方面的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括通過(guò)同時(shí)以5，10-CH2-THFA給藥來(lái)減少諸如但不限于卡培他濱的5-FU的類似物或前藥的毒性的方法。
在此方面的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括通過(guò)同時(shí)以5，10-CH2-THFA給藥來(lái)減少抗癌治療毒性的方法，所述抗癌治療包括以5-FU或5-FU的類似物或前藥和另外的抗癌藥物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)對(duì)癌癥患者給藥。
本發(fā)明的第五方面為減少包括5-FU或5-FU的類似物或前藥和甲酰四氫葉酸的抗癌藥物治療方案對(duì)患者的毒性的方法，所述方法包括用5，10-5，10-CH2-THFA代替在該抗癌藥物方案中的甲酰四氫葉酸。
在此方面的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括減少抗癌藥物方案的毒性的方法，該抗癌藥物方案包括諸如但不限于卡培他濱的5-FU的類似物或前藥和甲酰四氫葉酸，其中該方案的毒性通過(guò)用5，10-CH2-THFA代替該方案中的甲酰四氫葉酸而減少。
在此方面的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括減少抗癌治療對(duì)癌癥患者的毒性的方法，該抗癌治療包括5-FU或5-FU的類似物或前藥、甲酰四氫葉酸和至少一種另外的抗癌藥物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)，這通過(guò)用5，10-5，10-CH2-THFA代替在所述藥物方案中的甲酰四氫葉酸而實(shí)現(xiàn)。
在第六方面中，本發(fā)明提供了通過(guò)同時(shí)以5，10-5，10-CH2-THFA給藥來(lái)增加癌癥藥物治療方案的有效性的方法，該癌癥藥物治療方案包括以5-FU或5-FU的類似物或前藥對(duì)癌癥患者給藥。
在此方面的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括通過(guò)同時(shí)以5，10-CH2-THFA給藥來(lái)增加諸如但不限于卡培他濱的5-FU類似物或前藥的有效性的方法。
在此方面的其它優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括通過(guò)同時(shí)以5，10-CH2-THFA給藥來(lái)增加抗癌治療的有效性的方法，該抗癌治療包括以5-FU或5-FU的類似物或前藥和另外的抗癌藥物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)對(duì)癌癥患者給藥。
本發(fā)明的第七方面為增加抗癌藥物治療方案對(duì)患者的有效性的方法，所述抗癌藥物治療方案包括5-FU或5-FU的類似物或前藥和甲酰四氫葉酸，所述方法包括用5，10-5，10-CH2-THFA代替所述抗癌藥物方案中的甲酰四氫葉酸。
在此方面的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括增加抗癌藥物方案的有效性的方法，所述抗癌藥物方案包括諸如但不限于卡培他濱的5-FU類似物或前藥和甲酰四氫葉酸，其中通過(guò)用5，10-CH2-THFA代替該方案中的甲酰四氫葉酸來(lái)增加該方案的有效性。
在此方面的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括增加抗癌治療對(duì)癌癥患者的有效性的方法，所述抗癌治療包含5-FU或5-FU的類似物或前藥、甲酰四氫葉酸和至少一種另外的抗癌藥物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)，這通過(guò)用5，10-CH2-THFA代替所述藥物方案中的甲酰四氫葉酸而實(shí)現(xiàn)。
在相關(guān)方面，本發(fā)明提供了增加包括5-FU和甲酰四氫葉酸的抗癌藥物方案中的5-FU或5-FU的類似物或前藥的劑量的方法。所述方法包括獲得包括5-FU或5-FU的類似物或前藥和甲酰四氫葉酸的抗癌藥物方案；用5，10-5，10-CH2-THFA代替所述抗癌藥物方案中的甲酰四氫葉酸；以及增加該抗癌藥物方案中的5-FU或5-FU的類似物或前藥的劑量。在這一方面，用5，10-CH2-THFA代替所述抗癌中的甲酰四氫葉酸且同時(shí)增加5-FU的劑量可增加治療的有效性，且可能不增加毒性。
在另一相關(guān)方面，本發(fā)明提供了增加抗癌藥物方案中的另外的抗癌藥物的劑量的方法，所述抗癌藥物方案包括5-FU或5-FU的類似物或前藥、甲酰四氫葉酸和另外的抗癌藥物。所述方法包括獲得包括5-FU或5-FU的類似物或前藥、甲酰四氫葉酸和至少一種另外的抗癌藥物(其不同于5-FU或5-FU的類似物或前藥或胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)的抗癌藥物方案；用5，10-CH2-THFA代替所述抗癌藥物方案中的甲酰四氫葉酸；以及增加該抗癌藥物方案中的一種或多種另外的抗癌藥物的劑量。在這一方面，用5，10-CH2-THFA代替所述抗癌中的甲酰四氫葉酸且同時(shí)增加在該方案中使用的另外的抗癌藥物的劑量可增加治療的有效性，且可能不增加毒性。
附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1為描述在以5-FU、此處以“輔因子”代表的5，10-CH2-THFA、抗VEGF(阿瓦斯汀)和甲酰四氫葉酸的組合治療的裸小鼠中HT-29瘤的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)曲線圖。對(duì)于指出的藥物，從治療初始相對(duì)時(shí)間繪制HT-29瘤體積。繪制平均瘤體積±平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差。通過(guò)最佳擬合分析生成曲線。
圖2為描述在以5-FU、此處以“輔因子”代表的5，10-CH2-THFA和奧沙利鉑的組合治療的裸小鼠中HT-29瘤的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)曲線圖。對(duì)于指出的藥物，從治療初始相對(duì)時(shí)間繪制HT-29瘤體積。繪制平均瘤體積±±平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差。通過(guò)最佳擬合分析生成曲線。
圖3為描述以5-FU、此處以“輔因子”代表的5，10-CH2-THFA、抗VEGF(阿瓦斯汀)和甲酰四氫葉酸的組合治療帶有HT-29瘤的裸小鼠后的平均瘤體積圖。治療開(kāi)始后22天對(duì)每一治療組繪制平均瘤體積。誤差棒代表平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差。
圖4為描述在以5-FU、此處以“輔因子”代表的5，10-CH2-THFA和奧沙利鉑的組合治療帶有HT-29瘤的裸小鼠后的平均瘤體積圖。治療開(kāi)始后22天對(duì)每一治療組繪制平均瘤體積。誤差棒代表平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差。
圖5描述以5-FU、此處以“輔因子”代表的5，10-CH2-THFA、甲酰四氫葉酸和抗VEGF(阿瓦斯汀)的組合治療帶有HT-29瘤的裸小鼠后的存活率的Kaplan-Meier圖。
圖6描述以5-FU、此處以“輔因子”代表的5，10-CH2-THFA和奧沙利鉑的組合治療帶有HT-29瘤的裸小鼠后的存活率的Kaplan-Meier圖。
圖7為描述在以5-FU、此處以“輔因子”代表的5，10-CH2-THFA、甲酰四氫葉酸和抗VEGF(阿瓦斯汀)的組合處理的裸小鼠中HT-29瘤的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)曲線圖。對(duì)于指出的藥物，從治療初始相對(duì)時(shí)間繪制HT-29瘤體積。繪制平均瘤體積±平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差。通過(guò)最佳擬合分析生成曲線。
圖8為描述在以5-FU、此處以“輔因子”代表的5，10-CH2-THFA、甲酰四氫葉酸和抗VEGF(阿瓦斯汀)的組合治療帶有HT-29瘤的裸小鼠后的平均瘤體積圖。治療開(kāi)始后19天對(duì)每一治療組繪制平均瘤體積。誤差棒代表平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差。
圖9描述以5-FU、此處以“輔因子”代表的5，10-CH2-THFA和抗VEGF(阿瓦斯汀)的組合治療帶有HT-29瘤的裸小鼠后的存活率的Kaplan-Meier圖。
圖10為以5-FU、5-FU/甲酰四氫葉酸和5-FU/5，10-CH2-THFA(5，10-CH2-THFA表示為“輔因子”)治療帶有HT-29瘤的Balb/c小鼠后的存活率的Kaplan-Meier圖。
圖11為描述以5-FU、5-FU/甲酰四氫葉酸和5-FU/5，10-CH2-THFA(5，10-CH2-THFA表示為“輔因子”)治療的Balb/c小鼠的血液分析圖。通過(guò)將藥物治療后1周進(jìn)行的血液測(cè)量除以治療前血液的測(cè)量以計(jì)算繪制在圖中的基線測(cè)量百分?jǐn)?shù)。對(duì)每一治療組繪制平均數(shù)據(jù)值±平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差。WBC，白細(xì)胞；RBC，紅細(xì)胞；HGB，血紅蛋白；HCT，紅細(xì)胞壓積；MCV，平均細(xì)胞體積；MCH，平均細(xì)胞血紅蛋白；MCHC，平均細(xì)胞血紅蛋白量；PLT，血小板。
圖12為描述以5-FU、5-FU/甲酰四氫葉酸和5-FU/5，10-CH2-THFA(5，10-CH2-THFA表示為“輔因子”)治療后Balb/c小鼠的血小板毒性等級(jí)圖。藥物處理后一周，對(duì)每只小鼠計(jì)算血小板毒性等級(jí)。對(duì)每一治療組繪制具有1或2、3和4級(jí)毒性的小鼠百分?jǐn)?shù)。
圖13為描述以5-FU、5-FU/甲酰四氫葉酸和5-FU/5，10-CH2-THFA(5，10-CH2-THFA表示為“輔因子”)治療后Balb/c小鼠的中性粒細(xì)胞毒性等級(jí)圖。藥物處理后一周，對(duì)每只小鼠計(jì)算中性粒細(xì)胞毒性等級(jí)。對(duì)每一治療組繪制具有1或2、3和4級(jí)毒性的小鼠百分?jǐn)?shù)。
圖14為描述以5-FU、5-FU/甲酰四氫葉酸和5-FU/5，10-CH2-THFA(5，10-CH2-THFA表示為“輔因子”)治療后Balb/c小鼠的中性粒細(xì)胞毒性分析圖。藥物處理后一周，基于它們的絕對(duì)中性粒細(xì)胞數(shù)將具有4級(jí)中性粒細(xì)胞毒性的小鼠細(xì)分。對(duì)每一治療組繪制具有指出的中性粒細(xì)胞數(shù)的小鼠百分?jǐn)?shù)。
圖15為描述以5-FU、甲酰四氫葉酸和此處以“輔因子”表示的10-CH2-THF的組合治療后Balb/c小鼠的體重減輕毒性等級(jí)圖。藥物處理后一周，對(duì)每只鼠計(jì)算體重減輕毒性等級(jí)。對(duì)每一治療組繪制具有0、1、2和3級(jí)毒性的小鼠百分?jǐn)?shù)。Gem＝吉西他濱圖16為描述以5-FU、甲酰四氫葉酸、此處以“輔因子”表示的10-CH2-THF和吉西他濱的組合治療后Balb/c小鼠的體重減輕百分?jǐn)?shù)的圖。藥物處理后一周，對(duì)每只鼠計(jì)算自起始基線體重的體重減輕百分?jǐn)?shù)。然后對(duì)每一處理組繪制落入圖中指出的體重減輕范圍的小鼠百分?jǐn)?shù)。Gem＝吉西他濱。
圖17為描述以5-FU、甲酰四氫葉酸、此處以“輔因子”代表的10-CH2-THFA和吉西他濱的組合處理Balb/c小鼠后的存活率的Kaplan-Meier圖。
圖18為描述以5-FU、5-FU/甲酰四氫葉酸和5-FU/5，10-CH2-THF(5，10-CH2-THF表示為“輔因子”)處理后Balb/c小鼠的淋巴細(xì)胞減少的毒性等級(jí)圖。藥物處理后一周，對(duì)每只鼠計(jì)算淋巴細(xì)胞減少的毒性等級(jí)。對(duì)每一治療組繪制具1/2級(jí)、3級(jí)和4級(jí)毒性的小鼠的百分?jǐn)?shù)。
圖19為描述以卡培他濱(希羅達(dá))、希羅達(dá)/甲酰四氫葉酸和希羅達(dá)/5，10-CH2-THFA(5，10-CH2-THFA表示為“輔因子”)治療帶有HT-29瘤的裸小鼠后的HT-29瘤生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)圖。從治療初始相對(duì)時(shí)間繪制HT-29瘤體積。繪制平均瘤體積±平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差。通過(guò)最佳擬合分析生成曲線。
圖20為以卡培他濱(希羅達(dá))、希羅達(dá)/甲酰四氫葉酸和希羅達(dá)/5，10-CH2-THFA(5，10-CH2-THFA表示為“輔因子”)治療Balb/c小鼠后的存活率的Kaplan-Meier圖。
圖21為描述在以卡培他濱(希羅達(dá))、希羅達(dá)/甲酰四氫葉酸和希羅達(dá)/5，10-CH2-THFA(5，10-CH2-THFA表示為“輔因子”)治療后8天的Balb/c小鼠的體重減輕毒性圖。
發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明定義“抗癌藥物”為任何用于治療癌癥的藥物。可用于本發(fā)明的方法及組合物中的一些研究中的抗癌藥物的一些非限制性實(shí)例提供于表1中。
“化學(xué)治療劑”為任何具有生物活性且在疾病治療中有用的化學(xué)實(shí)體。在癌癥治療中，化學(xué)治療劑為直接或間接引起癌細(xì)胞死亡的化學(xué)實(shí)體?；瘜W(xué)治療劑作為單獨(dú)的試劑或是與一種或多種其它的化學(xué)治療劑組合可具有抗癌效果。
抗癌藥物或化療劑的“類似物”為在結(jié)構(gòu)上與抗癌藥物或化學(xué)治療劑相似但在組成上稍有不同的(如，以一種不同元素的原子替換一個(gè)原子或添加或取代特定的功能團(tuán))化合物。本文使用的“類似物”也可表示在結(jié)構(gòu)上相似或相同，但也包括例如能提高可溶性、延緩降解、增加在循環(huán)中的半衰期、賦予膜通透性或直接靶向組織或細(xì)胞的附加部分。優(yōu)選當(dāng)化合物、抗癌藥物或化學(xué)治療劑的類似物以治療有效量給予患者時(shí)，基本上與所述化合物、抗癌藥物或化學(xué)治療劑具有相同活性的。
抗癌藥物或化學(xué)治療劑的“前藥”為在體內(nèi)轉(zhuǎn)換為抗癌藥物或治療劑，但其自身無(wú)活性或者在數(shù)量和性質(zhì)上具有不同于所述抗癌藥物活性的分子。
本文使用的“抗癌藥物方案(anticancer drug regimen)”、“化療藥物方案(chemotherapy drug regimen)”、“抗癌藥物方案(anticancer drugprotocol)”或“化療方案(chemotherapy protocol)”為癌癥患者將接受何種治療、每一種確切地何時(shí)及以何種劑量給予的正式的概要或計(jì)劃。
本文使用的“胸苷酸合成酶的葉酸輔因子”或“TS的葉酸輔因子”為諸如5，10-CH2-THFA或5，10-CH2-THFA聚谷氨酸鹽的還原葉酸分子，其能通過(guò)5-FU加強(qiáng)對(duì)胸苷酸合成酶的抑制作用。本文使用的“胸苷酸合成酶的葉酸輔因子”也可為加強(qiáng)胸苷酸合成酶的抑制作用的葉酸分子的前體或前藥。例如，諸如亞葉酸(5-甲?；?四氫葉酸酯，甲酰四氫葉酸)的葉酸輔因子在體內(nèi)可轉(zhuǎn)換為5，10-CH2-THFA和5，10-CH2-THFA的聚谷氨酸鹽。
“毒性”指實(shí)體對(duì)細(xì)胞、組織、器官或機(jī)體系統(tǒng)的有害作用。毒性作用來(lái)自實(shí)體與治療個(gè)體的細(xì)胞或組織的生物化學(xué)反應(yīng)，可為普遍的或特異的，涉及特定系統(tǒng)或器官。作為非限制性實(shí)例，毒性可例如包括流淚增加，粘膜炎，esophagopharyngitis，諸如感覺(jué)異常、失眠和眩暈的神經(jīng)毒性，諸如惡心、嘔吐和腹瀉的胃腸毒性，體重減輕毒性，心臟毒性，包括脫發(fā)、出汗和皮疹在內(nèi)的皮膚病學(xué)毒性，諸如但不限于中性粒細(xì)胞減少、血小板減少、淋巴細(xì)胞減少、白細(xì)胞減少的血液毒性。毒性參數(shù)的臨床定義可見(jiàn)于國(guó)家癌癥研究所常用毒性標(biāo)準(zhǔn)(第三版)或世界衛(wèi)生組織毒性標(biāo)準(zhǔn)。
抗癌治療或化學(xué)治療方案的“有效性”由其抗腫瘤或抗癌細(xì)胞作用和改善臨床治療結(jié)果的能力來(lái)確定，所述臨床治療結(jié)果例如為緩和、進(jìn)展時(shí)間、應(yīng)答率和存活能力。在癌癥治療領(lǐng)域內(nèi)已充分建立了用于評(píng)價(jià)抗癌治療或化學(xué)治療方案的有效性的公認(rèn)的方法。例如，可通過(guò)檢測(cè)例如在血清或血漿中的癌細(xì)胞或標(biāo)志物評(píng)價(jià)抗癌作用。可被檢測(cè)的腫瘤蛋白或抗原的例子包括用于結(jié)腸癌的CEA和用于胰腺癌的CA19-9。對(duì)于實(shí)體瘤、可通過(guò)監(jiān)測(cè)腫瘤大小和腫瘤大小隨時(shí)間的變化測(cè)定抗腫瘤作用。在臨床研究中，可通過(guò)放射線照相術(shù)、斷層攝影術(shù)以及通過(guò)對(duì)腫瘤質(zhì)量的直接測(cè)量(如果可能)監(jiān)測(cè)損傷的數(shù)目、腫瘤大小和腫瘤生長(zhǎng)率?？鼓[瘤作用也可用分子生物學(xué)和生物化學(xué)技術(shù)測(cè)定，如ELISA、PCR、western印跡法或免疫細(xì)胞化學(xué)。
表1結(jié)腸直腸藥物的研究
1微管抑制劑6細(xì)胞因子2疫苗7碳水化合物/脂3EGFR/VEGFR靶8細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)劑4酪氨酸激酶/轉(zhuǎn)錄因子抑制劑9核苷類似物5非甾體類抗炎藥10其它I.用包括5-FU、5，10-CH2-THFA和至少一種另外的抗癌藥物的聯(lián)合療法治療癌癥患者的方法本發(fā)明提供了用聯(lián)合化學(xué)療法治療癌癥患者的方法，所述聯(lián)合化學(xué)療法包括5-5-FU或5-FU的類似物或前藥；5，10-CH2-THFA；和一種或多種另外的抗癌藥物。所述一種或多種另外的抗癌藥物可以是一種或多種任何類型的化學(xué)治療劑，包括但不限于包含特異性結(jié)合成員、蛋白、核酸或核酸類似物(例如，但不限于反義分子、核酶和siRNA)、脂類、類固醇、大分子、小分子或金屬的化學(xué)治療劑。該一種或多種抗癌藥物可包含一種或多種化學(xué)治療劑，例如但不限于拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(例如，依立替康、托泊替康)、抗代謝藥物(例如，甲氨喋呤、吉西他濱、tezacitabine)、5-FU調(diào)節(jié)劑、烷化劑(例如，環(huán)磷酰胺、卡氮芥)、核酸生物合成抑制劑(例如，絲裂霉素C、多柔比星、順鉑、奧沙利鉑)、微管破壞藥物(例如，太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、長(zhǎng)春瑞濱、長(zhǎng)春新堿)、激素阻斷藥物(例如，他莫昔芬)、包括但不限于受體和非受體酪氨酸激酶的激酶抑制劑(例如，易瑞沙(Iressa)、它賽瓦(Tarceva)、SU5416、PTK787、格列衛(wèi)(Gleevec))、蛋白體抑制劑(例如，硼替佐米(bortezomib))、免疫調(diào)節(jié)劑(例如，左旋咪唑)、抗炎藥物、血管生成抑制劑、細(xì)胞因子(例如，白介素、腫瘤壞死因子)和抑制細(xì)胞因子、激素或者細(xì)胞因子或激素的受體活性的藥物(例如，抗VEGF抗體貝伐單抗(bevacizumab)或“阿瓦斯汀”)?？拱┧幬镆部墒钦谘芯恐械目赡芫哂锌拱┗钚缘乃幬?，如表1中所列的那些藥物?？拱┧幬锇▎慰寺】贵w，例如但不限于結(jié)合細(xì)胞因子、激素或激素受體等等的單克隆抗體(例如，阻斷EFG或VEGF生長(zhǎng)因子活化的抗體，如阿瓦斯汀、erbutux、赫賽汀(herceptin))。
所述方法包括以5-FU或其類似物或其前藥；5，10-CH2-THFA；和至少一種另外的抗癌藥物對(duì)癌癥患者進(jìn)行給藥。如本發(fā)明所用的，“另外的”抗癌藥物不是5，10-CH2-THFA、5-FU或5-FU的類似物或前藥或者甲酰四氫葉酸。
癌癥患者可以是患有任何類型癌癥的患者。在本發(fā)明的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，該患者患有在當(dāng)前的實(shí)踐中通常用5-FU治療的腫瘤類型，例如結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、乳腺癌、頭頸癌、食管癌或胃癌。在本發(fā)明的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，該患者患有在當(dāng)前的實(shí)踐中通常不用5-FU治療的腫瘤類型，例如但不限于卵巢癌或子宮頸癌。本發(fā)明也關(guān)注聯(lián)合治療在除了那些目前通常用5-FU治療的癌癥之外的其它癌癥治療中的可能性，該聯(lián)合治療采用5，10-CH2-THFA、5-FU(或其類似物或其前藥)和一種或多種另外的抗癌藥物。
癌癥治療和化學(xué)治療領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員能夠采用已充分建立的用于評(píng)估毒性和有效性的方案確定5，10-CH2-THFA和5-FU的最佳劑量和方案。一些用5-FU和5，10-CH2-THFA治療癌癥患者的優(yōu)選方案采用每m210毫克至1克的5，10-CH2-THFA，優(yōu)選每m220毫克至500毫克的5，10-CH2-THFA，且更優(yōu)選每m230毫克至250毫克的5，10-CH2-THFA。例如，5，10-CH2-THFA的優(yōu)選劑量可為30毫克至約120毫克每m2。上述劑量只是一般性的指導(dǎo)方針，其可根據(jù)以下因素來(lái)擴(kuò)展或改變，如癌癥類型和級(jí)別、患者年齡、健康狀況和性別、聯(lián)合應(yīng)用中使用的特定藥物、給藥途徑和頻率以及采用多藥聯(lián)合的實(shí)驗(yàn)和臨床發(fā)現(xiàn)。
5-FU的劑量可為25毫克至約5克每m2，并優(yōu)選約50毫克至2.5克每m2，且更優(yōu)選約100毫克至約1克每m2。例如，5-FU的優(yōu)選劑量可為250毫克至約700毫克每m2。上述劑量只是一般性的指導(dǎo)方針，其可根據(jù)以下因素來(lái)擴(kuò)展或改變，如癌癥類型和級(jí)別、患者年齡、健康狀況和性別、聯(lián)合應(yīng)用中使用的特定藥物、給藥途徑和頻率以及采用多藥聯(lián)合的實(shí)驗(yàn)和臨床發(fā)現(xiàn)。5-FU可以任何可行的方法給藥，包括注射或IV給藥。
在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，5-FU的前藥或類似物而不是5-FU本身用于聯(lián)合治療中。在患者的組織中，5-FU轉(zhuǎn)化為胸苷酸合成酶抑制劑5-氟-2’-脫氧尿苷酸(FdUMP)。在本申請(qǐng)中，“5-FU的類似物或前藥”用于指可直接或間接轉(zhuǎn)化為諸如FdUMP的胸苷酸合成酶抑制劑的類似物或前藥。可用于本發(fā)明所述方法的一種5-FU的前藥為N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)。在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明所述方法包括以N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)；5，10-CH2-THFA；和至少一種另外的抗癌藥物對(duì)癌癥患者給藥。卡培他濱的劑量可由熟練的臨床醫(yī)師確定并部分依賴于給藥的頻率。例如，卡培他濱的日劑量可為約500mg至約7500mg每m2，優(yōu)選為約1000mg至約5000mg每m2，且更優(yōu)選為約1500mg至約3000mg每m2。可將所述劑量分為每天一至六次(優(yōu)選兩次)給藥。上述劑量只是一般性的指導(dǎo)方針，其可根據(jù)以下因素來(lái)擴(kuò)展或改變，如癌癥類型和級(jí)別、患者年齡、健康狀況和性別、聯(lián)合應(yīng)用中使用的特定藥物、給藥途徑和頻率以及采用多藥聯(lián)合的實(shí)驗(yàn)和臨床發(fā)現(xiàn)?？ㄅ嗨麨I可以任何可行的方法給藥，包括注射、IV給藥或以口服制劑形式給藥。
