專(zhuān)利名稱(chēng)：17－(四氫呋喃－2’－基)甲胺－17－去甲氧基格爾德霉素的抗病毒作用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種17-康胺格爾德霉素衍生物在抗病毒中的應(yīng)用；本發(fā)明又涉及所說(shuō)衍生物的藥物組合物在抗病毒中的應(yīng)用；本發(fā)明還涉及所說(shuō)衍生物的鹽或類(lèi)似物在抗病毒中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
17-(四氫呋喃-2’-基)甲胺-17-去甲氧基格爾德霉素(17-(tetrahydrofuran-2’-yl)methanamine-17-demethoxy-geldanamycinGM-THMF)屬于已知結(jié)構(gòu)化合物-格爾德霉素衍生物。Gallaschun，Randall James等以專(zhuān)利(WO 9501342 A1)形式，公開(kāi)了其結(jié)構(gòu)和在抗腫瘤方面的用途。本實(shí)驗(yàn)室在抗病毒藥物篩選研究中發(fā)現(xiàn)，上述化合物具有很強(qiáng)的廣譜抗病毒活性。經(jīng)STN國(guó)際聯(lián)機(jī)檢索，所說(shuō)化合物在抗病毒方面的作用迄今未見(jiàn)有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，說(shuō)明，化合物GM-THMF的抗病毒作用屬于本專(zhuān)利申請(qǐng)的首次發(fā)現(xiàn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了17-(四氫呋喃-2’-基)甲胺-17-去甲氧基格爾德霉素在抗病毒方面的應(yīng)用，所說(shuō)格爾德霉素衍生物的結(jié)構(gòu)如式(I)所示 式(1)
本發(fā)明又提供了所說(shuō)化合物的藥物組合物在抗病毒中的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了所說(shuō)化合物的鹽或類(lèi)似物在抗病毒中的應(yīng)用。
本發(fā)明所述的化合物及其藥物組合物、鹽或類(lèi)似物可用于制備相關(guān)的抗病毒藥物。
本發(fā)明的實(shí)施，是采用細(xì)胞培養(yǎng)法，測(cè)定式(1)化合物的體外抗病毒活性和抗病毒譜。結(jié)果表明，式(1)化合物具有廣譜抗病毒活性，對(duì)人免疫缺陷病毒(HIV-1)和乙型肝炎病毒(HBV)的抑制作用強(qiáng)，IC50在nmol/L水平，優(yōu)于對(duì)照藥拉米夫定；對(duì)單純皰疹病毒(HSV)1型和2型的活性明顯強(qiáng)于對(duì)照藥阿昔洛韋。此外，式(1)化合物對(duì)柯薩奇病毒(Cox)B3型、(Cox)B6型和對(duì)水皰性口炎病毒(VSV)均顯示了強(qiáng)抑制活性。式(1)化合物(GM-THMF)對(duì)試驗(yàn)的各種病毒的抑制活性測(cè)定結(jié)果如表1所示。
表1 GM-THMF的抗病毒作用 格爾德霉素的作用靶點(diǎn)是熱休克蛋白90，國(guó)外對(duì)其抗腫瘤作用研究比較多見(jiàn)。由于強(qiáng)脂溶性，格爾德霉素在體內(nèi)主要分布在肝臟和肺部，目前尚未成為藥物上市。因此，對(duì)17-(四氫呋喃-2’-基)甲胺-17-去甲氧基格爾德霉素抗病毒活性研究時(shí)，選用的對(duì)照藥均為臨床應(yīng)用的藥物。本發(fā)明列舉了三種臨床使用的抗HBV藥物——拉米夫定、阿德福韋酯和恩替卡韋，兩種臨床使用的抗HIV代表藥物-齊多夫定和拉米夫定，一種臨床使用的抗單純皰疹病毒代表藥物-阿昔洛韋以及廣譜抗病毒藥病毒唑作為對(duì)照藥，與GM-THMF進(jìn)行活性比較。對(duì)于HBV病毒，GM-THMF的IC50與近期上市的抗HBV活性最強(qiáng)的恩替卡韋相當(dāng)；GM-THMF抗HIV病毒活性比齊多夫定和拉米夫定強(qiáng)；GM-THMF抗HSV活性比治療該病毒感染的首選藥物阿昔洛韋強(qiáng)約8千至35萬(wàn)倍；GM-THMF對(duì)柯薩奇病毒(CoxB3型)和(Cox B6型)以及對(duì)水皰性口炎病毒(VSV)的抑制活性顯著強(qiáng)于對(duì)照藥病毒唑。