專利名稱：具有抗炎性作用及改善血液流變性和抑制血栓形成的藥物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一類復方化學藥品(新藥I(5)類)開發(fā)研究，具體涉及具有抗炎性作用及改善血液流變性和抑制血栓形成的復方藥物。
背景技術：
1.昔布類(--coxib)藥物為選擇性非甾體抗炎藥(NSAIDs)，也即高選擇性環(huán)氧化酶-2(Cox-2)抑制劑，對環(huán)氧化酶-1(Cox-1)的抑制作用弱，因此，昔布類而減少了NSAIDs常見的胃腸道不良反應的發(fā)生率，具有抗炎作用明顯，對胃腸道刺激作用輕微等優(yōu)點，在全球銷量很大。2004年，一篇資深綜述從臨床研究和藥理學依據中得出結論Cox-2抑制劑的應用有可能增加心血管疾病的危險性[1]。由于羅非昔布(rofecoxib)引起病人心血管不良事件發(fā)生率增加，2004年9月30日美國默克公司宣布對羅非昔布進行全球撤市，昔布類的用藥安全性突現(xiàn)出來。將羅非昔布和塞來昔布分別與安慰劑對照，實驗發(fā)現(xiàn)兩個藥都會增加心血管事件的發(fā)病率[2]。在近期地實驗中發(fā)現(xiàn)，塞來昔布組有86名患者出現(xiàn)了血栓性心血管疾病，其中70％是心肌缺血和心肌梗死，30％出現(xiàn)了腦中風。但是這些發(fā)病者中有56％患者有心血管病史，說明塞來昔布有使之惡化的可能[3]。研究表明，Cox-2選擇性抑制劑能夠增強血小板的活性，從而啟動血栓性事件的發(fā)生[4]。實驗和臨床研究已表明，Cox-2呈表達在腎、血管內皮等一些具有重要生理功能的組織上，依賴Cox-2生成的類前列腺素不僅參與疼痛或炎癥信號的調節(jié)，而且還維持血管的完整性。尤其是具有血管舒張及抗血小板活性的前列環(huán)素(PGI2)是通過Cox-2生成的，當Cox-2被抑制時PGI2水平將降低至正常水平的50％以下[5]。有研究表明，塞來昔布能降低健康人尿和血中PGI2的水平，增加了血栓形成的危險[6]。2005年2月發(fā)表的關于用塞來昔布(celecoxib)預防腺瘤的實驗(APC)中顯示，與安慰劑對比，塞來昔布(輝瑞制藥有限公司產品)引起致死性或非致死性心血管事件的危險性明顯增加，有16個服用這兩個劑量的病人出現(xiàn)心血管事件，其致死性或非致死性的危險性是安慰劑組的2.5倍，同時，在出現(xiàn)血栓事件患者中大都患有心血管疾病，提示塞來昔布可能加重原有的心血管疾病，美國國家癌癥機構已經中止了APC實驗中所采用的塞來昔布的劑量400，800毫克/天。
許多研究認為，主要是由于此類藥物抑制了PGI2的生成，致使TXA2升高，從而調節(jié)血小板聚集性的PGI2/TXA2平衡紊亂，此外，近年來大量文獻資料表明，缺血性心腦血管疾病患者血液粘度異常增高，比正常人高出5到6倍。因此多數(shù)學者認為血液粘度升高也是導致缺血性心腦血管疾病的主要危險因素之一，從而心腦血管血栓形成的危險性增加。
2、研究表明，亞硒酸鈉(Se)可以使PGI2升高，Valentrovic等人發(fā)現(xiàn)缺硒時主動脈合成PGI2明顯減少[7]。Schiavon等報道給健康志愿者補硒6周后PGI2合成增多，進一步研究發(fā)現(xiàn)加Se可使豬主動脈內皮培養(yǎng)細胞PGI2生成增加[8]。給正常大鼠補硒后大鼠主動脈內皮細胞谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性增高同時PGI2生成增多[9]，研究表明，硒以GSH-Px形式參與AA的脂氧酶代謝通路，催化過氧化氫廿碳四烯酸(HPETE)轉化為羥化廿碳四烯酸(HETE)[10]，而HPETE為動脈內皮PGI2合成酶抑制劑。此外，Se還可以通過使GSH-Px活性升高使氧化物水平降低而抑制環(huán)氧酶活性使TXA2生成減少[11]。基于以上兩個作用，Se可使PGI2/TXA2比值增加，產生血小板聚集的抑制作用。