可用于本發(fā)明所述方法的類似物組合為稱為UFT的以1∶4的比例聯(lián)合使用的替加氟(Tegafur，TF)和尿嘧啶(U)。在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明所述方法包括以UFT；5，10-CH2-THFA；和至少一種另外的抗癌藥物對(duì)癌癥患者給藥。UFT的劑量可由熟練的臨床醫(yī)師確定并部分依賴于給藥的頻率。例如，UFT的日劑量可為約50mg至約3000mg每m2，優(yōu)選為約100mg至約2000mg每m2，且更優(yōu)選為約200mg至約1000mg每m2。包括UFT的抗癌方案也可任選地包括同UFT給藥的亞葉酸鈣。上述劑量只是一般性的指導(dǎo)方針，其可根據(jù)以下因素來(lái)擴(kuò)展或改變，如癌癥類型和級(jí)別、患者年齡、健康狀況和性別、聯(lián)合應(yīng)用中使用的特定藥物、給藥途徑和頻率以及采用多藥聯(lián)合的實(shí)驗(yàn)和臨床發(fā)現(xiàn)。UFT可以任何可行的方法給藥，包括注射、IV給藥或以口服制劑形式給藥。
在本發(fā)明所述多藥方案中使用的一種或多種另外的抗癌藥物的劑量也可通過(guò)采用逐步增加劑量和監(jiān)測(cè)毒性和有效性的研究確定。對(duì)于已獨(dú)立地用于化學(xué)治療方案中的聯(lián)合治療來(lái)說(shuō)，在確定欲用于該聯(lián)合治療中的抗癌藥物的劑量時(shí)，執(zhí)業(yè)醫(yī)生可考慮在已建立的化學(xué)治療方案中使用的藥物劑量。
當(dāng)與5，10-CH2-THFA聯(lián)合時(shí)，5-FU(或其類似物或其前藥)毒性的減少可允許以下藥物方案5，10-CH2-THFA和5-FU(或其類似物或其前藥)與一種或多種另外的抗癌藥物聯(lián)合使用，該另外的抗癌藥物在不存在CH2-THFA時(shí)具有被禁止使用的毒性。
根據(jù)可由有資格的臨床醫(yī)師確定的方案，所述藥物可靜脈內(nèi)、口服或以任何其它可行的方式給藥。在本發(fā)明的聯(lián)合方案中使用的抗癌藥物可單獨(dú)給藥，或者在該聯(lián)合方案中使用的一種或多種抗癌藥物可共同給藥。當(dāng)一種或多種抗癌藥物單獨(dú)進(jìn)行給藥時(shí)，每種藥物給藥的時(shí)間選擇和時(shí)間表可改變。
例如，每種藥物的團(tuán)注可每周給予一次，持續(xù)數(shù)周。優(yōu)選地，在5-FU或5-FU的類似物或前藥之前，進(jìn)行5，10-CH2-THFA給藥。例如，在接受5-FU給藥之前約10分鐘至約4小時(shí)，患者可接受5，10-CH2-THFA給藥。在聯(lián)合治療中使用的另外的抗癌藥物可在5-FU(或其類似物或其前藥)給藥之前、過(guò)程中或之后給藥，或者在患者未接受5-FU(或其類似物或其前藥)和5，10-CH2-THFA的過(guò)程中進(jìn)行給藥。用于所述聯(lián)合治療的方案不是限制性的，并且對(duì)于頻率、持續(xù)時(shí)間和劑量可包括多種任何可行性給藥方案。
在本發(fā)明此方面的一些實(shí)施方案中，當(dāng)與在5，10-CH2-THFA和5-FU(或其類似物或其前藥)不存在時(shí)用一種或多種另外的抗癌藥物治療患者進(jìn)行比較時(shí)，或者當(dāng)與在5，10-CH2-THFA不存在時(shí)用5-FU(或其類似物或其前藥)和所述一種或多種另外的抗癌藥物治療患者進(jìn)行比較時(shí)，用5，10-CH2-THFA、5-FU(或其類似物或其前藥)和一種或多種另外的抗癌藥物治療癌癥患者可減少癌癥患者體內(nèi)的腫瘤生長(zhǎng)率。
在本發(fā)明此方面的一些實(shí)施方案中，當(dāng)與在5，10-CH2-THFA和5-FU(或其類似物或其前藥)不存在時(shí)用一種或多種另外的抗癌藥物治療癌癥患者進(jìn)行比較時(shí)，或者當(dāng)與在5，10-CH2-THFA不存在時(shí)用5-FU(或其類似物或其前藥)和所述一種或多種另外的抗癌藥物治療癌癥患者進(jìn)行比較時(shí)，用5，10-CH2-THFA、5-FU(或其類似物或其前藥)和一種或多種另外的抗癌藥物治療癌癥患者可增加癌癥患者的存活能力。
II.包含5-FU、5，10-亞甲基四氫葉酸和至少一種另外的抗癌藥物的用于癌癥治療的組合物本發(fā)明的第二方面為用于癌癥治療的組合物，其包括5-FU或其類似物或其前藥、5，10-CH2-THFA和至少一種另外的抗癌藥物。所述一種或多種另外的抗癌藥物可以是一種或多種任何類型的化學(xué)治療劑，包括但不限于包含特異性結(jié)合成員、蛋白、核酸或核酸類似物(例如，但不限于反義分子、核酶和siRNA)、脂類、類固醇、大分子、小分子或金屬的化學(xué)治療劑。該一種或多種抗癌藥物可包含一種化學(xué)治療劑，例如但不限于拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(例如，依立替康、托泊替康)、抗代謝藥物(例如，甲氨喋呤、吉西他濱)、有絲分裂抑制劑、5-氟尿嘧啶調(diào)節(jié)劑、烷化劑(例如，環(huán)磷酰胺、卡氮芥)、核酸生物合成抑制劑(例如，絲裂霉素C、多柔比星、順鉑、奧沙利鉑)、微管破壞藥物(例如，太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、長(zhǎng)春瑞濱、長(zhǎng)春新堿)、激素阻斷藥物(例如，他莫昔芬)、包括但不限于受體和非受體酪氨酸激酶的激酶抑制劑(例如，易瑞沙、它賽瓦、SU5416、PTK787、格列衛(wèi))、蛋白體抑制劑(例如，硼替佐米)、免疫調(diào)節(jié)劑(例如，左旋咪唑)、抗炎藥物、血管生成抑制劑、細(xì)胞因子(例如，白介素、腫瘤壞死因子)和抑制細(xì)胞因子、激素或者細(xì)胞因子或激素的受體活性的藥物(例如，抗VEGF抗體貝伐單抗或“阿瓦斯汀”)。抗癌藥物也可是正在研究中的可能具有抗癌活性的藥物，如表1中所列的那些藥物?？拱┧幬锇▎慰寺】贵w，例如但不限于結(jié)合細(xì)胞因子、激素或激素受體等等的單克隆抗體(例如，阻斷EFG或VEGF生長(zhǎng)因子活化的抗體，如阿瓦斯汀、erbutux、赫賽汀)。
本發(fā)明包括抗癌藥物組合，該抗癌藥物組合包括組方為藥物組合物的5-FU(或其類似物或其前藥)、5，10-CH2-THFA和一種或多種另外的抗癌藥物?？拱┧幬锝M合可包含一種或多種藥物制劑。例如，可以單獨(dú)制劑的形式提供每一5-FU(或其類似物或其前藥)、5，10-CH2-THFA和一種或多種另外的抗癌藥物?；蛘?，可將5-FU(或其類似物或其前藥)、5，10-CH2-THFA和一種或多種另外的抗癌藥物的兩種或多種共同提供于制劑中。可將在本發(fā)明的多藥抗癌方案中使用的單獨(dú)制劑設(shè)計(jì)成相同或不同的給藥途徑。
III.5-FU、5，10-亞甲基四氫葉酸和至少一種另外的抗癌藥物在制造用于治療癌癥的藥物組合物中的用途本發(fā)明還包括5-FU或其類似物或其前藥、5，10-CH2-THFA和至少一種另外的抗癌藥物在制造用于治療癌癥的藥物組合物中的用途。所述至少一種另外的抗癌藥物可以是如下抗癌藥物中的任意藥物拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(例如，依立替康、托泊替康)、抗代謝藥物(例如，甲氨喋呤、吉西他濱)、有絲分裂抑制劑、5-FU調(diào)節(jié)劑、烷化劑(例如，環(huán)磷酰胺、卡氮芥)、核酸生物合成抑制劑(例如，絲裂霉素C、多柔比星、順鉑、奧沙利鉑)、微管破壞藥物(例如，太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、長(zhǎng)春瑞濱、長(zhǎng)春新堿)、激素阻斷藥物(例如，他莫昔芬)、包括但不限于受體和非受體酪氨酸激酶的激酶抑制劑(例如，易瑞沙、它賽瓦、SU5416、PTK787、格列衛(wèi))、蛋白體抑制劑(例如，硼替佐米)、免疫調(diào)節(jié)劑(例如，左旋咪唑)、抗炎藥物、血管生成抑制劑、細(xì)胞因子(例如，白介素、腫瘤壞死因子)和抑制細(xì)胞因子、激素、或者細(xì)胞因子或激素的受體活性的藥物(例如，貝伐單抗或“阿瓦斯汀”)。所述用途包括將所述藥物組合物制造為單一制劑或多于一種形式的制劑。例如，可將5-FU作為注射用部分來(lái)提供，并且在5-FU給藥之前，可將5，10-CH2-THFA和至少一種另外的抗癌藥物作為另外的注射用部分來(lái)提供給藥。或者，可均以單獨(dú)制劑的形式提供5-FU、5，10-CH2-THFA和至少一種另外的抗癌藥物，以便每一種均可分別給藥，且其中將每一藥物部分制造為具有適于特定聯(lián)合藥物方案的適當(dāng)劑量。
所述藥物組合物包含準(zhǔn)備用于貯存和優(yōu)選隨后給藥的藥物可接受的載體，該藥物組合物在藥物可接受載體或稀釋劑中含有藥物有效量所述化合物。用于治療應(yīng)用的可接受的載體或稀釋劑在藥物領(lǐng)域內(nèi)是公知的，并且例如描述在Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明頓制藥學(xué))，18th Ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA(1990))中。防腐劑、穩(wěn)定劑、染料甚至調(diào)味劑均可提供于該藥物組合物中。例如，可加入作為防腐劑的苯甲酸鈉、抗壞血酸和對(duì)羥基苯甲酸的酯。另外，可使用抗氧化劑和助懸劑。
依賴于靶組織，可將本發(fā)明的藥物組合物進(jìn)行組方并用作用于口服給藥的片劑、膠囊或溶液；用于局部給藥的油膏劑或軟膏劑；用于直腸給藥的栓劑；適于用作吸入劑或鼻腔噴霧劑的無(wú)菌溶液、混懸液等等。注射劑也可以制備為下列常規(guī)形式作為溶液或懸浮液、在注射前適合制成溶液或懸浮液的固體劑型、或作為乳劑。適合的賦形劑例如是水、鹽水、葡萄糖、甘露醇、乳糖、卵磷脂、白蛋白、谷氨酸鈉、半胱氨酸鹽酸鹽等等。另外，如果需要，所述的注射用藥藥物組合物可包含較少量的無(wú)毒性輔助物，例如濕潤(rùn)劑、pH緩沖劑等等。
作為劑量所要求的組合物的藥物有效量將依賴于給藥途徑、待治療的癌癥類型和患者的身體特征。可調(diào)整所述劑量來(lái)實(shí)現(xiàn)預(yù)期效應(yīng)，但是依賴于下列因素例如體重、飲食、同時(shí)的藥物治療和在醫(yī)藥領(lǐng)域的技術(shù)人員公認(rèn)的其它因素。在本發(fā)明所述的方法的實(shí)施中，所述藥物組合物可單獨(dú)使用或與其它的治療試劑或診斷試劑聯(lián)合使用?？梢远喾N方式采用多種劑型以所述藥物組合物對(duì)患者給藥，包括局部的、腸胃外的、靜脈內(nèi)的、皮下的、肌內(nèi)的、結(jié)腸的、經(jīng)直腸的、鼻內(nèi)和腹膜內(nèi)給藥。優(yōu)選地，將所述藥物組合物腸胃外、靜脈內(nèi)和口服給藥。這些方法也可用于測(cè)試試驗(yàn)化合物在體內(nèi)的活性。
當(dāng)作為混懸液口服給藥時(shí)，本發(fā)明的組合物可根據(jù)藥物制劑領(lǐng)域內(nèi)公知的技術(shù)來(lái)制備，并可包含用于增大體積的微晶纖維素、作為助懸劑的藻酸或藻酸鈉、作為粘性增強(qiáng)劑的甲基纖維素和本領(lǐng)域內(nèi)公知的甜味劑/調(diào)味劑。作為即刻釋放的片劑，這些組合物可保哈微晶纖維素、磷酸二鈣、淀粉、硬脂酸鎂和乳糖和/或其它本領(lǐng)內(nèi)公知的賦形劑、粘合劑、膨脹劑、崩解劑、稀釋劑和潤(rùn)滑劑。在漱口制劑或沖洗制劑中的組分包括本領(lǐng)域內(nèi)公知的抗菌劑、表面活性劑、輔助表面活性劑、油、水和諸如甜味劑/調(diào)味劑的其它添加劑。
當(dāng)通過(guò)飲用溶液給藥時(shí)，所述組合物包含溶于含有適當(dāng)pH調(diào)節(jié)劑的水中一種或多種本發(fā)明的組合物和載體?？蓪⑺龌衔锶苡谡麴s水、自來(lái)水、泉水等水中。可優(yōu)選地將pH調(diào)為約3.5至約8.5?？杉尤胩鹞秳?％(w/v)蔗糖。
可將本發(fā)明的制劑加以改變，以包括；(1)調(diào)節(jié)pH的其它酸和堿；(2)其它張力賦予劑，例如山梨糖醇、甘油和葡萄糖的；(3)其它抗菌性防腐劑，如其它對(duì)羥基苯甲酸酯、山梨酸酯、苯甲酸酯、丙酸酯、氯代丁醇、苯乙醇、苯扎氯銨和汞劑；(4)其它賦予粘性劑，如羧甲基纖維素鈉、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇和其它樹膠；(5)適合的吸收促進(jìn)劑；(6)諸如抗氧化劑的穩(wěn)定劑，諸如重亞硫酸鹽和抗壞血酸，諸如依地酸鈉的金屬絡(luò)合劑和諸如聚乙二醇的藥物溶解促進(jìn)劑。
IV.減少包括5-FU的抗癌藥物治療方案對(duì)患者的毒性的方法本發(fā)明也提供了通過(guò)將5，10-CH2-THFA加入包括5-FU、5-FU的類似物或前藥的藥物方案中，以減少該藥物治療方案對(duì)癌癥患者的毒性的方法。
一方面，所述方法包括獲得包含5-FU或其類似物或其前藥的抗癌藥物方案，并將10-CH2-THFA加入該抗癌藥物方案中以得到對(duì)所述患者減少毒性的抗癌藥物方案。減少包括以5-FU或其類似物或其前藥給藥的癌癥藥物治療的毒性的方法，包括在5-FU給藥之前、之后或同時(shí)，以5，10-5，10-CH2-THFA對(duì)所述患者進(jìn)行給藥以減少5-FU的毒性。優(yōu)選地，在5-FU給藥之前進(jìn)行5，10-CH2-THFA給藥。在本發(fā)明此方面的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，將5，10-CH2-THFA對(duì)接受5-FU的患者給藥，以減少5-FU的血液毒性。在本發(fā)明此方面的優(yōu)選實(shí)施方案中，在甲酰四氫葉酸(亞葉酸，F(xiàn)A)不存在時(shí)以5-FU和5，10-CH2-THFA對(duì)所述患者進(jìn)行給藥。
癌癥患者可以是患有任何類型癌癥的患者。在本發(fā)明的以5，10-CH2-THFA對(duì)接受5-FU的癌癥患者進(jìn)行給藥的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，該患者患有通常用5-FU治療的腫瘤類型，例如，結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、乳腺癌、頭頸癌、食管癌或胃癌。
本發(fā)明是基于以下令人驚訝的結(jié)果5，10-CH2-THFA在增加5-FU在減少腫瘤生長(zhǎng)率和增加存活能力方面的有效性的同時(shí)，也減少5-FU對(duì)非腫瘤細(xì)胞的毒性。如實(shí)施例1和實(shí)施例2中所公開(kāi)的，與單獨(dú)用5-FU治療或者用5-FU與甲酰四氫葉酸(亞葉酸)的聯(lián)合治療相比，用5，10-CH2-THFA和5-FU的治療減少具有腫瘤的動(dòng)物的腫瘤生長(zhǎng)率并增加存活能力。
本發(fā)明所用的“減少毒性”是指減少對(duì)所述患者的毒性全身作用，或?qū)υ摶颊叩姆前┘?xì)胞的毒性作用。作為非限制性實(shí)例，毒性可包括，流淚增加；粘膜炎；esophagopharyngitis；神經(jīng)上的毒性，如感覺(jué)異常、失眠和頭暈；胃腸道毒性，如惡心、嘔吐和腹瀉；體重減輕毒性；心臟毒性；皮膚病學(xué)毒性，包括脫發(fā)、出汗和起疹；以及血液毒性，例如但不限于嗜中性粒細(xì)胞減少、血小板減少、淋巴細(xì)胞減少和白細(xì)胞減少。
在本發(fā)明此方面的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，5，10-CH2-THFA與5-FU聯(lián)合治療給藥以減少與5-FU治療相關(guān)的血液毒性程度。例如，5，10-CH2-THFA與5-FU一同給藥可減少與包括5-FU的化學(xué)治療方案相關(guān)的嗜中性粒細(xì)胞減少、血小板減少、淋巴細(xì)胞減少和白細(xì)胞減少，該包括5-FU的化學(xué)治療方案包括但不限于為包括5-FU和甲酰四氫葉酸(亞葉酸)的化學(xué)治療方案。
癌癥治療和化學(xué)治療領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員能夠采用已充分建立的用于評(píng)估毒性和有效性的方案確定5，10-CH2-THFA和5-FU的最佳劑量和方案。一些用5-FU和5，10-CH2-THFA治療癌癥患者的優(yōu)選方案采用每m210毫克至1克的5，10-CH2-THFA，優(yōu)選每m220毫克至500毫克的5，10-CH2-THFA，且更優(yōu)選每m230毫克至250毫克的5，10-CH2-THFA。例如，5，10-CH2-THFA的優(yōu)選劑量可為30毫克至約120毫克每m2。上述劑量只是一般性的指導(dǎo)方針，其可根據(jù)以下因素來(lái)擴(kuò)展或改變，如癌癥類型和級(jí)別、患者年齡、健康狀況和性別、聯(lián)合應(yīng)用中使用的特定藥物、給藥途徑和頻率以及采用多藥聯(lián)合的實(shí)驗(yàn)和臨床發(fā)現(xiàn)。
5-FU的劑量可為25毫克至約5克每m2，并優(yōu)選約50毫克至2.5克每m2，且更優(yōu)選約100毫克至約1克每m2。例如，5-FU的優(yōu)選劑量可為250毫克至約700毫克每m2。上述劑量只是一般性的指導(dǎo)方針，其可根據(jù)以下因素來(lái)擴(kuò)展或改變，如癌癥類型和級(jí)別、患者年齡、健康狀況和性別、聯(lián)合應(yīng)用中使用的特定藥物、給藥途徑和頻率以及采用多藥聯(lián)合的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)和臨床發(fā)現(xiàn)。5-FU可以任何可行的方法給藥，包括注射或IV給藥。
在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，5-FU的前藥或類似物而不是5-FU本身用于聯(lián)合治療中。在患者的組織中，5-FU轉(zhuǎn)化為胸苷酸合成酶抑制劑5-氟-2’-脫氧尿苷酸(FdUMP)。在本申請(qǐng)中，“5-FU的前藥或類似物”用于指可直接或間接轉(zhuǎn)化為諸如FdUMP的胸苷酸合成酶抑制劑的類似物或前藥?？捎糜诒景l(fā)明所述方法的一種5-FU的前藥為N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)。在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明所述方法包括以N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)；5，10-CH2-THFA；和至少一種另外的抗癌藥物對(duì)癌癥患者給藥?？ㄅ嗨麨I的劑量可由熟練的臨床醫(yī)師確定并部分依賴于給藥的頻率。例如，卡培他濱的日劑量可為約500mg至約7500mg每m2，優(yōu)選為約1000mg至約5000mg每m2，且更優(yōu)選為約1500mg至約3000mg每m2。可將所述劑量分為每天一至六次(優(yōu)選兩次)給藥。上述劑量只是一般性的指導(dǎo)方針，其可根據(jù)以下因素來(lái)擴(kuò)展或改變，如癌癥類型和級(jí)別、患者年齡、健康狀況和性別、聯(lián)合應(yīng)用中使用的特定藥物、給藥途徑和頻率以及采用多藥聯(lián)合的實(shí)驗(yàn)和臨床發(fā)現(xiàn)?？ㄅ嗨麨I可以任何可行的方法給藥，包括注射、IV給藥或以口服制劑形式給藥。
可用于本發(fā)明所述方法的類似物組合為稱為UFT的以1∶4的比例聯(lián)合使用的替加氟(TF)和尿嘧啶(U)。在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明所述方法包括以UFT；5，10-CH2-THFA；和至少一種另外的抗癌藥物對(duì)癌癥患者給藥。UFT的劑量可由熟練的臨床醫(yī)師確定并部分依賴于給藥的頻率。例如，UFT的日劑量可為約50mg至約3000mg每m2，優(yōu)選為約100mg至約2000mg每m2，且更優(yōu)選為約200mg至約1000mg每m2。包括UFT的抗癌方案也可任選地包括同UFT一起給藥的亞葉酸鈣。上述劑量只是一般性的指導(dǎo)方針，其可根據(jù)以下因素來(lái)擴(kuò)展或改變，如癌癥類型和級(jí)別、患者年齡、健康狀況和性別、聯(lián)合應(yīng)用中使用的特定藥物、給藥途徑和頻率以及采用多藥聯(lián)合的實(shí)驗(yàn)和臨床發(fā)現(xiàn)。UFT可以任何可行的方法給藥，包括注射、IV給藥或以口服制劑形式給藥。
使用卡培他濱的抗癌藥物方案的一些實(shí)例描述在Blum JL等人“Multicenter phase II study of capecitabine in paclitaxel-refractorymetastatic breast cancer(卡培他濱在耐太平洋紫杉醇的轉(zhuǎn)移性乳腺癌中的多中心的II期研究).”J Clin Oncol 1999；17485-93；Hoff等人“Comparison of oral capecitabine versus intravenous fluorouracil plusleucovorin as first-line treatment in 605 patients with metastatic colorectalcancerresults of a randomized phase III study(在患有轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌的605名患者的一線治療中口服的卡培他濱與靜脈注射的氟尿嘧啶加甲酰四氫葉酸的比較隨機(jī)的III期研究結(jié)果).”J Clin Oncol2001；19(8)2282-92；和Van Cutsem E等人“Oral capecitabine comparedwith intravenous fluorouracil plus leucovorin in patients with metastaticcolorectal cancerresults of a large phase III study(在患有轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌的患者中口服的卡培他濱與靜脈注射的氟尿嘧啶加甲酰四氫葉酸的比較大規(guī)模的III期研究結(jié)果).”J Clin Oncol 2001；19(21)4097-106中，在此將其全部引入作為參考，特別引入關(guān)于采用卡培他濱的化學(xué)治療方案的公開(kāi)。本發(fā)明包括在包括卡培他濱的方案中以5，10-CH2-THFA給藥以便減少卡培他濱治療的毒性。
例如，一種方案包括每天兩次給藥卡培他濱(1000-1250mg每m2)，持續(xù)兩周，隨后再休息一周時(shí)間，然后再進(jìn)一步進(jìn)行三周循環(huán)?？蓪?，10-CH2-THFA加入諸如此類的方案中，并且所述方案可根據(jù)關(guān)于毒性和有效性的臨床試驗(yàn)最優(yōu)化。
在此方面的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括通過(guò)同時(shí)以5，10-CH2-THFA給藥來(lái)減少以下抗癌治療的毒性的方法，所述抗癌治療包括將5-FU或5-FU的類似物和前藥和另外的抗癌藥物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)對(duì)癌癥患者給藥。所述方法包括獲得包括5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥和至少一種另外的抗癌藥物的抗癌藥物方案，然后將5，10-CH2-THFA加入該抗癌藥物方案中以得到對(duì)該患者減少毒性的抗癌藥物方案。
另外的抗癌藥物可以是任何類型的抗癌藥物，包括但不限于拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(例如，依立替康、托泊替康)、抗代謝藥物(例如，甲氨喋呤、吉西他濱)、5-氟尿嘧啶調(diào)節(jié)劑、烷化劑(例如，環(huán)磷酰胺、卡氮芥)、核酸生物合成抑制劑(例如，絲裂霉素C、多柔比星、順鉑、奧沙利鉑、卡鉑)、微管破壞藥物(例如，太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、長(zhǎng)春瑞濱、長(zhǎng)春新堿)、激素阻斷藥物(例如，他莫昔芬)、包括但不限于受體和非受體酪氨酸激酶的激酶抑制劑(例如，易瑞沙、它賽瓦、SU5416、PTK787、格列衛(wèi))、蛋白體抑制劑(例如，硼替佐米)、免疫調(diào)節(jié)劑(例如，左旋咪唑)、抗炎藥物、血管生成抑制劑、細(xì)胞因子(例如，白介素、腫瘤壞死因子)和抑制細(xì)胞因子、激素、或者細(xì)胞因子或激素的受體活性的藥物(例如，貝伐單抗(阿瓦斯汀)、西妥昔單抗(艾比特斯))?？拱┧幬镆部墒钦谘芯恐械目赡芫哂锌拱┗钚缘乃幬?，如表1中所列的那些藥物。抗癌藥物包括單克隆抗體，例如但不限于結(jié)合細(xì)胞因子、激素或激素受體等等的單克隆抗體(例如，阻斷EFG或VEGF生長(zhǎng)因子活化的抗體，如阿瓦斯汀、erbutux、赫賽汀)。本發(fā)明所述方法包括多于一種的另外的抗癌藥物與5-FU聯(lián)合應(yīng)用的方法。
