專利名稱：作為5－h(huán)t的制作方法
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及用作5-HT4受體激動(dòng)劑的喹啉酮-甲酰胺化合物。本發(fā)明還涉及包含該化合物的藥物組合物，使用該化合物治療或預(yù)防由5-HT4受體活性介導(dǎo)的醫(yī)學(xué)病況的方法，和用于制備該化合物的方法和中間體。
現(xiàn)有技術(shù)發(fā)展水平5-羥色胺(5-羥基色胺，5-HT)是廣泛分布在身體中、既在中樞神經(jīng)系統(tǒng)又在周圍神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)遞質(zhì)。已經(jīng)鑒定了至少7個(gè)5-羥色胺受體亞型，5-羥色胺和這些不同受體之間的相互作用與多種生理功能有關(guān)。因此，很有興趣開發(fā)靶向特定5-HT受體亞型的治療劑。
特別地，5-HT4受體的表征和與該受體相互作用的藥劑的鑒定已經(jīng)成為重大的新近研究活動(dòng)的焦點(diǎn)(參見例如Langlois和Fischmeister的綜述，J.Med.Chem.2003，46，319-344.)。5-HT4受體激動(dòng)劑對(duì)于治療胃腸道動(dòng)力降低的疾病是有用的。這些疾病包括過敏性腸綜合征(IBS)、長期便秘、機(jī)能性消化不良、胃排空延遲、胃食管返流疾病(GERD)、胃輕癱、手術(shù)后腸梗阻、假性腸梗塞和藥物造成的運(yùn)輸延遲。另外，已經(jīng)建議一些5-HT4受體激動(dòng)劑化合物可用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥，包括認(rèn)知障礙、行為障礙、心境障礙和自主功能控制障礙。
雖然調(diào)節(jié)5-HT4受體活性的藥劑有很多效用，然而目前只有極少數(shù)5-HT4受體激動(dòng)劑化合物在臨床上應(yīng)用。一種廣泛用于治療胃腸道動(dòng)力障礙的藥物，西沙必利，已經(jīng)從市場上召回，據(jù)報(bào)道是由于對(duì)心臟的副作用。另一種藥物普盧卡必利的晚期臨床試驗(yàn)已經(jīng)被懸置。
相應(yīng)地，對(duì)于能達(dá)到其預(yù)期效應(yīng)而又具有最小副作用的新5-HT4受體激動(dòng)劑存在需求。在其它性質(zhì)當(dāng)中，優(yōu)選藥物可具有改進(jìn)的選擇性、效力、藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)和/或作用的持續(xù)時(shí)間。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了具有5-HT4受體激動(dòng)活性的新化合物。在其它性質(zhì)當(dāng)中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物是強(qiáng)有力的并且選擇性的5-HT4受體激動(dòng)劑。另外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物顯示出良好的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，預(yù)期它經(jīng)口服給藥有良好的生物利用度。
相應(yīng)地，本發(fā)明提供了式(I)化合物 其中R1是氫、鹵素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基；R2是C3-4烷基或C3-6環(huán)烷基；R3是氫或C1-3烷基；R4是-S(O)2R6或-C(O)R7；R5是氫、C1-3烷基、被-OH或C1-3烷氧基取代的C2-3烷基、或-CH2-吡啶基；R6是C1-3烷基；或，R5和R6一起形成C3-4亞烷基；和R7是氫、C1-3烷基或吡啶基；或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明化合物和藥學(xué)可接受載體的藥物組合物。
本發(fā)明還提供了治療與5-HT4受體活性相關(guān)的疾病或病癥的方法，例如胃腸道動(dòng)力減弱疾病，該方法包括給哺乳動(dòng)物施用治療有效量的本發(fā)明化合物。
進(jìn)一步地，本發(fā)明提供了治療哺乳動(dòng)物與5-HT4受體活性相關(guān)的疾病或病癥的方法，該方法包括給哺乳動(dòng)物施用治療有效量的本發(fā)明的藥物組合物。
本發(fā)明化合物也可以用作研究工具，即，用于研究生物系統(tǒng)或樣品，或用于研究其它化合物的活性。相應(yīng)地，在另一方法方面中，本發(fā)明提供了使用式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體作為研究工具，研究生物系統(tǒng)或樣品，或發(fā)現(xiàn)新的5-HT4受體激動(dòng)劑的方法，該方法包括將生物系統(tǒng)或樣品與本發(fā)明化合物接觸，并測定由該化合物引起的對(duì)于生物系統(tǒng)或樣品的作用。
在單獨(dú)不同的方面中，本發(fā)明還提供了本文所述的合成方法和中間體，所述中間體對(duì)于制備本發(fā)明化合物是有用的。
本發(fā)明還提供了本文所述的用于醫(yī)學(xué)治療的本發(fā)明化合物，以及本發(fā)明化合物在制備治療哺乳動(dòng)物與5-HT4受體活性相關(guān)的疾病或病癥的制劑或藥物中的應(yīng)用，例如，胃腸道動(dòng)力減弱疾病。
發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明提供了新的式(I)喹啉酮-甲酰胺5-HT4受體激動(dòng)劑，或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。下列取代基和值旨在提供本發(fā)明各個(gè)方面有代表性的實(shí)例。這些有代表性的值旨在進(jìn)一步定義這些方面，并不旨在排除其它值或限制本發(fā)明范圍。
在本發(fā)明具體方面中，R1是氫、鹵素、C1-4烷基或C1-4烷氧基。
在其它具體方面中，R1是氫、鹵素或C1-4烷基；或R1是氫或鹵素；或R1是氟；或R1是溴。
在又一個(gè)具體方面中，R1是氫。
在具體方面中，R2是C3-4烷基或C3-6環(huán)烷基。
在另一個(gè)具體方面中，R2是C3-4烷基。典型的R2基團(tuán)包括正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基和叔丁基。
在另一個(gè)具體方面中，R2是異丙基。
在更其它具體方面中，R2是C3-4烷基或C4-5環(huán)烷基；或R2是異丙基或C4-5環(huán)烷基。
在具體方面中，R3是氫或C1-3烷基。
在其它具體方面中，R3是氫或R3是甲基。
在具體方面中，R4是-S(O)2R6，其中，R6是C1-3烷基。
在另一個(gè)具體方面中，R4是-S(O)2CH3。
在具體方面中，R4是-C(O)R7，其中，R7是氫、C1-3烷基或吡啶基。
在其它具體方面中，R4是-C(O)R7，其中，R7是氫或C1-3烷基；或R4是-C(O)R7，其中，R7是氫或甲基；或R4是-C(O)R7，其中，R7是氫；或R4是-C(O)R7，其中，R7是甲基。
在又一個(gè)具體方面中，R4是-C(O)R7，其中，R7是3-吡啶基或4-吡啶基。
在具體方面中，R5是氫；C1-3烷基；被-OH或C1-3烷氧基取代的C2-3烷基；或-CH2-吡啶基。
在其它具體方面中，R5是氫、C1-3烷基或-CH2-吡啶基；或R5是氫或C1-3烷基。
在更其它具體方面中，R5是-CH2-3-吡啶基；或R5是氫或甲基；或R5是氫；或R5是甲基。
在更其它具體方面中，R5和R6一起形成-(CH2)3-或-(CH2)4；或R5和R6一起形成-(CH2)3-。
在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了式(I)化合物，其中，R3是氫。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了式(I)化合物，其中，R4是-S(O)2R6。
在另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了式(I)化合物，其中，R4是-C(O)R7。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了式(I)化合物，其中，R1是氫或鹵素；R2是異丙基或C4-5環(huán)烷基；而R3、R4、R5、R6和R7如式(I)中定義。
在又一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了式(I)化合物，其中R1是氫；
R2是C3-4烷基或C4-5環(huán)烷基；R3是氫；R4是-S(O)2R6或-C(O)R7；R5是氫或C1-3烷基；R6是C1-3烷基；和R7是氫或C1-3烷基。
在又一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了一組式(II)化合物
其中，R1是氫，R2是異丙基，而R3、R4、R5和R6，或R3、R4、R5和R7分別取表I和表II中所示的值。
表I
表II
本文所用的化學(xué)命名協(xié)議用實(shí)施例1化合物進(jìn)行舉例說明
根據(jù)由MDL Information Systems，GmbH(法蘭克福，德國)提供的AutoNom軟件，該化合物被命名為1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺。該指定(1S，3R，5R)描述了與二環(huán)系統(tǒng)有關(guān)的鍵的相對(duì)取向，它們用實(shí)楔形和虛楔形表示。該化合物可選擇地表示成N-[(3-內(nèi))-8-[2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基]-1-(1-甲基乙基)-2-氧代-1，2-二氫-3-喹啉甲酰胺。在所有上述本發(fā)明化合物中，喹啉酮-甲酰胺處于氮雜二環(huán)辛烷基的內(nèi)位。
可特別提及下列化合物1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-(甲磺酰基氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(S)-2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(乙?；?甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(甲?；?甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-3-(乙?；?甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-3-(甲?；?甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；和1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺酰基氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺。
如以上所列的特定化合物所舉例說明的，本發(fā)明化合物可包含手性中心，特別地，在式(I)或(II)中攜帶-OR3取代基的碳原子處。相應(yīng)地，除非特別說明，本發(fā)明包括外消旋混合物、純立體異構(gòu)體和這類異構(gòu)體中立體異構(gòu)體富集的混合物。當(dāng)說明特定立體異構(gòu)體時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知道，除非另外說明，少量其它立體異構(gòu)體可存在于本發(fā)明組合物中，條件是該組合物作為一個(gè)整體的任何效用不被這些其它異構(gòu)體的存在所消除。
定義當(dāng)描述本發(fā)明化合物、組合物和方法時(shí)，除非另外說明，下列術(shù)語具有下列含義。
術(shù)語“烷基”指的是可為直鏈、支鏈或其組合的單價(jià)飽和烴基。除非另外說明，該烷基通常包含1到10個(gè)碳原子。例如，典型的烷基包括甲基、乙基、正丙基(n-Pr)、異丙基(i-Pr)、正丁基(n-Bu)、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基和正癸基等。
術(shù)語“亞烷基”指的是可為直鏈、支鏈或其組合的二價(jià)飽和烴基。除非另外說明，該亞烷基通常包含1到10個(gè)碳原子。例如，典型的亞烷基包括亞甲基、亞乙基、亞正丙基、亞正丁基、丙烷-1，2-二基(1-甲基亞乙基)、和2-甲基丙烷-1，2-二基(1，1-二甲基亞乙基)等。
術(shù)語″烷氧基″指的是單價(jià)基團(tuán)-O-烷基，其中，烷基如上定義。例如，典型的烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基等。
術(shù)語“環(huán)烷基”指的是可為單環(huán)或多環(huán)的單價(jià)飽和碳環(huán)基團(tuán)。除非另外說明，該環(huán)烷基通常包含3到10個(gè)碳原子。例如，典型的環(huán)烷基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛基等。
術(shù)語“鹵素”指的是氟、氯、溴或碘。
術(shù)語″化合物″指的是合成制備或以任何其它途徑如通過代謝制備的化合物。
術(shù)語“治療有效量”指的是當(dāng)給需要治療的患者施用時(shí)，足以實(shí)現(xiàn)治療的量。
本文所用的術(shù)語“治療”指的是治療患者如哺乳動(dòng)物(尤其是人)的疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況，它包括
(a)預(yù)防疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況發(fā)生，即，對(duì)患者的預(yù)防性治療；(b)改善疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況，即，消除患者的疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況或引起其消退；(c)遏制疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況，即，減緩或阻止患者疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況的發(fā)展；或(d)減輕患者疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況的癥狀。
術(shù)語“藥學(xué)可接受的鹽”指的是從酸或堿制備的鹽，它對(duì)于給患者例如哺乳動(dòng)物施用是可接受的。該鹽可以衍生自藥學(xué)可接受的無機(jī)酸或有機(jī)酸，和衍生自藥學(xué)可接受的堿。典型地，本發(fā)明化合物藥學(xué)可接受的鹽是從酸制備的。
衍生自藥學(xué)可接受的酸的鹽包括但不限于乙酸、己二酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、富馬酸、葡糖酸、谷氨酸、氫溴酸、鹽酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對(duì)甲苯磺酸、xinafoic(1-羥基-2-萘甲酸)和萘-1，5-二磺酸等。
術(shù)語“溶劑化物”指的是由一個(gè)或多個(gè)溶質(zhì)(即本發(fā)明化合物或其藥學(xué)可接受的鹽)分子和一個(gè)或多個(gè)溶劑分子形成的復(fù)合物或聚集物。該溶劑化物通常是具有基本上固定的溶質(zhì)和溶劑摩爾比的結(jié)晶固體。例如，典型的溶劑包括水、甲醇、乙醇、異丙醇和乙酸等。當(dāng)溶劑是水時(shí)，所形成的溶劑化物是水合物。
可以理解的是，術(shù)語“或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體”旨在包括鹽、溶劑化物和立體異構(gòu)體的所有排列，例如式(I)化合物的立體異構(gòu)體的藥學(xué)可接受的鹽的溶劑化物。
術(shù)語“氨基-保護(hù)基”指的是適合于阻止氨基氮處發(fā)生不希望的反應(yīng)的保護(hù)基。典型的氨基-保護(hù)基包括但不限于甲?；?；?；?，例如烷酰基，如乙酰基；烷氧羰基，如叔丁氧羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如芐氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；芳甲基，如芐基(Bn)、三苯甲基(Tr)和1，1-二-(4’-甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)；和諸如此類。
一般合成過程本發(fā)明化合物可以使用下列一般方法和程序，從容易獲得的原料制備。雖然本發(fā)明的特定方面在下列路線圖中詳細(xì)說明了，然而本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，本發(fā)明的所有方面可以使用本文所述的方法或使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它方法、試劑和原料制備。也可以理解的是，雖然給出了典型或優(yōu)選的工藝條件(即反應(yīng)溫度、時(shí)間、反應(yīng)物的摩爾比、溶劑、壓力等)，但是其它操作條件也可以使用，除非另外說明。最佳反應(yīng)條件可根據(jù)所用的特定試劑或溶劑而改變，但這種反應(yīng)條件可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)優(yōu)化程序確定。
另外，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，常規(guī)保護(hù)基對(duì)于防止某些官能團(tuán)經(jīng)歷不希望的反應(yīng)來說可能是必需的。為特定官能團(tuán)選擇適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基以及保護(hù)和去保護(hù)的適當(dāng)條件都是現(xiàn)有技術(shù)公知的。例如，大量保護(hù)基和它們的引入和去除都描述在T.W.Greene和G.M.Wuts，Protecting Groups in Organic Synthesis，Third Edition，Wiley，New York，1999，和其中引用的參考文獻(xiàn)中。
在一種合成方法中，式(I)化合物如路線圖A中所述制備。(除非另外說明，在下列路線圖中所示的取代基和變量具有以上提供的定義)。
路線圖A 在路線圖A中，L代表離去基團(tuán)，例如氯、溴、碘或乙氧基，或試劑L-R4是羧酸HO-C(O)R7，即，L在形式上代表羥基。
路線圖A反應(yīng)的最佳反應(yīng)條件可根據(jù)試劑L-R4的化學(xué)性質(zhì)而改變，這對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是公知的。
例如，當(dāng)L是鹵素離去基團(tuán)如氯時(shí)，反應(yīng)通常如下進(jìn)行在惰性稀釋劑如二氯甲烷中，在過量堿例如約3-約6當(dāng)量的堿如N，N-二異丙基乙基胺或1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(DBY)的存在下，將中間體(III)與約1-約4當(dāng)量的式L-R4化合物接觸。適當(dāng)?shù)亩栊韵♂寗┮舶∟，N-二甲基甲酰胺、三氯甲烷、1，1，2，2-四氯乙烷和四氫呋喃等。反應(yīng)通常在約-100℃到約30℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行約一刻鐘-約2小時(shí)，或直至反應(yīng)基本完成。其中L是氯的試劑L-R4實(shí)例包括甲磺酰氯和乙酰氯。
當(dāng)試劑L-R4是羧酸時(shí)，路線圖A代表酰胺偶合反應(yīng)，它通常如下進(jìn)行在惰性稀釋劑例如N，N-二甲基甲酰胺中，在偶聯(lián)劑例如苯并三唑-1-基氧三吡咯烷-六氟磷酸鏻(PyBop)的存在下，將中間體(III)與約1-約4當(dāng)量的羧酸L-R4化合物接觸。反應(yīng)通常在環(huán)境溫度下進(jìn)行約一刻鐘-約2小時(shí)，或直至反應(yīng)基本完成。適當(dāng)?shù)目晒┻x擇的偶聯(lián)劑包括1，3-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)、和與1-羥基-7-氮雜苯并三唑(HOAt)聯(lián)合的PyBop。
