專利名稱：推遲或阻止發(fā)生多發(fā)性硬化的制作方法
推遲或阻止發(fā)生多發(fā)性硬化
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多發(fā)性硬化(MS)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性、多灶性(multifocal)、脫髓鞘 (demyelinating)、自身免疫病。全世界有超過2百萬人患有MS，美國(guó)有 400,000。近80%的MS患者有復(fù)發(fā)形似，其中>80%的患者在25年內(nèi)進(jìn)展 為繼發(fā)漸進(jìn)型MS(secondary progressive MS)。
發(fā)明概述
一方面，本發(fā)明涉及治療有多發(fā)性硬化(MS)風(fēng)險(xiǎn)，例如有漸進(jìn)型MS (progressive MS)或復(fù)發(fā)型MS (relapsing MS)風(fēng)險(xiǎn)的受試者的方法。所述方法 包括，對(duì)該受試者施用VLA-4阻斷劑(VLA-4 blocking agent),例如VLA-4 結(jié)合抗體(VLA-4 binding antibody)(例如全長(zhǎng)VLA-4結(jié)合抗體或VLA-4結(jié)合 抗體片段)。在一實(shí)施方案中，所述方法可以阻止(prevent) MS(例如復(fù)發(fā)弛 張型MS (relapsing remitting MS))臨床表現(xiàn)(clinical manifestation)的發(fā)作或?qū)?其推遲(dday)(例如至少1年、2年、3年、4年、5年、10年或更長(zhǎng)時(shí)間)， 或者可以使后續(xù)(例如繼發(fā))臨床表現(xiàn)的嚴(yán)重程度最低。在一實(shí)施方案中，該 受試者有不到兩次的灶性(focal)神經(jīng)功能缺損(neurologic deficit)臨床發(fā)作 (clinical episode)。
在一實(shí)施方案中，所述受試者經(jīng)歷一次灶性神經(jīng)功能缺損的臨床發(fā)作。 所述神經(jīng)功能缺損可以表現(xiàn)為例如以下一或多個(gè)癥狀四肢中 一或多肢(one or more extremities)虛弱、四月支中 一或多肢麻痹(paralysis)、四肢中 一或多肢 震顫(tremor)、失控型肌肉痙攣(uncontrollable muscle spasticity)、感覺喪失或 異常(sensory loss or abnormality)、 協(xié)調(diào)性降低(decreased coordination)、 平衡 能力喪失(loss of balance)、抽象思維能力喪失(loss of ability to thinkabstractly)、歸納能力喪失(loss of ability to generalize), ^并i舌困》,(difficulty speaking)、 以及言i吾理角罕困》偉(difficulty understanding speech)。
所述VLA-4阻斷劑可以在臨床發(fā)作的6、 4、 3、 2、或l周內(nèi)施用。 在另 一實(shí)施方案中，受試者經(jīng)神經(jīng)病學(xué)損傷(neurological damage)^r查 發(fā)現(xiàn)有多發(fā)性硬化風(fēng)險(xiǎn)。。例如，受試者可以用例如顱部掃描(cranial scan) 進(jìn)行評(píng)估，例如通過X線照片掃描(radiographicscan)、計(jì)算機(jī)輔助體層攝影 (computed tomography, CT)掃描、或磁共振成像(magnetic resonance imaging, MRI)掃描進(jìn)行評(píng)估。檢測(cè)出腦組織炎癥或髓鞘(myelin sheath)受損(damage) 的身體證據(jù)(physical evidence)可以說明，接受治療的該受試者無臨床發(fā)作或 有一次臨床發(fā)作。在另一實(shí)例中，受試者如果通過例如MRI被檢出有至少 2、 3、 5、 10、 15、 20或25個(gè)腦損傷或疤痕(例如大于或等于1.5或3mm)， 可以對(duì)其進(jìn)行治療。
在另一實(shí)施方案中，受試者有生化或生理指標(biāo)表明有多發(fā)性硬化風(fēng)險(xiǎn)， 例如在無臨床發(fā)作或有一次臨床發(fā)作的情況下。例如，有抗髓少突膠質(zhì)細(xì) 月包4唐蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein, MOG)和髓石奔脂石威性蛋白 (myelin basic protein, MBP)之一或二者的血清抗體，可以表明該受試者有風(fēng) 險(xiǎn)。
也可以將本文所述多種標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)用，來判定受試者是否可以接受治療。 可以對(duì)受試者施用VLA-4阻斷劑，例如當(dāng)受試者有至少l、 2、 3、 4、或5 種MS風(fēng)險(xiǎn)因素(risk factor),例如本文所述風(fēng)險(xiǎn)因素時(shí)。例如，受試者經(jīng)歷 一次神經(jīng)功能缺損臨床發(fā)作且可檢出神經(jīng)病學(xué)損傷或表明有生化或生理指 標(biāo)時(shí)，可以對(duì)其進(jìn)行治療。在另一實(shí)例中，受試者未經(jīng)歷神經(jīng)功能缺損臨 床發(fā)作、但檢出神經(jīng)病學(xué)損傷或表明有生化或生理指標(biāo)。例如，未經(jīng)歷灶 性神經(jīng)功能缺損的臨床發(fā)作的受試者，如有以下一或多項(xiàng)特征，表明可以 接受治療(a)經(jīng)顱部掃描發(fā)現(xiàn)有多處大于或等于3 mm的腦損傷或疤痕，(b) 有抗髓少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(MOG)和髓磷脂堿性蛋白(MBP)之一或二者的 血清抗體，(c)與對(duì)照相比，CSF IgG水平增加，和(d)與對(duì)照相比，髓磷脂 堿性蛋白(MBP)水平增加。
在另一實(shí)施方案中，受試者有多發(fā)性硬化家族史，例如父母、兄弟姊 妹(sibling)、或祖父母有至少一位患有多發(fā)性硬化。在一實(shí)施方案中，所述 受試者有一次急性孤立(isolated)脫髓鞘事件，如累及視神經(jīng)(optic nerve)、脊
髓(spinal cord)或小腦(cerebellum)的事件。在另一實(shí)施方案中，受試者有多 發(fā)性硬化的無臨床癥狀(clinically silent)的特征。例如，受試者有至少l、 2、 5、或10個(gè)無臨床癥狀的、大于或等于3 mm的腦部MRI損傷。在一實(shí)施 方案中，受試者有橫貫性脊髓炎(transverse myelitis)或視神經(jīng)炎(optic neuritis)。
在一些例子中，受試者經(jīng)測(cè)評(píng)不具有除MS以外的其它疾病的相關(guān)病理 表現(xiàn)。例如，受試者經(jīng)測(cè)定未患有可引起神經(jīng)功能缺損的代謝病、脈管病 (vascular)、月交原-脈管病(collagen-vascular)、傳染病、和/或瘤形成疾病 (neoplastic disease)。例如，受試者經(jīng)測(cè)定未患有中風(fēng)(stroke)、 CNS淋巴瘤、 腦干神經(jīng)月交質(zhì)瘤(brainstem glioma)、或溶酶體l&積癥(lysosomal storage disease)。
在一實(shí)施方案中，在至少一個(gè)起始用藥點(diǎn)，所述受試者的EDSS分?jǐn)?shù)低 于3、 2、 1.5、或1。
在一實(shí)施方案中，受試者是成年人，例如年齡大于或等于16、 18、 19、 20、 24、或30歲。例如，受試者年齡為19-40歲。受試者可以是女性或男 性。受試者可以施用VLA-4阻斷劑超過14周，例如超過6或9個(gè)月，超過 1、 1.5、或2年，例如按通常的定期間隔(regular intervals)用藥。
在一實(shí)施方案中，所述方法包括，在用藥之前，基于以下一或多項(xiàng)選 出有MS風(fēng)險(xiǎn)的受試者(a)顱部掃描有髓鞘受損證據(jù)、(b)有抗MOG和MBP 之一或兩者的血清抗體、(c)CSFIgG水平增加、(d)MBP水平增加、以及(e) 出現(xiàn)一次灶性神經(jīng)功能缺損的臨床發(fā)作。
在一實(shí)施方案中，所述VLA-4阻斷劑包括VLA-4結(jié)合抗體，例如IgGl, IgG2， IgG3，或IgG4等全長(zhǎng)抗體。所述抗體可以是有效人化(effectively human),人化(human)或人源化(humanized)的抗體。所述VLA-4結(jié)合抗體可 抑制VLA-4與其關(guān)聯(lián)(cognate)配體，例如VCAM-1的相互作用。所述VLA-4 結(jié)合抗體至少結(jié)合VLA-4的a鏈，例如結(jié)合a4亞基的胞外區(qū)。例如，所述 VLA-4結(jié)合抗體識(shí)別VLA-4 a鏈上的表位B (如Bl或B2)。所述VLA-4結(jié) 合抗體可以與那他珠單抗(natalizumab)、 HP1/2、或本文所述另一種VLA-4 結(jié)合抗體來竟?fàn)幗Y(jié)合VLA-4。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述VLA-4結(jié)合抗體是 那他珠單抗，或包括那他珠單抗的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)。
早期治療可以，例如，防止經(jīng)過4交長(zhǎng)時(shí)間后發(fā)生殘疾(disability)、減少 隨著時(shí)間推移所出現(xiàn)的T2和Gd+損傷、防止發(fā)生繼發(fā)漸進(jìn)型MS、和/或防 止發(fā)生持續(xù)的腦組織損傷(例如經(jīng)MRI檢測(cè)到的損傷)。