減少包括以5-FU或其類似物或其前藥和另外抗癌藥物給藥的癌癥藥物治療的毒性的方法，包括在5-FU(或其類似物或其前藥)給藥之前、之后或同時(shí)，以5，10-CH2-THFA對(duì)患者進(jìn)行給藥。優(yōu)選地，在5-FU給藥之前進(jìn)行5，10-CH2-THFA給藥?？稍?-FU給藥之前、之后或同時(shí)，以另外一種抗癌藥物給藥。
在本發(fā)明所述多藥方案中使用的一種或多種另外的抗癌藥物劑量也可通過(guò)采用逐步增加劑量和監(jiān)測(cè)毒性和有效性的研究來(lái)確定。對(duì)于已獨(dú)立地用于化學(xué)治療方案中的聯(lián)合治療來(lái)說(shuō)，在確定欲用于該聯(lián)合治療中的抗癌藥物的劑量時(shí)，執(zhí)業(yè)醫(yī)生可考慮在已建立的化學(xué)治療方案中使用的藥物劑量。
將5-FU與一種或多種抗癌藥物(其不同于胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)聯(lián)合的多種化學(xué)治療方案在癌癥治療領(lǐng)域內(nèi)是眾所周知的。例如，包括5-FU與一種或多種另外的藥物(其不同于葉酸輔因子)的組合的抗癌方案包括但不限于包括環(huán)磷酰胺、表柔比星和氟尿嘧啶的用于乳腺癌的治療(參見(jiàn)，例如，Levine MN，Bramwell VH，Pritchard KI等人“Randomized trial of intensive cyclophosphamide，epirubicin，andfluorouracil chemotherapy compared with cyclophosphamide，methotrexate，and fluorouracil in premenopausal women withnode-positive breast cancer(在患有淋巴結(jié)陽(yáng)性乳腺癌的絕經(jīng)前婦女中，環(huán)磷酰胺、表柔比星和氟尿嘧啶的加強(qiáng)型化學(xué)治療與環(huán)磷酰胺、甲氨喋呤和氟尿嘧啶進(jìn)行對(duì)照的隨機(jī)試驗(yàn)).”J Clin Oncol 1998；16(8)2651-8；在此引入作為參考，特別是引入采用5-FU的抗癌方案的公開(kāi)作為參考)。包括5-FU與一種或多種另外的藥物(其不同于葉酸輔因子)的組合的抗癌方案也包括包含環(huán)磷酰胺、多柔比星和氟尿嘧啶的用于乳腺癌的治療(參見(jiàn)，例如，Bennett JM，Muss HB，Doroshaw JH，等人“A randomized multicenter trial comparing mitoxantrone，cyclophophamide，and fluorouracil with doxorubicin，cyclophosphamide，and fluorouracil in the therapy of metastatic breast cancer(在轉(zhuǎn)移性乳腺癌的治療中，米托蒽醌、環(huán)磷酰胺和氟尿嘧啶與多柔比星、環(huán)磷酰胺和氟尿嘧啶進(jìn)行對(duì)照的隨機(jī)多中心試驗(yàn)).”J Clin Oncol1988；6(10)1611-20；在此引入作為參考，特別是引入包括5-FU的抗癌方案的公開(kāi)作為參考)。本發(fā)明包括將5，10-CH2-THFA加入諸如這類方案的化學(xué)治療方案中以便減少該化學(xué)治療方案的毒性。
可加入5，10-CH2-THFA以減少治療毒性的抗癌方案的另一實(shí)例為包括采用絲裂霉素C和氟尿嘧啶的用于治療頭頸癌的方案，如KeaneTJ，Cummings BJ，O′Sullivan B，Payne D，Rawlinson E，MacKenzie R，Danjoux C，Hodson I在“A randomized trial of radiation therapycompared to split course radiation therapy combined with mitomycin Cand 5-fluorouracil as initial treatment for advanced laryngeal andhypopharyngeal squamous carcinoma(作為用于晚期喉及喉咽部鱗狀細(xì)胞癌的初始治療，放射治療與聯(lián)合絲裂霉素C和5-氟尿嘧啶的分段放射治療進(jìn)行對(duì)照的隨機(jī)試驗(yàn)).”IJ Radiation Oncology Biol Phys，199325(4)613-8中所公開(kāi)的，在此引入作為參考，特別是引入與采用5-FU的抗癌方案相關(guān)的公開(kāi)作為參考。在此情況下，所述抗癌治療方案除化學(xué)治療之外還包括放射治療。
可加入5，10-CH2-THFA以減少治療毒性的其它類型方案還為將5-FU與絲裂霉素C聯(lián)合的抗癌方案，例如在Keane TJ，Cummings BJ，O’Sullivan B，Payne D，Rawlinson E，MacKenzie R，Danjoux C，Hodson I.“A randomized trial of radiation therapy compared to split courseradiation therapy combined with mitomycin C and 5-fluorouracil as initialtreatment for advanced laryngeal and hypopharyngeal squamouscarcinoma(作為用于晚期喉及喉咽部鱗狀細(xì)胞癌的初始治療，放射治療與聯(lián)合絲裂霉素C和5-氟尿嘧啶的分段放射治療進(jìn)行對(duì)照的隨機(jī)試驗(yàn)).”IJ Radiation Oncology Biol Phys，199325(4)中所公開(kāi)的，在此引入作為參考，特別是引入與包括5-FU的抗癌方案相關(guān)的公開(kāi)作為參考，以及將卡鉑與5-FU聯(lián)合應(yīng)用的其它方案，如Calais G，Alfonsi M，Bardet E等人在“Randomized trial of radiation therapy versusconcomitant chemotherapy and radiation therapy for advanced-stageoropharynx carcinoma(作為用于晚期口咽癌的治療，放射治療與化學(xué)治療和放射治療共存進(jìn)行對(duì)比的隨機(jī)試驗(yàn)).”J Natl Cancer Inst 1999；912081-6中所公開(kāi)的，在此引入作為參考，特別是引入與包括5-FU的抗癌方案相關(guān)的公開(kāi)作為參考。在這些治療中，抗癌治療方案除化學(xué)治療之外還包括放射治療。
本發(fā)明包括通過(guò)同時(shí)以5，10-CH2-THFA給藥來(lái)減少包括5-FU的類似物或前藥和另外抗癌藥物(其不同于胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)的方案的毒性的方法。包括卡培他濱和多烯紫杉醇的抗癌方案的實(shí)例在O’Shaughnessy J，等人的Superior survival with capecitabine plusdocetaxel combination therapy in anthracycline pre-treated patients withadvanced breast cancerphase III trial results(在用蒽環(huán)類化合物預(yù)處理的患有晚期乳腺癌的患者中，用卡培他濱加多烯紫杉醇的聯(lián)合治療進(jìn)行治療的患者具有出眾的存活能力III期試驗(yàn)結(jié)果).J Clin Oncol 2002；202812-23中所公開(kāi)，在此引入作為參考，特別是引入采用卡培他濱的抗癌方案的公開(kāi)作為參考。也可將5，10-CH2-THFA加入包括替加氟-尿嘧啶(UFT)與另外的癌癥藥物聯(lián)合的方案中，例如包括奧沙利鉑的方案中，如Feliu J.等人在“Phase II study of UFT and oxaliplatin infirst-line treatment of advanced colorectal cancer(UFT和奧沙利鉑在晚期結(jié)腸直腸癌的一線治療中的II期研究).”Br.J.Cancer 2004 911758-62中所公開(kāi)的，在此引入作為參考，特別是引入采用UFT的抗癌方案的公開(kāi)作為參考。
上述參考方案只是實(shí)例，且不應(yīng)以任何方式理解為對(duì)本發(fā)明的限制?？杉尤?，10-CH2-THFA以減少治療毒性的抗癌方案可從任何公認(rèn)的來(lái)源中獲得，包括科學(xué)和醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)以及醫(yī)院、癌癥中心和臨床資源。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，在通過(guò)5，10-CH2-THFA給藥以減少方案的毒性方面，可對(duì)5-FU、5，10-CH2-THFA兩者之一或者兩者以及相關(guān)的一種或多種另外的抗癌藥物的劑量和時(shí)間方案進(jìn)行修改。這種修改可由監(jiān)測(cè)患者對(duì)治療反應(yīng)的經(jīng)訓(xùn)練的臨床醫(yī)師根據(jù)公認(rèn)的醫(yī)學(xué)實(shí)踐進(jìn)行。
本發(fā)明此方面的一些優(yōu)選實(shí)施方案包括減少包括5-FU(或其類似物或其前藥)和胸苷酸合成酶的葉酸輔因子的抗癌藥物方案的毒性的方法，其中用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氫葉酸作為胸苷酸合成酶的葉酸輔因子。所述方法包括獲得包含5-FU或其類似物或其前藥和甲酰四氫葉酸的抗癌藥物方案，并用5，10-CH2-THFA代替該抗癌藥物方案中的甲酰四氫葉酸。
在此方面的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括減少抗癌藥物方案的毒性的方法，該抗癌藥物方案包括諸如但不限于卡培他濱或UFT的5-FU的類似物或前藥和甲酰四氫葉酸，其中通過(guò)用5，10-CH2-THFA代替該方案中的甲酰四氫葉酸減少該方案的毒性。
在此方面的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括通過(guò)用5，10-CH2-THFA代替藥物方案中的甲酰四氫葉酸來(lái)減少抗癌治療對(duì)癌癥患者的毒性的方法，所述抗癌治療包括5-FU或5-FU的類似物或前藥、甲酰四氫葉酸和至少一種另外的抗癌藥物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)。所述方法包括獲得包含5-FU或其類似物或其前藥；甲酰四氫葉酸和至少一種另外的抗癌藥物的抗癌藥物方案，并用5，10-CH2-THFA代替該抗癌藥物方案中的甲酰四氫葉酸。
因?yàn)榕c甲酰四氫葉酸相比，5，10-CH2-THFA具有抗腫瘤活性和減少的全身毒性，并且因?yàn)榧柞Ｋ臍淙~酸和5，10-CH2-THFA具有相似的化學(xué)和代謝途徑，所以發(fā)明人考慮在目前的一系列化學(xué)治療方案內(nèi)，5，10-CH2-THFA可代替甲酰四氫葉酸。目前通常用于與5-FU加甲酰四氫葉酸聯(lián)合的藥物的非限制性實(shí)例為依立替康(GPT-11)、奧沙利鉑、吉西他濱、絲裂霉素C、左旋咪唑和長(zhǎng)春瑞濱。本發(fā)明包括用5，10-CH2-THFA代替這些方案中的甲酰四氫葉酸的治療。用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氫葉酸可提供增強(qiáng)的治療作用及減少的毒性。作為非限制性實(shí)例，可用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氫葉酸的目前的聯(lián)合用藥方案包括在結(jié)腸直腸癌治療中使用的以下方法·AIO方案(亞葉酸、5-FU、依立替康)·第一天依立替康(100mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；第一天甲酰四氫酸(500mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；隨后通過(guò)攜帶式泵在24小時(shí)靜脈(IV)團(tuán)注5-FU(2,000mg/m2)，連續(xù)四周，每52周重復(fù)一次。
·Douillard方案(亞葉酸、5-FU、依立替康)·第一天依立替康(180mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；第一天和第二天甲酰四氫葉酸(200mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；隨后IV團(tuán)注負(fù)荷劑量的5-FU(400mg/m2)，然后在第一天和第二天通過(guò)攜帶式泵IV在22小時(shí)注入5-FU(600mg/m2)，每2周重復(fù)一次。
·FOLFOX4方案(奧沙利鉑、甲酰四氫葉酸、5-FU)·第一天奧沙利鉑(85mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；第一天和第二天甲酰四氫葉酸(200mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；隨后IV團(tuán)注負(fù)荷劑量的5-FU(400mg/m2)，然后在第一天和第二天通過(guò)攜帶式泵在22小時(shí)IV注入5-FU(600mg/m2)，每2周重復(fù)一次。
·FOLFOX6方案(奧沙利鉑、甲酰四氫葉酸、5-FU)·第一天奧沙利鉑(85-100mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；第一天甲酰四氫葉酸(400mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；隨后在第一天IV團(tuán)注負(fù)荷劑量的5-FU(400mg/m2)，然后通過(guò)攜帶式泵在46小時(shí)IV注入5-FU(2,400-3,000mg/m2)，每2周重復(fù)一次。
·FOLFIRI方案(亞葉酸、5-FU、依立替康)·第一天依立替康(180mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；第一天甲酰四氫葉酸(400mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；隨后在第一天IV團(tuán)注負(fù)荷劑量的5-FU(400mg/m2)，然后通過(guò)攜帶式泵在46小時(shí)IV注入5-FU(2,400-3,000mg/m2)，每2周重復(fù)一次。
·IFL(或Saltz)方案(依立替康、5-FU、甲酰四氫葉酸)·對(duì)于6周中的4周，每周IV團(tuán)注依立替康(125mg/m2)、5-FU(500mg/m2)，以及IV團(tuán)注甲酰四氫葉酸(20mg/m2)。
可用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氫葉酸的其它方案包括與5-FU和至少一種其它抗癌藥物的聯(lián)合應(yīng)用，包括，例如，用于治療胰腺癌的FOLFUGEM 1(甲酰四氫葉酸400mg/m2，聯(lián)合5-氟尿嘧啶(FU)團(tuán)注400mg/m2，然后5-FU 2-3g/m2/46小時(shí)，及30分鐘內(nèi)吉西他濱1000mg/m2)和FOLFUGEM 2(2小時(shí)內(nèi)甲酰四氫葉酸400mg/m2，隨后22小時(shí)內(nèi)5-FU 1000mg/m2，然后吉西他濱800mg/m2(10mg/m2/分鐘)，每14天循環(huán)一次)(如Andre等人在“Phase II study of leucovorin，5-fluorouracil，and gemcitabine for locally advanced and metastaticpancreatic cancer(FOLFUGEM 2)(適于局部晚期和轉(zhuǎn)移的胰腺癌的甲酰四氫葉酸、5-氟尿嘧啶和吉西他濱的II期研究(FOLFUGEM 2)).Gastroeneterol Clin Biol；2004 28645-650中所公開(kāi)的，在此引入作為參考，特別引入包括5-FU的癌癥治療方案的公開(kāi)作為參考)。
在另一實(shí)例中，5，10-CH2-THFA可代替還包括5-FU和左旋咪唑的聯(lián)合治療中的甲酰四氫葉酸(如Poplin等人在“Phase III SouthwestOncology Group 9415/Intergroup 0153 randomized trial of fluorouracil，leucovorin，and levamisole versus fluorouracil continuous infusion andlevamisole for adjuvant treatment of stage III and high-risk stage II coloncancer(用于III期和高危II期結(jié)腸癌的輔助治療的氟尿嘧啶、甲酰四氫葉酸和左旋咪唑與氟尿嘧啶連續(xù)輸注和左旋咪唑進(jìn)行對(duì)照的III期Southwest Oncology Group 9415/Intergroup 0153的隨機(jī)試驗(yàn)).”J.ClinOncol.2005 231819-25中所公開(kāi)的；在此引入作為參考，特別引入包括5-FU的癌癥治療方案的公開(kāi)作為參考)。
在另一實(shí)例中，5，10-CH2-THFA可代替還包括5-FU和長(zhǎng)春瑞濱的聯(lián)合治療中的甲酰四氫葉酸(如Yeh等人“Phase II study of weeklyvinorelbine and 24-hr infusion of high-dose 5-fluorouracil plus leucovorinas first-line treatment of advanced breast cancer(作為晚期乳腺癌的一線治療，每周長(zhǎng)春瑞濱和24小時(shí)輸注高劑量的5-氟尿嘧啶加甲酰四氫葉酸的II期研究).”Br.J.Cancer 2005 921013-8；在此引入作為參考，特別引入包括5-FU的癌癥治療方案的公開(kāi)作為參考)。
上述實(shí)例不應(yīng)以任何方式理解為對(duì)本發(fā)明的限制，例如，可對(duì)劑量和方案進(jìn)行改變和優(yōu)化以最小化對(duì)患者的毒性或改善有效性。另外，本發(fā)明未描述的許多抗癌藥物可與5，10-CH2-THFA和5-FU聯(lián)合使用。也可用5，10-CH2-THFA代替以下方案中的甲酰四氫葉酸，在該方案中5-FU和甲酰四氫葉酸與多于一種的另外的抗癌藥物聯(lián)合應(yīng)用。我們也包括將5，10-CH2-THFA用在與下一代形式的5-FU，尤其是口服形式的5-FU(如，希羅達(dá)、卡培他濱)和UFT的聯(lián)合治療中。
5，10-CH2-THFA的其它用途為與新類型的生物抗腫瘤試劑的聯(lián)合治療，如具有抗腫瘤活性的單克隆抗體?？膳c5，10-CH2-THFA(優(yōu)選地與5-FU)聯(lián)合的抗體實(shí)例包括抗VEGF抗體(例如，貝伐單抗或“阿瓦斯汀”)和抗EGF受體(例如，艾比特斯、西妥昔單抗、赫賽汀)。如實(shí)施例1和實(shí)施例2所示，與其它藥物組合相比，5-FU/5，10-CH2-THFA/阿瓦斯汀對(duì)裸小鼠中結(jié)腸直腸癌的聯(lián)合治療更能抑制腫瘤生長(zhǎng)。
因?yàn)楸景l(fā)明公開(kāi)的5，10-CH2-THFA具有較低毒性特征，本發(fā)明也包括5，10-CH2-THFA與通常被認(rèn)為具有非常高的毒性以致不適于廣泛應(yīng)用的藥物聯(lián)合應(yīng)用。例如，5-FU/5，10-CH2-THFA/順鉑治療就是這種組合。順鉑為基于鉑的化學(xué)治療劑，其具有高毒性。另外，5，10-CH2-THFA的較低毒性特征可允許增加藥物(如5-FU)的濃度或延長(zhǎng)服藥期。因而這可增加藥物有效性。
本發(fā)明也包括用5，10-CH2-THFA替換未采用5-FU的療法中的甲酰四氫葉酸(甲酰四氫葉酸)。例如，根據(jù)5，10-CH2-THFA比甲酰四氫葉酸(甲酰四氫葉酸)具有更低的毒性特征和增加的活性，5，10-CH2-THFA可用于甲氨喋呤救援治療。這種治療模式目前使用甲酰四氫葉酸。
V.增加包括5-FU的抗癌藥物治療方案的有效性的方法本發(fā)明還提供了通過(guò)同時(shí)以5，10-CH2-THFA給藥，來(lái)增加包括將5-FU或5-FU的類似物或前藥對(duì)癌癥患者給藥的抗癌藥物治療方案的有效性的方法。
在一方面，所述方法包括獲得包含5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥的抗癌藥物方案，并且將5，10-CH2-THFA加入該藥物方案中以增加該抗癌藥物方案的有效性。在本發(fā)明此方面的優(yōu)選實(shí)施方案中，在甲酰四氫葉酸(亞葉酸，F(xiàn)A)不存在時(shí)，以5-FU和5，10-CH2-THFA對(duì)患者給藥。增加包括以5-FU或其類似物或其前藥給藥的癌癥藥物治療有效性的方法包括在5-FU給藥之前、之后或同時(shí)，以5，10-CH2-THFA對(duì)患者進(jìn)行給藥以減少5-FU的毒性。優(yōu)選地，在5-FU給藥之前進(jìn)行5，10-CH2-THFA給藥。
在相關(guān)方面，本發(fā)明提供了通過(guò)將5，10-CH2-THFA加入對(duì)所述患者進(jìn)行給藥的抗癌藥物方案中以增加癌癥患者的存活能力的方法，所述抗癌藥物方案包括5-FU或5-FU的類似物或前藥。所述方法包括獲得包含5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥的抗癌藥物方案，將5，10-CH2-THFA加入該抗癌藥物方案中；以及用該改良的抗癌藥物方案治療癌癥患者。所述方法包括在5-FU給藥之前、之后或同時(shí)，以5，10-CH2-THFA對(duì)患者進(jìn)行給藥。在本發(fā)明此方面的優(yōu)選實(shí)施方案中，在甲酰四氫葉酸(亞葉酸，F(xiàn)A)不存在時(shí)，以5-FU和5，10-CH2-THFA對(duì)患者給藥。
癌癥患者可以是患有任何類型癌癥的患者。在以5，10-CH2-THFA對(duì)接受5-FU的癌癥患者進(jìn)行給藥的本發(fā)明的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，，該患者患有通常用5-FU治療的腫瘤類型，例如結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、乳腺癌、頭頸癌或胃癌。
通過(guò)諸如但不限于以下方法確定抗癌藥物方案的有效性治療后的腫瘤大小、腫瘤生長(zhǎng)(或收縮)率、癌細(xì)胞或標(biāo)志物的檢測(cè)、治療后緩和持續(xù)時(shí)間以及用該方案進(jìn)行治療的癌癥患者的存活能力。
癌癥治療和化學(xué)治療領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員能夠采用已充分建立的用于評(píng)估毒性和有效性的方案確定5，10-CH2-THFA和5-FU的最佳劑量和方案。一些用5-FU和5，10-CH2-THFA治療癌癥患者的優(yōu)選方案采用每m210毫克至1克的5，10-CH2-THFA，優(yōu)選每m220毫克至500毫克的5，10-CH2-THFA，且更優(yōu)選每m230毫克至250毫克的5，10-CH2-THFA。例如，5，10-CH2-THFA的優(yōu)選劑量可為30毫克至約120毫克每m2。上述劑量只是一般性的指導(dǎo)方針，其可根據(jù)以下因素來(lái)擴(kuò)展或改變，如癌癥類型和級(jí)別、患者年齡、健康狀況和性別、聯(lián)合應(yīng)用中使用的特定藥物、給藥途徑和頻率以及采用多藥聯(lián)合的實(shí)驗(yàn)和臨床發(fā)現(xiàn)。
5-FU的劑量可為25毫克至約5克每m2，并優(yōu)選約50毫克至2.5克每m2，且更優(yōu)選約100毫克至約1克每m2。例如，5-FU的優(yōu)選劑量可為250毫克至約700毫克每m2。上述劑量只是一般性的指導(dǎo)方針，其可根據(jù)以下因素來(lái)擴(kuò)展或改變，如癌癥類型和級(jí)別、患者年齡、健康狀況和性別、聯(lián)合應(yīng)用中使用的特定藥物、給藥途徑和頻率以及采用多藥聯(lián)合的實(shí)驗(yàn)和臨床發(fā)現(xiàn)。5-FU可以任何可行的方法給藥，包括注射或IV給藥。