可選地，中間體(III)與羧酸L-R4的酰胺偶合可以如下進(jìn)行將L-R4轉(zhuǎn)變成活化的酯，例如N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)酯，或?qū)ο趸交?，或酸咪?acid imidazole)，然后將它與中間體(III)反應(yīng)。
可選地，當(dāng)試劑L-R4是液體例如甲酸乙酯時(shí)，反應(yīng)可以如下進(jìn)行將(III)溶于極大過量的試劑L-R4，并加熱至約50℃-約100℃約12-約24小時(shí)。
用常規(guī)方法分離和純化式(I)產(chǎn)物。例如，可以將產(chǎn)物減壓濃縮至干，溶于弱酸水溶液，并用HPLC色譜純化。
可選地，可以將根據(jù)路線圖A制備的其中R2是氫的式(I)化合物N-烷基化而制備式(I)化合物。通常通過將其中R2是氫的式(I)化合物與約1-約4當(dāng)量的其中L′是離去基團(tuán)如碘或溴的式L′-R2化合物接觸，進(jìn)行N-烷基化反應(yīng)。通常在極性非質(zhì)子溶劑如二甲基甲酰胺中，在約2-約4當(dāng)量強(qiáng)堿如叔丁醇鉀的存在下進(jìn)行該反應(yīng)。典型地，反應(yīng)在約60℃-約100℃的溫度下進(jìn)行約6-約24小時(shí)，或直至反應(yīng)基本完成。
在又一個(gè)可選的實(shí)施方案中，從其中R1是氫的式(I)化合物通過常規(guī)方法制備其中R1不是氫的式(I)化合物。
從容易獲得的原料制備式(III)中間體。例如，當(dāng)攜帶取代基-OR3的碳非手性時(shí)，通過路線圖B中圖解說明的過程制備式(III)中間體。
路線圖B 其中，L′獨(dú)立地代表鹵素離去基團(tuán)，例如溴、氯或碘。荷負(fù)電荷的抗衡離子也與荷正電荷的中間體(V)或(V′)相伴存在。
首先，將式(IV)中間體與環(huán)氧乙烷化合物例如2-溴甲基環(huán)氧乙烷(通常稱為表溴醇)反應(yīng)，形成式(V)的吖丁啶鹽。通常在極性稀釋劑如乙醇中，通過將(IV)與約2-約4當(dāng)量的2-溴甲基環(huán)氧乙烷接觸，進(jìn)行該反應(yīng)。通常在環(huán)境溫度下反應(yīng)約24-約48小時(shí)或直至反應(yīng)基本完成來進(jìn)行該反應(yīng)。
可以理解的是，在路線圖B的過程中和使用中間體(IV)的下述其它過程中，中間體(IV)可以以游離堿的形式或以鹽的形式提供，如果需要的話，用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的知識(shí)適當(dāng)調(diào)節(jié)反應(yīng)條件。
可以在惰性稀釋劑中，在約1-約3當(dāng)量強(qiáng)堿如叔丁醇鉀或氫化鈉的存在下，通過將中間體(V)與略少于1當(dāng)量-約1當(dāng)量的其中R3是C1-3烷基的式L′-R3化合物接觸，來制備其中R3是C1-3烷基的式(V′)中間體。該反應(yīng)通常在環(huán)境溫度下進(jìn)行約一刻鐘-1小時(shí)，或直至反應(yīng)基本完成。適當(dāng)?shù)亩栊韵♂寗┌ǘ燃淄椤⑷燃淄楹?，1，2，2-四氯乙烷等。
接下來，將吖丁啶中間體(V)或(V′)與式H2NR5胺反應(yīng)，得到中間體(III)。典型地，將吖丁啶中間體溶于惰性稀釋劑如乙醇，并與約1-約8當(dāng)量胺H2NR5接觸。例如，當(dāng)胺H2NR5是揮發(fā)性試劑如甲胺時(shí)，優(yōu)選使用約5-約7當(dāng)量的該胺。反應(yīng)通常在約50℃-約100℃的溫度下進(jìn)行約12-約24小時(shí)，或直至反應(yīng)基本完成。
可以用甲酸銨代替氨，即代替路線圖B中所示的試劑H2NR5，從吖丁啶中間體(V)或(V′)制備其中R5是氫的式(III)中間體。可選地，為了制備其中R5是氫的中間體(III)，可以通過與疊氮化物如疊氮化鈉反應(yīng)打開(V)或(V′)的吖丁啶環(huán)，然后接著通過還原反應(yīng)得到中間體(III)，或可以通過與氫氧化銨反應(yīng)打開該環(huán)。
如實(shí)施例4a中詳細(xì)所述，當(dāng)R3和R5是氫，并且攜帶取代基-OR3的碳非手性時(shí)，可以通過將中間體(IV)與含有受保護(hù)氮原子的環(huán)氧乙烷基甲基化合物反應(yīng)，然后去保護(hù)，制備式(III)中間體。一種有用的試劑是2-環(huán)氧乙烷基甲基-異吲哚-1，3-二酮，通常稱為環(huán)氧丙基鄰苯二甲酰亞胺，它與中間體(IV)反應(yīng)，形成其中鄰苯二甲酰亞氨基取代的2-羥基丙基 與式(IV)的氮雜二環(huán)辛烷環(huán)的氮相連的中間體。然后在肼中回流除去鄰苯二甲酰亞氨基，形成其中R3和R5是氫的式(III)中間體。
其中R3和R5是氫的式(III)中間體也可以通過將吖丁啶(V)與鄰苯二甲酰亞胺的陰離子反應(yīng)，隨后用肼處理來制備。
在可供選擇的合成方法中，其中R3是氫的式(III)中間體可以通過將中間體(IV)與受保護(hù)的中間體(VI)反應(yīng) 接著去保護(hù)來制備。在式(VI)中，P1是氨基-保護(hù)基，L′是鹵素離去基團(tuán)，星號(hào)表示手性中心。利用式(VI)中間體的過程對(duì)于制備其中用星號(hào)標(biāo)記的中心的立體化學(xué)尤其是(R)或(S)的形式的中間體(III)，以及對(duì)于制備非手性形式的中間體(III)是有用的。
典型地，在極性稀釋劑如甲醇中，在多于1當(dāng)量的堿如N，N-二異丙基乙基胺的存在下，將中間體(IV)與約1-約2當(dāng)量的中間體(VI)接觸。反應(yīng)通常在約60℃-約100℃的溫度下進(jìn)行約12-約24小時(shí)，或直至反應(yīng)基本完成。用標(biāo)準(zhǔn)程序除去保護(hù)基P1，得到式(III)中間體。有用的保護(hù)基P1是Boc，它通常通過用酸如三氟乙酸處理除去。
在制備中間體(III)的又一個(gè)可選方法中，在與中間體(IV)反應(yīng)生成中間體(III)以前，中間體(VI)可以首先轉(zhuǎn)變成環(huán)化形式(VII) 通常是在堿例如氫氧化鈉的存在下，通過將中間體(VI)溶于惰性稀釋劑例如四氫呋喃，制備中間體(VII)。通常在極性稀釋劑如甲醇中，通過將中間體(IV)與約1-約4當(dāng)量中間體(VII)接觸，進(jìn)行(VII)與(IV)的反應(yīng)，得到中間體(III)。該反應(yīng)通常在約60℃-約100℃的溫度下進(jìn)行約1-約4小時(shí)，或直至反應(yīng)基本完成。用標(biāo)準(zhǔn)程序除去保護(hù)基P1得到式(III)中間體。
可以從環(huán)氧乙烷制備受保護(hù)的中間體(VI)，如路線圖C中對(duì)使用手性環(huán)氧乙烷形成Boc-保護(hù)的手性中間體(VI′)的特定實(shí)例所闡明的。該反應(yīng)同樣可用于制備非手性式(VI)化合物。
路線圖C 如路線圖C中所示，芐胺2在非極性稀釋劑如己烷或甲苯中與至少1當(dāng)量的手性環(huán)氧乙烷1接觸，形成2-羥基丙胺3。反應(yīng)通常在室溫下進(jìn)行約12-約24小時(shí)，或直至反應(yīng)基本完成。中間體3通常是在氫氣氛下，在過渡金屬催化劑的存在下，與稍過量例如約1.1當(dāng)量的二碳酸二叔丁酯(通常稱為(Boc)2O)反應(yīng)，生成Boc保護(hù)的中間體(VI′)。反應(yīng)通常是在環(huán)境溫度下進(jìn)行約8-約24小時(shí)。
制備式(IV)中間體的過程顯示在路線圖D中。
路線圖D 受保護(hù)的氨基氮雜二環(huán)辛烷，或通常稱為氨基托烷5，首先與取代的喹啉酮羧酸(VIII)反應(yīng)。典型地，該反應(yīng)如下進(jìn)行，首先將(VIII)轉(zhuǎn)變成?；?，通過將(VIII)與至少1當(dāng)量、優(yōu)選約1-約2當(dāng)量的活化劑如亞硫酰氯或草酰氯，在芳族稀釋劑如甲苯、苯、二甲苯等中接觸。該反應(yīng)通常在約80℃-約120℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行約15分鐘-約4小時(shí)，或直至反應(yīng)基本完成。
酰基氯溶液通常加到約1當(dāng)量的氨基托烷5的二相混合物中形成受保護(hù)的中間體，它通過標(biāo)準(zhǔn)程序萃取。5的二相混合物一般是通過將5溶于如上面所用的芳族稀釋劑中，并加入包含過量堿如氫氧化鈉或氫氧化鉀優(yōu)選約2-5當(dāng)量堿的水溶液而制備的。
可選地，中間體5與羧酸(VIII)的酰胺偶合可以在偶聯(lián)劑如1，3-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)或苯并三唑-1-基氧三吡咯烷-六氟磷酸鏻(PyBop)(任選與1-羥基-7-氮雜苯并三唑(HOAt)聯(lián)合)的存在下進(jìn)行，如以上所述的中間體(III)與羧酸的酰胺偶合。在又一個(gè)可選方案中，中間體5與羧酸(VIII)的酰胺偶合可以通過將(VIII)轉(zhuǎn)變成活化的酯(也如上所述)而進(jìn)行。
通過標(biāo)準(zhǔn)程序除去保護(hù)基P1，得到式(IV)中間體。例如，當(dāng)保護(hù)基是Boc時(shí)，通常是用酸如三氟乙酸處理，得到中間體的酸性鹽而進(jìn)行去除。如果需要，通過用堿常規(guī)處理，中間體(IV)的酸性鹽可以轉(zhuǎn)變成游離堿。在另一個(gè)實(shí)例中，通過在適當(dāng)?shù)慕饘俅呋瘎┤玮Z碳上氫解，常規(guī)去除保護(hù)基Cbz。
在本申請(qǐng)所述反應(yīng)中采用的受保護(hù)的氨基托烷5是從很容易獲得的原料制備的。例如，當(dāng)保護(hù)基P1是Boc時(shí)，通過路線圖E中所述操作制備受保護(hù)的氨基托烷5′路線圖E 如下面實(shí)施例1a中的詳細(xì)描述，為了制備受保護(hù)的中間體5′，首先，在緩沖劑如磷酸氫二鈉的存在下，在酸性水溶液中，將2，5-二甲氧基四氫呋喃6與約1-2當(dāng)量、優(yōu)選約1.5當(dāng)量的芐胺和稍過量例如約1.1當(dāng)量的1，3-丙酮二羧酸7接觸。將反應(yīng)混合物加熱至約60-約100℃，以確保產(chǎn)物8-芐基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-酮8(通常稱為N-芐基托烷酮)中任何羧化中間體的脫羧。
通常是在氫氣氛下，在過渡金屬催化劑的存在下，將中間體8與稍過量例如約1.1當(dāng)量的二碳酸二叔丁酯(通常稱為(Boc)2O)反應(yīng)，生成Boc保護(hù)的中間體9，3-氧代-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯。反應(yīng)通常在環(huán)境溫度下進(jìn)行約12-約72小時(shí)。最終，在過渡金屬催化劑的存在下，在惰性稀釋劑如甲醇中，中間體9與極大過量例如至少約25當(dāng)量的甲酸銨接觸，以高立體特異性生成內(nèi)構(gòu)型的產(chǎn)物5′，例如內(nèi)型與外型之比＞99∶1。反應(yīng)通常在環(huán)境溫度下進(jìn)行約12-約72小時(shí)，或直至反應(yīng)基本完成。分份加入甲酸銨試劑是有利的。例如，中間體9與最初份量為約15-約25當(dāng)量的甲酸銨接觸。間隔約12-約36小時(shí)以后，加入另一份約5-約10當(dāng)量的甲酸銨。在類似的間隔之后可以重復(fù)隨后的添加。可以用常規(guī)操作如堿萃取來純化產(chǎn)物5′。
在可選的合成方法中，如路線圖F所說明的，通過將取代的喹啉酮羧酸(VIII)與式(IX)中間體偶聯(lián)制備式(I)化合物。
路線圖F 路線圖F的反應(yīng)通常是在上述羧酸(VIII)與中間體5反應(yīng)的酰胺偶合條件下進(jìn)行的。
可以通過對(duì)式(X)中間體脫保護(hù)制備式(IX)中間體 其中，P2代表氨基-保護(hù)基。
式(X)中間體可以從很容易獲得的原料，使用類似于上述烷化作用和其它反應(yīng)的操作和/或使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的可替代反應(yīng)制備。例如，可以使用中間體10制備中間體(X) 可通過用氨基-保護(hù)基P2保護(hù)氨基氮雜二環(huán)辛烷5的氨基氮，然后從氮雜二環(huán)辛烷基團(tuán)的氮上除去P1，形成中間體10。選擇保護(hù)基P1和P2，使得它們?cè)诓煌瑮l件下被除去。例如，當(dāng)選擇P1為Boc時(shí)，那么Cbz可以用作P2。在上述制備中間體(III)的反應(yīng)中，用受保護(hù)的氨基托烷10替代中間體(IV)，得到式(X)中間體。
在又一個(gè)合成方法中，在下面用式(I′)表示的其中R3是氫的式(I)化合物可以如路線圖G中所說明的進(jìn)行制備。
路線圖G 中間體(XI)可包含手性中心，如受保護(hù)的環(huán)氧乙烷中間體(VII)所明確顯示。
典型地，中間體(IV)在極性稀釋劑如乙醇中與約1-約2當(dāng)量的環(huán)氧乙烷中間體(XI)接觸，形成產(chǎn)物(I′)。中間體(IV)可以以鹽的形式提供，在這種情況下，在加入環(huán)氧乙烷以前，將摩爾稍過量的堿性堿包括在反應(yīng)混合物中。反應(yīng)通常在約60℃-約100℃的溫度下進(jìn)行約1-約3小時(shí)，或直至反應(yīng)基本完成?？梢詮亩栊韵♂寗┲型ㄟ^結(jié)晶分離作為游離堿或作為酸性鹽的產(chǎn)物。
可以通過將路線圖C中說明的環(huán)氧乙烷中間體1與仲胺HNR4R5反應(yīng)，制備式(XI)中間體。典型地，含約1當(dāng)量堿如氫氧化鈉、氫氧化鋰、氫氧化銫或氫氧化鉀的胺HNR4R5的水溶液與約1.5-約2.5當(dāng)量的環(huán)氧乙烷中間體1接觸。反應(yīng)通常在約0℃-約10℃的溫度下進(jìn)行約12-約30小時(shí)，或直至反應(yīng)基本完成。
通過類似于文獻(xiàn)Suzuki等人，Heterocycles，2000，53，2471-2485中報(bào)道的和下列實(shí)施例中所述的方法，很容易地制備喹啉酮羧酸(VIII)。
試劑L′-R2、L′-R3、L-R4、H2NR5和HNR4R5是可商購的，或通過標(biāo)準(zhǔn)程序從常用原料很容易制備。
關(guān)于制備本發(fā)明典型化合物或其中間體的特定反應(yīng)條件和其它方法的進(jìn)一步細(xì)節(jié)在下列實(shí)施例中描述。
相應(yīng)地，在方法方面中，本發(fā)明提供了制備式(I)化合物、或其鹽或立體異構(gòu)體的方法，該方法包括(a)將式(III)化合物 與式L-R4化合物反應(yīng)，其中，L是離去基團(tuán)，或L-R4代表HO-C(O)R7；或(b)將式(VIII)化合物 與式(IX)化合物 反應(yīng)，得到式(I)化合物或其鹽或立體異構(gòu)體。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了式(III)化合物、或其鹽或立體異構(gòu)體或受保護(hù)的衍生物，其中，R1、R2、R3和R5如式(I)中所定義。
在其它方法方面中，本發(fā)明提供了制備式(I′)化合物(其中，R1、R2、R4和R5如式(I)中所定義)或其鹽或立體異構(gòu)體的方法，該方法包括將式(IV)化合物 或其鹽與式(XI)化合物
反應(yīng)，得到式(I′)化合物或其鹽或立體異構(gòu)體。
藥物組合物本發(fā)明的喹啉酮-甲酰胺化合物通常以藥物組合物的形式給患者施用。可通過任何可接受的給藥途徑給患者施用該藥物組合物，包括但不限于，口服、直腸、陰道、鼻腔、吸入、局部(包括經(jīng)皮)和胃腸外給藥模式。
相應(yīng)地，在其組合物的一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及包含藥學(xué)可接受的載體或賦形劑以及治療有效量的式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽的藥物組合物。任選地，該藥物組合物可包含其它治療劑和/或制劑輔劑，如果需要的話。
本發(fā)明的藥物組合物通常包含治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。典型地，該藥物組合物將包含約0.1-約95％重量的活性劑；優(yōu)選地，約5-約70％重量；更優(yōu)選地，約10-約60％重量的活性劑。
任何常規(guī)載體或賦形劑可用于本發(fā)明藥物組合物。特定載體或賦形劑或載體或賦形劑的組合的選擇將取決于用于治療特定患者的給藥模式，或醫(yī)學(xué)病況或疾病狀態(tài)的類型。在這方面，用于特定給藥模式的適當(dāng)藥物組合物的制備在藥學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員公知的范圍內(nèi)。另外，用于該組合物的成分可商購自例如Sigma，郵政信箱14508，圣路易斯，MO 63178。作為進(jìn)一步的闡述，常規(guī)制劑技術(shù)描述在RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，第20版，LippincottWilliams & White，Baltimore，Maryland(2000)；和H.C.Ansel等人，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第7版，Lippincott Williams & White，Baltimore，Maryland(1999)中。
可以用作藥學(xué)可接受載體的典型材料的實(shí)例包括但不限于下列(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素，例如微晶纖維素，及其衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；(4)西黃蓍膠粉；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石粉；(8)賦形劑，例如可可脂和栓劑蠟類；(9)油，例如花生油、棉子油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯類，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；(15)海藻酸；(16)無熱原水；(17)等滲鹽水；(18)林格溶液；(19)乙醇；(20)磷酸鹽緩沖溶液；和(21)在藥物組合物中采用的其它無毒可相容的物質(zhì)。
本發(fā)明的藥物組合物通常是通過將本發(fā)明化合物與藥學(xué)可接受的載體和一種或多種任選成分充分密切混合或摻和而制備的。如果需要或希望的話，然后可以使用常規(guī)方法和設(shè)備將所得的均一摻和混合物成形或填裝成片劑、膠囊和藥丸等。
本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選包裝成單位劑型。術(shù)語″單位劑型″指的是適合于給患者定量給藥的物理分離單位，即，各個(gè)單位包含預(yù)定量活性劑，經(jīng)計(jì)算可單獨(dú)或與一個(gè)或多個(gè)附加單位聯(lián)合產(chǎn)生所需的治療效果。例如，該單位劑型可為膠囊、片劑和藥丸等。
在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物適合于口服給藥。用于口服給藥的適當(dāng)藥物組合物可為膠囊、片劑、藥丸、錠劑、扁膠囊、糖錠劑、粉劑、顆粒劑的形式；或作為含水液體或非含水液體中的溶液或混懸液；或作為水包油或油包水液體乳劑；或作為酏劑或糖漿劑等；各自包含預(yù)定量作為有效成分的本發(fā)明化合物。
當(dāng)意欲以固體劑型(即作為膠囊、片劑、藥丸等)口服給藥時(shí)，本發(fā)明藥物組合物通常包含作為有效成分的本發(fā)明化合物和一種或多種藥學(xué)可接受的載體，例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣。任選地或可選地，該固體劑型還可包含(1)填充劑或增量劑，例如淀粉、微晶纖維素、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合劑，例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯膠；(3)保濕劑，例如甘油；(4)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸鹽、和/或碳酸鈉；(5)溶解阻滯劑，例如石蠟；(6)吸收促進(jìn)劑，例如季銨化合物；(7)潤濕劑，例如鯨蠟醇和/或單硬脂酸甘油酯；(8)吸收劑，例如高嶺土和/或膨潤土粘土；(9)潤滑劑，例如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉和/或其混合物；(10)著色劑；和(11)緩沖劑。