本發(fā)明另一方面涉及一種方法，其包括評(píng)價(jià)受試者或者獲取評(píng)價(jià)受 試者的相關(guān)信息；以及，在該評(píng)價(jià)表明該受試者有MS風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，對(duì)該受試者 施用VLA-4結(jié)合抗體。在一實(shí)施方案中，所述方法包括對(duì)受試者進(jìn)行掃 描，以及在該掃描顯示MS (例如早期MS)的無臨床癥狀的特征時(shí)，對(duì)該受 試者施用VLA-4阻斷劑。無臨床癥狀的特征例如，腦組織炎癥或髓鞘受損， 例如在無神經(jīng)功能缺損臨床發(fā)作的情況下有Gd+、 Tl或T2損傷。其它評(píng) 價(jià)例如，評(píng)價(jià)本文所述風(fēng)險(xiǎn)因素?？梢栽u(píng)價(jià)所述受試者的至少1、 2、 3或4 個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素。當(dāng);f僉測(cè)到至少1、 2、 3或4個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素時(shí)，對(duì)該受試者施用 VLA-4阻斷劑。
本發(fā)明另一方面涉及一種方法，其包括鑒別患有單相脫髓鞘病 (monophasic demyelinating disorder)的受試者；并對(duì)該受試者施用VLA-4結(jié) 合抗體，例如用量足以有效治療該疾病。例如，所述受試者患有臨床不能 確定為多發(fā)性硬化的疾病。所述受試者可以患有例如橫貫性脊髓炎、視神 經(jīng)炎、或急性播散性腦脊髓炎(acute disseminated encephalomyelitis, ADEM)。
定義
"神經(jīng)功能缺損，，是指中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能下降。實(shí)例包括，不能表達(dá) (inability to speak)、感覺遲鈍(decreased sensation)、平衡喪失(loss ofbalance)、 虛弱(weakness)、認(rèn)知障礙(cognitive dysfUnction)、視覺變化(visual changes)、 反射異常(abnormal reflexes)、和行走困難(problems walking)。"灶性神經(jīng)功 能缺損，，既可以是累及具體部位(如左臉、右臉、左臂、右臂)，也可以是累 及具體功能(例如，可影響語言表達(dá)，但不影響寫的能力)。術(shù)語"臨床發(fā)作" 在指神經(jīng)功能缺損時(shí)，表示持續(xù)數(shù)小時(shí)、數(shù)日、或數(shù)周(但此后可以部分或 完全恢復(fù))、可通過患者的身體外部指標(biāo)(outward physical signs)直接觀察到 的神經(jīng)功能缺損，它區(qū)別于僅可通過對(duì)身體內(nèi)部組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室測(cè)試或成 像才能觀察到的情況。臨床神經(jīng)功能缺損常常通過醫(yī)療史(medical history) 和/或神經(jīng)學(xué)體檢(physical neurological exam)確定。
術(shù)語"治療"是指進(jìn)行治療，且治療量、治療方式(manner)、和/或治療模
式(mode)導(dǎo)致有效改善病情、癥狀、或與疾病有關(guān)的參數(shù)，或者防止或減緩 疾病進(jìn)展，直至統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著程度或直至本領(lǐng)域技術(shù)人員可以檢測(cè)到的程度。 有效量、有效方式或有效模式可以依受試者的不同而有多種情況，而且可 以適應(yīng)于受試者進(jìn)行調(diào)整。
"顱部掃描"是檢查并獲得活體腦部成像的技術(shù)。實(shí)例有CT掃描和MRI 掃描。
術(shù)語"生物學(xué)"是指基于蛋白的治療試劑。
"VLA-4結(jié)合試劑"是指與VLA-4整聯(lián)蛋白以小于l(T6 M的Kd結(jié)合的 任何化合物。 一例VLA-4結(jié)合試劑是VLA-4結(jié)合蛋白，例如抗體，如那他 珠單抗。
"VLA-4拮抗劑"是指，至少部分地抑制VLA-4整聯(lián)蛋白的活性、尤其 是VLA-4整聯(lián)蛋白的結(jié)合活性或信號(hào)傳遞活性(例如傳遞VLA-4介導(dǎo)的信 號(hào)的能力)的任何化合物。例如，VLA-4拮抗劑可抑制VLA-4與其關(guān)聯(lián)配體 (例如VCAM-1等細(xì)胞表面蛋白)、或與細(xì)胞外基質(zhì)成分(如纖連蛋白 (fibronectin)或骨橋蛋白(osteopontin))的結(jié)合。典型的VLA-4拮抗劑可結(jié)合 VLA-4或VLA-4配體(例如VCAM-1)或纖連蛋白或骨橋蛋白等胞外基質(zhì)成 分。與VLA-4結(jié)合的VLA-4拮抗劑可以與a4亞基和/或(31亞基結(jié)合。VLA-4 拮抗劑也可以與其它含有a4亞基的整聯(lián)蛋白(如a4p7)或其它含有pi的整 聯(lián)蛋白結(jié)合。VLA-4拮抗劑可以與VLA-4或與VLA-4配體以小于1(T6、10-7、 l(T8、 IO-9或1(T"M的Kd結(jié)合。
本文中術(shù)語"抗體"是指，包括至少 一個(gè)免疫球蛋白可變區(qū)(例如提供免 疫球蛋白可變區(qū)或免疫球蛋白可變區(qū)序列的氨基酸序列)的蛋白。例如，抗 體可包括重鏈(H)可變區(qū)(本文中縮寫為VH)和輕鏈(L)可變區(qū)(本文中縮寫為 VL)。在另一例中，抗體包括兩個(gè)重鏈(H)可變區(qū)和兩個(gè)輕鏈(L)可變區(qū)。術(shù) 語"抗體"涵蓋抗體的抗原結(jié)合片段(如單鏈抗體、Fab片段、F(ab'》片段、Fd 片段、Fv片段、和dAb片段)以及完整抗體，例如完整且未接觸過抗原的 (intact)免疫球蛋白，為IgA, IgG， IgE, IgD， IgM類(及其亞類)。免疫球蛋白輕 鏈可以是kappa (k)或lambda (人)型。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體為糖基化抗體。 抗體可以在抗體-依賴性細(xì)胞毒活性和/或補(bǔ)體介導(dǎo)型細(xì)胞毒活性中發(fā)揮功 能，或者可以在上述一種或全部?jī)煞N活性中無功能。
VH和VL區(qū)還可以進(jìn)一步細(xì)分為，具有高度變異性的區(qū)(稱"互補(bǔ)決定
區(qū)"，"CDR")，其間間隔了相對(duì)較保守的區(qū)(稱"框架區(qū)"，F(xiàn)R)。各個(gè)FR和 各個(gè)CDR的邊界已經(jīng)清楚界定(見Kabat, E.A.， et al. (1991) Sqeuences of Proteins of Immunological Interest, Fz, ￡^/c w， US Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; and Chothia, C. et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917)。本文采用Kabat的指定。每一個(gè)VH和VL通常 由三個(gè)CDR和四個(gè)FR組成，它們從氨基端到羧基端按照以下順序排列 FRl， CDR1， FR2， CDR2, FR3, CDR3, FR4。
"免疫球蛋白區(qū)"是指，免疫球蛋白分子可變區(qū)或恒定區(qū)的區(qū)。免疫球蛋 白區(qū)通常包含兩個(gè)(3-折疊(它們各由約7個(gè)卩鏈形成)和一個(gè)保守二^ 危鍵(見 例如A. F, Williams and A. N. Barclay 1988 Ann. Rev Immunol. 6:381-405》
本文中，"免疫球蛋白可變區(qū)序列"是指，可形成免疫球蛋白可變區(qū)結(jié)構(gòu) 的氨基酸序列。例如，所述序列可包括天然可變區(qū)的全部或部分氨基酸序 列。例如，所述序列可省略l個(gè)、2個(gè)或更多個(gè)N-端或C-端氨基酸、內(nèi)部 氨基酸，可包括一或多個(gè)插入或額外的末端氨基酸，或者可包括其它改變。 在一個(gè)實(shí)施方案中，含有免疫球蛋白可變區(qū)序列的多肽可以與另 一免疫球 蛋白可變區(qū)序列結(jié)合，形成耙結(jié)合結(jié)構(gòu)(或"抗原結(jié)合位點(diǎn)")，例如與VLA-4 相互作用的結(jié)構(gòu)。
抗體的VH或VL鏈還可以包括重鏈恒定區(qū)或輕鏈恒定區(qū)的全部或部 分，以分別形成免疫球蛋白重鏈或輕鏈。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是具有 兩條免疫球蛋白重鏈和兩條免疫球蛋白輕鏈的四聚體。免疫球蛋白重鏈和 輕鏈可以經(jīng)二硫鍵相連。重鏈恒定區(qū)一般包括三個(gè)恒定區(qū)CH1、 CH2和 CH3。輕鏈恒定區(qū)一般包括CL區(qū)。重鏈和輕鏈的可變區(qū)包含與抗原相互作 用的結(jié)合區(qū)?？贵w恒定區(qū)一般介導(dǎo)抗體與宿主組織或因子(包括免疫系統(tǒng)的 多種細(xì)胞(如效應(yīng)細(xì)胞)和經(jīng)典補(bǔ)體系統(tǒng)的第 一種成分(Clq))的結(jié)合。