在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，5-FU的前藥或類似物而不是5-FU本身用于聯(lián)合治療中。在患者的組織中，5-FU轉(zhuǎn)化為胸苷酸合成酶抑制劑5-氟-2’-脫氧尿苷酸(FdUMP)。在本申請(qǐng)中，“5-FU的前藥或類似物”用于指可直接或間接轉(zhuǎn)化為諸如FdUMP的胸苷酸合成酶抑制劑的類似物或前藥?？捎糜诒景l(fā)明所述方法的一種5-FU的前藥為N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)。在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明所述方法包括以N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)；5，10-CH2-THFA；和至少一種另外的抗癌藥物對(duì)癌癥患者給藥。卡培他濱的劑量可由熟練的臨床醫(yī)師確定并部分依賴于給藥的頻率。例如，卡培他濱的日劑量可為約500mg至約7500mg每m2，優(yōu)選為約1000mg至約5000mg每m2，且更優(yōu)選為約1500mg至約3000mg每m2?？蓪⑺鰟┝糠譃槊刻煲恢亮?優(yōu)選兩次)給藥。上述劑量只是一般性的指導(dǎo)方針，其可根據(jù)以下因素來(lái)擴(kuò)展或改變，如癌癥類型和級(jí)別、患者年齡、健康狀況和性別、聯(lián)合應(yīng)用中使用的特定藥物、給藥途徑和頻率以及采用多藥聯(lián)合的實(shí)驗(yàn)和臨床發(fā)現(xiàn)?？ㄅ嗨麨I可以任何可行的方法給藥，包括注射、IV給藥或以口服制劑形式給藥。
可用于本發(fā)明所述方法的類似物組合為稱為UFT的以1∶4的比例聯(lián)合使用的替加氟(TF)和尿嘧啶(U)。在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明所述方法包括以UFT；5，10-CH2-THFA；和至少一種另外的抗癌藥物對(duì)癌癥患者給藥。UFT的劑量可由熟練的臨床醫(yī)師確定并部分依賴于給藥的頻率。例如，UFT的日劑量可為約50mg至約3000mg每m2，優(yōu)選為約100mg至約2000mg每m2，且更優(yōu)選為約200mg至約1000mg每m2。包括UFT的抗癌方案也可任選地包括同UFT一起給藥的亞葉酸鈣。上述劑量只是一般性的指導(dǎo)方針，其可根據(jù)以下因素來(lái)擴(kuò)展或改變，如癌癥類型和級(jí)別、患者年齡、健康狀況和性別、聯(lián)合應(yīng)用中使用的特定藥物、給藥途徑和頻率以及采用多藥聯(lián)合的實(shí)驗(yàn)和臨床發(fā)現(xiàn)。UFT可以任何可行的方法給藥，包括注射、IV給藥或以口服制劑形式給藥。
使用卡培他濱的抗癌藥物方案的一些實(shí)例描述在Blum JL，等人“Multicenter phase II study of capecitabine in paclitaxel-refractorymetastatic breast cancer(卡培他濱在耐太平洋紫杉醇的轉(zhuǎn)移性乳腺癌中的多中心的II期研究).”J Clin Oncol 1999；17485-93；Hoff等人“Comparison of oral capecitabine versus intravenous fluorouracil plusleucovorin as first-line treatment in 605 patients with metastatic colorectalcancerresults of a randomized phase III study(在患有轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌的605名患者的一線治療中口服的卡培他濱與靜脈注射的氟尿嘧啶加甲酰四氫葉酸的比較隨機(jī)的III期研究結(jié)果).”J Clin Oncol2001；19(8)2282-92；和Van Cutsem E等人“Oral capecitabine comparedwith intravenous fluorouracil plus leucovorin in patients with metastaticcolorectal cancerresults of a large phase III study(在患有轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌的患者中口服的卡培他濱與靜脈注射的氟尿嘧啶加甲酰四氫葉酸的比較大規(guī)模的III期研究結(jié)果).”J Clin Oncol 2001；19(21)4097-106中進(jìn)行描述，在此將其全部引入作為參考，特別引入關(guān)于采用卡培他濱的化學(xué)治療方案的公開(kāi)。本發(fā)明包括在包括卡培他濱的方案中以5，10-CH2-THFA給藥以便減少卡培他濱治療的毒性。
例如，一種方案包括每天兩次給藥卡培他濱(1000-1250mg每m2)，持續(xù)兩周，隨后再休息一周時(shí)間，然后再進(jìn)一步進(jìn)行三周循環(huán)。可將5，10-CH2-THFA加入諸如此類的方案中，并且所述方案可根據(jù)關(guān)于毒性和有效性的臨床試驗(yàn)最優(yōu)化。
在此方面的其它優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括通過(guò)同時(shí)以5，10-CH2-THFA給藥來(lái)增加以下抗癌治療的有效性的方法，所述抗癌治療包括將5-FU或5-FU的類似物和前藥和至少一種另外的抗癌藥物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)對(duì)癌癥患者給藥。所述方法包括獲得包括5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥和至少一種另外的抗癌藥物的抗癌藥物方案，然后將5，10-亞甲基-四氫葉酸加入該抗癌藥物方案中以得到具有增加的有效性的抗癌藥物方案。
增加包括以5-FU或其類似物或其前藥和另外抗癌藥物給藥的癌癥藥物治療的有效性的方法，包括在5-FU(或其類似物或其前藥)給藥之前、之后或同時(shí)，以5，10-5，10-CH2-THFA對(duì)患者進(jìn)行給藥。優(yōu)選地，在5-FU給藥之前進(jìn)行5，10-CH2-THFA給藥?？稍?-FU給藥之前、之后或同時(shí)，進(jìn)行另外抗癌藥物給藥。
在相關(guān)方面，本發(fā)明提供了通過(guò)將5，10-CH2-THFA加入對(duì)患者進(jìn)行給藥的抗癌藥物方案中以增加癌癥患者的存活能力的方法，所述抗癌藥物方案包括5-FU或5-FU的類似物或前藥和至少一種另外的抗癌藥物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)。所述方法包括獲得包含5-FU或其類似物或其前藥和至少一種另外抗癌藥物的抗癌藥物方案；將5，10-CH2-THFA加入該抗癌藥物方案中；以及用該改進(jìn)的抗癌藥物方案治療癌癥患者。所述方法包括在5-FU給藥之前、之后或同時(shí)，以5，10-CH2-THFA對(duì)患者進(jìn)行給藥。在本發(fā)明此方面的優(yōu)選實(shí)施方案中，在甲酰四氫葉酸(亞葉酸，F(xiàn)A)不存在時(shí)，以5-FU和5，10-CH2-THFA對(duì)患者給藥?？稍?-FU給藥之前、之后和同時(shí)，以另外的抗癌藥物進(jìn)行給藥。
在本發(fā)明所述多藥方案中使用的一種或多種另外的抗癌藥物的劑量也可通過(guò)采用逐步增加劑量和監(jiān)測(cè)毒性和有效性的研究來(lái)確定。對(duì)于已獨(dú)立地用于化學(xué)治療方案中的聯(lián)合治療來(lái)說(shuō)，在確定欲用于該聯(lián)合治療中的抗癌藥物的劑量時(shí)，執(zhí)業(yè)醫(yī)生可考慮在已建立的化學(xué)治療方案中使用的藥物劑量。
將5-FU與一種或多種抗癌藥物(其不同于胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)聯(lián)合的多種化學(xué)治療方案在癌癥治療領(lǐng)域內(nèi)是眾所周知的。例如，包括5-FU與一種或多種另外的藥物(其不同于葉酸輔因子)的組合的抗癌方案包括但不限于包括環(huán)磷酰胺、表柔比星和氟尿嘧啶的用于乳腺癌的治療(參見(jiàn)，例如，Levine MN，Bramwell VH，Pritchard KI等人“Randomized trial of intensive cyclophosphamide，epirubicin，andfluorouracil chemotherapy compared with cyclophosphamide，methotrexate，and fluorouracil in premenopausal women withnode-positive breast cancer(在患有淋巴結(jié)陽(yáng)性乳腺癌的絕經(jīng)前婦女中，環(huán)磷酰胺、表柔比星和氟尿嘧啶的加強(qiáng)型化學(xué)治療與環(huán)磷酰胺、甲氨喋呤和氟尿嘧啶進(jìn)行對(duì)照的隨機(jī)試驗(yàn)).”J Clin Oncol 1998；16(8)2651-8；在此引入作為參考，特別是引入采用5-FU的抗癌方案的公開(kāi)作為參考)。包括5-FU與一種或多種另外的藥物(其不同于葉酸輔因子)的組合的抗癌方案也包括包含環(huán)磷酰胺、多柔比星和氟尿嘧啶的用于乳腺癌的治療(參見(jiàn)，例如，Bennett JM，Muss HB，Doroshaw JH，等人“A randomized multicenter trial comparing mitoxantrone，cyclophophamide，and fluorouracil with doxorubicin，cyclophosphamide，and fluorouracil in the therapy of metastatic breast cancer(在轉(zhuǎn)移性乳腺癌的治療中，米托蒽醌、環(huán)磷酰胺和氟尿嘧啶與多柔比星、環(huán)磷酰胺和氟尿嘧啶進(jìn)行對(duì)照的隨機(jī)多中心試驗(yàn)).”J Clin Oncol1988；6(10)1611-20；在此引入作為參考，特別是引入包括5-FU的抗癌方案的公開(kāi)作為參考)。5，10-CH2-THFA的加入可增加這些化學(xué)治療方案的有效性并改進(jìn)用該改良的方法進(jìn)行治療的患者的生存能力。
可加入5，10-CH2-THFA以增加治療有效性的抗癌方案的另一實(shí)例為包括采用絲裂霉素C和氟尿嘧啶的用于治療頭頸癌的方案，如KeaneTJ，Cummings BJ，O′Sullivan B，Payne D，Rawlinson E，MacKenzie R，Danjoux C，Hodson I在“A randomized trial of radiation therapycompared to split course radiation therapy combined with mitomycin Cand 5-fluorouracil as initial treatment for advanced laryngeal andhypopharyngeal squamous carcinoma(作為用于晚期喉及喉咽部鱗狀細(xì)胞癌的初始治療，放射治療與聯(lián)合絲裂霉素C和5-氟尿嘧啶的分段放射治療進(jìn)行對(duì)照的隨機(jī)試驗(yàn)).”IJ Radiation Oncology Biol Phys，199325(4)613-8中所公開(kāi)的，在此引入作為參考，特別是引入與采用5-FU的抗癌方案相關(guān)的公開(kāi)作為參考。在此情況下，所述抗癌治療方案除化學(xué)治療之外還包括放射治療。
可加入5，10-CH2-THFA以增加治療有效性的其它類型方案還為將5-FU與絲裂霉素C聯(lián)合的抗癌方案，例如在Keane TJ，Cummings BJ，O’Sullivan B，Payne D，Rawlinson E，MacKenzie R，Danjoux C，Hodson I.“A randomized trial of radiation therapy compared to split courseradiation therapy combined with mitomycin C and 5-fluorouracil as initialtreatment for advanced laryngeal and hypopharyngeal squamouscarcinoma(作為用于晚期喉及喉咽部鱗狀細(xì)胞癌的初始治療，放射治療與聯(lián)合絲裂霉素C和5-氟尿嘧啶的分段放射治療進(jìn)行對(duì)照的隨機(jī)試驗(yàn)).”IJ Radiation Oncology Biol Phys，199325(4)中所公開(kāi)的，在此引入作為參考，特別是引入與包括5-FU的抗癌方案相關(guān)的公開(kāi)作為參考，以及將卡鉑與5-FU聯(lián)合應(yīng)用的其它方案，如Calais G，Alfonsi M，Bardet E等人在“Randomized trial of radiation therapy versusconcomitant chemotherapy and radiation therapy for advanced-stageoropharynx carcinoma(作為用于晚期口咽癌的治療，放射治療與化學(xué)治療和放射治療共存進(jìn)行對(duì)比的隨機(jī)試驗(yàn)).”J Natl Cancer Inst 1999；912081-6中所公開(kāi)的，在此引入作為參考，特別是引入與采用5-FU的抗癌方案相關(guān)的公開(kāi)作為參考。在這些治療中，抗癌治療方案除化學(xué)治療之外還包括放射治療。
本發(fā)明包括通過(guò)同時(shí)以5，10-CH2-THFA給藥來(lái)增加包括5-FU的類似物或前藥和另外抗癌藥物(其不同于胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)的方案有效性的方法。包括卡培他濱和多烯紫杉醇的抗癌方案的實(shí)例由O’Shaughnessy J，等人在Superior survival with capecitabine plusdocetaxel combination therapy in anthracycline pre-treated patients withadvanced breast cancerphase III trial results(在用蒽環(huán)類化合物預(yù)處理的患有晚期乳腺癌的患者中，用卡培他濱加多烯紫杉醇的聯(lián)合治療進(jìn)行治療的患者具有出眾的存活能力III期試驗(yàn)結(jié)果).J Clin Oncol 2002；202812-23中所公開(kāi)，在此引入作為參考，特別是引入采用卡培他濱的抗癌方案的公開(kāi)作為參考。也可將5，10-CH2-THFA加入包括替加氟-尿嘧啶(UFT)與另外的癌癥藥物聯(lián)合的方案中，例如包括奧沙利鉑的方案中，如Feliu J.等人在“Phase II study of UFT and oxaliplatin infirst-line treatment of advanced colorectal cancer(UFT和奧沙利鉑在晚期結(jié)腸直腸癌的一線治療中的II期研究).”Br.J.Cancer 2004 911758-62中所公開(kāi)的，在此引入作為參考，特別是引入采用UFT的抗癌方案的公開(kāi)作為參考。
上述參考方案只是實(shí)例，且不應(yīng)以任何方式理解為對(duì)本發(fā)明的限制?？杉尤?，10-CH2-THFA以增加治療有效性的抗癌方案可從任何公認(rèn)的來(lái)源中獲得，包括科學(xué)和醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)，以及醫(yī)院、癌癥中心和臨床資源。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，在通過(guò)5，10-CH2-THFA給藥以增加方案的有效性方面，可對(duì)5-FU、5，10-CH2-THFA兩者之一或者兩者以及相關(guān)的一種或多種另外的抗癌藥物的劑量和時(shí)間方案進(jìn)行修改。這種修改可由監(jiān)測(cè)患者對(duì)治療反應(yīng)的經(jīng)訓(xùn)練的臨床醫(yī)師根據(jù)公認(rèn)的醫(yī)學(xué)實(shí)踐進(jìn)行。
在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括增加包括5-FU和胸苷酸合成酶的葉酸輔因子的抗癌藥物方案的有效性的方法，其中用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氫葉酸作為胸苷酸合成酶的輔因子。本發(fā)明包括增加抗癌藥物方案的有效性的方法，其中所述抗癌藥物方案包括5-FU和胸苷酸合成酶的葉酸輔因子，通過(guò)用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氫葉酸作為胸苷酸合成酶的輔因子而增加有效性。
在本發(fā)明此方面的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述方法包括獲得包含5-FU或其類似物或其前藥、甲酰四氫葉酸和另外抗癌藥物的抗癌藥物方案；并用5，10-CH2-THFA代替該藥物方案中的甲酰四氫葉酸以獲得具有改進(jìn)的有效性的藥物方案。
在相關(guān)方面，本發(fā)明提供了通過(guò)用5，10-5，10-CH2-THFA代替包括5-FU或5-FU的類似物或前藥的抗癌藥物方案中的甲酰四氫葉酸對(duì)患者給藥，以增加癌癥患者的存活能力的方法。所述方法包括獲得包含5-FU或其類似物或其前藥和甲酰四氫葉酸的抗癌藥物方案，用5，10-CH2-THFA代替該抗癌藥物方案中的甲酰四氫葉酸；以及用該改良的抗癌藥物方案治療癌癥患者。所述方法包括在5-FU給藥之前、之后或同時(shí)，以5，10-CH2-THFA對(duì)患者給藥。
在此方面的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括增加以下抗癌藥物方案的有效性的方法，所述抗癌藥物方案包括諸如但不限于卡培他濱或UFT的5-FU類似物或前藥和甲酰四氫葉酸，其中通過(guò)用5，10-CH2-THFA代替該方案中的甲酰四氫葉酸增加該方案的有效性。
本發(fā)明也提供了通過(guò)用5，10-5，10-CH2-THFA代替抗癌藥物方案中的甲酰四氫葉酸以增加癌癥患者的存活能力的方法，對(duì)所述患者進(jìn)行給藥的所述抗癌藥物方案包括5-FU的類似物或前藥，例如但不限于卡培他濱或UFT。
在此方面的一些優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括通過(guò)用5，10-5，10-CH2-THFA代替藥物方案中的甲酰四氫葉酸以增加抗癌治療對(duì)患者的有效性的方法，所述抗癌治療包括5-FU或5-FU的類似物或前藥、甲酰四氫葉酸和至少一種另外的抗癌藥物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)。所述方法包括獲得包含5-FU或其類似物或其前藥、甲酰四氫葉酸和至少一種另外的抗癌藥物的抗癌藥物方案；用5，10-CH2-THFA代替該抗癌藥物方案中的甲酰四氫葉酸。
在相關(guān)方面，本發(fā)明提供了通過(guò)用5，10-5，10-CH2-THFA代替抗癌藥物方案中的甲酰四氫葉酸以增加癌癥患者的存活能力的方法，對(duì)所述患者進(jìn)行給藥的所述抗癌藥物方案包括5-FU或5-FU的類似物或前藥和至少一種另外的抗癌藥物(其不同于5-FU或胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)。所述方法包括獲得包含5-FU或其類似物或其前藥、甲酰四氫葉酸和至少一種另外的抗癌藥物的抗癌藥物方案；用5，10-CH2-THFA代替該抗癌藥物方案中的甲酰四氫葉酸；以及用該改良的抗癌藥物方案治療癌癥患者。所述方法包括在5-FU給藥之前、之后或同時(shí)，以5，10-CH2-THFA對(duì)患者進(jìn)行給藥?？稍?-FU給藥之前、之后或同時(shí)，以另外抗癌藥物給藥。
因?yàn)榕c甲酰四氫葉酸相比，5，10-CH2-THFA具有抗腫瘤活性和減少的全身毒性，并且因?yàn)榧柞Ｋ臍淙~酸和5，10-CH2-THFA具有相似的化學(xué)和代謝途徑，所以發(fā)明人考慮在目前的一系列化學(xué)治療方案內(nèi)，可用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氫葉酸。目前通常用于與5-FU加甲酰四氫葉酸聯(lián)合的藥物的非限制性實(shí)例為依立替康(GPT-11)、奧沙利鉑、吉西他濱、左旋咪唑、絲裂霉素C和長(zhǎng)春瑞濱。本發(fā)明包括用5，10-CH2-THFA代替這些方案中的甲酰四氫葉酸的治療。用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氫葉酸可提供增強(qiáng)的治療作用及減少的毒性。作為非限制性實(shí)例，可用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氫葉酸的目前的聯(lián)合用藥方案包括
·AIO方案(亞葉酸、5-FU、依立替康)·第一天依立替康(100mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；第一天甲酰四氫葉酸(500mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；隨后通過(guò)攜帶式泵在24小時(shí)靜脈(IV)團(tuán)注5-FU(2,000mg/m2)24小時(shí)，連續(xù)四周，每52周重復(fù)一次。
·Douillard方案(亞葉酸、5-FU、依立替康)·第一天依立替康(180mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；第一天和第二天甲酰四氫葉酸(200mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；隨后IV團(tuán)注負(fù)荷劑量的5-FU(400mg/m2)，然后在第一天和第二天通過(guò)攜帶式泵在22小時(shí)IV注入5-FU(600mg/m2)，每2周重復(fù)一次。
·FOLFOX4方案(奧沙利鉑、甲酰四氫葉酸、5-FU)·第一天奧沙利鉑(85mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；第一天和第二天甲酰四氫葉酸(200mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；隨后IV團(tuán)注負(fù)荷劑量的5-FU(400mg/m2)，然后在第一天和第二天通過(guò)攜帶式泵在22小時(shí)IV注入5-FU(600mg/m2)，每2周重復(fù)一次。
·FOLFOX6方案(奧沙利鉑、甲酰四氫葉酸、5-FU)·第一天奧沙利鉑(85-100mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；第一天甲酰四氫葉酸(400mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；隨后在第一天IV團(tuán)注負(fù)荷劑量的5-FU(400mg/m2)，然后通過(guò)攜帶式泵在46小時(shí)IV注入5-FU(2,400-3,000mg/m2)，每2周重復(fù)一次。
·FOLFIRI方案(亞葉酸、5-FU、依立替康)·第一天依立替康(180mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；第一天甲酰四氫葉酸(400mg/m2)進(jìn)行2小時(shí)輸注；隨后在第一天IV團(tuán)注負(fù)荷劑量的5-FU(400mg/m2)，然后通過(guò)攜帶式泵在46小時(shí)IV注入5-FU(2,400-3,000mg/m2)，每2周重復(fù)一次。
·IFL(或Saltz)方案(依立替康、5-FU、甲酰四氫葉酸)·對(duì)于6周中的4周，每周IV團(tuán)注依立替康(125mg/m2)、5-FU(500mg/m2)，以及IV團(tuán)注甲酰四氫葉酸(20mg/m2)。
可用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氫葉酸的其它方案包括與5-FU和至少一種其它抗癌藥物的聯(lián)合應(yīng)用，包括，例如，用于治療胰腺癌的FOLFUGEM 1(甲酰四氫葉酸400mg/m2，聯(lián)合5-氟尿嘧啶(FU)團(tuán)注400mg/m2，然后5-FU 2-3g/m2/46小時(shí)，及30分鐘內(nèi)吉西他濱1000mg/m2和FOLFUGEM 2(2小時(shí)內(nèi)甲酰四氫葉酸400mg/m2，隨后22小時(shí)內(nèi)5-FU 1000mg/m2，然后吉西他濱800mg/m2(10mg/m2/分鐘)，每14天循環(huán)一次)(如Andre等人在“Phase II study of leucovorin，5-fluorouracil，and gemcitabine for locally advanced and metastaticpancreatic cancer(FOLFUGEM 2)(適于局部晚期和轉(zhuǎn)移的胰腺癌的甲酰四氫葉酸、5-氟尿嘧啶和吉西他濱的II期研究(FOLFUGEM 2)).Gastroeneterol Clin Biol；2004 28645-650中所公開(kāi)的，在此引入作為參考，特別引入包括5-FU的癌癥治療方案的公開(kāi)作為參考)。
