專利名稱：：抑制基因表達(dá)的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及抑制基因表達(dá)的方法和組合物。具體的說，本發(fā)明提供基于寡核苷酸的治療藥物以抑制與癌癥相關(guān)的癌基因。
背景技術(shù)：
：癌基因已成為理解癌癥生物學(xué)的主要概念，可為治療藥物提供有價值的靶標(biāo)。所有的癌基因及其產(chǎn)物都在細(xì)胞內(nèi)部起作用。這使得基于蛋白質(zhì)的藥物因其特異性涉及配體-受體識別而無效。反義寡脫氧核苷酸(寡核苷酸)正作為特異性地靶向癌基因的治療化合物而得到研究(Wickstrom，E.(編輯).ProspectsforantisensenucleicacidtherapyofcancerandAids.NewYorkWiley-Liss，Inc.1991；Murray，J.A.H.(編輯).AntisenseRNAandDNANewYorkWiley-Liss，Inc.1992)。反義藥物是修飾的合成寡核苷酸，通過干擾靶mRNA的核糖體翻譯而起作用。迄今所開發(fā)的反義藥物是通過結(jié)合靶mRNA并觸發(fā)核糖核酸酶H(RNA酶H)降解mRNA來破壞靶mRNA。寡核苷酸的半壽期約為20分鐘，因此它們在大多數(shù)細(xì)胞中被快速降解(Fisher，T.L.等，NucleicAcidsRes.213857-3865(1993))。為提高寡核苷酸的穩(wěn)定性，通常對它們進(jìn)行化學(xué)修飾，例如用硫替代其骨架中一個磷酸酯中的氧(硫代磷酸酯)來保護(hù)它們(Milligan，J.F.等，J.Med.Chem.361923-1937(1993)；Wagner，R.W.等，Science2601510-1513(1993))。但是，這種修飾只能減慢反義藥物的降解，因此反義藥物需要大劑量才能有效。盡管人們對反義療法的應(yīng)用充滿樂觀，但反義藥物的使用存在許多嚴(yán)重問題，如難以使足量的反義藥物進(jìn)入細(xì)胞中，存在非序列特異性作用，因大量含硫的硫代磷酸酯寡核苷酸和它們不能進(jìn)入其靶細(xì)胞而造成毒性，以及因連續(xù)大劑量傳遞而費(fèi)用高。反義藥物已有的另一問題是它們的活性無特異性。故另外需要不基于蛋白質(zhì)的靶向癌基因的癌癥治療藥物。特別需要在低劑量下有效和對對象無毒的治療藥物。發(fā)明概述本發(fā)明涉及抑制基因表達(dá)的方法和組合物。具體的說，本發(fā)明提供基于寡核苷酸的治療藥物以抑制與癌癥相關(guān)的癌基因。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含能在生理?xiàng)l件下與bcl-3基因啟動子區(qū)雜交的第一寡核苷酸(例如SEQIDNO1438，3，7，8或9)的組合物。在某些實(shí)施方案中，第一寡核苷酸中的至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，第一寡核苷酸中的所有胞嘧啶堿基都是5-甲基胞嘧啶。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一寡核苷酸與bcl-2基因啟動子區(qū)的雜交抑制bcl-2基因的表達(dá)。在某些實(shí)施方案中，bcl-2基因在細(xì)胞的染色體上，第一寡核苷酸與bcl-2基因啟動子區(qū)的雜交減少細(xì)胞的增殖。在某些實(shí)施方案中，所述組合物還包含第二寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中，第二寡核苷酸中的至少一個(例如所有的)胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，所述第二寡核苷酸包括SEQIDNO3，7，8或9，且與第一寡核苷酸不同(例如如果第二寡核苷酸具有SEQIDNO3的序列，則第一寡核苷酸具有SEQIDNO3以外的序列等等)。在某些實(shí)施方案中，第二寡核苷酸能與第二基因啟動子區(qū)雜交，其中所述第二基因不是bcl-2。在某些實(shí)施方案中，第二基因是癌基因(例如c-ki-Ras、c-Ha-Ras、c-myc、Her-2或TGF-α)。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含寡核苷酸的組合物，所述寡核苷酸能在包括SEQIDNO1的核苷酸1-40之間、SEQIDNO1的核苷酸161-350之間、SEQIDNO1的核苷酸401-590之間或SEQIDNO1的核苷酸1002-1260之間的位置與bcl-2基因啟動子區(qū)雜交。在另外其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供方法，該方法包括提供寡核苷酸(例如SEQIDNO1438，3，7，8或9)及能夠增殖和包含能夠表達(dá)的bcl-2基因的細(xì)胞；將寡核苷酸引入到細(xì)胞中。在某些實(shí)施方案中，引入的結(jié)果導(dǎo)致細(xì)胞增殖減少。在某些實(shí)施方案中，引入的結(jié)果導(dǎo)致bcl-2基因表達(dá)的抑制。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞是癌細(xì)胞。在其它實(shí)施方案中，細(xì)胞在宿主動物(例如非人哺乳動物或人)中。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸以每公斤體重0.01μg-100g的劑量，優(yōu)選以每公斤體重1mg-100mg的劑量引入到宿主動物中。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸每天一次或多次引入到宿主動物中。在其它實(shí)施方案中，寡核苷酸連續(xù)引入到宿主動物中。在還其它實(shí)施方案中，細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物中。在某些實(shí)施方案中，該方法還包括將試驗(yàn)化合物引入到細(xì)胞中的步驟。在某些實(shí)施方案中，試驗(yàn)化合物是公知的化療藥物。在某些實(shí)施方案中，癌癥是胰腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、白血病、前列腺癌、淋巴瘤、卵巢癌或黑素瘤。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸中的至少一個(例如所有的)胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，該方法還提供藥物傳遞系統(tǒng)。在某些實(shí)施方案中，藥物傳遞系統(tǒng)包含脂質(zhì)體(例如包含中性脂質(zhì)或脂質(zhì)樣化合物的脂質(zhì)體)。在某些實(shí)施方案中，藥物傳遞系統(tǒng)包含細(xì)胞靶向成分(例如細(xì)胞表面受體或核受體的配體或配體樣分子)。在某些實(shí)施方案中，藥物傳遞系統(tǒng)供在體內(nèi)使用，寡核苷酸和脂質(zhì)體存在的比例為2∶1-1∶3/1μg-100mg每公斤體重。本發(fā)明還提供方法，該方法包括提供能與bcl-2基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸及包含bcl-2基因的細(xì)胞；將寡核苷酸引入到細(xì)胞中。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，核苷酸與bcl-2基因啟動子區(qū)完全互補(bǔ)。在其它實(shí)施方案中，寡核苷酸與bcl-2基因啟動子區(qū)部分互補(bǔ)。例如，在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸含有bcl-2基因啟動子區(qū)的一個錯配。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，寡核苷酸只與bcl-2基因啟動子區(qū)互補(bǔ)，不與人基因組的其它區(qū)域完全互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸的長度在10至60個核苷酸之間，優(yōu)選在15至35個核苷酸之間。在某些實(shí)施方案中，該方法還提供藥物傳遞系統(tǒng)。在某些實(shí)施方案中，藥物傳遞系統(tǒng)包含脂質(zhì)體(例如包含中性脂質(zhì)或脂質(zhì)樣化合物的脂質(zhì)體)。在某些實(shí)施方案中，藥物傳遞系統(tǒng)包含細(xì)胞靶向成分(例如細(xì)胞表面受體或核受體的配體或配體樣分子)。在某些實(shí)施方案中，藥物傳遞系統(tǒng)供在體內(nèi)使用，寡核苷酸和脂質(zhì)體存在的比例為2∶1-1∶3/1μg-100mg每公斤體重。在還其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含寡核苷酸的組合物，該寡核苷酸能在生理?xiàng)l件下與bcl-2基因啟動子區(qū)雜交。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸與bcl-2基因啟動子區(qū)完全互補(bǔ)。在其它實(shí)施方案中，寡核苷酸與bcl-2基因啟動子區(qū)部分互補(bǔ)。例如，在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸含有bcl-2基因啟動子區(qū)的一個錯配。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，寡核苷酸只與bcl-2基因啟動子區(qū)互補(bǔ)，不與人基因組的其它區(qū)域完全互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸的長度在10至60個核苷酸之間，優(yōu)選在15至35個核苷酸之間。本發(fā)明還在使得bcl-2基因表達(dá)被抑制的條件下提供包含能在生理?xiàng)l件下與bcl-2基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸的組合物。本發(fā)明另外在使得細(xì)胞增殖減少的條件下提供包含寡核苷酸的組合物，該寡核苷酸能在生理?xiàng)l件下與位于細(xì)胞染色體上的bcl-2基因啟動子區(qū)雜交。本發(fā)明也提供包含第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的組合物，所述第一寡核苷酸能在生理?xiàng)l件下與bcl-2基因啟動子區(qū)雜交，包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶；所述第二寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含能在生理?xiàng)l件下與bcl-2基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸和說明書的試劑盒，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶；所述說明書說明如何使用試劑盒來減少在染色體上包含bcl-2基因的細(xì)胞的增殖或者抑制基因表達(dá)。在某些實(shí)施方案中，試劑盒中的組合物用以治療對象的癌癥，所述說明書包括如何使用試劑盒來治療對象的癌癥的說明。在某些實(shí)施方案中，說明書是美國食品和藥物管理局(U.S.FoodandDrugAgency)所要求的醫(yī)藥品標(biāo)簽說明。本發(fā)明也提供方法，該方法包括提供來自確診患有癌癥的對象的生物樣品及用以檢測樣品中是否存在癌基因表達(dá)的試劑；檢測樣品中是否存在癌基因表達(dá)；向?qū)ο笾幸肽茉谏項(xiàng)l件下與生物樣品中所表達(dá)的癌基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。本發(fā)明另外提供抑制對象中的基因表達(dá)的方法(例如用以治療癌癥或其它高增殖性疾病)，該方法包括提供能在生理?xiàng)l件下與生物樣品中所表達(dá)的與癌癥或高增殖性疾病相關(guān)的基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶；在使得基因表達(dá)被抑制的條件下將寡核苷酸給予對象。在某些實(shí)施方案中，對象是人。在又其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供篩選化合物的方法，所述方法包括提供包含可疑癌基因的細(xì)胞及能與該基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸；將寡核苷酸引入到細(xì)胞中；確定在寡核苷酸存在下相對于寡核苷酸不存在時細(xì)胞的增殖是否被抑制。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物(例如癌細(xì)胞系)中。在其它實(shí)施方案中，細(xì)胞在宿主動物(例如非人哺乳動物)中。在某些實(shí)施方案中，該方法是高通量篩選方法。因此，在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含能在生理?xiàng)l件下與c-ki-Ras基因啟動子區(qū)雜交的第一寡核苷酸(例如SEQIDNO47，48，50或53)的組合物。在某些實(shí)施方案中，第一寡核苷酸的至少一個(例如所有的)胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，第一寡核苷酸與c-ki-Ras基因啟動子區(qū)的雜交能抑制c-ki-Ras基因的表達(dá)。在某些實(shí)施方案中，c-ki-Ras基因在細(xì)胞的染色體上，第一寡核苷酸與c-ki-Ras基因啟動子區(qū)的雜交能減少細(xì)胞的增殖。在某些實(shí)施方案中，組合物還包含第二寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中，第二寡核苷酸中的至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。在其它實(shí)施方案中，第二寡核苷酸中的所有胞嘧啶堿基都是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，第二寡核苷酸包括SEQIDNO47，48，50或53，其中所述第二寡核苷酸與第一寡核苷酸不同(例如如果第二寡核苷酸具有SEQIDNO47的序列，則第一寡核苷酸具有SEQIDNO47以外的序列等等)。在某些實(shí)施方案中，第二寡核苷酸能與第二基因啟動子區(qū)雜交，其中所述第二基因不是c-ki-Ras。在某些實(shí)施方案中，第二基因是癌基因(例如包括但不限于c-Ha-Ras、c-myc、Her-2、TGF-α和bcl-2)。在另外其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含寡核苷酸的組合物，該寡核苷酸能在包括SEQIDNO46的核苷酸1-289之間或SEQIDNO46的核苷酸432-658之間的位置與c-ki-Ras基因啟動子區(qū)雜交。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供方法，所述方法包括提供能與c-ki-Ras基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸(例如包含SEQIDNO47，48，50或53的寡核苷酸)及包含能夠表達(dá)的c-ki-Ras基因的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞能夠增殖；將寡核苷酸引入到細(xì)胞中。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。在其它實(shí)施方案中，寡核苷酸的CG二核苷酸對中的所有胞嘧啶堿基都是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸能在包括SEQIDNO46的核苷酸1-289之間或SEQIDNO46的核苷酸432-658之間的位置與c-ki-Ras基因啟動子區(qū)雜交。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸的長度在15-30個堿基之間。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，引入的結(jié)果導(dǎo)致細(xì)胞的增殖減少。在某些實(shí)施方案中，引入的結(jié)果導(dǎo)致c-ki-Ras基因表達(dá)的抑制。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞是癌細(xì)胞(例如包括但不限于胰腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、白血病、前列腺癌、淋巴瘤、卵巢癌和黑素瘤)。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞是在宿主動物中。在某些實(shí)施方案中，宿主動物是非人哺乳動物。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸以每公斤體重0.01μg-100g的劑量，優(yōu)選以每公斤體重1mg-100mg的劑量引入到宿主動物中。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸每天一次或多次引入到宿主動物中。在其它實(shí)施方案中，寡核苷酸連續(xù)引入到宿主動物中(例如持續(xù)2小時至2周之間的時間)。在其它實(shí)施方案中，細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物中。在某些實(shí)施方案中，該方法還包括將試驗(yàn)化合物引入到細(xì)胞中的步驟。在某些實(shí)施方案中，試驗(yàn)化合物是公知的化療藥物。在某些實(shí)施方案中，該方法還提供藥物傳遞系統(tǒng)。在某些實(shí)施方案中，藥物傳遞系統(tǒng)包含脂質(zhì)體(例如包含中性脂質(zhì)或脂質(zhì)樣化合物的脂質(zhì)體)。在某些實(shí)施方案中，藥物傳遞系統(tǒng)包含細(xì)胞靶向成分(例如細(xì)胞表面受體或核受體的配體或配體樣分子)。在某些實(shí)施方案中，藥物傳遞系統(tǒng)供在體內(nèi)使用，寡核苷酸和脂質(zhì)體存在的比例為2∶1-1∶3/1μg-100mg每公斤體重。在還其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含能在生理?xiàng)l件下與c-ki-Ras基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸的組合物，其中寡核苷酸中的至少一個(例如所有的)胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸與c-ki-Ras基因啟動子區(qū)完全互補(bǔ)。在其它實(shí)施方案中，寡核苷酸與c-ki-Ras基因啟動子區(qū)部分互補(bǔ)。例如，在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸含有c-ki-Ras基因啟動子區(qū)的一個錯配。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，寡核苷酸只與c-ki-Ras基因啟動子區(qū)互補(bǔ)，不與人基因組的其它區(qū)域完全互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸的長度在10至60個核苷酸之間，優(yōu)選在15至35個核苷酸之間。本發(fā)明還在使得c-ki-Ras基因表達(dá)被抑制的條件下提供包含能在生理?xiàng)l件下與c-ki-Ras基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸的組合物。本發(fā)明另外在使得細(xì)胞增殖減少的條件下提供包含能在生理?xiàng)l件下與位于細(xì)胞染色體上的c-ki-Ras基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸的組合物。本發(fā)明也提供包含第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的組合物，所述第一寡核苷酸能在生理?xiàng)l件下與c-ki-Ras基因啟動子區(qū)雜交，包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶；所述第二寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含能在生理?xiàng)l件下與c-ki-Ras基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸和說明書的試劑盒，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶；所述說明書說明如何使用試劑盒來減少在染色體上包含c-ki-Ras基因的細(xì)胞的增殖或者抑制基因表達(dá)。在某些實(shí)施方案中，試劑盒中的組合物用以治療對象的癌癥，所述說明書包括如何使用試劑盒來治療對象的癌癥的說明。在某些實(shí)施方案中，說明書是美國食品和藥物管理局所要求的醫(yī)藥品標(biāo)簽說明。本發(fā)明也提供方法，該方法包括提供來自確診患有癌癥的對象的生物樣品及用以檢測樣品中是否存在癌基因表達(dá)的試劑；檢測樣品中是否存在癌基因表達(dá)；給予對象能在生理?xiàng)l件下與生物樣品中所表達(dá)的癌基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。本發(fā)明另外提供抑制對象中的基因表達(dá)的方法(例如用以治療癌癥或其它高增殖性疾病)，該方法包括提供能在生理?xiàng)l件下與生物樣品中所表達(dá)的與癌癥或高增殖性疾病相關(guān)的基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶；在使得基因表達(dá)被抑制的條件下將寡核苷酸給予對象。在某些實(shí)施方案中，對象是人。在又其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供篩選化合物的方法，所述方法包括提供包含可疑癌基因的細(xì)胞及能與該基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸；將寡核苷酸給予細(xì)胞；確定在寡核苷酸存在下相對于寡核苷酸不存在時細(xì)胞的增殖是否被抑制。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物(例如癌細(xì)胞系)中。在其它實(shí)施方案中，細(xì)胞在宿主動物(例如非人哺乳動物)中。在某些實(shí)施方案中，該方法是高通量篩選方法。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含能在生理?xiàng)l件下與c-myc基因啟動子區(qū)雜交的第一寡核苷酸(例如SEQIDNO110，111，112，113，114或115)的組合物。在某些實(shí)施方案中，第一寡核苷酸中的至少一個(例如所有的)胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一寡核苷酸與c-myc基因啟動子區(qū)的雜交能抑制c-myc基因的表達(dá)。在某些實(shí)施方案中，c-myc基因在細(xì)胞的染色體上，第一寡核苷酸與c-myc基因啟動子區(qū)的雜交能減少細(xì)胞的增殖。在某些實(shí)施方案中，組合物還包含第二寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中，第二寡核苷酸中的至少一個(例如所有的)胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，第二寡核苷酸包括SEQIDNO110，111，112，113，114或115，其中所述第二寡核苷酸與第一寡核苷酸不同(例如如果第二寡核苷酸具有SEQIDNO110的序列，則第一寡核苷酸具有SEQIDNO110以外的序列等等)。在某些實(shí)施方案中，第二寡核苷酸能與第二基因啟動子區(qū)雜交，其中所述第二基因不是c-myc。在某些實(shí)施方案中，第二基因是癌基因(例如c-ki-Ras、c-Ha-Ras、bcl-2、Her-2或TGF-α)。本發(fā)明還提供包含寡核苷酸的組合物，該寡核苷酸能在包括SEQIDNO108的核苷酸3-124之間或SEQIDNO108的核苷酸165-629之間的位置與c-myc基因啟動子區(qū)雜交。本發(fā)明還提供方法，該方法包括提供能在生理?xiàng)l件下與c-myc基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸(例如SEQIDNO110，111，112，113，114或115)及包含c-myc基因、能夠表達(dá)c-myc基因的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞能夠增殖；將寡核苷酸引入到細(xì)胞中。在某些實(shí)施方案中，引入的結(jié)果導(dǎo)致細(xì)胞增殖減少。在某些實(shí)施方案中，引入的結(jié)果導(dǎo)致c-myc基因表達(dá)的抑制。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞是癌細(xì)胞。在其它實(shí)施方案中，細(xì)胞在宿主動物(例如非人哺乳動物或人)中。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸以每公斤體重0.01μg-100g的劑量，優(yōu)選以每公斤體重1mg-100mg的劑量引入到宿主動物中。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸每天一次或多次引入到宿主動物中。在其它實(shí)施方案中，寡核苷酸連續(xù)引入到宿主動物中。在還其它實(shí)施方案中，細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物中。在某些實(shí)施方案中，該方法還包括將試驗(yàn)化合物引入到細(xì)胞中的步驟。在某些實(shí)施方案中，試驗(yàn)化合物是公知的化療藥物。在某些實(shí)施方案中，癌癥是胰腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、白血病、前列腺癌、淋巴瘤、卵巢癌或黑素瘤。在某些實(shí)施方案中，該方法還提供藥物傳遞系統(tǒng)。在某些實(shí)施方案中，藥物傳遞系統(tǒng)包含脂質(zhì)體(例如包含中性脂質(zhì)或脂質(zhì)樣化合物的脂質(zhì)體)。在某些實(shí)施方案中，藥物傳遞系統(tǒng)包含細(xì)胞靶向成分(例如細(xì)胞表面受體或核受體的配體或配體樣分子)。在某些實(shí)施方案中，藥物傳遞系統(tǒng)供在體內(nèi)使用，寡核苷酸和脂質(zhì)體存在的比例為2∶1-1∶3/1μg-100mg每公斤體重。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸中的至少一個、優(yōu)選所有的胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸的長度在10至60個核苷酸之間，優(yōu)選在15至35個核苷酸之間。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸在包括SEQIDNO108的核苷酸3-124之間或SEQIDNO108的核苷酸165-629之間的位置與c-myc基因啟動子區(qū)雜交。在還其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含能在生理?xiàng)l件下與c-myc基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸的組合物，所述寡核苷酸包含至少一個GC二核苷酸對，其中GC二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸與c-myc基因啟動子區(qū)完全互補(bǔ)。在其它實(shí)施方案中，寡核苷酸與c-myc基因啟動子區(qū)部分互補(bǔ)。例如，在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸含有c-myc基因啟動子區(qū)的一個錯配。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，寡核苷酸只與c-myc基因啟動子區(qū)互補(bǔ)，不與人基因組的其它區(qū)域完全互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸的長度在10至60個核苷酸之間，優(yōu)選在15至35個核苷酸之間。本發(fā)明還在使得c-myc基因表達(dá)被抑制的條件下提供包含能在生理?xiàng)l件下與c-myc基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸的組合物。本發(fā)明另外在使得細(xì)胞增殖減少的條件下提供包含能在生理?xiàng)l件下與位于細(xì)胞染色體上的c-myc基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸的組合物。本發(fā)明也提供包含第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的組合物，所述第一寡核苷酸能在生理?xiàng)l件下與c-myc基因啟動子區(qū)雜交，包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶；所述第二寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含能在生理?xiàng)l件下與c-myc基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸和說明書的試劑盒，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶；所述說明書說明如何使用試劑盒來減少在染色體上包含c-myc基因的細(xì)胞的增殖或者抑制基因表達(dá)。