抗體的一或多個(gè)區(qū)可以人化或有效人化。例如， 一或多個(gè)可變區(qū)可以 人化或有效人化。例如， 一或多個(gè)CDR，例如HC CDR1， HC CDR2, HC CDR3, LC CDR1, LC CDR2,和LC CDR3可以人化。每一輕鏈CDR可以人化。HC CDR3可以人化。 一或多個(gè)框架區(qū)可以人化，例如HC或LC的FRl, FR2, FR3, 和FR4。在一個(gè)實(shí)施方案中，所有框架區(qū)都已經(jīng)人化，例如源自人的體細(xì) 胞，例如生成免疫球蛋白的造血細(xì)胞、或非造血細(xì)胞。 一或多個(gè)恒定區(qū)可人化、或有效人化。在另一實(shí)施方案中，框架區(qū)(如FR1、 FR2、和FR3 一起，或FR1、 FR2、 FR3、和FR4—起)的至少70， 75， 80, 85, 90, 92, 95,或 98%或整個(gè)抗體可以人化或有效人化。例如，F(xiàn)R1，F(xiàn)R2，和FR3—起可以至 少70， 75， 80， 85， 90， 92, 95, 98，或99%與由人的種系節(jié)段(germline segment) 編碼的人的序列相同。
"有效人化，，免疫球蛋白可變區(qū)是，含有足夠數(shù)量的人化框架氨基酸位 置、因而在正常人體內(nèi)不激發(fā)免疫應(yīng)答的免疫球蛋白可變區(qū)。"有效人化" 抗體是，含有足夠數(shù)量的人化框架氨基酸位置、因而不在正常人體內(nèi)激發(fā) 免疫應(yīng)答的抗體。
"人源化"免疫球蛋白可變區(qū)是，經(jīng)過修飾含有足夠數(shù)量的人化框架氨基 酸位置、因而該免疫球蛋白可變區(qū)在正常人體內(nèi)不激發(fā)免疫應(yīng)答。對(duì)"人源 化"免疫球蛋白的描述包括例如美國(guó)專利6,407,213和5,693,762。在一些情 況中，人源化免疫球蛋白可以在一或多個(gè)框架氨基酸位置包含非人氨基酸。
抗體的全部或部分可以由免疫球蛋白基因或其節(jié)段編碼。人免疫球蛋 白基因例3口有kappa, lambda, alpha (IgAl和IgA2)， gamma (IgGl， IgG2， IgG3， IgG4), delta, epsilon和mu恒定區(qū)基因，以及眾多的免疫球蛋白可變區(qū)基因。 全長(zhǎng)免疫球蛋白"輕鏈"(約25 Kd或214個(gè)氨基酸)在NH2-末端(約110個(gè)氨 基酸)由可變區(qū)基因編碼，在COOH-末端由kappa或lambda恒定區(qū)基因編 碼。同樣，全長(zhǎng)免疫球蛋白"重鏈"(約50 Kd或446個(gè)氨基酸)由可變區(qū)基 因(約116個(gè)氨基酸)和上述其它恒定區(qū)基因之一，例如gamma (編碼約330 個(gè)氨基酸)編碼。
術(shù)語全長(zhǎng)抗體的"抗原結(jié)合片段"是指，全長(zhǎng)抗體的 一或多個(gè)保留與目標(biāo) 耙(例如VLA-4)特異性結(jié)合的能力的片段。由術(shù)語全長(zhǎng)抗體的"抗原結(jié)合片 段"所涵蓋的結(jié)合片段的實(shí)例包括(i) Fab片段，是單價(jià)片段，由VL， VH, CL 和CH1區(qū)組成；(ii)F(ab')2片段，是二價(jià)片段，包括兩個(gè)經(jīng)二硫橋在鉸鏈區(qū) 相連的Fab片段；(iii) Fd片段，由VH和CH1區(qū)組成；(iv) Fv片段，由抗 體單臂的VL和VH區(qū)組成；(v) dAb片段(Ward et al., (1989) A^w/r 341:544-546)，由VH區(qū)組成；和(vi)分離的保留功能的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。 此外，盡管Fv片段的VL和VH區(qū)分別由不同基因編碼，但可以利用重組 方法將它們用合成的連接子連接，使它們能夠形成單鏈蛋白，從而其中的 VL和VH區(qū)配對(duì)形成已知為單鏈Fv (scFv)的單價(jià)分子。參見，例如Bird et al. (1988) Science 242:423-426; Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879-5883。
發(fā)明詳述
多發(fā)性硬化
MS可以根據(jù)灶性神經(jīng)功能缺損的多次臨床發(fā)作來診斷，或者根據(jù)與 MRI等輔助測(cè)試所獲得的神經(jīng)病學(xué)損傷支持證據(jù)有時(shí)空間隔的灶性神經(jīng)功 能缺損臨床發(fā)作來診斷(McDonald et al.， Ann. Neurol., 2001， 50:121-7.)。該 McDonald標(biāo)準(zhǔn)使得可以通過MRI中出現(xiàn)的新?lián)p傷及時(shí)確定第二次發(fā)作。該
lesion)或1個(gè)增強(qiáng)型損傷來確立空間散布(dissemination in space)。初始臨床 表現(xiàn)可以是各種各樣的，包括體感改變(somatic sensory change)、視神經(jīng)炎、 或虛弱。為了進(jìn)行真實(shí)的臨床診斷，必須觀察到至少兩次神經(jīng)損害 (neurologic impairment)，且它們必須是在不同時(shí)間的不同次解剖中發(fā)現(xiàn)的。 此外，所述損害必須與MS患者中發(fā)現(xiàn)的損害一致，這通常意味著缺損歷時(shí) 數(shù)日或數(shù)周。本文所述方法可以用于，例如阻止或減緩臨床確定的MS或復(fù) 發(fā)MS的進(jìn)展。
據(jù)估計(jì)，單次神經(jīng)損害發(fā)作后，發(fā)生MS (例如復(fù)發(fā)型MS)的總體風(fēng)險(xiǎn) 從低至12% (Beck et al.， 1993， N. Engl. J. Med. 329:1764-1769)到高至58% (Rizzo et al.， 1988, Neurology 38:185-90)。 MRI已被證明是預(yù)測(cè)MS進(jìn)展最有 效的檢查。在對(duì)有臨床孤立事件的患者進(jìn)行的IO年隨訪研究中，54例MRI 表現(xiàn)異常的患者中有45例(83%)出現(xiàn)臨床MS， 27例MRI表現(xiàn)正常的患者 中只有3例出現(xiàn)MS (O'Riordan et al., 1998, Brain 121(Pt 3):495畫503)。
Tintor6 et al隨訪了 70例有孤立的神經(jīng)事件的患者，平均隨訪時(shí)間是 28.3個(gè)月，還比較了用于診斷MS的各種MRI標(biāo)準(zhǔn)，所述標(biāo)準(zhǔn)是Paty et al.， Fazekas et al.,和Barkhof et al,界定的那些(Tintor6 et al" 2000， AJNR Am. J. Ne畫radiol. 21:702-706; Paty et al" 1988, Neurology 38:180-185; Fazekas et al" 1988， Neurology 38:1822-1825; Barkhof et al., 1997， Brain 120:2059-2069)。 Paty et al.的方法要求有3或4次損傷(其中1次是腦室周(periventricular)損 傷)，他們報(bào)道的敏感性是86%,但特異性只有54%。
Fazekas et al.的標(biāo)準(zhǔn)有同樣的敏感性和特異性。這些標(biāo)準(zhǔn)要求有3次損 傷、以及以下3項(xiàng)特征中的2項(xiàng)幕下位置(infratentorial location)、腦室周 位置、以及損傷大于6mm。 Barkhof的標(biāo)準(zhǔn)要求有1次幕下?lián)p傷，1次近皮 質(zhì)損傷(juxtacortical lesion)、 3次腦室周損傷、以及1次釓增強(qiáng)型損傷或9 次以上損傷，是在T2加權(quán)MRI (T2-weighted MRI)中。這些標(biāo)準(zhǔn)的敏感性是 73%,特異性是73%。故，隨著MS診斷中MRI標(biāo)準(zhǔn)越來越嚴(yán)格，特異性 提高了，但代價(jià)是敏感性降低。
臨床孑瓜立綜合癥(CIS)和單相炎癥疾病(monophasic inflammatory disorder)
單次神經(jīng)學(xué)損傷事件表明患者的情況可以用VLA-4阻斷劑改善。臨床 孤立綜合癥(CIS)是指，檢測(cè)到脫髓鞘或另一種單相型CNS炎癥疾病(例如 脊髓綜合癥、腦干/小腦綜合癥、以及下述其它疾病)的單次臨床發(fā)作。
Frohman et al. (2003) Neurology. 2003 Sep 9;61(5):602-11報(bào)道稱，對(duì)CIS 受試者而言，在T2加權(quán)MRI掃描中，有三個(gè)以上白質(zhì)損傷(尤其當(dāng)其中一 個(gè)位于腦室周區(qū)域時(shí))，是表明此后7-10年內(nèi)發(fā)生CDMS的非常敏感的預(yù) 示指標(biāo)(可預(yù)示>80%的病例)。在隨訪期間掃描(follow-upscan)中，有兩個(gè)以 上處于基線水平的釓(Gd)增強(qiáng)型損傷、以及出現(xiàn)新的T2損傷或新的Gd增 強(qiáng)，也強(qiáng)烈預(yù)示在近期內(nèi)將發(fā)生CDMS。 Dalton et al. (2004) Brain 127(Pt 5):1101-7報(bào)道稱，灰質(zhì)部分容積(grey matter fractional volume, GMF，是顱 內(nèi)總?cè)莘e的一個(gè)部分)的中值降低(mean decrease),表明CIS受試者很可能發(fā) 展成MS。
本文所述VLA-4阻斷劑可以對(duì)CIS受試者施用，例如其用量導(dǎo)致有效 推遲后續(xù)發(fā)作的發(fā)生，例如推遲至少l年、2年、3年或更長(zhǎng)時(shí)間。所述試 劑可以對(duì)在T2加權(quán)MRI掃描中還有至少1、 2、或3處白質(zhì)損傷的CIS受 試者施用，所述損傷之一或多個(gè)可以位于腦室周區(qū)域。所述方法還可包括 定期評(píng)價(jià)受試者，例如通過MRI掃描進(jìn)行評(píng)價(jià)，以便確定可被MRI檢測(cè)到 的損傷數(shù)或灰質(zhì)部分容積的改變。
本文所述VLA-4阻斷劑也可以以治療有效量施用給患有單相型CNS炎 癥疾病(例如橫貫性脊髓炎，視神經(jīng)炎、或急性播散性腦脊髓炎(ADEM))的
