專利名稱：用于降低人或禽畜血清膽固醇的益生菌制劑及工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于改善腸道微生態(tài)平衡，降低人或禽畜血清膽固醇的益生菌制成的制劑或飼料添加劑及制備這種制劑或添加劑的工藝。

背景技術(shù)：
已有的益生菌的研究也只限于對(duì)單個(gè)菌種的研究，沒有針對(duì)益生菌群相互促進(jìn)、共生，協(xié)調(diào)促進(jìn)改善降低人或禽畜血清膽固醇的研究，也沒有協(xié)調(diào)促進(jìn)降低人或禽畜血清膽固醇的益生菌群制劑、飼料添加劑及工藝。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明主要是利用從動(dòng)物體內(nèi)分離出具有生理作用的3種益生菌菌株經(jīng)發(fā)酵分離菌體、干燥經(jīng)合理組方混合成具有降低人體或動(dòng)物血清膽固醇的益生菌活菌制劑，同時(shí)提供一種益生菌制劑的的制造工藝。
本發(fā)明益生菌制劑含有益生菌標(biāo)準(zhǔn)菌粉，益生菌有屎鏈球菌(Enterococcus faecium)、青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescentis)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)。其中的屎鏈球菌5-15份，雙歧桿菌5-15份，嗜酸乳桿菌20-30份，乳糖或低聚果糖或其他輔料10000-20000份。按以上配方制成的益生菌制劑，每克含有益生菌數(shù)20-50億/g。配制成粉劑或膠囊劑型。
本發(fā)明的益生菌制劑的的制造工藝。按重量稱取益生菌標(biāo)準(zhǔn)菌粉，其中的屎鏈球菌5-15份，雙歧桿菌5-15份，嗜酸乳桿菌20-30份，乳糖或低聚果糖或其他輔料10000-20000份。配制成粉劑或膠囊劑型。其中，單一菌粉制備工藝如下 (1)屎腸球菌菌粉的制備屎腸球菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量1％-3％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨、0.5-1％酵母浸膏、0.1-0.5％Na2HPO4、0.1-0.5％KH2PO4的培養(yǎng)液中經(jīng)32℃-38℃厭氧發(fā)酵后，離心分離出菌體，將占保護(hù)液重量23-45％的菌體加入含有100-200mM海藻糖和含有重量3％谷氨酸鈉的凍干保護(hù)液中混合，放置2-4小時(shí)，冷凍干燥后即可得到屎腸球菌菌粉。
(2)嗜酸乳桿菌菌粉的制備嗜酸乳桿菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量1％-3％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨、0.5-1％酵母浸膏培養(yǎng)基中經(jīng)32℃-36℃厭氧發(fā)酵后，離心分離出菌體，將占保護(hù)液重量30-45％的菌體加入100-200mM海藻糖和含有3％谷氨酸鈉的凍干保護(hù)液中混合，放置2-4小時(shí)，冷凍干燥后即可得到嗜酸乳桿菌菌粉。
(3)青春雙歧桿菌菌粉的制備青春雙歧桿菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量0.5-1.5％酵母浸膏、1-2.5％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨培養(yǎng)液基中經(jīng)35℃-38℃厭氧發(fā)酵后，離心分離出菌體，將占保護(hù)液重量30-45％的菌體加入含有100-200mM海藻糖和含有重量3％谷氨酸鈉的凍干保護(hù)液中混合，放置2-4小時(shí)，冷凍干燥后即可得到青春雙歧桿菌菌粉菌粉。
本發(fā)明所述的3種益生菌已通過毒理學(xué)和藥理學(xué)試驗(yàn)研究，證明每一菌株都是安全和無毒副作用的。組合后特有的優(yōu)點(diǎn)是乳酸菌降膽固醇機(jī)制有多種方式，如1.對(duì)3-羥基-3-甲基戊二酰COA還酶的抑制作用該酶是膽固醇體內(nèi)生物合成的限速酶；2.通過膽鹽水解酶的作用，將部小腸內(nèi)的膽鹽水解，水解后的膽鹽能與食物中的膽固醇發(fā)生共沉淀作用，從而促進(jìn)食源中的膽固醇向糞便中轉(zhuǎn)移；3.菌體對(duì)膽固醇的同化作用，直接分解膽固醇。屎鏈球菌、雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌三種菌分別在人或動(dòng)物的不同腸段上定植，其降膽固醇的作用機(jī)制也不同，將三種菌組合起來可以發(fā)揮他們?cè)诟髯阅c段以不同機(jī)制共同發(fā)揮作用，優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)。