釋放劑(Release agent)、潤濕劑、包衣衣料、甜味劑、調(diào)味劑和香料、防腐劑和抗氧化劑也可以存在于本發(fā)明藥物組合物中。藥學(xué)可接受的抗氧化劑的實(shí)例包括(1)水溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸、鹽酸半胱氨酸、硫酸氫鈉、偏硫酸氫鈉和亞硫酸鈉等；(2)油溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁羥基茴香醚(BHA)、丁羥甲苯(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯和α-生育酚等；和(3)金屬螯合劑，例如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸和磷酸等。片劑、膠囊和藥丸等的包衣衣料包括用于腸溶包衣的那些，例如醋酞纖維素(CAP)、聚醋酸乙烯鄰苯二甲酸酯(PVAP)、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物、醋酸纖維素苯三酸酯(CAT)、羧甲基乙基纖維素(CMEC)和羥丙甲基纖維素乙酸琥珀酸酯(HPMCAS)等。
如果需要的話，也可使用例如不同比例的羥丙甲基纖維素，或其它聚合物基質(zhì)，脂質(zhì)體和/或微球，配制本發(fā)明藥物組合物，以提供有效成分的緩釋或控釋。
另外，本發(fā)明的藥物組合物可任選包含遮光劑，并且可配制成只在或優(yōu)先在胃腸道的某些部位釋放有效成分，任選地以延遲的方式?？梢允褂玫陌窠M合物的實(shí)例包括聚合物和蠟。有效成分也可以與一種或多種上述賦形劑制成微囊形式，如果適當(dāng)?shù)脑挕?br> 適當(dāng)?shù)目诜o藥液體劑型包括，例如，藥學(xué)可接受的乳劑，微乳，溶液，混懸劑，糖漿劑和酏劑。該液體劑型通常包含有效成分和惰性稀釋劑，例如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1，3-丁二醇，油(尤其是棉子、落花生、玉米、胚芽、橄欖、蓖麻和芝麻油)，甘油，四氫呋喃甲醇，聚乙二醇和脫水山梨醇脂肪酸酯，及其混合物。除了有效成分以外，混懸劑可包含助懸劑，例如，乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁(aluminummetahydroxide)、膨潤土、瓊脂和西黃蓍膠，以及其混合物。
可選地，本發(fā)明的藥物組合物可制成通過吸入給藥。適當(dāng)?shù)奈虢o藥藥物組合物通常將是氣霧劑或粉末的形式。該組合物一般使用公知遞送裝置給藥，例如壓力定量吸入器、干粉吸入器、噴霧器或類似的遞藥裝置。
當(dāng)使用加壓容器吸入給藥時(shí)，本發(fā)明的藥物組合物通常將包含有效成分和適當(dāng)?shù)膾伾鋭?，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適當(dāng)?shù)臍怏w。
另外，藥物組合物可為包含本發(fā)明化合物和適用于粉末吸入器的粉末的膠囊或藥筒(例如用明膠制成)形式。適當(dāng)?shù)姆勰┗|(zhì)包括，例如，乳糖或淀粉。
本發(fā)明化合物也可以使用已知的透皮遞藥系統(tǒng)和賦形劑經(jīng)皮給藥。例如，本發(fā)明化合物可以與滲透促進(jìn)劑混合，例如丙二醇、聚乙二醇單月桂酸酯、氮雜環(huán)烷-2-酮類(azacycloalkan-2-ones)等，并摻入到貼劑或類似的遞藥系統(tǒng)中。其它賦形劑包括膠凝劑、乳化劑和緩沖劑，如果需要的話，可用于該透皮組合物。
下列制劑舉例說明了本發(fā)明的典型藥物組合物制劑實(shí)施例A如下制備用于口服給藥的硬明膠膠囊成分量本發(fā)明化合物50mg乳糖(噴霧干燥) 200mg
硬脂酸鎂10mg典型程序?qū)⒏鞒煞殖浞只旌希缓笱b載到硬明膠膠囊中(260mg組合物/膠囊)。
制劑實(shí)施例B如下制備用于口服給藥的硬明膠膠囊成分量本發(fā)明化合物20mg淀粉89mg微晶纖維素 89mg硬脂酸鎂2mg典型程序?qū)⒏鞒煞殖浞只旌希缓笸ㄟ^45目U.S.篩，并裝載到硬明膠膠囊中(200mg組合物/膠囊).
制劑實(shí)施例C如下制備用于口服給藥的膠囊成分量本發(fā)明化合物10mg聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯 50mg淀粉粉末250mg
典型程序?qū)⒏鞒煞殖浞只旌?，然后裝載到明膠膠囊中(310mg組合物/膠囊)。
制劑實(shí)施例D如下制備用于口服給藥的片劑成分量本發(fā)明化合物5mg淀粉50mg微晶纖維素 35mg聚乙烯吡咯烷酮(10wt.％水溶液) 4mg羧甲基淀粉鈉4.5mg硬脂酸鎂0.5mg滑石粉 1mg典型程序?qū)⒂行С煞?、淀粉和纖維素通過45目U.S.篩并充分混合，將聚乙烯吡咯烷酮溶液與所得粉末混合，然后將該混合物通過14目U.S.篩。如此制備的顆粒劑在50-60℃下干燥，并通過18目U.S.篩。然后將羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石粉(之前已經(jīng)通過了60目U.S.篩)加到顆粒中?；旌弦院?，將混合物在壓片機(jī)上壓片，得到重100mg的片劑。
制劑實(shí)施例E如下制備用于口服給藥的片劑成分量本發(fā)明化合物25mg微晶纖維素 400mg熱解法二氧化硅(Silicon dioxide fumed) 10mg硬脂酸 5mg典型程序?qū)⒏鞒煞殖浞只旌希缓髩褐菩纬善瑒?每片440mg組合物)。
制劑實(shí)施例F如下制備用于口服給藥的單刻痕片劑成分量本發(fā)明化合物15mg玉米淀粉50mg交聯(lián)羧甲基纖維素鈉 25mg乳糖120mg硬脂酸鎂5mg典型程序?qū)⒏鞒煞殖浞只旌希缓髩褐菩纬蓡慰毯燮瑒?每片215mg組合物)。
制劑實(shí)施例G如下制備用于口服給藥的混懸劑成分量本發(fā)明化合物0.1g富馬酸 0.5g氯化鈉 2.0g對(duì)羥苯甲酸甲酯 0.15g對(duì)羥苯甲酸丙酯 0.05g砂糖25.5g山梨醇(70％溶液)12.85gVeegum k(Vanderbilt Co.)1.0g調(diào)味劑 0.035mL著色劑 0.5mg蒸餾水 適量至100mL典型程序?qū)⒏鞒煞只旌闲纬擅?0mL混懸劑含10mg有效成分的混懸劑。
制劑實(shí)施例H如下制備用于吸入給藥的干粉成分量本發(fā)明化合物1.0mg乳糖25mg典型程序?qū)⒂行С煞治⒎刍?，然后與乳糖混合。然后將該混合的混合物裝載到明膠吸入藥筒中。使用粉末吸入器施用藥筒內(nèi)容物。
制劑實(shí)施例I如下制備用于在壓力定量吸入器中吸入給藥的干粉
典型程序通過將10g平均粒徑小于10μm的微粉化顆粒狀活性化合物分散在由0.2g卵磷脂溶于200mL脫礦質(zhì)水形成的溶液中，制備含5wt.％本發(fā)明化合物和0.1wt.％卵磷脂的混懸劑。將該混懸劑噴霧干燥，將所得物質(zhì)微粉化成平均直徑小于1.5μm的顆粒。將顆粒裝載到含有加壓1，1，1，2-四氟乙烷的藥筒中。
制劑實(shí)施例J如下制備注射劑成分 量本發(fā)明化合物 0.2g醋酸鈉緩沖液(0.4M)40mLHCl(0.5N)或NaOH(0.5N) 適量至pH 4水(蒸餾過，無菌) 適量至20mL典型程序混合以上成分，并用0.5N HCl或0.5N NaOH將pH調(diào)節(jié)至4±0.5。
制劑實(shí)施例K如下制備用于口服給藥的膠囊成分 量本發(fā)明化合物 4.05mg微晶纖維素(Avicel PH 103) 259.2mg硬脂酸鎂 0.75mg典型程序?qū)⒏鞒煞殖浞只旌?，然后裝載到明膠膠囊中(#1大小，白色，不透明)(每膠囊264mg組合物)。
制劑實(shí)施例L如下制備用于口服給藥的膠震成分量本發(fā)明化合物8.2mg微晶纖維素(Avicel PH 103) 139.05mg硬脂酸鎂0.75mg典型程序?qū)⒏鞒煞殖浞只旌希缓笱b載到明膠膠囊中(#1大小，白色，不透明)(每膠囊148mg組合物)。
可以理解的是，適合于特定給藥模式的任何形式的本發(fā)明化合物(即游離堿、藥用鹽或溶劑化物)都可以用于上述藥物組合物。
效用本發(fā)明的喹啉酮-甲酰胺化合物是5-HT4受體激動(dòng)劑，因此預(yù)期可用于治療由5-HT4受體介導(dǎo)的或與5-HT4受體活性有關(guān)的醫(yī)學(xué)病況，即，用5-HT4受體激動(dòng)劑治療可改善的醫(yī)學(xué)病況。該醫(yī)學(xué)病況包括但不限于過敏性腸綜合征(IBS)、長期便秘、機(jī)能性消化不良、胃排空延遲、胃食管返流疾病(GERD)、胃輕癱、手術(shù)后腸梗阻、假性腸梗塞和藥物造成的運(yùn)輸(transit)延遲。另外，已經(jīng)提出一些5-HT4受體激動(dòng)劑化合物可用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥，包括認(rèn)知障礙、行為障礙、心境障礙和自主功能控制障礙。
特別地，本發(fā)明化合物增強(qiáng)胃腸(GI)道動(dòng)力，從而預(yù)期可用于治療哺乳動(dòng)物包括人由動(dòng)力減弱引起的GI道病癥。該GI動(dòng)力病癥包括，例如，長期便秘、便秘-為主的過敏性腸綜合征(C-IBS)、糖尿病性和自發(fā)性胃輕癱、和機(jī)能性消化不良。
因此，在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了增強(qiáng)哺乳動(dòng)物胃腸道動(dòng)力的方法，該方法包括給哺乳動(dòng)物施用治療有效量的包含藥學(xué)可接受載體和本發(fā)明化合物的藥物組合物。
當(dāng)用于治療GI道動(dòng)力減弱病癥或由5-HT4受體介導(dǎo)的其它病況時(shí)，本發(fā)明化合物通常以單個(gè)日劑量或每天多個(gè)劑量口服給藥，盡管也可使用其它給藥形式。每劑量施用的活性劑的量或每天施用的總量通常由醫(yī)師考慮到有關(guān)的情況，包括要治療的病況、所選的給藥途徑、所施用的實(shí)際化合物及其相對(duì)活性、個(gè)體患者的年齡、體重和反應(yīng)、患者癥狀的嚴(yán)重性等來決定。
用于治療GI道動(dòng)力減弱病癥或由5-HT4受體介導(dǎo)的其它病癥的適當(dāng)?shù)膭┝繛榧s0.0007-約20mg/kg/天的活性劑，包括約0.0007-約1mg/kg/天。對(duì)于平均70kg的人來說，總計(jì)為每天約0.05-約70mg的活性劑。
在本發(fā)明一方面中，本發(fā)明化合物用于治療長期便秘。當(dāng)用于治療長期便秘時(shí)，本發(fā)明化合物通常以單個(gè)日劑量或每天多個(gè)劑量口服給藥。優(yōu)選地，治療長期便秘的劑量為每天約0.05-約70mg。
在本發(fā)明另一方面中，本發(fā)明化合物用于治療過敏性腸綜合征。當(dāng)用于治療便秘-為主的過敏性腸綜合征時(shí)，本發(fā)明化合物通常以單個(gè)日劑量或每天多個(gè)劑量口服給藥。優(yōu)選地，治療便秘-為主的過敏性腸綜合征的劑量為每天約0.05-約70mg。
在本發(fā)明另一方面中，本發(fā)明化合物用于治療糖尿病性胃輕癱。當(dāng)用于治療糖尿病性胃輕癱時(shí)，本發(fā)明化合物通常以單個(gè)日劑量或每天多個(gè)劑量口服給藥。優(yōu)選地，治療糖尿病性胃輕癱的劑量為每天約0.05-約70mg。
在本發(fā)明又一方面中，本發(fā)明化合物用于治療機(jī)能性消化不良。當(dāng)用于治療機(jī)能性消化不良時(shí)，本發(fā)明化合物通常以單個(gè)日劑量或每天多個(gè)劑量口服給藥。優(yōu)選地，治療機(jī)能性消化不良的劑量為每天約0.05-約70mg。
本發(fā)明還提供了治療患有與5-HT4受體活性有關(guān)的疾病或病況的哺乳動(dòng)物的方法，該方法包括給哺乳動(dòng)物施用治療有效量的本發(fā)明化合物，或包含本發(fā)明化合物的藥物組合物。
如上所述，本發(fā)明化合物是5-HT4受體激動(dòng)劑。因此，本發(fā)明進(jìn)一步提供了在哺乳動(dòng)物中激動(dòng)5-HT4受體的方法，該方法包括給哺乳動(dòng)物施用本發(fā)明化合物。另外，本發(fā)明化合物也可用作研究工具，用于調(diào)查或研究有5-HT4受體的生物系統(tǒng)或樣品，或用于發(fā)現(xiàn)新的5-HT4受體激動(dòng)劑。此外，由于相對(duì)于結(jié)合其它5-HT亞型受體，尤其是5-HT3受體，本發(fā)明化合物對(duì)5-HT4受體表現(xiàn)出結(jié)合選擇性，因此該化合物尤其能用于研究生物系統(tǒng)或樣品中5-HT4受體選擇性激動(dòng)作用的效應(yīng)。任何具有5-HT4受體的適當(dāng)?shù)纳锵到y(tǒng)或樣品可用于該項(xiàng)研究，它可在體外或體內(nèi)進(jìn)行。適合于該項(xiàng)研究的典型的生物系統(tǒng)或樣品包括但不限于細(xì)胞、細(xì)胞提取物、質(zhì)膜、組織樣品和哺乳動(dòng)物(例如小鼠、大鼠、豚鼠、兔子、狗、豬等)等。
在本發(fā)明這個(gè)方面中，包含5-HT4受體的生物系統(tǒng)或樣品與5-HT4受體-激動(dòng)量的本發(fā)明化合物接觸。然后用常規(guī)方法和裝置如放射配體結(jié)合試驗(yàn)和功能試驗(yàn)測定激動(dòng)5-HT4受體的效果。這些功能試驗(yàn)包括配體介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的改變，配體介導(dǎo)的腺苷酸環(huán)化酶(它合成cAMP)活性的改變，配體介導(dǎo)的三磷酸鳥苷(GTP)類似物例如[35S]GTPγS(鳥苷5′-O-(γ-硫代)三磷酸酯)或GTP-Eu經(jīng)由受體催化的GTP類似物對(duì)0GDP類似物的交換而摻入離體膜的改變，配體介導(dǎo)的游離胞內(nèi)鈣離子的改變(例如，用購自Molecular Devices，Inc.的熒光-結(jié)合成像讀板器(fluorescence-linked imaging plate reader)或FLIPR測量)，和測量促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)活化。本發(fā)明化合物可在以上所列的任何功能試驗(yàn)或類似性質(zhì)的試驗(yàn)中激動(dòng)5-HT4受體或增強(qiáng)5-HT4受體的激活。5-HT4受體-激動(dòng)量的本發(fā)明化合物通常為約1nM-約500nM。
另外，本發(fā)明化合物可以用作研究工具來發(fā)現(xiàn)新的5-HT4受體激動(dòng)劑。在該實(shí)施方案中，試驗(yàn)化合物或一組試驗(yàn)化合物的5-HT4受體結(jié)合數(shù)據(jù)或功能數(shù)據(jù)與本發(fā)明化合物的5-HT4受體結(jié)合數(shù)據(jù)或功能數(shù)據(jù)相比較，以鑒定具有優(yōu)異結(jié)合活性或功能活性的試驗(yàn)化合物，如果有的話。作為單獨(dú)實(shí)施方案，本發(fā)明的這個(gè)方面包括生成比較數(shù)據(jù)(使用適當(dāng)?shù)脑囼?yàn))，和分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，以鑒定令人感興趣的試驗(yàn)化合物。
在其它性質(zhì)中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物是5-HT4受體的有效激動(dòng)劑，并且在放射配體結(jié)合試驗(yàn)中，相對(duì)于5-HT3受體亞型，本發(fā)明化合物對(duì)5-HT4受體亞型顯示出了明顯的選擇性。進(jìn)一步地，已經(jīng)在大鼠模型中證明了本發(fā)明化合物優(yōu)秀的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。因此預(yù)期本發(fā)明化合物通過口服給藥有很好的生物利用度。另外，在體外電壓鉗模型中使用表達(dá)hERG心臟鉀通道的離體完整細(xì)胞，已經(jīng)顯示了這些化合物不表現(xiàn)出不能接受的鉀離子流抑制水平。電壓鉗試驗(yàn)是評(píng)價(jià)藥劑改變心臟復(fù)極化模式，尤其是引起與心律失常相關(guān)的所謂QT延長的潛能的公認(rèn)的臨床前方法(Cavero等人，Opinion on Pharmacotherapy，2000，1，947-73，F(xiàn)ermini等人，Nature Reviews Drug Discovery，2003，2，439-447)。相應(yīng)地，包含本發(fā)明化合物的藥物組合物預(yù)期具有可接受的心臟性能。
可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的各種體外和體內(nèi)試驗(yàn)證明本發(fā)明化合物的這些性質(zhì)和效用。典型試驗(yàn)在下列實(shí)施例中進(jìn)一步詳細(xì)描述。
實(shí)施例下列合成實(shí)施例和生物學(xué)實(shí)施例是用于闡明本發(fā)明，不能解釋成以任何方式限制本發(fā)明的范圍。在下列實(shí)施例中，除非另外說明，下列縮略語具有下列含義。沒有在下面定義的縮略語具有它們一般接受的含義。
Boc＝叔丁氧基羰基(Boc)2O ＝二碳酸二叔丁酯DCM ＝二氯甲烷DMF ＝N，N-二甲基甲酰胺DMSO ＝二甲亞砜EtOAc ＝乙酸乙酯mCPBA ＝間氯苯甲酸
MeCN ＝乙腈MTBE ＝叔丁基甲基醚PyBop ＝苯并三唑-1-基氧三吡咯烷-六氟磷酸Rf＝保留因子RT ＝室溫TFA ＝三氟乙酸THF ＝四氫呋喃試劑(包括仲胺)和溶劑都購自商品供應(yīng)商(Aldrich、Fluka、Sigma等)，使用時(shí)不經(jīng)進(jìn)一步純化。除非另外注明，否則反應(yīng)都在氮?dú)夥障逻M(jìn)行。用薄層色譜法(TLC)、分析型高效液相色譜法(anal.HPLC)和質(zhì)譜法監(jiān)測反應(yīng)混合物的進(jìn)程，其細(xì)節(jié)分別在下面具體反應(yīng)實(shí)施例中給出。如各個(gè)反應(yīng)中的具體描述處理反應(yīng)混合物；它們通常是用萃取和其它純化方法如溫度-和溶劑-依賴性結(jié)晶以及沉淀進(jìn)行純化。另外，反應(yīng)混合物常規(guī)地用制備型HPLC進(jìn)行純化通用方案在下面描述。用質(zhì)譜和1H-NMR波譜法常規(guī)地進(jìn)行反應(yīng)產(chǎn)物的表征。對(duì)于NMR測量來說，將樣品溶于氘代溶劑(CD3OD、CDCl3或DMSO-d6)，在標(biāo)準(zhǔn)觀測條件下，用Varian Gemini 2000儀器(300MHz)獲得1H-NMR譜。通過電噴霧電離法(ESMS)，用Applied Biosystems(Foster City，CA)API 150 EX型儀器或Agilent(Palo Alto，CA)1100LC/MSD型儀器進(jìn)行化合物的質(zhì)譜鑒定。通過卡爾·費(fèi)歇爾滴定，用Brinkmann(Westbury，NY)Metrohm Karl Fischer 813型庫侖計(jì)測定水含量。
實(shí)施例1合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺a.制備8-芐基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-酮邊攪拌邊將濃鹽酸(30mL)加到2，5-二甲氧基四氫呋喃(82.2g，0.622mol)在水(170mL)中的非均質(zhì)溶液中。在冷卻至0℃(冰浴)的單獨(dú)燒瓶中，將濃鹽酸(92mL)緩慢加入芐胺(100g，0.933mol)的水(350mL)溶液。攪拌2，5-二甲氧基四氫呋喃溶液約20分鐘，用水(250mL)稀釋，然后加入芐胺溶液，接著加入1，3-丙酮二羧酸(100g，0.684mol)的水(400mL)溶液，然后加入磷酸氫二鈉(44g，0.31mol)的水(200mL)溶液。用40％NaOH將pH調(diào)節(jié)至pH 1到pH～4.5。將所得的渾濁淡黃色溶液攪拌過夜。然后用50％鹽酸將溶液從pH 7.5酸化至pH 3，加熱至85℃并攪拌2小時(shí)。將溶液冷卻至室溫，用40％NaOH堿化至pH 12，并用DCM(3×500mL)萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過濾并減壓濃縮，得到標(biāo)題中間體粗產(chǎn)品的粘稠褐色的油(52g)。