3、體外研究發(fā)現(xiàn)，雙密達莫對血小板黏附無影響，但能抑制血小板聚集。雙密達莫通過抑制環(huán)核苷酸磷酸二酯酶活性而增加血小板內cAMP濃度，而增強PGI2的作用。近來有關文獻報道雙密達莫具有良好的抗炎作用[12]。
以下是申請人檢索的相關參考文獻
1.Clark DWJ，Layton D，Shakir SAW.Do some inhibitors of COX-2 increase the risk ofthromboembo-lic events？Linking all of the data analysed in this report.Drug Saf 2004；27(7)427-56；
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發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于，提供一類具有抗炎性作用及改善血液流變性和抑制血栓形成的藥物，該藥物能夠在協(xié)同抗炎作用的同時，還具有良好的協(xié)同改善血液流變性和抑制血栓形成的作用。
為了實現(xiàn)上述任務，本發(fā)明采取如下的技術解決方案
具有抗炎性作用及改善血液流變性和抑制血栓形成的藥物，其特征在于，該藥物由塞來昔布、亞硒酸鈉、雙密達莫三種藥物中的兩種或兩種以上構成，其中
塞來昔布、亞硒酸鈉和雙密達莫組成塞來昔布復方，其重量配伍比例為塞來昔布∶亞硒酸鈉∶雙密達莫＝1∶0.0013∶2.3；或
塞來昔布和亞硒酸鈉組成塞來昔布復方，其重量配伍比例為塞來昔布∶亞硒酸鈉＝1∶0.0013；或
塞來昔布和雙密達莫組成塞來昔布復方，其重量配伍比例為塞來昔布∶雙密達莫＝1∶2.3；或
亞硒酸鈉和雙密達莫組成雙密達莫復方，其重量配伍比例為亞硒酸鈉∶雙密達莫＝0.000565∶1。
經申請人對上述藥物復方的研究證明，塞來昔布、亞硒酸鈉、雙密達莫均具有抗佐劑性關節(jié)炎作用；上述3個復方塞來昔布(塞來昔布+亞硒酸鈉+雙密達莫，塞來昔布+亞硒酸鈉；塞來昔布+雙密達莫)和雙密達莫復方(雙密達莫+亞硒酸鈉)也具有抗炎性關節(jié)炎作用。復方塞來昔布(塞來昔布+亞硒酸鈉+雙密達莫，塞來昔布+雙密達莫)的抗早期炎癥作用較單用塞來昔布明顯。
申請人將盡快完成申報新藥的相關工作。
具體實施例方式
一、復方塞來昔布組方研究
1.研究目的
塞來昔布的最重要不良反應是促進血栓形成，引起心腦血管梗塞。本研究以減輕塞來昔布促血栓形成的不良反應為目的，以健康大鼠血栓形成為觀察指標，研究塞來昔布與亞硒酸鈉及雙密達莫的交互作用，以期尋找對血栓形成有良好抑制作用的塞來昔布、亞硒酸鈉、雙密達莫的復方組方及其組方比例。
2.實驗材料
2.1藥品及試劑
塞來昔布由輝瑞制藥有限公司生產(批號BK050609)，亞硒酸鈉購于鄭州福潤德工貿有限公司(批號041121)，雙密達莫由山西臨汾制藥廠生產(批號0512031)，
2.2儀器
1.體外血栓形成儀(9103-B)，由中科院傳感技術公司生產。
2.扭力天平、顯微鏡、游標卡尺、濾紙等。
2.3動物
健康成年♂SD大鼠，體重250±25g，動物和飼料由西安交通大學醫(yī)學院試驗動物中心提供(二級動物合格證號陜醫(yī)動字08-005)。
3.實驗方法
3.1權重配方設計
利用體外血栓形成實驗，通過DAS軟件的權重配方設計將塞來昔布、亞硒酸鈉、雙密達莫按照三因素六水平進行配伍設計，如表1-1所示；
表1-1.權重配方設計表
3.1進行分組及體外血栓形成及血栓指數(shù)測定法
取42只健康成年♂SD大鼠(體重200±25g)按體重均衡隨機分為7組，每組6只，其中6組為不同配比的用藥組，另1組為空白對照組。各組用藥容量均為1ml/100g。根據權重配方設計表安排的劑量(見表1-2)灌胃給藥，每日灌胃一次，連續(xù)10天，于第10天給藥后一個小時，從大鼠頸總動脈取血，將1.8ml未抗凝血快速注入體外血栓形成儀中的硅化塑料環(huán)，立刻將環(huán)套于血栓形成儀轉盤上，以(17±1)rpm(線速度437mm/s)的轉速旋轉，旋轉環(huán)與地面夾角為74°，旋轉15min后取下，將環(huán)中血栓倒在濾紙上，吸去余血，用游標卡尺測血栓長度L(mm)，用扭力天平稱其濕重W(mg)，并依公式血栓指數(shù)計算Q值。