堂試者。
脊體祭合癥(S/ /"a/ Coni 5y"(iro膨J
脊髓綜合癥受試者具有與脫髓鞘事件一致的脊髓MRI、并有脊髓病 (myelopathy)的癥狀，例如以下 一 或多種癥狀(a)布朗-塞卡爾綜合癥 (Brown-Sequard syndrome); (b)下肢麻痹禾口/或上肢麻瘠(cr腦l and/or brachial paresis or plegia)(單側(cè)或只又側(cè))；(c)小^更失禁或尿錄留(urinary incontinence or retention); (d)大l更失禁或大i"更4亭滯(fecal incontinence or retention); (e)陣 發(fā)型張力失常(paroxysmal dystonia) ; (f)萊爾米特現(xiàn)象(Lhermitte，s phenomena)。
腐"/1/V、腐祭合癥fS簡(jiǎn)'"Wew/Ore6e〃"r ^"(iro柳e」
對(duì)于腦干/小腦綜合癥受試者，經(jīng)神經(jīng)學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)的異常與經(jīng)神經(jīng)病學(xué) 專家確定的該受試者的癥狀一致。癥狀至少包括以下2種(a)眩暈(vertigo)、 (b)三叉4申經(jīng)痛(trigeminal neuralgia) 、 (c)才亥內(nèi)眼月幾麻痹(internuclear ophthalmoparesis (plegia))、 (d)目艮J求震I貞(nystagmus)、 (e)^展動(dòng)幻^見(oscillopsia) 和復(fù)浮見(diplopia)、 (f)同向或異向注牙見麻痹(conjugate or dysconjugate gaze palsies (paresis))、 (g)交叉運(yùn)動(dòng)綜合癥(crossed motor syndrome)、 (h)交叉感覺 綜合癥(crossed sensory syndrome)、 (i)半面肌痙攣(hemifacial spasm)、 (j)共濟(jì) 失調(diào)(ataxia)、 (k)震顫、(l)構(gòu)音困難(dysarthria)。
《孝賞'絲脊^^/PaWa/ Mje/zto
橫貫性脊髓炎是因橫貫脊髓同一水平或節(jié)段雙側(cè)的炎癥引起的神經(jīng)學(xué) 疾病。炎癥的發(fā)作可以損害或破壞髓磷脂，中斷脊髓中神經(jīng)與機(jī)體其它部 分的聯(lián)絡(luò)。橫貫性脊髓炎的癥狀包括在數(shù)小時(shí)至數(shù)周內(nèi)喪失脊髓功能。始 于下背部突然疼痛、肌肉虛弱、或腳趾和腳的異常感覺的癥狀，可以快速 發(fā)展為更嚴(yán)重的癥狀，包括麻痹、尿潴留、以及腸失控。雖然有些患者可 以從橫貫性脊髓炎恢復(fù)，僅留下 一點(diǎn)點(diǎn)殘余問題或根本沒有任何殘余問題， 但其他患者可以遭受長(zhǎng)期損害，影響他們完成日常生活中常規(guī)任務(wù)的能力。 大多數(shù)患者僅有 一次橫貫性脊髓炎發(fā)作。少數(shù)患者可有復(fù)發(fā)。
橫貫性脊髓炎的一種急性、快速進(jìn)展形式有時(shí)表示(signal)多發(fā)性硬化 (MS)的首次發(fā)作；但研究表明，大多數(shù)橫貫性脊髓炎患者并不發(fā)展為MS。
然而，仍可以在橫貫性脊髓炎患者中篩查MS,因?yàn)楂@得如此診斷的患者可
以要求不同的治療。Partial myelitis可以更常用于預(yù)示MS。
視神經(jīng)炎是服務(wù)于眼部視網(wǎng)膜的視神經(jīng)(顱神經(jīng)II)的一種炎癥，伴有脫 髓鞘。它可以有以下任一種或多種癥狀視力模糊(blurringofvision)、喪失 視敏度(visual acuity)、喪失部分或全部色覺(color vision)、徹底或部分的失 明以及眼后疼痛。70%的病例只有單側(cè)(一只眼)有癥狀。在約20%的MS患 者中，視神經(jīng)炎是MS的最初表現(xiàn)(首次發(fā)作)。視神經(jīng)炎診斷測(cè)試包括，視 覺i秀導(dǎo)電位(visually evoked potential, VEP)測(cè)試和一見覺i秀導(dǎo)反應(yīng)(visually evoked response, VER)測(cè)試，它們檢測(cè)沿視神經(jīng)的神經(jīng)傳遞速度。
視神經(jīng)炎患者可以通過以下一或多種(優(yōu)選全部)癥狀的存在來鑒定(a) 單側(cè)(而非雙側(cè))視神經(jīng)炎；(b)曾有通常與疼痛相伴的突發(fā)失明；(c)有視神經(jīng) 功能紊亂跡象(例如有相對(duì)傳入瞳孔效應(yīng)(relative afferent pupillary effect, RAPD)以及受累眼的視野缺陷)；(d)受累眼的視盤(optic disc)正?；螂厦?但 不蒼白)；(e)才及樣i量斑流出物(macular exudates)、虹月莫(iritism)或3皮璃體 (vitreous)細(xì)胞；(f)經(jīng)檢查沒有可以解釋上述視覺癥狀的任何其它發(fā)現(xiàn)。
,慈^^教t^嫁脊體^ ^D五ikT」
ADEM是一種CNS單相脫髓鞘病， 一般先有病毒性綜合癥或免疫接種。 它可以伴有髓磷脂損失，但軸突相對(duì)較少累及(sparing)。常見有小靜脈周圍 淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)以及脫髓鞘。
MS風(fēng)險(xiǎn)
多發(fā)性硬化病因復(fù)雜。 一或多種因素都可能導(dǎo)致多發(fā)性硬化風(fēng)險(xiǎn)，這 樣的因素包括目前已知的那些，以及本領(lǐng)域技術(shù)人員通過測(cè)定發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì) 學(xué)顯著效應(yīng)的那些。
臨床孤立綜合癥或單相炎癥疾病的表現(xiàn)是一種可以指示受試者有多發(fā) 性硬化風(fēng)險(xiǎn)的事件。風(fēng)險(xiǎn)因素的其它例子可包括，地理位置、環(huán)境因素、 和基因多態(tài)性。環(huán)境因素可包括，在先的用藥和疫苗接種。例如，Hemanet al. (2004, Neurology 63:838-42)報(bào)道稱，接種乙肝疫苗可以導(dǎo)致多發(fā)性硬化
風(fēng)險(xiǎn)。
遺傳因素也可以導(dǎo)致多發(fā)性硬化風(fēng)險(xiǎn)。有很多文獻(xiàn)記載了家族聚集性。
當(dāng)遺傳性家族(genetic family)成員有多發(fā)性硬化時(shí)，多發(fā)性硬化風(fēng)險(xiǎn)也比一 般群體增加約2-40倍。例如，同卵雙胞胎的風(fēng)險(xiǎn)增加20倍。
MS1是指主要組織相容性復(fù)合體。6號(hào)染色體短臂上主要組織相容性復(fù) 合體(MHC)中的HLA-DR2單元型(DRB 1*1501 DQBP0602)是MS中鑒定的 最強(qiáng)遺傳效應(yīng)，在家族和病例-控制研究(case-control studies)中被一貫證實(shí)即 有連鎖又有關(guān)聯(lián)(association)。 Olerup et al (1991) Tissue Antigens 38:1-15。此 外，已有人將MS與一些人類白細(xì)胞抗原(HLA)單元型關(guān)聯(lián)，尤其是與DR2， DR(1*1501), DQ(1*602), DQA102和DW2單元型關(guān)聯(lián)?；蚪M篩查顯示， 有證據(jù)支持在該區(qū)域的連鎖，所有四種基因組篩查的后續(xù)分析(meta-analysis) 將19ql3鑒定為僅次于MHC的最顯著區(qū)域(Barcellos et al.， (1997) JAMA 278:1256-1271; Pericak-Vance et al.， (2001) Neurogenetics 3:195-201)。
Bilinska等報(bào)道稱，CTLA-4基因第一個(gè)外顯子中的特定SNP與MS關(guān) 聯(lián)(ActaNeurol Scand. 2004 Jul;110(l):67-71)。其它可以調(diào)節(jié)多發(fā)性硬化風(fēng)險(xiǎn) 的基因座包括編碼ApoE的基因。見，例如Schmidt et al.， Am. J. Hum. Genet. (2002) 70:708-717。
地理因素和環(huán)境因素也可以導(dǎo)致多發(fā)性硬化風(fēng)險(xiǎn)。例如，Schiffer et al. ((2001) Arch Environ Health. 56(5):389-95)報(bào)道了在Illinois州中北部一個(gè)小 區(qū)域的 一組多發(fā)性硬化(MS)病例，該區(qū)域因有鋅熔爐故屬于重金屬重污染 區(qū)。Pugliatti et al. (Neurology. (2002) 58(2):277-82)發(fā)現(xiàn)，在撒丁島(Sardinia)， 多發(fā)性硬化病例呈不均分布。
^r測(cè)風(fēng)險(xiǎn)因素實(shí)例
腦脊液;險(xiǎn)查可以用于檢測(cè)MS風(fēng)險(xiǎn)。例如， 一個(gè)因素可以表現(xiàn)為CSF IgG 水平增加，例如與基線水平相比或與配對(duì)的健康個(gè)體相比、或表現(xiàn)為CSF IgG比CSF清蛋白的比例增加。見，例如Perkin et al, (1983) J Neurol Sci. 60(3):325-36。例如，IgG指標(biāo)大于或等于0.7可指示異常比例。免疫固定電 泳發(fā)現(xiàn)有不連續(xù)的IgG單一條帶(oligoclonal band),也可以指示MS風(fēng)險(xiǎn)。
將受試者血清與MOG和MBP的重組蛋白接觸，可以4企測(cè)這些蛋白的 抗體。人重組MOG Ig-區(qū)和人髓磷脂衍生的MBP可以按，例如Reindl et al.