在0℃，向中間體粗產(chǎn)品的甲醇(1000mL)溶液中加入二碳酸二叔丁酯(74.6g，0.342mol)。讓溶液溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^夜。減壓除去甲醇，將所得的油溶于二氯甲烷(1000mL)。將中間體萃取到1MH3PO4(1000mL)中，并用二氯甲烷(3×250mL)洗滌。用NaOH水溶液將水層堿化至pH 12，并用二氯甲烷(3×500mL)萃取。干燥合并的有機(jī)層(MgSO4)，過濾并減壓濃縮，得到標(biāo)題中間體的粘稠、淡褐色的油。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.5-7.2(m，5H，C6H5)，3.7(s，2H，CH2Ph)，3.45(寬s，2H，CH-NBn)，2.7-2.6(dd，2H，CH2CO)，2.2-2.1(dd，2H，CH2CO)，2.1-2.0(m，2H，CH2CH2)，1.6(m，2H，CH2CH2)。(m/z)[M+H]+C14H17NO的計(jì)算值216.14；實(shí)測值216.0。
b.制備3-氧代-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯向8-芐基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-酮(75g，0.348mol)的EtOAc(300mL)溶液中加入二碳酸二叔丁酯(83.6g，0.383mol，1.1eq)的EtOAc(300mL)溶液。在氮?dú)饬飨?，將所得溶液和沖洗液(100mL EtOAc)加到含23g氫氧化鈀(20wt.％Pd(基于干燥量基準(zhǔn))吸附于碳，～50％被水潤濕，例如Pearlman’s催化劑)的1L Parr氫化容器中。將反應(yīng)容器除氣(交替真空和N2五次)，并加壓至60psi的H2氣。攪動(dòng)反應(yīng)溶液兩天，如果需要的話，再次充入H2，保持H2壓在60psi，直至用硅石薄層色譜法監(jiān)測到反應(yīng)完成。然后將黑色溶液通過Celite襯墊過濾，并減壓濃縮定量得到標(biāo)題中間體的粘稠、黃色至橙色的油。它不經(jīng)進(jìn)一步處理就用于下一個(gè)步驟。1H NMR(CDCl3)δ(ppm)4.5(寬，2H，CH-NBoc)，2.7(寬，2H，CH2CO)，2.4-2.3(dd，2H，CH2CH2)，2.1(寬m，2H，CH2CO)，1.7-1.6(dd，2H，CH2CH2)，1.5(s，9H，(CH3)3COCON))。
c.制備(1S，3R，5R)-3-氨基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯在N2流下，邊經(jīng)由機(jī)械攪拌器攪拌，邊向前步產(chǎn)物(75.4g，0.335mol)的甲醇(1L)溶液中加入甲酸銨(422.5g，6.7mol)、水(115mL)和65g吸附于活性炭的鈀(10％基于干燥量基準(zhǔn)，～50％被水潤濕，Degussa type E101NE/W)。在24和48小時(shí)以后，每次加入另一份甲酸銨(132g，2.1mol)。如分析型HPLC所監(jiān)測，一旦反應(yīng)進(jìn)程停止，就加入Celite(＞500g)，過濾所得的濃稠混懸液，然后用甲醇(～500mL)沖洗收集到的固體。合并濾液，減壓濃縮，直至所有甲醇都已經(jīng)被除去。然后用1M磷酸將所得的混濁二相溶液稀釋至最終體積～1.5到2.0L，pH2，并用二氯甲烷(3×700mL)洗滌。用40％NaOH水溶液將水層堿化至pH 12，并用二氯甲烷(3×700mL)萃取。用MgSO4干燥合并的有機(jī)層，過濾，并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，然后高真空得到52g(70％)標(biāo)題中間體，通常被稱為N-Boc-內(nèi)-3-氨基托烷，作為白色到淡黃色固體。根據(jù)1H-NMR分析(通過分析型HPLC，純度＞96％)，產(chǎn)物中內(nèi)型胺(endo amine)和外型胺(exo amine)的異構(gòu)體比例＞99∶1。1H NMR(CDCl3)δ(ppm)4.2-4.0(寬d，2H，CHNBoc)，3.25(t，1H，CHNH2)，2.1-2.05(m，4H)，1.9(m，2H)，1.4(s，9H，(CH3)3OCON)，1.2-1.1(寬，2H)。(m/z)[M+H]+C12H22N2O2)計(jì)算值227.18；實(shí)測值227.2。分析HPLC(恒溶劑法(isocratic method)；經(jīng)過5分鐘，2∶98(A∶B)到90∶10(A∶B))保留時(shí)間＝3.68min。
d.制備1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸首先，在室溫下，將丙酮(228.2mL，3.11mol)加入2-氨基苯甲醇(255.2g，2.07mol)和乙酸(3.56mL，62mmol)在水(2L)中的攪拌混懸液中。4h后，將混懸液冷卻至0℃，并再攪拌2.5h，然后過濾。收集固體，用水洗滌，用冷凍干燥法冷卻并干燥濕固體，得到2，2，-二甲基-1，4-二氫-2H-苯并[1，3]嗪(332.2g，98％)的灰白色固體。1H NMR(CDCl3；300MHz)1.48(s，6H，C(CH3)2)，4.00(bs，1H，NH)，4.86(s，2H，CH2)，6.66(d，1H，ArH)，6.81(t，1H，ArH)，6.96(d，1H，ArH)，7.10(t，1H，ArH)。
通過閃爍漏斗(scintillation funnel)過濾2，2，-二甲基-1，4-二氫-2H-苯并[1，3]嗪(125g，0.77mo l)的THF(1L)溶液，然后在0℃下，經(jīng)過2.5h，經(jīng)由另外的漏斗將其逐滴加到1.0M LiAlH4在THF(800mL)中的攪拌溶液中。在0℃下，經(jīng)過1.5h，通過緩慢逐份加入Na2SO4·10H2O(110g)而使反應(yīng)萃滅。將反應(yīng)混合物攪拌過夜，過濾，并用THF充分洗滌固體鹽。減壓濃縮濾液，得到2-異丙基氨基苯甲醇(120g，95％)的黃色的油。1H NMR(CDCl3；300MHz)1.24(d，6H，CH(CH3)2)，3.15(bs，1H，OH)，3.61(sept，1H，CH(CH3)2)，4.57(s，2H，CH2)，6.59(t，1H，ArH)，6.65(d，1H，ArH)，6.99(d，1H，ArH)，7.15(t，1H，ArH)。
將二氧化錳(85％ 182.6g，1.79mol)加到2-異丙基氨基苯甲醇(118g，0.71mol)在甲苯(800mL)中的攪拌溶液中，并將反應(yīng)混合物加熱至117℃ 4h。讓反應(yīng)混合物冷卻至室溫過夜，然后通過用甲苯洗提過的Celite襯墊過濾。減壓濃縮濾液，得到2-異丙基氨基苯甲醛(105g，90％)的橙色的油。1H NMR(CDCl3；300MHz)1.28(d，6H，CH(CH3)2)，3.76(sept，1H，CH(CH3)2)，6.65(t，1H，ArH)，6.69(d，1H，ArH)，7.37(d，1H，ArH)，7.44(t，1H，ArH)，9.79(s，1H，CHO)。
在0℃下，將2，2-二甲基-[1，3]二烷-4，6-二酮(通常也稱為Meldrum’s酸)(166.9g，1.16mol)加到2-異丙基氨基苯甲醛(105g，0.64mol)、乙酸(73.6mL，1.29mol)和乙二胺(43.0mL，0.64mol)在甲醇(1L)中的攪拌溶液中。在0℃下攪拌反應(yīng)混合物1h，然后在室溫下攪拌過夜。過濾所得的混懸液，用甲醇洗滌該固體，收集得到標(biāo)題中間體1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸(146g，98％)的灰白色固體。1H NMR(CDCl3；300MHz)1.72(d，6H，CH(CH3)2)，5.50(bs，1H，CH(CH3)2)，7.44(t，1H，ArH)，7.75-7.77(m，2H，ArH)，7.82(d，1H，ArH)，8.89(s，1H，CH)。
e.制備(1S，3R，5R)-3-[1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羰基)氨基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯在85℃，將亞硫酰氯(36.6mL，0.52mol)加到1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸(80g，0.35mol)在甲苯(600mL)中的攪拌混懸液中，然后將反應(yīng)混合物加熱至95℃2h。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后在℃下經(jīng)25分鐘加到劇烈攪拌的(1S，3R，5R)-3-氨基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(78.2g，0.35mol)和氫氧化鈉(69.2g，1.73mol)在甲苯/水(1∶1)(1L)中的二相溶液中。1h以后，分離各層，減壓濃縮有機(jī)相。用EtOAc(1L)，然后(500mL)洗滌水相，合并的有機(jī)萃取物用于溶解濃縮的有機(jī)剩余物。用1M H3PO4(500mL)、飽和NaHCO3水溶液(500mL)和鹽水(500mL)洗滌該溶液，用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮，得到標(biāo)題中間體(127.9g，大約84％)的黃色固體。1H NMR(CDCl3)1.47(s，9H)，1.67(d，6H)，1.78-1.84(m，2H)，2.04-2.18(m，6H)，4.20-4.39(m，3H)，5.65(bs，1H)，7.26(dd.1H)，7.63(m，2H)，7.75(dd，1H)，8.83(s，1H)，10.63(d，1H)。
f.制備1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S、3R，5R)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺在0℃下，將TFA(300mL)加到前步產(chǎn)物(127.9g)在CH2Cl2(600mL)中的攪拌溶液中。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，并攪?h，然后減壓濃縮。然后將油狀褐色剩余物倒入劇烈攪拌的乙醚(3L)溶液中，立即形成了固體沉淀。混懸液攪拌過夜，然后過濾收集固體，用乙醚洗滌得到標(biāo)題中間體的三氟乙酸鹽(131.7g，86％經(jīng)過2步)的淡黃色固體。1H NMR(CDCl3)1.68(d，6H)，2.10(d，2H)，2.33-2.39(m，4H)，2.44-2.61(m，2H)，4.08(bs，2H)，4.41(m，1H)，5.57(bs，1H)，7.31(m.1H)，7.66(m，2H)，7.77(d，1H)，8.83(s，1H)，9.38(bd，2H)，10.78(d，1H)。
g.制備3-羥基-3′-{[1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)羰基]氨基}螺[吖丁啶-1，8′-(1S，3R，5R)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷(其中R1＝H，R2＝異丙基的中間體(V))在室溫下，將2-溴甲基環(huán)氧乙烷(10.72mL，129.5mmol)加到1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺三氟乙酸鹽(14.65g，43.2mmol)在乙醇(150mL)中的攪拌溶液中。攪拌反應(yīng)混合物36h，這時(shí)形成了固體沉淀。過濾收集固體，用乙醇(70mL)洗滌，得到標(biāo)題中間體的溴鹽(8.4g)。(m/z)[M]+C23H30N3O3計(jì)算值396.23；實(shí)測值396.5。保留時(shí)間(分析HPLC2-50％MeCN/H2O，經(jīng)過5分鐘)＝4.13min。
h.制備1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-甲氨基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將3-羥基-3′-{[1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)羰基]氨基}螺[吖丁啶-1，8′-(1S，3R，5R)-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物(678mg，1.4mmol)溶于乙醇(10mL)，然后加入甲胺(41％水溶液)(510μl，8.0mmol)?；旌衔镉?0℃加熱16h，然后減壓濃縮得到標(biāo)題中間體的粗油，它直接用于下一個(gè)步驟。
i.合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將前步產(chǎn)物溶于二氯甲烷(10mL)，然后加入1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(763μL，5.1mmol)，在氮?dú)庀聰嚢杌旌衔铮⒗鋮s至0℃。加入甲磺酰氯(132μL，1.7mmol)，將混合物在0℃下攪拌30min。通過加入水使反應(yīng)萃滅，并減壓濃縮至干。將產(chǎn)物溶于乙酸/水(1∶1)(10mL)，并用HPLC色譜法純化。使純化級(jí)分凍干，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽(340mg)。(m/z)[M+H]+C25H36N4O5S計(jì)算值505.25；實(shí)測值505.4。保留時(shí)間(分析HPLC2-50％MeCN/H2O，經(jīng)過5分鐘)＝4.17min。
實(shí)施例2合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-甲氧基-3-(甲磺酰基-甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺a.制備3-甲氧基-3′-{[1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-基)羰基]氨基}螺[吖丁啶-1，8′-(1S，R，5R)-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛烷(其中R1＝H，R2＝異丙基，R3＝甲基的中間體(V′))在室溫下，將叔丁醇鉀(1.63g，14.5mmol)加到3-羥基-3′-{[1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)羰基]氨基}螺[吖丁啶-1，8′-(1S，3R，5R)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物(3.45g，7.25mmol)在二氯甲烷(100mL)中的攪拌混懸液中。2分鐘以后，將碘甲烷(0.477mL，7.61mmol)加到反應(yīng)混合物中。30分鐘以后，加入水(2mL)使反應(yīng)萃滅，減壓濃縮反應(yīng)混合物。將剩余物溶于最小體積的乙酸/水(1∶1)中，并用制備型HPLC純化得到標(biāo)題中間體的三氟乙酸鹽(2.1g)。(m/z)[M]+C24H32N3O3計(jì)算值410.24；實(shí)測值410.5。保留時(shí)間(分析HPLC2-50％MeCN/H2O，經(jīng)過5分鐘)＝4.36min。
b.制備1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-甲氧基-3-甲氨基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將3-甲氧基-3′-{[1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)羰基]氨基}螺[吖丁啶-1，8′-(1S，3R，5R)-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛烷三氟乙酸鹽(410mg，0.84mmol)溶于乙醇(10mL)，然后加入甲胺(41％水溶液，320μL，5mmol)。將混合物于80℃加熱16h，然后減壓濃縮得到產(chǎn)物的粗油，它直接用于下一個(gè)步驟。
c.合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-甲氧基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將前步產(chǎn)物(53.6mg，0.12mmol)溶于二氯甲烷(1.0mL)，然后加入1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(89.7μL，0.6mmol)，在氮?dú)庀聰嚢杌旌衔?，并冷卻至0℃。加入甲磺酰氯(18.6μL，0.24mmol)，在0℃下攪拌混合物30分鐘。通過加入水使混合物萃滅，并減壓濃縮至干。將產(chǎn)物溶于乙酸/水(1∶1)(1.5mL)，并用HPLC色譜法純化。凍干純化級(jí)分，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽(45.8mg)。(m/Z)[M+H]+C26H38N4O5S計(jì)算值519.27；實(shí)測值519.2。保留時(shí)間(分析HPLC5-40％MeCN/H2O，經(jīng)過4分鐘)＝2.72min。
實(shí)施例3合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(甲磺?；?吡啶-3-基甲基-氨基)-2-甲氧基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺a.制備1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-{2-甲氧基-3-[(吡啶-3-基甲基)氨基]丙基}-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將3-甲氧基-3′-{[1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)羰基]氨基}螺[吖丁啶-1，8′-(1S，3R，5R)-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛烷(410mg，0.84mmol)溶于乙醇(10mL)，然后加入3-氨基甲基吡啶(153μL，1.5mmol)。將混合物于60℃加熱16h，然后減壓濃縮得到標(biāo)題中間體的粗油，它直接用于下一個(gè)步驟。
b.合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(甲磺?；?吡啶-3-基甲基-氨基)-2-甲氧基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將前步產(chǎn)物(102.6mg，0.2mmol)溶于二氯甲烷(1.0mL)，然后加入1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(119.6μL，0.8mmol)，在氮?dú)庀聰嚢杌旌衔锊⒗鋮s至0℃。加入甲磺酰氯(30.1μL，0.4mmol)，混合物在0℃下攪拌30min。通過加入水使反應(yīng)萃滅，混合物減壓濃縮至干。將產(chǎn)物溶于乙酸/水(1∶1)(1.5mL)，并用HPLC色譜法純化。凍干純化級(jí)分，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽(63.5mg)。(m/Z)[M+H]+C31H41N5O5S計(jì)算值596.29；實(shí)測值596.2。保留時(shí)間(分析HPLC5-40％MeCN/H2O，經(jīng)過4min)＝2.35min。