研究結(jié)果顯示，式(I)化合物GM-THMF的抗病毒活性是所有抗病毒化合物中最強(qiáng)的。因此，式(1)化合物GM-THMF極有潛力開(kāi)發(fā)成新型廣譜抗病毒藥物。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例可以幫助本專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員更全面的理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1抗HBV病毒活性的測(cè)定采用2.2.15(SIGMA購(gòu)得)細(xì)胞培養(yǎng)法，測(cè)定了式(1)化合物在體外對(duì)乙肝病毒復(fù)制的影響。首先測(cè)定樣品GM-THMF對(duì)細(xì)胞的毒性將試驗(yàn)細(xì)胞配制成每毫升(1～2)×105個(gè)/ml，接種96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔100μl，37℃5％CO2培養(yǎng)24小時(shí)，細(xì)胞長(zhǎng)成接近單層后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。目標(biāo)化合物和對(duì)照藥用培養(yǎng)液配制成所需濃度后加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每濃度4孔，每4天換同濃度藥液一次，同時(shí)設(shè)無(wú)藥物細(xì)胞對(duì)照組、感染細(xì)胞對(duì)照組及陽(yáng)性藥物對(duì)照組。以細(xì)胞病變作為指標(biāo)，8天顯微鏡下觀察細(xì)胞病變程度。其次，測(cè)定樣品GM-THMF抑制肝炎病毒的活性，試驗(yàn)方法為每毫升(1～2)×105個(gè)/ml試驗(yàn)細(xì)胞接種96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔100μl，37℃5％CO2培養(yǎng)24小時(shí)，分別加入GM-THMF和對(duì)照藥物拉米夫定、阿德福韋酯及恩替卡韋，同時(shí)設(shè)細(xì)胞對(duì)照組。第4天換原濃度藥液或?qū)φ张囵B(yǎng)液一次。培養(yǎng)第8天細(xì)胞裂解后，按分子克隆實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法提取HBV DNA。各樣品進(jìn)行斑點(diǎn)雜交、放射自顯影、測(cè)量各雜交點(diǎn)的A值后，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計(jì)算細(xì)胞對(duì)照及給藥組的HBV DNA含量后，用Reed&Muench法計(jì)算半數(shù)有效濃度。結(jié)果表明，IC50＝0.001μmol/L(見(jiàn)表1)。
實(shí)施例2藥物抑制HIV-1活性測(cè)定首先按照實(shí)施例1相同方法，測(cè)定GM-THMF對(duì)MT-4細(xì)胞的毒性；在96孔MT-4細(xì)胞培養(yǎng)中加入8個(gè)不同稀釋濃度的GM-THMF和對(duì)照藥拉米夫定及齊多夫定，每個(gè)稀釋度重復(fù)2孔，并設(shè)無(wú)藥物細(xì)胞對(duì)照組、感染細(xì)胞對(duì)照組及陽(yáng)性藥物對(duì)照組。再將已感染HIV-1D的細(xì)胞(2×105個(gè)/ml)100μl接種于含藥96孔細(xì)胞培養(yǎng)板各試驗(yàn)組內(nèi)。置37℃、5％CO2和飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每天觀察細(xì)胞病變。按HIV-1P24抗原試劑盒提供的操作步驟，測(cè)定加藥后第4天(96小時(shí))細(xì)胞培養(yǎng)上清HIV-1P24抗原含量，用Reed&Muench法計(jì)算藥物半數(shù)有效濃度。結(jié)果表明，IC50＝0.0012μmol/L(見(jiàn)表1)。