在另一實(shí)例中，5，10-CH2-THFA可代替還包括5-FU和左旋咪唑的聯(lián)合治療中的甲酰四氫葉酸(如Poplin等人在“Phase III SouthwestOncology Group 9415/Intergroup 0153 randomized trial of fluorouracil，leucovorin，and levamisole versus fluorouracil continuous infusion andlevamisole for adjuvant treatment of stage III and high-risk stage II coloncancer(在用于III期和高危II期結(jié)腸癌的輔助治療中，氟尿嘧啶、甲酰四氫葉酸和左旋咪唑與氟尿嘧啶連續(xù)輸注和左旋咪唑進(jìn)行對(duì)照的III期Southwest Oncology Group 9415/Intergroup 0153的隨機(jī)試驗(yàn)).”J.Clin Oncol.2005 231819-25中所公開(kāi)的；在此引入作為參考，特別引入采用5-FU的癌癥治療方案的公開(kāi)作為參考)。
在另一實(shí)例中，5，10-CH2-THFA可代替還包括5-FU和長(zhǎng)春瑞濱的聯(lián)合治療中的甲酰四氫葉酸(如Yeh等人“Phase II study of weeklyvinorelbine and 24-hr infusion of high-dose 5-fluorouracil plus leucovorinas first-line treatment of advanced breast cancer(作為晚期乳腺癌的一線治療，每周長(zhǎng)春瑞濱和24小時(shí)輸注高劑量的5-氟尿嘧啶加甲酰四氫葉酸的II期研究).”Br.J.Cancer 2005 921013-8；在此引入作為參考，特別引入包括5-FU的癌癥治療方案的公開(kāi)作為參考)。
上述實(shí)例不應(yīng)以任何方式理解為對(duì)本發(fā)明的限制，例如，可對(duì)劑量和方案進(jìn)行改變和優(yōu)化以最小化對(duì)患者的毒性或改善有效性。另外，本發(fā)明未描述的許多抗癌藥物可與5，10-CH2-THFA和5-FU聯(lián)合使用。也可用5，10-CH2-THFA代替以下方案中的甲酰四氫葉酸，在該方案中5-FU和甲酰四氫葉酸與多于一種的另外的抗癌藥物聯(lián)合應(yīng)用。我們也建議5，10-CH2-THFA與下一代形式的5-FU，尤其是口服形式的5-FU(如，希羅達(dá)、卡培他濱)和UFT用于聯(lián)合治療中。
5，10-CH2-THFA的其它用途為與新類型的生物抗腫瘤試劑的聯(lián)合治療，如具有抗腫瘤活性的單克隆抗體?？膳c5，10-CH2-THFA(優(yōu)選地與5-FU)聯(lián)合的抗體實(shí)例包括抗VEGF抗體(例如，阿瓦斯汀或貝伐單抗)和抗EGF受體(例如，艾比特斯、西妥昔單抗、赫賽汀)。如實(shí)施例1和實(shí)施例2所示，與其它藥物組合相比，5-FU/5，10-CH2-THFA/阿瓦斯汀對(duì)裸小鼠中結(jié)腸直腸癌的聯(lián)合治療更能抑制腫瘤生長(zhǎng)。
在將5，10-CH2-THFA加入包括5-FU(或其類似物或其前藥)和另外的抗癌藥物的治療方案中的方法的其它方面，發(fā)明人考慮相對(duì)于在包括5-FU的方案中另外的抗癌藥物通常使用的劑量，可將一種或多種另外抗癌藥物中的至少一種抗癌藥物以增加的劑量給藥。因此，本發(fā)明包括通過(guò)將5，10-CH2-THFA加入藥物方案中并增加一種或多種另外抗癌藥物中的至少一種抗癌藥物的劑量來(lái)增加抗癌藥物方案的有效性，所述抗癌藥物方案包括5-FU和至少一種另外的抗癌藥物(其不同于5-FU，或胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)。所述方法包括獲得包括5-FU或5-FU的類似物或前藥和至少一種另外的抗癌藥物(其不同于5-FU或5-FU的類似物或前藥或胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)的抗癌藥物方案；將5，10-CH2-THFA加入該抗癌藥物方案中；以及增加在該抗癌藥物方案中的一種或多種另外抗癌藥物的劑量。在此方面，將5，10-CH2-THFA加入該抗癌方案中且同時(shí)增加另外抗癌藥物的劑量可增加治療的有效性，且可能不增加毒性。
在相關(guān)方面，本發(fā)明包括通過(guò)將5，10-CH2-THFA加入抗癌方案中并增加在該方案中的一種或多種另外抗癌藥物中的至少一種抗癌藥物的劑量，以增加癌癥患者的存活能力的方法，所述抗癌方案包括5-FU和一種或多種另外的抗癌藥物(其不同于5-FU或5-FU的類似物或前藥或胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)將5-FU與一種或多種抗癌藥物(其不同于胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)聯(lián)合的多種化學(xué)治療方案在癌癥治療領(lǐng)域內(nèi)是眾所周知的。例如，本申請(qǐng)中引用的方案包括將5-FU與環(huán)磷酰胺、表柔比星、docorubicin、卡鉑或絲裂霉素C聯(lián)合的方案。這些實(shí)例不以任何方式對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限制。在癌癥治療領(lǐng)域內(nèi)公知的或在將來(lái)使用的、將5-FU與這些或其它抗癌藥物聯(lián)合應(yīng)用的其它方案也可通過(guò)包含5，10-CH2-THFA并增加一種或多種另外抗癌藥物中的至少一種抗癌藥物的劑量來(lái)進(jìn)行修改。
本發(fā)明包括通過(guò)同時(shí)以5，10-CH2-THFA給藥增加以下方案的有效性的方法，所述方案包括5-FU和至少一種另外的抗癌藥物(其不同于胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)。包括卡培他濱和多烯紫杉醇的抗癌方案和包括UFT和奧沙利鉑的抗癌方案作為方案的非限制性實(shí)例在此引用，該方案可通過(guò)包含5，10-CH2-THFA并增加另外抗癌藥物中的劑量來(lái)進(jìn)行修改。
上述參考方案只是實(shí)例，且不應(yīng)以任何方式理解為對(duì)本發(fā)明的限制?？杉尤?，10-CH2-THFA的抗癌方案可從任何公知的來(lái)源中獲得，包括科學(xué)和醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)，以及醫(yī)院、癌癥中心和臨床資源?？筛鶕?jù)監(jiān)測(cè)毒性和有效性的已建立的方案實(shí)施劑量遞增研究。在優(yōu)化抗癌治療方案中，對(duì)5-FU、5，10-CH2-THFA兩者之一或兩者以及一種或多種另外抗癌藥物的劑量和時(shí)間表進(jìn)行修改也是在本發(fā)明的范圍內(nèi)。這些修改可由監(jiān)測(cè)患者對(duì)治療反應(yīng)的有經(jīng)驗(yàn)的臨床醫(yī)師根據(jù)公認(rèn)的醫(yī)學(xué)實(shí)踐來(lái)進(jìn)行。
在另一相關(guān)方面，本發(fā)明提供了通過(guò)用5，10-CH2-THFA替換以下方案中的甲酰四氫葉酸并增加至少一種另外抗癌藥物的劑量，以增加抗癌藥物方案的有效性的方法，所述抗癌藥物方案包括5-FU或5-FU的類似物或前藥、甲酰四氫葉酸和至少一種另外的抗癌藥物。所述方法包括獲得包括5-FU或5-FU的類似物或前藥、甲酰四氫葉酸和至少一種另外的抗癌藥物(其不同于5-FU或5-FU的類似物或前藥或胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)的抗癌藥物方案；用5，10-CH2-THFA代替該抗癌藥物方案中的甲酰四氫葉酸；并增加該抗癌藥物方案中的至少一種另外抗癌藥物的劑量。在此方面，用5，10-CH2-THFA代替該方案中的甲酰四氫葉酸且同時(shí)增加該方案中使用的另外抗癌藥物的劑量可增加治療的有效性，且可能不增加毒性。
在相關(guān)方面，本發(fā)明包括通過(guò)用5，10-CH2-THFA代替抗癌方案中的甲酰四氫葉酸并增加在該方案中使用的一種或多種另外抗癌藥物中的至少一種抗癌藥物的劑量，以增加癌癥患者的存活能力的方法，所述抗癌方案包括5-FU和一種或多種另外的抗癌藥物(其不同于5-FU或5-FU的類似物或前藥或胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)將5-FU和甲酰四氫葉酸與一種或多種抗癌藥物(其不同于胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)聯(lián)合的多種化學(xué)治療方案在癌癥治療領(lǐng)域內(nèi)是眾所周知的。例如，本申請(qǐng)中引用的方案包括將5-FU與吉西他濱、長(zhǎng)春瑞濱、左旋咪唑、依立替康、奧沙利鉑或絲裂霉素C聯(lián)合的方案。這些實(shí)例不以任何方式對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限制。在癌癥治療領(lǐng)域內(nèi)公知的或在將來(lái)使用的、將5-FU與這些或其它抗癌藥物聯(lián)合應(yīng)用的其它方案也可通過(guò)用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氫葉酸并增加一種或多種另外抗癌藥物中的至少一種抗癌藥物的劑量來(lái)進(jìn)行修改。
本發(fā)明包括通過(guò)用5，10-CH2-THFA進(jìn)行代替并增加另外抗癌藥物的劑量，以增加方案的有效性的方法，所述方案包括5-FU的類似物或前藥、甲酰四氫葉酸和至少一種另外的抗癌藥物(其不同于胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)。
上述參考方案只是實(shí)例，且不應(yīng)以任何方式理解為對(duì)本發(fā)明的限制。包含多種抗癌藥物的、可用5，10-CH2-THFA代替甲酰四氫葉酸的抗癌方案可從任何公知的來(lái)源中獲得，包括科學(xué)和醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)以及醫(yī)院、癌癥中心和臨床資源?？筛鶕?jù)監(jiān)測(cè)毒性和有效性的已建立的方案實(shí)施劑量遞增研究。在優(yōu)化抗癌治療方案中，對(duì)5-FU、5，10-CH2-THFA兩者之一或兩者以及一種或多種另外抗癌藥物的劑量和時(shí)間表進(jìn)行修改也是在本發(fā)明的范圍內(nèi)。這些修改可由監(jiān)測(cè)患者對(duì)治療反應(yīng)的有經(jīng)驗(yàn)的臨床醫(yī)師根據(jù)公認(rèn)的醫(yī)學(xué)實(shí)踐來(lái)進(jìn)行。
發(fā)明人也關(guān)注當(dāng)將5，10-CH2-THFA加入藥物方案時(shí)，相對(duì)于通常用于聯(lián)合治療中的劑量，可將5-FU以增加的劑量給藥。因此，本發(fā)明包括通過(guò)增加在治療癌癥的藥物方案中使用的5-FU劑量來(lái)增加抗癌藥物方案的有效性的方法，所述抗癌藥物方案包括5-FU(或其類似物或其前藥)和另外的抗癌藥物(其不同于胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)，所述方法通過(guò)將5，10-CH2-THFA加入該藥物方案中而實(shí)現(xiàn)。所述方法包括獲得包括5-FU或5-FU的類似物或前藥和至少一種另外的抗癌藥物(其不同于胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)的抗癌藥物方案；將5，10-CH2-THFA加入該抗癌藥物方案中；以及增加該抗癌藥物方案中的5-FU劑量。在此方面，將5，10-CH2-THFA加入所述抗癌方案中且同時(shí)增加該方案中使用的5-FU劑量可增加治療的有效性，且可能不增加毒性。
在另一相關(guān)方面，本發(fā)明提供了通過(guò)用5，10-CH2-THFA替換甲酰四氫葉酸增加抗癌藥物方案中的5-FU劑量的方法，所述抗癌藥物方案包括5-FU或5-FU的類似物或前藥、甲酰四氫葉酸和另外的抗癌藥物。所述方法包括獲得包括5-FU或5-FU的類似物或前藥、甲酰四氫葉酸和至少一種另外的抗癌藥物(其不同于胸苷酸合成酶的葉酸輔因子)；用5，10-CH2-THFA代替該抗癌藥物方案中的甲酰四氫葉酸；以及增加該抗癌藥物方案中的5-FU(或其類似物或其前藥)劑量。在此方面，用5，10-CH2-THFA代替所述抗癌方案中的甲酰四氫葉酸且同時(shí)增加該方案中使用的5-FU劑量可增加治療的有效性，且可能不增加毒性。
實(shí)施例實(shí)施例1關(guān)于使用5-FU、5，10-CH2-THFA、甲酰四氫葉酸、抗VEGF和奧沙利鉑治療結(jié)腸直腸腫瘤HT-29的裸小鼠研究材料和方法小鼠裸(nu/nu)小鼠得自Charles River實(shí)驗(yàn)室。在所有的研究開(kāi)始時(shí)，小鼠均為6-8周齡。將小鼠飼養(yǎng)在LAB國(guó)際動(dòng)物飼養(yǎng)所(San Diego，CA)中的隔離的、高效微?？諝膺^(guò)濾器(hepa-filter)通風(fēng)的籠子內(nèi)，每只籠子中飼養(yǎng)4只小鼠。
細(xì)胞系人結(jié)腸癌HT-29得自美國(guó)組織培養(yǎng)物收藏所(American TissueCulture Collection)(ATCC)。將細(xì)胞系維持在37℃，5％CO2增濕的培養(yǎng)箱內(nèi)的含10％胎牛血清(FBS)、2mM 1-谷氨酰胺、100單位/ml青霉素和100微克/ml鏈霉素的DMEM(DMEM-10)中。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)前，細(xì)胞系每2-3天進(jìn)行傳代。
藥物5-氟尿嘧啶(5-FU)得自Calbiochem。甲酰四氫葉酸(leucovorin)和奧沙利鉑得自Sigma-Aldrich。5，10-CH2-THFA由Eprova AG生產(chǎn)。針對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的單克隆抗體(抗VEGF)得自R&D Systems(識(shí)別人VEGF異體形式(isoform)165的克隆26530)或Genentech(阿瓦斯汀)。
HT-29結(jié)腸直腸癌裸小鼠研究#1以如下方式制備注射用的HT-29細(xì)胞。用PBS洗滌鋪滿組織培養(yǎng)瓶的HT-29細(xì)胞一次，隨后用胰蛋白酶進(jìn)行細(xì)胞分離。分離的細(xì)胞然后在DMEM-10中洗滌一次，接著用PBS洗滌一次。最后，以2×107細(xì)胞/ml將細(xì)胞重懸于PBS中。采用28規(guī)格的胰島素針/注射器，以100微升(2×106細(xì)胞)HT-29細(xì)胞對(duì)裸小鼠(nu/nu)進(jìn)行皮下接種。當(dāng)腫瘤體積達(dá)到100至300mm3時(shí)，通過(guò)腹膜內(nèi)注射給藥，用5-FU、5，10-CH2-THFA、甲酰四氫葉酸、奧沙利鉑和抗-VEGF(R&D Systems抗體)的多種組合對(duì)小鼠進(jìn)行治療。除了抗-VEGF和奧沙利鉑以外，所有藥物均每日給藥(0.6mg/小鼠/藥物)，連續(xù)給藥五天?？?VEGF在第五天時(shí)給藥一次(100微克/小鼠)。奧沙利鉑在第一天時(shí)給藥一次(0.3mg/小鼠)。另外，在5-FU注射前20分鐘，注射5，10-CH2-THFA或甲酰四氫葉酸。每2至3天，使用測(cè)徑器測(cè)量腫瘤大小。使用以下公式計(jì)算腫瘤體積腫瘤體積＝(長(zhǎng)×寬2)/2。當(dāng)腫瘤直徑＞2cm或者腫瘤潰瘍時(shí)，使用CO2對(duì)小鼠進(jìn)行無(wú)痛處死，接著進(jìn)行頸脫位。
數(shù)據(jù)分析采用GraphPad Prism科學(xué)軟件對(duì)腫瘤和血的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。進(jìn)行Bonferonni′s T檢驗(yàn)比較多組之間的腫瘤大小。Logrank檢驗(yàn)用于測(cè)定組存活曲線之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在一些情況中，其中只有兩組進(jìn)行比較，Student′s T檢驗(yàn)用于測(cè)定組測(cè)量結(jié)果之間的顯著性。
結(jié)果用如表2的藥物組合治療裸小鼠。在此研究中，我們希望檢驗(yàn)5-FU/5，10-CH2-THFA與奧沙利鉑或抗-VEGF(得自R&D Systems)聯(lián)合治療是否可以比其它藥物組合更能夠抑制結(jié)腸直腸腫瘤生長(zhǎng)。藥物濃度和治療天數(shù)已在“材料和方法”部分中描述。治療之后，每2-3天測(cè)量一次腫瘤大小并計(jì)算腫瘤體積。然后以腫瘤體積對(duì)從治療開(kāi)始時(shí)的時(shí)間進(jìn)行繪圖(圖1及2)。為了簡(jiǎn)化該圖，我們將分析分為含有抗-VEGF數(shù)據(jù)的圖及另一副含有奧沙利鉑數(shù)據(jù)的圖。計(jì)算每個(gè)治療組的最佳擬合曲線并繪在這些圖中。如圖1可見(jiàn)，以5-FU/5，10-CH2-THFA/抗-VEGF治療的小鼠具有最慢的腫瘤生長(zhǎng)曲線，接下來(lái)是以5-FU/5，10-CH2-THFA或以5-FU/抗VEGF治療的小鼠。
表2小鼠治療組
我們還分析了在治療之后平均腫瘤體積之間的差異。比較了抗-VEGF組數(shù)據(jù)的多種治療組合(圖3)，我們觀察到用5-FU/5，10-CH2-THFA/抗-VEGF治療的小鼠的平均腫瘤體積(478.6±102.7，平均值±SEM，n＝7)小于用5-FU(752.5±104.2，n＝8)、5-FU/甲酰四氫葉酸(707.5±93.6，n＝8)、5-FU/5，10-CH2-THFA(522.5±78.2，n＝8)及用5-FU/抗-VEGF(502.5±64.1，n＝8)治療的小鼠。用奧沙利鉑治療的小鼠具有最大的腫瘤(腫瘤體積為875.0±90.6，平均值±SEM，n＝8)(圖4)，這表明HT-29腫瘤對(duì)此藥物無(wú)反應(yīng)(見(jiàn)Plasencia等人(2002)American Society for Clinical Oncology Annual MeetingAbstract No.2188.)。當(dāng)與在任何抗-VEGF組合中具有最小腫瘤大小的用5-FU/5，10-CH2-THFA/抗-VEGF三聯(lián)組合治療的小鼠(圖3)相比，HT-29腫瘤對(duì)奧沙利鉑的抗藥性可能解釋了在接受5FU/5，10-CH2-THFA/奧沙利鉑(735.0±80.3，n＝8)(圖4)三聯(lián)藥物組合的治療組中，缺少等效的腫瘤抑制作用。
還計(jì)算了所有治療組的小鼠存活曲線。當(dāng)出現(xiàn)明顯的全身毒性、腫瘤潰瘍，或當(dāng)腫瘤直徑＞2cm時(shí)，小鼠被無(wú)痛處死。當(dāng)研究期(42天)結(jié)束以后，75％的用5-FU/5，10-CH2-THFA治療的小鼠仍然存活(圖5)。此存活期明顯比僅用5-FU治療的小鼠(25％，p＜0.05，Logrank檢驗(yàn))的存活期長(zhǎng)。除了用5-FU/5，10-CH2-THFA治療的小鼠之外，用5-FU/5，10-CH2-THFA/抗-VEGF治療的小鼠(57％)比所有其它治療組的小鼠存活時(shí)間都更長(zhǎng)。用5-FU/5，10-CH2-THFA/奧沙利鉑治療的小鼠(25％)(圖6)與其它治療組相比缺乏保護(hù)，這最可能歸因于HT-29腫瘤對(duì)奧沙利鉑有明顯的耐藥性(圖3)。對(duì)于奧沙利鉑治療亞組分析，5-FU/5，10-CH2-THFA治療組提供了最大的存活益處。
實(shí)施例2關(guān)于采用5-FU、5，10-CH2-THFA，F(xiàn)A和抗VEGF治療結(jié)腸直腸腫瘤HT-29的裸小鼠研究材料和方法小鼠裸(nu/nu)小鼠得自Charles River實(shí)驗(yàn)室。在所有的研究開(kāi)始時(shí)，小鼠均為6-8周齡。將小鼠飼養(yǎng)在LAB國(guó)際的動(dòng)物飼養(yǎng)所(San Diego，CA)中的隔離的、高效微?？諝膺^(guò)濾器通風(fēng)的籠子內(nèi)，每只籠子中飼養(yǎng)4只小鼠。
細(xì)胞系人結(jié)腸癌HT-29得自美國(guó)組織培養(yǎng)物收藏所(ATCC)。將細(xì)胞系維持在37℃，5％CO2增濕的培養(yǎng)箱內(nèi)的含10％胎牛血清(FBS)、2mM 1-谷氨酰胺、100單位/ml青霉素和100微克/ml鏈霉素的DMEM(DMEM-10)中。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)前，細(xì)胞系每2-3天進(jìn)行傳代。
藥物5-氟尿嘧啶(5-FU)得自Calbiochem。甲酰四氫葉酸(leucovorin)和奧沙利鉑得自Sigma-Aldrich。5，10-CH2-THFA由Eprova AG生產(chǎn)。對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的單克隆抗體(抗VEGF)得自R&D Systems(識(shí)別人VEGF異體形式165的克隆26530)或Genentech(阿瓦斯汀)。
HT-29結(jié)腸直腸癌裸小鼠研究#2以如下方式制備注射用的HT-29細(xì)胞。用PBS洗滌鋪滿組織培養(yǎng)瓶的HT-29細(xì)胞一次，隨后用胰蛋白酶進(jìn)行細(xì)胞分離。然后分離的細(xì)胞在DMEM-10中洗滌一次，接著用PBS洗滌一次。最后，以1×107細(xì)胞/ml將細(xì)胞重新混懸于PBS中。采用28規(guī)格的胰島素針/注射器，以100微升(106細(xì)胞)HT-29細(xì)胞對(duì)裸小鼠(nu/nu)進(jìn)行皮下接種。當(dāng)腫瘤體積達(dá)到100至300mm3時(shí)，通過(guò)腹膜內(nèi)注射給藥，用5-FU、5，10-CH2-THFA、甲酰四氫葉酸和抗-VEGF(Genentech’s阿瓦斯汀抗體)的多種組合對(duì)小鼠進(jìn)行治療。除了抗-VEGF在第一天和第七天給藥兩次(100微克/小鼠)以外，所有藥物均每日給藥(0.6mg/小鼠/藥物)，連續(xù)給藥七天。另外，在5-FU注射前20分鐘，注射5，10-CH2-THFA或甲酰四氫葉酸。每2至3天，使用測(cè)徑器測(cè)量腫瘤的大小。使用以下公式計(jì)算腫瘤體積腫瘤體積＝(長(zhǎng)×寬2)/2。當(dāng)腫瘤直徑＞2cm或者腫瘤潰瘍時(shí)，使用CO2對(duì)小鼠進(jìn)行無(wú)痛處死，接著進(jìn)行頸脫位。
數(shù)據(jù)分析采用GraphPad Prism科學(xué)軟件對(duì)腫瘤和血的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。進(jìn)行Bonferonni’s T檢驗(yàn)用于比較多組之間的腫瘤大小。Logrank檢驗(yàn)用于測(cè)定組存活曲線之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在一些情況中，其中只有兩組進(jìn)行比較，Student’s T檢驗(yàn)用于測(cè)定組測(cè)量結(jié)果之間的顯著性。
結(jié)果根據(jù)上述第一次裸小鼠研究中獲得的試驗(yàn)結(jié)果，我們重復(fù)了另一次HT-29裸小鼠研究，在研究設(shè)計(jì)上進(jìn)行了一些修改。修改包括更大的組規(guī)模，用Genentech’s的抗-VEGF阿瓦斯汀抗體代替了R&DSystem的抗體，排除奧沙利鉑，增加治療天數(shù)，以及增加抗-VRGF抗體的劑量數(shù)。用如表3所述的藥物組合治療裸小鼠。在此次研究中，我們想檢驗(yàn)5-FU/5，10-CH2-THFA與抗-VEGF抗體阿瓦斯汀的聯(lián)合治療是否比其它藥物組合更能抑制結(jié)腸直腸腫瘤生長(zhǎng)。藥物濃度和治療天數(shù)已在“材料和方法”部分?jǐn)⑹?。治療之后，?-3天測(cè)量一次腫瘤大小并計(jì)算腫瘤體積。然后以腫瘤體積對(duì)從治療開(kāi)始時(shí)的時(shí)間進(jìn)行繪圖(圖7)。計(jì)算每個(gè)治療組的最佳擬合曲線并繪在此圖中。根據(jù)最佳擬合曲線分析，計(jì)算每組的平均倍增時(shí)間(表4)。與所有其它組相比，用5-FU/5，10CH2-THFA/阿瓦斯汀的組合治療的小鼠表現(xiàn)出最慢的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)(倍增時(shí)間＝9.9天)。這些結(jié)果與先前描述的第一次裸小鼠腫瘤研究中得到的結(jié)果相一致。