實(shí)施例4合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-甲磺酰基氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺a.制備1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(1，3-二氧代-1，3-二氫異吲哚-2-基)-2-羥丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(3.39g，10mmol)溶于乙醇(40mL)，然后加入2-環(huán)氧乙烷基甲基異吲哚-1，3-二酮(通常也稱為環(huán)氧丙基鄰苯二甲酰亞胺)(3.05g，15mmol)。將混合物于80℃加熱36h，冷卻，然后減壓濃縮。將所得的油進(jìn)行快速色譜(SiO2，用9∶1的二氯甲烷/甲醇溶液洗脫)，得到標(biāo)題中間體(4.95g)的白色固體，它直接用于下一個(gè)步驟。
b.制備1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-氨基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將前步產(chǎn)物(4.95g，9.13mmol)溶于乙醇(40mL)，然后加入肼(860μL，27.4mmol)?；旌衔锘亓?6h，然后冷卻至室溫。過濾混合物，并將濾液濃縮得到標(biāo)題中間體的粗油，它不經(jīng)進(jìn)一步純化就直接使用。
c.合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-甲磺?；被?丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將前步產(chǎn)物(82mg，0.2mmol)溶于二氯甲烷(1.0mL)，然后加入1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(60μL，0.4mmol)，混合物在氮?dú)庀聰嚢?，并冷卻至-78℃。加入甲磺酰氯(15.5μL，0.2mmol)，攪拌混合物，經(jīng)30分鐘時(shí)間讓其溫?zé)嶂潦覝?。通過加入水使反應(yīng)萃滅，減壓濃縮混合物至干。將產(chǎn)物溶于乙酸/水(1∶1)(1.5mL)，用HPLC色譜法純化。凍干純化級(jí)分得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽(70.7mg)。(m/z)[M+H]+C24H34N4O5S計(jì)算值491.23；實(shí)測值491.2。保留時(shí)間(分析HPLC5-40％MeCN/H2O，經(jīng)過4min)＝2.43min。
實(shí)施例5合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(甲磺酰基-吡啶-3-基甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺a.制備1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-{2-羥基-3-[(吡啶-3-基甲基)氨基]丙基}-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將3-羥基-3′-{[1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-基)羰基]氨基}螺[吖丁啶-1，8′-(1S，3R，5R)-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物(505mg，1.27mmol)溶于乙醇(10mL)，然后加入3-(氨基甲基)-吡啶(193μL，1.9mmol)?；旌衔镉?0℃加熱16h，然后減壓濃縮得到標(biāo)題中間體的粗油，它直接用于下步反應(yīng)中。
b.合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(甲磺?；?吡啶-3-基甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將前步產(chǎn)物(42.5mg，0.08mmol)溶于二氯甲烷(1.0mL)，加入1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(74.8μL，0.5mmol)，在氮?dú)庀聰嚢杌旌衔锊⒗鋮s至0℃。加入甲磺酰氯(6.1μL，0.08mmol)，在0℃下攪拌混合物30min。加入水使反應(yīng)萃滅，減壓濃縮至干。將產(chǎn)物溶于乙酸/水(1∶1)(1.5mL)，并用HPLC色譜法純化。凍干純化級(jí)分，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽(22.8mg)。(m/z)[M+H]+C30H39N5O5S計(jì)算值582.28；實(shí)測值582.2。保留時(shí)間(分析HPLC5-40％MeCN/H2O，經(jīng)過4min)＝2.78min。
實(shí)施例6合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺a.制備(S)-1-(芐基-甲基-氨基)-3-氯丙-2-醇將N-芐基甲胺(13.95mL，108.1mmol)和(S)-2-氯甲基環(huán)氧乙烷(通常被稱為(S)-表氯醇)(8.48mL，108.1mmol)溶于己烷(40mL)，并攪拌16h。然后使溶液過快速色譜(SiO2，用10％甲醇/90％二氯甲烷洗脫)。將包含產(chǎn)物的級(jí)分濃縮，得到標(biāo)題中間體的油(19.7g)。1H-NMR(DMSO d6，299.96MHz)δ(ppm)2.01(s，3H)，2.2-2.4(m，2H)，3.21-3.5(m，3H)，3.53-3.6(m，1H)，3.65-3.75(m，1H)，4.95(d，1H)，7.0-7.25(m，5H)。(m/z)[M+H]+C11H16ClNO計(jì)算值214.10；實(shí)測值214.1。
b.制備((S)-3-氯-2-羥基丙基)甲基氨基甲酸叔丁酯將(S)-1-(芐基-甲基-氨基)-3-氯丙-2-醇(8.4g，39.3mmol)溶于乙酸乙酯(75mL)，然后加入二碳酸二叔丁酯(9.3g，43.23mmol)和氫氧化鈀(2.5g)。在氫氣(60atm)下振搖混合物12h。通過Celite濾床過濾混合物，并減壓濃縮至干。將所得的油通過硅石過濾，用己烷，接著用二氯甲烷，接著用二乙醚洗脫。濃縮醚層，得到標(biāo)題中間體的油(7.1g)。1H-NMR(DMSO d6，299.96MHz)δ(ppm)1.35-1.46(s，9H)，2.81-2.85(s，3H)，2.95-3.1(m，1H)，3.3-3.6(m，3H)，3.67-3.85(m，1H)，5.25-5.4(m，1H)。(m/z)[M+H-Boc]+C9H18ClNO3計(jì)算值123.10；實(shí)測值123.1。
c.制備((R)-2-羥基-3-{3-[(1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羰基)氨基[-(1S，3R，5R)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基}丙基)甲基氨基甲酸叔丁酯將((R)-3-氯-2-羥基丙基)甲基氨基甲酸叔丁酯(335mg，1.5mmol)和1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(339mg，1.0mmol)溶于甲醇(5mL)，然后加入N，N-二異丙基乙胺(523μL，3.0mmol)。混合物于80℃加熱16h，然后減壓濃縮。將所得的油進(jìn)行快速色譜(SiO2，用10％甲醇/90％二氯甲烷洗脫)。濃縮包含產(chǎn)物的級(jí)分得到標(biāo)題中間體的白色固體(0.5g)。(m/z)[M+H]+C29H42N4O5計(jì)算值527.33；實(shí)測7值527.6。保留時(shí)間(分析HPLC2-50％MeCN/H2O，經(jīng)過5min)＝4.75min。
d.制備1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-甲氨基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將((R)-2-羥基-3-{3-[(1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羰基)氨基]-(1S，3R，5R)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基}丙基)甲基氨基甲酸叔丁酯(575mg，1.09mmol)溶于二氯甲烷(5mL)，然后緩慢加入三氟乙酸(5mL)。攪拌混合物30min，然后減壓濃縮。用二乙醚研磨所得的油，然后過濾。真空干燥沉淀物，得到標(biāo)題中間體的三氟乙酸鹽(0.68g)。(m/z)[M+H]+C24H34N4O3計(jì)算值427.27；實(shí)測值427.2。保留時(shí)間(分析HPLC2-50％MeCN/H2O，經(jīng)過5min)＝3.40min。
e.合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺酰基-甲基-氨基)丙基]-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-甲氨基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(1.03g，1.57mmol)溶于二氯甲烷(6.0mL)，加入1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(747μL，5.0mmol)，在氮?dú)庀聰嚢杌旌衔?，并冷卻至0℃。加入甲磺酰氯(124.4μL，1.6mmol)，在0℃下攪拌混合物30min。加入水使反應(yīng)萃滅，減壓濃縮混合物至干。將產(chǎn)物溶于乙酸/水(1∶1)(5mL)，并用HPLC色譜法純化。凍干純化級(jí)分，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽(0.38g)。
(m/z)[M+H]+C25H36N4O5S計(jì)算值505.25；實(shí)測值505.4。保留時(shí)間(分析HPLC2-50％MeCN/H2O，經(jīng)過5min)＝4.17min。游離堿1H-NMR(DMSO d6，299.96MHz)δ(ppm)1.40-1.68(d，6H)，1.81-2.02(brs，4H)，2.02-2.18(br m，2H)，2.22-2.36(d，2H)，2.78-2.90(2s，6H)，2.91-3.04(m，1H)，3.10-3.30(m，4H)，3.61-3.78(brs，1H)，4.02-4.17(m，1H)，4.71-4.79(brs，1H)，5.2-5.8(brs，1H)，7.3-7.4(t，1H)，7.67-7.78(t，1H)，7-82-7.94(d，1H)，7.98-8.02(d，1H)，8.80(s，1H)，10.37-10.40(d，NH)。
實(shí)施例7合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺酰基-甲基-氨基)丙基]-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺按照實(shí)施例6的方法，用(R)-2-氯甲基環(huán)氧乙烷替代步驟a中的(S)-2-氯甲基環(huán)氧乙烷，制備下列中間體和標(biāo)題化合物。
(R)-1-(芐基-甲基-氨基)-3-氯丙-2-醇1H-NMR(DMSO d6，299.96MHz)δ(ppm)2.01(s，3H)，2.2-2.4(m，2H)，3.21-3.5(m，3H)，3.53-3.6(m，1H)，3.65-3.75(m，1H)，4.95(d，1H)，7.0-7.25(m，5H)。(m/z)[M+H]+C11H16ClNO計(jì)算值214.10；實(shí)測值214.1。
((R)-3-氯-2-羥基-丙基)甲基氨基甲酸叔丁酯1H-NMR(DMSO d6，299.96MHz)δ(ppm)1.35-1.46(s，9H)，2.81-2.85(s，3H)，2.95-3.1(m，1H)，3.3-3.6(m，3H)，3.67-3.85(m，1H)，5.25-5.4(m，1H)。(m/z)[M+H-Boc]+C9H18ClNO3計(jì)算值123.10；實(shí)測值123.1。
((S)-2-羥基-3-{3-[(1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羰基)氨基]-(1S，3R，5R)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基}丙基)甲基氨基甲酸叔丁酯(m/z)[M+H]+C29H42N4O5計(jì)算值527.33；實(shí)測值527.6。保留時(shí)間(分析HPLC2-50％MeCN/H2O，經(jīng)過5min)＝4.75min。
1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-甲氨基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(m/z)[M+H]+C24H34N4O3計(jì)算值427.27；實(shí)測值427.2。保留時(shí)間(分析HPLC2-50％MeCN/H2O，經(jīng)過5min)＝3.40min。
1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(m/z)[M+H]+C25H36N4O5S計(jì)算值505.25；實(shí)測值505.4。保留時(shí)間(分析HPLC2-50％MeCN/H2O，經(jīng)過5min)＝4.17min。
實(shí)施例8合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-[甲基-(吡啶-4-羰基)氨基]丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-甲氨基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(71mg，0.17mmol)溶于DMF(0.5mL)，然后加入N，N-二異丙基乙胺(88.9μL，0.51mmol)。接下來，加入異煙酸(41.8mg，0.34mmol)和PyBOP(177mg，0.34mmol)的DMF溶液。在室溫下振搖所得混合物30分鐘，然后減壓濃縮至干。將產(chǎn)物溶于乙酸/水(1∶1)(1.5mL)，并用HPLC色譜法純化。凍干純化級(jí)分，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽(30.8mg)。(m/z)[M+H]+C30H37N5O4計(jì)算值532.29；實(shí)測值532.7。保留時(shí)間(分析HPLC5-40％MeCN/H2O，經(jīng)過4min)＝2.11min。
實(shí)施例9合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-[(吡啶-4-羰基)氨基]丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-氨基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(82.4mg，0.2mmol)溶于DMF(0.5mL)，然后加入N，N-二異丙基乙胺(69.7μL，0.4mmol)。接下來，加入異煙酸(49.2mg，0.4mmol)和PyBOP(208.2mg，0.4mmol)的DMF溶液。將所得混合物在室溫下振搖30分鐘，然后減壓濃縮至干。將產(chǎn)物溶于乙酸/水(1∶1)(1.5mL)，并用HPLC色譜法純化。凍干純化級(jí)分，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽(82.1mg)。(m/z)[M+H]+C29H35N5O4計(jì)算值518.28；實(shí)測值518.2。保留時(shí)間(分析HPLC5-40％MeCN/H2O，經(jīng)過4min)＝2.20min。
實(shí)施例10合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(乙?；?甲基-氨基)-2-甲氧基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-甲氧基-3-甲氨基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(53.6mg，0.12mmol)溶于DMF(1.0mL)，然后加入N，N-二異丙基乙胺(104.μL，0.6mmol)。在氮?dú)庀聰嚢杌旌衔?，并冷卻至0℃。加入乙酰氯(17.1μL，0.24mmol)，并在0℃下攪拌混合物30min，然后減壓濃縮至干。將產(chǎn)物溶于乙酸/水(1∶1)(1.5mL)，并用HPLC色譜法純化。凍干純化級(jí)分，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽(40.4mg)。(m/z)[M+H]+C27H38N4O4計(jì)算值483.30；實(shí)測值483.2。保留時(shí)間(分析HPLC5-40％MeCN/H2O，經(jīng)過4min)＝2.54min。
實(shí)施例11.合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-甲氧基-3-[甲基-(吡啶-4-羰基)氨基]丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-甲氧基-3-甲氨基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(53.6mg，0.12mmol)溶于DMF(1.0mL)，然后加入N，N-二異丙基乙胺(104.5μL，0.6mmol)。在氮?dú)庀聰嚢杌旌衔?，并冷卻至0℃。加入異煙酰氯(42.7mg，0.24mmol)，并在0℃下攪拌混合物30min，然后減壓濃縮至干。將產(chǎn)物溶于乙酸/水(1∶1)(1.5mL)，并用HPLC色譜法純化。凍干純化級(jí)分，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽(54.4mg)。(m/z)[M+H]+C31H39N5O4計(jì)算值546.31；實(shí)測值546.2。保留時(shí)間(分析HPLC5-40％MeCN/H2O，經(jīng)過4min)＝2.29min。
實(shí)施例12.合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(乙?；?吡啶-3-基甲基-氨基)-2-甲氧基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸(8-{2-甲氧基-3-[(吡啶-3-基甲基)氨基]丙基}-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺(102.6mg，0.2mmol)溶于DMF(1.0mL)，然后加入N，N-二異丙基乙胺(139.4μL，0.8mmol)。在氮?dú)庀聰嚢杌旌衔?，并冷卻至0℃。加入乙酰氯(28.5μL，0.4mmol)，在0℃攪拌混合物30min，然后減壓濃縮至干。將產(chǎn)物溶于乙酸/水(1∶1)(1.5mL)，并用HPLC色譜法純化。凍干純化級(jí)分，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽(33.2mg)。(m/z)[M+H]+C32H41N5O4計(jì)算值560.33；實(shí)測值560.4。保留時(shí)間(分析HPLC5-40％MeCN/H2O，經(jīng)過4min)＝2.27min。
實(shí)施例13.合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-乙酰基氨基-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-氨基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(82.4mg，0.2mmol)溶于DMF(0.5mL)，然后加入N，N-二異丙基乙胺(69.7μL，0.4mmol)。接著，加入乙酸(22.7μL，0.4mmol)和PyBOP(208.2mg，0.4mmol)的DMF溶液。在室溫振搖所得混合物30分鐘，然后減壓濃縮至干。將產(chǎn)物溶于乙酸/水(1∶1)(1.5mL)，并用HPLC色譜法純化。凍干純化級(jí)分，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽(79.2mg)。(m/z)[M+H]+C25H34N4O4計(jì)算值455.27；實(shí)測值455.2。保留時(shí)間(分析HPLC5-40％MeCN/H2O，經(jīng)過4min)＝2.33min。