實(shí)施例3化合物GM-THMF抗單純皰疹病毒1型(VR733株)活性測(cè)定將VERO細(xì)胞(非洲綠猴腎細(xì)胞，SIGMA公司購(gòu)得)配成(2～4)×105個(gè)/ml接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔0.1ml。于37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)24小時(shí)，棄去培養(yǎng)液，加入適量HSV-1病毒，37℃下吸附1~2小時(shí)后，棄去病毒液。分別加入測(cè)試藥物GM-THMF和對(duì)照藥阿昔洛韋，每濃度2孔。于37℃，5％CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng)，48小時(shí)后觀察細(xì)胞病變。用Reed&Muench法計(jì)算藥物抑制病毒的半數(shù)有效濃度(IC50)，按下式計(jì)算，IC50=Antilog(A+50-AB-A×C)]]>A＝log(病變＜50％的藥物濃度)B＝log(病變＞50％的藥物濃度)C＝log(稀釋倍數(shù))結(jié)果表明，IC50＝0.0011μmol/L(見(jiàn)表1)。
實(shí)施例4化合物GM-THMF抗單純皰疹病毒2型(SAV株)活性的測(cè)定除感染病毒為單純皰疹病毒2型外，其他步驟及計(jì)算均按實(shí)施例3的方法，測(cè)定化合物GM-THMF抗HSV-2病毒IC50值。結(jié)果表明，IC50＝0.0006μmol/L(見(jiàn)表1)。
實(shí)施例5化合物GM-THMF抗Cox B3病毒活性的測(cè)定除感染病毒為Cox B3病毒外，其他步驟及計(jì)算均按實(shí)施例3的方法，測(cè)定化合物抗Cox B3型病毒IC50值。結(jié)果表明，IC50＝0.0056μmol/L(見(jiàn)表1)。
實(shí)施例6化合物GM-THMF抗Cox B6病毒活性的測(cè)定除感染病毒為Cox B6病毒外，其他步驟及計(jì)算均按實(shí)施例3的方法，測(cè)定化合物抗Cox B6型病毒IC50值。結(jié)果表明，IC50＝0.00016μmol/L(見(jiàn)表1)。
實(shí)施例7化合物GM-THMF抗VSV病毒活性的測(cè)定除感染病毒為VSV病毒外，其他步驟及計(jì)算均按實(shí)施例3的方法，測(cè)定化合物抗VSV病毒IC50值。結(jié)果表明，IC50＝0.00076μmol/L(見(jiàn)表1)。
權(quán)利要求
1.一種17-(四氫呋喃-2’-基)甲胺-17-去甲氧基格爾德霉素在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用，所說(shuō)格爾德霉素的結(jié)構(gòu)如式(1)所示。 式(1)
2.如權(quán)利要求1所述格爾德霉素的藥物組合物在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求1所述格爾德霉素的鹽及其類(lèi)似物在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種17－(四氫呋喃－2’－基)甲胺－17－去甲氧基格爾德霉素在抗病毒中的應(yīng)用，抗病毒活性研究結(jié)果顯示，所說(shuō)化合物具有強(qiáng)抗病毒活性和廣抗病毒譜，為今后深入研究與開(kāi)發(fā)所說(shuō)化合物成為臨床有效的抗病毒藥物奠定了良好的基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)A61K31/395GK1827617SQ20061007299
公開(kāi)日2006年9月6日 申請(qǐng)日期2006年4月10日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月10日
發(fā)明者李卓榮, 陶佩珍, 山廣志, 李玉環(huán), 游雪甫 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所