表3小鼠治療組
表4腫瘤倍增時(shí)間
我們還分析了在治療開(kāi)始后19天時(shí)確定的平均腫瘤體積之間的差異。平均腫瘤體積±SEM繪于圖8中。我們觀察到用5-FU/5，10-CH2-THFA/阿瓦斯汀治療的小鼠的平均腫瘤體積(94.0±10.2，平均值±SEM，n＝12)明顯小于(p＜0.05，Bonferonni’s T檢驗(yàn))用5-FU(368.5±63.7，n＝10)、5-FU/甲酰四氫葉酸(262.0±36.5，n＝11)、5-FU/5，10-CH2-THFA(225.4±32.0，n＝12)、5-FU/阿瓦斯汀(225.5±28.8，n＝12)治療的小鼠，但并不明顯小于用5-FU/甲酰四氫葉酸/阿瓦斯汀(140.8±20.3，n＝12)治療的小鼠。相反，5-FU/甲酰四氫葉酸/阿瓦斯汀治療的小鼠的平均腫瘤體積只明顯小于5-FU治療的小鼠的腫瘤體積，而并不明顯小于其它治療組。
還計(jì)算了所有治療組的小鼠存活曲線。當(dāng)出現(xiàn)明顯的全身毒性、腫瘤潰瘍，或當(dāng)腫瘤直徑＞2cm時(shí)，小鼠被無(wú)痛處死。在研究完成前(從治療開(kāi)始起38天)，≤50％的用鹽水、5-FU、或5-FU加阿瓦斯汀治療的小鼠依然存活(圖9)。相反，92％的用5-FU加阿瓦斯汀與5，10-CH2-THFA或者與甲酰四氫葉酸的組合治療的小鼠依然存活。多種藥物組合的存活模式與上述的第一次裸小鼠結(jié)腸直腸腫瘤研究中得到的結(jié)果相似。
實(shí)施例3用5-FU、甲酰四氫葉酸和5，10-CH2-THFA的組合處理的Balb/c小鼠的血液分析材料和方法小鼠Balb/c小鼠得自Charles River實(shí)驗(yàn)室。在所有的研究開(kāi)始時(shí)，小鼠均為6-8周齡。將小鼠飼養(yǎng)在LAB國(guó)際動(dòng)物飼養(yǎng)所(San Diego，CA)中的隔離的、高效微?？諝膺^(guò)濾器通風(fēng)的籠子內(nèi)，每只籠子中飼養(yǎng)4只小鼠。
藥物5-氟尿嘧啶(5-FU)得自Calbiochem。甲酰四氫葉酸(亞葉酸)得自Sigma-Aldrich。5，10-亞甲基四氫葉酸(5，10-CH2-THFA)由Eprova AG生產(chǎn)。
Balb/c血液分析研究用5-FU、甲酰四氫葉酸和5，10-CH2-THFA的組合對(duì)Balb/c小鼠(7周齡的雌性小鼠)連續(xù)注射7天。采用28規(guī)格的胰島素針/注射器將全部藥物進(jìn)行腹膜內(nèi)注射(100微升/小鼠，0.6mg/小鼠/藥物)。在第0天(藥物注射前)、第8天和第13天時(shí)通過(guò)眶后穿刺，用EDTA涂布的微量采血管(VWR International)采集200-250微升血/小鼠。由LabcorpCorporation of America采用Bayer Advia 120血液學(xué)分析儀確定全血細(xì)胞計(jì)數(shù)加血細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。
結(jié)果除了其殺滅腫瘤活性之外，5-FU對(duì)正常細(xì)胞具有細(xì)胞毒性，尤其是由于其骨髓抑制作用對(duì)造血系統(tǒng)的細(xì)胞具有細(xì)胞毒性。因?yàn)榧柞Ｋ臍淙~酸和5，10-CH2-THFA具有相關(guān)的化學(xué)特征和作用方式，我們想確定5-FU/5，10-CH2-THFA聯(lián)合治療是否有相似的毒性特征。由此，我們用5-FU、甲酰四氫葉酸和5，10-CH2-THFA的多種組合對(duì)正常Balb/c小鼠進(jìn)行注射(表5)。預(yù)處理時(shí)、處理后一周、兩周，我們分析全血細(xì)胞計(jì)數(shù)加分類計(jì)數(shù)在血液參數(shù)方面的變化。此外，我們分析了藥物毒性的定性和定量測(cè)量。
表5.Balb/c小鼠處理組
在給藥一周后，我們觀察到所有的小鼠均有藥物-相關(guān)的毒性，包括褶皺的皮毛、瀕死和脫水。在藥物處理開(kāi)始12天內(nèi)，只用5-FU處理和用5-FU/甲酰四氫葉酸處理的組中的全部小鼠死亡。相反，14天后在5-FU/5，10-CH2-THFA處理組中38％的小鼠存活。對(duì)于全部處理組，繪制Kaplan-Meier存活曲線(圖10)。5-FU/5，10-CH2-THFA處理組對(duì)5-FU/甲酰四氫葉酸處理的Logrank統(tǒng)計(jì)學(xué)對(duì)比表明在存活能力方面存在顯著差異(p＜0.05)。
血液分析也顯示在選擇血細(xì)胞類型方面存在差異(圖11)。我們測(cè)量了以下血液參數(shù)白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞壓積(HCT)、平均細(xì)胞容積(MCV)、平均細(xì)胞血紅蛋白(MCH)、平均細(xì)胞血紅蛋白含量(MCHC)、嗜中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血小板(PLT)、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞。藥物處理后一周，相對(duì)于5-FU/甲酰四氫葉酸處理的小鼠，我們觀察到在5-FU/5，10-CH2-THFA處理的小鼠中白細(xì)胞明顯地更多(p＜0.05，Student’s t檢驗(yàn))。在白細(xì)胞亞型中，我們觀察到5-FU/5，10-CH2-THFA處理組比其它處理組具有明顯更多的血小板和嗜中性粒細(xì)胞。
因?yàn)槲覀冇^察到5-FU/5，10-CH2-THFA處理后在血小板和嗜中性粒細(xì)胞水平方面具有差異，我們進(jìn)一步評(píng)價(jià)了這些細(xì)胞類型。采用對(duì)毒性的NCI分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，我們以組合的1/2級(jí)毒性、3級(jí)毒性或者4級(jí)毒性計(jì)算小鼠的百分比。對(duì)于血小板，我們觀察到25％的單獨(dú)用5-FU處理的小鼠發(fā)展為4級(jí)毒性(圖12)。相反，5-FU/甲酰四氫葉酸或者5-FU/5，10-CH2-THFA處理的小鼠未注意到4級(jí)毒性。但是，不同于具有3級(jí)毒性的5-FU/甲酰四氫葉酸處理的小鼠(45％)，僅15％的5-FU/5，10-CH2-THFA處理的小鼠發(fā)展為3級(jí)血小板毒性。剩余的5-FU/5，10-CH2-THFA處理的小鼠(85％)發(fā)展為1級(jí)或2級(jí)毒性。因此，這些數(shù)據(jù)表明5-FU/5，10-CH2-THFA比單獨(dú)5-FU或者5-FU/甲酰四氫葉酸引起更溫和的血小板毒性。
同樣地，我們?cè)u(píng)價(jià)了嗜中性粒細(xì)胞毒性特征。和血小板差異形成對(duì)比，所述標(biāo)準(zhǔn)的NCI分級(jí)系統(tǒng)在處理組之間不顯示顯著的嗜中性粒細(xì)胞差異。例如，100％的單獨(dú)用5-FU和5-FU/甲酰四氫葉酸處理的小鼠發(fā)展為4級(jí)毒性，而92％的5-FU/5，10-CH2-THFA處理的小鼠發(fā)展為相同的4級(jí)毒性。剩余8％的5-FU/5，10-CH2-THFA處理的小鼠發(fā)展為3級(jí)毒性(圖13)。但是，對(duì)發(fā)展為4級(jí)毒性的小鼠的進(jìn)一步分析顯示了可量化的嗜中性粒細(xì)胞差異。我們根據(jù)處理后其嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)范圍將具有4級(jí)毒性的小鼠分為亞組(圖14)。此分析顯示100％的僅用5-FU處理的小鼠和80％的5-FU/甲酰四氫葉酸處理的小鼠具有0-99的嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)。相反，僅40％的5-FU/5，10-CH2-THFA處理的小鼠發(fā)展為該最低水平的嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)。大多數(shù)定為4級(jí)的5-FU/5，10-CH2-THFA處理的小鼠(50％)具有200-499的嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)。因此，這些數(shù)據(jù)表明5-FU/5，10-CH2-THFA引起比單獨(dú)5-FU或5-FU/甲酰四氫葉酸更溫和的嗜中性粒細(xì)胞毒性。
實(shí)施例4用5-FU、甲酰四氫葉酸、5，10-CH2-THFA和吉西他濱的組合處理的Balb/c小鼠的體重減輕毒性分析材料和方法小鼠Balb/c小鼠得自Charles River實(shí)驗(yàn)室。在研究開(kāi)始時(shí)，小鼠均為6-8周齡。將小鼠飼養(yǎng)在LAB國(guó)際動(dòng)物飼養(yǎng)所(San Diego，CA)中的隔離的、高效微?？諝膺^(guò)濾器通風(fēng)的籠子內(nèi)，每只籠子中飼養(yǎng)4只小鼠。
藥物5-氟尿嘧啶(5-FU)和甲酰四氫葉酸(leucovorin)得自Sigma-Aldrich。5，10亞甲基四氫葉酸(5，10-CH2-THFA)由Eprova AG生產(chǎn)。吉西他濱由Eli Lilly生產(chǎn)并購(gòu)自Myoderm Inc.。
Balb/c體重分析研究用5-FU、甲酰四氫葉酸、5，10-CH2-THFA和吉西他濱的組合對(duì)Balb/c雌性小鼠進(jìn)行注射。5-FU、甲酰四氫葉酸和5，10-CH2-THFA(100微升/小鼠，0.6mg/小鼠/藥物)腹膜內(nèi)連續(xù)注射5天(1-5天)。吉西他濱每三天(第1、4和7天)腹膜內(nèi)注射一次(100微升/小鼠，100微克/小鼠/藥物)。所有藥物均用27規(guī)格的胰島素針/注射器進(jìn)行注射。在藥物開(kāi)始給藥之前(預(yù)處理)和第8天時(shí)用分析天平測(cè)量小鼠體重。
結(jié)果公知5-FU的毒性為胃腸毒性并與體重減輕相關(guān)。據(jù)報(bào)道甲酰四氫葉酸可能加重胃腸毒性。此外，吉西他濱目前為胰腺癌的標(biāo)準(zhǔn)療法，其本身具有相關(guān)的毒性特征。雖然5-FU/吉西他濱和5-FU/甲酰四氫葉酸/吉西他濱的聯(lián)合治療已在臨床上進(jìn)行了檢查并表現(xiàn)出具有增強(qiáng)的臨床活性，但是這些組合通常顯示出比單獨(dú)吉西他濱或單獨(dú)5-FU/甲酰四氫葉酸更嚴(yán)重的毒性。因?yàn)榧柞Ｋ臍淙~酸和5，10-CH2-THFA具有相關(guān)的化學(xué)特性和作用方式，我們想研究5-FU/5，10-CH2-THFA與吉西他濱聯(lián)合的毒性特征，因?yàn)?-FU/5，10-CH2-THFA/吉西他濱的聯(lián)合治療是適用于胰腺癌的可能的治療方案。此外，我們想將我們先前的關(guān)于5-FU/5，10-CH2-THFA組合的毒性分析進(jìn)行擴(kuò)展，并且確定與5-FU/甲酰四氫葉酸或者單獨(dú)的5-FU相比，這種組合是否具有另外的不明顯的毒性特征。因此，我們用5-FU、甲酰四氫葉酸、5，10-CH2-THFA和吉西他濱的多種組合對(duì)正常的Balb/c小鼠進(jìn)行注射(表6)。預(yù)處理和處理開(kāi)始后一周時(shí)，我們檢查了作為胃腸毒性測(cè)量結(jié)果的體重減輕/增加。
表6.Balb/c小鼠處理組
在開(kāi)始給藥之前(預(yù)處理)，小鼠的隨機(jī)分組顯示了相似的平均體重。處理后(第8天)，所有處理組中的小鼠體重均降低。采用不良事件(Adverse Events)的國(guó)立癌癥研究所(NCI)通用的術(shù)語(yǔ)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)(National Cancer Institute’s(NCI)Common Terminology Criteria)，對(duì)每一處理組的體重減輕嚴(yán)重性進(jìn)行繪圖(圖15)。根據(jù)來(lái)自起始基線體重的體重減輕百分比對(duì)毒性分級(jí)(表7)。這些結(jié)果顯示與單獨(dú)5-FU或者5-FU/甲酰四氫葉酸處理組合相比(兩個(gè)處理組中100％小鼠為2-3級(jí)毒性)，5-FU/5，10-CH2-THFA引起明顯較低的2-3級(jí)毒性(50％)(p＜0.05，F(xiàn)isher’s精確檢驗(yàn))。
表7.國(guó)立癌癥研究所體重減輕毒性級(jí)別
雖然由于以亞毒性濃度給藥，吉西他濱單獨(dú)處理不誘導(dǎo)比1級(jí)更大的體重減輕毒性，但是將吉西他濱加入至5-FU/甲酰四氫葉酸或5-FU/5，10-CH2-THFA處理中導(dǎo)致100％小鼠具有3級(jí)毒性(圖15)。但是，在這些處理組之間可檢測(cè)出體重減輕百分比的數(shù)量差異(圖16)。這些數(shù)據(jù)表明當(dāng)與二重細(xì)胞毒性藥物5-FU和吉西他濱聯(lián)合時(shí)，5，10-CH2-THFA比甲酰四氫葉酸更有效地保護(hù)小鼠免于體重減輕。92％的5-FU/甲酰四氫葉酸/吉西他濱處理的小鼠具有＞25％的體重減輕，而具有如此嚴(yán)重的體重減輕毒性(33％的小鼠)的5-FU/5，10-CH2-THFA/吉西他濱處理的小鼠明顯地更少(p＜0.05，F(xiàn)isher’s精確檢驗(yàn))。
對(duì)于每一處理組，也隨時(shí)間注意了小鼠存活能力(圖17)。與用5-FU單獨(dú)處理的小鼠相比(36％)，5-FU/甲酰四氫葉酸和5-FU/5，10-CH2-THFA組都具有多至14天的明顯更大的小鼠存活百分比(對(duì)于每組有83％的小鼠)(p＜0.05，Logrank檢驗(yàn))。在5-FU/甲酰四氫葉酸/吉西他濱或者5-FU/5，10-CH2-THFA/吉西他濱三聯(lián)藥物組合中觀察到了最短的存活時(shí)間，其中在第14天前100％的小鼠死亡。但是，5-FU/5，10-CH2-THFA/吉西他濱處理的小鼠比5-FU/甲酰四氫葉酸/吉西他濱處理的小鼠(8天)具有明顯更長(zhǎng)的存活時(shí)間(9天，p＜0.05，Logrank檢驗(yàn))。這與5-FU/5，10-CH2-THFA/吉西他濱聯(lián)合組具有上述較輕嚴(yán)重性的體重減輕毒性相關(guān)，并再次表明當(dāng)與5-FU/吉西他濱方案聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，相對(duì)于甲酰四氫葉酸，5，10-CH2-THFA引起更溫和的體重減輕。
實(shí)施例5用5-FU、甲酰四氫葉酸和5，10-CH2-THFA的組合處理的Balb/c小鼠的淋巴細(xì)胞分析材料和方法小鼠Balb/c小鼠得自Charles River實(shí)驗(yàn)室。在所有研究開(kāi)始時(shí)，小鼠均為6-8周齡。將小鼠飼養(yǎng)在LAB國(guó)際動(dòng)物飼養(yǎng)所(San Diego，CA)中的隔離的、高效微?？諝膺^(guò)濾器通風(fēng)的籠子內(nèi)，每只籠子中飼養(yǎng)4只小鼠。
藥物5-氟尿嘧啶(5-FU)得自Calbiochem。甲酰四氫葉酸(leucovorin)得自Sigma-Aldrich。5，10-亞甲基四氫葉酸(5，10-CH2-THFA)由Eprova AG生產(chǎn)。
Balb/c血液分析研究用5-FU、甲酰四氫葉酸和5，10-CH2-THFA的組合對(duì)Balb/c小鼠(7周齡的雌性小鼠)連續(xù)注射7天。采用28規(guī)格的胰島素針/注射器將全部藥物進(jìn)行腹膜內(nèi)注射(100微升/小鼠，0.6mg/小鼠/藥物)。在第0天(藥物注射前)、第8天和第13天時(shí)通過(guò)眶后穿刺，用EDTA涂布的微量采血管(VWR International)采集200-250微升血/小鼠。由LabcorpCorporation of America采用Bayer Advia 120血液學(xué)分析儀確定全血細(xì)胞計(jì)數(shù)加血細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。
結(jié)果實(shí)施例3中所述試驗(yàn)的補(bǔ)充分析進(jìn)一步顯示了處理組之間的毒性差異。如最初所述的，我們注意到與5-FU/甲酰四氫葉酸和5-FU單獨(dú)處理相比，5-FU/5，10-CH2-THFA處理組保護(hù)白細(xì)胞，包括血小板和嗜中性粒細(xì)胞。采用基于基線淋巴細(xì)胞水平百分比的NCI毒性分級(jí)(表8)對(duì)所述數(shù)據(jù)進(jìn)行新的分析，該分析也顯示出與其它組相比，5-FU/5，10-CH2-THFA處理組中具有更好的淋巴細(xì)胞保護(hù)(圖18)。在5-FU單獨(dú)處理組和5-FU/甲酰四氫葉酸處理組中100％的小鼠發(fā)展為3-4級(jí)淋巴細(xì)胞減少癥，而5-FU/5，10-CH2-THFA處理組中明顯更少的小鼠(62％)發(fā)展為此毒性水平(p＜0.05，F(xiàn)isher’s精確檢驗(yàn))。因此，此數(shù)據(jù)表明與5-FU單獨(dú)或者5-FU/甲酰四氫葉酸相比，5-FU/5，10-CH2-THFA引起更溫和的淋巴細(xì)胞毒性。
表8.國(guó)立癌癥研究所淋巴細(xì)胞減少癥毒性級(jí)別
實(shí)施例6關(guān)于用卡培他濱(希羅達(dá))、5，10-亞甲基四氫葉酸(5，10-CH2-THFA)和甲酰四氫葉酸治療HT-29結(jié)腸直腸腫瘤的裸小鼠研究材料和方法小鼠裸(nu/nu)小鼠得自Simonsen實(shí)驗(yàn)室。在所有研究開(kāi)始時(shí)，小鼠均為6-8周齡。將小鼠飼養(yǎng)在Perry Scientific’s動(dòng)物飼養(yǎng)所(San Diego，CA)中的隔離的、高效微粒空氣過(guò)濾器通風(fēng)的籠子內(nèi)，每只籠子中飼養(yǎng)4只小鼠。
細(xì)胞系人結(jié)腸癌HT-29得自美國(guó)組織培養(yǎng)物收藏所(ATCC)。將細(xì)胞系維持在37℃，10％CO2增濕的培養(yǎng)箱內(nèi)的含10％胎牛血清(FBS)、2mM 1-谷氨酰胺、100單位/ml青霉素和100微克/ml鏈霉素的DMEM(DMEM-10)中。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)前，細(xì)胞系每2-3天進(jìn)行傳代。
藥物卡配他濱(希羅達(dá))由Roche實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)(Nutley，新澤西)。甲酰四氫葉酸(leucovorin)得自Sigma-Aldrich。5，10-亞甲基四氫葉酸(5，10-CH2-THFA)由Eprova AG生產(chǎn)。
治療以如下方式制備注射用的HT-29細(xì)胞用PBS洗滌鋪滿組織培養(yǎng)瓶的HT-29細(xì)胞一次，隨后用胰蛋白酶進(jìn)行細(xì)胞分離。分離的細(xì)胞然后在DMEM-10中洗滌一次，接著用PBS洗滌一次。最后，以107細(xì)胞/ml將細(xì)胞重懸于PBS中。采用28規(guī)格的針/1ml胰島素注射器，用100微升(106細(xì)胞)HT-29細(xì)胞對(duì)裸小鼠(nu/nu)進(jìn)行皮下接種。當(dāng)腫瘤體積達(dá)到100至300mm3時(shí)，用希羅達(dá)、5，10-CH2-THFA、甲酰四氫葉酸或水的多種組合對(duì)小鼠進(jìn)行治療。通過(guò)口腔管飼法進(jìn)行水和希羅達(dá)的給藥(72mg/小鼠/天)。大約在希羅達(dá)給藥前20分鐘，通過(guò)腹腔內(nèi)注射進(jìn)行5，10-CH2-THFA和甲酰四氫葉酸的給藥(0.6mg/小鼠/藥物/天)。所有藥物均每天給藥，連續(xù)持續(xù)14天。每2-4天測(cè)量腫瘤大小和小鼠體重。使用以下公式計(jì)算腫瘤體積腫瘤體積＝(長(zhǎng)×寬2)/2。當(dāng)腫瘤直徑＞2cm或者腫瘤潰瘍時(shí)，使用CO2對(duì)小鼠進(jìn)行無(wú)痛處死，接著進(jìn)行頸脫位。
數(shù)據(jù)分析采用GraphPad Prism科學(xué)軟件實(shí)施腫瘤生長(zhǎng)、存活能力和體重減輕的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和曲線擬合。
結(jié)果腫瘤生長(zhǎng)用如表9所示的藥物組合對(duì)帶有腫瘤的小鼠進(jìn)行治療。
與用于人體的經(jīng)批準(zhǔn)的臨床方案相似，將希羅達(dá)口服給藥。與對(duì)照治療的小鼠相比(水)，所有含希羅達(dá)的治療組具有較小的腫瘤生長(zhǎng)(圖19)。此外，甲酰四氫葉酸和5，10-CH2-THFA都增加希羅達(dá)的抗腫瘤活性。這些差異可在腫瘤倍增時(shí)間中看到，所述腫瘤倍增時(shí)間是從指數(shù)腫瘤生長(zhǎng)的最佳擬合線性回歸中計(jì)算出，并顯示于表10中。
表9.小鼠治療組
表10.腫瘤倍增時(shí)間
存活率在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，自始至終關(guān)注小鼠存活率(圖20)。這些結(jié)果表明與甲酰四氫葉酸加希羅達(dá)(25％)和單獨(dú)希羅達(dá)(38％)相比，在實(shí)驗(yàn)第33天時(shí)(將藥物給藥的首日限定為第一天)，5，10-CH2-THFA加希羅達(dá)導(dǎo)致最大的存活率(67％)。此外，這些數(shù)據(jù)表明用甲酰四氫葉酸加希羅達(dá)治療的小鼠具有更快速的死亡率，如具有19天生存中值所表明的，而所有其它治療組＞30天。
藥物毒性作為藥物毒性的替代標(biāo)記，我們檢查了小鼠體重隨時(shí)間的變化。采用適用于體重減輕的國(guó)立癌癥研究所通用毒性標(biāo)準(zhǔn)第3版分級(jí)系統(tǒng)(表11)，對(duì)體重減輕的最大毒性級(jí)別進(jìn)行繪圖(圖21)。雖然希羅達(dá)本身相對(duì)無(wú)毒性，其僅在36％的小鼠中誘導(dǎo)1級(jí)毒性，但是甲酰四氫葉酸將所有1-3級(jí)毒性的小鼠增加至90％。這增加的毒性與II期人臨床試驗(yàn)結(jié)果一致，該結(jié)果顯示甲酰四氫葉酸增加諸如腹瀉、嘔吐和粘膜炎癥的希羅達(dá)毒性參數(shù)(參見(jiàn)Van Cutsem，E.，M.Findlay，B.Osterwalder，M Kocha，D.Dalley，R.Pazdur，J.Cassidy，L.Dirix，C.Twelves，D.Allman，J.F.Seitz，J.Scholmerich，H.U.Burger，and J.Verweij.2000.Capecitabine，an oral fluoropyrimidine carbamate withsubstantial activity in advanced colorectal cancerresults of a randomizedphase II study(作為口服的氟嘧啶氨基甲酸酯，卡培他濱在晚期結(jié)腸直腸癌中具有相當(dāng)大的活性隨機(jī)的II期研究結(jié)果).J ClinOncol181337)。相反，5，10-CH2-THFA不像甲酰四氫葉酸一樣在小鼠中增加希羅達(dá)毒性，僅50％的小鼠具有1-3級(jí)體重減輕，與甲酰四氫葉酸治療組相比將毒性減少了40％。
表11.體重減輕毒性標(biāo)準(zhǔn)
結(jié)論綜上所述，這些數(shù)據(jù)表明5，10-CH2-THFA增加希羅達(dá)的抗腫瘤有效性且具有比甲酰四氫葉酸更小的毒性。
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所有標(biāo)題皆是為了讀者方便，且除非如此說(shuō)明，不應(yīng)理解為用來(lái)限制緊隨該標(biāo)題后的正文的含義。
本發(fā)明引用的所有參考文獻(xiàn)，包括參考數(shù)目中所列的那些參考文獻(xiàn)均全部引入作為參考。
權(quán)利要求
1.(a)5，10亞甲基四氫葉酸；和(b)5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥；和(c)至少一種另外的化學(xué)治療劑，在制備治療癌癥的藥物組合物中的用途，其中所述至少一種另外的化學(xué)治療選自烷化劑、抗代謝物、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、微管破壞藥物、核酸合成抑制劑、激酶抑制劑、激素阻斷藥物、蛋白體抑制劑、血管生成抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎藥物、細(xì)胞因子、細(xì)胞因子抑制劑、受體-結(jié)合藥物和5-氟尿嘧啶調(diào)節(jié)劑。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述被治療的癌癥為結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、胃癌、非小細(xì)胞肺癌、子宮頸癌、卵巢癌、胰腺癌、食管癌或頭頸癌。