在某些實(shí)施方案中，試劑盒中的組合物用以治療對象的癌癥，所述說明書包括如何使用試劑盒來治療對象的癌癥的說明。在某些實(shí)施方案中，說明書是美國食品和藥物管理局所要求的醫(yī)藥品標(biāo)簽說明。本發(fā)明也提供方法，該方法包括提供來自確診患有癌癥的對象的生物樣品及用以檢測樣品中是否存在癌基因表達(dá)的試劑；檢測樣品中是否存在癌基因表達(dá)；給予對象能在生理?xiàng)l件下與生物樣品中所表達(dá)的癌基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。本發(fā)明另外提供抑制對象中的基因表達(dá)的方法(例如用以治療癌癥或其它高增殖性疾病)，該方法包括提供能在生理?xiàng)l件下與生物樣品中所表達(dá)的與癌癥或高增殖性疾病相關(guān)的基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶；在使得基因表達(dá)被抑制的條件下將寡核苷酸給予對象。在某些實(shí)施方案中，對象是人。在又其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供篩選化合物的方法，所述方法包括提供包含可疑癌基因的細(xì)胞及能與該基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸；將寡核苷酸給予細(xì)胞；確定在寡核苷酸存在下相對于寡核苷酸不存在時細(xì)胞的增殖是否被抑制。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物(例如癌細(xì)胞系)中。在其它實(shí)施方案中，細(xì)胞在宿主動物(例如非人哺乳動物)中。在某些實(shí)施方案中，該方法是高通量篩選方法。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含能在生理?xiàng)l件下與c-Ha-ras基因啟動子區(qū)雜交的第一寡核苷酸(例如SEQIDNO67，68，69，71，73，74，76，78，84，160，161或162)的組合物。在某些實(shí)施方案中，第一寡核苷酸中的至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，第一寡核苷酸中的所有胞嘧啶堿基都是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，第一寡核苷酸能在生理?xiàng)l件下與c-Ha-ras基因啟動子區(qū)雜交。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一寡核苷酸與c-Ha-ras基因啟動子區(qū)的雜交能抑制c-Ha-ras基因的表達(dá)。在某些實(shí)施方案中，c-Ha-ras基因在細(xì)胞的染色體上，第一寡核苷酸與c-Ha-ras基因啟動子區(qū)的雜交能減少細(xì)胞的增殖。在某些實(shí)施方案中，組合物還包含第二寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中，第二寡核苷酸中的至少一個(例如所有的)胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，第二寡核苷酸包括SEQIDNO67，68，69，71，73，74，76，78，84，160，161或162，其中所述第一寡核苷酸與第二寡核苷酸不同(例如如果第二寡核苷酸具有SEQIDNO67的序列，則第一寡核苷酸具有SEQIDNO67以外的序列等等)。在某些實(shí)施方案中，第二寡核苷酸能與第二基因啟動子區(qū)雜交，其中所述第二基因不是c-Ha-ras。在某些實(shí)施方案中，第二基因是癌基因(例如c-ki-Ras、c-myc、bcl-2、Her-2或TGF-α)。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含寡核苷酸的組合物，該寡核苷酸能在包括SEQIDNO66的核苷酸21-220之間、SEQIDNO66的核苷酸233-860之間、SEQIDNO66的核苷酸1411-1530之間或SEQIDNO66的核苷酸1631-1722之間的位置與c-Ha-ras基因啟動子區(qū)雜交。在另外其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供方法，該方法包括提供能在生理?xiàng)l件下與c-Ha-ras基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸(例如SEQIDNO67，68，69，71，73，74，76，78，84，160，161或162)及包含能夠表達(dá)的c-Ha-ras基因的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞能夠增殖；將寡核苷酸引入到細(xì)胞中。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸的長度在15-30個堿基之間。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸能在包括SEQIDNO66的核苷酸21-220之間、SEQIDNO66的核苷酸233-860之間、SEQIDNO66的核苷酸1411-1530之間或SEQIDNO66的核苷酸1631-1722之間的位置與c-Ha-ras基因啟動子區(qū)雜交。在某些實(shí)施方案中，引入的結(jié)果導(dǎo)致細(xì)胞的增殖減少。在某些實(shí)施方案中，引入的結(jié)果導(dǎo)致c-Ha-ras基因表達(dá)的抑制。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞是癌細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，癌癥是胰腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、白血病、前列腺癌、淋巴瘤、卵巢癌和黑素瘤。在其它實(shí)施方案中，細(xì)胞是在宿主動物(例如非人哺乳動物或人)中。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸以每公斤體重0.01μg-100g的劑量，優(yōu)選以每公斤體重1mg-100mg的劑量引入到宿主動物中。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸每天一次或多次引入到宿主動物中。在其它實(shí)施方案中，寡核苷酸連續(xù)引入到宿主動物中(例如持續(xù)2小時至2周之間的時間)。在其它實(shí)施方案中，細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物中。在某些實(shí)施方案中，該方法還包括將試驗(yàn)化合物引入到細(xì)胞中的步驟。在某些實(shí)施方案中，試驗(yàn)化合物是公知的化療藥物。在某些實(shí)施方案中，該方法還提供藥物傳遞系統(tǒng)。在某些實(shí)施方案中，藥物傳遞系統(tǒng)包含脂質(zhì)體(例如包含中性脂質(zhì)或脂質(zhì)樣化合物的脂質(zhì)體)。在某些實(shí)施方案中，藥物傳遞系統(tǒng)包含細(xì)胞靶向成分(例如細(xì)胞表面受體或核受體的配體或配體樣分子)。在某些實(shí)施方案中，藥物傳遞系統(tǒng)供在體內(nèi)使用，寡核苷酸和脂質(zhì)體存在的比例為2∶1-1∶3/1μg-100mg每公斤體重。在還其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含能在生理?xiàng)l件下與c-Ha-ras基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸的組合物。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸中的至少一個(例如所有的)胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸與c-Ha-ras基因啟動子區(qū)完全互補(bǔ)。在其它實(shí)施方案中，寡核苷酸與c-Ha-ras基因啟動子區(qū)部分互補(bǔ)。例如，在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸含有c-Ha-ras基因啟動子區(qū)的一個錯配。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，寡核苷酸只與c-Ha-ras基因啟動子區(qū)互補(bǔ)，不與人基因組的其它區(qū)域完全互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸的長度在10至60個核苷酸之間，優(yōu)選在15至35個核苷酸之間。本發(fā)明還在使得c-Ha-ras基因表達(dá)被抑制的條件下提供包含能在生理?xiàng)l件下與c-Ha-ras基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸的組合物。本發(fā)明另外在使得細(xì)胞增殖減少的條件下提供包含能在生理?xiàng)l件下與位于細(xì)胞染色體上的c-Ha-ras基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸的組合物。本發(fā)明也提供包含第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的組合物，所述第一寡核苷酸能在生理?xiàng)l件下與c-Ha-ras基因啟動子區(qū)雜交，包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶；所述第二寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含能在生理?xiàng)l件下與c-Ha-ras基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸和說明書的試劑盒，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶；所述說明書說明如何使用試劑盒來減少在染色體上包含c-Ha-ras基因的細(xì)胞的增殖或者抑制基因表達(dá)。在某些實(shí)施方案中，試劑盒中的組合物用以治療對象的癌癥，所述說明書包括如何使用試劑盒來治療對象的癌癥的說明。在某些實(shí)施方案中，說明書是美國食品和藥物管理局所要求的醫(yī)藥品標(biāo)簽說明。本發(fā)明也提供方法，該方法包括提供來自確診患有癌癥的對象的生物樣品及用以檢測樣品中是否存在癌基因表達(dá)的試劑；檢測樣品中是否存在癌基因表達(dá)；給予對象能在生理?xiàng)l件下與生物樣品中所表達(dá)的癌基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。本發(fā)明另外提供抑制對象中的基因表達(dá)的方法(例如用以治療癌癥或其它高增殖性疾病)，該方法包括提供能在生理?xiàng)l件下與生物樣品中所表達(dá)的與癌癥或高增殖性疾病相關(guān)的基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶；在使得基因表達(dá)被抑制的條件下將寡核苷酸給予對象。在某些實(shí)施方案中，對象是人。在又其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供篩選化合物的方法，所述方法包括提供包含可疑癌基因的細(xì)胞及能與該基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸；將寡核苷酸給予細(xì)胞；確定在寡核苷酸存在下相對于寡核苷酸不存在時細(xì)胞的增殖是否被抑制。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物(例如癌細(xì)胞系)中。在其它實(shí)施方案中，細(xì)胞在宿主動物(例如非人哺乳動物)中。在某些實(shí)施方案中，該方法是高通量篩選方法。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含包括SEQIDNO31，32，35，36，37或38的寡核苷酸的組合物。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸的所有CG二核苷酸對中的所有胞嘧啶堿基都是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸能在生理?xiàng)l件下與Her-2基因啟動子區(qū)雜交。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，寡核苷酸與Her-2基因啟動子區(qū)的雜交能抑制Her-2基因的表達(dá)。在某些實(shí)施方案中，Her-2基因在細(xì)胞的染色體上，寡核苷酸與Her-2基因啟動子區(qū)的雜交能減少細(xì)胞的增殖。在某些實(shí)施方案中，組合物還包含第二寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中，第二寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，第二寡核苷酸包括SEQIDNO31，32，35，36，37或38。在某些實(shí)施方案中，第二寡核苷酸能與第二基因啟動子區(qū)雜交，其中所述第二基因不是Her-2。在某些實(shí)施方案中，第二基因是癌基因(例如c-ki-Ras，c-myc，bcl-2，c-Ha-ras或TGF-α)。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含寡核苷酸的組合物，該寡核苷酸能在包括SEQIDNO29的核苷酸205-344之間或SEQIDNO29的核苷酸382-435之間的位置與c-myc基因啟動子區(qū)雜交。在還其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含能在生理?xiàng)l件下與Her-2基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸的組合物。在另外其它實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供方法，該方法包括提供寡核苷酸(例如SEQIDNO31，32，35，36，37或38)及包含Her-2基因的細(xì)胞；將寡核苷酸給予細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，給予的結(jié)果導(dǎo)致細(xì)胞增殖減少。在某些實(shí)施方案中，給予的結(jié)果導(dǎo)致Her-2基因表達(dá)的抑制。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞是癌細(xì)胞。在其它實(shí)施方案中，細(xì)胞在宿主動物(例如非人哺乳動物或人)中。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸以每公斤體重0.01μg-100g的劑量，優(yōu)選以每公斤體重1mg-100mg的劑量引入到宿主動物中。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸每天一次或多次引入到宿主動物中。在其它實(shí)施方案中，寡核苷酸連續(xù)引入到宿主動物中。在還其它實(shí)施方案中，細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物中。在某些實(shí)施方案中，該方法還包括給予細(xì)胞試驗(yàn)化合物的步驟。在某些實(shí)施方案中，試驗(yàn)化合物是公知的化療藥物。在某些實(shí)施方案中，癌癥是胰腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、白血病、前列腺癌、淋巴瘤、卵巢癌或黑素瘤。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個、優(yōu)選所有的胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。本發(fā)明還提供方法，所述方法包括提供能與Her-2基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸及包含Her-2基因的細(xì)胞；將寡核苷酸給予細(xì)胞。在還其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含能在生理?xiàng)l件下與Her-2基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸的組合物，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸與Her-2基因啟動子區(qū)完全互補(bǔ)。在其它實(shí)施方案中，寡核苷酸與Her-2基因啟動子區(qū)部分互補(bǔ)。例如，在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸含有Her-2基因啟動子區(qū)的一個錯配。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，寡核苷酸只與Her-2基因啟動子區(qū)互補(bǔ)，不與人基因組的其它區(qū)域完全互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸的長度在10至60個核苷酸之間，優(yōu)選在15至35個核苷酸之間。本發(fā)明還在使得Her-2基因表達(dá)被抑制的條件下提供包含能在生理?xiàng)l件下與Her-2基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸的組合物。本發(fā)明另外在使得細(xì)胞增殖減少的條件下提供包含能在生理?xiàng)l件下與位于細(xì)胞染色體上的Her-2基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸的組合物。本發(fā)明也提供包含第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的組合物，所述第一寡核苷酸能在生理?xiàng)l件下與Her-2基因啟動子區(qū)雜交，包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶；所述第二寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含能在生理?xiàng)l件下與Her-2基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸和說明書的試劑盒，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶；所述說明書說明如何使用試劑盒來減少在染色體上包含Her-2基因的細(xì)胞的增殖或者抑制基因表達(dá)。在某些實(shí)施方案中，試劑盒中的組合物用以治療對象的癌癥，所述說明書包括如何使用試劑盒來治療對象的癌癥的說明。在某些實(shí)施方案中，說明書是美國食品和藥物管理局所要求的醫(yī)藥品標(biāo)簽說明。本發(fā)明也提供方法，該方法包括提供來自確診患有癌癥的對象的生物樣品及用以檢測樣品中是否存在癌基因表達(dá)的試劑；檢測樣品中是否存在癌基因表達(dá)；給予對象能在生理?xiàng)l件下與生物樣品中所表達(dá)的癌基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。本發(fā)明另外提供抑制對象中的基因表達(dá)的方法(例如用以治療癌癥或其它高增殖性疾病)，該方法包括提供能在生理?xiàng)l件下與生物樣品中所表達(dá)的與癌癥或高增殖性疾病相關(guān)的基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶；在使得基因表達(dá)被抑制的條件下將寡核苷酸給予對象。在某些實(shí)施方案中，對象是人。在又其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供篩選化合物的方法，所述方法包括提供包含可疑癌基因的細(xì)胞及能與該基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸；將寡核苷酸給予細(xì)胞；確定在寡核苷酸存在下相對于寡核苷酸不存在時細(xì)胞的增殖是否被抑制。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物(例如癌細(xì)胞系)中。在其它實(shí)施方案中，細(xì)胞在宿主動物(例如非人哺乳動物)中。在某些實(shí)施方案中，該方法是高通量篩選方法。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含包括SEQIDNO134，136，139，140，141，142，143或144的寡核苷酸的組合物。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸的所有CG二核苷酸對中的所有胞嘧啶堿基都是5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸能在生理?xiàng)l件下與TGF-α基因啟動子區(qū)雜交。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸與TGF-α基因啟動子區(qū)的雜交能抑制TGF-α基因的表達(dá)。在某些實(shí)施方案中，TGF-α基因在細(xì)胞的染色體上，寡核苷酸與TGF-α基因啟動子區(qū)的雜交能減少細(xì)胞的增殖。在某些實(shí)施方案中，組合物還包含第二寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中，第二寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，第二寡核苷酸選自SEQIDNO134，136，139，140，141，142，143或144。在其它實(shí)施方案中，第二寡核苷酸能與第二基因啟動子區(qū)雜交，其中所述第二基因不是TGF-α。在還其它實(shí)施方案中，第二基因是癌基因(例如c-ki-Ras，c-Ha-Ras，bcl-2，Her-2或c-myc)。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含寡核苷酸的組合物，該寡核苷酸能在包括SEQIDNO131的核苷酸1-90之間、SEQIDNO131的核苷酸175-219之間、SEQIDNO131的核苷酸261-367之間、SEQIDNO131的核苷酸431-930之間或SEQIDNO131的核苷酸964-1237之間的位置與c-myc基因啟動子區(qū)雜交。在另外其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含能在生理?xiàng)l件下與TGF-α基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸的組合物。在還其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供方法，該方法包括提供寡核苷酸(例如SEQIDNO134，136，139，140，141，142，143或144)及包含TGF-α基因的細(xì)胞；將寡核苷酸給予細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，給予的結(jié)果導(dǎo)致細(xì)胞增殖減少。在某些實(shí)施方案中，給予的結(jié)果導(dǎo)致TGF-α基因表達(dá)的抑制。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞是癌細(xì)胞。在其它實(shí)施方案中，細(xì)胞在宿主動物(例如非人哺乳動物或人)中。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸以每公斤體重0.01μg-100g的劑量，優(yōu)選以每公斤體重1mg-100mg的劑量引入到宿主動物中。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸每天一次或多次引入到宿主動物中。在其它實(shí)施方案中，寡核苷酸連續(xù)引入到宿主動物中。在還其它實(shí)施方案中，細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物中。在某些實(shí)施方案中，該方法還包括給予細(xì)胞試驗(yàn)化合物的步驟。在某些實(shí)施方案中，試驗(yàn)化合物是公知的化療藥物。在某些實(shí)施方案中，癌癥是胰腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、白血病、前列腺癌、淋巴瘤、卵巢癌或黑素瘤。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個、優(yōu)選所有的胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。本發(fā)明還提供方法，所述方法包括提供能與TGF-α基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸及包含TGF-α基因的細(xì)胞；將寡核苷酸給予細(xì)胞。在還其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含能在生理?xiàng)l件下與TGF-α基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸的組合物，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸與TGF-α基因啟動子區(qū)完全互補(bǔ)。在其它實(shí)施方案中，寡核苷酸與TGF-α基因啟動子區(qū)部分互補(bǔ)。例如，在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸含有TGF-α基因啟動子區(qū)的一個錯配。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，寡核苷酸只與TGF-α基因啟動子區(qū)互補(bǔ)，不與人基因組的其它區(qū)域完全互補(bǔ)。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸的長度在10至60個核苷酸之間，優(yōu)選在15至35個核苷酸之間。本發(fā)明還在使得TGF-α基因表達(dá)被抑制的條件下提供包含能在生理?xiàng)l件下與TGF-α基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸的組合物。本發(fā)明另外在使得細(xì)胞增殖減少的條件下提供包含能在生理?xiàng)l件下與位于細(xì)胞染色體上的TGF-α基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸的組合物。本發(fā)明也提供包含第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的組合物，所述第一寡核苷酸能在生理?xiàng)l件下與TGF-α基因啟動子區(qū)雜交，包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶；所述第二寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含能在生理?xiàng)l件下與TGF-α基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸和說明書的試劑盒，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶；所述說明書說明如何使用試劑盒來減少在染色體上包含TGF-α基因的細(xì)胞的增殖或者抑制基因表達(dá)。在某些實(shí)施方案中，試劑盒中的組合物用以治療對象的癌癥，所述說明書包括如何使用試劑盒來治療對象的癌癥的說明。在某些實(shí)施方案中，說明書是美國食品和藥物管理局所要求的醫(yī)藥品標(biāo)簽說明。本發(fā)明也提供方法，該方法包括提供來自確診患有癌癥的對象的生物樣品及用以檢測樣品中是否存在癌基因表達(dá)的試劑；檢測樣品中是否存在癌基因表達(dá)；給予對象能在生理?xiàng)l件下與生物樣品中所表達(dá)的癌基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。本發(fā)明另外提供抑制對象中的基因表達(dá)的方法(例如用以治療癌癥或其它高增殖性疾病)，該方法包括提供能在生理?xiàng)l件下與生物樣品中所表達(dá)的與癌癥或高增殖性疾病相關(guān)的基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸，所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶；在使得基因表達(dá)被抑制的條件下將寡核苷酸給予對象。在某些實(shí)施方案中，對象是人。在又其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供篩選化合物的方法，所述方法包括提供包含可疑癌基因的細(xì)胞及能與該基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸；將寡核苷酸給予細(xì)胞；確定在寡核苷酸存在下相對于寡核苷酸不存在時細(xì)胞的增殖是否被抑制。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物(例如癌細(xì)胞系)中。在其它實(shí)施方案中，細(xì)胞在宿主動物(例如非人哺乳動物)中。在某些實(shí)施方案中，該方法是高通量篩選方法。