在對(duì)屎腸球菌降膽固醇作用研究中，我們從142份健康兒童糞便中分離出一株具有在體外降解膽固醇作用的菌株，經(jīng)中科院微生物研究所鑒定為屎腸球菌。通過藥效學(xué)研究證明與飼以高脂飼料的對(duì)照組大鼠相比，在實(shí)驗(yàn)的第14、28天分別測(cè)定大鼠血清TC濃度低與對(duì)照組，并有顯著性差異(p＜0.05)。通過計(jì)算顯示高中劑量組HDL/TC比值高與對(duì)照組、動(dòng)脈硬化指數(shù)低與對(duì)照組并有顯著性差異(p＜0.05)。(見表1、表2、表3、表4)。根據(jù)《保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》的判定標(biāo)準(zhǔn)，可以認(rèn)為屎腸球菌具有調(diào)節(jié)大鼠血脂的作用。本通過人體實(shí)驗(yàn)證明本菌具有同樣的作用(見表5)。藥理學(xué)研究證明本菌無毒、無害、安全。是人體內(nèi)一種具有調(diào)節(jié)膽固醇代謝作用的正常生理性細(xì)菌。生產(chǎn)工藝研究表明，屎腸球菌DM891129菌株經(jīng)篩選、馴化后，采用發(fā)酵、濃縮、冷凍干燥等工藝可制成穩(wěn)定的微生態(tài)調(diào)節(jié)劑。并可投入工業(yè)化生產(chǎn)。
表1 實(shí)驗(yàn)前后各組大鼠體重變化(g，M±SD，n＝10) 注三個(gè)實(shí)驗(yàn)組給于受試物屎腸球菌菌粉，劑量分別為低劑量組225mg/kg.BW，中劑量組450mg/kg.BW，高劑量組900mg/kg.BW，分別相當(dāng)于人體推薦量攝入量的5、10、20倍。
表2 實(shí)驗(yàn)前后各組大鼠血清TC濃度(mg/dl、M±SD，n＝10) 表3各組大鼠血清HDL-C/TC比值(％，M±SD) 注*與對(duì)照組相比P＜0.05 表4 各組大鼠動(dòng)脈硬化指數(shù)(AI(M±SD) 注動(dòng)脈硬化指數(shù)(AI)是反應(yīng)心血管疾病易患程度的一個(gè)指標(biāo)，由

計(jì)算而來，該指數(shù)越高，心血管疾病的易患程度越高，從表6可以看出高、中、低劑量組，在第14天及28天時(shí)均低于對(duì)照組(P＜0.05)。
表5 人體試驗(yàn)血清膽固醇、甘油三酯水平(mmol/L) 注1、正常對(duì)照組及第1組服藥4周，停藥4周，再繼續(xù)服藥4周，共觀察12周，每階段服藥前后各查一次各項(xiàng)指標(biāo)；2、TC第8w時(shí)血TC水平略有上升，此為第一階段結(jié)束，第二階段服藥前的結(jié)果，但其數(shù)值仍在正常范圍之內(nèi)，第二階段服藥后又略下降，與服藥前水平相近?？梢姶酥苿?duì)正常血TC水平及TG水平無明顯影響，各階段相應(yīng)指標(biāo)比較無顯著意義(P＞0.05)。
嗜酸乳桿菌和青春雙歧桿菌是我們分離到的兩株具有同化膽固醇能力的乳酸菌，體外試驗(yàn)試驗(yàn)表明嗜酸乳桿菌和青春雙歧桿菌均對(duì)低膽固醇或正常水平膽固醇的同化降解能力不顯著，而對(duì)高水平膽固醇的同化降解作用比較明顯。結(jié)果見表6、表7。
表6 嗜酸乳桿菌對(duì)不同濃度膽固醇的同化能力 注將三濃度膽固醇加入MRS培養(yǎng)基中，接入10％嗜酸乳桿菌種子液，在不同時(shí)間測(cè)定培養(yǎng)液中膽固醇含量，以確定膽固醇被同化的數(shù)量。
表7 雙歧桿菌對(duì)不同濃度膽固醇的同化能力 注將三濃度膽固醇加入BS培養(yǎng)基中，接入10％雙歧桿菌種子液，在不同時(shí)間測(cè)定培養(yǎng)液中膽固醇含量，以確定膽固醇被同化的數(shù)量。
青春雙歧桿菌、屎場(chǎng)球菌和嗜酸乳桿菌都是人體正常菌群，在維護(hù)人體生態(tài)平衡、抑制腐敗型細(xì)菌及各種腸內(nèi)有毒物質(zhì)發(fā)揮重要作用。將三種菌聯(lián)合應(yīng)用于降血清膽固醇可發(fā)揮其三菌不同降膽固醇機(jī)制，全方位調(diào)節(jié)人體血清膽固醇水平。