實(shí)施例14.合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(乙?；?甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-甲氨基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(43mg，0.1mmol)溶于DMF(1.0mL)，然后加入N，N-二異丙基乙胺(87.1μL，0.5mmol)。在氮?dú)庀聰嚢杌旌衔?，并冷卻至0℃。加入乙酰氯(17.8μL，0.25mmol)，在0℃攪拌混合物30min。減壓濃縮混合物至干。將產(chǎn)物溶于乙酸/水(1∶1)(1.5mL)，并用HPLC色譜法純化。凍干純化級(jí)分，得到標(biāo)題中間體的三氟乙酸鹽(17.1mg)。(m/z)[M+H]+C26H36N4O4計(jì)算值469.28；實(shí)測值469.2。保留時(shí)間(分析HPLC5-40％MeCN/H2O，經(jīng)過4min)＝2.49min。
實(shí)施例15.合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(甲?；?甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-甲氨基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(43mg，0.1mmol)溶于甲酸乙酯(1.0mL)。將混合物于65℃加熱16h，然后減壓濃縮至干。將產(chǎn)物溶于乙酸/水(1∶1)(1.5mL)，并用HPLC色譜法純化。凍干純化級(jí)分，得到標(biāo)題中間體的三氟乙酸鹽(22.7mg)。(m/z)[M+H]+C25H34N4O4計(jì)算值455.27；實(shí)測值455.2。保留時(shí)間(分析HPLC5-40％MeCN/H2O，經(jīng)過4min)＝2.37min。
實(shí)施例16.合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-甲酰基氨基-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-氨基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(41.2mg，0.1mmol)溶于甲酸乙酯(1.0mL)。將混合物于65℃加熱16h，然后減壓濃縮至干。將產(chǎn)物溶于乙酸/水(1∶1)(1.5mL)，并用HPLC色譜法純化。凍干純化級(jí)分，得到標(biāo)題中間體的三氟乙酸鹽(37.5mg)。(m/z)[M+H]+C24H32N4O4計(jì)算值441.25；實(shí)測值441.2。保留時(shí)間(分析HPLC5-40％MeCN/H2O，經(jīng)過4min)＝2.89min。
實(shí)施例17.合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-3-(乙?；?甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(S)-2-羥基-3-甲氨基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(200mg，0.3mmol)溶于DMF(1.0mL)，然后加入N，N-二異丙基乙胺(160.3μL，0.92mmol)。接著，加入乙酸(17.3μL，0.3mmol)和PyBOP(159mg，0.3mmol)的DMF溶液。在室溫下振搖所得混合物30分鐘，然后減壓濃縮至干。將產(chǎn)物溶于乙酸/水(1∶1)(1.5mL)，并用HPLC色譜法純化。凍干純化級(jí)分，得到標(biāo)題中間體的三氟乙酸鹽(130mg)。(m/z)[M+H]+C26H36N4O4計(jì)算值469.28；實(shí)測值469.5。保留時(shí)間(分析HPLC2-50％MeCN/H2O，經(jīng)過5min)＝3.94min。
實(shí)施例18.合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-3-(甲?；?甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺將1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(S)-2-羥基-3-甲氨基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺(235mg，0.36mmol)溶于甲酸乙酯(5.0mL)。將混合物于65℃加熱16h，然后減壓濃縮至干。將產(chǎn)物溶于乙酸/水(1∶1)(1.5mL)，并用HPLC色譜法純化。凍干純化級(jí)分，得到標(biāo)題中間體的三氟乙酸鹽(97.5mg)。(m/z)[M+H]+C25H34N4O4計(jì)算值455.27；實(shí)測值455.2。保留時(shí)間(分析HPLC2-50％MeCN/H2O，經(jīng)過5min)＝3.87min。
實(shí)施例19合成5-溴代-1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺向溶于乙腈(5mL)和乙酸(10mL)混合物的1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(500mg，0.99mmol)溶液加入溴(0.30mL，5.9mmol)。在環(huán)境溫度下攪拌混合物12h，減壓濃縮，得到淡黃色油狀剩余物。將剩余物溶于20％乙腈的水溶液(0.5％TFA)(5mL)，并用HPLC純化。得到標(biāo)題化合物作為主要產(chǎn)物，并分離成三氟乙酸鹽(200mg)。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)8.64(s，1H)，7.97(s，1H)，7.72-7.70(m，2H)，4.18(brm，2H)，4.0(brs，1H)，3.2-3.0(m)，2.88(s，3H)，2.79(s，3H)，2.5-2.2(m，2H)，1.56(d，6H)。(m/z)[M+H]+C25H35BrN4O5S計(jì)算值583.16；實(shí)測值583.4。保留時(shí)間(分析HPLC10-50％MeCN/H2O，經(jīng)過6min)＝3.90min。
實(shí)施例20替代方案合成((R)-2-羥基-3-{3-[(1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羰基)氨基]-(1S，3R，5R)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基}丙基)甲基氨基甲酸叔丁酯a.制備甲基-(S)-1-環(huán)氧乙烷基甲基氨基甲酸叔丁酯將((S)-3-氯-2-羥基丙基)-甲基氨基甲酸叔丁酯(2.23g，10mmol)溶于THF(30mL)，然后加入氫氧化鈉水溶液(0.48g溶于10mL水)。攪拌混合物2h。然后減壓濃縮混合物，除去大部分THF，將剩余水溶液萃取到乙酸乙酯中，用水洗滌。用硫酸鈉干燥產(chǎn)物，過濾并減壓濃縮，得到標(biāo)題中間體的油(1.6g)。(m/z)[M+Na]+C9H17NO3計(jì)算值210.10；實(shí)測值210.1。1H-NMR(DMSO d6，299.96MHz)δ(ppm)1.32-1.42(s，9H)，2.69-2.73(m，1H)，2.75-2.85(s，3H)，2.95-3.05(brs，1H)，3.10-3.15(dm，1H)，3.16-3.21(d，1H)，3.37-3.51(m，2H)。
b.合成((R)-2-羥基-3-{3-[(1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羰基)氨基]-(1S，3R，5R)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基}丙基)甲基氨基甲酸叔丁酯將甲基-(R)-1-環(huán)氧乙烷基甲基氨基甲酸叔丁酯(9.53g，51.1mmol)和1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(8.7g，25.6mmol)溶于甲醇(100mL)。將混合物于80℃加熱2h，然后減壓濃縮。將所得的油溶于乙酸乙酯，并用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，接著用飽和氯化鈉水溶液洗滌。有機(jī)層用硫酸鈉干燥，過濾，并減壓濃縮。將所得的油進(jìn)行快速色譜(SiO2，用10％甲醇/90％二氯甲烷洗脫)。包含產(chǎn)物的級(jí)分濃縮得到標(biāo)題中間體的白色固體(13.5g)。(m/z)[M+H]+C29H42N4O5計(jì)算值527.33；實(shí)測值527.6。保留時(shí)間(分析HPLC2-50％MeCN/H2O，經(jīng)過5min)＝4.75min。
實(shí)施例21合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-(甲磺?；?乙基氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺按照實(shí)施例1的方法，用乙胺代替步驟h中的甲胺，制備標(biāo)題化合物。(m/z)[M+H]+C26H38N4O5S計(jì)算值519.28；實(shí)測值519.2。保留時(shí)間(分析HPLC10-70％MeCN/H2O，經(jīng)過6min)＝2.91min。
實(shí)施例22合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺酰基氨基)-丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺a1.制備(S)-2-環(huán)氧乙烷基甲基異吲哚-1，3-二酮向在冰浴中的(S)-1-環(huán)氧乙烷基甲醇(5g，67.5mmol)和鄰苯二甲酰亞胺(9.9g，67.3mmol)在四氫呋喃(200mL)中的冷溶液中加入三苯基膦(17.9g，68.2mmol)和二乙基偶氮二羧酸酯(12.3g，70.6mmol)。在0℃下攪拌混合物2h，并在環(huán)境溫度下攪拌48h。真空濃縮混合物，用快速硅石柱色譜法純化油狀剩余物，得到所需的產(chǎn)物(10.1g)的淡黃色固體在1∶1 EtOAc/己烷中，Rf＝0.51。1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ(ppm)7.76-7.64(m，2H)，7.63-7.60(m，2H)，3.9-3.8(dd，1H)，3.70-3.65(dd，1H)，3.15(m，1H)，2.70-2.67(dd，1H)，2.58-2.55(dd，1H)。
b1.合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-甲磺?；被?丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺按照實(shí)施例4的方法，用先前步驟的手性中間體替代外消旋2-環(huán)氧乙烷基甲基-異吲哚-1，3-二酮，制備標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽。(m/z)[M+H]+C24H34N4O5S計(jì)算值491.24；實(shí)測值491.4。保留時(shí)間(分析HPLC10-50％MeCN/H2O，經(jīng)過6min)＝3.69min。1H-NMR(CD3OD，300MHz)δ(ppm)8.67(s，1H)，7.74-7.73(m，3H)，7.7-7.6(dt，1H)，7.3-7.2(t，1H)，4.2(brs，2H)，4.0(brm，2H)，3.2-2.9(m，4H)，2.8(s，3H)，2.6-2.3(brm，6H)，2.2-2.1(brm，2H)，1.57-1.55(d，6H)。
也用下列方法制備標(biāo)題化合物。
a2.制備N-((S)-環(huán)氧乙烷基甲基)甲磺酰胺向冰浴中的甲磺酰胺(10g，0.105mol)的冷水(100mL)溶液加入粒狀氫氧化鈉(8.4g，0.21mol)，然后加入(S)-2-氯甲基環(huán)氧乙烷(12.4g，0.158mol)。在相同溫度下攪拌混合物2h，并在室溫下攪拌12h，然后加入濃鹽酸(18mL)。用二氯甲烷(2×300mL)萃取水層，分離產(chǎn)物。用MgSO4干燥有機(jī)層，然后蒸發(fā)至干，得到無色液體(2.5g)，它直接用于下一個(gè)步驟。
b2.合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；被?丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺向1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(TFA鹽；4g，8.8mmol)的甲醇(150mL)溶液中加入N，N-二異丙基乙胺(1.7mL，9.5mmol)和前步產(chǎn)物(2.5g，18.2mmol)。在80℃下攪拌混合物2天。真空濃縮后，用制備型HPLC純化剩余物，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽(1.3g)。(m/z)[M+H]+C24H34N4O5S計(jì)算值491.24；實(shí)測值491.4。保留時(shí)間(分析HPLC10-50％MeCN/H2O，經(jīng)過6min)＝3.69min。
實(shí)施例23合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-(1，1-二氧代-2-異噻唑烷基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺a.制備1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-(3-氯丙磺酰氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺向冰浴中的1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-氨基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺TFA鹽(0.125g，0.195mmol)的二氯甲烷(2mL)冷溶液中加入N，N-二異丙基乙胺(0.119mL，0.683mmol)和3-氯丙磺酰氯(0.025mL，0.205mmol)。在0℃下攪拌2h后，混合物在室溫下攪拌過夜。用二氯甲烷(50mL)稀釋，并用鹽水和飽和NaHCO3溶液洗滌。用MgSO4干燥后，將有機(jī)溶液蒸發(fā)至干，得到油狀剩余物。將粗產(chǎn)物直接用于下一個(gè)步驟。
b.1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-(1，1-二氧代-2-異噻唑烷基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺向1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-(3-氯丙磺酰氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(100mg，0.18mmol)的無水DMF(3mL)溶液中加入碳酸鉀(75mg，0.56mmol)。在85℃下振搖反應(yīng)混合物12h，并真空濃縮。將剩余物溶于二氯甲烷(50mL)，并用飽和NaHCO3洗滌。用MgSO4干燥以后，蒸發(fā)濾液至干，用制備HPLC純化剩余物得到標(biāo)題化合物。(m/z)[M+H]+C26H36N4O5S計(jì)算值517.26；實(shí)測值517.3。
實(shí)施例24合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺a.制備(1S，3S，5R)-3-[1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羰基)氨基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯在3L燒瓶中，將1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸(112.4g，0.486mol，1.1eq)混懸在甲苯(1L)中。將混合物加熱至85℃，經(jīng)70分鐘逐滴加入亞硫酰氯(86.74g，0.729mol)。邊攪拌邊將混合物于95℃加熱1.5h，然后冷卻至室溫。
在單獨(dú)的12L燒瓶中，將(1S，3R，5R)-3-氨基-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(100.0g，0.442mol，1eq)混懸在甲苯(1L)中，并加入3M NaOH(4eq)。室溫?cái)嚢杌旌衔?0分鐘，然后冷卻至約5℃。經(jīng)40分鐘緩慢加入?；热芤?，同時(shí)攪拌，保持內(nèi)部溫度低于10℃。在3-5℃下攪拌混合物30min，讓各層分離過夜。收集甲苯層(～2.5L)，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至約一半(～1.2L)，直接用于下一個(gè)步驟。
b.制備1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺經(jīng)20分鐘，在20℃下，邊攪拌邊向先前步驟中制備的甲苯溶液(～1.2L)中加入三氟乙酸(200mL)。在20℃下攪拌混合物2h。加入水(1.55L)，在20℃下攪拌混合物30分鐘。30分鐘以后，混合物分成三層。底層(～350mL)粘稠褐色的油含中間體粗品。
在1-2℃下，經(jīng)1小時(shí)邊攪拌邊向裝有MTBE(2.8L)的12L燒瓶內(nèi)加入褐色的粗油。在相同溫度下攪拌混合物1h，然后過濾。用MTBE(2×300mL)洗滌濾液，在室溫下真空干燥4天，得到標(biāo)題中間體的三氟乙酸鹽(163.3g)的淡黃色粉末。
c.制備N-甲基-N-[(S)-2-環(huán)氧乙烷-2-基甲基]甲磺酰胺在12L燒瓶中裝入水(1L)，接著加入NaOH(50％的水溶液，146.81g，1.835mol)。用水(2×500mL)洗滌裝NaOH的燒杯，并將洗液加入燒瓶。室溫?cái)嚢杌旌衔?0min，并將其冷卻至～8℃。經(jīng)5分鐘的時(shí)間加入(N-甲基)甲磺酰胺(200.2g，1.835mol)的水(500mL)溶液。在～4℃下攪拌混合物1h，并加入(S)-2-氯甲基環(huán)氧乙烷(339.6g，3.67mol)。在3-4℃下攪拌混合物20h。加入二氯甲烷(2L)，在5-10℃下攪拌混合物30min。經(jīng)過10分鐘讓兩層分離，并收集。將有機(jī)層(～2.5L)加回到12L燒瓶中，并用1M H3PO4(800mL)和鹽水(800mL)洗滌。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去二氯甲烷。向粗產(chǎn)物中加入甲苯(400mL)，并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去。再經(jīng)過3個(gè)甲苯處理循環(huán)以后，得到標(biāo)題中間體(228.2g)，它不經(jīng)進(jìn)一步純化就用于下一個(gè)步驟。
d.合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺在3L燒瓶中，將1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺三氟乙酸鹽(105.0g，0.232mol)混懸在無水乙醇(400mL)中。在室溫下，向該混懸液中加入溶于無水乙醇(100mL)的NaOH(50％的水溶液，0.243mol.1.05eq)。用乙醇(2×50mL)洗滌裝NaOH的燒杯，并將洗液加到反應(yīng)混合物中。攪拌30min以后，加入N-甲基-N-[(S)-2-環(huán)氧乙烷-2-基甲基]甲磺酰胺(62.0g，1.5eq)的無水乙醇(100mL)溶液?；旌衔锘亓?h，冷卻至室溫，并加入標(biāo)題化合物的晶種。約5min攪拌以后，形成白色固體。將混合物冷卻至3-5℃，并攪拌2h。過濾白色固體，用冷的無水乙醇(3×50mL)洗滌潮濕的濾餅。在30℃下真空干燥固體60h，得到標(biāo)題化合物(93.8g，用卡爾·費(fèi)歇爾滴定法測得含水量2.03％)。1H NMR(CDCl3)δppm 10.52(d，1H)，8.83(s，1H)，7.75(d，2H)，7.64-7.60(m，2H)，7.28-7.26(m，1H)，4.33-4.26(m，2H)，3.78-3.75(m，1H)，3.27-3.20(m，4H)，3.01(s，3H)，2.88(s，3H)，2.58-2.53(m，1H)，2.30-1.81(m，11H)，1.68(d，6H)。