表1-2.塞來昔布、亞硒酸鈉及雙密達莫的配方設計表
3.3數(shù)據分析
所得權重配方數(shù)據均用DAS軟件(DAS，ver1.0)藥物相互作用模塊進行分析。
4.實驗結果
由于DAS軟件藥物相互作用分析時比較的是最大效應，而本實驗的目的是觀察塞來昔布、亞硒酸鈉及雙密達莫三藥配伍時對血栓形成的抑制效應，故現(xiàn)將血栓指數(shù)Q進行倒數(shù)轉換后(1/Q)再用DAS軟件分析，得出三藥配伍的優(yōu)化劑量，結果如表1-3、1-4所示
表1-3.三藥配伍對血栓指數(shù)Q值的影響(E1/Q的均數(shù)，SD1/Q的標準差)
表1-4.三藥以血栓指數(shù)Q的倒數(shù)(1/Q)為指標的組方劑量優(yōu)化
各組分在組方中的作用及其相互作用定性分析
5、結果分析
DAS數(shù)據處理的結果顯示，在以塞來昔布、亞硒酸鈉、雙密達莫三藥組方對血栓形成的影響中，雙密達莫是主藥(權重指數(shù)b＝1.853，且P＝0.011)，而亞硒酸鈉的作用也比較明顯(b＝1.811，且P＝0.037)，也可作為主藥；塞來昔布(權重指數(shù)b＝-0.067，且P＝0.071)具有促血栓形成趨勢。
此外，在6個配伍組中，第二組血栓指數(shù)倒數(shù)(1/Q)的均數(shù)為最大(1/Q的均數(shù)X＝0.078)，反之，Q的均數(shù)最小，即藥效最好。除此，結果顯示亞硒酸鈉與雙密達莫配伍中對抑制血栓形成有協(xié)同性，所以針對減少塞來昔布促血栓形成副作用的目的，選用雙密達莫和(或)亞硒酸鈉與塞來昔布配伍。
6、結論
理論優(yōu)化組方為①塞來昔布12mg/kg+亞硒酸鈉16μg/kg+雙密達莫28mg/kg，三者的理論配伍比例為1∶0.0013∶2.3；②塞來昔布12mg/kg+亞硒酸鈉16μg/kg，二者的理論配伍比例為1∶0.0013；③塞來昔布12mg/kg+雙密達莫28mg/kg，二者的理論配伍比例為1∶2.3；④亞硒酸鈉16μg/kg+雙密達莫28mg/kg，二者的理論配伍比例為0.000565∶1。
二、復方塞來昔布抗大鼠佐劑性關節(jié)炎作用及其拆方研究
1.研究目的
以前面實驗結果為基礎，將塞來昔布、亞硒酸鈉與雙密達莫按1∶0.0013∶2.3的比例配伍成4個復方(塞來昔布+亞硒酸鈉+雙密達莫；塞來昔布+亞硒酸鈉；塞來昔布+雙密達莫；雙密達莫+亞硒酸鈉)，研究復方藥物經拆方后對大鼠佐劑性關節(jié)炎的影響及其交互作用。
2.實驗材料
2.1藥品及試劑
塞來昔布由輝瑞制藥有限公司生產(批號BK050609)，亞硒酸鈉購于鄭州福潤德工貿有限公司(批號041121)，雙密達莫由山西臨汾制藥廠生產(批號0512031)，弗氏完全佐劑購于Sigma公司(批號R051124)。
2.2實驗儀器20ml注射器，三角架，三通管，容量吸管；
2.3實驗動物SD大鼠，雄性，體重175～225g，動物和飼料由西安交通大學醫(yī)學院試驗動物中心提供(二級動物合格證號陜醫(yī)動字08-005)。
3.實驗方法和結果
3.1方法
根據藥物效應拆方分析實驗需要，將健康成年雄性SD大鼠隨機分為11組，每組10只，分別為
(1)空白對照組NS 20ml/kg；
(2)模型組NS 20ml/kg；
(3)塞來昔布+亞硒酸鈉+雙密達莫(cele.+Se+Dm)大劑量組24mg/kg+32μg/kg+56mg/kg；
(4)塞來昔布+亞硒酸鈉+雙密達莫(cele.+Se+Dm)中劑量組12mg/kg+16μg/kg+28mg/kg；
(5)塞來昔布+亞硒酸鈉+雙密達莫(cele.+Se+Dm)小劑量組6mg/kg+8μg/kg+14mg/kg；