具體實(shí)施例方式 實(shí)施例1 屎鏈球菌5g，雙歧桿菌10g，嗜酸乳桿菌30g，玉米粉或麥麩粉20kg。按以上配方制成的益生菌制劑，每克含有益生菌數(shù)20-50億/g。配制成粉劑，添加劑與飼料比為1∶100。即每kg平脂生添加劑可配制100kg飼料?？捎糜诘湍懝檀茧u或豬的飼養(yǎng)。菌粉制備工藝如下 (1)屎腸球菌菌粉的制備屎腸球菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量1％葡萄糖、1％蛋白胨、1％酵母浸膏、0.5％Na2HPO4、0.5％KH2PO4的培養(yǎng)液中經(jīng)32℃-38℃厭氧發(fā)酵后，離心分離出菌體，將占保護(hù)液重量45％的菌體加入含有200mM海藻糖和含有重量3％谷氨酸鈉的凍于保護(hù)液中混合，放置4小時(shí)，冷凍干燥后即可得到屎腸球菌菌粉。
(2)嗜酸乳桿菌菌粉的制備嗜酸乳桿菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量1％葡萄糖、1％蛋白胨、1％酵母浸膏培養(yǎng)基中經(jīng)32℃-36℃厭氧發(fā)酵后，離心分離出菌體，將占保護(hù)液重量45％的菌體加入200mM海藻糖和含有3％谷氨酸鈉的凍干保護(hù)液中混合，放置4小時(shí)，冷凍干燥后即可得到嗜酸乳桿菌菌粉。
(3)青春雙歧桿菌菌粉的制備青春雙歧桿菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量0.5％酵母浸膏、1.8％葡萄糖、1.5％蛋白胨培養(yǎng)液基中經(jīng)35℃-38℃厭氧發(fā)酵后，離心分離出菌體，將占保護(hù)液重量45％的菌體加入含有200mM海藻糖和含有重量3％谷氨酸鈉的凍干保護(hù)液中混合，放置4小時(shí)，冷凍干燥后即可得到青春雙歧桿菌菌粉菌粉。
實(shí)施例2 屎鏈球菌10g，雙歧桿菌15g，嗜酸乳桿菌20g，乳糖或葡萄糖15kg。按以上配方制成的益生菌制劑，每克含有益生菌數(shù)20-50億/g。以1∶1000比例添加到飲用水中，直接供禽畜飲用。可用于低膽固醇雞或豬的飼養(yǎng)。菌粉制備工藝如下 (1)屎腸球菌菌粉的制備屎腸球菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量2％葡萄糖、1.5％蛋白胨、0.5％酵母浸膏、0.3％Na2HPO4、0.3％KH2PO4的培養(yǎng)液中經(jīng)32℃-38℃厭氧發(fā)酵后，離心分離出菌體，將占保護(hù)液重量34％的菌體加入含有150mM海藻糖和含有重量3％谷氨酸鈉的凍干保護(hù)液中混合，放置3小時(shí)，冷凍干燥后即可得到屎腸球菌菌粉。
(2)嗜酸乳桿菌菌粉的制備嗜酸乳桿菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量2％葡萄糖、1.5％蛋白胨、0.5％酵母浸膏培養(yǎng)基中經(jīng)32℃-36℃厭氧發(fā)酵后，離心分離出菌體，將占保護(hù)液重量38％的菌體加入150mM海藻糖和含有3％谷氨酸鈉的凍干保護(hù)液中混合，放置3小時(shí)，冷凍干燥后即可得到嗜酸乳桿菌菌粉。
(3)青春雙歧桿菌菌粉的制備青春雙歧桿菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量1％酵母浸膏、2.5％葡萄糖、0.5％蛋白胨培養(yǎng)液基中經(jīng)35℃-38℃厭氧發(fā)酵后，離心分離出菌體，將占保護(hù)液重量38％的菌體加入含有150mM海藻糖和含有重量3％谷氨酸鈉的凍干保護(hù)液中混合，放置3小時(shí)，冷凍干燥后即可得到青春雙歧桿菌菌粉菌粉。
實(shí)施例3 屎鏈球菌15g，雙歧桿菌5g，嗜酸乳桿菌25g，水蘇糖或低聚木糖10kg。按以上配方制成的益生菌粉劑，分裝1號(hào)或0號(hào)膠囊。用于高血脂人群。成人每日服用量4-8粒。菌粉制備工藝如下 (1)屎腸球菌菌粉的制備屎腸球菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量3％葡萄糖、0.5％蛋白胨、0.8％酵母浸膏、0.1％Na2HPO4、0.1％KH2PO4的培養(yǎng)液中經(jīng)32℃-38℃厭氧發(fā)酵后，離心分離出菌體，將占保護(hù)液重量23％的菌體加入含有100mM海藻糖和含有重量3％谷氨酸鈉的凍干保護(hù)液中混合，放置2小時(shí)，冷凍干燥后即可得到屎腸球菌菌粉。