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于癌癥治療的方法和組合物。具體的說，本發(fā)明提供基于脂質(zhì)體的癌癥治療藥物。因此，在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含陽離子脂質(zhì)體、中性脂質(zhì)體或陰離子脂質(zhì)體及寡核苷酸(例如由它們組成)的藥物組合物。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，脂質(zhì)體是基于心磷脂的陽離子脂質(zhì)體(例如NEOPHECTIN)。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，NEOPHECTIN與寡核苷酸的電荷比是6∶1。在其它實(shí)施方案中，脂質(zhì)體包括N-[1-(2，3-二油酰氧基)丙基]-N，N，N-三甲基銨硫酸甲酯(DOTAP)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含寡核苷酸(例如能與癌基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸)和第一藥物組合物及包含任選的第二藥物組合物的試劑盒，所述第一藥物組合物包含陽離子脂質(zhì)體、中性脂質(zhì)體或陰離子脂質(zhì)體(例如由它們組成)，其中所述第二藥物組合物包含公知的化療藥物(例如TAXOTERE、TAXOL或長春新堿)，且其中所述公知的化療藥物與第一藥物組合物分開配制。在某些實(shí)施方案中，化療藥物的存在量小于標(biāo)準(zhǔn)劑量的二分之一，更優(yōu)選小于三分之一、甚至更優(yōu)選小于四分之一、還更優(yōu)選小于十分之一、再更優(yōu)選小于標(biāo)準(zhǔn)劑量的一百分之一。在另外其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供方法，所述方法包括提供由陽離子脂質(zhì)體、中性脂質(zhì)體或陰離子脂質(zhì)體和寡核苷酸(例如能與癌基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸)組成的藥物組合物；將藥物組合物暴露給癌細(xì)胞。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，脂質(zhì)體是基于心磷脂的陽離子脂質(zhì)體(例如NEOPHECTIN)。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，NEOPHECTIN與寡核苷酸的電荷比是6∶1。在其它實(shí)施方案中，脂質(zhì)體包含N-[1-(2，3-二油酰氧基)丙基]-N，N，N-三甲基銨硫酸甲酯(DOTAP)。在某些實(shí)施方案中，癌細(xì)胞是前列腺癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、白血病細(xì)胞或淋巴瘤細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞在宿主動物(例如人)中。在某些實(shí)施方案中，藥物組合物每天一次或多次引入到宿主動物中(例如連續(xù)引入)。在某些實(shí)施方案中，該方法還包括給予對象公知的化療藥物(例如TAXOTERE、TAXOL或長春新堿)的步驟，其中所述公知的化療藥物與陽離子脂質(zhì)體、中性脂質(zhì)體或陰離子脂質(zhì)體分開配制。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述公知的化療藥物與藥物組合物分開給予。在某些實(shí)施方案中，化療藥物的存在量小于標(biāo)準(zhǔn)劑量的二分之一，更優(yōu)選小于三分之一、甚至更優(yōu)選小于四分之一、還更優(yōu)選小于十分之一、再更優(yōu)選小于標(biāo)準(zhǔn)劑量的一百分之一。附圖簡述圖1顯示bcl-2基因的核酸序列(SEQIDNO1)。圖2顯示用于本發(fā)明某些實(shí)施方案的bcl-2反義基因的序列。X指甲基化的C核苷酸。圖3顯示c-erbB-2(Her-2)基因的核酸序列(SEQIDNO29)。圖4顯示用于本發(fā)明某些實(shí)施方案的c-erbB-2反義基因的序列。X指甲基化的C核苷酸。圖5顯示c-ki-Ras基因的核酸序列(SEQIDNO46)。圖6顯示用于本發(fā)明某些實(shí)施方案的c-ki-Ras反義基因的序列。X指甲基化的C核苷酸。圖7顯示c-Ha-Ras基因的核酸序列(SEQIDNO66)。圖8顯示用于本發(fā)明某些實(shí)施方案的c-Ha-Ras反義基因的序列。X指甲基化的C核苷酸。圖9顯示c-myc基因的核酸序列(SEQIDNO108)。圖10顯示用于本發(fā)明某些實(shí)施方案的c-myc反義基因的序列。X指甲基化的C核苷酸。圖11顯示TGF-α基因的核酸序列(SEQIDNO131)。圖12顯示用于本發(fā)明某些實(shí)施方案的TGF-α反義基因的序列。X指甲基化的C核苷酸。圖13顯示用于本發(fā)明某些實(shí)施方案的c-ki-Ras反義基因?qū)?xì)胞生長的表達(dá)的抑制作用。圖14顯示用于本發(fā)明某些實(shí)施方案的bcl-2反義基因?qū)?xì)胞生長的表達(dá)的抑制作用。圖15顯示用于本發(fā)明某些實(shí)施方案的c-erb-2反義基因?qū)?xì)胞生長的表達(dá)的抑制作用。圖16顯示用于本發(fā)明某些實(shí)施方案的c-Ha-Ras反義基因?qū)?xì)胞生長的表達(dá)的抑制作用。圖17顯示用于本發(fā)明某些實(shí)施方案的c-myc反義基因?qū)?xì)胞生長的表達(dá)的抑制作用。圖18顯示用于本發(fā)明某些實(shí)施方案的TGF-α反義基因?qū)?xì)胞生長的表達(dá)的抑制作用。圖19顯示c-ki-Ras反義基因?qū)?xì)胞生長的表達(dá)的抑制作用的劑量反應(yīng)曲線。圖20顯示bcl-2反義基因?qū)SCCL細(xì)胞(A)和MCF-7細(xì)胞(B)細(xì)胞生長的表達(dá)的抑制作用的劑量反應(yīng)曲線。圖21顯示c-erb-2反義基因?qū)?xì)胞生長的表達(dá)的抑制作用的劑量反應(yīng)曲線。圖22顯示c-Ha-Ras反義基因?qū)?xì)胞生長的表達(dá)的抑制作用的劑量反應(yīng)曲線。圖23顯示c-myc反義基因?qū)?xì)胞生長的表達(dá)的抑制作用的劑量反應(yīng)曲線。圖24顯示TGF-α反義基因?qū)47D細(xì)胞(A)和MDA-MB-231細(xì)胞(B)細(xì)胞生長的表達(dá)的抑制作用的劑量反應(yīng)曲線。圖25顯示c-ki-Ras反義基因的代表性變體。圖26顯示bcl-2反義基因的代表性變體。圖27顯示c-erb-2反義基因的代表性變體。圖28顯示c-ha-ras反義基因的代表性變體。圖29顯示c-myc反義基因的代表性變體。圖30顯示TGF-α反義基因的代表性變體。圖31顯示靶向Bcl-2的非甲基化寡核苷酸對淋巴瘤細(xì)胞的抑制作用。圖32顯示PC-3GFP前列腺癌皮下模型中的腫瘤用本發(fā)明組合物處理后的平均腫瘤體積。圖33顯示PC-3GFP前列腺癌皮下模型中的腫瘤用本發(fā)明組合物處理后的平均重量。圖34顯示PC-3GFP前列腺癌皮下模型中的腫瘤用本發(fā)明組合物處理后的平均腫瘤體積。圖35顯示PC-3GFP前列腺癌皮下模型中的腫瘤用本發(fā)明組合物處理后的平均最終腫瘤體積。圖36顯示W(wǎng)SU-DLCL2移植后20天的腫瘤負(fù)荷。圖37顯示W(wǎng)SU-DLCL2移植后20天的腫瘤負(fù)荷。定義為幫助理解本發(fā)明，以下對許多術(shù)語和短語進(jìn)行定義本文所用的術(shù)語“其中所述化療藥物的存在量低于標(biāo)準(zhǔn)劑量的二分之一”指低于用以給藥于人的標(biāo)準(zhǔn)劑量范圍的最低值二分之一(例如低于50％，優(yōu)選低于40％，甚至更優(yōu)選低于10％，還更優(yōu)選低于1％)的劑量。在某些實(shí)施方案中，標(biāo)準(zhǔn)劑量范圍是生產(chǎn)商所推薦的劑量范圍。在其它實(shí)施方案中，標(biāo)準(zhǔn)劑量范圍是本領(lǐng)域的醫(yī)師所采用的范圍。在還其它實(shí)施方案中，標(biāo)準(zhǔn)劑量范圍是本領(lǐng)域認(rèn)為屬常規(guī)治療標(biāo)準(zhǔn)(normalstandardofcare)的范圍。劑量范圍內(nèi)的具體劑量由例如對象的年齡、體重和健康情況以及所治療癌癥的類型來決定。本文所用的術(shù)語“在使得所述基因表達(dá)被抑制的條件下”指本發(fā)明寡核苷酸能與基因(例如該基因啟動子區(qū))雜交，并相對于不存在寡核苷酸時的轉(zhuǎn)錄水平能抑制該基因的轉(zhuǎn)錄達(dá)至少10％，優(yōu)選至少25％，甚至更優(yōu)選至少50％，還更優(yōu)選至少90％的條件。本發(fā)明并不限于對具體基因的表達(dá)的抑制作用。代表性的基因包括但不限于c-ki-Ras、c-Ha-Ras、c-myc、Her-2、TGF-α和bcl-2。本文所用的術(shù)語“在使得所述細(xì)胞增殖減少的條件下”指當(dāng)將本發(fā)明的寡核苷酸給予細(xì)胞(例如癌細(xì)胞)時，相對于不存在寡核苷酸時的細(xì)胞生長速度能減少細(xì)胞生長速度達(dá)至少10％，優(yōu)選至少25％，甚至更優(yōu)選至少50％，還更優(yōu)選至少90％的條件。本文所用的術(shù)語“表位”指與特定抗體發(fā)生接觸的抗原部分。當(dāng)用蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)的片段來免疫宿主動物時，該蛋白質(zhì)的許多區(qū)域都可誘導(dǎo)產(chǎn)生能特異性結(jié)合該蛋白質(zhì)上的特定區(qū)域或三維結(jié)構(gòu)的抗體；這些區(qū)域或結(jié)構(gòu)稱作“抗原決定簇”?？乖瓫Q定簇可與完整抗原(即用以引起免疫反應(yīng)的“免疫原”)一起競爭與抗體的結(jié)合。本文所用的術(shù)語“對象”指將成為特定治療的接受者的任何動物(例如哺乳動物)，包括但不限于人類、非人靈長類動物、嚙齒類動物等。通常，在本文中當(dāng)指人類對象時，術(shù)語“對象”和“患者”可互換使用。本文所用的術(shù)語“計算機(jī)存儲器”和“計算機(jī)存儲設(shè)備”指計算機(jī)處理器可讀的任何存儲介質(zhì)。計算機(jī)存儲器的實(shí)例包括但不限于RAM、ROM、計算機(jī)芯片、數(shù)字視頻光盤(DVD)、壓縮光盤(CD)、硬盤驅(qū)動器(HDD)和磁帶。本文所用的術(shù)語“計算機(jī)可讀介質(zhì)”指用以存儲和向計算機(jī)處理器提供信息(例如數(shù)據(jù)和指令)的任何設(shè)備或系統(tǒng)。計算機(jī)可讀介質(zhì)的實(shí)例包括但不限于DVD、CD、硬盤驅(qū)動器、磁帶和網(wǎng)絡(luò)上流式傳輸媒體的服務(wù)器。本文所用的術(shù)語“處理器”和“中央處理器”或“CPU”可互換使用，指能夠從計算機(jī)存儲器(例如ROM或其它計算機(jī)存儲器)讀取程序并按程序執(zhí)行一組步驟的設(shè)備。本文所用的術(shù)語“非人動物”指所有的非人動物，包括但不限于脊椎動物如嚙齒類動物、非人靈長類、綿羊、牛、反芻動物、兔、豬、山羊、馬、犬、貓、猿(ave)等，以及無脊椎動物如果蠅和線蟲。在某些實(shí)施方案中，“非人動物”還指原核生物和病毒，如細(xì)菌病原體和病毒病原體。本文所用的術(shù)語“核酸分子”指任何含核酸的分子，包括但不限于DNA或RNA。該術(shù)語涵括了包含任何公知的DNA和RNA堿基類似物的序列，所述堿基類似物包括但不限于4-乙酰胞嘧啶、8-羥基-N6-甲基腺苷、吖丙啶基胞嘧啶、假異胞嘧啶、5-(羧基羥基甲基)尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羧甲基氨基甲基-2-硫尿嘧啶、5-羧甲基氨基甲基尿嘧啶、二氫尿嘧啶、肌苷、N6-異戊烯基腺嘌呤、1-甲基腺嘌呤、1-甲基假尿嘧啶、1-甲基鳥嘌呤、1-甲基肌苷、2，2-二甲基鳥嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鳥嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-甲基腺嘌呤、7-甲基鳥嘌呤、5-甲基氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫尿嘧啶、β-D-甘露糖基Q核苷(mannosylqueosine)、5′-甲氧基羰基甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲基硫代-N6-異戊烯基腺苷、尿嘧啶-5-羥基乙酸甲酯、尿嘧啶-5-羥基乙酸、oxybutoxosine、假尿嘧啶、Q核苷(queosine)、2-硫代胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、N-尿嘧啶-5-羥基乙酸甲酯、尿嘧啶-5-羥基乙酸、假尿嘧啶、Q核苷、2-硫代胞嘧啶和2，6-二氨基嘌呤。術(shù)語“基因”指包含為產(chǎn)生多肽、前體或RNA(例如rRNA、tRNA)所必需的編碼序列的核酸(例如DNA)序列。多肽可由全長編碼序列編碼，或者由編碼序列的任何部分編碼，只要全長多肽或其片段的所需活性或功能特性(例如酶活性、配體結(jié)合力、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫原性等)得以保留。該術(shù)語還涵括結(jié)構(gòu)基因的編碼區(qū)和在5′和3′末端上位于編碼區(qū)附近、距離任一末端約1kb或更長以使該基因符合全長mRNA的長度的各序列。位于編碼區(qū)的5′且存在于mRNA上的序列稱為5′非翻譯序列。位于編碼區(qū)的3′且存在于mRNA上的序列稱為3′非翻譯序列。術(shù)語“基因”涵括cDNA形式和基因組形式兩者的基因?；蚪M形式或克隆的基因含有被稱為“內(nèi)含子”或“間插區(qū)(interveningregion)”或“間插序列”的非編碼序列隔開的編碼區(qū)。內(nèi)含子是被轉(zhuǎn)錄成核RNA(hnRNA)的基因區(qū)段；內(nèi)含子可含有調(diào)節(jié)元件如增強(qiáng)子。內(nèi)含子被移出或“剪接出”核轉(zhuǎn)錄物或者說初級轉(zhuǎn)錄物；因此內(nèi)含子在信使RNA(mRNA)轉(zhuǎn)錄物中不存在。mRNA在翻譯過程中起到確定新生多肽的氨基酸序列或順序的作用。本文所用的術(shù)語“異源基因”指不在其天然環(huán)境中的基因。例如，異源基因包括從一個物種引入到另一物種中的基因。異源基因還包括生物天然所有、但已被以某種方式改變(例如突變、以多重拷貝添加、連接到非天然調(diào)節(jié)序列等)的基因。異源基因與內(nèi)源基因的區(qū)別在于，異源基因序列通常連接的DNA序列沒有發(fā)現(xiàn)與染色體中的基因序列有天然聯(lián)系，或者與在自然界沒有發(fā)現(xiàn)的染色體的某些部分有聯(lián)系(例如在通常不表達(dá)基因的基因座中表達(dá)的基因)。本文所用的術(shù)語“基因表達(dá)”指將編碼于基因中的遺傳信息通過基因的“轉(zhuǎn)錄”(例如通過RNA聚合酶的酶促作用)轉(zhuǎn)變成RNA(例如mRNA、rRNA、tRNA或snRNA)的過程，對于蛋白質(zhì)編碼基因來說指通過mRNA的“翻譯”轉(zhuǎn)變成蛋白質(zhì)的過程。基因表達(dá)可在過程中的許多階段進(jìn)行調(diào)節(jié)?！吧险{(diào)”或“激活”指能增加基因表達(dá)產(chǎn)物(即RNA或蛋白質(zhì))的產(chǎn)生的調(diào)節(jié)，而“下調(diào)”或“阻遏”指能減少產(chǎn)生的調(diào)節(jié)。參與上調(diào)或下調(diào)的分子(例如轉(zhuǎn)錄因子)通常分別稱作“激活物”和“阻遏物”。基因組形式的基因除含有內(nèi)含子外，還可包含位于出現(xiàn)在RNA轉(zhuǎn)錄物上的序列的5′和3′兩末端上的序列。這些序列稱為“側(cè)翼”序列或區(qū)域(這些側(cè)翼序列位于出現(xiàn)在mRNA轉(zhuǎn)錄物上的非翻譯序列的5′或3′)。5′側(cè)翼區(qū)可含有控制或影響基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)序列如啟動子和增強(qiáng)子。3′側(cè)翼區(qū)可含有指導(dǎo)轉(zhuǎn)錄的終止、翻譯后切割和聚腺苷酸化的序列。術(shù)語“野生型”指從天然來源分離的基因或基因產(chǎn)物。野生型基因是種群中最常觀察到的基因，因此被人為指定為“正?！被颉耙吧汀毙问降幕?。相反，術(shù)語“修飾的”或“突變的”指當(dāng)與野生型基因或基因產(chǎn)物比較時顯示出序列或功能特性上的修改(即改變的特征)的基因或基因產(chǎn)物。應(yīng)指出的是，天然突變體可被分離；這些突變體可通過當(dāng)與野生型基因或基因產(chǎn)物比較時發(fā)現(xiàn)它們具有改變的特征(包括改變的核酸序列)這一事實(shí)來鑒定。本文所用的術(shù)語“核酸分子編碼的”、“DNA序列編碼的”和“DNA編碼的”指脫氧核糖核酸鏈上的脫氧核糖核苷酸的順序或序列。這些脫氧核糖核苷酸的順序決定了多肽(蛋白質(zhì))鏈上的氨基酸的順序。因此DNA序列編碼氨基酸序列。本文所用的術(shù)語“具有編碼基因的核苷酸序列的寡核苷酸”和“具有編碼基因的核苷酸序列的多核苷酸”指包含基因的編碼區(qū)的核酸序列，或者換句話說指編碼基因產(chǎn)物的核酸序列。編碼區(qū)可以以cDNA、基因組DNA或RNA的形式存在。寡核苷酸或多核苷酸當(dāng)以DNA形式存在時可以是單鏈(即有義鏈)或雙鏈。如有需要，可將合適的調(diào)控元件如增強(qiáng)子/啟動子、剪接點(diǎn)、聚腺苷酸化信號等置于基因編碼區(qū)的近鄰，以便于轉(zhuǎn)錄的適當(dāng)引發(fā)和/或初級RNA轉(zhuǎn)錄物的正確加工?；蛘?，本發(fā)明的表達(dá)載體所采用的編碼區(qū)可含有內(nèi)源增強(qiáng)子/啟動子、剪接點(diǎn)、間插序列、聚腺苷酸化信號等，或含有內(nèi)源和外源控制元件的組合。本文所用的術(shù)語“寡核苷酸”指短長度的單鏈多核苷酸鏈。寡核苷酸的長度通常不到200個殘基(例如8-100個)，但是本文所用的該術(shù)語也有意涵括更長的多核苷酸鏈(例如長至5000個殘基)。寡核苷酸通常按其長度來稱謂。例如24個殘基的寡核苷酸稱為“24聚體”。寡核苷酸能通過自身雜交或通過與其它多核苷酸雜交形成二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)。這種結(jié)構(gòu)可包括但不限于雙鏈體、發(fā)夾結(jié)構(gòu)、十字形結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)和三鏈體。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸是“反義基因”。本文所用的術(shù)語“反義基因”指能與基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸。在某些實(shí)施方案中，反義基因與啟動子的雜交抑制該基因的表達(dá)。本文所用的術(shù)語“互補(bǔ)”或“互補(bǔ)性”用于指按堿基配對規(guī)則發(fā)生聯(lián)系的多核苷酸(即核苷酸的序列)。例如序列“A-G-T”與序列“T-C-A”互補(bǔ)?；パa(bǔ)性可以是“部分的”，其中只有某些核酸堿基根據(jù)堿基配對規(guī)則進(jìn)行配對。或者，核酸之間可存在“完全的”或“總體的”互補(bǔ)性。核酸鏈之間互補(bǔ)的程度對核酸鏈之間雜交的效率和強(qiáng)度具有顯著的影響。這在依賴于核酸之間的結(jié)合的擴(kuò)增反應(yīng)以及檢測方法中特別重要。本文所用的術(shù)語“完全互補(bǔ)”例如當(dāng)用以指本發(fā)明的寡核苷酸時，指其中所有的核苷酸都與靶序列(例如基因)互補(bǔ)的寡核苷酸。本文所用的術(shù)語“部分互補(bǔ)”例如當(dāng)用以指本發(fā)明的寡核苷酸時，指其中至少有一個核苷酸不與靶序列互補(bǔ)的寡核苷酸。優(yōu)選的部分互補(bǔ)寡核苷酸是在生理?xiàng)l件下仍可與靶序列雜交的寡核苷酸。術(shù)語“部分互補(bǔ)”指在其內(nèi)部或任一端具有一個或多個非互補(bǔ)核苷酸的區(qū)域的寡核苷酸。在兩端有錯配的寡核苷酸仍可與靶序列雜交。術(shù)語“同源性”指互補(bǔ)的程度。可存在部分同源性或完全同源性(即同一性)。部分互補(bǔ)序列是至少部分抑制完全互補(bǔ)核酸分子與靶核酸雜交的核酸分子，是“基本同源的”。完全互補(bǔ)序列與靶序列雜交的抑制情況可用雜交試驗(yàn)(DNA印跡法或RNA印跡法、溶液雜交等)在低嚴(yán)格條件下來檢查。基本同源的序列或探針在低嚴(yán)格條件下會與完全同源的核酸分子競爭與靶標(biāo)的結(jié)合(即雜交)并抑制后者與靶標(biāo)的結(jié)合。這并不是說低嚴(yán)格條件是允許發(fā)生非特異性結(jié)合的條件；低嚴(yán)格條件要求兩個序列相互間的結(jié)合是特異型(即選擇性)相互作用?？捎没静换パa(bǔ)(例如同一性低于約30％)的第二靶標(biāo)來測試非特異性結(jié)合的不存在；在不存在非特異性結(jié)合時探針不會與第二不互補(bǔ)靶標(biāo)雜交。術(shù)語“基本同源”當(dāng)用以指雙鏈核酸序列如cDNA或基因組克隆時，指可在上述低嚴(yán)格條件下與雙鏈核酸序列的任一鏈或兩條鏈雜交的任何探針?；蚩僧a(chǎn)生多種RNA類型，這是通過初級RNA轉(zhuǎn)錄物的差別剪接而產(chǎn)生的。屬相同基因的剪接變體的各cDNA會含有具序列同一性或完全同源性的區(qū)域(意味著兩條cDNA上存在相同外顯子或相同外顯子的部分)和具完全非同一性的區(qū)域(例如意味著在cDNA1上存在外顯子“A”，而cDNA2卻含有外顯子“B”)。由于兩條cDNA含有具序列同一性的區(qū)域，它們可能都會與衍生自整個基因或基因部分、含有兩種cDNA上發(fā)現(xiàn)的序列的探針雜交；兩種剪接變體因此與這種探針基本同源，且互相基本同源。術(shù)語“基本同源”當(dāng)用以指單鏈核酸序列時，指能在上述低嚴(yán)格條件下與單鏈核酸序列雜交的任何探針(即它與單鏈核酸序列互補(bǔ))。本文所用的術(shù)語“雜交”用于指互補(bǔ)核酸的配對。雜交和雜交的強(qiáng)度(即核酸之間發(fā)生關(guān)聯(lián)的強(qiáng)度)受核酸之間的互補(bǔ)程度、所涉及的條件的嚴(yán)格性、所形成的雜交體的Tm和核酸內(nèi)部的G∶C比等因素的影響。將在其結(jié)構(gòu)內(nèi)部具有互補(bǔ)核酸配對現(xiàn)象的單個分子稱作是“自雜交的”。本文所用的術(shù)語“Tm”用于指“解鏈溫度”。解鏈溫度是雙鏈核酸分子群體有一半解離成單鏈的溫度。計算核酸的Tm的方程式是本領(lǐng)域公知的。如標(biāo)準(zhǔn)的參考文獻(xiàn)所指出，當(dāng)核酸在1MNaCl水溶液中時，通過以下方程式Tm＝81.5+0.41(％G+C)，可簡單計算Tm值的估計值(參見例如Anderson和Young，QuantitativeFilterHybridization，NucleicAcidHybridization)。其它的參考文獻(xiàn)涉及更為復(fù)雜的計算法，在Tm的計算中考慮了結(jié)構(gòu)特性以及序列特性。本文所用術(shù)語“嚴(yán)格”用于指進(jìn)行核酸雜交的溫度、離子強(qiáng)度、其它化合物如有機(jī)溶劑的存在等條件。在“低嚴(yán)格條件”下目的核酸序列會與其精確互補(bǔ)序列、有單個堿基錯配的序列、緊密相關(guān)序列(例如有90％或更高同源性的序列)和只有部分同源性的序列(例如有50-90％同源性的序列)雜交。在“中等嚴(yán)格條件”下，目的核酸序列只會與其精確互補(bǔ)序列、有單個堿基錯配的序列和緊密相關(guān)序列(例如有90％或更高同源性)雜交。在“高嚴(yán)格條件”下，目的核酸序列只會與其精確互補(bǔ)序列和(取決于溫度等條件)有單個堿基錯配的序列雜交。換句話說，在高嚴(yán)格條件下，可提高溫度以排除與有單個堿基錯配的序列的雜交?！案邍?yán)格條件”當(dāng)用以指核酸雜交時，包括相當(dāng)于以下的條件在由5XSSPE(43.8g/lNaCl、6.9g/lNaH2PO4H2O和1.85g/lEDTA，pH用NaOH調(diào)至7.4)、0.5％SDS、5XDenhardt試劑和100μg/ml變性鮭精DNA組成的溶液中于42℃下進(jìn)行結(jié)合或雜交，然后在包含0.1XSSPE、1.0％SDS的溶液中于42℃下進(jìn)行洗滌，使用的探針長度約為500個核苷酸?！爸械葒?yán)格條件”當(dāng)用以指核酸雜交時，包括相當(dāng)于以下的條件在由5XSSPE(43.8g/lNaCl、6.9g/lNaH2PO4H2O和1.85g/lEDTA，pH用NaOH調(diào)至7.4)、0.5％SDS、5XDenhardt試劑和100μg/ml變性鮭精DNA組成的溶液中于42℃下進(jìn)行結(jié)合或雜交，然后在包含1.0XSSPE、1.0％SDS的溶液中于42℃下進(jìn)行洗滌，使用的探針長度約為500個核苷酸?！暗蛧?yán)格條件”包括相當(dāng)于以下的條件在由5XSSPE(43.8g/lNaCl、6.9g/lNaH2PO4H2O和1.85g/lEDTA，pH用NaOH調(diào)至7.4)、0.1％SDS、5XDenhardt試劑[50XDenhardt試劑每500ml含5gFicoll(Type400，Pharamcia)、5gBSA(FractionV；Sigma)]和100μg/ml變性鮭精DNA組成的溶液中于42℃下進(jìn)行結(jié)合或雜交，然后在包含5XSSPE、0.1％SDS的溶液中于42℃下進(jìn)行洗滌，使用的探針長度約為500個核苷酸。本發(fā)明不限于長度約500個核苷酸的探針的雜交。本發(fā)明還設(shè)想使用長度在大約8個核苷酸到數(shù)千個(例如至少5000個)核苷酸之間的探針。相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員懂得，可改變嚴(yán)格條件用于其它大小的探針(參見例如Anderson和Young，QuantitaiveFilterHybridization，NucleicAcidHybridization及Sambrook等，MolecularCloningALaboratoryManual，ColdSpringHarborPress，NY)。本領(lǐng)域熟知，可采用多種等價條件來組成低嚴(yán)格條件；要考慮諸如探針的長度和性質(zhì)(DNA、RNA、堿基組成)、靶標(biāo)的性質(zhì)(DNA、RNA、堿基組成、在溶液中存在或固定化等)以及鹽和其它成分(例如是否存在甲酰胺、硫酸葡聚糖、聚乙二醇)的濃度之類的因素，可對雜交溶液加以改變，以產(chǎn)生不同于但等價于以上所列條件的低嚴(yán)格雜交條件。另外，本領(lǐng)域知道能促進(jìn)在高嚴(yán)格條件下的雜交的條件(例如提高雜交和/或洗滌步驟的溫度、在雜交溶液中使用甲酰胺等)(參見上文對“嚴(yán)格”的定義)。本文所用的術(shù)語“生理?xiàng)l件”指近似于或就是動物(例如人)體內(nèi)條件的具體嚴(yán)格條件。代表性的體外用生理?xiàng)l件包括但不限于37℃、95％空氣、5％CO2、哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)用的市售培養(yǎng)基(例如可獲自美國馬里蘭州Gibco公司的DMEM培養(yǎng)基)、5-10％血清(例如牛血清或馬血清)、另外的緩沖液和任選的激素(例如胰島素和表皮生長因子)。術(shù)語“分離的”當(dāng)用以指核酸，如在“分離的寡核苷酸”或“分離的多核苷酸”中時，指鑒別并與其天然來源中通常相關(guān)的至少一種成分或污染物分離的核酸序列。分離核酸所存在的形式或環(huán)境不同于其在自然界中發(fā)現(xiàn)的形式或環(huán)境。相反，非分離核酸作為核酸如DNA和RNA以它們在自然界中存在的狀態(tài)被發(fā)現(xiàn)。例如，特定DNA序列(例如基因)被發(fā)現(xiàn)在宿主細(xì)胞染色體上靠近鄰近的基因；RNA序列，如編碼特定蛋白質(zhì)的特定mRNA序列被發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞中作為與編碼眾多蛋白質(zhì)的許多其它mRNA的混合物。但是，編碼特定蛋白質(zhì)的分離核酸舉例來說包括細(xì)胞中通常表達(dá)特定蛋白質(zhì)的核酸，該核酸所在的染色體位置與其在天然細(xì)胞中所在的位置不同，或者其側(cè)翼核酸序列不同于天然所見的側(cè)翼核酸序列。分離核酸、分離寡核苷酸或分離多核苷酸可以以單鏈或雙鏈的形式存在。當(dāng)分離核酸、分離寡核苷酸或分離多核苷酸要用來表達(dá)蛋白質(zhì)時，寡核苷酸或多核苷酸須至少含有有義鏈或編碼鏈(即寡核苷酸或多核苷酸可以是單鏈的)，但可以同時含有有義鏈和反義鏈(即寡核苷酸或多核苷酸可以是雙鏈的)。本文所用的術(shù)語“純化的”或“純化”指從樣品中除去某些成分(例如污染物)。例如，抗體可通過除去污染性非免疫球蛋白的蛋白質(zhì)來純化；也可通過除去不能與靶分子結(jié)合的免疫球蛋白來純化。非免疫球蛋白的蛋白質(zhì)的除去和/或不能與靶分子結(jié)合的免疫球蛋白的除去，導(dǎo)致樣品中靶標(biāo)反應(yīng)性免疫球蛋白的百分比提高。在另一個實(shí)例中，重組多肽在細(xì)菌宿主細(xì)胞中表達(dá)，該多肽通過除去宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)來純化；樣品中重組多肽的百分比因而提高?！鞍被嵝蛄小焙屠纭岸嚯摹被颉暗鞍踪|(zhì)”的術(shù)語并不意在將氨基酸序列限制于與列舉到的蛋白質(zhì)分子有關(guān)的完全、天然氨基酸序列。術(shù)語“天然蛋白質(zhì)”在本文中用于表示蛋白質(zhì)不含載體序列所編碼的氨基酸殘基；也就是說，天然蛋白質(zhì)只含見于天然出現(xiàn)的蛋白質(zhì)的氨基酸。