(6)塞來昔布+亞硒酸鈉(cele.+Se).中劑量組12mg/kg+16μg/kg；
(7)塞來昔布+雙密達莫(cele.+Dm)中劑量組12mg/kg+28mg/kg；
(8)亞硒酸鈉+雙密達莫(se+Dm).中劑量組16μg/kg+28mg/kg；
(9)塞來昔(cele)中劑量組12mg/kg；
(10)亞硒酸鈉(se)中劑量組16μg/kg；
(11)雙密達莫(Dm)中劑量組28mg/kg。
大鼠適應性飼養(yǎng)5天后，每鼠于右后足跖皮下注射0.1mL弗氏完全佐劑致炎，給藥組大鼠于佐劑注射后第19天按上述分組和劑量給藥，每天一次，連續(xù)給藥d14，于給藥前及給藥后d1、d3、d5、d7、d14根據容積法量取各鼠左、右后足踝容積。
大鼠左、右足踝容積的差值即為腫脹度，計算腫脹度的均值，按以下公式計算腫脹抑制率。
3.2數(shù)據統(tǒng)計
所得數(shù)據用DAS統(tǒng)計軟件(DAS，ver1.0)模塊中時序性資料組間t-test進行比較。
3.3實驗結果
按上述11組分組觀察佐劑型關節(jié)炎大鼠踝關節(jié)腫脹度，并以炎癥模型組為對比組，統(tǒng)計關節(jié)腫脹度的變化，進而分析復方藥物(塞來昔布+亞硒酸鈉+雙密達莫；塞來昔布+亞硒酸鈉；塞來昔布+雙密達莫；雙密達莫+亞硒酸鈉)和單化合物藥物(塞來昔布、亞硒酸鈉、雙密達莫)對炎癥的影響；再以塞來昔布組為對比組進行拆方分析。
表2-1復方塞來昔布拆方后在不同時間對大鼠足跖腫脹的治療作用(x±S，n＝10)
:表示對比組，-P＞0.05，*P＜0.05，**P＜0.01，以變化率進行統(tǒng)計。
(續(xù)表2-1)
表2-2復方塞來昔布拆方后在不同時間對大鼠足跖腫脹的治療作用(x±S，n＝10)
:表示對比組，-P＞0.05，*P＜0.05，**P＜0.01，以變化率進行統(tǒng)計。
研究發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠發(fā)生了足跖腫脹，且腫脹度隨后逐漸明顯，在d5達到高峰，在d14足跖腫脹仍明顯存在(P＜0.01)，說明佐劑關節(jié)炎模型復制成功。
在給藥后d1、d3、d5、d7、d14，給藥9組(復方塞來昔布3個劑量，塞來昔布+亞硒酸鈉，塞來昔布+雙密達莫，亞硒酸鈉+雙密達莫，塞來昔布，亞硒酸鈉，雙密達莫)均可使大鼠足跖腫脹度減輕；d1后各組腫脹度變化率不大，只有復方中劑量組較明顯，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；隨著給藥時間延長，各給藥組抑制大鼠足跖腫脹(抑制率)的作用趨于明顯(見表2-3)。研究表明，塞來昔布、亞硒酸鈉和雙密達莫均具有獨立的抗炎性關節(jié)腫脹作用；以塞來昔布為主組成的復方(塞來昔布+亞硒酸鈉+雙密達莫，塞來昔布+亞硒酸鈉，塞來昔布+雙密達莫，亞硒酸鈉+雙密達莫)也具有抗炎、抗關節(jié)腫脹作用。(表2-1，表2-2)
拆方分析表明，在炎癥早期(d1)復方藥物(塞來昔布+亞硒酸鈉+雙密達莫，塞來昔布+雙密達莫)的作用大于塞來昔布單獨使用的作用，說明復方藥物中各組分發(fā)揮了相互促進作用。
各給藥組隨著時間對大鼠足跖腫脹度抑制率大小見表2-3；從圖2-1、2-2、2-3均可看出復方藥物和單獨3個藥的對大鼠佐劑性關節(jié)炎的抑制率隨著時間的延長呈上升趨勢。
表2-3復方塞來昔布拆方后不同時間對大鼠足跖腫脹的抑制率(n＝10)
4.小結
1、成功建立了佐劑性關節(jié)炎，炎癥反應在d5達高峰。
2、塞來昔布、亞硒酸鈉、雙密達莫均具有抗佐劑性關節(jié)炎作用；3種藥組成的復方(塞來昔布+亞硒酸鈉+雙密達莫，塞來昔布+雙密達莫，雙密達莫+亞硒酸鈉)也具有抗炎性關節(jié)炎作用，其作用隨用藥時間延長而明顯。
3、在炎性關節(jié)炎早期，復方藥物(塞來昔布+亞硒酸鈉+雙密達莫，塞來昔布+雙密達莫)的抗炎作用較單用塞來昔布明顯。