(1999) Brain 122: 2047-2056所述制備。例如，可以將1 mg重組MOG-Ig或 2 mg MBP在SDS-PAGE凝膠上電泳，并轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜或nytran膜。 再將這些膜用2。/。奶粉的磷酸鹽緩沖液(PBS)補(bǔ)加0.05% Tween-20 (PBS-T)進(jìn) 行封閉。然后將這些膜與稀釋的受試者血清(在2%奶粉的PBS-T溶液中，IgG 稀釋為1:1000; IgM或IgA稀釋為l:200)接觸。之后，洗膜，并用第二抗體 室溫1小時(shí)進(jìn)行評(píng)估，所述第二抗體例如》成性磷酸酶偶聯(lián)型抗-人IgG, IgM 或IgA (例如，全部是1:5000; G6907, G5204或G5415;全部來自Axell, Westbury, USA)。洗膜后，用合適的堿性磷酸酶檢測(cè)體系(例如氯化四唑?qū)ο?基蘭(p-nitro blue tetrazolium chloride)和5-溴-4-氯-3-口引咮磷酸(都來自Roche Molecular Diagnostics, Mannheim, Germany》斗全觀J ^亥第二4元體。i口果i亥第二4元 體與另外的檢測(cè)試劑偶聯(lián)，則可以相應(yīng)調(diào)整檢測(cè)方案。見，例如Soderstrom et al., Neurology (1998) 50:708- 14。
;現(xiàn)覺誘導(dǎo)電位;險(xiǎn)查也可以用于鑒定MS風(fēng)險(xiǎn)因素。見，例如Cuypers et al.: (1995) Doc Ophthalmol. 90(3):247-57。
VLA-4結(jié)合抗體
那他珠單抗是a4整聯(lián)蛋白結(jié)合抗體，它抑制白細(xì)胞從血液遷移到中樞 神經(jīng)系統(tǒng)。那他珠單抗與活化T細(xì)胞和其它單核白細(xì)胞表面的VLA-4結(jié)合。 它可以破壞T細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞之間的粘附，從而阻止單核白細(xì)胞跨過內(nèi)皮、 進(jìn)入實(shí)質(zhì)(parenchyma)。結(jié)果使促炎細(xì)胞因子水平也下降。
那他珠單抗可以減少復(fù)發(fā)弛張型多發(fā)性硬化和復(fù)發(fā)性繼發(fā)-漸進(jìn)型多發(fā) 性硬化患者的腦損傷數(shù)和臨床復(fù)發(fā)次數(shù)。那他珠單抗可以聯(lián)合干擾素(3-la (IFN卩-la)療法安全地施用于多發(fā)性硬化患者。其它VLA-4結(jié)合抗體可以具 有這些特性或類似特性。
那他珠單抗及相關(guān)VLA-4結(jié)合抗體在例如美國(guó)專利5,840,299中描述。 單克隆抗體21.6和HPl/2是結(jié)合VLA-4的鼠單克隆抗體的例子。那他珠單 抗是鼠mAb 21.6的人源化形式(參見，例如美國(guó)專利5,840,299)。另有文獻(xiàn) 描述了 HP1/2的人源化形式(參見，例如美國(guó)專利6，602，503)。其它數(shù)種結(jié)合 VLA-4的單克隆抗體，如HP2/1、 HP2/4、 L25和P4C2,都有文獻(xiàn)描述(參 見例^口美國(guó)專利6,602,503; Sanchez-Madrid et al.， 1986 Eur. J. Immunol" 16:1343-1349; Hemler et al,, 1987 J.Biol. Chem. 2:11478-11485; Issekutz and
Wykretowicz， 1991, J. Immunol" 147: 109 (TA-2 mab); Pulido et al.， 1991 J. Biol. Chem.， 266(16): 10241-10245;美國(guó)專利5,888,507)。
一些VLA-4結(jié)合抗體識(shí)別a4亞基上參與結(jié)合關(guān)聯(lián)配體(如VCAM-1或 纖連蛋白)的表位。多個(gè)這種抗體抑制與關(guān)聯(lián)配體(如VCAM-1和纖連蛋白) 的結(jié)合。
一些有用的VLA-4結(jié)合抗體與細(xì)胞(例如淋巴細(xì)胞)表面VLA-4相互作 用，但不引起細(xì)胞聚集。而另一些抗VLA-4結(jié)合抗體被發(fā)現(xiàn)引起這類聚集。 HP1/2不引起細(xì)胞聚集。HP1/2 MAb (Sanchez-Madrid et al., 1986)具有很高的 活性，它阻斷VLA-4與VCAM-1和纖連蛋白兩者的相互作用，并對(duì)VLA-4 表面的表位B具有特異性。該抗體及其它B表位特異性抗體(如Bl或B2 表位結(jié)合抗體；Pulido et al., 1991，出處同上)代表了 一類有用的VLA-4結(jié)合 抗體。
一例VLA-4結(jié)合抗體具有本文所述具體抗體的一或多個(gè)CDR,例如全 部三個(gè)HC CDR和/或全部三個(gè)LC CDR，或具有與這種抗體(例如那他珠單 抗)總體上至少80, 85, 90, 92, 94， 95， 96, 97, 98, 99%相同的CDR。在一個(gè)實(shí) 施方案中，HI和H2超變環(huán)具有與本文所述抗體的超變環(huán)相同的典型結(jié)構(gòu) (canonical structure),在一個(gè)實(shí)施方案中，LI和L2超變環(huán)具有與本文所述 抗體的超變環(huán)相同的典型結(jié)構(gòu)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，HC和/或LC可變區(qū)的氨基酸序列至少70， 80， 85， 90: 92， 95， 97, 98, 99,或100%與本文所述抗體(例如那他珠單抗)的HC和/或LC 可變區(qū)的氨基酸序列相同。HC和/或LC可變區(qū)的氨基酸序列可以有至少一 個(gè)氨基酸、但最多不超過IO、 8、 6、 5、 4、 3、或2個(gè)氨基酸不同于本文所 述抗體(例如那他j朱單抗)的相應(yīng)序列。例如，這種差別可以主要或全部位于
框架區(qū)。
HC和LC可變區(qū)的氨基酸序列，可以由在嚴(yán)格條件下與本文所述核酸 序列雜交的序列編碼，或者由編碼本文所述可變區(qū)或氨基酸序列的核酸序 列編碼。在一個(gè)實(shí)施方案中，HC和/或LC可變區(qū)的一或多個(gè)框架區(qū)(如FR1, FR2， FR3和/或FR4)的氨基酸序列有至少70， 80, 85， 90， 92, 95， 97, 98， 99,或 100%與本文所述抗體的HC和LC可變區(qū)的相應(yīng)框架區(qū)相同。在一個(gè)實(shí)施 方案中， 一或多個(gè)重鏈或輕鏈框架區(qū)(如HCFR1，F(xiàn)R2和FR3)有至少70,80， 85, 90， 95， 96， 97, 98，或100%與人種系抗體的相應(yīng)框架區(qū)序列相同。
兩個(gè)序列之間的"同源性"或"序列同 一性"(這兩個(gè)術(shù)語在本文中可互換 使用)如下計(jì)算。對(duì)序列按照最佳比較的目的進(jìn)行比對(duì)(如，為了進(jìn)行最佳比 對(duì)，可以在兩個(gè)氨基酸序列或核酸序列之一或兩者中引入空隙；為了進(jìn)行
比較，可以忽略非同源序列)。最佳比對(duì)用GCG軟件包中的GAP程序評(píng)出 的最佳分值來確定，在該GAP程序中，使用Blossum62評(píng)分矩陣，空隙罰 分為12，空隙延伸罰分為4，移碼空隙罰分(frameshiftgappenalty)為5。然 后比較相應(yīng)氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸殘基或核香酸。當(dāng)?shù)谝粋€(gè)序 列中的一個(gè)位置與第二個(gè)序列中的相應(yīng)位置被相同的氨基酸殘基或核苷酸 占據(jù)時(shí)，這兩個(gè)分子在該位置是相同的(本文中，氨基酸或核酸"同一性"等 同于氨基酸或核酸"同源性")。兩個(gè)序列之間的同 一性百分比是這兩個(gè)序列 所共有的相同位置的數(shù)量的函數(shù)。
本文中術(shù)語"在嚴(yán)格條件下雜交"是指雜交和洗滌條件。雜交反應(yīng)可參照 C^/re/^ /Vo oco/s z." Afo/ecw/(3r 5/o/ogy， John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6進(jìn)行，其全文引入本文作參考。該文獻(xiàn)中描述了水性(aqueous)和 非水性(non叫ueous)的方法，它們都可以被采用。高度嚴(yán)格雜交條件包括， 在6XSSC、約45。C雜交，然后在0.2XSSC、 0.1%SDS、 65。C洗一或多次， 或者采用基本相似的條件。
可以測(cè)試抗體的功能特征，例如VLA-4結(jié)合特征，例如參見美國(guó)專利 6,602,503。
抗體生成(Antibody Generation)
與VLA-4結(jié)合的抗體可以通過免疫(例如用動(dòng)物進(jìn)行免疫)而生成。 VLA-4的全部或一部分可以用作免疫原。例如，可以用a4亞基的胞外區(qū)作 免疫原。在一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)免疫的動(dòng)物含有產(chǎn)生免疫球蛋白的細(xì)胞， 這些細(xì)胞具有天然的、人化的或部分人化的免疫球蛋白基因座。在一個(gè)實(shí) 施方案中，所述非人動(dòng)物具有人免疫球蛋白基因的至少一部分。例如，可 以用人Ig基因座的大片段對(duì)抗體生成有缺陷的小鼠品系進(jìn)行改造?？梢杂?雜交瘤技術(shù)從具有所需特異性的基因生成并篩選出抗原特異性單克隆抗 體。參見，例如XenoMouseTM, Green et al., Nature Genetics 7:13-21 (1994), US 2003-0070185,美國(guó)專利5,789,650，以及WO 96/34096。
還可以產(chǎn)生抗VLA-4的非人抗體，例如嚙齒類抗體。可以將這種非人
抗體人源化，例如參見美國(guó)專利6,602,503， EP 239 400,美國(guó)專利5,693,761， 和美國(guó)專利6,407,213。