天然蛋白質(zhì)可通過重組方法產(chǎn)生，或者可從天然來源分離。術(shù)語“部分”在本文中當(dāng)用以指蛋白質(zhì)時(如在“特定蛋白質(zhì)的部分”)，指該蛋白質(zhì)的片段。片段的大小可在從四個氨基酸殘基到整個氨基酸序列減去一個氨基酸的范圍。術(shù)語“DNA印跡”指如下的DNA分析將DNA在瓊脂糖凝膠或丙烯酰胺凝膠上按其大小進(jìn)行分級，接著將其從凝膠轉(zhuǎn)移到固相載體如硝基纖維素或尼龍膜上。然后將固定化的DNA用標(biāo)記探針進(jìn)行探測，以檢測與所用探針互補(bǔ)的DNA類型。DNA在進(jìn)行電泳之前可先用限制酶切割。DNA電泳后可在轉(zhuǎn)移到固相載體之前或轉(zhuǎn)移過程中進(jìn)行部分脫嘌呤和變性。DNA印跡是分子生物學(xué)家的一種標(biāo)準(zhǔn)工具(J.Sambrook等，MolecularCloningALaboratoryManual，ColdSpringHarborPress，NY，第9.31-9.58頁)。本文所用術(shù)語“RNA印跡”指如下的RNA分析將RNA在瓊脂糖凝膠上按其大小進(jìn)行分級，接著將RNA從凝膠轉(zhuǎn)移到固相載體如硝基纖維素或尼龍膜上。然后將固定化的RNA用標(biāo)記探針進(jìn)行探測，以檢測與所用探針互補(bǔ)的RNA類型。RNA印跡是分子生物學(xué)家的一種標(biāo)準(zhǔn)工具(J.Sambrook等，出處同上，第7.39-7.52頁)。術(shù)語“蛋白質(zhì)印跡”指對固定化到載體如硝基纖維素和尼龍膜上的蛋白質(zhì)(或多肽)的分析。將蛋白質(zhì)在丙烯酰胺凝膠上跑膠以分離蛋白質(zhì)，接著將蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相載體如硝基纖維素或尼龍膜上。然后將固定化的蛋白質(zhì)暴露于對目的抗原具有反應(yīng)性的抗體?？贵w的結(jié)合情況可通過各種方法來檢測，包括使用放射性標(biāo)記的抗體。本文所用的術(shù)語“細(xì)胞培養(yǎng)物”指細(xì)胞的任何體外培養(yǎng)物。這一術(shù)語包括傳代細(xì)胞系(例如具有永生表型)、原代細(xì)胞培養(yǎng)物、轉(zhuǎn)化細(xì)胞系、有限細(xì)胞系(例如非轉(zhuǎn)化細(xì)胞)和體外維持的其它任何細(xì)胞群。本文所用術(shù)語“真核生物”指可與“原核生物”區(qū)別開來的生物。該術(shù)語意在涵括所有具有顯示出真核生物的通常特性的細(xì)胞的生物，所述通常特性如存在被核膜包圍、內(nèi)含染色體的真細(xì)胞核，存在被細(xì)胞膜包圍的細(xì)胞器，以及在真核生物中通常觀察到的其它特性。因此，該術(shù)語包括但不限于真菌、原生動物和動物(例如人類)。本文所用的術(shù)語“體外”指人工環(huán)境和指人工環(huán)境中發(fā)生的過程和反應(yīng)。體外環(huán)境可包括但不限于試管和細(xì)胞培養(yǎng)物?！绑w內(nèi)”指自然環(huán)境(例如動物或細(xì)胞)和指自然環(huán)境中發(fā)生的過程和反應(yīng)。術(shù)語“試驗(yàn)化合物”和“候選化合物”指作為候選者供用以治療或預(yù)防身體功能疾病、病癥、障礙或失調(diào)(例如癌癥)的任何化學(xué)實(shí)體(chemicalentity)、藥品、藥物等。試驗(yàn)化合物包括已知和潛在的治療化合物兩者。試驗(yàn)化合物可通過用本發(fā)明的篩選方法進(jìn)行篩選來確定具有治療作用。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，試驗(yàn)化合物包括反義化合物。本文所用的術(shù)語“已知的化療藥物”指已知可用于治療疾病(例如癌癥)的化合物。對癌癥有效的代表性化療藥物包括但不限于柔紅霉素、放線菌素D、多柔比星、博來霉素、絲裂霉素、氮芥、苯丁酸氮芥、美法侖、環(huán)磷酰胺、6-巰基嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、阿糖胞苷(CA)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、氟尿苷(5-FUdR)、甲氨喋呤(MTX)、秋水仙堿、長春新堿、長春堿、依托泊苷、替尼泊苷、順鉑和乙烯雌酚(DES)。本文所用的術(shù)語“樣品”以其最廣泛的意義使用。在一個意義上，它意在包括從任何來源獲得的樣本或培養(yǎng)物，以及生物樣品和環(huán)境樣品。生物樣品可從動物(包括人類)獲得，涵括液體、固體、組織和氣體。生物樣品包括血液制品如血漿、血清等。環(huán)境樣品包括環(huán)境材料如表面物質(zhì)、土壤、水、晶體和工業(yè)樣品。但這些樣品不能被解釋為對適用于本發(fā)明的樣品類型的限制。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及治療癌癥的方法和組合物。具體的說，本發(fā)明提供基于寡核苷酸的治療藥物以抑制與多種癌癥有關(guān)的癌基因。本發(fā)明并不限于治療特定的癌癥?？砂邢蛉魏伟┌Y都，包括但不限于乳腺癌。本發(fā)明也不限于靶向癌癥或癌基因。本發(fā)明的方法和組合物適合用于需要抑制其表達(dá)的任何基因(例如供治療用或研究用)。I.癌基因靶標(biāo)在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供癌基因的反義基因抑制劑。本發(fā)明并不限于抑制特定的癌基因。實(shí)際上，本發(fā)明涵括許多癌基因(包括但不限于本文所公開的癌基因)的反義基因抑制劑。A.Ras一個已引起許多科學(xué)家注意的基因是人原癌基因c-Ha-ras。c-H-ras啟動子區(qū)的核酸序列在圖7中顯示。這個基因充當(dāng)中心調(diào)度者的角色，向細(xì)胞中傳播化學(xué)信號和控制細(xì)胞分裂。Ras基因的改變可造成該基因停留在“開”的位置。據(jù)認(rèn)為多達(dá)30％的癌癥是由ras癌基因造成的，包括結(jié)腸癌、肺癌、膀胱癌和乳腺癌(Bos，CancerRes.494682-4689)。因此ras癌基因已成為治療藥物的靶標(biāo)。有幾份報告顯示，與rasmRNA的多個不同位點(diǎn)互補(bǔ)的寡核苷酸可抑制ras蛋白(ρ21)的合成，造成細(xì)胞培養(yǎng)物中細(xì)胞增殖速度下降(美國專利第5,576,208號；美國專利第5,582,986號；Daska等，OncogeneRes.5267-275；Brown等，OncogeneRes.4243-252；Saison-Behmoaras等，EMBOJ.101111-1116[1991)]。已證實(shí)與c-Ha-rasRNA轉(zhuǎn)錄物的5′側(cè)翼區(qū)互補(bǔ)的寡核苷酸能抑制裸鼠的腫瘤生長達(dá)14天(Gray等，CancerRes.53577-580)。最近有報告指出，導(dǎo)向c-Ha-rasmRNA的密碼子12中的點(diǎn)突變(G＞C)的反義寡核苷酸抑制細(xì)胞增殖，當(dāng)皮下注射時抑制裸鼠中的腫瘤生長(美國專利第5,576,208號；美國專利第5,582,986號；Schwab等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA9110460-10464；以上各文獻(xiàn)通過引用結(jié)合到本文中)。研究者們還報告，在小型臨床試驗(yàn)中反義藥物能使卵巢腫瘤縮小(Roush等，Science2761192-1194)。B.Her-2HER-2(也稱neu癌基因或erbB-2)癌基因編碼受體樣酪氨酸激酶(RTK)，該激酶因其在幾種人類癌癥(Hynes和Stern，Biochim.etBiophy.Acta1198165-184；Dougall等，Oncogene92109-2123)和在哺乳動物發(fā)育(Lee等，Nature378394-398)中的作用而得到廣泛的研究。Her-2的啟動子區(qū)的核酸序列在圖3中顯示。HER-2蛋白的序列由cDNA測定，該cDNA通過與來自胎盤(Coussens等，Science2301132-1139)和胃癌細(xì)胞系(Yamamoto等，Nature319230-234)的表皮生長因子受體(EGFR)mRNA的同源性而得到克隆。已顯示HER-2mRNA長約4.5kb(Coussens等，Science2301132-1139；Yamamoto等，Nature319230-234)，編碼正常和惡性人組織中的185kDa的跨膜糖蛋白(p185HER-2)(Hynes和Steen，Biochim.etBiophys.Acta1198165-184；Dougall等，Oncogene92109-2123)。HER-2的過量表達(dá)會引起培養(yǎng)細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)化(DiFiore等，Science237178-182；Hudziak等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA847159-7163)，且已將其與乳腺癌和卵巢癌的侵略性臨床進(jìn)展相關(guān)聯(lián)(Slamon等，Science235177-182；Slamon等，Science244707-712)。HER-2是癌癥中最常發(fā)生改變的基因之一。它編碼具有酪氨酸激酶活性的跨膜受體(也稱p185)，是表皮生長因子(EGF)家族成員之一，因此與表皮生長因子受體(EGFR或HER-1)相關(guān)。異常HER-2基因表達(dá)在很多癌癥中都存在，在乳腺癌、卵巢癌和胃癌中最為常見。在所有的人類乳腺癌和卵巢癌中有25-30％存在HER-2過量表達(dá)。HER-2過量表達(dá)水平與乳腺癌臨床階段、預(yù)后和轉(zhuǎn)移潛能的相關(guān)性良好。HER-2過量表達(dá)與存活率較低、復(fù)發(fā)率增高和轉(zhuǎn)移潛能增加有關(guān)。Tan等(CancerRes.，571199)證實(shí)，HER-2基因的過量表達(dá)會增加乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛能而不提高它們的轉(zhuǎn)化能力。HER-2的異常表達(dá)包括正常HER-2表達(dá)的增加和突變型HER-2的表達(dá)這兩方面。HER-2原癌基因的激活可通過以下三種機(jī)制之任一種而發(fā)生點(diǎn)突變、基因擴(kuò)增和過量表達(dá)?；驍U(kuò)增是最常見的機(jī)制。與還需要配體激活以促進(jìn)轉(zhuǎn)化的其它EGF家族成員不同，單獨(dú)的HER-2過量表達(dá)就足以進(jìn)行轉(zhuǎn)化(Cohen等，J.Biol.Chem.，27130897)。已采用幾種治療方法來降低HER-2基因產(chǎn)物水平。已用裸鼠乳腺癌模型將5型腺病毒基因產(chǎn)物E1A作為潛在的治療藥物進(jìn)行研究。該基因產(chǎn)物能通過阻遏HER-2/neu啟動子活性來阻遏HER-2/neu過量表達(dá)，并抑制過量表達(dá)HER-2/neu的卵巢癌細(xì)胞的致瘤潛能。在帶有過量表達(dá)HER-2/neu的乳腺癌異種移植物的小鼠中，與對照小鼠相比，通過腺病毒或脂質(zhì)體傳遞的E1A能顯著抑制腫瘤生長，延遲小鼠存活時間(Chang等，Oncogene14561)。已進(jìn)行臨床試驗(yàn)，評估靶向HER-2/neu蛋白產(chǎn)物和FcγRIII(CD16)兩者的胞外域的雙特異性抗體，F(xiàn)cγRIII(CD16)是由人天然殺傷細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和分化的單核吞噬細(xì)胞表達(dá)的Fcγ受體(Weiner等，J.Hematotherapy，4471)。已發(fā)現(xiàn)HER-2的過量表達(dá)與對化療抗性的提高有關(guān)。因此，HER-2水平高的患者對許多藥物的反應(yīng)都很差。已將用以抑制HER-2表達(dá)的方法與常用的化療藥物結(jié)合起來(Ueno等，Oncogene15953)。將5型腺病毒基因產(chǎn)物E1A與紫杉醇結(jié)合，在人乳腺癌細(xì)胞中顯示出協(xié)同作用。Zhang等(Oncogene，12571)證明大黃素(酪氨酸特異性抑制劑)能使非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)細(xì)胞對多種化療藥物敏感，包括順鉑、多柔比星和依托泊苷。發(fā)現(xiàn)HER-2抗體可提高他莫昔芬在人乳腺癌細(xì)胞中的效力(Witters等，BreastCancerRes.andTreatment，421)。也使用寡核苷酸來研究HER-2的功能。發(fā)現(xiàn)靶向HER-2啟動子(mRNA轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游的42-69個核苷酸)的三鏈形成寡核苷酸在體外抑制HER-2表達(dá)(Ebbinghaus等，J.Clin.Invest.，922433)。Porumb等(CancerRes.，56515)也使用了靶向相同的HER-2啟動子區(qū)的三鏈形成寡核苷酸。在培養(yǎng)細(xì)胞中觀察到HER-2mRNA和蛋白質(zhì)水平下降。Juhl等(J.Biol.Chem.，27229482)使用靶向正好位于蛋白質(zhì)跨膜區(qū)下游的HER-2RNA中心區(qū)域的抗HER-2核酶，表現(xiàn)出人卵巢癌細(xì)胞中HER-2mRNA和蛋白質(zhì)水平下降。還觀察到裸鼠的腫瘤生長減少。已將反義方法用作過量表達(dá)HER-2的癌癥的潛在治療方法。Pegues等(CancerLett.，11773)將反義方向的1.5kbHER-2片段克隆到表達(dá)載體中；將此構(gòu)建物轉(zhuǎn)染到卵巢癌細(xì)胞中導(dǎo)致貼壁不依賴性生長減少。Casalini等(Int.J.Cancer72631)使用幾種含有長度在151bp-415bp之間的HER-2片段的人HER-2反義載體構(gòu)建物，證明肺腺癌細(xì)胞中HER-2蛋白水平和貼壁不依賴性生長得以減少。Colomer等(Br.J.Cancer，70819)證實(shí)，靶向翻譯起始密碼子或其緊接下游的磷酸二酯反義寡核苷酸能抑制人乳腺癌細(xì)胞的增殖達(dá)60％。Wiechen等(Int.J.Cancer63604)證明，靶向HER-2編碼區(qū)(位于翻譯起始密碼子下游33個核苷酸)的18核苷酸的硫代磷酸酯寡核苷酸能減少卵巢癌細(xì)胞的貼壁不依賴性生長。Bertram等(Biochem.Biophys.Res.Commun.，200661)使用靶向翻譯起始區(qū)和mRNA翻譯區(qū)3′部分序列(其與酪氨酸激酶共有序列具有高度同源性)的反義硫代磷酸酯寡核苷酸，證明人乳腺癌細(xì)胞中HER-2蛋白水平下降75％。Liu等(AntisenseandNucleicAcidDevelop.，69)使用了靶向5′加帽位點(diǎn)和編碼區(qū)的反義硫代磷酸酯寡核苷酸。靶向5′加帽位點(diǎn)的最有效寡核酸使HER-2蛋白表達(dá)減少90％。細(xì)胞增殖的減少量也相當(dāng)。Vaughn等(Nuc.Acids.Res.，244558)使用了靶向HER-2翻譯起始區(qū)或其鄰近(在任一側(cè))的硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯和嵌合反義寡核苷酸。靶向翻譯起始區(qū)的交替二硫代酯/二酯寡核苷酸的效果比全部硫代磷酸酯寡核苷酸稍好。Brysch等(CancerGeneTher.，199)使用靶向HER-2的翻譯起始密碼子的化學(xué)修飾反義寡核苷酸，以減少蛋白質(zhì)水平并造成人乳腺癌細(xì)胞系的生長停滯。C.C-Mycc-myc基因產(chǎn)物由即時早期應(yīng)答基因編碼，該基因的表達(dá)可由多種不同的促細(xì)胞分裂劑誘導(dǎo)。c-myc基因啟動子區(qū)的核酸序列在圖9中顯示。C-myc表達(dá)與導(dǎo)致細(xì)胞分裂的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑相關(guān)。研究證明，增殖細(xì)胞的c-mycmRNA和c-myc蛋白水平比休眠細(xì)胞更高。導(dǎo)向人c-myc蛋白的抗體已知能抑制從人細(xì)胞分離的細(xì)胞核中的DNA合成。相反，基因轉(zhuǎn)移產(chǎn)生的c-myc組成型表達(dá)抑制幾種細(xì)胞系的誘導(dǎo)分化。c-myc的組成型表達(dá)會使轉(zhuǎn)基因小鼠易于產(chǎn)生腫瘤。某些研究提示，c-myc基因產(chǎn)物可能在SMC中起促增殖作用。已知大鼠主動脈球囊(balloon)去內(nèi)皮和損傷會增加血管SMC的c-mycmRNA表達(dá)，之后血管SMC才增殖和遷移。同樣，培養(yǎng)物中的SMC當(dāng)暴露于幾種促細(xì)胞分裂劑(包括PDGF、FGF、EGF、IGF-I)和血清時會發(fā)生增殖。已發(fā)現(xiàn)這些促細(xì)胞分裂劑的每一種都能夠增加c-myc蛋白、c-mycmRNA或其兩者在其它細(xì)胞系中的表達(dá)。另外，已發(fā)現(xiàn)血清能提高SMC中的c-mycmRNA水平。Harel-Bellan等(J.Immun.140；2431-2435(1988))證明，與c-mycmRNA互補(bǔ)的反義寡核苷酸能有效抑制其在人T細(xì)胞中的翻譯。這些T細(xì)胞被妨礙進(jìn)入細(xì)胞分裂的S期。c-myc原癌基因序列在Marcu等，Ann.Rev.Biochem.，61809-860；Watt等，Nature，303725-728[1983)]；Battey等，Cell，34779-787(1983)和Epstein等，NTIS出版物PB93-100576中有描述。D.Bcl2在許多類型的人腫瘤中，包括淋巴瘤和白血病，人bcl-2基因過量表達(dá)，且可能與致瘤性有關(guān)(Tsujimoto等，Science2281440-1443)。bcl-2啟動子區(qū)的核酸序列在圖1中顯示。在所有存在t(14；18)染色體易位的淋巴瘤中，包括大多數(shù)濾泡型B細(xì)胞淋巴瘤和許多大細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤，已發(fā)現(xiàn)人bcl-2基因的表達(dá)水平很高。在某些不存在t(14；18)染色體易位的白血病中，包括大多數(shù)情形的慢性淋巴細(xì)胞性白血病，許多前B細(xì)胞類型的淋巴細(xì)胞性白血病，成神經(jīng)細(xì)胞瘤，鼻咽癌以及前列腺、乳腺和結(jié)腸的許多腺癌，也已發(fā)現(xiàn)bcl-2基因的表達(dá)水平很高。(Reed等，CancerRes.516529；Yunis等，NewEnglandJ.Med.3201047；Campos等，Blood813091-3096；McDonnell等，CancerRes.526940-6944[1992)；Lu等，Int.JCancer5329-35；Bonner等，LabInvest.6843A)。E.TGF-α轉(zhuǎn)化生長因子-α(TGF-α)是50個氨基酸的多肽。TGF-α啟動子的核酸序列在圖11中顯示。它最初從反轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)化的小鼠細(xì)胞系中分離出來，隨后在人腫瘤細(xì)胞、在大鼠早期胚胎細(xì)胞中和在來自人腦垂體的細(xì)胞培養(yǎng)物中鑒定出來。TGF-α與表皮生長因子(EGF)在結(jié)構(gòu)上和功能上兩方面都密切相關(guān)，兩者都能結(jié)合相同的受體，即表皮生長因子受體(EGFR)。已測定了EGF和TGF-α兩者的序列和三維結(jié)構(gòu)(Campbell等，Prog.GrowthFactorRes.113)。TGF-α是50個氨基酸多肽，與EGF具有約40％的殘基同源性。這兩種肽的特征都是有三個完好的環(huán)(分別表示為A、B和C)，且具有三個分子內(nèi)二硫鍵。據(jù)認(rèn)為幾種生長因子(包括TGF-α和EGF)通過與表皮生長因子受體(EGF受體)的相互作用來發(fā)揮其生物作用。EGF受體屬I型受體酪氨酸激酶。EGF受體及其配體因它們在正常生理過程以及在高增殖性疾病和腫瘤病中的作用而備受關(guān)注。TGF-α的體內(nèi)前體是160個氨基酸殘基的膜結(jié)合蛋白(pro-TGF-alpha)，其被切割可產(chǎn)生可溶性化合物(Massague，J.Biol.Chem.，26521393-21396)。這種切割作用能切除由50個氨基酸組成、分子量為6Kd的胞外部分，被認(rèn)為是一種重要的調(diào)節(jié)事件(Pandiella等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，881726-1730)，該事件可由佛波酯通過蛋白激酶C作用來刺激(Pandiella等，J.Biol.Chem.，2665769-5773)。培養(yǎng)的人前列腺腫瘤系含有高水平的TGF-αmRNA，能響應(yīng)TGF-α而增殖(Wilding等，TheProstate，151-12)。TGF-α似乎同時具有自分泌和旁分泌功能，能刺激生理活動如細(xì)胞分裂和血管發(fā)生。當(dāng)在轉(zhuǎn)基因小鼠中被誘導(dǎo)時，TGF-α能產(chǎn)生類似原位癌的上皮增生和病灶性發(fā)育異常變化(focaldysplasticchange)(Sandgren等，Cell，611121-1135)。F.c-ki-RASc-Ki-RAS(KRAS)癌基因是遍在表達(dá)的。長度超過30kb的KRAS比HRAS或NRAS大得多。c-ki-ras啟動子區(qū)的序列在圖5中顯示。雖然HRAS、KRAS和NRAS這三個ras基因具有不同的遺傳結(jié)構(gòu)，但它們都編碼189個氨基酸殘基的蛋白質(zhì)(一般叫做p21蛋白)。這些基因通過影響它們各自p21的第12個或第61個氨基酸殘基摻入的單點(diǎn)突變來取得惡性特性。KRAS涉及惡性腫瘤比HRAS更為普遍。在一項(xiàng)于NIH3T3轉(zhuǎn)化系統(tǒng)中對96個人腫瘤或腫瘤細(xì)胞系進(jìn)行的研究中，(Pulciani等，Nature300539(1982)只在T24膀胱癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)突變的HRAS基因座，而轉(zhuǎn)化KRAS基因在8種不同的癌和肉瘤中得到鑒定。Feig等(Science223698(1984))證實(shí)在卵巢漿液性囊腺癌中存在激活的KRAS癌基因，該基因在同一患者的正常細(xì)胞中不被激活。該轉(zhuǎn)化基因產(chǎn)物在SDS-聚丙烯酰胺凝膠上顯示的電泳遷移率與其它腫瘤中的KRAS轉(zhuǎn)化蛋白的遷移率不同。因此，之前未被描述過的突變是造成這一卵巢癌中KRAS激活的原因。為研究癌基因在肺癌中的作用，Rodenhuis等(NewEng.J.Med.317929(1987))在體外擴(kuò)增步驟之后使用了基于寡核苷酸雜交的試驗(yàn)。對由胸廓切開術(shù)獲得的39個腫瘤樣本的基因組DNA進(jìn)行了檢查。發(fā)現(xiàn)KRAS基因在10個腺癌樣本中有5個是通過密碼子12的點(diǎn)突變激活的。這些腫瘤中有兩個大小在2cm以下，不發(fā)生轉(zhuǎn)移。在15個鱗狀細(xì)胞癌、10個大細(xì)胞癌、1個類癌瘤、2個肺外原發(fā)腫瘤的轉(zhuǎn)移腺癌和1個小細(xì)胞癌中，都沒有觀察到HRAS、KRAS或NRAS突變。在證明是直腸癌的單獨(dú)肺轉(zhuǎn)移的腫瘤中觀察到未突變KRAS基因有大約20倍的擴(kuò)增。Yanez等(Oncogene1315(1987))在16例結(jié)腸癌中的4例、27例肺癌中的2例和8例乳腺癌中的1例中發(fā)現(xiàn)了KRAS基因的密碼子12突變；在位置61沒有發(fā)現(xiàn)突變。密碼子12的6個可能的氨基酸置換除一個外其它都在鑒定出的7個突變有體現(xiàn)。G.其它癌基因靶標(biāo)本發(fā)明并不限于上述癌基因。本發(fā)明的方法適合用于有公知啟動子區(qū)的任何癌基因。代表性的癌基因包括但不限于BCR/ABL、ABL1/BCR、ABL、BCL1、CD24、CDK4、EGFR/ERBB-1、HSTF1、INT1/WNT1、INT2、MDM2、MET、MYB、MYC、MYCN、MYCL1、RAF1、NRAS、REL、AKT2、APC、BCL2-ALPHA、BCL2-BETA、BCL3、BCR、BRCA1、BRCA2、CBL、CCND1、CDKN1A、CDKN1C、CDKN2A、CDKN2B、CRK、CRK-II、CSF1R/FMS、DBL、DDOST、DCC、DPC4/SMAD4、E-CAD、E2F1/RBAP、ELK1、ELK3、EPH、EPHA1、E2F1、EPHA3、ERG、ETS1、ETS2、FER、FGR、FLI1/ERGB2、FOS、FPS/FES、FRA1、FRA2、FYN、HCK、HEK、HER3/ERBB-2、ERBB-3、HER4/ERBB-4、HST2、INK4A、INK4B、JUN、JUNB、JUND、KIP2、KIT、KRAS2A、KRAS2B、LCK、LYN、MAS、MAX、MCC、MLH1、MOS、MSH2、MYBA、MYBB、NF1、NF2、P53、PDGFB、PIM1、PTC、RB1、RET、ROS1、SKI、SRC1、TAL1、TGFBR2、THRA1、THRB、TIAM1、TRK、VAV、VHL、WAF1、WNT2、WT1、YES1、ALK/NPM1、AMI1、AXL、FMS、GIP、GLI、GSP、HOXI1、HST、IL3、INT2、KS3、K-SAM、LBC、LMO-1、LMO-2、L-MYC、LYL1、LYT-10、MDM-2、MLH1、MLL、MLM、N-MYC、OST、PAX-5、PMS-1、PMS-2、PRAD-1、RAF、RHOM-1、RHOM-2、SIS、TAL2、TAN1、TIAM1、TSC2、TRK、TSC1、STK11、PTCH、MEN1、MEN2、P57/KIP2、PTEN、HPC1、ATM、XPA/XPG、BCL6、DEK、AKAP13、CDH1、BLM、EWSR1/FLI1、FES、FGF3、FGF4、FGF6、FANCA、FLI1/ERGB2、FOSL1、FOSL2、GLI、HRAS1、HRX/MLLT1、HRX/MLLT2、KRAS2、MADH4、MAS1、MCF2、MLLT1/MLL、MLLT2/HRX、MTG8/RUNX1、MYCLK1、MYH11/CBFB、NFKB2、NOTCH1、NPM1/ALK、NRG/REL、NTRK1、PBX1/TCF3、PML/RARA、PRCA1、RUNX1、RUNX1/CBFA2T1、SET、TCF3/PBX1、TGFB1、TLX1、P53、WNT1、WNT2、WT1、αν-β3、PKCα、TNFα、簇蛋白、存活蛋白、TGFβ、c-fos、c-SRC和INT-I。II.非癌基因靶標(biāo)本發(fā)明并不限于對癌基因的靶向。本發(fā)明的方法和組合物可在需要下調(diào)其表達(dá)的任何基因的靶向中有用。例如，在某些實(shí)施方案中，要靶向的基因包括但不限于免疫球蛋白或抗體基因、凝血因子基因、蛋白酶、垂體激素、蛋白酶抑制劑、生長因子、生長調(diào)節(jié)素(somatomedian)、促性腺素、趨化因子(chemotactin)、趨化因子(chemokine)、血漿蛋白質(zhì)、血漿蛋白酶抑制劑、白介素、干擾素、細(xì)胞因子、轉(zhuǎn)錄因子或病原體靶標(biāo)(例如病毒基因、細(xì)菌基因、微生物基因、真菌基因)。具體基因的實(shí)例包括但不限于ADAMTS4、ADAMTS5、APOA1、APOE、APP、B2M、COX2、CRP、DDX25、DMC1、FKBP8、GH1、GHR、IAPP、IFNA1、IFNG、IL1、I110、IL12、IL13、IL2、IL4、IL7、IL8、IPW、MAPK14、Mei1、MMP13、MYD88、NDN、PACE4、PRNP、PSEN1、PSEN2、RAD51、RAD51C、SAP、SNRPN、TLR4、TLR9、TTR、UBE3A、VLA-4以及PTP-IB、c-RAF、m-TOR、LDL、VLDL、ApoB-100、HDL、VEGF、rhPDGF-BB、NADs、ICAM-I、MUC1、2-dG、CTL、PSGL-1、E2F、NF-kB、HIF和GCPRs。在其它實(shí)施方案中，靶向病原體的基因。代表性的病原體包括但不限于人免疫缺陷病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、甲肝病毒、呼吸道合胞病毒、與嚴(yán)重急性呼吸綜合征相關(guān)的的病原體、西尼羅病毒和食物病原體(例如大腸桿菌)。III.DNA甲基化在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供在特定位點(diǎn)被甲基化的寡核苷酸治療藥物。本發(fā)明并不限于具體的機(jī)制。實(shí)際上，實(shí)施本發(fā)明并不需要了解有關(guān)機(jī)制。但盡管如此，還是設(shè)想基因活性調(diào)節(jié)的一種機(jī)制是DNA中胞嘧啶殘基的甲基化。5-甲基胞嘧啶(5-MeC)是DNA中檢測出的唯一一種天然修飾堿基(Ehrlick等，Science2121350-1357(1981))。雖然不是所有的基因都通過甲基化進(jìn)行修飾，但許多基因中特定位點(diǎn)或特定區(qū)域的低甲基化與活性轉(zhuǎn)錄相關(guān)(Doerfler，Annu.Rev.Biochem.5293-124；Christman，Curr.Top.Microbiol.Immunol.10849-78；Cedar，Cell345503-5513)。體外DNA甲基化能防止無細(xì)胞系統(tǒng)中的基因的有效轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)染基因的瞬時表達(dá)。某些特定順式調(diào)節(jié)區(qū)中的胞嘧啶殘基甲基化還可阻斷或增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄因子或阻遏物的結(jié)合(Doerfler，出處同上；Christman，出處同上；Cedar，Cell345503-5513(1988)；Tate等，Curr.Opin.Genet.Dev.3225-231；Christman等，VirusStrategies，Doerfler，W.