(2)嗜酸乳桿菌菌粉的制備嗜酸乳桿菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量3％葡萄糖、0.5％蛋白胨、0.8％酵母浸膏培養(yǎng)基中經(jīng)32℃-36℃厭氧發(fā)酵后，離心分離出菌體，將占保護(hù)液重量30％的菌體加入100mM海藻糖和含有3％谷氨酸鈉的凍干保護(hù)液中混合，放置2-4小時(shí)，冷凍干燥后即可得到嗜酸乳桿菌菌粉。
(3)青春雙歧桿菌菌粉的制備青春雙歧桿菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量1.5％酵母浸膏、1％葡萄糖、1％蛋白胨培養(yǎng)液基中經(jīng)35℃-38℃厭氧發(fā)酵后，離心分離出菌體，將占保護(hù)液重量30％的菌體加入含有100mM海藻糖和含有重量3％谷氨酸鈉的凍干保護(hù)液中混合，放置2小時(shí)，冷凍干燥后即可得到青春雙歧桿菌菌粉菌粉。
權(quán)利要求
1、一種用于降低人或禽畜血清膽固醇的益生菌制劑，其特征在于有按重量配比的屎鏈球菌5-15份，雙歧桿菌5-15份，嗜酸乳桿菌20-30份。
2、如權(quán)利要求1所說的益生菌制劑，其特征在于還有乳糖或低聚果糖或其他輔料10000-20000份。
3、一種用于降低人或禽畜血清膽固醇的益生菌制劑生產(chǎn)工藝，按重量稱取屎鏈球菌5-15份，雙歧桿菌5-15份，嗜酸乳桿菌20-30份，乳糖或低聚果糖或其他輔料10000-20000份，配制成粉劑或膠囊劑型，屎鏈球菌、雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌的菌粉制備如下
(1)屎腸球菌菌粉的制備屎腸球菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量1％-3％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨、0.5-1％酵母浸膏、0.1-0.5％Na2HPO4、0.1-0.5％KH2PO4的培養(yǎng)液中經(jīng)32℃-38℃厭氧發(fā)酵后，離心分離出菌體，將占保護(hù)液重量23-45％的菌體加入含有100-200mM海藻糖和含有重量3％谷氨酸鈉的凍干保護(hù)液中混合，放置2-4小時(shí)，冷凍干燥后即可得到屎腸球菌菌粉。
(2)嗜酸乳桿菌菌粉的制備嗜酸乳桿菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量1％-3％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨、0.5-1％酵母浸膏培養(yǎng)基中經(jīng)32℃-36℃厭氧發(fā)酵后，離心分離出菌體，將占保護(hù)液重量30-45％的菌體加入100-200mM海藻糖和含有3％谷氨酸鈉的凍干保護(hù)液中混合，放置2-4小時(shí)，冷凍干燥后即可得到嗜酸乳桿菌菌粉。
(3)青春雙歧桿菌菌粉的制備青春雙歧桿菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量0.5-1.5％酵母浸膏、1-2.5％葡萄糖、0.5-1.5％蛋白胨培養(yǎng)液基中經(jīng)35℃-38℃厭氧發(fā)酵后，離心分離出菌體，將占保護(hù)液重量30-45％的菌體加入含有100-200mM海藻糖和含有重量3％谷氨酸鈉的凍干保護(hù)液中混合，放置2-4小時(shí)，冷凍干燥后即可得到青春雙歧桿菌菌粉菌粉。
全文摘要
用于降低人或禽畜血清膽固醇的益生菌制劑及工藝，按重量稱取屎鏈球菌5－15份，雙歧桿菌5－15份，嗜酸乳桿菌20－30份，乳糖或低聚果糖或其他輔料10000－20000份；上述3種菌經(jīng)30－45℃分別發(fā)酵，24hr－36hr，離心分離菌體，加凍干保護(hù)劑，冷凍干燥獲得干燥菌粉，按比例添加到玉米粉或水蘇糖中，制備粉劑或膠囊劑，能調(diào)節(jié)腸內(nèi)菌群，降低血清膽固醇。
文檔編號(hào)A61K9/19GK101028290SQ20061004595
公開日2007年9月5日 申請(qǐng)日期2006年3月1日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月1日
發(fā)明者康白, 袁杰利 申請(qǐng)人:大連森佰澳科技有限公司