EP 239 400 (Winter et al.)描述了通過將一個(gè)物種的抗體的互補(bǔ)決定區(qū) (CDR)用另一物種的CDR取代，從而改變(在指定的可變區(qū)改變)抗體的方 法。CDR-取代型抗體預(yù)計(jì)比真正的嵌合抗體較少激發(fā)人的免疫應(yīng)答，因?yàn)?CDR-取代型抗體中的非人成分很少(Riechmann et al.， 1988， Nature 332, 323-327; Verhoeyen et al., 1988, Science 239, 1534-1536)。通常利用重組核酸 技術(shù)，將鼠抗體的CDR取代為人抗體的相應(yīng)區(qū)，產(chǎn)生編碼所需取代型抗體 的序列?？梢蕴砑泳哂兴瑾?dú)特型的人恒定區(qū)基因節(jié)段(通常是CH的 gamma I和CL的kappa)，并使人源化的重鏈基因和輕鏈基因在哺乳動(dòng)物細(xì) 胞中一起表達(dá)，從而產(chǎn)生可溶性人源化抗體。
Queen et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 86:10029-33， 1989)和WO 90/07861描述了一種方法，其包括，通過利用計(jì)算機(jī)分析與原始鼠抗體的V 區(qū)框架的最佳蛋白序列同源性，來選擇人V區(qū)框架區(qū)，并建立鼠V區(qū)的三 級(jí)結(jié)構(gòu)模型，從而顯示出很可能與鼠CDR相互作用的框架氨基酸殘基。然 后將這些鼠氨基酸殘基置于同源人框架之上。也參見美國(guó)專利5，693，762; 5,693,761; 5,585,089;和5,530,101。 Tempest et al. (1991, Biotechnology 9: 266-271)利用分別源自NEWM和REI重鏈和輕鏈的V區(qū)框架作為標(biāo)準(zhǔn)，在 不引進(jìn)鼠殘基的情況下，進(jìn)行CDR-移植。用Tempest et al.方法構(gòu)建基于 NEWM和REI的人源化抗體的一個(gè)好處在于，NEWM和REI的可變區(qū)的三 維結(jié)構(gòu)已通過X-線晶體成像技術(shù)弄清楚了 ，因而可以針對(duì)CDR和V區(qū)框 架殘基之間的特異性相互作用建立模型。
非人抗體可以經(jīng)過修飾而包括插入人免疫球蛋白序列的取代，例如在 具體位置的共有的人氨基酸殘基，例如以下一或多個(gè)(優(yōu)選至少5, 10， 12， 或全部)位置(在輕鏈可變區(qū)的FR中)4L， 35L, 36L, 38L, 43L， 44L, 58L, 46L， 62L， 63L, 64L， 65L, 66L， 67L， 68L， 69L, 70L， 71L， 73L, 85L， 87L, 98L,和/或 (在重鏈可變區(qū)的FR中)2H， 4H， 24H, 36H, 37H, 39H， 43H， 45H, 49H， 58H， 60H， 67H， 68H, 69H, 70H， 73H， 74H， 75H， 78H， 91H， 92H, 93H,和/或103H (遵循Kabat編號(hào))。參見，例如美國(guó)專利6，407，213 。
與VLA-4結(jié)合的完全的人單克隆抗體可以利用例如體外刺激(in vitro-primed)的人脾細(xì)月包來制備，參見Boerner et al., 1991， J. Immunol., 147, 86-95。它們可以通過所有組分克隆(repertoire cloning)來制備，參見Persson et al., 1991, Pro" Nat. Acad. Sci. USA, 88: 2432-2436或Huang and Stollar， 1991, J. Immunol. Methods 141,227-236;以及美國(guó)專利5，798，230。大型非致 敏人噬菌體展示文庫也可以用于分離高親和力抗體，將它們研發(fā)為人類治 療劑，這可以利用標(biāo)準(zhǔn)噬菌體技術(shù)(參見，例如Vaughan et al, 1996; Hoogenboom et al. (1998) Immunotechnology 4:1-20; Hoogenboom et al, (2000) Immunol Today 2:371-8; US 2003-0232333)。
抗體制備(Antibody Production)
抗體可以在原核細(xì)胞和真核細(xì)胞中產(chǎn)生。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體(如 scFv)在畢赤酵母(尸/c/z/a)(參見，例如Powers et al. (2001) J Immunol Methods. 251:123-35)、漢遜酵母(7/flraw/a)或糖酵母CSacc/2aram;;c&s)等酵母細(xì)胞中表達(dá)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體，尤其是全長(zhǎng)抗體，例如IgG,在哺乳動(dòng)物細(xì) 胞中生成。用于重組表達(dá)的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞例如有，中國(guó)倉鼠卵巢(CHO 細(xì)胞)(包括dhfr- CHO細(xì)胞，見Urlaub et al (1980) Pro" Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216-4220,使用DHFR選擇標(biāo)記，例如見Kaufman et al (1982) Mol. Biol. 159: 601-621)、淋巴細(xì)胞系例如NS0骨髓瘤細(xì)胞和SP2細(xì)胞、COS細(xì)胞、 K562、以及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物)的細(xì)胞。例如，所述細(xì)胞是哺 乳動(dòng)物上皮細(xì)胞。
重組表達(dá)載體除了攜帶編碼免疫球蛋白區(qū)的核酸序列，還可以攜帶其 它序列，如調(diào)節(jié)該載體在宿主細(xì)胞中的復(fù)制的序列(如復(fù)制起點(diǎn))和選擇標(biāo)記 基因。選擇標(biāo)記基因有利于選出引入了所述載體的宿主細(xì)胞(參見，例如美 國(guó)專利4,399,216,4,634,665和5,179,017)。選擇標(biāo)記基因例如有，二氫葉酸 還原酶(DHFR)基因(其利用氨曱蝶呤選擇/擴(kuò)增W/r—宿主細(xì)胞)和neo基因 (其用于G418篩選)。
在一例抗體(如全長(zhǎng)抗體或其抗原結(jié)合部分)重組表達(dá)系統(tǒng)中，將編碼抗 體重鏈和抗體輕鏈兩者的重組表達(dá)載體，通過磷酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染，引入d/ /K CHO細(xì)胞。在該重組表達(dá)載體中，抗體的重鏈和輕鏈基因各自與增強(qiáng)子/
啟動(dòng)子調(diào)節(jié)元件(如源自SV40、 CMV、腺病毒等，諸如CMV增強(qiáng)子/AdMLP 啟動(dòng)子調(diào)節(jié)元件或SV40增強(qiáng)子/AdMLP啟動(dòng)子調(diào)節(jié)元件)可操作相連，以便 驅(qū)動(dòng)所述基因的高水平轉(zhuǎn)錄。所述重組表達(dá)載體還可以攜帶DHFR基因， 其允許用氨曱蝶呤選擇/擴(kuò)增轉(zhuǎn)染了所述載體的CHO細(xì)胞。對(duì)選出的轉(zhuǎn)化宿 主細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，使之表達(dá)抗體重鏈和輕鏈，并從培養(yǎng)基中回收完整抗體。 用標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)技術(shù)制備所述重組表達(dá)載體，來轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，選出轉(zhuǎn) 化體，培養(yǎng)宿主細(xì)胞，并從培養(yǎng)基中回收抗體。例如， 一些抗體可以利用 蛋白A或蛋白G通過親和層析進(jìn)行分離。美國(guó)專利6,602,503也描述了表達(dá) 和純化VLA-4結(jié)合抗體的方法的實(shí)例。
抗體還可以包含修飾，例如改變Fc功能的修飾，從而例如減弱或消除 與Fc受體和/或與Clq的相互作用。例如，人IgGl恒定區(qū)可以突變一或多 個(gè)殘基，例如殘基234和237的一或多個(gè)，編號(hào)例如見美國(guó)專利5,648,260。 其它修飾例子可參見美國(guó)專利5,648,260。
對(duì)于一些含F(xiàn)c區(qū)的抗體，可以設(shè)計(jì)抗體制備系統(tǒng)，來合成含糖基化Fc 區(qū)的抗體。例如，IgG分子的Fc區(qū)在CH2區(qū)的天冬酰胺297處糖基化。該 天冬酰胺是用雙觸角型寡糖(biantennary-type oligosaccharide)進(jìn)行修飾的位 置。這種糖基化參與Fcy受體和補(bǔ)體Clq所介導(dǎo)的效應(yīng)器功能(Burton and Woof (1992) Adv. Immunol. 51:1-84; Jefferis et al. (1998) Immunol. Rev. 163: 59-76)。 Fc區(qū)可以在哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)中產(chǎn)生，/人而佳_對(duì)應(yīng)于天冬酰胺 297的殘基適當(dāng)糖基化。Fc區(qū)也可以包含其它的真核細(xì)胞翻譯后修飾。
抗體也可以由轉(zhuǎn)基因動(dòng)物產(chǎn)生。例如，美國(guó)專利5,849,992描述了在轉(zhuǎn) 基因哺乳動(dòng)物乳腺中表達(dá)抗體的方法。構(gòu)建轉(zhuǎn)基因，使其含有乳特異性啟 動(dòng)子、編碼目標(biāo)抗體的核酸序列，以及用于分泌的信號(hào)序列。由這類轉(zhuǎn)基 因哺乳動(dòng)物中的雌性動(dòng)物產(chǎn)出的乳汁含有分泌至其中的目標(biāo)抗體。所述抗 體可以從乳汁中純化出來，或在一些應(yīng)用中，不經(jīng)純化而直接使用。
抗體還可以用例如改進(jìn)其在循環(huán)(如血液、血清、'淋巴)、支氣管肺泡灌 洗液或其它組織中的穩(wěn)定性和/或滯留時(shí)間的組分(moiety)進(jìn)行修飾，所述改 進(jìn)例如是改進(jìn)至少1.5、 2、 5、 10、或50倍。
例如，VLA-4結(jié)合抗體可以與聚合物結(jié)合，所述聚合物例如基本上無 抗原性的聚合物，如聚環(huán)氧烷烴(polyalkylene oxide)或聚環(huán)氧乙烷 (polyethylene oxide)。合適的聚合物分子量可以差別很大?？梢圆捎梅肿恿?br> 平均約200-約35,000道爾頓(或約1,000-約15,000、以及2,000-約12,500)
的聚合物。