三、復方塞來昔布對大鼠佐劑性關節(jié)炎血液流變性及血栓形成的影響
有研究表明，塞來昔布能降低健康人尿和血中PGI2的水平，增加了血栓形成的危險。這些研究證明了理論上的推測選擇性Cox-2抑制劑能夠增強血小板的活性，從而能夠啟動血栓性事件的發(fā)生。近年來大量文獻資料表明血液粘度升高也是導致缺血性心腦血管疾病的主要危險因素之一。此外，有研究表明AA大鼠的血液流變學指標明顯異常，表現(xiàn)為各切變率下的全血粘度、還原粘度、血漿粘度、壓積、血沉、血沉方程值都顯著增高，說明大鼠在關節(jié)炎時血液處于濃、粘、凝、聚狀態(tài)。
1.目的
觀察佐劑誘導大鼠關節(jié)炎中塞來昔布是否具有增加血小板活性及對血液流變學產生影響，并研究其與亞硒酸鈉、雙密達莫配伍對血液流變學的影響，以期減少塞來昔布的血栓性副作用。
2..材料
2.1藥品和試劑
塞來昔布由輝瑞制藥有限公司生產(批號BK050609)，亞硒酸鈉購于鄭州福潤德工貿有限公司(批號041121)，雙密達莫由山西臨汾制藥廠生產(批號0512031)，枸櫞酸鈉由西安化學試劑廠生產(批號030608)，肝素鈉由江蘇徐州生物化學制藥廠生產(批號0602113)，草酸銨由西安化學試劑廠生產(批號021009)，TXB2，PGI2放免試劑盒購于蘇州大學醫(yī)學院血液病實驗室(批號060428)。
2.2儀器
LBY-N6K型普利生全自動清洗血液流變儀，由北京普利生儀器有限公司生產，切變率分別為10、60、1501/S；F-3型高速微量離心機；讀數(shù)顯微鏡，由長春第一光學儀器廠生產；體外血栓形成儀(9103-B)、血小板粘附儀(9103-A)，均由中科院傳感技術公司生產，LXJ-II型離心沉淀機，上海醫(yī)用分析儀器廠；γ放射免疫計數(shù)儀，上海二六二廠。
2.3實驗動物
健康成年♂SD大鼠，體重250±25g，動物和飼料由西安交通大學醫(yī)學院試驗動物中心提供(二級動物合格證號陜醫(yī)動字08-005)
3.實驗方法
3.1分組
取健康SD♂大鼠110只，體重250±25g，按體重隨機均衡分為11組，分組同上。將濃度為10mg.mL-1的佐劑于每鼠右后足跖皮下注射0.1mL致炎。給藥組大鼠于佐劑注射后于第19天按劑量給藥，模型組和空白對照組則給于生理鹽水灌胃，每天一次，灌胃容量均為10ml/kg體重，連續(xù)給藥14d。于第15天，停食12小時后，對空腹大鼠進行血液流變學指標的測定。
3.2血液流變學實驗
將各組大鼠用烏拉坦(20％)5ml/kg腹腔注射麻醉，分離頸動脈由頸總動脈插管取血8ml。其中3.5ml血迅速注入肝素抗凝管(抗凝管制備方法肝素鈉用蒸餾水配制成溶液，濃度為31.25單位/ml血，用微量加樣器加入試管底部，放入烘箱內烘干備用)中，搖勻后，置入35℃的恒溫水浴箱備用；1.5ml血迅速注入枸櫞酸鈉抗凝管(制備方法枸櫞酸鈉用生理鹽水配制成濃度為3.8％的溶液，取0.13ml加入硅化試管中)，搖勻備用，1.1ml用于測體外血栓形成指數(shù)，1.5ml則用于檢測血漿TXB2，PGI2含量。
1)全血及血漿粘度的測定取1ml肝素抗凝血注入粘度計數(shù)筒內，轉換高、中、低切變率開關，從計算機上直接讀取高、中、低切變率粘度粘度值。做完全血粘度后黏度儀自動清洗，將剩余的2.5ml肝素抗凝血用離心機離心15分鐘，轉速為3000rpm，取1ml血漿注入黏度計數(shù)筒內測血漿粘度。
2)血沉及紅細胞壓積的測定取底端平整的毛細管，插入剛混勻的肝素抗凝血中，待血進入毛細管內4/5處，封住下端口，下端插入橡皮泥中，垂直豎立，并計時，1小時后用血沉，壓積板讀出血沉值(溫氏法)。將測定血沉的毛細離心管，用3F-3型高速微量離心機離心5分鐘，轉速為12000rpm，再用血沉，壓積板讀出紅細胞積值。
3)血小板粘附率測定將1ml枸櫞酸鈉抗凝血加入容量為5ml的長頸圓球形玻璃瓶中，將其置于血小板粘附儀轉盤上，以5rpm的轉速旋轉15分鐘后，再用定量取血管分別吸取20μl旋轉前和旋轉后的抗凝血注入1％的草酸銨稀釋劑0.4ml中，測定旋轉前后血中的血小板板數(shù)，然后按下式計算