3.如權(quán)利要求1所述的用途，其中至少一種另外的化學(xué)治療劑為特異性結(jié)合成員、或核酸或核酸類似物分子、或小分子。
4.如權(quán)利要求3所述的用途，其中所述特異性結(jié)合成員包括結(jié)合生長(zhǎng)因子的抗體。
5.如權(quán)利要求4所述的用途，其中所述結(jié)合生長(zhǎng)因子的抗體至少為一種結(jié)合VEGF的抗體。
6.如權(quán)利要求5所述的用途，其中所述結(jié)合VEGF的抗體為貝伐單抗。
7.如權(quán)利要求3所述的用途，其中所述特異性結(jié)合成員包括結(jié)合生長(zhǎng)因子受體的抗體。
8.如權(quán)利要求7所述的用途，其中所述結(jié)合生長(zhǎng)因子的抗體至少為一種結(jié)合EGFR的抗體。
9.如權(quán)利要求8所述的用途，其中所述結(jié)合EGFR的抗體為西妥昔單抗。
10.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述至少一種另外的化學(xué)治療劑選自依立替康(CPT-11))、二氟脫氧胞嘧啶核苷(吉西他濱)、(E)-2’-脫氧-2’-(氟亞甲基)胞苷(tezacitabine)、多柔比星、表柔比星、絲裂霉素C、環(huán)磷酰胺、順鉑、奧沙利鉑、太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿和長(zhǎng)春瑞濱。
11.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述藥物組合物被組方為通過(guò)注射或通過(guò)靜脈內(nèi)輸入給藥。
12.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述藥物組合物的(a)、(b)和(c)組分被組方為單一制劑。
13.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述藥物組合物的(a)、(b)和(c)組分被分別組方。
14.治療癌癥患者的方法，所述方法包括以5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥；5，10-亞甲基四氫葉酸；和至少一種另外的抗癌藥物對(duì)患者給藥。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其中5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥為5-氟尿嘧啶。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶通過(guò)注射給藥。
17.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的劑量為約25毫克至約5克每m2。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的劑量為約50毫克至約2.5克每m2。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的劑量為約100毫克至約1克每m2。
20.如權(quán)利要求14所述的方法，其中5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥為N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)的日劑量為約500mg至約7.5g每m2。
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)的日劑量為約1000mg至約5g每m2。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)的日劑量為約1500mg至約3000mg每m2。
24.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸通過(guò)注射給藥。
25.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約10毫克至1克每m2。
26.如權(quán)利要求25所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約20毫克至500毫克每m2。
27.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約50毫克至250毫克每m2。
28.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物包括至少一種烷化劑、抗代謝物、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、微管破壞藥物、核酸合成抑制劑、激酶抑制劑、激素阻斷藥物、蛋白體抑制劑、血管生成抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎藥物、細(xì)胞因子、細(xì)胞因子抑制劑、受體-結(jié)合藥物或5-氟尿嘧啶調(diào)節(jié)劑。
29.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物包括至少一種特異性結(jié)合成員、或核酸或核酸類似物分子、或小分子。
30.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述癌癥為結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、胃癌、非小細(xì)胞肺癌、子宮頸癌、卵巢癌、胰腺癌、食管癌或頭頸癌。
31.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述癌癥為結(jié)腸直腸癌。
32.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述癌癥為乳腺癌。
33.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述癌癥為胰腺癌。
34.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述癌癥為胃癌。
35.如權(quán)利要求29所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物包括特異性結(jié)合成員。
36.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述特異性結(jié)合成員包括結(jié)合VEGF的抗體。
37.如權(quán)利要求36所述的方法，其中所述結(jié)合VEGF的抗體為貝伐單抗。
38.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述特異性結(jié)合成員包括結(jié)合EGFR的抗體。
39.如權(quán)利要求38所述的方法，其中所述結(jié)合EGFR的抗體為西妥昔單抗。
40.如權(quán)利要求28所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑。
41.如權(quán)利要求40所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為依立替康。
42.如權(quán)利要求28所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為抗代謝物。
43.如權(quán)利要求42所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為二氟脫氧胞嘧啶核苷(吉西他濱)、(E)-2’-脫氧-2’-(氟亞甲基)胞苷(tezacitabine)、多柔比星或表柔比星。
44.如權(quán)利要求38所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為烷化劑。
45.如權(quán)利要求44所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為絲裂霉素C、環(huán)磷酰胺、順鉑或奧沙利鉑。
46.如權(quán)利要求45所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為奧沙利鉑。
47.如權(quán)利要求28所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為激酶抑制劑。
48.如權(quán)利要求47所述的方法，所述激酶抑制劑為酪氨酸激酶抑制劑。
49.如權(quán)利要求48所述的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制劑為EGFR酪氨酸激酶抑制劑或VEGFR酪氨酸激酶抑制劑。
50.如權(quán)利要求28所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為微管破壞劑。
51.如權(quán)利要求50所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿或長(zhǎng)春瑞濱。
52.減少欲對(duì)診斷為癌癥的患者給藥的抗癌藥物方案的毒性的方法，所述方法包括獲得抗癌藥物方案，所述抗癌藥物方案包括5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥；亞葉酸；和至少一種另外的抗癌藥物；以及用5，10亞甲基四氫葉酸代替所述的欲對(duì)診斷為癌癥的患者給藥的抗癌藥物方案中的亞葉酸。
53.如權(quán)利要求42所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥為5-氟尿嘧啶。
54.如權(quán)利要求52所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥為N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)。
55.如權(quán)利要求52所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約10毫克至約1克每m2。
56.如權(quán)利要求55所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約20毫克至500毫克每m2。
57.如權(quán)利要求56所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約30毫克至250毫克每m2。
58.如權(quán)利要求52所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物包括至少一種烷化劑、抗代謝物、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、微管破壞藥物、核酸合成抑制劑、激酶抑制劑、激素阻斷藥物、蛋白體抑制劑、血管生成抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎藥物、細(xì)胞因子、細(xì)胞因子抑制劑、受體-結(jié)合藥物或5-氟尿嘧啶調(diào)節(jié)劑。
59.如權(quán)利要求52所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中的至少一種抗癌藥物包括至少一種特異性結(jié)合成員、或核酸或核酸類似物分子、或小分子。
60.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述癌癥為結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、胃癌、非小細(xì)胞肺癌、子宮頸癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌或頭頸癌。
61.如權(quán)利要求60所述的方法，其中所述癌癥為結(jié)腸直腸癌。
62.如權(quán)利要求60所述的方法，其中所述癌癥為乳腺癌。
63.如權(quán)利要求60所述的方法，其中所述癌癥為胰腺癌。
64.如權(quán)利要求60所述的方法，其中所述癌癥為胃癌。
65.如權(quán)利要求49所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物包括特異性結(jié)合成員。
66.如權(quán)利要求65所述的方法，其中所述特異性結(jié)合成員包括結(jié)合生長(zhǎng)因子的抗體。
67.如權(quán)利要求66所述的方法，其中所述結(jié)合生長(zhǎng)因子的抗體至少為一種結(jié)合VEGF的抗體。
68.如權(quán)利要求67所述的方法，其中所述結(jié)合VEGF的抗體為貝伐單抗。
69.如權(quán)利要求65所述的方法，其中所述結(jié)合生長(zhǎng)因子的抗體至少為一種結(jié)合EGFR的抗體。
70.如權(quán)利要求69所述的方法，其中所述結(jié)合EGFR的抗體為西妥昔單抗。
71.如權(quán)利要求58所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑。
72.如權(quán)利要求71所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為依立替康。
73.如權(quán)利要求58所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為抗代謝物。
74.如權(quán)利要求73所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為二氟脫氧胞嘧啶核苷吉西他濱、(E)-2’-脫氧-2’-(氟亞甲基)胞苷(tezacitabine)、多柔比星或表柔比星。
75.如權(quán)利要求58所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為烷化劑。
76.如權(quán)利要求75所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為絲裂霉素C或環(huán)磷酰胺。
77.如權(quán)利要求75所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為順鉑或奧沙利鉑。
78.如權(quán)利要求77所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為奧沙利鉑。
79.如權(quán)利要求58所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為激酶抑制劑。
80.如權(quán)利要求79所述的方法，所述激酶抑制劑為酪氨酸激酶抑制劑。
81.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制劑為EGFR酪氨酸激酶抑制劑或VEGFR酪氨酸激酶抑制劑。
82.如權(quán)利要求58所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為微管破壞劑。
83.如權(quán)利要求82所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿或長(zhǎng)春瑞濱。
84.減少欲對(duì)診斷為癌癥的患者給藥的抗癌藥物的毒性的方法，所述方法包括獲得抗癌藥物方案，所述抗癌藥物方案包括
5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥；和至少一種另外的抗癌藥物；以及將5，10亞甲基四氫葉酸加入到所述的欲對(duì)診斷為癌癥的患者給藥的抗癌藥物方案中。
85.如權(quán)利要求84所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥為5-氟尿嘧啶。
86.如權(quán)利要求85所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶通過(guò)注射給藥。
87.如權(quán)利要求85所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的劑量為約25毫克至約5克每m2。
88.如權(quán)利要求87所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的劑量為約50毫克至約2.5克每m2。
89.如權(quán)利要求88所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的劑量為約100毫克至約1克每m2。
90.如權(quán)利要求84所述的方法，其中5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥為N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)。
91.如權(quán)利要求80所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)的日劑量為約500mg至約7.5g每m2。
92.如權(quán)利要求82所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)的日劑量為約1000mg至約5g每m2。
93.如權(quán)利要求83所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)的日劑量為約1500mg至約3000mg每m2。
94.如權(quán)利要求84所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸能通過(guò)注射給藥。
95.如權(quán)利要求84所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約10毫克至1克每m2。
96.如權(quán)利要求95所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約20毫克至500毫克每m2。
97.如權(quán)利要求96所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約30毫克至250毫克每m2。
98.如權(quán)利要求84所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物包括至少一種烷化劑、抗代謝物、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、微管破壞藥物、核酸合成抑制劑、激酶抑制劑、激素阻斷藥物、蛋白體抑制劑、血管生成抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎藥物、細(xì)胞因子、細(xì)胞因子抑制劑、受體-結(jié)合藥物或5-氟尿嘧啶調(diào)節(jié)劑。
99.如權(quán)利要求74所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物包括至少一種特異性結(jié)合成員、或核酸或核酸類似物分子、或小分子。
100.如權(quán)利要求84所述的方法，其中所述癌癥為結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、胃癌、非小細(xì)胞肺癌、子宮頸癌、卵巢癌、胰腺癌、食管癌或頭頸癌。
101.如權(quán)利要求100所述的方法，其中所述癌癥為結(jié)腸直腸癌。
102.如權(quán)利要求100所述的方法，其中所述癌癥為乳腺癌。
103.如權(quán)利要求100所述的方法，其中所述癌癥為胰腺癌。
104.如權(quán)利要求100所述的方法，其中所述癌癥為胃癌。
105.如權(quán)利要求99所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物包括特異性結(jié)合成員。
106.如權(quán)利要求105所述的方法，其中所述特異性結(jié)合成員包括結(jié)合生長(zhǎng)因子的抗體。
107.如權(quán)利要求106所述的方法，其中所述結(jié)合生長(zhǎng)因子的抗體至少為一種結(jié)合VEGF的抗體。
108.如權(quán)利要求107所述的方法，其中所述結(jié)合VEGF的抗體為貝伐單抗。
109.如權(quán)利要求105所述的方法，其中所述特異性結(jié)合成員包括結(jié)合生長(zhǎng)因子受體的抗體。
110.如權(quán)利要求109所述的方法，其中所述結(jié)合生長(zhǎng)因子的抗體至少為一種結(jié)合EGFR的抗體。
111.如權(quán)利要求110所述的方法，其中所述結(jié)合EGFR的抗體為西妥昔單抗。
112.如權(quán)利要求98所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑。
113.如權(quán)利要求112所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為依立替康。
114.如權(quán)利要求98所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為抗代謝物。
115.如權(quán)利要求114所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為二氟脫氧胞嘧啶核苷(吉西他濱)、(E)-2’-脫氧-2’-(氟亞甲基)胞苷(tezacitabine)、多柔比星或表柔比星。
116.如權(quán)利要求98所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為烷化劑。
117.如權(quán)利要求116所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為絲裂霉素C、環(huán)磷酰胺、順鉑或奧沙利鉑。
118.如權(quán)利要求117所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為奧沙利鉑。
119.如權(quán)利要求98所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為激酶抑制劑。
120.如權(quán)利要求119所述的方法，所述激酶抑制劑為酪氨酸激酶抑制劑。
121.如權(quán)利要求120所述的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制劑為EGFR酪氨酸激酶抑制劑或VEGFR酪氨酸激酶抑制劑。
122.如權(quán)利要求98所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為微管破壞劑。
123.如權(quán)利要求122所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿或長(zhǎng)春瑞濱。
124.減少欲對(duì)癌癥患者給藥的抗癌藥物方案的毒性的方法，所述方法包括獲得抗癌藥物方案，所述抗癌藥物方案包括5-氟尿嘧啶的類似物或前藥和亞葉酸；以及用5，10亞甲基四氫葉酸代替在所述的欲對(duì)診斷為癌癥的患者給藥的抗癌藥物方案中的亞葉酸。
125.如權(quán)利要求124所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的類似物或前藥為N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)。
126.如權(quán)利要求125所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)的日劑量為約500mg至約7.5g每m2。
127.如權(quán)利要求126所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)的日劑量為約1000mg至約5g每m2。
128.如權(quán)利要求127所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)的日劑量為約200mg至約1500mg每m2。
129.如權(quán)利要求124所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸能通過(guò)注射給藥。
130.如權(quán)利要求114所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約10毫克至1克每m2。
131.如權(quán)利要求121所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約20毫克至500毫克每m2。