和Bohm，P.(編輯)(VCH，Weinheim，N.Y.)第319-333頁)。已將正常模式的DNA甲基化的破壞與癌癥的發(fā)展聯(lián)系起來(Christman等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA927347-7351)。腫瘤和腫瘤衍生細(xì)胞系的DNA的5-MeC含量通常比正常組織要低(Jones等，Adv.CancerRes401-30)。在多種人腫瘤和動物腫瘤中已檢測出特定癌基因如c-myc、c-Ki-ras和c-Ha-ras的低甲基化現(xiàn)象(Nambu等，Jpn.J.Cancer(Gann)78696-704；Feinberg等，Biochem.Biophys.Res.Commun.11147-54；Cheah等，JNCI731057-1063；Bhave等，Carcinogenesis(Lond)9343-348。在有關(guān)人腫瘤進(jìn)展的一個研究得最多的實(shí)例中，證實(shí)DNA的低甲基化是結(jié)腸癌發(fā)展中的早期事件(Goetz等，Science228187-290)。對體內(nèi)甲基化的干擾會導(dǎo)致腫瘤形成。已有報告說，給大鼠喂食甲基化抑制劑如L-甲硫氨酸或5-氮雜胞苷(cytodine)，或者通過喂食缺乏lipotrope的飲食造成大鼠5-腺苷甲硫氨酸嚴(yán)重不足，會引起大鼠中肝腫瘤的形成(Wainfan等，CancerRes.522071s～2077s)。研究表明，lipotrope極端不足的飲食會造成c-myc、ras和c-fos等基因中的特定位點(diǎn)失去甲基(Dizik等，Carcinogenesis121307-1312)。盡管存在著高水平的DNAMT酶活性，但仍會發(fā)生低甲基化(Wainfan等，CancerRes.494094-4097)。持續(xù)活性增殖所需的基因在分化過程中隨著甲基化的發(fā)生而變得無活性，而組織特異型基因發(fā)生低甲基化而有活性。這樣，低甲基化作用可以移動無活性和有活性這兩種狀態(tài)之間的平衡。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明因此利用這種天然現(xiàn)象來提供用以進(jìn)行特定基因啟動子的位點(diǎn)特異性甲基化的組合物和方法，從而防止某些基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供通過改變基因的甲基化型式來上調(diào)目的基因(例如腫瘤抑制基因)的表達(dá)的方法和組合物。本發(fā)明并不限于使用甲基化寡核苷酸。實(shí)際上，本發(fā)明也特地設(shè)想使用非甲基化寡核苷酸來抑制基因表達(dá)。在開發(fā)本發(fā)明的過程中進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)(參見例如實(shí)施例8)證明，靶向Bcl-2的未甲基化寡核苷酸對淋巴瘤細(xì)胞生長的抑制水平與甲基化寡核苷酸相當(dāng)。IV.寡核苷酸在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供反義基因寡核苷酸以抑制癌基因的表達(dá)。反義基因的代表性設(shè)計和生產(chǎn)策略在下文描述。以下描述并不意在限制適合用于本發(fā)明的反義基因化合物的范圍。相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員會認(rèn)識到，其它另外的反義基因也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。A.寡核苷酸設(shè)計在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸根據(jù)優(yōu)選的設(shè)計標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行設(shè)計。然后可用本文公開的方法測試這種寡核苷酸的效力。例如，在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸在至少一個、優(yōu)選至少兩個、甚至更優(yōu)選所有的CpG島發(fā)生甲基化。在其它實(shí)施方案中，寡核苷酸不被甲基化。本發(fā)明并不限于具體的機(jī)制。實(shí)際上，實(shí)施本發(fā)明并不需要了解有關(guān)機(jī)制。但盡管如此，還是設(shè)想優(yōu)選的寡核苷酸是具有至少50％GC含量和至少2個GC二核苷酸的寡核苷酸。優(yōu)選寡核苷酸不發(fā)生自雜交。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸設(shè)計成具有至少1個A或T，以使自雜交現(xiàn)象減至最低。在某些實(shí)施方案中，用市售的計算機(jī)程序來調(diào)查寡核苷酸自雜交的能力。優(yōu)選的寡核苷酸長度為至少10個、優(yōu)選至少15個核苷酸，且不超過100個核苷酸。特別優(yōu)選的寡核苷酸長度為18-24個核苷酸。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸包含通用蛋白質(zhì)結(jié)合序列CGCCC和CGCG或其互補(bǔ)序列。也優(yōu)選寡核苷酸與位于啟動子TATA框上游的基因啟動子區(qū)雜交。還優(yōu)選寡核苷酸化合物與人基因組的其它區(qū)域不完全同源。本發(fā)明寡核苷酸化合物與基因組其它區(qū)域的同源性可使用可獲得的搜索工具(例如BLAST，可獲自NCBI的因特網(wǎng)站點(diǎn))來測定。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸設(shè)計成可與已知被蛋白質(zhì)(例如轉(zhuǎn)錄因子)結(jié)合的癌基因啟動子區(qū)雜交。本發(fā)明的代表性寡核苷酸化合物在圖2、4、6、8、10和12中顯示。本發(fā)明并不限于本文描述的寡核苷酸。也可鑒定其它合適的寡核苷酸(例如使用上述標(biāo)準(zhǔn))。本文所公開寡核苷酸的代表性寡核苷酸變體在圖25-30中顯示?？捎萌魏魏线m的方法，包括但不限于以下說明性實(shí)施例中所述的方法，來測試候選寡核苷酸的效力。使用以下實(shí)施例1和2中描述的體外試驗(yàn)，可評估候選寡核苷酸在各個濃度下防止細(xì)胞增殖的能力。特別優(yōu)選的寡核苷酸是能在低濃度下(例如在本文公開的體外試驗(yàn)中低于20μM，優(yōu)選低于10μM)抑制細(xì)胞增殖的基因表達(dá)的寡核苷酸。B.優(yōu)選的寡核苷酸區(qū)在某些實(shí)施方案中，癌基因啟動子區(qū)當(dāng)中的某些區(qū)域還進(jìn)一步確定為用于寡核苷酸雜交的優(yōu)選區(qū)域。在某些實(shí)施方案中，這些優(yōu)選區(qū)域稱為“熱區(qū)(hotzone)”。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)被證明為有效(參見上文關(guān)于寡核苷酸的節(jié))的寡核苷酸化合物和根據(jù)上述寡核苷酸優(yōu)選標(biāo)準(zhǔn)被設(shè)想為有效的寡核苷酸化合物，確定熱區(qū)。優(yōu)選的熱區(qū)包括包含在各熱區(qū)中的各化合物的上游和下游10bp，在各化合物的再上游或下游40bp增量中具有至少1個或多個CG。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，熱區(qū)包括包含在熱區(qū)中的各寡核苷酸化合物上游和下游的最多100bp。在另外的實(shí)施方案中，熱區(qū)確定在在各啟動子的開始區(qū)域。這些熱區(qū)根據(jù)有效序列或設(shè)想序列來確定，優(yōu)選的最大長度為200bp。根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)計了代表性的熱區(qū)。這些熱區(qū)在表1中顯示。編號基于本發(fā)明各圖中描述的序列。C.寡核苷酸的制備和配制任何公知的寡核苷酸合成方法都可用于制備本發(fā)明的修飾寡核苷酸。如本發(fā)明所教導(dǎo)，在某些實(shí)施方案中，在適當(dāng)情況下通過使用甲基化寡核苷酸將核苷酸dC用5-甲基-dC置換。本發(fā)明的修飾或未修飾寡核苷酸可最方便地用任何市售的自動核酸合成儀制備。它們也可從按照客戶規(guī)格合成定制寡核苷酸的商業(yè)渠道獲得。雖然寡核苷酸是優(yōu)選的化合物形式，但本發(fā)明還包括其它寡聚寡核苷酸化合物，包括但不限于如下文所描述的寡核苷酸模擬物。根據(jù)本發(fā)明的寡核苷酸化合物優(yōu)選包含約18至約30個核堿基(即約18至約30個連接在一起的堿基)，不過更長或更短的序列也都可用于本發(fā)明?？捎糜诒景l(fā)明的優(yōu)選化合物的具體實(shí)例包括含有修飾骨架或非天然核苷酸間鍵的寡核苷酸。如本說明書所定義，具有修飾骨架的寡核苷酸包括骨架中保留磷原子的寡核苷酸和骨架中沒有磷原子的寡核苷酸。對于本說明書的目的，在其核苷間骨架中沒有磷原子的修飾寡核苷酸也認(rèn)為是寡核苷酸。優(yōu)選的修飾寡核苷酸骨架包括例如硫代磷酸酯、手性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基磷酸三酯、甲基和其它烷基膦酸酯(包括3′-亞烷基膦酸酯和手性膦酸酯)、亞膦酸酯、氨基磷酸酯(包括3′-氨基氨基磷酸酯和氨基烷基氨基磷酸酯)、硫羰基氨基磷酸酯、硫羰基烷基膦酸酯、硫羰基烷基磷酸三酯和具有正常3′-5′鍵的硼烷磷酸酯、這些骨架的2′-5鏈接類似物以及具有反極性即其中鄰近的核苷單元對以3′-5′～5′-3′或2′-5′～5′-2′連接的骨架。還包括各種鹽形式、混合鹽形式和游離酸形式。其中不包含磷原子的優(yōu)選修飾寡核苷酸骨架，具有通過短鏈烷基或環(huán)烷基核苷間鍵、混合雜原子和烷基或環(huán)烷基核苷間鍵、或者一個或多個短鏈雜原子或雜環(huán)核苷間鍵所形成的骨架。這些骨架包括具有嗎啉代鍵(部分由核苷的糖部分形成)的骨架；硅氧烷骨架；硫化物、亞砜和砜骨架；formacetyl和thioformacetyl骨架；methyleneformacetyl和thioformacetyl骨架；含有烯烴的骨架；氨基磺酸酯骨架；亞甲基亞胺和亞甲基肼骨架；磺酸酯和氨磺酰骨架；酰胺骨架；以及具有混合N、O、S和CH2組成部分的其它骨架。在其它優(yōu)選的寡核苷酸模擬物中，核苷酸單元的糖和核苷間鍵(即骨架)均被新型基團(tuán)所置換。堿基單元被保留，以供與適當(dāng)?shù)暮怂岚谢衔镫s交。一種這樣的寡聚化合物——一種已證實(shí)具有優(yōu)異的雜交性能的寡核苷酸模擬物，被稱為肽核酸(PNA)。在PNA化合物中，寡核苷酸的糖-骨架被含酰胺的骨架特別是氨基乙基甘氨酸骨架所置換。核堿基被保留，且與骨架的酰胺部分的氮雜氮原子直接或間接結(jié)合。教導(dǎo)如何制備PNA化合物的代表性美國專利包括但不限于美國專利第5,539,082號；第5,714,331號和第5,719,262號，所述每一個都通過引用結(jié)合到本文中。PNA化合物的更多教導(dǎo)可參見Nielsen等，Science2541497(1991)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸是具有硫代磷酸酯骨架的寡核苷酸和具有雜原子骨架的寡核苷，具體的說是以上引用的美國專利第5,489,677號的--CH2、--NH--O--CH2--、--CH2--N(CH3)--O--CH2--[稱為亞甲基(甲基亞胺)或MMI骨架]、--CH2--O--N(CH3)--CH2--、-CH2--N(CH3)--N(CH3)--CH2--和--O--N(CH3)--CH2--CH2--[其中天然磷酸二酯骨架表示為--O--P--O--CH2--]，以及以上引用的美國專利第5,602,240號的酰胺骨架。還優(yōu)選的是具有以上引用的美國專利第5,034,506號的嗎啉代骨架結(jié)構(gòu)的寡核苷酸。修飾寡核苷酸還可含有一個或多個取代的糖部分。優(yōu)選的寡核苷酸在2′位包含以下之一OH；F；O-烷基、S-烷基或N-烷基；O-烯基、S-烯基或N-烯基；O-炔基、S-炔基或N-炔基；或O-烷基-O-烷基，其中所述烷基、烯基和炔基可為取代或未取代的C1-C10烷基或者C2-C10烯基和炔基。特別優(yōu)選O[(CH2)nO]mCH3、O(CH2)nOCH3、O(CH2)nNH2、O(CH2)nCH3、O(CH2)nONH2和O(CH2)nON[(CH2)nCH3)]2，其中n和m為1至約10。其它優(yōu)選的寡核苷酸在2′位包含以下之一C1-C10低級烷基、取代的低級烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基或O-芳烷基、SH、SCH3、OCN、Cl、Br、CN、CF3、OCF3、SOCH3、SO2CH3、ONO2、NO2、N3、NH2、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷芳基、氨基烷基氨基、多烷基氨基、取代的甲硅烷基、RNA切割基團(tuán)、報道基團(tuán)、嵌入劑、用以改善寡核苷酸的藥物動力學(xué)性能的基團(tuán)或者用以改善寡核苷酸的藥效學(xué)性能的基團(tuán)以及具有類似性能的其它取代基。優(yōu)選的修飾包括2′-甲氧基乙氧基(2′-O--CH2CH2OCH3，也稱′-O-(2-甲氧基乙基)或2′-MOE)(Martin等，Helv.Chim.Acta78486)，即烷氧基烷氧基基團(tuán)。另外優(yōu)選的修飾包括2′-二甲基氨基氧基乙氧基(即O(CH2)2ON(CH3)2基團(tuán)，也稱2′-DMAOE)和2′-二甲基氨基乙氧基乙氧基(本領(lǐng)域也稱2′-O-二甲基氨基乙氧基乙基或2′-DMAEOE，即2′-O--CH2--O--CH2--N(CH2)2)。其它優(yōu)選的修飾包括2′-甲氧基(2′-O--CH3)、2′-氨基丙氧基(2′-OCH2CH2CH2NH2)和2′-氟(2′-F)。還可在寡核苷酸上的其它位置，特別是在3′末端核苷酸上的糖的3′位置，或者在2′-5′連接寡核苷酸和在5′末端核苷酸的5′位置，造成類似的修飾。寡核苷酸還可具有替換呋喃戊糖(pentofuranosylsugar)的糖類似物如環(huán)丁基部分。寡核苷酸還可包含核堿基(本領(lǐng)域通常簡稱為“堿基”)修飾或取代。本文所用的“未修飾的”或“天然的”核堿基包括嘌呤堿基即腺嘌呤(A)和鳥嘌呤(G)以及嘧啶堿基即胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。修飾的核堿基包括其它合成核堿基和天然核堿基，如5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、5-羥基甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鳥嘌呤的6-甲基和其它烷基衍生物、腺嘌呤和鳥嘌呤的2-丙基和其它烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶和2-硫代胞嘧啶、5-鹵代尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶、6-氮雜尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶，8-鹵代、8-氨基、8-硫羥、8-硫代烷基、8-羥基和其它8-取代的腺嘌呤和鳥嘌呤，5-鹵代特別是5-溴、5-三氟甲基和其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶，7-甲基鳥嘌呤和7-甲基腺嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤和8-氮雜腺嘌呤、7-去氮雜鳥嘌呤和7-去氮雜腺嘌呤以及3-去氮雜鳥嘌呤和3-去氮雜腺嘌呤。另外的核堿基包括美國專利第3,687,808號中公開的核堿基。這些核堿基中有某些對于提高本發(fā)明的寡聚化合物的結(jié)合親和力特別有用。這些核堿基包括5-取代的嘧啶、6-氮雜嘧啶以及N-2、N-6和O-6取代的嘌呤，包括2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶取代已證實(shí)能提高核酸雙鏈體穩(wěn)定性達(dá)0.6-1.2℃，是目前優(yōu)選的堿基取代，當(dāng)與2′-O-甲氧基乙基糖修飾作用結(jié)合時尤為如此。本發(fā)明寡核苷酸的另一種修飾涉及將一種或多種能增強(qiáng)寡核苷酸的活性、細(xì)胞分布或細(xì)胞攝取的部分或綴合物化學(xué)連接到寡核苷酸上。這種部分包括但不限于脂質(zhì)部分如膽固醇部分、膽酸、硫醚(例如己基-S-三苯甲基硫醇)、硫代膽固醇、脂族鏈(例如十二烷二醇?xì)埢蚴煌榛鶜埢?、磷脂(例如二-十六烷基-rac-甘油或1，2-二-O-十六烷基-rac-甘油基-S-H-膦酸三乙銨)、聚胺或聚乙二醇鏈或者金剛烷乙酸、棕櫚基部分、或者十八胺或己基氨基-羰基-羥膽甾醇部分。相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知如何產(chǎn)生含有上述修飾的寡核苷酸。本發(fā)明并不限于上述反義寡核苷酸?？刹捎萌魏魏线m的修飾或取代。沒有必要讓特定化合物中的所有位置被一致地修飾，事實(shí)上，在單個寡核苷酸化合物中乃至在寡核苷酸當(dāng)中的單個核苷上都可摻入不止一種的上述修飾。本發(fā)明還包括包含如下所述的本發(fā)明反義化合物的藥物組合物和制劑。D.雞尾酒藥物在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含兩種或更多種導(dǎo)向基因(例如癌基因)啟動子區(qū)的寡核苷酸的雞尾酒藥物。在某些實(shí)施方案中，所述兩種寡核苷酸與同一基因的啟動子的不同區(qū)域雜交。在其它實(shí)施方案中，所述兩種或更多種寡核苷酸與兩種不同的基因的啟動子雜交。本發(fā)明并不限于具體的機(jī)制。實(shí)際上，實(shí)施本發(fā)明并不需要了解有關(guān)機(jī)制。但盡管如此，還是設(shè)想兩種或更多種本發(fā)明化合物的組合所提供的抑制作用比單獨(dú)給予各化合物所累積的抑制作用要高。V.研究用途本發(fā)明并不限于治療應(yīng)用。例如，在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供將寡核苷酸用作研究工具的組合物和方法。A.試劑盒例如，在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供試劑盒，其包含能特異性抑制目的基因的寡核苷酸和任選的已知能表達(dá)該基因的細(xì)胞系(例如癌細(xì)胞系)。這種試劑盒在例如對代謝途徑或?qū)蛟诩膊?例如癌癥)中的涉及的鑒定上以及在診斷應(yīng)用上有用。在某些實(shí)施方案中，試劑盒還包含緩沖劑和其它必需的試劑以及使用說明書。B.靶標(biāo)確認(rèn)在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于確認(rèn)基因靶標(biāo)(例如懷疑與疾病相關(guān)的基因)的方法和組合物。例如，在某些實(shí)施方案中，用本發(fā)明的方法和組合物來下調(diào)在大規(guī)模篩選應(yīng)用(例如基因表達(dá)陣列)中被鑒定為與疾病相關(guān)的基因的表達(dá)。對于靶標(biāo)確認(rèn)的目的，本發(fā)明的方法和組合物適合在體外和體內(nèi)(例如在非人動物中)使用。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物在移植研究(例如HLA抑制)中有用。C.藥物篩選在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法和組合物用于藥物篩選應(yīng)用。例如，在某些實(shí)施方案中，將本發(fā)明的寡核苷酸給予細(xì)胞(例如在培養(yǎng)物中或在非人動物中)，以抑制目的基因的表達(dá)。在某些實(shí)施方案中，對目的基因的抑制是對生理或疾病狀況的模擬。在其它實(shí)施方案中，抑制癌基因。然后將試驗(yàn)化合物(例如小分子藥物或寡核苷酸模擬物)給予試驗(yàn)細(xì)胞并測試試驗(yàn)化合物的作用。本發(fā)明的試驗(yàn)化合物可用本領(lǐng)域公知的組合文庫方法中的任何方法來獲得，所述組合文庫方法包括生物文庫；擬肽文庫(具有肽的官能度、可是卻有新型非肽骨架的分子的文庫，所述分子能抵抗酶促降解而仍保持生物活性；參見例如Zuckennann等，J.Med.Chem.372678-85)；空間可定位平行固相或溶液相文庫；需要重疊合(deconvolution)的合成文庫方法；‘一珠一化合物’文庫方法；和使用親和層析選擇的合成文庫方法。生物文庫和擬肽文庫方法優(yōu)選用于肽文庫，而其它四種方法則適用于肽、非肽寡聚物或小分子化合物文庫(Lam(1997)AnticancerDrugDes.12145)。分子文庫的合成方法的實(shí)例可在本領(lǐng)域中找到，例如在以下文獻(xiàn)中找到DeWitt等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.SA.906909；Erb等，Proc.Nad.Acad.Sci.USA9111422；Zuckermann等，J.Med.Chem.372678；Cho等，Science2611303；Carrell等，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.33.2059；Carell等，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.332061；和Gallop等，J.Med.Chem.371233?；衔镂膸炜纱嬖谠谌芤褐?例如Houghten，Biotechniques13412-421)，或者在珠(Lam，Nature35482-84)、芯片(Fodor，Nature364555-556)、細(xì)菌或孢子(美國專利第5,223,409號；通過引用結(jié)合到本文中)、質(zhì)粒(Cull等，Proc.Nad.Acad.Sci.USA8918651869)或噬菌體(Scott和Smith，Science249386-390；DevlinScience249404-406；Cwirla等，Proc.Natl.Acad.Sci.876378-6382；Felici，J.Mol.Biol.222301)上。VI.組合物和傳遞在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的寡核苷酸化合物配制成藥物組合物，以作為藥物傳遞給對象。本發(fā)明的新型抗原化合物在治療各種需要抑制基因表達(dá)或細(xì)胞生長的疾病狀態(tài)和狀況中有用。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述化合物用來治療由無控細(xì)胞生長導(dǎo)致的疾病狀態(tài)，例如包括但不限于癌癥。本發(fā)明并不限于治療具體的癌癥。本發(fā)明的寡核苷酸化合物適合于治療各種癌癥，包括但不限于乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、膀胱癌、白血病和淋巴瘤。以下討論提供了劑型和劑量的代表性、非限制性實(shí)例。A.藥物組合物本發(fā)明還提供藥物組合物(例如包含上述寡核苷酸化合物)。根據(jù)需要進(jìn)行局部治療還是全身治療以及根據(jù)待治療的區(qū)域，本發(fā)明的藥物組合物可以以多種方式給藥。給藥可以是局部給藥(包括眼內(nèi)給藥和黏膜給藥，包括陰道和直腸傳遞)、肺部給藥(例如通過吸入或吹入粉末或氣霧劑給藥，包括通過噴霧器給藥；氣管內(nèi)、鼻內(nèi)、表皮和透皮給藥)、口服給藥或胃腸外給藥。胃腸外給藥包括靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)給藥或者肌肉內(nèi)注射或輸注；或者顱內(nèi)(例如鞘內(nèi))或心室內(nèi)的給藥。用于局部給藥的藥物組合物和制劑可包括透皮貼劑、軟膏劑、洗劑、乳膏劑、凝膠劑、滴劑、栓劑、噴霧劑、液體劑和散劑。常規(guī)的藥物載體、含水基料、粉末基料、含油基料、增稠劑等也是必需或適宜的。用于口服給藥的組合物和制劑包括散劑或顆粒劑、水介質(zhì)或非水介質(zhì)中的混懸劑或溶液劑、膠囊劑、扁囊劑(sachet)或片劑。增稠劑、矯味劑、稀釋劑、乳化劑、分散助劑或粘合劑也是適宜的。用于胃腸外、鞘內(nèi)或心室內(nèi)給藥的組合物和制劑可包括無菌水溶液劑，其中可含有緩沖劑、稀釋劑和其它合適的添加劑，例如但不限于滲透促進(jìn)劑、載體化合物和其它藥物可接受的載體或賦形劑。本發(fā)明的藥物組合物包括但不限于溶液劑、乳劑和含脂質(zhì)體的制劑。這些組合物可由多種成分形成，包括但不限于預(yù)配液體、自乳化固體和自乳化半固體。本發(fā)明的藥物制劑可按照醫(yī)藥工業(yè)公知的常規(guī)技術(shù)制備，可方便的以單位劑量形式存在。這種技術(shù)包括使活性成分與藥物載體或賦形劑結(jié)合的步驟。一般如下制備制劑使活性成分與液體載體或微細(xì)固體載體或兩者均勻地和緊密地結(jié)合，然后如有需要則使產(chǎn)品成型。本發(fā)明的組合物可配制成任何多種可能的劑型，例如但不限于片劑、膠囊劑、液體糖漿劑、軟膠囊劑、栓劑和灌腸劑。本發(fā)明的組合物還可配制成在水介質(zhì)、非水介質(zhì)或混合介質(zhì)中的混懸劑。水混懸劑還可含有能增加混懸劑的粘度的物質(zhì)，包括例如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇和/或葡聚糖?；鞈覄┮部珊蟹€(wěn)定劑。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，藥物組合物可配制成泡沫劑并以泡沫劑形式使用。藥物泡沫劑包括例如但不限于以下制劑乳劑、微乳劑、乳膏劑、膠凍劑和脂質(zhì)體劑。這些制劑雖然在性質(zhì)上基本相似，但在最終產(chǎn)品的成分和稠度上不同。也可將能增強(qiáng)寡核苷酸在細(xì)胞水平的攝取的物質(zhì)加入到本發(fā)明的藥物和其它組合物中。例如，陽離子脂質(zhì)如Lipofectin(美國專利第5,705,188號)、陽離子甘油衍生物和聚陽離子分子如聚賴氨酸(WO97/30731)也能增強(qiáng)細(xì)胞對寡核苷酸的攝取。本發(fā)明的組合物還可另外含有其它通常見于藥物組合物中的輔助成分。因此，例如，組合物可含有其它另外的相容性藥物活性材料，如止癢劑、收斂劑、局部麻醉劑或抗炎劑，或者可含有其它另外的可用于物理配制本發(fā)明組合物各種不同劑型的材料，如染料、矯味劑、防腐劑、抗氧化劑、遮光劑、增稠劑和穩(wěn)定劑。但這種材料加入時不應(yīng)對本發(fā)明組合物各成分的生物活性造成不適當(dāng)?shù)母蓴_。各制劑可進(jìn)行滅菌，且如有需要可與例如以下不會與制劑中的核酸發(fā)生有害相互作用的助劑混合潤滑劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑、乳化劑、用以影響滲透壓的鹽類、緩沖劑、著色劑、矯味劑和/或芳香物質(zhì)等。供口服給藥的組合物和制劑包括散劑或顆粒劑、微顆粒劑、納米顆粒劑、水介質(zhì)或非水介質(zhì)中的混懸劑或溶液劑、膠囊劑、凝膠膠囊劑、扁囊劑、片劑或小片劑。增稠劑、矯味劑、稀釋劑、乳化劑、分散助劑或粘合劑也是適宜的。優(yōu)選的口服制劑是其中本發(fā)明的寡核苷酸與一種或多種滲透促進(jìn)劑、表面活性劑和螯合劑一起給藥的制劑。優(yōu)選的表面活性劑包括脂肪酸和/或其酯或鹽、膽汁酸和/或其鹽。優(yōu)選的膽汁酸/鹽包括鵝脫氧膽酸(CDCA)和熊脫氧鵝脫氧膽酸(UDCA)、膽酸、去氫膽酸、脫氧膽酸、丙烯醇酸(glucholicacid)、甘氨膽酸(glycholicacid)、甘氨脫氧膽酸、?；悄懰帷⑴；敲撗跄懰?、?；?24，25-二氫-夫西地酸鈉、乙二醇二氫夫西地酸鈉。優(yōu)選的脂肪酸包括花生四烯酸、十一烷酸、油酸、月桂酸、辛酸、癸酸、豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸、亞麻酸、二癸酸、三癸酸、一油精、二月桂精、甘油-1-癸酸酯、1-十二烷基氮雜環(huán)庚-2-酮、?；鈮A、酰基膽堿或單甘油酯、甘油二酯或其藥物可接受的鹽(例如鈉鹽)。還優(yōu)選的幾種滲透促進(jìn)劑的組合，例如脂肪酸/鹽與膽汁酸/鹽的組合。特別優(yōu)選的組合是月桂酸、癸酸和UDCA的鈉鹽。更多的滲透促進(jìn)劑包括聚氧乙烯-9-月桂基醚、聚氧乙烯-20-鯨蠟基醚。本發(fā)明的寡核苷酸可以顆粒形式(包括噴干顆粒)口服傳遞，或者可絡(luò)合形成微顆?；蚣{米顆粒。寡核苷酸絡(luò)合劑包括聚氨基酸；聚亞胺；聚丙烯酸酯；聚丙烯酸烷酯；polyoxethane；聚氰基丙烯酸烷酯；陽離子化明膠；白蛋白；淀粉；丙烯酸酯；聚乙二醇(PEG)和淀粉；聚氰基丙烯酸烷酯；DEAE衍生化聚亞胺；普魯蘭多糖(pollulan)；纖維素和淀粉。特別優(yōu)選的絡(luò)合劑包括殼聚糖、N-三甲基殼聚糖、聚-L-賴氨酸、聚組氨酸、聚鳥氨酸、聚精胺、魚精蛋白、聚乙烯吡啶、聚硫代二乙氨基-甲基乙烯(PTDAE)、聚氨基苯乙烯(例如p-氨基)、聚(氰基丙烯酸乙酯甲酯)、聚(氰基丙烯酸乙酯)、聚(氰基丙烯酸丁酯)、聚(氰基丙烯酸異丁酯)、聚(氰基丙烯酸異己酯)、DEAE-甲基丙烯酸酯、DEAE-丙烯酸己酯、DEAE-丙烯酰胺、DEAE-白蛋白和DEAE-葡聚糖、聚丙烯酸甲酯、聚丙烯酸己酯、聚(D，L-乳酸)、聚DL-乳酸乙醇酸共聚物(PLGA)、海藻酸鹽和聚乙二醇(PEG)。本發(fā)明的某些實(shí)施方案提供含有(a)一種或多種寡核苷酸化合物和(b)一種或多種通過非寡核苷酸機(jī)制起作用的其它化療藥物的藥物組合物。這種化療藥物的實(shí)例包括但不限于抗癌藥物如柔紅霉素、放線菌素D、多柔比星、博來霉素、絲裂霉素、氮芥、苯丁酸氮芥、美法侖、環(huán)磷酰胺、6-巰基嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、阿糖胞苷(CA)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、氟尿苷(5-FUdR)、甲氨喋呤(MTX)、秋水仙堿、長春新堿、長春堿、依托泊苷、替尼泊苷、順鉑和乙烯雌酚(DES)?？寡姿幬?包括但不限于非甾體類抗炎藥物和皮質(zhì)類固醇)及抗病毒藥物(包括但不限于利巴韋林(ribivirin)、阿糖腺苷、阿昔洛韋和更昔洛韋)也可結(jié)合到本發(fā)明的組合物中。