例如，VLA-4結(jié)合抗體可以與水溶性聚合物偶聯(lián)，所述聚合物例如親 水聚乙烯聚合物，如聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮。這類聚合物的非限制性 例子有，聚環(huán)氧烷烴均聚物如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇、聚氧乙烯化多元 醇(polyoxyethylenatedpolyols)、它們的共聚物和嵌段共聚物，只要維持所述 嵌段共聚物的水溶性即可。其它可用的聚合物包括，聚氧化烯 (polyoxyalkylenes) 3口聚氧4匕乙歸(polyoxyethylene)、 聚氧4匕丙烯 (polyoxypropylene)、以及聚氧化乙烯和聚氧化丙烯的嵌段共聚物(Pluronics); 聚曱基丙烯酸酯(polymethacrylates);丙烯酸共聚物(carbomer);含有以下單 糖的分支或非分支多糖D-甘露糖、D-及L-半乳糖、巖藻糖(fbcose)、果糖、 D-木糖(xylose)、 L-阿拉伯糖、D-葡糖醛酸(glucuronic acid)、唾液S臾(sialic acid)、 D-半享L^唐趁酉吏(galacturonic acid)、 D-甘露4唐趁酸(mannuronic acid) 聚甘露糖醛酸或藻酸(alginic acid))、 D-葡糖胺(glucosamine)、 D-半乳糖胺 (galactosamine) 、 D-葡萄糖和神經(jīng)氨酸(neuraminic acid)包括同多糖 (homopolysaccharide)和雜多糖(heteropolysaccharide)如乳糖、支鏈淀粉 (amylopectin)、淀粉(starch)、羥乙基淀粉、直鏈淀粉(amylose)、硫酸葡聚糖 (dextrane sulfate)、葡聚糖(dextran)、糊精(dextrin)、糖原(glycogen),或酸性 粘多糖(acid mucopolysaccharide)的多糖亞基，如透明質(zhì)酸(hyaluronic acid); 糖醇聚合物如聚山梨糖醇(polysorbitol)和聚甘露糖醇(polyma皿itol);肝素 (heparin)或heparon。
藥物組合物
VLA-4阻斷劑，如VLA-4結(jié)合抗體(如那他J朱單抗)可以配制成藥物組 合物。藥物組合物通常含有可藥用載體。本文中"可藥用載體，，包括任何及所 有溶劑、分散介質(zhì)(dispersionmedia)、包衣(coating)、抗細(xì)菌劑和抗真菌劑、 等滲劑和吸收延遲劑、以及其它生理相容性試劑。
"可藥用鹽"是指，保留母體化合物的所需活性且不引起任何不良毒性的 鹽(參見，例如Berge， S.M.， et al. (1977) J, Pharm. Sci, 66:1-19)。這樣的鹽例 如有，酸加成鹽和堿加成鹽。酸加成鹽包括，由無毒性無機(jī)酸和無毒性有 機(jī)酸衍生的鹽，所述無機(jī)酸如鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸(sulfuricacid)、氫溴酸、氫碘酸、亞磷酸(phosphorousacid)等，所述有機(jī)酸如脂肪族一羧酸和二 叛酸(aliphatic mono- and dicarboxylic acid)、 笨基耳又4義的鏈火克酉交 (phenyl-substituted alkanoic acid)、羥基鏈烷酸、芳香酸(aromatic acid)、月旨肪 力矣禾口芳香力臭石黃酸(aliphatic and aromatic sulfonic acid)等。石咸力口成鹽包4舌，由石威 土金屬和無毒性有機(jī)胺衍生的鹽，所述堿土金屬如鈉、鉀、鎂、鈣等，所 述有機(jī)胺如N,N'-二千基乙二胺(dibenzylethylenediamine)、 N-曱基還原葡糖 胺(methylglucamine)、氯普魯卡因(chloroprocaine)、月旦石威(choline)、 二乙醇胺 (diethanolamine)、 乙二胺(ethylenediamine)，普魯卡因(procaine)等。
那他珠單抗及本文所述其它試劑可按標(biāo)準(zhǔn)方法配制。藥物配制是本領(lǐng) i或4艮成熟的沖支術(shù)，可參見Gennaro (ed.)， Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th ed., Lippincott， Williams & Wilkins (2000) (ISBN: 0683306472》Ansel et al.， Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th Ed.， Lippincott Williams & Wilkins Publishers (1999) (ISBN: 0683305727); Kibbe (ed.), Handbook of Pharmaceutical Excipients American Pharmaceutical Association, 3rd ed. (2000) (ISBN: 091733096X)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，VLA-4阻斷劑，如VLA-4結(jié)合試劑(如那他珠單抗) 可以與賦形劑(excipient)物質(zhì)一起配制，所述賦形劑物質(zhì)如氯化鈉、七水磷 酸氬二鈉(sodium dibasic phosphate heptahydrate)、石粦酸二氬鈉(sodium monobasic phosphate)、以及polysorbate 80。它可以是例如緩沖溶液中約 20mg/ml的濃度，并可以貯存在2-8。C。那他珠單抗(TYSABRI⑧)可以按產(chǎn) 品標(biāo)簽所注進(jìn)行配制。
藥物組合物還可以是多種其它形式。例如，液體、半固體及固體劑型， 如i容'液(如注射液和灌注液)、分散體(dispersion)或懸浮'液(suspension)、片劑、 丸劑、粉劑、脂質(zhì)體和栓劑。優(yōu)選形式可以取決于用藥模式和治療目的。 通常，本文所述試劑的組合物釆用注射液或灌注液的形式。
所述組合物可以經(jīng)非胃腸道途徑施用(如靜脈、皮下、腹腔、或肌肉注 射)。術(shù)語"非胃腸道施用，，在本文中是指，除了腸道施用和局部表面施用以 外的施用模式，通常經(jīng)注射而施用，包括但不限于經(jīng)以下模式注射和輸注 l爭(zhēng)內(nèi)(intravenous)、月幾肉內(nèi)(intramuscular)、 動(dòng)月永內(nèi)(intraarterial)、 鞘內(nèi) (intrathecal)、 嚢內(nèi)(intracapsular)、目艮0匡內(nèi)(intraorbital)、 心內(nèi)(intracardiac)、 皮內(nèi)(intradermal)、 腹月空(intraperitoneal)、 經(jīng)氣管(transtracheal)、 皮下(subcutaneous)、 表皮下(subcuticular)、 關(guān)節(jié)內(nèi)(intraarticular) 、 #皮月莫下 (subcapsular)、蟲朱網(wǎng)月莫下(subarachnoid)、脊4主內(nèi)(intraspinal)、石更月莫夕卜(epidural) 以及胸骨內(nèi)(intrasternal)。
藥物組合物通常必須是無菌的，且在制備和貯存條件下保持穩(wěn)定。也 可以對(duì)藥物組合物進(jìn)行測(cè)試，以確保它符合用藥規(guī)定和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。
可以將組合物配制成溶液、微乳液、分散體、脂質(zhì)體或其它適于藥物 高濃度的有序結(jié)構(gòu)。將需要量的活性化合物，與所需的一或多種上文所列 的成分一起，摻入合適的溶劑中，再過濾除菌，可以制得無菌注射液。通
菌媒介物(vehicle)中，可制得分散體。在制備無菌注射液所用的無菌粉末的 情況下，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和凍干，產(chǎn)生活性成分和任何其它所 需成分的粉末，所述其它所需成分來自其事先經(jīng)過過濾除菌的溶液。溶液 的適當(dāng)流動(dòng)性(properfluidity)可以通過以下方法維持，例如，利用卯磷脂之 類的包衣、在分散體的情況下維持所需的粒徑(particlesize)、以及利用表面 活性劑。注射組合物通過在組合物中包含硬脂酸鹽和明膠之類的延遲吸收 劑，可延長(zhǎng)吸收時(shí)間。
用藥
VLA-4阻斷劑，如VLA-4結(jié)合抗體(如那他珠單抗)可以經(jīng)多種方法對(duì) 受試者(例如人類受試者)用藥。在多種應(yīng)用中，用藥途徑是以下之一靜脈 注射或輸注、皮下注射、或肌肉注射。VLA-4阻斷劑，如VLA-4結(jié)合抗體 (如那他珠單抗)可以按固定劑量(fixed dose)施用，或者按mg/kg劑量施用， 但優(yōu)選按固定劑量施用。所述抗體可以靜脈(IV)或皮下(SC)施用。
VLA-4阻斷劑，如VLA-4結(jié)合抗體(如那他珠單抗)可以按50-1000 mg IV，例如100-600 mg IV,例如約300 mg IV的固定單位劑量(fixed unit dose) 施用?？梢悦?周施用一個(gè)單位劑量(unitdose)，或采用更高或更低的頻率， 例如每2周一次或每周一次。當(dāng)皮下施用時(shí)，所述抗體通常按50-100 mgSC (如75 mg)的劑量施用例如至少一周一次(如一周兩次)。也可以按l-10mg/kg (例如約6.0, 4.0, 3.0， 2.0, 1.0 mg/kg)的劑量以快速輸注(bolus)的形式施用。在 一些情況下，可以進(jìn)行連續(xù)用藥，例如經(jīng)皮下泵進(jìn)行連續(xù)用藥。
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也可以選用減少或避免抗VLA-4結(jié)合抗體的抗體生成的劑量，以實(shí)現(xiàn)
a4亞基的40, 50, 70, 75，或80%以上飽和度，或?qū)崿F(xiàn)a4亞基的80, 70, 60, 50, 或40°/。以下飽和度，或阻止循環(huán)白細(xì)胞量增加。
此外，不具有臨床確定的多發(fā)性硬化的受試者可以施用比具有臨床確 定的多發(fā)性石更化的受試者減量(reduced dose)的VLA-4阻斷劑，例如VLA-4 結(jié)合抗體，例如那他珠單抗。例如，對(duì)于有風(fēng)險(xiǎn)但未實(shí)際患有臨床確定的 多發(fā)性硬化的受試者，可以按20-300 mg IV ，例如20-150 mg IV (例如每4 周1次)、或者20-70或20-40 mg SC (例如約35 mg),例如至少1周1次的 固定劑量，施用VLA-4阻斷劑，例如VLA-4結(jié)合抗體，例如那他珠單抗。