132.如權(quán)利要求122所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約30毫克至250毫克每m2。
133.增加欲對(duì)診斷為癌癥的患者給藥的抗癌藥物方案的有效性的方法，所述方法包括獲得抗癌藥物方案，所述抗癌藥物方案包括5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥；亞葉酸；和和至少一種另外的抗癌藥物；以及用5，10亞甲基四氫葉酸代替在所述的欲對(duì)診斷為癌癥的患者給藥的抗癌藥物方案中的亞葉酸。
134.如權(quán)利要求133所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥為5-氟尿嘧啶。
135.如權(quán)利要求134所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥為N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)。
136.如權(quán)利要求135所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約10毫克至1克每m2。
137.如權(quán)利要求136所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約20毫克至500毫克每m2。
138.如權(quán)利要求137所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約30毫克至250毫克每m2。
139.如權(quán)利要求133所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物包括至少一種烷化劑、抗代謝物、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、微管破壞藥物、核酸合成抑制劑、激酶抑制劑、激素阻斷藥物、蛋白體抑制劑、血管生成抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎藥物、細(xì)胞因子、細(xì)胞因子抑制劑、受體-結(jié)合藥物或5-氟尿嘧啶調(diào)節(jié)劑。
140.如權(quán)利要求133所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物包括至少一種特異性結(jié)合成員、或核酸或核酸類似物分子、或小分子。
141.如權(quán)利要求133所述的方法，其中所述癌癥為結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、胃癌、非小細(xì)胞肺癌、子宮頸癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌或頭頸癌。
142.如權(quán)利要求133所述的方法，其中所述癌癥為結(jié)腸直腸癌。
143.如權(quán)利要求133所述的方法，其中所述癌癥為乳腺癌。
144.如權(quán)利要求133所述的方法，其中所述癌癥為胰腺癌。
145.如權(quán)利要求133所述的方法，其中所述癌癥為胃癌。
146.如權(quán)利要求140所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物包括特異性結(jié)合成員。
147.如權(quán)利要求146所述的方法，其中所述特異性結(jié)合成員包括結(jié)合生長(zhǎng)因子的抗體。
148.如權(quán)利要求147所述的方法，其中所述結(jié)合生長(zhǎng)因子的抗體至少為一種結(jié)合VEGF的抗體。
149.如權(quán)利要求148所述的方法，其中所述結(jié)合VEGF的抗體為貝伐單抗。
150.如權(quán)利要求146所述的方法，其中所述結(jié)合生長(zhǎng)因子的抗體至少為一種結(jié)合EGFR的抗體。
151.如權(quán)利要求141所述的方法，其中所述結(jié)合EGFR的抗體為西妥昔單抗。
152.如權(quán)利要求139所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑。
153.如權(quán)利要求152所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為依立替康。
154.如權(quán)利要求139所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為抗代謝物。
155.如權(quán)利要求154所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為二氟脫氧胞嘧啶核苷(吉西他濱)、(E)-2’-脫氧-2’-(氟亞甲基)胞苷(tezacitabine)、多柔比星或表柔比星。
156.如權(quán)利要求139所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為烷化劑。
157.如權(quán)利要求156所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為絲裂霉素C或環(huán)磷酰胺。
158.如權(quán)利要求156所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為順鉑或奧沙利鉑。
159.如權(quán)利要求158所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為奧沙利鉑。
160.如權(quán)利要求139所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為激酶抑制劑。
161.如權(quán)利要求160所述的方法，所述激酶抑制劑為酪氨酸激酶抑制劑。
162.如權(quán)利要求161所述的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制劑為EGFR酪氨酸激酶抑制劑或VEGFR酪氨酸激酶抑制劑。
163.如權(quán)利要求139所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為微管破壞劑。
164.如權(quán)利要求163所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿或長(zhǎng)春瑞濱。
165.增加欲對(duì)診斷為癌癥的患者給藥的抗癌藥物方案的有效性的方法，所述方法包括獲得抗癌藥物方案，所述抗癌藥物方案包括5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥和至少一種另外的抗癌藥物；以及將5，10亞甲基四氫葉酸加入到所述的欲對(duì)診斷為癌癥的患者給藥的抗癌藥物方案中。
166.如權(quán)利要求165所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥為5-氟尿嘧啶。
167.如權(quán)利要求166所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶能通過(guò)注射給藥。
168.如權(quán)利要求166所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的劑量為約25毫克至約5克每m2。
169.如權(quán)利要求168所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的劑量為約50毫克至約2.5克每m2。
170.如權(quán)利要求160所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的劑量為約100毫克至約1克每m2。
171.如權(quán)利要求165所述的方法，其中5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥為N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)。
173.如權(quán)利要求171所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5，-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)能以口服制劑形式每日給藥一至六次。
174.如權(quán)利要求163所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)的日劑量為約500mg至約7.5g每m2。
175.如權(quán)利要求174所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)的日劑量為約1000mg至約5g每m2。
176.如權(quán)利要求175所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)的日劑量為約1500mg至約3000mg每m2。
177.如權(quán)利要求165所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸能通過(guò)注射給藥。
178.如權(quán)利要求165所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約10毫克至1克每m2。
179.如權(quán)利要求168所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約20毫克至500毫克每m2。
180.如權(quán)利要求169所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約30毫克至250毫克每m2。
181.如權(quán)利要求165所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物包括至少一種烷化劑、抗代謝物、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、微管破壞藥物、核酸合成抑制劑、激酶抑制劑、激素阻斷藥物、蛋白體抑制劑、血管生成抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎藥物、細(xì)胞因子、細(xì)胞因子抑制劑、受體-結(jié)合藥物或5-氟尿嘧啶調(diào)節(jié)劑。
182.如權(quán)利要求165所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物包括至少一種特異性結(jié)合成員、或核酸或核酸類似物分子、或小分子。
183.如權(quán)利要求165所述的方法，其中所述癌癥為結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、胃癌、非小細(xì)胞肺癌、子宮頸癌、卵巢癌、胰腺癌、食管癌或頭頸癌。
184.如權(quán)利要求183所述的方法，其中所述癌癥為結(jié)腸直腸癌。
185.如權(quán)利要求183所述的方法，其中所述癌癥為乳腺癌。
186.如權(quán)利要求183所述的方法，其中所述癌癥為胰腺癌。
187.如權(quán)利要求183所述的方法，其中所述癌癥為胃癌。
188.如權(quán)利要求182所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物包括特異性結(jié)合成員。
189.如權(quán)利要求188所述的方法，其中所述特異性結(jié)合成員包括結(jié)合生長(zhǎng)因子的抗體。
190.如權(quán)利要求189所述的方法，其中所述結(jié)合生長(zhǎng)因子的抗體至少為一種結(jié)合VEGF的抗體。
191.如權(quán)利要求190所述的方法，其中所述結(jié)合VEGF的抗體為貝伐單抗。
192.如權(quán)利要求188所述的方法，其中所述特異性結(jié)合成員包括結(jié)合生長(zhǎng)因子受體的抗體。
193.如權(quán)利要求192所述的方法，其中所述結(jié)合生長(zhǎng)因子的抗體至少為一種結(jié)合EGFR的抗體。
194.如權(quán)利要求193所述的方法，其中所述結(jié)合EGFR的抗體為西妥昔單抗。
195.如權(quán)利要求181所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑。
196.如權(quán)利要求195所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為依立替康。
197.如權(quán)利要求181所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為抗代謝物。
198.如權(quán)利要求197所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為二氟脫氧胞嘧啶核苷(吉西他濱)、(E)-2’-脫氧-2’-(氟亞甲基)胞苷(tezacitabine)、多柔比星或表柔比星。
199.如權(quán)利要求181所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為烷化劑。
200.如權(quán)利要求199所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為絲裂霉素C、環(huán)磷酰胺、順鉑或奧沙利鉑。
201.如權(quán)利要求200所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為奧沙利鉑。
202.如權(quán)利要求181所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為激酶抑制劑。
203.如權(quán)利要求202所述的方法，所述激酶抑制劑為酪氨酸激酶抑制劑。
204.如權(quán)利要求203所述的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制劑為EGFR酪氨酸激酶抑制劑或VEGFR酪氨酸激酶抑制劑。
205.如權(quán)利要求181所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為微管破壞劑。
206.如權(quán)利要求205所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿或長(zhǎng)春瑞濱。
207.增加對(duì)癌癥患者給藥的抗癌藥物方案的有效性的方法，所述方法包括獲得抗癌藥物方案，所述抗癌藥物方案包括5-氟尿嘧啶的類似物或前藥和亞葉酸；以及用5，10亞甲基四氫葉酸代替所述的欲對(duì)診斷為癌癥的患者給藥的抗癌藥物方案中的亞葉酸。
208.如權(quán)利要求207所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的類似物或前藥為N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)。
209.如權(quán)利要求208所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)能以口服制劑的形式每日給藥一至六次。
210.如權(quán)利要求208所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)的日劑量為約500mg至約7.5g每m2。
211.如權(quán)利要求200所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)的日劑量為約1000mg至約5g每m2。
212.如權(quán)利要求201所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)的日劑量為約1500mg至約3000mg每m2。
213.如權(quán)利要求197所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸能通過(guò)注射給藥。
214.如權(quán)利要求197所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約10毫克至1克每m2。
215.如權(quán)利要求214所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約20毫克至500毫克每m2。
216.如權(quán)利要求215所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約30毫克至250毫克每m2。
217.增加欲對(duì)診斷為癌癥的患者給藥的抗癌藥物方案的有效性的方法，所述方法包括獲得抗癌藥物方案，所述抗癌藥物方案包括5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥；亞葉酸；和和至少一種另外的抗癌藥物；用5，10亞甲基四氫葉酸代替在所述抗癌藥物方案中的亞葉酸；以及增加在所述抗癌藥物方案中的至少一種另外的抗癌藥物的劑量以獲得具有增加的有效性的抗癌藥物方案。
218.如權(quán)利要求133所述的方法，其中5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥為5-氟尿嘧啶。
219.如權(quán)利要求218所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶通過(guò)注射給藥。
220.如權(quán)利要求208所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的劑量為約25毫克至約5克每m2。
221.如權(quán)利要求220所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的劑量為約50毫克至約2.5克每m2。
222.如權(quán)利要求221所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶的劑量為約100毫克至約1克每m2。
223.如權(quán)利要求217所述的方法，其中5-氟尿嘧啶或其類似物或其前藥為N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)。
224.如權(quán)利要求223所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)以口服制劑形式每日給藥一至六次。
225.如權(quán)利要求223所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)的日劑量為約500mg至約7.5g每m2。
226.如權(quán)利要求225所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)的日劑量為約1000mg至約5g每m2。
227.如權(quán)利要求226所述的方法，其中所述N4-戊氧基羰基-5’-脫氧-5-氟胞嘧啶(卡培他濱)的日劑量為約1500mg至約3000mg每m2。
228.如權(quán)利要求227所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸通過(guò)注射給藥。
229.如權(quán)利要求217所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約10毫克至1克每m2。
230.如權(quán)利要求229所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約20毫克至500毫克每m2。
231.如權(quán)利要求220所述的方法，其中所述5，10亞甲基四氫葉酸的劑量為約50毫克至250毫克每m2。
232.如權(quán)利要求217所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物包括至少一種烷化劑、抗代謝物、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、微管破壞藥物、核酸合成抑制劑、激酶抑制劑、激素阻斷藥物、蛋白體抑制劑、血管生成抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎藥物、細(xì)胞因子、細(xì)胞因子抑制劑、受體-結(jié)合藥物或5-氟尿嘧啶調(diào)節(jié)劑。
233.如權(quán)利要求217所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物包括至少一種特異性結(jié)合成員、或核酸或核酸類似物分子、或小分子。
234.如權(quán)利要求217所述的方法，其中所述癌癥為結(jié)腸直腸癌、乳腺癌、胃癌、非小細(xì)胞肺癌、子宮頸癌、卵巢癌、胰腺癌、食管癌或頭頸癌。
235.如權(quán)利要求234所述的方法，其中所述癌癥為結(jié)腸直腸癌。
236.如權(quán)利要求234所述的方法，其中所述癌癥為乳腺癌。
237.如權(quán)利要求234所述的方法，其中所述癌癥為胰腺癌。
238.如權(quán)利要求234所述的方法，其中所述癌癥為胃癌。
239.如權(quán)利要求233所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物包括特異性結(jié)合成員。
240.如權(quán)利要求239所述的方法，其中所述特異性結(jié)合成員包括結(jié)合生長(zhǎng)因子的抗體。
241.如權(quán)利要求240所述的方法，其中所述結(jié)合生長(zhǎng)因子的抗體至少為一種結(jié)合VEGF的抗體。
242.如權(quán)利要求241所述的方法，其中所述結(jié)合VEGF的抗體為貝伐單抗。
243.如權(quán)利要求239所述的方法，其中所述特異性結(jié)合成員包括結(jié)合生長(zhǎng)因子受體的抗體。
244.如權(quán)利要求243所述的方法，其中所述結(jié)合生長(zhǎng)因子的抗體至少為一種結(jié)合EGFR的抗體。
245.如權(quán)利要求234所述的方法，其中所述結(jié)合EGFR的抗體為西妥昔單抗。
246.如權(quán)利要求232所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑。
247.如權(quán)利要求246所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為依立替康。
248.如權(quán)利要求232所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為抗代謝物。
249.如權(quán)利要求248所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為二氟脫氧胞嘧啶核苷(吉西他濱)、(E)-2’-脫氧-2’-(氟亞甲基)胞苷(tezacitabine)、多柔比星或表柔比星。
250.如權(quán)利要求232所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為烷化劑。
251.如權(quán)利要求250所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為絲裂霉素C、環(huán)磷酰胺、順鉑或奧沙利鉑。
252.如權(quán)利要求241所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為奧沙利鉑。
253.如權(quán)利要求232所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為激酶抑制劑。
254.如權(quán)利要求253所述的方法，所述激酶抑制劑為酪氨酸激酶抑制劑。
255.如權(quán)利要求254所述的方法，其中所述酪氨酸激酶抑制劑為EGFR酪氨酸激酶抑制劑或VEGFR酪氨酸激酶抑制劑。
256.如權(quán)利要求232所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為微管破壞劑。
257.如權(quán)利要求256所述的方法，其中所述至少一種另外的抗癌藥物中至少一種抗癌藥物為太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿或長(zhǎng)春瑞濱。
全文摘要
本發(fā)明提供了5，10－亞甲基四氫葉酸(“5，10－CH
文檔編號(hào)A61P35/00GK1942189SQ200580012067
公開(kāi)日2007年4月4日 申請(qǐng)日期2005年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月2日
發(fā)明者瓊·M·羅賓斯, 馬克·J·坎特韋爾 申請(qǐng)人:阿德文特克斯藥物有限公司