其它的非寡核苷酸化療藥物也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。兩種或更多種組合的化合物可一起使用或依次使用。B.傳遞本發(fā)明的寡核苷酸化合物可用任何合適的方法傳遞。在某些實(shí)施方案中，給予的是裸DNA。在其它實(shí)施方案中，采用脂質(zhì)轉(zhuǎn)染法將核酸傳遞給對象。在還其它實(shí)施方案中，寡核苷酸用硫代磷酸酯(phosphothiolate)修飾以便傳遞(參見例如美國專利第6,169,177號，該專利通過引用結(jié)合到本文中)。在某些實(shí)施方案中，壓縮所要傳遞的核酸，以幫助其攝取。(參見例如美國專利第6,008,366號、第6,383,811號，其通過引用結(jié)合到本文中)。在某些實(shí)施方案中，將壓縮的核酸通過靶細(xì)胞結(jié)合部分(參見例如美國專利第5,844,107號、第6,077,835號，其各自通過引用結(jié)合到本文中)靶向特定細(xì)胞類型(例如癌細(xì)胞)。在某些實(shí)施方案中，將寡核苷酸綴合到其它化合物上，以幫助其傳遞。例如，在某些實(shí)施方案中，將核酸綴合到聚乙二醇上幫助傳遞(參見例如美國專利第6,177,274號、第6,287,591號、第6,447,752號、第6,447,753號和第6,440,743號，其各自通過引用結(jié)合到本文中)。在另外其它實(shí)施方案中，將核酸綴合到保護(hù)的接枝共聚物上，該接枝共聚物是可充電的藥物納米載體(PharmaIn)。在還其它實(shí)施方案中，通過將寡核苷酸綴合到維生素上來促進(jìn)寡核苷酸向細(xì)胞內(nèi)的運(yùn)輸(Endocyte，Inc；WestLafayette，IN；參見例如美國專利第5,108,921號、第5,416,016號、第5,635,382號、第6,291,673號和WO02/085908；其各自通過引用結(jié)合到本文中)。在其它實(shí)施方案中，將寡核苷酸綴合到納米顆粒上(例如NanoMedPharmaceuticals；Kalamazoo，MI)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將寡核苷酸包封入脂質(zhì)(例如脂質(zhì)體或膠束)中幫助傳遞(參見例如美國專利第6,458,382號、第6,429,200號；其各自通過引用結(jié)合到本文中)。優(yōu)選的脂質(zhì)體包括但不限于基于心磷脂的陽離子脂質(zhì)體(例如NEOPHECTIN，可獲自NeoPharm，F(xiàn)orestLake，IL)。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，NEOPHECTIN與寡核苷酸的電荷比是6∶1。在還其它實(shí)施方案中，將寡核苷酸與其它另外的聚合物絡(luò)合，以幫助傳遞(參見例如美國專利第6,379,966號、第6,339,067號、第5,744,335號，其各自通過引用結(jié)合到本文中；及IntradigmCorp.，Rockville，MD)。在還其它實(shí)施方案中，采用Minis(Madison，WI)開發(fā)的可控高壓傳遞系統(tǒng)來傳遞寡核苷酸。C.劑量給藥根據(jù)所要治療的疾病狀態(tài)的嚴(yán)重程度和反應(yīng)來進(jìn)行，療程可持續(xù)幾天到幾個月，或者直到達(dá)到治愈目的或?qū)崿F(xiàn)疾病狀態(tài)的消減為止。最佳給藥方案可從對患者體內(nèi)的藥物積累的測量結(jié)果計算得出。給藥醫(yī)師能容易地確定最佳劑量、給藥方法和重復(fù)給藥次數(shù)。最佳劑量可根據(jù)各單個寡核苷酸的相對效價、傳遞方式而變化，通?？筛鶕?jù)在體外和體內(nèi)動物模型中發(fā)現(xiàn)有效的EC50或根據(jù)本文描述的實(shí)施例來估計。一般來說，劑量為每公斤體重0.01μg-100g，且可每天、每周、每月或每年一次或多次給予。在某些實(shí)施方案中，劑量連續(xù)給予(例如靜脈內(nèi)給予)，持續(xù)幾個小時到幾天或幾周的時間。在某些實(shí)施方案中，治療連續(xù)進(jìn)行確定的時間，接著是無治療時間。在某些實(shí)施方案中，將連續(xù)給藥后跟著無治療時間的這種治療模式重復(fù)幾次(例如直到疾病狀態(tài)消減)。主治醫(yī)師能根據(jù)測出的藥物在體液或組織中的停留時間和濃度估計重復(fù)給藥速度。治療獲得成功后，需要讓對象進(jìn)行維持治療，以防止疾病狀態(tài)的復(fù)發(fā)，在維持治療中寡核苷酸以維持劑量給予，為每公斤體重0.01μg-100g，優(yōu)選1mg-50mg，甚至更優(yōu)選6mg-30mg，每天一次或多次至每20年一次。VII.聯(lián)合療法在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物與現(xiàn)有治療一起聯(lián)合提供。在其它實(shí)施方案中，兩種或更多種本發(fā)明化合物聯(lián)合提供。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物與公知的癌癥化療藥物一起聯(lián)合提供。本發(fā)明并不限于具體的化療藥物。設(shè)想將各種不同類別的抗腫瘤藥(例如抗癌)藥物用于本發(fā)明的某些實(shí)施方案中。適合用于本發(fā)明的抗癌藥物包括但不限于誘導(dǎo)凋亡的藥物、抑制腺苷脫氨酶功能的藥物、抑制嘧啶生物合成的藥物、抑制嘌呤環(huán)生物合成的藥物、抑制核苷酸相互轉(zhuǎn)化的藥物、抑制核糖核苷酸還原酶的藥物、抑制一磷酸胸苷(TMP)合成的藥物、抑制二氫葉酸還原的藥物、抑制DNA合成的藥物、與DNA形成加合物的藥物、損害DNA的藥物、抑制DNA修復(fù)的藥物、嵌入DNA的藥物、使天冬酰胺脫氨的藥物、抑制RNA合成的藥物、抑制蛋白質(zhì)合成或穩(wěn)定性的藥物、抑制微管合成或功能的藥物等。在某些實(shí)施方案中，適合用于本發(fā)明組合物和方法中的代表性抗癌藥物包括但不限于1)生物堿，包括微管抑制劑(例如長春新堿、長春堿和長春地辛等)、微管穩(wěn)定劑(例如紫杉醇(TAXOL)和多西他賽等)及染色質(zhì)功能抑制劑，包括拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑如表鬼臼毒素(例如依托泊苷(VP-16)和替尼泊苷(VM-26)等)和靶向拓?fù)洚悩?gòu)酶I的藥物(例如喜樹堿和伊立替康(CPT-11)等)；2)共價DNA結(jié)合藥物(烷化劑)，包括氮芥(例如氮芥、苯丁酸氮芥、磷酰胺、異環(huán)磷酰胺和白消安(MYLERAN)等)、亞硝基脲(例如卡莫司汀、洛莫司汀和司莫司汀等)及其它烷化劑(例如達(dá)卡巴嗪、羥基甲基蜜胺、塞替派和絲裂霉素等)；3)非共價DNA結(jié)合藥物(抗腫瘤抗生素)，包括核酸抑制劑(例如更生霉素(放線菌素D)等)、蒽環(huán)霉素(例如柔紅霉素(道諾霉素和Cerubidine)、多柔比星(阿霉素)和伊達(dá)比星(Idamycin)等)、蒽二酮(例如蒽環(huán)霉素類似物如米托蒽醌等)、博來霉素(BLENOXANE)等及普卡霉素(光輝霉素)等；4)抗代謝物，包括葉酸抗代謝物(例如甲氨喋呤、FOLEX和MEXATE等)、嘌呤抗代謝物(例如6-巰基嘌呤(6-MP，PURINETHOL)、6-硫代鳥嘌呤(6-TG)、硫唑嘌呤、阿昔洛韋、更昔洛韋、氯脫氧腺苷、2-氯脫氧腺苷(CdA)和2′-脫氧考福霉素(噴司他丁)等)、嘧啶拮抗劑(例如氟嘧啶(例如5-氟尿嘧啶(ADRUCIL)、5-氟脫氧尿苷(FdUrd)(氟尿苷))等)及胞嘧啶阿拉伯糖苷(例如CYTOSAR(ara-C)和氟達(dá)拉濱等)；5)酶類，包括L-天冬酰胺酶和羥基脲等；6)激素，包括糖皮質(zhì)類固醇、抗雌激素藥(例如他莫昔芬等)、非甾體類抗雄激素藥(例如氟他胺等)及芳化酶抑制劑(例如阿那曲唑(ARIMIDEX)等)；7)鉑化合物(例如順鉑和卡鉑等)；8)與抗癌藥物、毒素和/或放射性核素等綴合的單克隆抗體；9)生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物(例如干擾素(例如IFN-α等)及白介素(例如IL-2等)等)；10)過繼免疫治療；11)造血生長因子；12)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化的藥物(例如全反式維A酸等)；13)基因治療技術(shù)；14)反義治療技術(shù)；15)腫瘤疫苗；16)導(dǎo)向腫瘤轉(zhuǎn)移的治療(例如巴馬司他等)；17)血管發(fā)生抑制劑；18)蛋白體抑制劑(例如VELCADE)；19)乙酰化作用和/或甲基化作用抑制劑(例如HDAC抑制劑)；20)NFκB調(diào)節(jié)劑；21)細(xì)胞周期調(diào)節(jié)抑制劑(例如CDK抑制劑)；22)p53蛋白功能調(diào)節(jié)劑；以及23)輻射。日常用于癌癥治療場合的任何溶瘤細(xì)胞藥物均可用于本發(fā)明的組合物和方法。例如，美國食品和藥物管理局保持著被批準(zhǔn)在美國使用的溶瘤細(xì)胞藥物的處方集。美國食品和藥物管理局的國際對等機(jī)構(gòu)也保持著類似的處方集。表3提供被批準(zhǔn)在美國使用的代表性抗腫瘤藥列表。本領(lǐng)域技術(shù)人員會意識到，所有美國批準(zhǔn)的化療藥物上要求貼附的“產(chǎn)品標(biāo)簽”，均對所述代表性藥物描述了適應(yīng)癥、給藥信息、毒性數(shù)據(jù)等。表3VIII.定制患者護(hù)理在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供定制患者護(hù)理。可將本發(fā)明的組合物靶向患者疾病(例如癌癥)所獨(dú)有的特定基因。例如，在某些實(shí)施方案中，首先獲得患者癌癥組織或其它受疾病侵襲的組織(例如活檢組織)的樣本。分析活檢組織是否存在特定基因(例如癌基因)的表達(dá)。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，對患者中的基因表達(dá)水平進(jìn)行分析?？赏ㄟ^監(jiān)測是否存在與特定癌基因?qū)?yīng)的RNA或DNA來檢測表達(dá)情況。可采用任何合適的檢測方法，包括但不限于下文描述的方法。鑒定了患者的目的基因的基因表達(dá)模式后，可為每一位患者產(chǎn)生定制治療方案。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將對患者中(例如腫瘤中)異常表達(dá)的基因具有特異性的各寡核苷酸化合物與雞尾酒療法聯(lián)合。在某些實(shí)施方案中，雞尾酒療法還包括其它另外的化療藥物(例如上述化療藥物)。然后如上所述將雞尾酒藥物給予患者。在某些實(shí)施方案中，癌癥樣本的分析和挑選寡核苷酸用作治療化合物是自動進(jìn)行的。例如，在某些實(shí)施方案中，采用能分析一系列癌基因的表達(dá)水平以獲得寡核苷酸的最佳選擇方案和濃度的軟件程序。在某些實(shí)施方案中，由臨床實(shí)驗(yàn)室分析患者樣本來進(jìn)行所述分析，然后將分析結(jié)果傳輸?shù)搅硪恢委熖峁┱咭灾贫u尾酒治療方案。在某些實(shí)施方案中，信息通過因特網(wǎng)傳輸，從而使診斷與治療開始之間的時間盡可能最短。A.RNA的檢測在某些實(shí)施方案中，癌基因(例如包括但不限于本文所公開的癌基因)通過測量組織樣本(例如癌組織)中的相應(yīng)mRNA的表達(dá)來檢測。在其它實(shí)施方案中，對體液中的mRNA表達(dá)進(jìn)行測量，所述體液包括但不限于血液、血清、黏液和尿液。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，對mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行定量測量。RNA表達(dá)可通過任何合適的方法測量，包括但不限于下文公開的方法。在某些實(shí)施方案中，RNA通過RNA印跡分析來檢測。RNA印跡分析涉及RNA的分離和互補(bǔ)標(biāo)記探針的雜交。在其它實(shí)施方案中，RNA表達(dá)通過對特定結(jié)構(gòu)的酶促切割來檢測(INVADER測定法，ThirdWaveTechnologies；參見例如美國專利第5,846,717號；第6,090,543號；第6,001,567號；第5,985,557號和第5,994,069號，其各自通過引用結(jié)合到本文中)。INVADER測定法通過用結(jié)構(gòu)特異性酶類切割重疊寡核苷酸探針的雜交所形成的復(fù)合物來檢測特定的核酸(例如RNA)。在還其它實(shí)施方案中，RNA(或相應(yīng)的cDNA)通過與寡核苷酸探針雜交來檢測?？色@得多種使用各種雜交和檢測技術(shù)的雜交測定。例如，在某些實(shí)施方案中，采用了TaqMan測定法(PEBiosystems，F(xiàn)osterCity，CA；參見例如美國專利第5,962,233號和第5,538,848號，其各自通過引用結(jié)合到本文中)。該分析方法在PCR反應(yīng)過程中進(jìn)行。TaqMan測定法利用了AMPLITAQGOLDDNA聚合酶的5′-3′外切核酸酶活性。將由寡核苷酸及5′-報道染料(例如熒光染料)和3′-猝滅染料組成的探針納入到PCR反應(yīng)中。在PCR過程中，如果探針與其靶標(biāo)發(fā)生結(jié)合，AMPLITAQGOLDDNA聚合酶的5′-3′溶核活性將切割報道染料和猝滅染料之間的探針。報道染料與猝滅染料的分離導(dǎo)致熒光增強(qiáng)。該信號隨PCR的每一個循環(huán)而累積，可用熒光計來監(jiān)測。在另外其它實(shí)施方案中，用反轉(zhuǎn)錄酶PCR(RT-PCR)來檢測RNA的表達(dá)。在RT-PCR中，用反轉(zhuǎn)錄酶將RNA酶促轉(zhuǎn)化成互補(bǔ)DNA或“cDNA”。然后將cDNA用作PCR反應(yīng)的模板。PCR產(chǎn)物可用任何合適的方法來檢測，包括但不限于凝膠電泳及用DNA特異性染料染色或與標(biāo)記探針雜交。在某些實(shí)施方案中，采用了美國專利第5,639,606號、第5,643,765號和第5,876,978號(其各自通過引用結(jié)合到本文中)所描述的定量反轉(zhuǎn)錄酶PCR加標(biāo)準(zhǔn)化競爭性模板混合物的方法。B.蛋白質(zhì)的檢測在其它實(shí)施方案中，癌基因的基因表達(dá)通過測量相應(yīng)的蛋白質(zhì)或多肽的表達(dá)來檢測。在某些實(shí)施方案中，對組織樣本中的蛋白質(zhì)表達(dá)進(jìn)行檢測。在其它實(shí)施方案中，對體液中的蛋白質(zhì)表達(dá)進(jìn)行檢測。在某些實(shí)施方案中，對蛋白質(zhì)表達(dá)水平進(jìn)行定量。蛋白質(zhì)表達(dá)可用任何合適的方法來檢測。在某些實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)通過其與針對其產(chǎn)生的抗體的結(jié)合來檢測。抗體的產(chǎn)生方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的?？贵w結(jié)合通過本領(lǐng)域公知的技術(shù)來檢測，例如放射免疫測定、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)、“夾心”免疫測定、免疫放射測定、凝膠擴(kuò)散沉淀反應(yīng)、免疫擴(kuò)散測定、原位免疫測定(例如使用膠體金、酶或放射性同位素標(biāo)記)、蛋白質(zhì)印跡、沉淀反應(yīng)、凝集試驗(yàn)(例如凝膠凝集試驗(yàn)、血細(xì)胞凝集試驗(yàn)等)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、免疫熒光測定、A蛋白試驗(yàn)及免疫電泳試驗(yàn)等。在一個實(shí)施方案中，抗體結(jié)合通過檢測第一抗體上的標(biāo)記來檢測。在另一個實(shí)施方案中，第一抗體通過檢測第二抗體或試劑與第一抗體的結(jié)合來檢測。在又一實(shí)施方案中，第二抗體被標(biāo)記。許多用以在免疫測定中檢測結(jié)合情況的方法是本領(lǐng)域公知的，也落入本發(fā)明的范圍之內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，采用了自動檢測方法。免疫測定自動化的方法包括美國專利第5,885,530號、第4,981,785號、第6,159,750號和第5,358,691號中描述的方法，其各自通過引用結(jié)合到本文中。在某些實(shí)施方案中，結(jié)果的分析和展示也自動進(jìn)行。例如，在某些實(shí)施方案中，采用了能根據(jù)一系列對應(yīng)于癌基因的蛋白質(zhì)的存在或不存在情況來生成表達(dá)型的軟件。在其它實(shí)施方案中，采用了美國專利第5,599,677號和第5,672,480號中描述的免疫測定；其各自通過引用結(jié)合到本文中。實(shí)驗(yàn)提供以下實(shí)施例是為了證明和進(jìn)一步說明本發(fā)明某些優(yōu)選的實(shí)施方案和方面，這些實(shí)施例不應(yīng)被解釋為限制本發(fā)明的范圍。在下文的實(shí)驗(yàn)公開內(nèi)容中，應(yīng)用了以下縮寫N(當(dāng)量)；M(摩爾濃度)；mM(毫摩爾濃度)；μM(微摩爾濃度)；mol(摩爾)；mmol(毫摩爾)；μmol(微摩爾)；nmol(納摩爾)；pmol(皮摩爾)；g(克)；mg(毫克)；μg(微克)；ng(納克)；l或L(升)；ml(毫升)；μl(微升)；cm(厘米)；mm(毫米)；μm(微米)；nm(納米)；和℃(攝氏度)。實(shí)施例1材料和方法本實(shí)施例描述以下實(shí)施例中所采用的實(shí)驗(yàn)方法。A.細(xì)胞系以下描述用于本發(fā)明實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞系。MDA-MB-231組織腺癌；乳腺；乳房；胸腔積液致瘤潛能形成III級腺癌所表達(dá)的受體表皮生長因子(EGF)和轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-α)癌基因wnt3+和wnt7h+參考文獻(xiàn)SicilianoMJ，BarkerPE，CailleauR.Mutuallyexclusivegeneticsignaturesofhumanbreasttumorcelllineswithacommonchromosomalmarker(帶共同染色體標(biāo)記的人乳腺腫瘤細(xì)胞系的互斥基因簽名)。CancerRes.1979年3月；39(3)919-22。CalleauR，OliveM，CrucigerQV.Long-termhumanbreastcarcinomacelllinesofmetastaticoriginpreliminarycharacterization(轉(zhuǎn)移來源的長期人乳腺癌細(xì)胞系初步鑒定)。Invitro.1978年11月；14(11)9115。CrucigerQV，PathakS，CalleauR.HumanbreastcarcinomasmarkerchromosomesinvolvingIqinsevencases(人乳腺癌七個病例中涉及1q的標(biāo)記染色體)。CytogenetCellGenet.1976年；17(4)231-5。Satya-PrakashKL，PathakS，HsuTC，OliveM，CailleauR.Cytogeneticanalysisoneighthumanbreasttumorcelllineshighfrequenciesof1q，11qandHeLa-likemarkerchromosomes(對八個人乳腺腫瘤細(xì)胞系的細(xì)胞遺傳學(xué)分析1q、11q和HeLa標(biāo)記染色體)。CancerGenetCytogenet1981年1月；3(11)61-73。MCF7組織腺癌；乳腺；乳房轉(zhuǎn)移部位胸腔積液受體雌激素受體+癌基因wnt7h+還已知該細(xì)胞系能適度表達(dá)c-erbB-2癌基因和過量表達(dá)c-myc癌基因細(xì)胞產(chǎn)物胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白(IGFBP)參考文獻(xiàn)SouleHD等，Ahumancelllinefromapleuraleffusionderivedfromabreastcarcinoma(來自衍生于乳腺癌的胸腔積液的人細(xì)胞系).J.Natl.CancerInst.511409-1416，1973LandersJE等，Translationalenhancementofmdm2oncogeneexpressioninhumantumorcellcontainingastabilizedwild-typep53protein(含穩(wěn)定化野生型p53蛋白的人腫瘤細(xì)胞中mdm2癌基因表達(dá)的翻譯增強(qiáng)).CancerRes.573562-3568，1997BacusSS等，Differentiationofculturedhumancancercells(AU-565andMCF7)associatedwithlossofcellsurfaceHER-2/neuoligonucleotide(與細(xì)胞表面HER-2/neu寡核苷酸損失有關(guān)的培養(yǎng)人癌細(xì)胞(AU-565和MCF7)的分化).Mol.Carcinog.3350-362，1990MCF10CA1MCF10細(xì)胞衍生自患纖維囊腫病婦女的良性乳腺組織。MCF10細(xì)胞系由幾種細(xì)胞系組成，其中之一是MCF10A，這是一種無限增殖化的正常人乳腺細(xì)胞系。MCF10A用T24Ha-ras轉(zhuǎn)化產(chǎn)生MCF10AneoT細(xì)胞。具有瘤形成進(jìn)展?jié)摿Φ腗CF10AT衍生自異種移植傳代的MCF10-AneoT。MCF10AT在大約25％的異種移植物中產(chǎn)生癌。完全惡性的MCF10CA1細(xì)胞系衍生自幾次異種移植傳代的MCF10AT。MCF10CA1a會100％形成腫瘤并發(fā)生轉(zhuǎn)移。MCF10CA1a的核型顯示染色體1存在額外拷貝。MCF10CA1a會在靜脈注射細(xì)胞36天后轉(zhuǎn)移到肺部中。參考文獻(xiàn)SantnerSJ等，MalignantMCF10CA1celllinesderivedfrompremalignanthumanbreastepithelialMCF10ATcells(衍生自惡化前人乳腺上皮MCF10AT細(xì)胞的惡性MCF10CA1細(xì)胞系).BreastCancerResearchandtreatment65101-110，2001。MYC-MT-1一雌性MMTV-C-MYC轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)展了乳腺腫瘤。將腫瘤分離，取少量新鮮組織放入由卡馬諾斯癌癥學(xué)會(KarmanosCancerInstitute)的JushoaLiao博士調(diào)理的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。此腫瘤細(xì)胞系在10次傳代后得以建立。NMuMG組織小鼠正常乳腺，上皮品系NAMRU，雌性致瘤潛能在小鼠中產(chǎn)生良性腫瘤參考文獻(xiàn)OwensRB.Glandularepithelialcellsfrommiceamethodforselectivecultivation(小鼠腺上皮細(xì)胞選育方法).J.Natl.CancerInst.521375-1378，1974OwensRB等，Epithelialcellculturesfromnormalglandulartissueofmice(來自小鼠正常腺組織的上皮細(xì)胞培養(yǎng)物).J.Natl.CancerInst.53261-269，1974YinglingJM等，Mammaliandwarfinsarephosphorylatedinresponsetotransforming，growthfactorbetaandareimplicatedincontrolofcellgrowth(哺乳動物侏蛋白響應(yīng)轉(zhuǎn)化生長因子-β發(fā)生磷酸化并牽連到對細(xì)胞生長的控制).Proc.Natl.Acad.Sci.USA938940-8944，1996BxPC-3組織腺癌；胰腺細(xì)胞產(chǎn)物黏蛋白，胰腺癌特異性抗原；CEA，癌胚抗原來源61歲女性致瘤潛能有癌基因c-Ki-ras參考文獻(xiàn)TanMH等，Characterizationofanewprimaryhumanpancreatictumorline(新初級人胰腺腫瘤系的鑒定).CancerInvest.415-23，1986LoorR等，Useofpancreas-specificantigeninimmunodiagnosisofpancreaticcancer(胰腺特異性抗原在胰腺癌的免疫診斷中的應(yīng)用).Clin.Lab.Med.2567-578，1982LanMS等，Polypeptidecoreofahumanpancreatictumormucinantigen(人胰腺腫瘤黏蛋白抗原的多肽核心).CancerRes.502997-3001，1990ChambersJAandHarrisA.Expressonofthecysticfibrosisgeneandthemajorpancreaticmucingene，MUC1，inhumanductalepithelialcells(人導(dǎo)管上皮細(xì)胞中囊性纖維變性基因和主要胰黏蛋白基因MUC1的表達(dá)).J.CellSci.105417-422，1993T-47D組織導(dǎo)管癌，乳腺，乳房，導(dǎo)管轉(zhuǎn)移部位胸腔積液來源患乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的54歲女性的胸腔積液受體表達(dá)雌激素、雄激素、降鈣素、孕酮、糖皮質(zhì)類固醇和催乳素陽性癌基因wnt3+和wnt7h+還已知此細(xì)胞系過量表達(dá)c-erbB-2參考文獻(xiàn)KeydarI等，Establishmentandcharacterizationofacelllineofhumanbreastcarcinomaorigin(人乳腺癌來源的細(xì)胞系的建立和鑒定).Eur.J.Cancer15659-670，1979JudgeSMandChattertonRTJr.Progesterone-specificstimulationoftriglyceridebiosynthesisinabreastcancercellline(T-47D)(對乳腺癌細(xì)胞系(T-47D)中甘油三酯生物合成的孕酮特異性刺激).CancerRes.434407-4412，1983LampSJ等Calcitonininductionofapersistentactivatedstateofadenylatecyclaseinhumanbreastcancercell(T-47D)(人乳腺癌細(xì)胞(T-47D)中腺苷酸環(huán)化酶的持久激活狀態(tài)的降鈣素誘導(dǎo)).J.Biol.Chem.25612269-12274，1981SherE等，Whole-celluptakeandnuclearlocalizationof1，25-dhydroxy-cholecalciferolbybreastcancercell(T-47D)inculture(培養(yǎng)物中乳腺癌細(xì)胞(T-47D)對1，25-二羥基-膽鈣化甾醇的全細(xì)胞攝取和核定位)Biochem.J.200315-320，1981FreakeHC等，1，25-DihydroxyvitaminD3specificallybindstoabreastcancercellline(T-47D)andstimulatesgrowth(1，25-二羥基維生素D3能特異型結(jié)合人乳腺癌細(xì)胞系(T-47D)并刺激生長).Biochem.Biophys.Res.Commun.1011131-1138，1981FaustJBandMeekerTC.Amplificationandexpressionofthebcl-1geneinhumansolidtumorcellline(人實(shí)體瘤細(xì)胞系中bcl-1基因的擴(kuò)增和表達(dá)).CancerRes.522460-2463，1992RF33514HuguetEL等，DiffrentialexpressionofhumanWntgenes2，3，4，and7Binhumanbreastcelllineandnormalanddiseasestatesofhumanbreasttissue(人乳腺細(xì)胞系中人Wnt基因2、3、4和7B的分化表達(dá)與人乳腺組織的正常和疾病狀態(tài)).CancerRes.542615-2621，1994BT-474組織導(dǎo)管癌，乳腺，乳房來源60歲女性癌基因c-erbB-2參考文獻(xiàn)LasfarguesEY等，Isolationoftwohumantumorepithelialcelllinesfromsolidbreastcarcinomas(從實(shí)體乳腺癌分離兩個人腫瘤上皮細(xì)胞系).J.Natl.CancerInst.61967-978，1978LasfarguesEY等，Ahumanbreasttumorcellline(BT-474)thatsupportsmousemammarytumorvirusreplication(支持小鼠乳腺腫瘤病毒復(fù)制的人乳腺腫瘤細(xì)胞系(BT-474)).Invitro15723-729，1979Littlewood-EvansAJ等，Theosteoclast-associatedproteasecathepsinKisexpressedinhumanbreastcarcinoma(破骨細(xì)胞相關(guān)組織蛋白酶K在人乳腺癌中表達(dá)).CancerRes.575386-5390，1997WSU-FSCCL1993年建立的人B細(xì)胞系來源來自患白血病階段的低度濾泡性小裂細(xì)胞性淋巴瘤的男性患者的外周血癌基因?qū)τ赾-myc和bcl-2都顯示染色體易位參考文獻(xiàn)MohammadRM，MohamedAN，SmithMR，JawadiNS，AL-KhatibA.AuniqueEBV-NegativeLowGradeLymphomaLine(WSU-FSCCL)Exhibitingbotht(14；18)andt(8；11)(顯示t(14；18)和t(8；11)的獨(dú)特EBV陰性低度淋巴瘤系(WSU-FSCCL)).CancerGenetCytogenet7062-67，1993B.