4)紅細胞變形性的測定
5)體外血栓形成及血栓指數(shù)測定法將1.1ml未抗凝血快速注入硅化塑料環(huán)內(體外血栓形成儀附件)，立刻將環(huán)套于血栓形成儀轉盤上，以(17±1)rpm(線速度437mm/s)的轉速旋轉，旋轉環(huán)與地面夾角為74°，旋轉15min后取下，將環(huán)中血栓倒在濾紙上，吸去余血，用游標尺測其長度，扭力天平稱其濕重，并依公式血栓指數(shù)計算Q值，式中L為血栓長度(mm)，W為血栓濕重(mg)。
6)血漿中TXB2、PGF1α測定
制備標本將前述1.5ml血用2％EDTA溶液按1∶9比例抗凝，以3000轉/分離心30分鐘，吸取上清液置于低溫冰箱保存。
TXB2、PGF12測定操作步驟
①TXB2標準品用緩沖液倍比稀釋成2.5～160pg/0.1ml 7個管，將TXB2抗血清、TXB2示蹤劑加入緩沖液10ml稀釋。將制備好的待測樣品取出復溶。
②按下表所示操作
從第3管起離心3000rpm30分鐘，吸棄上清后測定沉淀的放射性。
③將制備好的各管標記后送同位素室測定樣本中TXB2、PGF1α含量。
④計算結果
3.3統(tǒng)計分析
數(shù)據用SPSS分析，實驗結果以x±s表示，組間比較用t檢驗。
4.實驗結果
4.1佐劑性關節(jié)炎大鼠血液流變性改變
表3-1數(shù)據說明，與正常對照組比較，佐劑性關節(jié)炎大鼠的全血高切粘度、中切、低切粘度、紅細胞IR值、紅細胞聚集指數(shù)、血栓指數(shù)Q，血小板黏附率均增高且具有高度統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；佐劑性關節(jié)炎大鼠的紅細胞壓積、血沉則無明顯改變。以上結果與文獻報道相一致，說明佐劑性關節(jié)炎血瘀癥模型復制成功。
表3-1.血瘀癥模型復制情況(x±S，n＝10)
與正常對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01
4.2塞來昔布、亞硒酸鈉、雙密達莫及其復方對佐劑性關節(jié)炎大鼠全血切粘度的影響
表3-2表明，與模型組比較，除塞來昔布無明顯性作用外，亞硒酸鈉、雙密達莫及其組成的復方塞來昔布(Cele+Se+Dm)(高、中、低劑量)和其他2藥組成的復方(Cele.+Se；Cele.+Dm；Se.+Dm)均可使佐劑性關節(jié)炎血瘀癥模型的高、中、低切變率全血黏度均降低，且具非常顯著的統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，說明他們對血液流變性具有良好的該善作用。
與塞來昔布組(17mg/kg)比較，其與亞硒酸鈉、雙密達莫組成的各種復方的作用均大于塞來昔布組，特別是復方塞來昔布(Cele+Se+Dm)的低劑量組(8.5mg 11.5μg；20mg/kg)降低高、中、低切變率全血黏度的作用仍然大于塞來昔布組(17mg/kg)，說明藥物產生了良好的相互作用。
表3-2塞來昔布、亞硒酸鈉及雙密達莫及其復方對全血黏度的影響(x±S，n＝10)
:表示對比組，-P＞0.05，*P＜0.05，**P＜0.01。
4.3塞來昔布、亞硒酸鈉及雙密達莫及其復方對紅細胞剛性指數(shù)IR的影響
紅細胞剛性指數(shù)IR值表示紅細胞的脆性，與紅細胞的變形能力呈反比關系。紅細胞剛性指數(shù)IR值見表3-3。
與模型組比較，由塞來昔布、亞硒酸鈉及雙密達莫組成的任何復方(Cele+Se+Dm，Cele.+Se；Cele.+Dm；Se.+Dm)均可使佐劑關節(jié)炎大鼠的紅細胞剛性指數(shù)IR值均明顯降低，且具有高度統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；此外，亞硒酸鈉單獨作用也可使IR值明顯降低，且具有高度統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；而雙密達莫組、塞來昔布組IR值變化無統(tǒng)計學意義。