從先前以較小規(guī)模用該實(shí)施例的方法進(jìn)行的標(biāo)題化合物制備中得到晶種，其中結(jié)晶是自發(fā)發(fā)生的。
實(shí)施例25合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺鹽酸鹽在1L燒瓶中，將1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(34.7g，0.069mo)混懸在無水乙醇(210mL)中。在室溫下邊攪拌邊加入濃HCl(1.1eq)?；亓鲾嚢杌旌衔?0min，冷卻至室溫，并攪拌2h。過濾固體，用冷無水乙醇(3×50mL)洗滌潮濕的濾餅。在30℃下真空干燥固體48h，得到標(biāo)題化合物(34.5g，93.7％產(chǎn)率，用卡爾·費(fèi)歇爾滴定法測得含水量0.13％)。
實(shí)施例26合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的檸檬酸鹽將1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺酰基-甲基-氨基)丙基]-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基)酰胺(0.1g，0.2mmol)混懸在乙醇(1mL)中。向該混懸液中加入1M檸檬酸的乙醇溶液(0.072mL，0.072mmol，0.33eq)。對(duì)混合物進(jìn)行簡單的聲處理，直至澄明，蓋上蓋子，然后讓其放置過夜。然后除去蓋子，讓混合物在環(huán)境條件下蒸發(fā)，直至觀察到固體。然后給混合物重新蓋上蓋子，放置72h。過濾所得固體，用冷乙醇洗滌，得到標(biāo)題化合物的固體(74.3mg)。
實(shí)施例27合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的酸性鹽按照實(shí)施例26的方法，使用所標(biāo)明當(dāng)量的酸，制備固體形式的下表III中所列的1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的酸性鹽。
表III酸性鹽
實(shí)施例28合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺酰基-甲基-氨基)丙基]-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的甲磺酸鹽向1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺酰基-甲基-氨基)丙基]-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺(0.1g，0.2mmol)的50％乙腈/水(1mL)溶液中加入1M甲磺酸的乙醇溶液(0.2mL，0.2mmol，1eq)。然后冷凍混合物，并凍干至干過夜。將所得固體溶于異丙醇(1mL)，同時(shí)略微溫?zé)岵⒃试S冷卻。過濾收集所得固體，并用冷異丙醇洗滌，得到標(biāo)題化合物的固體(90mg)。
實(shí)施例29合成1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺酰基-甲基-氨基)丙基]-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的酸性鹽按照實(shí)施例28的方法，使用所標(biāo)明當(dāng)量的酸，制備固體形式的下表IV中所列的1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺的酸性鹽。
表IV酸性鹽
試驗(yàn)1對(duì)人5-HT4(c)受體的放射配體結(jié)合試驗(yàn)a.膜制備5-HT4(c)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人5-HT4(c)受體cDNA的HEK-293(人胚腎)細(xì)胞(Bmax＝～6.0pmol/mg蛋白，如使用[3H]-GR113808膜放射配體結(jié)合試驗(yàn)所測定的)在T-225燒瓶中，在含4,500mg/LD-葡萄糖和鹽酸吡哆醇(GIBCO-Invitrogen Corp.，Carlsbad CACat#11965)，補(bǔ)充了10％胎牛血清(FBS)(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat#10437)、2mM L-谷氨酰胺和(100單位)青霉素-(100μg)鏈霉素/ml(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat #15140)的Dulbecco’s改進(jìn)的Eagle培養(yǎng)基(DMEM)中，在5％CO2增濕培養(yǎng)箱中在37℃下生長。通過加入800μg/mL遺傳霉素(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat #10131)到培養(yǎng)基中，使細(xì)胞在連續(xù)選擇壓力下生長。
細(xì)胞生長至差不多60-80％融合(＜35次培養(yǎng)傳代)。在收獲細(xì)胞前20-22小時(shí)，用不含血清的DMEM洗滌細(xì)胞兩次，并給細(xì)胞補(bǔ)料。膜制備的所有步驟都在冰上進(jìn)行。通過溫和的機(jī)械攪動(dòng)和用25mL吸量管研磨而揚(yáng)起單層細(xì)胞。通過以1000rpm離心(5min)收集細(xì)胞。
為了膜制備，將細(xì)胞沉淀團(tuán)塊再懸浮于冰冷的50mM 4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)，pH 7.4(膜制備緩沖液)(40mL/來自30-40個(gè)T225燒瓶的全部細(xì)胞收獲量)中，并用polytron破裂器(設(shè)置19，2×10s)在冰上進(jìn)行勻漿處理。在4℃下，將所得的勻漿以1200g離心分離5分鐘。棄去沉淀物，在40,000g下對(duì)上清液離心(20min)。通過用膜制備緩沖液再懸浮并在40,000g下離心分離(20min)而洗滌沉淀物一次。將最終的沉淀物再懸浮于50mM HEPES，pH 7.4(試驗(yàn)緩沖液)(相當(dāng)于1個(gè)T225燒瓶/1mL)中。用Bradford法(Bradford，1976)測定膜混懸液的蛋白濃度。在-80℃下分份冷凍保存膜。
b.放射配體結(jié)合試驗(yàn)在1.1mL 96-深孔聚丙烯分析板(Axygen)中進(jìn)行放射配體結(jié)合試驗(yàn)，總分析體積為400μL，在包含0.025％牛血清白蛋白(BSA)的50mM HEPES pH 7.4中含2μg膜蛋白。在0.001nM-5.0nM范圍內(nèi)的8-12個(gè)不同濃度下，使用[3H]-GR113808(Amersham Inc.，Bucks，UKCat #TRK944；比活～82 Ci/mmol)進(jìn)行飽和結(jié)合研究，用于測定放射性配體的Kd值。用0.15nM的[3H]-GR113808，和在10pM-100μM范圍內(nèi)的11個(gè)不同化合物濃度，進(jìn)行置換分析，用于測定化合物的pKi值。
收到的試驗(yàn)化合物為在DMSO中的10mM儲(chǔ)備液，并在25℃下，在含0.1％BSA的50mM HEPES pH 7.4中稀釋至400μM，然后在相同緩沖液中進(jìn)行連續(xù)稀釋(1∶5)。在1μM未標(biāo)記的GR113808的存在下測定非特異性結(jié)合。在室溫下溫育該試驗(yàn)60min，然后通過經(jīng)在0.3％聚乙烯亞胺中預(yù)浸漬的96-孔GF/B玻璃纖維濾板(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)快速過濾終止結(jié)合反應(yīng)。用過濾緩沖液(冰冷的50mMHEPES，pH7.4)洗滌濾板三次，除去非結(jié)合的放射性。干燥濾板，將35μL Microscint-20液體閃爍液(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)加到各個(gè)孔內(nèi)，在Packard Topcount液體閃爍計(jì)數(shù)器(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)中對(duì)板進(jìn)行計(jì)數(shù)。
用GraphPad Prism軟件包(GraphPad Software，Inc.，SanDiego，CA)，使用單位點(diǎn)競爭的3-參數(shù)模型，通過非線性回歸分析分析結(jié)合數(shù)據(jù)。將BOTTOM(曲線最小值)定為非特異性結(jié)合的值，如在1μM GR113808的存在下測定的。在Prism中，從最佳擬合IC50值和放射性配體的Kd值，使用Cheng-Prusoff方程式(Cheng and Prusoff，Biochemical Pharmacology，1973，22，3099-108)，計(jì)算試驗(yàn)化合物的Ki值Ki＝IC50/(1+[L]/Kd)，其中，[L]＝[3H]-GR113808濃度。結(jié)果表示為Ki值的負(fù)的十的對(duì)數(shù)，pKi。
在該試驗(yàn)中具有較高pKi值的試驗(yàn)化合物對(duì)5-HT4受體具有較高的結(jié)合親和力。在該試驗(yàn)中測試的本發(fā)明化合物具有約6.3-約9.0的pKi值，通常為約6.5-約8.5。
試驗(yàn)2對(duì)人5-HT3A受體的放射配體結(jié)合試驗(yàn)受體亞型選擇性的測定a.膜制備5-HT3A從Dr.Michael Bruess(University of Bonn，GDR)獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人5-HT3A受體cDNA的HEK-293(人胚腎)細(xì)胞(Bmax＝～9.0pmol/mg蛋白，如使用[3H]-GR65630膜放射配體結(jié)合試驗(yàn)所測定的)。細(xì)胞在T-225燒瓶或細(xì)胞工廠中補(bǔ)充了10％熱滅活的胎牛血清(FBS)(Hyclone，Logan，UTCat #SH30070.03)和(50單位)青霉素-(50μg)鏈霉素/ml(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat #15140)的50％Dulbecco’s改進(jìn)的Eagle培養(yǎng)基(DMEM)(GIBCO-Invitrogen Corp.，Carlsbad，CACat #11965)和50％Ham′s F12(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat#11765)中，在5％CO2增濕培養(yǎng)箱中，在37℃下生長。
細(xì)胞生長至差不多70-80％融合(＜35次培養(yǎng)傳代)。膜制備的所有步驟都在冰上進(jìn)行。為了收獲細(xì)胞，吸取培養(yǎng)基，細(xì)胞用不含Ca2+、Mg2+的Dulbecco’s磷酸鹽緩沖鹽水(dPBS)沖洗。通過溫和的機(jī)械攪動(dòng)揚(yáng)起單層細(xì)胞。在1000rpm下離心分離(5min)收集細(xì)胞。膜制備的隨后步驟按照表達(dá)5-HT4(c)受體膜的上述實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。
b.放射配體結(jié)合試驗(yàn)在96-孔聚丙烯試驗(yàn)板中進(jìn)行放射配體結(jié)合試驗(yàn)，總試驗(yàn)體積為200μL，在含0.025％BSA的50mM HEPES pH 7.4試驗(yàn)緩沖液中包含1.5-2μg膜蛋白。使用[3H]-GR65630(PerkinElmer Life SciencesInc.，Boston，MACat #NET1011，比活～85Ci/mmol)，以0.005nM到20nM范圍內(nèi)的12個(gè)不同濃度，進(jìn)行測定放射性配體Kd值的飽和結(jié)合研究。用0.50nM的[3H]-GR65630和10pM到100μM范圍內(nèi)的11個(gè)不同的化合物濃度進(jìn)行測定化合物pKi值的置換試驗(yàn)。收到的化合物為DMSO中的10mM儲(chǔ)備液(參見第3.1節(jié))，在25℃下，在含0.1％BSA的50mM HEPES pH 7.4中稀釋至400μM，然后在相同緩沖液中進(jìn)行連續(xù)(1∶5)稀釋。在10μM未標(biāo)記的MDL72222的存在下測定非特異性結(jié)合。在室溫下溫育該試驗(yàn)60min，然后通過經(jīng)在0.3％聚乙烯亞胺中預(yù)浸漬的96-孔GF/B玻璃纖維濾板(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)快速過濾而終止結(jié)合反應(yīng)。用過濾緩沖液(冰冷的50mMHEPES，pH7.4)洗滌濾板三次，除去非結(jié)合的放射性。干燥濾板，將35μL Microscint-20液體閃爍液(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)加到各個(gè)孔內(nèi)，在Packard Topcount液體閃爍計(jì)數(shù)器(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)中對(duì)板進(jìn)行計(jì)數(shù)。
使用上述測定Ki值的非線性回歸法分析分析結(jié)合數(shù)據(jù)。將BOTTOM(曲線最小值)定為非特異性結(jié)合的值，如在10μM MDL72222的存在下測定的。將Cheng-Prusoff方程式中的量[L]定義為[3H]-GR65630濃度。
將對(duì)5-HT4受體亞型相對(duì)于5-HT3受體亞型的選擇性計(jì)算成Ki(5-HT3A)/Ki(5-HT4(c))之比。在該試驗(yàn)中測試的本發(fā)明化合物具有約50-約8000的5-HT4/5-HT3受體亞型選擇性，通常為約100-約4000。
試驗(yàn)3用表達(dá)人5-HT4(c)受體的HEK-293細(xì)胞進(jìn)行完整細(xì)胞cAMP蓄積Flashplate試驗(yàn)在該試驗(yàn)中，通過測定當(dāng)表達(dá)5-HT4受體的HEK-293細(xì)胞與不同濃度的試驗(yàn)化合物接觸時(shí)所產(chǎn)生的環(huán)AMP的量，測定試驗(yàn)化合物的功能效力。
a.細(xì)胞培養(yǎng)以克隆的人5-HT4(c)受體cDNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HEK-293(人胚腎)細(xì)胞被制備成以兩種不同密度表達(dá)受體(1)密度為約0.5-0.6pmol/mg蛋白，如使用[3H]-GR113808膜放射配體結(jié)合試驗(yàn)所測定的，和(2)密度為約6.0pmol/mg蛋白。細(xì)胞在T-225燒瓶中，在補(bǔ)充了10％胎牛血清(FBS)(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat #10437)和(100單位)青霉素-(100μg)鏈霉素/ml(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat #15140)的含4,500mg/L D-葡萄糖(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat #11965)的Dulbecco’s改進(jìn)的Eagle培養(yǎng)基(DMEM)中，在5％CO2增濕培養(yǎng)箱內(nèi)在37℃生長。通過向培養(yǎng)基中加入遺傳霉素(800μg/mLGIBCO-Invitrogen Corp.Cat #10131)，細(xì)胞在連續(xù)選擇壓力下生長。
b.細(xì)胞制備細(xì)胞生長至差不多60-80％融合。在試驗(yàn)前20-22小時(shí)，用含4,500mg/LD-葡萄糖(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat #11965)的無血清DMEM洗滌細(xì)胞兩次并補(bǔ)料。為了收獲細(xì)胞，吸取培養(yǎng)基，將10mLVersene(GIBCO-Invitrogen Corp.Cat #15040)加到各個(gè)T-225燒瓶中。在RT下培養(yǎng)細(xì)胞5min，然后通過機(jī)械振蕩從燒瓶中取出。將細(xì)胞混懸液轉(zhuǎn)移到含等體積預(yù)熱(37℃)dPBS的離心管內(nèi)，并在1000rpm下離心分離5min。丟棄上清液，將沉淀物重新混懸在預(yù)熱(37℃)的刺激緩沖液中(每2-3個(gè)T-225燒瓶10mL當(dāng)量)。記錄該時(shí)間，并標(biāo)記為0時(shí)。用庫爾特計(jì)數(shù)器對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)(計(jì)數(shù)8μm以上，燒瓶收率是1-2×107細(xì)胞/瓶)。以5×105細(xì)胞/ml的濃度將細(xì)胞再混懸在預(yù)熱(37℃)的刺激緩沖液中(如flashplate試劑盒中提供的)，并在37℃下預(yù)溫育10min。
根據(jù)制造商的說明，使用Flashplate腺苷酸環(huán)化酶激活試驗(yàn)系統(tǒng)，用125I-cAMP(SMP004B，PerkinElmer Life Sciences Inc.，Boston，MA)以放射免疫測定形式進(jìn)行cAMP測定。
如上所述生長并制備細(xì)胞。在試驗(yàn)中的最終細(xì)胞濃度為25×103細(xì)胞/孔，最終試驗(yàn)體積為100μL。收到的試驗(yàn)化合物為DMSO中的10mM儲(chǔ)備液，在25℃下，在含0.1％BSA的50mM HEPES pH 7.4中稀釋至400μM，然后在相同緩沖液中進(jìn)行連續(xù)(1∶5)稀釋。用10pM到100μM(最終試驗(yàn)濃度)范圍內(nèi)的11個(gè)不同的化合物濃度進(jìn)行環(huán)AMP的蓄積試驗(yàn)。5-HT濃度-反應(yīng)曲線(10pM到100μM)被包括在每個(gè)板上。在37℃下振搖培養(yǎng)細(xì)胞15min，通過向各個(gè)孔內(nèi)加入100μl冰冷的檢測緩沖液(如flashplate試劑盒中提供的)終止反應(yīng)。將板密封，并在4℃下培養(yǎng)過夜。通過閃爍近似光譜法，使用Topcount(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)對(duì)結(jié)合放射性進(jìn)行定量。
根據(jù)制造商的用戶手冊(cè)中提供的說明，從cAMP標(biāo)準(zhǔn)曲線推出每mL反應(yīng)所產(chǎn)生的cAMP的量。用GraphPad Prism軟件包，使用3-參數(shù)S形劑量反應(yīng)模型(限制于統(tǒng)一的斜率(slope constrained tounity))，通過非線性回歸分析分析數(shù)據(jù)。效力數(shù)據(jù)報(bào)道成pEC50值(EC50值的負(fù)的十的對(duì)數(shù))，其中，EC50是50％最大響應(yīng)的有效濃度。
在該試驗(yàn)中顯示出較高pEC50值的試驗(yàn)化合物對(duì)于激動(dòng)5-HT4受體具有較高的效力。在該試驗(yàn)中測試的本發(fā)明化合物，例如，在密度為約0.5-0.6pmol/mg蛋白的細(xì)胞系(1)中，具有約7.0-約9.0的pEC50值，通常為約7.5-約8.5。