細(xì)胞培養(yǎng)人乳腺癌細(xì)胞MCF7、MCF10CA1a、MDA-MB231、MDA-MB435.eB和人正常乳腺細(xì)胞MCF10A均獲自KarmanosCancerInstitute。所有細(xì)胞都在補(bǔ)加10mMHEPES、29mM碳酸氫鈉、青霉素(100單位/ml)和鏈霉素(100μg/ml)的DMEM/F12培養(yǎng)基(Gibco，MD)中培養(yǎng)。另外，還將10％牛血清、10μg/ml胰島素(SigmaChemical，StLouis，MO)和0.5nM雌二醇用于MCF7培養(yǎng)基中。將5％馬血清和胰島素(10μg/ml)用于MCF10CA1a，10％胎牛血清用于MDA-MB231和435細(xì)胞系。MCF1.0A培養(yǎng)物補(bǔ)加5％馬血清、胰島素(10μg/ml)、100ng/ml霍亂腸毒素(Calbiochem，CA)、0.5μg/ml氫化可的松(SigmaChemical)和20ng/ml表皮生長因子(SigmaChemical)。所有的燒瓶和培養(yǎng)板都37℃下95％空氣和5％CO2的濕潤環(huán)境中溫育。還將MYC-MT-1細(xì)胞培養(yǎng)于含有10ng/mlEGF(上皮生長因子)、1nM雌二醇、10μg/ml胰島素和10％FBS(胎牛血清)的DMEM/F12培養(yǎng)基中。將BxPC-3胰腺癌細(xì)胞系和BT-474乳腺腫瘤細(xì)胞系培養(yǎng)于補(bǔ)加10％FBS的RPMI1640中。將乳腺腫瘤細(xì)胞系T-47D培養(yǎng)于與BT-474相同的培養(yǎng)基，但補(bǔ)加2.5μg/ml胰島素。將NMuMG(正常小鼠乳腺細(xì)胞)細(xì)胞系生長于補(bǔ)加4.5g/l葡萄糖、10μg/ml胰島素和10％FBS的DMEM培養(yǎng)基中。將所有上述細(xì)胞都以2500-5,000細(xì)胞/孔的密度接種于96孔板中。細(xì)胞接種24小時后用溶于新鮮培養(yǎng)基(100μl總體積)的寡核苷酸化合物處理。在處理后24小時及每隔48小時連續(xù)6-7天或直到對照細(xì)胞達(dá)到80-100％鋪滿，用不含寡核苷酸的新鮮培養(yǎng)基替換培養(yǎng)基。使用MTT染色技術(shù)評估寡核苷酸的抑制作用。用人濾泡性淋巴瘤細(xì)胞系WSU-FSCCL評估抗c-myc寡核苷酸及抗Bcl-2寡核苷酸的作用。FSCCL細(xì)胞在組織培養(yǎng)中生長成單細(xì)胞懸液。培養(yǎng)物維持在補(bǔ)加10％胎牛血清、1％L-谷氨酰胺、100單位/ml青霉素和1.00μg/ml鏈霉素的RPMI1640中。FSCCL細(xì)胞在24孔板(2x105細(xì)胞/孔/ml)中用寡核苷酸化合物處理，并在37℃下95％空氣和5％CO2的濕潤環(huán)境中溫育。每隔24小時用血細(xì)胞計數(shù)器對細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。C.寡核苷酸制備所有的寡核苷酸均由BIOSYNTHESIS(Lewisville，Texas)或Qiagen(Valencia，CA)進(jìn)行合成、凝膠純化和凍干。甲基化寡核苷酸在所有的CpG位點(diǎn)進(jìn)行甲基化。將甲基化寡核苷酸溶于純無菌水(Gibco，InvitrogenCorporation)中，用以處理培養(yǎng)物中的細(xì)胞。D.Lipofectin包封將20μglipofectin(Invitrogen)和16μg寡核苷酸各自用200μlOpti-MEM(Invitrogen)培養(yǎng)基在單獨(dú)的無菌管中室溫下溫育45分鐘。接著將它們合并，再溫育15分鐘。然后加入1.6mlOpti-MEM培養(yǎng)基，至2ml的最終體積和1μM寡核苷酸的最終濃度。lipofectin和寡核苷酸的濃度可根據(jù)它們的分子量和所需的化合物濃度來調(diào)整。在此濃度水平下不存在細(xì)胞毒性作用。E.細(xì)胞生長抑制的測定細(xì)胞生長抑制情況用購自SigmaChemical(StLouis，MO)的溴化3-[4，5-二甲基-噻唑-2-基]-2，5-二苯基四唑(MTT)進(jìn)行評估。將細(xì)胞以50,000個細(xì)胞/ml的密度重懸于培養(yǎng)基中，向96孔平底培養(yǎng)板(CostarCorning，NY，USA)的每一個孔分配100μl，溫育24小時。將培養(yǎng)基改成100μl含所需濃度的寡核苷酸的新鮮培養(yǎng)基，溫育24小時。對照培養(yǎng)物的培養(yǎng)基為與寡核苷酸溶液等體積的純無菌水。每隔24小時更換培養(yǎng)基，但不再添加寡核苷酸，直到對照培養(yǎng)物鋪滿(6-7天)。之后除去培養(yǎng)基，培養(yǎng)板用磷酸緩沖鹽水(PBS)洗滌兩次，向每孔加入100μl含0.5mg/mlMTT染料的無血清培養(yǎng)基，37℃下溫育1小時。除去含染料的培養(yǎng)基，用PBS洗滌，加入100μl二甲亞砜(DMSO)使活性染料增溶。用自動多孔分光光度計(Bio-TekMicroplateAutoreader，Winooski，VT，USA)讀取吸光值。每個處理每次用8個獨(dú)立的孔重復(fù)至少3次。F.蛋白質(zhì)提取和蛋白質(zhì)印跡分析將細(xì)胞以200,000個細(xì)胞/燒瓶的密度接種和培養(yǎng)于T25組織培養(yǎng)燒瓶(Costar，Coming，NY，USA)中。讓細(xì)胞進(jìn)行貼壁24小時。培養(yǎng)基用含有10-20μM寡核苷酸的新鮮培養(yǎng)基替換，溫育24小時。每隔48小時更換培養(yǎng)基，但不再添加抑制劑，繼續(xù)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，直到對照燒瓶鋪滿(6-7天)。用1x胰蛋白酶EDTA(Invitrogen，Gibco，MD)收獲細(xì)胞，2000rpm離心5分鐘進(jìn)行收集。將細(xì)胞重懸于125mMTris-HCl緩沖液(pH6.8)中，超聲處理得10-20％產(chǎn)量，然后在等體積的8％SDS中(使SDS終濃度為4％)裂解。將細(xì)胞提取物煮沸10分鐘，置冰上冷卻，2000rpm離心5分鐘，然后收集上清液。用BCA蛋白質(zhì)測定試劑盒(Pierce，Rockford，IL)對蛋白質(zhì)進(jìn)行定量。取50-100μg蛋白質(zhì)進(jìn)行10-15％凝膠(取決于每種蛋白質(zhì)的分子量)電泳，然后轉(zhuǎn)移到硝基纖維素膜(Schleicher&Schuell，Kence，NH)上。每張膜用溶于TBSTe(Tris緩沖鹽水，吐溫20)的10％乳粉封閉2小時，然后與第一抗體一起在TBST中溫育過夜?？谷薱-myc、c-ha-ras和erbB-2的抗體是小鼠IgG(Pharmingen，SanDiego，CA)。將膜在TBST中洗滌3次，每次15分鐘，然后與用過氧化物酶綴合的第二抗體一起溫育1小時。將膜在TBST中洗滌5次，每次10分鐘，然后與各2ml的Lumino/Enhancer和StablePeroxideSolution(PIERCE)一起溫育1分鐘。將膜曝光于X射線片2分鐘(如有必要，曝光時間在10秒直至24小時之間調(diào)整)，實(shí)施例2c-ki-RAS本實(shí)施例描述靶向c-ki-Ras基因啟動子的寡核苷酸化合物抑制癌細(xì)胞系生長的能力。實(shí)驗(yàn)按實(shí)施例1的描述進(jìn)行。結(jié)果在圖13和19中顯示。靶向c-ki-Ras的寡核苷酸的序列以及c-ki-Ras基因的序列在圖5和6中顯示。實(shí)施例3Bcl-2本實(shí)施例描述靶向bcl-2基因啟動子的寡核苷酸化合物抑制癌細(xì)胞系生長的能力。實(shí)驗(yàn)按實(shí)施例1的描述進(jìn)行。結(jié)果在圖14和20中顯示。靶向bcl-2的寡核苷酸的序列以及bcl-2基因的序列在圖1和2中顯示。實(shí)施例4c-ha-RAS本實(shí)施例描述靶向c-ha-Ras基因啟動子的寡核苷酸化合物抑制癌細(xì)胞系生長的能力。實(shí)驗(yàn)按實(shí)施例1的描述進(jìn)行。結(jié)果在圖16和22中顯示。靶向c-ha-Ras的寡核苷酸的序列以及c-ha-Ras基因的序列在圖7和8中顯示。實(shí)施例5c-erbB-2本實(shí)施例描述靶向c-erbB-2基因啟動子的寡核苷酸化合物抑制癌細(xì)胞系生長的能力。實(shí)驗(yàn)按實(shí)施例1的描述進(jìn)行。結(jié)果在圖15和21中顯示。靶向c-erbB-2的寡核苷酸的序列以及c-erbB-2基因的序列在圖3和4中顯示。實(shí)施例6c-myc本實(shí)施例描述靶向c-myc基因啟動子的寡核苷酸化合物抑制癌細(xì)胞系生長的能力。實(shí)驗(yàn)按實(shí)施例1的描述進(jìn)行。結(jié)果在圖17和23中顯示。靶向c-myc的寡核苷酸的序列以及c-myc基因的序列在圖9和10中顯示。實(shí)施例7TGF-α本實(shí)施例描述靶向TGF-α基因啟動子的寡核苷酸化合物抑制癌細(xì)胞系生長的能力。實(shí)驗(yàn)按實(shí)施例1的描述進(jìn)行。結(jié)果在圖18和24中顯示。靶向TGF-α的寡核苷酸的序列以及TGF-α基因的序列在圖11和12中顯示。實(shí)施例8非甲基化寡核苷酸對細(xì)胞生長的抑制本實(shí)施例描述靶向Bcl-2的非甲基化寡核苷酸對淋巴瘤細(xì)胞系生長的抑制作用。在t＝-24小時，將WSU-FSCCL細(xì)胞以2×105個細(xì)胞/孔的密度接種于24孔板中。對于每個收獲時間點(diǎn)，在t＝0用指示濃度的寡核苷酸處理三個重復(fù)孔。對照樣本接種三份。將各板在37℃下溫育。用臺盼藍(lán)染色法和血細(xì)胞計數(shù)器，通過連續(xù)4天每隔24小時的細(xì)胞計數(shù)和生存力，監(jiān)測實(shí)驗(yàn)過程中的所有培養(yǎng)物。MABL2寡核苷酸靶向Bcl-2的啟動子區(qū)[5′-CAXGCAXGXGCATCCCXGCCXGTG-3′]。Pho-Mabl-2是未甲基化形式的MABL-2[5′-CACGCACGCGCATCCCCGCCCGTG-3′]。WSU-FSCCL從人B細(xì)胞淋巴瘤(低度濾泡性小裂細(xì)胞性淋巴瘤)衍生。實(shí)驗(yàn)方案顯示于表2。結(jié)果在圖31中顯示。結(jié)果證明，導(dǎo)向Bcl-2的未甲基化寡核苷酸與甲基化寡核苷酸一樣能有效抑制細(xì)胞生長。實(shí)施例9腫瘤生長的體內(nèi)抑制本實(shí)施例描述本發(fā)明寡核苷酸在人前列腺癌模型中對腫瘤生長的抑制作用。動物采用了人PC-3GFP前列腺癌皮下模型(參見例如Yang等，CancerResearch59，781-786，；Glinskii等，CancerResearch63，4239-4243，和Kalikin等，CancerBiologyandTherapy26，17-21)。使用5-6周齡的雄性無胸腺NCr裸鼠。將動物飼養(yǎng)和維持在HEPA過濾環(huán)境中，籠子、食物和草墊均高壓滅菌。繁殖對獲自TaconicQualityLaboratoryAnimalsandServicesforResearch(Germantown，NY)。動物食物(5010可高壓滅菌嚙齒動物飼糧)獲自PMInutritionInternationalInc.(Brentwood，MO)。本研究共使用了60只雄性動物。研究用藥物基于核酸的寡核苷酸化合物PNT100和雜(scrambled)寡核苷酸對照PNT-C用陽離子脂質(zhì)體傳遞系統(tǒng)(LDV)配制。GFP表達(dá)載體pLEIN購自Clontech(PaloAlto，CA)。該載體根據(jù)含有內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)的雙順反子信息表達(dá)增強(qiáng)型GFP(綠色熒光蛋白)和新霉素抗性基因。細(xì)胞培養(yǎng)、載體產(chǎn)生、轉(zhuǎn)染和亞克隆表達(dá)10AI病毒包膜的NIH3T3衍生包裝細(xì)胞系PT67購自Clontech。將PT67細(xì)胞培養(yǎng)于補(bǔ)加10％胎牛血清的DMEM中。為進(jìn)行載體產(chǎn)生，將70％鋪滿的包裝細(xì)胞(PT67)與硫酸甲酯N-[1-(2，3-二油酰氧基)丙基]-N，N，N-三甲基銨試劑和飽和量的pLEIN質(zhì)粒的沉淀混合物一起溫育18小時。在此時補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基。轉(zhuǎn)染后48小時通過熒光顯微鏡檢術(shù)檢查細(xì)胞。將細(xì)胞在200-1000μg/mlG418存在下培養(yǎng)7天，以進(jìn)行選擇。PC-3-GFP細(xì)胞的GFP基因轉(zhuǎn)導(dǎo)為進(jìn)行GFP基因轉(zhuǎn)導(dǎo)，將20％鋪滿的PC-3細(xì)胞(ATCC，CRL1435)與PT67細(xì)胞的反轉(zhuǎn)錄病毒上清液和含7％胎牛血清的Ham′sF-12K的1∶1沉淀混合物一起溫育72小時。在此時再裝滿新鮮培養(yǎng)基。PC-3細(xì)胞在轉(zhuǎn)導(dǎo)后72小時用胰蛋白酶EDTA收獲，以1∶15的比例傳代培養(yǎng)于含200μg/ml6418的選擇性培養(yǎng)基中。將6418水平逐步增加至1000Ng/ml。挑選出表達(dá)GFP的最亮PC-3細(xì)胞克隆，合并，然后通過常規(guī)的培養(yǎng)方法擴(kuò)增和轉(zhuǎn)移。皮下腫瘤生長將PC-3-GFP細(xì)胞以5×106個細(xì)胞/200μl的濃度皮下注射入裸鼠脅腹，產(chǎn)生瘤株。在收獲前先確認(rèn)生長于小鼠皮下組織的腫瘤強(qiáng)烈表達(dá)GFP。對在裸鼠皮下生長后收獲的腫瘤組織進(jìn)行檢查，除去任何明顯壞死或懷疑壞死的或者非GFP的腫瘤組織。隨后將腫瘤組織切成大約2mm3的小碎片。皮下組織碎片移植通過將PC-3GFP細(xì)胞皮下注射入裸鼠脅腹，建立前列腺癌瘤株P(guān)C-3GFP。該腫瘤在使用前作為瘤株維持在裸鼠皮下。在移植前，先用熒光確認(rèn)PC-3GFP腫瘤組織強(qiáng)烈表達(dá)GFP。在移植當(dāng)天，從裸鼠皮下部位收獲腫瘤，放入RPMI-1640培養(yǎng)基中。除去壞死組織，活組織切成2mm3小塊。然后將組織碎片皮下移植到裸鼠的右側(cè)脅腹。對表達(dá)綠色熒光蛋白的腫瘤及其轉(zhuǎn)移的整體光學(xué)成像使用了裝有汞燈電源的LeicaLZ12型立體熒光顯微鏡。通過D425/60帶通濾波器和470DCXR二向色鏡產(chǎn)生GFP的選擇性激發(fā)。在帶1317x1035像素芯片的ST-133Micromax高速TEA/CCD-1317K1熱電冷卻照相機(jī)(PrincetonInstruments，Trenton，NJ)上通過長通濾波器GG475(ChromaTechnology，Brattleboro，VT)收集發(fā)射熒光。同時進(jìn)行對照實(shí)驗(yàn)，圖像作對比度和亮度處理，借助ImageProPlus3.1軟件(MediaCybemetics，SilverSpring，Maryland)進(jìn)行分析。高分辨率圖像直接捕捉到計算機(jī)上，或者通過視頻輸出連續(xù)進(jìn)行捕捉。研究用動物本研究共使用60只小鼠，在外科手術(shù)后12天分成6組。隨機(jī)選擇各同期條件的組。治療的開始當(dāng)估計初級腫瘤達(dá)到50-100mm3的體積時開始。研究的設(shè)計方案在表4中顯示。表4數(shù)據(jù)收集腫瘤大小每周一次通過卡尺測量檢查每只動物的腫瘤生長情況，直到研究結(jié)束。進(jìn)行為時40天的測量工作，以計算腫瘤體積隨時間的變化。用公式1/2(axb)計算腫瘤的近似體積，其中b是兩個相互垂直的直徑較小者。腫瘤的近似體積通過公式(WxL)x1/2計算。GFP成像移植后12天，對表達(dá)GFP的腫瘤每周進(jìn)行一次整體光學(xué)成像。體重在研究過程中所有動物每周稱重一次。用電子天平進(jìn)行體重測量。結(jié)束在研究的第46天將動物處死后獲得最終腫瘤重量。用電子天平稱量每個腫瘤的重量。效力評估所用的統(tǒng)計方法所有6個組的腫瘤體積和最終腫瘤重量均用Studentt2檢驗(yàn)進(jìn)行分析，p＝0.05(雙側(cè))。結(jié)果結(jié)果在圖32-35中顯示。圖32顯示PC3GFP前列腺癌皮下模型中的腫瘤用PNT-100和/或TAXOTERE處理后的平均腫瘤體積。圖33顯示PC-3GFP前列腺癌皮下模型中的腫瘤用PNT-100和/或TAXOTERE處理后的平均體重。圖34顯示PC-3GFP前列腺癌皮下模型中的腫瘤用PNT-100和/或TAXOTERE處理后的平均腫瘤體積。圖35顯示PC-3GFP前列腺癌皮下模型中的腫瘤用PNT-100和/或TAXOTERE處理后的平均最終腫瘤體積。結(jié)果表明PNT-100能使腫瘤大小降低。該作用在TAXOTERE存在下得到增強(qiáng)。實(shí)施例10腫瘤生長的體內(nèi)抑制本實(shí)施例描述人前列腺癌模型中體內(nèi)傳遞本發(fā)明寡核苷酸對腫瘤生長的抑制作用。1)用在不同新生血管化狀態(tài)的隨機(jī)化異種移植物，研究了PC-3前列腺癌異種移植腫瘤對靜脈內(nèi)給藥的PNT100的反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)用兩步Neophectin制劑進(jìn)行，分五個1mg/kgPNT100的日劑量。所有小鼠對給藥方案均能存活，無明顯的毒性反應(yīng)。II)WSU-DLCL2異種移植物靜脈內(nèi)注射PNT100研究進(jìn)行了第二項(xiàng)研究，以確定PNT100-Neophectin在非何杰金氏淋巴瘤模型(NHL)中的靜脈內(nèi)傳遞和效力。本研究設(shè)計為給予五個5mg/kgPNT100的日劑量，在某些同期組中，與長春新堿進(jìn)行聯(lián)合治療。觀察到注射PNT100和PNT-C(雜對照)的動物在一劑量的PNT100后體重顯著減輕。數(shù)據(jù)證實(shí)PNT100和PNT-C聯(lián)合治療作用甚大。結(jié)果在圖1和2中顯示。圖36和37顯示W(wǎng)SU-DLCL2移植20天后的腫瘤負(fù)荷。結(jié)果表明，PNT-100單獨(dú)及與長春新堿聯(lián)合能使小鼠腫瘤縮小。以上說明書提到的所有出版物和專利都通過引用結(jié)合到本文中。本發(fā)明所描述的方法和系統(tǒng)的各種修改和變化對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說會是顯而易見的，而不偏離本發(fā)明的范圍和精神。雖然已通過具體的優(yōu)選實(shí)施方案對本發(fā)明進(jìn)行了描述，但應(yīng)認(rèn)識到，要求保護(hù)的本發(fā)明不應(yīng)不適當(dāng)?shù)厥芟抻谶@種具體實(shí)施方案。實(shí)際上，已描述的本發(fā)明實(shí)施方式的各種修改方案對相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員來說是顯而易見的，有意將其納入以下權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。權(quán)利要求1.一種組合物，所述組合物包含能在生理?xiàng)l件下與bcl-2基因啟動子區(qū)雜交的第一寡核苷酸。2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述第一寡核苷酸選自SEQIDNO3，7，8和9。3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述第一寡核苷酸中的至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。4.權(quán)利要求3的組合物，其中所述第一寡核苷酸中的所有所述胞嘧啶堿基都是5-甲基胞嘧啶。5.權(quán)利要求1的組合物，其中所述第一寡核苷酸與所述bcl-2基因啟動子區(qū)的所述雜交抑制所述bcl-2基因的表達(dá)。6.權(quán)利要求1的組合物，其中所述bcl-2基因在細(xì)胞染色體上，且其中所述第一寡核苷酸與所述bcl-2基因啟動子區(qū)的所述雜交減少所述細(xì)胞的增殖。7.權(quán)利要求1的組合物，所述組合物還包含第二寡核苷酸。8.權(quán)利要求7的組合物，其中所述CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。9.權(quán)利要求7的組合物，其中所述第二寡核苷酸選自SEQIDNO3，7，8和9，且其中所述第二寡核苷酸不同于所述第一寡核苷酸。10.權(quán)利要求7的組合物，其中所述第二寡核苷酸能與第二基因啟動子區(qū)雜交，其中所述第二基因不是bcl-2。11.權(quán)利要求10的組合物，其中所述第二基因是癌基因。12.權(quán)利要求11的組合物，其中所述癌基因選自c-ki-Ras、c-Ha-Ras、c-myc、Her-2和TGF-α。13.一種組合物，所述組合物包含能在選自SEQIDNO1的核苷酸1-40之間、SEQIDNO1的核苷酸161-350之間、SEQIDNO1的核苷酸401-590之間或SEQIDNO1的核苷酸1002-1260之間的位置與bcl-2基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸。14.一種方法，所述方法包括a)提供i)選自SEQIDNO3，7，8和9的寡核苷酸；ii)能夠表達(dá)bcl-2基因的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞能夠增殖；b)將所述寡核苷酸引入到所述細(xì)胞中。15.權(quán)利要求14的方法，其中所述給予導(dǎo)致所述細(xì)胞的增殖減少。16.權(quán)利要求14的方法，其中所述給予導(dǎo)致所述bcl-2基因表達(dá)的抑制。17.權(quán)利要求14的方法，其中所述細(xì)胞是癌細(xì)胞。18.權(quán)利要求14的方法，其中所述細(xì)胞在宿主動物中。19.權(quán)利要求18的方法，其中所述宿主動物是非人哺乳動物。20.權(quán)利要求18的方法，其中所述宿主動物是人。21.權(quán)利要求18的方法，其中所述寡核苷酸以0.01μg-100g的劑量引入到所述宿主動物中。22.權(quán)利要求18的方法，其中所述寡核苷酸以每公斤體重1mg-100mg的劑量引入到所述宿主動物中。23.權(quán)利要求18的方法，其中所述寡核苷酸每天一次或多次引入到所述宿主動物中。24.權(quán)利要求18的方法，其中所述寡核苷酸連續(xù)引入到所述宿主動物中。25.權(quán)利要求14的方法，其中所述細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物中。26.權(quán)利要求14的方法，所述方法還包括將試驗(yàn)化合物引入到所述細(xì)胞中的步驟。27.權(quán)利要求27的方法，其中所述試驗(yàn)化合物是公知的化療藥物。28.權(quán)利要求17的方法，其中所述癌癥選自胰腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、白血病、前列腺癌、淋巴瘤、卵巢癌和黑素瘤。29.權(quán)利要求19的方法，所述方法還包括提供藥物傳遞系統(tǒng)以將所述寡核苷酸引入到所述細(xì)胞中。30.權(quán)利要求29的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)包括脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體選自中性脂質(zhì)和脂質(zhì)樣化合物。31.權(quán)利要求29的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)包括細(xì)胞靶向成分。32.權(quán)利要求31的方法，其中所述細(xì)胞靶向化合物選自細(xì)胞表面受體的配體和核受體的配體。33.權(quán)利要求29的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)供在體內(nèi)使用，且其中寡核苷酸和所述脂質(zhì)體存在的比例為2∶1-1∶3/1μg-100mg每公斤體重。34.一種方法，所述方法包括a)提供i)能與bcl-2基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸；ii)包含bcl-2基因的細(xì)胞；b)將所述寡核苷酸引入到所述細(xì)胞中。35.權(quán)利要求34的方法，其中所述寡核苷酸能在選自SEQIDNO1的核苷酸1-40之間、SEQIDNO1的核苷酸161-350之間、SEQIDNO1的核苷酸401-590之間或SEQIDNO1的核苷酸1002-1260之間的位置與所述bcl-2基因的所述啟動子區(qū)雜交。36.權(quán)利要求34的方法，其中所述寡核苷酸的長度在15-30個堿基之間。37.權(quán)利要求34的方法，其中所述寡核苷酸中的所述至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。38.權(quán)利要求34的方法，其中所述寡核苷酸中的所有所述胞嘧啶堿基都是5-甲基胞嘧啶。39.一種組合物，所述組合物包含能在生理?xiàng)l件下與c-ki-Ras基因啟動子區(qū)雜交的第一寡核苷酸。40.權(quán)利要求39的組合物，其中所述第一寡核苷酸選自SEQIDNO47，48，50和53。41.權(quán)利要求39的組合物，其中所述寡核苷酸中的所述至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。42.權(quán)利要求41的組合物，其中所述寡核苷酸中的所有所述胞嘧啶堿基都是5-甲基胞嘧啶。43.權(quán)利要求42的組合物，其中所述第一寡核苷酸與所述c-ki-Ras基因啟動子區(qū)的所述雜交抑制所述c-ki-Ras基因的表達(dá)。44.權(quán)利要求43的組合物，其中所述c-ki-Ras基因在細(xì)胞染色體上，且其中所述第一寡核苷酸與所述c-ki-Ras基因啟動子區(qū)的所述雜交減少所述細(xì)胞的增殖。45.權(quán)利要求39的組合物，所述組合物還包含第二寡核苷酸。46.權(quán)利要求45的組合物，其中所述第二寡核苷酸中的至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。47.權(quán)利要求45的組合物，其中所述第二寡核苷酸選自SEQIDNO47，48，50和53，且其中所述第二寡核苷酸不同于所述第一寡核苷酸。48.權(quán)利要求45的組合物，其中所述第二寡核苷酸能與第二基因啟動子區(qū)雜交，其中所述第二基因不是c-ki-Ras。49.權(quán)利要求48的組合物，其中所述第二基因是癌基因。50.權(quán)利要求49的組合物，其中所述癌基因選自c-Ha-Ras、c-myc、Her-2、TGF-α和bcl-2。51.一種組合物，所述組合物包含能在選自SEQIDNO46的核苷酸1-289之間或SEQIDNO46的核苷酸432-658之間的位置與c-ki-Ras基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸。52.一種方法，所述方法包括a)提供i)選自SEQIDNO47，48，50和53的寡核苷酸；ii)包含c-ki-Ras基因的細(xì)胞，其中所述c-ki-ras基因能夠表達(dá)，且其中所述細(xì)胞能夠增殖；b)將所述寡核苷酸引入到所述細(xì)胞中。53.權(quán)利要求52的方法，其中所述引入導(dǎo)致所述細(xì)胞的增殖減少。54.權(quán)利要求52的方法，其中所述給予導(dǎo)致所述c-ki-Ras基因表達(dá)的抑制。55.權(quán)利要求53的方法，其中所述細(xì)胞是癌細(xì)胞。56.權(quán)利要求53的方法，其中所述細(xì)胞在宿主動物中。57.權(quán)利要求56的方法，其中所述宿主動物是非人哺乳動物。58.權(quán)利要求56的方法，其中所述宿主動物是人。59.權(quán)利要求56的方法，其中所述寡核苷酸以0.01μg-100g的劑量引入到所述宿主動物中。60.權(quán)利要求56的方法，其中所述寡核苷酸以每公斤體重1mg-100mg的劑量引入到所述宿主動物中。61.權(quán)利要求56的方法，其中所述寡核苷酸每天一次或多次引入到所述宿主動物中。62.權(quán)利要求56的方法，其中所述寡核苷酸連續(xù)引入到所述宿主動物中。63.權(quán)利要求52的方法，其中所述細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物中。64.權(quán)利要求52的方法，所述方法還包括將試驗(yàn)化合物引入到所述細(xì)胞中的步驟。65.權(quán)利要求64的方法，其中所述試驗(yàn)化合物是公知的化療藥物。66.權(quán)利要求55的方法，其中所述癌癥選自胰腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、白血病、前列腺癌、淋巴瘤、卵巢癌和黑素瘤。67.權(quán)利要求57的方法，所述方法還包括提供藥物傳遞系統(tǒng)以將所述寡核苷酸引入到所述細(xì)胞中。68.權(quán)利要求67的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)包括脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體選自中性脂質(zhì)和脂質(zhì)樣化合物。69.權(quán)利要求67的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)包括細(xì)胞靶向成分。70.權(quán)利要求69的方法，其中所述細(xì)胞靶向化合物選自細(xì)胞表面受體的配體和核受體的配體。71.權(quán)利要求67的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)供在體內(nèi)使用，且其中寡核苷酸和所述脂質(zhì)體存在的比例為2∶1-1∶3/1μg-100mg每公斤體重。