表3-3.塞來昔布、亞硒酸鈉及雙密達莫及其復方對IR值的影響(x±S，n＝10)
:表示對比組，-P＞0.05，*P＜0.05，**P＜0.01。
拆方分析與塞來昔布組比較，同比劑量的塞來昔布+雙密達莫(Cele.+Dm)降低IR值的作用顯著性提高，說明塞來昔布與雙密達莫協(xié)同增加紅細胞的變形能力；與亞硒酸鈉比較，同比劑量的亞硒酸鈉+雙密達莫(Se.+Dm)降低IR值的作用顯著性提高，說明亞硒酸鈉與雙密達莫協(xié)同增加紅細胞的變形能力；與雙密達莫比較，同比劑量的亞硒酸鈉+雙密達莫(Se.+Dm)、塞來昔布+雙密達莫+亞硒酸鈉(Cele+Se+Dm)降低IR值的作用顯著性提高，說明塞來昔布、亞硒酸鈉和雙密達莫協(xié)同增加紅細胞的變形能力，其中硒可能起到關鍵作用。
4.4塞來昔布、亞硒酸鈉及雙密達莫復方對血小板黏附率及血栓指數(shù)Q的影響
與模型組比較研究發(fā)現(xiàn)，塞來昔布(Cele)、亞硒酸鈉(Se)、雙密達莫(Dm)及其復方(Cele+Se+Dm、Cele.+Se、Cele.+Dm、Se.+Dm)均可降低血小板黏附率和血栓指數(shù)Q值(P＜0.01)。見表3-4。
表3-4.塞來昔布、亞硒酸鈉及雙密達莫及其復方對血小板黏附率和血栓指數(shù)的影響
x±S，n＝10，:表示對比組，-P＞0.05，*P＜0.05，**P＜0.01
與塞來昔布組比較研究發(fā)現(xiàn)，塞來昔布對血小板黏附率及血栓指數(shù)Q的抑制作用弱于亞硒酸鈉和雙密達莫；由3藥組成的復方(Cele+Se+Dm)在同比劑量時抗血小板黏附作用明顯強于塞來昔布單獨使用時；由3藥組成的復方在同比劑量時降低血栓指數(shù)Q方面也明顯強于塞來昔布單獨使用時，由2藥組成的復方(Cele.+Se，Cele.+Dm)在同比中劑量和低劑量時也明顯強于塞來昔布單獨使用時。研究表明，復方藥物在對血小板黏附率及血栓指數(shù)Q的抑制作用時發(fā)揮了良好的相互作用，其中微量的亞硒酸鈉可能起到重要作用。見表3-4。
4-5復方塞來昔布拆方后對血漿TXA2/PGI2比值的影響
表3-5所揭示得信息量很大，與模型組比較，在炎癥時PGI2的含量和相對量(TXB2/PGI2)均增加；塞來昔布可使炎癥大鼠PGI2降低和TXA2/PGI2比值增加，對抗炎癥變化；復方塞來昔布(Cele+Se+Dm)在較大劑量時(高、中劑量)使TXB2和PGI2均降低，但TXA2/PGI2比值卻在增加。
表3-5.復方塞來昔布拆方對血漿TXA2，PGI2水平的影響x±S，n＝10
:表示對比組，-P＞0.05，*P＜0.05，**P＜0.01
研究表明，塞來昔布可明顯增加TXA2/PGI2比值，有可能增加發(fā)生血栓性心血管不良反應的危險性；與同比劑量的塞來昔布單用相比，復方塞來昔布(Cele+Se+Dm)具有更強的降低TXB2作用，因此增加TXA2/PGI2比值的作用較弱；同比劑量的塞來昔布+亞硒酸鈉復方(Cele+Se)也在增加TXB2和PGI2時，也具有增加TXA2/PGI2比值的作用較弱的特點；未觀察到同比劑量的塞來昔布與雙密達莫復方(Cele+Dm)具有這樣的特點。與塞來昔布單用比較，復方塞來昔布(Cele+Se+Dm或Cele+Se)增加TXA2/PGI2比值的作用較弱，從而降低了塞來昔布心血管不良反應的危險性。
5、小結
5.1、在佐劑性關節(jié)炎大鼠模型上，觀察到血液流變性的不良變化和血栓形成加劇，包括全血粘度增大，紅細胞變形能力降低，血小板黏附增強，血栓指數(shù)Q值增大等變化。佐劑性關節(jié)炎大鼠PGI2的含量和TXB2/PGI2比值降低。
5.2、亞硒酸鈉、雙密達莫具有改善大鼠佐劑性關節(jié)炎模型血液流變性(高、中、低切變全血粘度降低，紅細胞變形能力增加)的作用；復方塞來昔布各種組方(Cele+Se+Dm、Cele+Se、Cele+Dm)和雙密達莫硒(Se+Dm)也具有改善大鼠血液流變性的作用。說明復方塞來昔布作用優(yōu)于塞來昔布單獨使用。