試驗(yàn)4在表達(dá)hERG心臟鉀通道的完整細(xì)胞中抑制鉀離子流的體外電壓鉗試驗(yàn)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染hERG cDNA的CHO-K1細(xì)胞獲得自Wisconsin大學(xué)的GailRobertson。將細(xì)胞保存在低溫儲(chǔ)藏條件下直至需要使用。細(xì)胞在補(bǔ)充了10％胎牛血清和200μg/mL遺傳霉素的Dulbecco′s改進(jìn)的Eagle培養(yǎng)基/F12中擴(kuò)充并傳代。將細(xì)胞以能夠?yàn)橥暾?xì)胞電壓鉗研究選擇分離細(xì)胞的密度在35mm2的平皿中(包含2mL培養(yǎng)基)接種到聚-D-賴氨酸(100μg/mL)涂覆的蓋玻片上。平皿保持在37℃下的增濕的5％CO2環(huán)境中。
至少每7天制備細(xì)胞外溶液，并且當(dāng)不用時(shí)保存在4℃下。細(xì)胞外溶液包含(mM)NaCl(137)、KCl(4)、CaCl2(1.8)、MgCl2(1)、葡萄糖(10)、4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)(10)，用NaOH調(diào)節(jié)至pH 7.4。在不含或包含試驗(yàn)化合物的情況下，將細(xì)胞外溶液保存在貯器中，它可從該貯器以約0.5mL/min的速率流入記錄室。制備細(xì)胞內(nèi)溶液，分份并保存在-20℃下直至使用那天。細(xì)胞內(nèi)溶液包含(mM)KCl(130)、MgCl2(1)、乙二醇-雙(β-氨基乙醚)N，N，N′，N′-四乙酸鹽(EGTA)(5)、MgATP(5)、4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)(10)，用KOH調(diào)節(jié)至pH 7.2。所有試驗(yàn)都在室溫(20-22℃)下進(jìn)行。
將接種細(xì)胞的蓋玻片轉(zhuǎn)移到記錄室，并連續(xù)灌注。在細(xì)胞和膜片電極之間形成了Gigaohm密封。一旦達(dá)成穩(wěn)定膜片，就在電壓鉗模型中開始記錄，最初的控制電位是-80mV。實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定的完整細(xì)胞電流以后，就將細(xì)胞暴露于試驗(yàn)化合物。標(biāo)準(zhǔn)電壓實(shí)驗(yàn)方案是在4.8秒期間從-80mV的控制電位逐步變?yōu)?20mV，在5秒期間復(fù)極化至-50mV，然后回復(fù)到最初的控制電位(-80mV)。每15秒(0.067Hz)運(yùn)行一次該電壓方案。使用pClamp軟件測定復(fù)極相期間的峰電流幅度。將濃度3μM的試驗(yàn)化合物灌注在細(xì)胞上5分鐘，接著是不含化合物的5分鐘的清除期。最后將陽性對(duì)照(西沙必利，20nM)加到灌注液中，以測試細(xì)胞功能。從-80mV到+20mV的步驟激活了hERG通道，導(dǎo)致外向電流。返回-50mV的步驟導(dǎo)致了外向尾電流，如通道從失活恢復(fù)并滅活。
使用pCLAMP軟件測定復(fù)極相期間的峰電流幅度。將對(duì)照數(shù)據(jù)和檢品數(shù)據(jù)輸出到Origin(OriginLab Corp.，Northampton MA)，其中，將各電流幅度相對(duì)于不含化合物的最初電流幅度標(biāo)準(zhǔn)化。計(jì)算各個(gè)條件下的標(biāo)準(zhǔn)化電流的均值和標(biāo)準(zhǔn)誤，并相對(duì)于實(shí)驗(yàn)的時(shí)間過程繪圖。
在暴露于檢品或賦形劑對(duì)照(通常是0.3％DMSO)5分鐘后觀察到的K+流抑制之間進(jìn)行比較。使用兩個(gè)群體獨(dú)立的t-檢驗(yàn)(MicrocalOrigin v.6.0)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。p＜0.05時(shí)，認(rèn)為差異顯著。
在該試驗(yàn)中，鉀離子流抑制百分?jǐn)?shù)越小，試驗(yàn)化合物當(dāng)用作治療劑時(shí)改變心臟復(fù)極模式的可能性就越小。在該試驗(yàn)中以3μM濃度測試的本發(fā)明化合物顯示出抑制鉀離子流小于約20％，通常小于約15％。
試驗(yàn)5口服生物利用度的體外模型Caco-2滲透試驗(yàn)進(jìn)行Caco-2滲透試驗(yàn)，模仿試驗(yàn)化合物口服后通過腸進(jìn)入血流的能力。測定溶液中試驗(yàn)化合物滲透細(xì)胞單層的速率，該細(xì)胞單層設(shè)計(jì)成模擬人小腸單層的緊密連接。
從ATCC(美國模式培養(yǎng)物保藏所；Rockville，MD)獲得Caco-2(結(jié)腸，腺癌；人)細(xì)胞。為了進(jìn)行滲透研究，將細(xì)胞以63,000細(xì)胞/cm2的密度接種在預(yù)浸濕的跨孔聚碳酸酯濾器(transwellspolycarbonate filters)上(Costar；Cambridge，MA)。培養(yǎng)21天后形成了細(xì)胞單層。在跨孔板內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)以后，從跨孔板分離含細(xì)胞單層的膜，并插入擴(kuò)散盒(Costar；Cambridge，MA)。將擴(kuò)散盒插入加熱塊，該加熱塊配備有用于控制溫度的循環(huán)外部恒溫調(diào)節(jié)于37℃的水。氣體多支管遞送95％O2/5％CO2到擴(kuò)散盒每一半內(nèi)，并制造出跨越細(xì)胞單層的層流模式，它有效減少了沒有被攪動(dòng)過的邊界層。
用濃度100μM的試驗(yàn)化合物進(jìn)行滲透研究，并用14C-甘露醇監(jiān)測單層的完整性。所有實(shí)驗(yàn)都在37℃下進(jìn)行60min。在0、30和60min時(shí)，從盒子的供給側(cè)和接收側(cè)取樣。用HPLC或液體閃爍計(jì)數(shù)分析樣品中的試驗(yàn)化合物和甘露醇濃度。計(jì)算以cm/sec表示的滲透系數(shù)(Kp)。
在該試驗(yàn)中，大于約10×10-6cm/sec的Kp值被認(rèn)為表示良好的生物利用度。在該試驗(yàn)中測試的本發(fā)明化合物顯示出約10×10-6cm/sec-約50×10-6cm/sec的Kp值，通常為約20×10-6cm/sec-約40×10-6cm/sec。
試驗(yàn)6大鼠中的藥代動(dòng)力學(xué)研究在pH約5-約6的0.1％乳酸中制備試驗(yàn)化合物的水溶液制劑。用試驗(yàn)化合物以2.5mg/kg的劑量經(jīng)由靜脈內(nèi)給藥(IV)或以5mg/kg的劑量通過經(jīng)口管飼法(PO)給雄性Sprague-Dawley大鼠(CD品系，Charles River Laboratories，Wilmington，MA)服藥。給藥體積是IV為1mL/kg，PO給藥為2mL/kg。在給藥前和給藥后2(只有IV)、5、15和30分鐘和1、2、4、8和24小時(shí)從動(dòng)物采集系列血樣。用液相色譜-質(zhì)譜分析(LC-MS/MS)(MDS SCIEX，API 4000，AppliedBiosystems，F(xiàn)oster City，CA)，測定血漿中試驗(yàn)化合物的濃度，檢測低限為1ng/mL。
使用WinNonlin(Version 4.0.1，Pharsight，Mountain View，CA)，通過非房室分析(Model 201用于IV和Model 200用于PO)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。試驗(yàn)化合物血漿濃度對(duì)時(shí)間曲線中的最大值表示為Cmax。通過線性梯形法則計(jì)算從給藥時(shí)到最后可測量濃度的濃度對(duì)時(shí)間曲線下面積(AUC(0-t))?？诜锢枚?F(％))，即PO給藥的AUC(0-t)與IV給藥的AUC(0-t)的劑量標(biāo)準(zhǔn)化比例計(jì)算成F(％)＝AUCPO/AUCIV×劑量IV/劑量PO×100％在該試驗(yàn)中參數(shù)Cmax、AUC(0-t)和F(％)值較大的試驗(yàn)化合物預(yù)期口服給藥時(shí)具有較大的生物利用度。在該試驗(yàn)中測試的本發(fā)明化合物的Cmax值通常為約0.1-約0.25μg/mL，AUC(0-t)值通常為約0.4-約0.9μg·hr/mL。例如，在大鼠模型中，實(shí)施例1化合物的Cmax值為0.17μg/mL，AUC(0-t)值為0.66μg·hr/mL，口服生物利用度(F(％))為約35％。
雖然參考具體實(shí)施方案已經(jīng)描述了本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解的是，可進(jìn)行各種改變，可替代等同方案，而不背離本發(fā)明的精神和范圍。另外，可進(jìn)行很多修改，以使特定情況、材料、物質(zhì)組成、過程、一個(gè)或多個(gè)過程步驟適應(yīng)本發(fā)明的目的、精神和范圍。所有這些修改都意欲包括在所附權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。另外，本文上面引用的所有出版物、專利和專利文件都全文引入本文作為參考，就好像它們被單獨(dú)引入作為參考一樣。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物 其中R1是氫、鹵素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基；R2是C3-4烷基或C3-6環(huán)烷基；R3是氫或C1-3烷基；R4是-S(O)2R6或-C(O)R7；R5是氫、C1-3烷基、被-OH或C1-3烷氧基取代的C2-3烷基、或-CH2-吡啶基；R6是C1-3烷基；或，R5和R6一起形成C3-4亞烷基；和R7是氫、C1-3烷基或吡啶基；或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中，R5是氫、C1-3烷基、被-OH或C1-3烷氧基取代的C2-3烷基、或-CH2-吡啶基；和R6是C1-3烷基。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中，R1是氫或鹵素。
4.權(quán)利要求2的化合物，其中，R2是C3-4烷基。
5.權(quán)利要求2的化合物，其中，R4是-S(O)2R6。
6.權(quán)利要求5的化合物，其中，R4是-S(O)2CH3。
7.權(quán)利要求2的化合物，其中，R4是-C(O)R7。
8.權(quán)利要求7的化合物，其中，R7是氫或甲基。
9.權(quán)利要求2的化合物，其中，R5是氫或甲基。
10.權(quán)利要求2的化合物，其中R1是氫；R2是C3-4烷基或C4-5環(huán)烷基；R3是氫；R4是-S(O)2R6或-C(O)R7；R5是氫或C1-3烷基；R6是C1-3烷基；和R7是氫或C1-3烷基。
11.權(quán)利要求1的化合物，其中，該化合物選自1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-(甲磺酰基-甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-甲氧基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(甲磺酰基-吡啶-3-基甲基-氨基)-2-甲氧基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-甲磺?；被?丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(甲磺?；?吡啶-3-基甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(S)-2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-[甲基-(吡啶-4-羰基)氨基]丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-[(吡啶-4-羰基)氨基]丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(乙?；?甲基-氨基)-2-甲氧基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-甲氧基-3-[甲基-(吡啶-4-羰基)氨基]丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(乙酰基-吡啶-3-基甲基-氨基)-2-甲氧基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-乙?；被?2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(乙?；?甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(甲?；?甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-甲?；被?2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-3-(乙?；?甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫-喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-3-(甲?；?甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；5-溴代-1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-(甲磺?；?乙基氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；被?丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；和1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-(1，1-二氧代-2-異噻唑烷基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；及其藥學(xué)可接受的鹽和溶劑化物和立體異構(gòu)體。
12.權(quán)利要求2的化合物，其中，該化合物選自1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-(甲磺?；被?丙基]-8-氮雜-二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺酰基-甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(S)-2-羥基-3-(甲磺酰基-甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(乙?；?甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[3-(甲?；?甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-3-(乙?；?甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-3-(甲?；?甲基-氨基)-2-羥基丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉酮-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺酰基氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；及其藥學(xué)可接受的鹽和溶劑化物和立體異構(gòu)體。
13.權(quán)利要求12的化合物，其中，該化合物選自1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[2-羥基-3-(甲磺酰基-甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；?甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(S)-2-羥基-3-(甲磺酰基-甲基-氨基)丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；1-異丙基-2-氧代-1，2-二氫喹啉-3-羧酸{(1S，3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲磺?；被?丙基]-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺；及其藥學(xué)可接受的鹽和溶劑化物和立體異構(gòu)體。
14.包含治療有效量的權(quán)利要求1到13任一項(xiàng)的化合物和藥學(xué)可接受載體的藥物組合物。
15.如權(quán)利要求1到13任一項(xiàng)中請(qǐng)求保護(hù)的化合物在治療中的應(yīng)用。
16.權(quán)利要求1到13任一項(xiàng)的化合物用于制造藥物的應(yīng)用。
17.權(quán)利要求16的應(yīng)用，其中，所述藥物是用于治療哺乳動(dòng)物與5-HT4受體活性有關(guān)的醫(yī)學(xué)病況。
18.權(quán)利要求17的應(yīng)用，其中，疾病或病況是胃腸道動(dòng)力減弱的病癥。
19.治療患有與5-HT4受體活性有關(guān)的醫(yī)學(xué)病況的哺乳動(dòng)物的方法，該方法包括給哺乳動(dòng)物施用治療有效量的含藥學(xué)可接受載體和權(quán)利要求1到13任一項(xiàng)的化合物的藥物組合物。
20.權(quán)利要求19的方法，其中，醫(yī)學(xué)病況選自過敏性腸綜合征、長期便秘、機(jī)能性消化不良、胃排空延遲、胃食管返流疾病、胃輕癱、手術(shù)后腸梗阻、假性腸梗塞和藥物造成的運(yùn)輸延遲。
21.治療哺乳動(dòng)物胃腸道動(dòng)力減弱病癥的方法，該方法包括給哺乳動(dòng)物施用治療有效量的含藥學(xué)可接受載體和權(quán)利要求1到13任一項(xiàng)的化合物的藥物組合物。
22.權(quán)利要求21的方法，其中，動(dòng)力減弱病癥選自長期便秘、便秘為主的過敏性腸綜合征、糖尿病性和自發(fā)性胃輕癱以及機(jī)能性消化不良。
23.制備權(quán)利要求1到13任一項(xiàng)的化合物的方法，該方法包括(a)將式(III)化合物 與式L-R4化合物反應(yīng)，其中，L是離去基團(tuán)，或L-R4代表HO-C(O)R7；或(b)將式(VIII)化合物 與式(IX)化合物 反應(yīng)，得到式(I)化合物，或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
24.制備式(I′)化合物的方法， 其中，R1、R2、R4和R5如權(quán)利要求1中定義；或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體，該方法包括將式(IV)化合物 或其鹽與式(XI)化合物 反應(yīng)，得到式(I′)化合物，或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
25.由權(quán)利要求23或權(quán)利要求24的方法制備的產(chǎn)物。
26.式(III)化合物 其中R1是氫、鹵素、羥基、C1-4烷基或C1-4烷氧基；R2是C3-4烷基或C3-6環(huán)烷基；R3是氫或C1-3烷基；R4是-S(O)2R6或-C(O)R7；和R5是氫、C1-3烷基、被-OH或C1-3烷氧基取代的C2-3烷基、或-CH2-吡啶基；或其鹽或立體異構(gòu)體或受保護(hù)的衍生物。
27.研究包含5-HT4受體的生物系統(tǒng)或樣品的方法，該方法包括(a)將該生物系統(tǒng)或樣品與權(quán)利要求1到13任一項(xiàng)的化合物接觸；和(b)測定由所述化合物引起的對(duì)該生物系統(tǒng)或樣品的作用。
全文摘要
本發(fā)明提供了式(I)的新的喹啉酮－甲酰胺5－HT
文檔編號(hào)A61K31/4709GK1946719SQ200580013391
公開日2007年4月11日 申請(qǐng)日期2005年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月7日
發(fā)明者D·馬克斯, P·R·法瑟里, D·S·特納, D·D·龍, 崔錫基, A·A·戈德布拉姆, D·吉諾夫 申請(qǐng)人:施萬制藥