72.一種方法，所述方法包括a)提供i)能與c-ki-Ras基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸；ii)包含c-ki-Ras基因的細(xì)胞；b)將所述寡核苷酸引入到所述細(xì)胞中。73.權(quán)利要求72的方法，其中所述寡核苷酸能在選自SEQIDNO46的核苷酸1-289之間或SEQIDNO46的核苷酸432-658之間的位置與c-ki-Ras基因啟動子區(qū)雜交。74.權(quán)利要求72的方法，其中所述寡核苷酸的長度在15-30個堿基之間。75.權(quán)利要求72的方法，其中所述寡核苷酸中的所述至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。76.權(quán)利要求72的方法，其中所述寡核苷酸中的所有所述胞嘧啶堿基都是5-甲基胞嘧啶。77.一種組合物，所述組合物包含能在生理?xiàng)l件下與c-myc基因啟動子區(qū)雜交的第一寡核苷酸。78.權(quán)利要求77的組合物，其中所述第一寡核苷酸選自SEQIDNO110，111，112，113，114和115。79.權(quán)利要求77的組合物，其中所述第一寡核苷酸中的至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。80.權(quán)利要求79的組合物，其中所述第一寡核苷酸中的所有所述胞嘧啶堿基都是5-甲基胞嘧啶。81.權(quán)利要求80的組合物，其中所述第一寡核苷酸與所述c-myc基因啟動子區(qū)的所述雜交抑制所述c-myc基因的表達(dá)。82.權(quán)利要求81的組合物，其中所述c-myc基因在細(xì)胞染色體上，且其中所述第一寡核苷酸與所述c-myc基因啟動子區(qū)的所述雜交減少所述細(xì)胞的增殖。83.權(quán)利要求77的組合物，所述組合物還包含第二寡核苷酸。84.權(quán)利要求83的組合物，其中所述第二寡核苷酸中的至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。85.權(quán)利要求83的組合物，其中所述第二寡核苷酸選自SEQIDNO110，111，112，113，114和115，且其中所述第二寡核苷酸不同于所述第一寡核苷酸。86.權(quán)利要求83的組合物，其中所述第二寡核苷酸能與第二基因啟動子區(qū)雜交，其中所述第二基因不是c-myc。87.權(quán)利要求86的組合物，其中所述第二基因是癌基因。88.權(quán)利要求87的組合物，其中所述癌基因選自c-ki-Ras、c-Ha-Ras、bcl-2、Her-2和TGF-α。89.一種組合物，所述組合物包含能在選自SEQIDNO108的核苷酸3-124之間或SEQIDNO108的核苷酸165-629之間的位置與c-myc基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸。90.一種方法，所述方法包括a)提供i)選自SEQIDNO110，111，112，113，114和115的寡核苷酸；ii)包含c-myc基因的細(xì)胞，其中所述c-myc基因能夠被表達(dá)，且其中所述細(xì)胞能夠增殖；b)將所述寡核苷酸引入到所述細(xì)胞中。91.權(quán)利要求90的方法，其中所述引入導(dǎo)致所述細(xì)胞的增殖減少。92.權(quán)利要求90的方法，其中所述給予導(dǎo)致所述c-myc基因表達(dá)的抑制。93.權(quán)利要求90的方法，其中所述細(xì)胞是癌細(xì)胞。94.權(quán)利要求90的方法，其中所述細(xì)胞在宿主動物中。95.權(quán)利要求94的方法，其中所述宿主動物是非人哺乳動物。96.權(quán)利要求94的方法，其中所述宿主動物是人。97.權(quán)利要求94的方法，其中所述寡核苷酸以0.01μg-100g的劑量引入到所述宿主動物中。98.權(quán)利要求94的方法，其中所述寡核苷酸以每公斤體重1mg-100mg的劑量引入到所述宿主動物中。99.權(quán)利要求94的方法，其中所述寡核苷酸每天一次或多次引入到所述宿主動物中。100.權(quán)利要求94的方法，其中所述寡核苷酸連續(xù)引入到所述宿主動物中。101.權(quán)利要求90的方法，其中所述細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物中。102.權(quán)利要求90的方法，所述方法還包括將試驗(yàn)化合物引入到所述細(xì)胞中的步驟。103.權(quán)利要求102的方法，其中所述試驗(yàn)化合物是公知的化療藥物。104.權(quán)利要求94的方法，其中所述癌癥選自胰腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、白血病、前列腺癌、淋巴瘤、卵巢癌和黑素瘤。105.權(quán)利要求14的方法，所述方法還包括提供藥物傳遞系統(tǒng)。106.權(quán)利要求105的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)包括脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體選自中性脂質(zhì)和脂質(zhì)樣化合物。107.權(quán)利要求105的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)包括細(xì)胞靶向成分。108.權(quán)利要求107的方法，其中所述細(xì)胞靶向化合物選自細(xì)胞表面受體的配體和核受體的配體。109.權(quán)利要求105的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)供在體內(nèi)使用，且其中寡核苷酸和所述脂質(zhì)體存在的比例為2∶1-1∶3/1μg-100mg每公斤體重。110.一種方法，所述方法包括a)提供i)能與c-myc基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸；ii)包含c-myc基因的細(xì)胞；b)將所述寡核苷酸引入到所述細(xì)胞中。111.權(quán)利要求110的方法，其中所述寡核苷酸能在選自SEQIDNO108的核苷酸3-124之間或SEQIDNO108的核苷酸165-629之間的位置與c-myc基因啟動子區(qū)雜交。112.權(quán)利要求110的方法，其中所述寡核苷酸的長度在15-30個堿基之間。113.權(quán)利要求110的方法，其中所述寡核苷酸中的所述至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。114.權(quán)利要求110的方法，其中所述寡核苷酸中的所有所述胞嘧啶堿基都是5-甲基胞嘧啶。115.一種組合物，所述組合物包含能在生理?xiàng)l件下與c-Ha-ras基因啟動子區(qū)雜交的第一寡核苷酸。116.權(quán)利要求115的組合物，其中所述第一寡核苷酸選自SEQIDNO67，68，69，71，73，74，76，78，84，160，161和162。117.權(quán)利要求115的組合物，其中所述第一寡核苷酸中的至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。118.權(quán)利要求115的組合物，其中所述第一寡核苷酸中的所有所述胞嘧啶堿基都是5-甲基胞嘧啶。119.權(quán)利要求118的組合物，其中所述第一寡核苷酸與所述c-Ha-ras基因啟動子區(qū)的所述雜交抑制所述c-Ha-ras基因的表達(dá)。120.權(quán)利要求119的組合物，其中所述c-Ha-ras基因在細(xì)胞染色體上，且其中所述第一寡核苷酸與所述c-Ha-ras基因啟動子區(qū)的所述雜交減少所述細(xì)胞的增殖。121.權(quán)利要求115的組合物，所述組合物還包含第二寡核苷酸。122.權(quán)利要求121的組合物，其中所述第二核苷酸中的至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。123.權(quán)利要求121的組合物，其中所述第二寡核苷酸選自SEQIDNO67，68，69，71，73，74，76，78，84，160，161和162，且其中所述第二寡核苷酸不同于所述第一寡核苷酸。124.權(quán)利要求121的組合物，其中所述第二寡核苷酸能與第二基因啟動子區(qū)雜交，其中所述第二基因不是c-Ha-ras。125.權(quán)利要求124的組合物，其中所述第二基因是癌基因。126.權(quán)利要求125的組合物，其中所述癌基因選自c-ki-Ras、c-myc、bcl-2、Her-2和TGF-α。127.一種組合物，所述組合物包含能在選自SEQIDNO66的核苷酸21-220之間、SEQIDNO66的核苷酸233-860之間、SEQIDNO66的核苷酸1411-1530之間或SEQIDNO66的核苷酸1631-1722之間的位置與c-Ha-ras基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸。128.一種方法，所述方法包括a)提供i)選自SEQIDNO67，68，69，71，73，74，76，78，84，160，161和162的寡核苷酸；ii)包含c-Ha-ras基因的細(xì)胞，其中所述c-ki-ras基因能夠表達(dá)，且其中所述細(xì)胞能夠增殖；b)將所述寡核苷酸引入到所述細(xì)胞中。129.權(quán)利要求128的方法，其中所述引入導(dǎo)致所述細(xì)胞的增殖減少。130.權(quán)利要求128的方法，其中所述引入導(dǎo)致所述c-Ha-ras基因表達(dá)的抑制。131.權(quán)利要求128的方法，其中所述細(xì)胞是癌細(xì)胞。132.權(quán)利要求128的方法，其中所述細(xì)胞在宿主動物中。133.權(quán)利要求132的方法，其中所述宿主動物是非人哺乳動物。134.權(quán)利要求132的方法，其中所述宿主動物是人。135.權(quán)利要求132的方法，其中所述寡核苷酸以0.01μg-100g的劑量引入到所述宿主動物中。136.權(quán)利要求132的方法，其中所述寡核苷酸以每公斤體重1mg-100mg的劑量引入到所述宿主動物中。137.權(quán)利要求132的方法，其中所述寡核苷酸每天一次或多次引入到所述宿主動物中。138.權(quán)利要求132的方法，其中所述寡核苷酸連續(xù)引入到所述宿主動物中。139.權(quán)利要求128的方法，其中所述細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物中。140.權(quán)利要求128的方法，所述方法還包括將試驗(yàn)化合物引入到所述細(xì)胞中的步驟。141.權(quán)利要求140的方法，其中所述試驗(yàn)化合物是公知的化療藥物。142.權(quán)利要求131的方法，其中所述癌癥選自胰腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、白血病、前列腺癌、淋巴瘤、卵巢癌和黑素瘤。143.權(quán)利要求128的方法，所述方法還包括提供藥物傳遞系統(tǒng)以將所述寡核苷酸引入到所述細(xì)胞中。144.權(quán)利要求143的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)包括脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體選自中性脂質(zhì)和脂質(zhì)樣化合物。145.權(quán)利要求143的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)包括細(xì)胞靶向成分。146.權(quán)利要求145的方法，其中所述細(xì)胞靶向化合物選自細(xì)胞表面受體的配體和核受體的配體。147.權(quán)利要求143的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)供在體內(nèi)使用，且其中寡核苷酸和所述脂質(zhì)體存在的比例為2∶1-1∶3/1μg-100mg每公斤體重。148.一種方法，所述方法包括a)提供i)能與c-Ha-ras基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸；ii)包含c-Ha-ras基因的細(xì)胞；b)將所述寡核苷酸引入到所述細(xì)胞中。149.權(quán)利要求148的方法，其中所述寡核苷酸能在選自SEQIDNO66的核苷酸21-220之間、SEQIDNO66的核苷酸233-860之間、SEQIDNO66的核苷酸1411-1530之間或SEQIDNO66的核苷酸1631-1722之間的位置與所述c-Ha-ras基因的所述啟動子區(qū)雜交。150.權(quán)利要求148的方法，其中所述寡核苷酸的長度在15-30個堿基之間。151.權(quán)利要求148的方法，其中所述寡核苷酸中的所述至少一個胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。152.權(quán)利要求148的方法，其中所述寡核苷酸中的所有所述胞嘧啶堿基都是5-甲基胞嘧啶。153.一種組合物，所述組合物包含能在生理?xiàng)l件下與Her-2基因啟動子區(qū)雜交的第一寡核苷酸。154.權(quán)利要求153的組合物，其中所述第一寡核苷酸選自SEQIDNO31，32，35，36，37和38。155.權(quán)利要求153的組合物，其中所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中所述CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。156.權(quán)利要求153的組合物，其中所述寡核苷酸的所有所述CG二核苷酸對中的所有所述胞嘧啶堿基都是5-甲基胞嘧啶。157.權(quán)利要求153的組合物，其中所述寡核苷酸與所述Her-2基因啟動子區(qū)的所述雜交抑制所述Her-2基因的表達(dá)。158.權(quán)利要求157的組合物，其中所述Her-2基因在細(xì)胞染色體上，且其中所述寡核苷酸與所述Her-2基因啟動子區(qū)的所述雜交減少所述細(xì)胞的增殖。159.權(quán)利要求153的組合物，所述組合物還包含第二寡核苷酸。160.權(quán)利要求159的組合物，其中所述第二寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中所述CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。161.權(quán)利要求159的組合物，其中所述第二寡核苷酸選自SEQIDNO31，32，35，36，37和38。162.權(quán)利要求159的組合物，其中所述第二寡核苷酸能與第二基因啟動子區(qū)雜交，其中所述第二基因不是Her-2。163.權(quán)利要求163的組合物，其中所述第二基因是癌基因。164.權(quán)利要求163的組合物，其中所述癌基因選自c-ki-Ras、c-Ha-Ras、bcl-2、c-myc和TGF-α。165.一種組合物，所述組合物包含能在SEQIDNO29的核苷酸205-344之間或SEQIDNO29的核苷酸382-435之間的位置與c-myc基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸。166.一種方法，所述方法包括a)提供i)選自SEQIDNO31，32，35，36，37和38的寡核苷酸；ii)包含Her-2基因的細(xì)胞；b)將所述寡核苷酸引入到所述細(xì)胞中。167.權(quán)利要求166的方法，其中所述給予導(dǎo)致所述細(xì)胞的增殖減少。168.權(quán)利要求166的方法，其中所述引入導(dǎo)致所述Her-2基因表達(dá)的抑制。169.權(quán)利要求166的方法，其中所述細(xì)胞是癌細(xì)胞。170.權(quán)利要求166的方法，其中所述細(xì)胞在宿主動物中。171.權(quán)利要求166的方法，其中所述宿主動物是非人哺乳動物。172.權(quán)利要求170的方法，其中所述宿主動物是人。173.權(quán)利要求170的方法，其中所述寡核苷酸以0.01μg-100g的劑量給予所述宿主動物。174.權(quán)利要求170的方法，其中所述寡核苷酸以每公斤體重1mg-100mg的劑量給予所述宿主動物。175.權(quán)利要求170的方法，其中所述寡核苷酸每天一次或多次給予所述宿主動物。176.權(quán)利要求170的方法，其中所述寡核苷酸連續(xù)給予所述宿主動物。177.權(quán)利要求166的方法，其中所述細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物中。178.權(quán)利要求166的方法，所述方法還包括將試驗(yàn)化合物給予所述細(xì)胞的步驟。179.權(quán)利要求178的方法，其中所述試驗(yàn)化合物是公知的化療藥物。180.權(quán)利要求169的方法，其中所述癌癥選自胰腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、白血病、前列腺癌、淋巴瘤、卵巢癌和黑素瘤。181.權(quán)利要求166的組合物，其中所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中所述CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。182.權(quán)利要求166的組合物，其中所述寡核苷酸的所有所述CG二核苷酸對中的所有所述胞嘧啶堿基都是5-甲基胞嘧啶。183.權(quán)利要求166的方法，所述方法還包括提供藥物傳遞系統(tǒng)。184.權(quán)利要求183的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)包括脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體選自中性脂質(zhì)和脂質(zhì)樣化合物。185.權(quán)利要求183的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)包括細(xì)胞靶向成分。186.權(quán)利要求185的方法，其中所述細(xì)胞靶向化合物是特定細(xì)胞表面受體或核受體的配體或配體樣組分。187.權(quán)利要求183的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)供在體內(nèi)使用，且其中寡核苷酸和所述脂質(zhì)體存在的比例為2∶1-1∶3/1μg-100mg每公斤體重。188.一種方法，所述方法包括a)提供i)能與Her-2基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸；ii)包含Her-2基因的細(xì)胞；b)將所述寡核苷酸引入到所述細(xì)胞中。189.一種組合物，所述組合物包含選自SEQIDNO134，136，139，140，141，142，143和144的寡核苷酸。190.權(quán)利要求189的組合物，其中所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中所述CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。191.權(quán)利要求189的組合物，其中所述寡核苷酸的所有所述CG二核苷酸對中的所有所述胞嘧啶堿基是5-甲基胞嘧啶。192.權(quán)利要求189的組合物，其中所述寡核苷酸能在生理?xiàng)l件下與TGF-α基因啟動子區(qū)雜交。193.權(quán)利要求192的組合物，其中所述寡核苷酸與所述TGF-α基因啟動子區(qū)的所述雜交抑制所述TGF-α基因的表達(dá)。194.權(quán)利要求193的組合物，其中所述TGF-α基因在細(xì)胞染色體上，且其中所述寡核苷酸與所述TGF-α基因啟動子區(qū)的所述雜交減少所述細(xì)胞的增殖。195.權(quán)利要求189的組合物，所述組合物還包含第二寡核苷酸。196.權(quán)利要求195的組合物，其中所述第二寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中所述CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。197.權(quán)利要求195的組合物，其中所述第二寡核苷酸選自SEQIDNO134，136，139，140，141，142，143和144。198.權(quán)利要求195的組合物，其中所述第二寡核苷酸能與第二基因啟動子區(qū)雜交，其中所述第二基因不是TGF-α。199.權(quán)利要求198的組合物，其中所述第二基因是癌基因。200.權(quán)利要求199的組合物，其中所述癌基因選自c-ki-Ras、c-Ha-Ras、bcl-2、Her-2和c-myc。201.一種組合物，所述組合物包含能在選自SEQIDNO131的核苷酸1-90之間、SEQIDNO131的核苷酸175-219之間、SEQIDNO131的核苷酸261-367之間、SEQIDNO131的核苷酸431-930之間和SEQIDNO131的核苷酸964-1237之間的位置與c-myc基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸。202.一種組合物，所述組合物包含能在生理?xiàng)l件下與TGF-α基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸。203.一種方法，所述方法包括a)提供i)選自SEQIDNO134，136，139，140，141，142，143和144的寡核苷酸；ii)包含TGF-α基因的細(xì)胞；b)將所述寡核苷酸引入到所述細(xì)胞中。204.權(quán)利要求203的方法，其中所述給予導(dǎo)致所述細(xì)胞的增殖減少。205.權(quán)利要求203的方法，其中所述給予導(dǎo)致所述TGF-α基因表達(dá)的抑制。206.權(quán)利要求203的方法，其中所述細(xì)胞是癌細(xì)胞。207.權(quán)利要求203的方法，其中所述細(xì)胞在宿主動物中。208.權(quán)利要求207的方法，其中所述宿主動物是非人哺乳動物。209.權(quán)利要求207的方法，其中所述宿主動物是人。210.權(quán)利要求207的方法，其中所述寡核苷酸以0.01μg-100g的劑量給予所述宿主動物。211.權(quán)利要求207的方法，其中所述寡核苷酸以每公斤體重1mg-100mg的劑量給予所述宿主動物。212.權(quán)利要求207的方法，其中所述寡核苷酸每天一次或多次給予所述宿主動物。213.權(quán)利要求207的方法，其中所述寡核苷酸連續(xù)給予所述宿主動物。214.權(quán)利要求203的方法，其中所述細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物中。215.權(quán)利要求203的方法，所述方法還包括將試驗(yàn)化合物給予所述細(xì)胞的步驟。216.權(quán)利要求215的方法，其中所述試驗(yàn)化合物是公知的化療藥物。217.權(quán)利要求206的方法，其中所述癌癥選自胰腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、白血病、前列腺癌、淋巴瘤、卵巢癌和黑素瘤。218.權(quán)利要求203的方法，其中所述寡核苷酸包含至少一個CG二核苷酸對，其中所述CG二核苷酸對中的至少一個胞嘧啶堿基包括5-甲基胞嘧啶。219.權(quán)利要求203的方法，其中所述寡核苷酸的所述CG二核苷酸對中的所有所述胞嘧啶堿基都是5-甲基胞嘧啶。220.權(quán)利要求203的方法，所述方法還包括提供藥物傳遞系統(tǒng)。221.權(quán)利要求230的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)包括脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體包括中性脂質(zhì)或脂質(zhì)樣化合物。222.權(quán)利要求230的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)包括細(xì)胞靶向成分。223.權(quán)利要求233的方法，其中所述細(xì)胞靶向化合物是特定細(xì)胞表面受體或核受體的配體或配體樣組分。224.權(quán)利要求230的方法，其中所述藥物傳遞系統(tǒng)供在體內(nèi)使用，且其中寡核苷酸和所述脂質(zhì)體存在的比例為2∶1-1∶3/1μg-100mg每公斤體重。225.一種方法，所述方法包括a)提供i)能與TGF-α基因啟動子區(qū)雜交的寡核苷酸；ii)包含TGF-α基因的細(xì)胞；b)將所述寡核苷酸引入到所述細(xì)胞中。226.一種組合物，所述組合物包含能在生理?xiàng)l件下與bcl-2基因啟動子區(qū)雜交的第一寡核苷酸，其中所述第一寡核苷酸是SEQIDNO1438。227.權(quán)利要求236的組合物，其中所述bcl-2基因在細(xì)胞染色體上，且其中所述第一寡核苷酸與所述bcl-2基因啟動子區(qū)的所述雜交減少所述細(xì)胞的增殖。228.權(quán)利要求237的組合物，其中所述細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞。229.權(quán)利要求238的組合物，其中所述腫瘤細(xì)胞是前列腺癌細(xì)胞。230.權(quán)利要求237的組合物，其中所述細(xì)胞在對象中。231.權(quán)利要求236的組合物，所述組合物還包含第二寡核苷酸。232.權(quán)利要求241的組合物，其中所述第二寡核苷酸能與第二基因啟動子區(qū)雜交，其中所述第二基因不是bcl-2。233.權(quán)利要求242的組合物，其中所述第二基因是癌基因。234.權(quán)利要求243的組合物，其中所述癌基因選自c-ki-Ras、c-Ha-Ras、c-myc、Her-2和TGF-α。235.權(quán)利要求236的組合物，所述組合物還包含公知的化療藥物。236.權(quán)利要求245的組合物，其中所述化療藥物是TAXOTERE。237.一種方法，所述方法包括a)提供i)包含具有SEQIDNO1438序列的寡核苷酸和脂質(zhì)體的組合物；ii)能夠表達(dá)bcl-2基因的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞能夠增殖；b)將所述寡核苷酸引入到所述細(xì)胞中。238.權(quán)利要求247的組合物，其中所述給予導(dǎo)致所述細(xì)胞增殖減少。239.權(quán)利要求248的組合物，其中所述給予導(dǎo)致所述bcl-2基因表達(dá)的抑制。240.權(quán)利要求247的組合物，其中所述細(xì)胞是癌細(xì)胞。241.權(quán)利要求250的組合物，其中所述癌細(xì)胞是前列腺癌細(xì)胞。242.權(quán)利要求247的組合物，其中所述細(xì)胞在宿主動物中。243.權(quán)利要求252的組合物，其中所述宿主動物是非人哺乳動物。244.權(quán)利要求252的組合物，其中所述宿主動物是人。245.權(quán)利要求252的方法，其中所述寡核苷酸以0.01μg-100g的劑量引入到所述宿主動物中。246.權(quán)利要求252的方法，其中所述寡核苷酸以每公斤體重1mg-100mg的劑量引入到所述宿主動物中。247.權(quán)利要求252的方法，其中所述寡核苷酸每天一次或多次引入到所述宿主動物中。248.權(quán)利要求252的方法，其中所述寡核苷酸連續(xù)引入到所述宿主動物中。249.權(quán)利要求247的方法，其中所述細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)物中。250.權(quán)利要求247的方法，所述方法還包括將試驗(yàn)化合物引入到所述細(xì)胞中的步驟。251.權(quán)利要求260的方法，其中所述試驗(yàn)化合物是公知的化療藥物。252.權(quán)利要求47的方法，其中所述癌癥選自胰腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、白血病、前列腺癌、淋巴瘤、卵巢癌和黑素瘤。253.權(quán)利要求247的方法，其中所述脂質(zhì)體是基于心磷脂的陽離子脂質(zhì)體。254.權(quán)利要求263的方法，其中所述基于心磷脂的陽離子脂質(zhì)體制劑是NEOPHECTIN。255.權(quán)利要求263的方法，其中所述脂質(zhì)體包含硫酸甲酯N-[1-(2，3-二油酰氧基)丙基]-N，N，N-三甲基銨(DOTAP)。256.權(quán)利要求266的方法，其中所述寡核苷酸和所述脂質(zhì)體存在的比例為2∶1-1∶3/1μg-100mg每公斤體重。257.權(quán)利要求264的方法，其中所述NEOPHECTIN和所述寡核苷酸以6∶1的電荷比存在。258.權(quán)利要求247的方法，所述方法還包括將公知的化療藥物給予所述對象的步驟。259.權(quán)利要求268的方法，其中所述公知的化療藥物是TAXOTERE。260.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含具有SEQIDNO1438核酸序列的寡核苷酸和脂質(zhì)體。261.權(quán)利要求270的組合物，其中所述脂質(zhì)體是基于心磷脂的陽離子脂質(zhì)體。262.權(quán)利要求271的方法，其中所述基于心磷脂的陽離子脂質(zhì)體制劑是NEOPHECTIN。263.權(quán)利要求270的方法，其中所述脂質(zhì)體包含硫酸甲酯N-[1-(2，3-二油酰氧基)丙基]-N，N，N-三甲基銨(DOTAP)。264.權(quán)利要求272的方法，其中所述NEOPHECTIN和所述寡核苷酸以6∶1的電荷比存在。全文摘要本發(fā)明涉及用于抑制基因表達(dá)的方法和組合物。具體的說，本發(fā)明提供基于寡核苷酸的治療藥物，以抑制與癌癥相關(guān)的癌基因。文檔編號A61K48/00GK101014608SQ200580025490公開日2007年8月8日申請日期2005年6月1日優(yōu)先權(quán)日2004年6月1日發(fā)明者G·謝克內(nèi)亞德,M·P·索奇,N·古德溫,D·奧爾森申請人:普隆奈治療公司