5.3、亞硒酸鈉、雙密達莫具有降低大鼠佐劑性關節(jié)炎模型血栓指數(shù)Q值和抑制血小板黏附率的作用，復方塞來昔布各種組方(Cele+Se+Dm、Cele+Se、Cele+Dm)也具有降低血栓指數(shù)Q值和抑制血小板黏附率的作用，說明復方塞來昔布作用優(yōu)于塞來昔布單用。雙密達莫硒(Se+Dm)同樣具有降低血栓指數(shù)Q值和抑制血小板黏附率的作用。
5.4、塞來昔布、亞硒酸鈉、雙密達莫均可使大鼠佐劑性關節(jié)炎模型TXB2/PGI2比值增加，其中塞來昔布作用最明顯(與文獻報道一致)；復方塞來昔布(Cele+Se+Dm，Cele+Se)升高TXB2/PGI2比值的作用顯著性低于塞來昔布單獨使用，說明復方塞來昔布引起血栓性疾病的危險顯著性低于塞來昔布單用。
四、研究結論
1、復方塞來昔布優(yōu)化組方為①塞來昔布12mg/kg+亞硒酸鈉16μg/kg+雙密達莫28mg/kg，三者的配伍比例為1∶0.0013∶2.3；②塞來昔布12mg/kg+亞硒酸鈉16μg/kg，二者的配伍比例為1∶0.0013③塞來昔布12mg/kg+雙密達莫28mg/kg，二者的配伍比例為1∶2.3；④雙密達莫28mg/kg+亞硒酸鈉16μg/kg，二者的配伍比例為1∶0.00057。
2、塞來昔布、亞硒酸鈉、雙密達莫均具有抗佐劑性關節(jié)炎作用；3個復方塞來昔布組方(塞來昔布+亞硒酸鈉+雙密達莫，塞來昔布+亞硒酸鈉；塞來昔布+雙密達莫)和雙密達莫硒(雙密達莫+亞硒酸鈉)也具有抗炎性關節(jié)炎作用。復方藥物(塞來昔布+亞硒酸鈉+雙密達莫，塞來昔布+雙密達莫)的抗早期炎癥作用較單用塞來昔布明顯。
3、亞硒酸鈉、雙密達莫組方具有改善大鼠佐劑性關節(jié)炎模型血液流變性和抑制血栓形成的良好作用，塞來昔布無上述作用復方塞來昔布3個組方(Cele+Se+Dm、Cele+Se、Cele+Dm)和雙密達莫硒(Dm+Se)均具有改善大鼠血液流變性和抑制血栓形成的良好作用。
4、結論復方塞來昔布(塞來昔布+亞硒酸鈉+雙密達莫，塞來昔布+亞硒酸鈉；塞來昔布+雙密達莫)和雙密達莫硒(雙密達莫+亞硒酸鈉)組方合理，克服了塞來昔布的促血栓形成的缺點，在發(fā)揮協(xié)同抗炎作用的同時，還具有良好的協(xié)同改善血液流變性和抑制血栓形成的作用。
權利要求
1.一種具有抗炎性作用及其協(xié)同改善血液流變性和抑制血栓形成的藥物，其特征在于，該藥物由塞來昔布、亞硒酸鈉、雙密達莫三種藥物中的兩種或三種構成，其中
塞來昔布、亞硒酸鈉和雙密達莫組成塞來昔布復方，其重量配伍比例為塞來昔布∶亞硒酸鈉∶雙密達莫＝1∶0.0013∶2.3；或
塞來昔布和亞硒酸鈉組成塞來昔布復方，其重量配伍比例為塞來昔布∶亞硒酸鈉＝1∶0.0013；或
塞來昔布和雙密達莫組成塞來昔布復方，其重量配伍比例為塞來昔布∶雙密達莫＝1∶2.3；或
亞硒酸鈉和雙密達莫組成雙密達莫復方，其重量配伍比例為亞硒酸鈉∶雙密達莫＝0.000565∶1。
全文摘要
本發(fā)明公開了一類具有抗炎作用及其協(xié)同改善血液流變性和抑制血栓形成的藥物，該藥物由塞來昔布、亞硒酸鈉、雙密達莫三種藥物中的兩種或三種構成四種復方，經申請人對上述藥物復方的研究證明，塞來昔布、亞硒酸鈉、雙密達莫均具有抗佐劑性關節(jié)炎作用；上述3個塞來昔布復方和雙密達莫復方也具有抗炎性關節(jié)炎作用。復方塞來昔布的抗早期炎癥作用較單用塞來昔布明顯。本發(fā)明的復方塞來昔布和雙密達莫硒組方合理，克服了塞來昔布的促血栓形成的缺點，在發(fā)揮協(xié)同抗炎作用的同時，還具有良好的協(xié)同改善血液流變性和抑制血栓形成的作用。
文檔編號A61K31/519GK1872087SQ20061004299
公開日2006年12月6日 申請日期2006年6月19日 優(yōu)先權日2006年6月19日
發(fā)明者袁秉祥, 唐俊杰 申請人:西安交通大學