在一些實(shí)施方案中，活性試劑可以與保護(hù)該化合物免于快速釋放的載 體(carrier)—起配制，如控釋配制劑，包括植入體(implant)，泵，以及微嚢 遞送體系(microencapsulated delivery system)?？梢源缋粲蒙锟山到獾纳餂_目 容性聚合物，如乙烯乙酸乙酯(ethylene vinyl acetate)、聚酸酐(polyanhydride)、 聚乙醇酸(polyglycolic acid)、月交原(collagen)、聚原酸酯(polyorthoester)和聚 乳酸(polylactic acid)。制備這類配制劑的多種方法有專利或者是眾所周知 的。參見,例Jt口 Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978。
藥物組合物可以利用醫(yī)療設(shè)備來施用。例如，藥物組合物可以用無針 式皮下注射i殳備(needleless hypodermic injection device)來施用,所述i殳備參 見例如美國(guó)專利5,399,163， 5,383,851, 5,312,335, 5，064，413， 4,941,880， 4，790,824或4,596,556。眾所周知的植入體和模塊(module)有美國(guó)專利 4,487,603公開了 一種可植入的顯微-輸注泵，用于以控制速率分配 (dispensing)藥物；美國(guó)專利4,486,194公開了 一種治療設(shè)備，用于穿過皮膚 施用藥物；美國(guó)專利4,447,233公開了一種藥物輸注泵，用于以精確的輸注 速率遞送藥物；美國(guó)專利4,447,224公開了一種可變流植入型輸注裝置，用 于連續(xù)遞送藥物；美國(guó)專利4,439,196公開了一種滲透型藥物遞送體系，其 具有多室隔間(multi-chamber compartment);美國(guó)專利4，475， 196公開了 一種 滲透型藥物遞送體系。當(dāng)然，另有多種這類植入體、遞送體系和模塊也是 本領(lǐng)i或已知的。
可以對(duì)劑量方案(dosage regimen)進(jìn)行調(diào)整，以產(chǎn)生所需反應(yīng)，例如治療 反應(yīng)或組合治療效應(yīng)(combinatorial therapeutic effect)。本文中，單位劑型 (Dosage unit form)或"固定劑量(fixed dose)"是指物理離散單位，是適合對(duì)受 治受試者施用的單次藥劑(unitary dosage);每一單位含有預(yù)定量的活性化合 物和所需的藥用載體，還可以任選含有其它試劑，所述活性化合物的預(yù)定 量是經(jīng)過計(jì)算可以產(chǎn)生所需治療效應(yīng)的量。
藥物組合物可以包含"治療有效量"的本文所述試劑。試劑的治療有效 量也可以因個(gè)體的疾病狀態(tài)、年齡、性別、體重，以及該化合物在該個(gè)體 體內(nèi)激發(fā)所需反應(yīng)的能力等因素而有不同，所述能力例如調(diào)節(jié)風(fēng)險(xiǎn)因素， 推遲神經(jīng)功能缺損臨床發(fā)作的發(fā)生或減輕其嚴(yán)重程度，改進(jìn)至少一個(gè)疾病 參數(shù)，例如多發(fā)性硬化參數(shù)，或改進(jìn)該疾病(例如多發(fā)性硬化)的至少一種癥 狀。治療有效量也可以是，治療有益效果超過該組合物的任何毒副作用或 有害作用的量。
聯(lián)合治療(Combination Therapy)
在一些實(shí)施方案中，對(duì)受試者，例如有多發(fā)性硬化風(fēng)險(xiǎn)的受試者，例 如本文所述受試者，可以將第二種試劑與VLA-4阻斷劑，例如VLA-4結(jié)合 抗體，例如那他珠單抗聯(lián)用?？梢耘cVLA-4阻斷劑聯(lián)用以治療或防止多發(fā) 性硬化的試劑的非限制性實(shí)例可參見未結(jié)案申請(qǐng)U.S.S.N. 60/603,468 ，其于 2004年8月20日提交，代理人案號(hào)(attorney docket number) 10287-087P01/ P0608 ，標(biāo)題為"Combination Therapy"。
本文中所有專利申請(qǐng)、專利、參考文獻(xiàn)和出版物都引入做參考。 其它實(shí)施方案都包括在后續(xù)權(quán)利要求的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.對(duì)有復(fù)發(fā)或漸進(jìn)型多發(fā)性硬化風(fēng)險(xiǎn)的受試者進(jìn)行治療的方法，包括對(duì)該受試者施用VLA-4結(jié)合抗體。
2. 權(quán)利要求1的方法，其中所述受試者經(jīng)歷一次灶性神經(jīng)功能缺損的 臨床發(fā)作。
3. 權(quán)利要求2的方法，其中所述抗體在所述臨床發(fā)作的4周內(nèi)施用。
4. 權(quán)利要求2的方法，其中所述神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)為選自下組的一或 多個(gè)癥狀四肢中一或多肢虛弱、四肢中一或多肢麻痹、四肢中一或多肢 震顫、失控型肌肉痙攣、感覺喪失或異常、協(xié)調(diào)性降低、平衡能力喪失、 抽象思維能力喪失、歸納能力喪失、講話困難、言語理解困難、單目或雙 目失明(monocular or binocular visual loss)、 以及大或小《更失禁(bladder or bowel discontrol)。
5. 權(quán)利要求1的方法，其中所述受試者經(jīng)顱部掃描顯示腦組織炎癥或 髓鞘受損的身體證據(jù)。
6. 權(quán)利要求5的方法，其中所述顱部掃描選自X線照片掃描、計(jì)算 機(jī)輔助體層攝影(CT)掃描，和磁共振成像(MRI)掃描。
7. 權(quán)利要求5的方法，其中所述受試者經(jīng)MRI測(cè)出有l(wèi)-50處腦損傷。
8. 權(quán)利要求1的方法，其中所述受試者有抗髓少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白 (MOG)和髓磷脂堿性蛋白(MBP)之一或兩者的血清抗體。
9. 權(quán)利要求5的方法，其中所述受試者經(jīng)歷一次神經(jīng)功能缺損臨床發(fā)作。
10. 權(quán)利要求5的方法，其中所述受試者未經(jīng)歷神經(jīng)功能缺損臨床發(fā)作。
11. 權(quán)利要求8的方法，其中所述受試者經(jīng)歷一次神經(jīng)功能缺損臨床發(fā)作。
12. 權(quán)利要求8的方法，其中所述受試者未經(jīng)歷神經(jīng)功能缺損臨床發(fā)作。
13. 權(quán)利要求1的方法，其中所述受試者未經(jīng)歷灶性神經(jīng)功能缺損的臨 床發(fā)作、且具有一或多個(gè)以下特征(a)經(jīng)顱部掃描發(fā)現(xiàn)有多處大于或等于3 mm的腦損傷或疤痕， (b) 有抗髓少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(MOG)和髓磷脂堿性蛋白(MBP)之一或兩者的血清抗體，(c) 與陰性對(duì)照相比，CSFIgG水平增加，和(d) 與陰性對(duì)照相比，髓磷脂堿性蛋白(MBP)水平增加。
14. 權(quán)利要求1的方法，其中所述受試者經(jīng)歷一次灶性神經(jīng)功能缺損的 臨床發(fā)作、且具有一或多個(gè)以下特征(a) 經(jīng)顱部掃描發(fā)現(xiàn)有多處大于或等于3 mm的腦損傷或疤痕，(b) 有抗髓少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(MOG)和髓磷脂堿性蛋白(MBP)之一或 兩者的血清抗體，(c) 與陰性對(duì)照相比，CSFIgG水平增加，和(d) 與陰性對(duì)照相比，髓磷脂堿性蛋白(MBP)水平增加。
15. 權(quán)利要求l的方法，還包括，在用藥之前，基于以下一或多項(xiàng)選出 有MS風(fēng)險(xiǎn)的受試者(a)顱部掃描顯示髓鞘受損、(b)有抗MOG和MBP 之一或兩者的血清抗體、(c)CSFIgG水平增加、(d)MBP水平增加、以及(e) 出現(xiàn)一次灶性神經(jīng)功能缺損的臨床發(fā)作。
16. 權(quán)利要求1的方法，其中所述受試者有多發(fā)性硬化家族史。
17. 權(quán)利要求1的方法，其中所述受試者有一次累及視神經(jīng)、脊髓或小 腦的急性孤立脫髓鞘事件。
18. 權(quán)利要求l的方法，其中所述受試者有多個(gè)無臨床癥狀、大于或等 于3mm的腦MRI損傷。
19. 權(quán)利要求l的方法，其中所述受試者有橫貫性脊髓炎。
20. 權(quán)利要求1的方法，其中所述受試者有視神經(jīng)炎。
21. 治療受試者的方法，包括 對(duì)受試者進(jìn)行掃描，和當(dāng)掃描顯示出無臨床癥狀的腦組織炎癥或髓鞘受損證據(jù)時(shí)，對(duì)該受試 者施用VLA-4結(jié)合抗體。
22. 治療受試者的單相脫髓鞘病的方法，包括鑒別患有單相脫髓鞘病 的受試者；和對(duì)該受試者施用VLA-4結(jié)合抗體。
23. 權(quán)利要求22的方法，其中所述受試者有橫貫性脊髓炎。
24. 權(quán)利要求22的方法，其中所述受試者有視神經(jīng)炎。
25. 權(quán)利要求22的方法，其中所述受試者有急性播散性腦脊髓炎(ADEM)。
26. 權(quán)利要求1， 13， 14, 15,21和22之一的方法，其中所述VLA-4結(jié)合 抗體至少結(jié)合VLA-4的a鏈。
27. 權(quán)利要求1， 13， 14, 15,21和22之一的方法，其中所述VLA-4結(jié)合 抗體包含那他珠單抗。
28. 權(quán)利要求1， 13, 14, 15,21和22之一的方法，其中所述VLA-4結(jié)合 抗體與HP1/2或那他珠單抗竟?fàn)幗Y(jié)合VLA-4。
29. 權(quán)利要求1, 13, 14， 15,21和22之一的方法，其中所述VLA-4結(jié)合 抗體是人抗體或人源化抗體。
30. 權(quán)利要求l， 13, 14， 15, 21和22之一的方法，其中所述VLA-4結(jié)合抗 體與第二種治療劑聯(lián)用。
全文摘要
本文描述了對(duì)有復(fù)發(fā)MS風(fēng)險(xiǎn)的人進(jìn)行治療的方法。
文檔編號(hào)A61K39/395GK101111263SQ200580047544
公開日2008年1月23日 申請(qǐng)日期2005年12月2日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月3日
發(fā)明者邁克爾·潘扎拉, 馬科·里佐 申請(qǐng)人:比奧根艾迪克Ma公司