專(zhuān)利名稱(chēng)：長(zhǎng)梗南五味子提取物，其制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及長(zhǎng)梗南五味子提取物，其制備方法及用途。本發(fā)明還涉及含長(zhǎng)梗南五味子提取物的組合物。
背景技術(shù)：
長(zhǎng)梗南五味子(Kadsura longepedunculata Finet et Gagnep)系五味子科(Schisandraceae)南五味子屬(Kadsura)植物，為常綠木質(zhì)藤本，根部入藥，民間常用其治療風(fēng)濕、胃痛、胃腸炎和跌打損傷等(宋萬(wàn)志等，中國(guó)五味產(chǎn)科藥用植物中的木脂素成分，中草藥，1982，1340)。近年來(lái)，已有學(xué)者從長(zhǎng)梗南五味子的根皮、種子和莖中分離得到木脂素和三萜類(lèi)成分，主要包括南五木脂素C，D，E，F(xiàn)，G，南五內(nèi)酯A、五內(nèi)酯A，B，E，F(xiàn)、南五內(nèi)酯、五味子酸、長(zhǎng)南酸、新南五酸A，B，C和表安五酸等(藥學(xué)學(xué)報(bào)，1997，32(6)455-45；中國(guó)中藥雜志，2003，28(12)1120-1124；昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，138-40)。有發(fā)明公開(kāi)從長(zhǎng)梗南五味子莖和葉中分離到的長(zhǎng)梗南五味內(nèi)酯素類(lèi)化合物以及木脂素類(lèi)化合物具有抗腫瘤活性(中國(guó)專(zhuān)利，申請(qǐng)?zhí)?00610010715.0)；安五脂素在離體水平可不同程度抑制兔血小板的聚集作用(復(fù)旦大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2005，32(4)467-478)；五內(nèi)酯E，F(xiàn)和長(zhǎng)南酸具有顯著抑制白血病細(xì)胞P388形成的作用(Tetrahedron Letter，1983，24(23)2351-2354)；長(zhǎng)梗南五味子的乙醇提取物對(duì)大鼠幽門(mén)結(jié)扎型潰瘍具有較好的保護(hù)作用(中草藥，1990，21(9)27-28)。
雖已有學(xué)者對(duì)長(zhǎng)梗南五味子不同部位的藥理及藥化進(jìn)行過(guò)研究，但這些研究多集中于脂溶性成分的研究，而對(duì)長(zhǎng)梗南五味子部分，尤其是其根部提取物的生物活性及化學(xué)組成未有研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所需解決的技術(shù)問(wèn)題之一是提供一種長(zhǎng)梗南五味子提取物；本發(fā)明所需解決的技術(shù)問(wèn)題之二是提供一種長(zhǎng)梗南五味子提取物的制備方法；本發(fā)明所需解決的技術(shù)問(wèn)題之三是提供一種長(zhǎng)梗南五味子提取物的用途；本發(fā)明所需解決的技術(shù)問(wèn)題之四是提供一種含長(zhǎng)梗南五味子提取物的組合物；以克服現(xiàn)有技術(shù)的不足和缺陷。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下本發(fā)明的長(zhǎng)梗南五味子提取物，其制備方法如下
用6～14倍長(zhǎng)梗南五味子根重量的水浸泡長(zhǎng)梗南五味子根12-48小時(shí)，煎煮提取2-4次，每次提取0.5-1.5小時(shí)，合并各次水提液；過(guò)濾，濃縮水提液；加乙醇至濃縮水提液，使乙醇濃度至60～80％，放置醇沉8～24小時(shí)；過(guò)濾，回收乙醇，干燥，得長(zhǎng)梗南五味子提取物。
所說(shuō)的長(zhǎng)梗南五味子，為其根部，可洗凈干燥后，粉碎使用。
所說(shuō)的水用量為藥材重量的6～14倍，優(yōu)選的為8～12倍，最優(yōu)選的為10倍。加水量過(guò)多，增加濾液濃縮時(shí)的工作量；過(guò)少，則有效成分提取不完全。本發(fā)明的提取方法使用水為提取溶劑，與乙醇和丙酮等有機(jī)溶劑提取法不同，所得到的提取物的有效成分在種類(lèi)上也有本質(zhì)區(qū)別。
所說(shuō)的煎煮提取為2～4次，每次提取0.5～1.5小時(shí)，合并煎液，優(yōu)選的為提取3次，每次提取1小時(shí)，合并煎液。提取次數(shù)過(guò)多、時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，易得到較多的淀粉、多糖等雜質(zhì)；提取次數(shù)過(guò)少、時(shí)間過(guò)短，則有效成分提取不完全。
所說(shuō)的過(guò)濾可使用中藥領(lǐng)域各種常規(guī)的過(guò)濾方法進(jìn)行，如濾紙過(guò)濾、濾膜過(guò)濾等。
所說(shuō)的濃縮可使用中藥領(lǐng)域各種常規(guī)的濃縮方法進(jìn)行，如減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、超濾等。
所說(shuō)的加乙醇至濃縮水提液，使乙醇濃度至60～80％，優(yōu)選的乙醇濃度為70％。乙醇濃度過(guò)高，易造成有效成分損失；過(guò)低，不能有效去除蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì)。
所說(shuō)的醇沉?xí)r間為8～24小時(shí)。時(shí)間過(guò)短，不能有效沉淀雜質(zhì)。
所說(shuō)的干燥可使用中藥領(lǐng)域各種常規(guī)的干燥方法進(jìn)行，如水浴蒸干、減壓干燥等。
本發(fā)明的長(zhǎng)梗南五味子提取物可單獨(dú)使用，也可與藥學(xué)上可接受的載體組成藥物組合物。提取物加入制備不同劑型時(shí)所需的各種常規(guī)輔料，如稀釋劑、崩解劑、黏合劑、潤(rùn)滑劑、矯味劑、防腐劑等，以常規(guī)的中藥制劑方法可制備成任何一種常用口服劑型，如丸劑、散劑、片劑、膠囊劑、口服液等。
本發(fā)明的有益效果在于長(zhǎng)梗南五味子提取物的制備工藝簡(jiǎn)單、成本較低、重現(xiàn)性好。
所得到的長(zhǎng)梗南五味子水溶性提取物具有明顯的抗菌、抗氧化、抗?jié)兗翱垢篂a效果，且大鼠口服急性毒性較低，可成為臨床治療胃腸道疾病的有效藥物。
以本發(fā)明的長(zhǎng)梗南五味子提取物為主藥，可制備多種長(zhǎng)梗南五味子的現(xiàn)代中藥制劑，方便患者使用。


圖1為長(zhǎng)梗南五味子提取物紫外吸收?qǐng)D譜。適量實(shí)施例2中的長(zhǎng)梗南五味子提取物溶于甲醇中，190～700nm掃描，表明該提取物在220及280nm處具有最大吸收峰。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例通過(guò)下面的具體實(shí)施例可進(jìn)一步了解本發(fā)明。但它們不是對(duì)本發(fā)明的限定。
實(shí)施例1用6倍長(zhǎng)梗南五味子根重量的水浸泡過(guò)夜，提取2次，每次提取1.5小時(shí)，合并煎液；過(guò)濾，濃縮水提液；加乙醇至濃縮水提液，使乙醇濃度至60％，放置8小時(shí)；過(guò)濾，回收乙醇，干燥，得長(zhǎng)梗南五味子提取物。
實(shí)施例2用8倍長(zhǎng)梗南五味子根重量的水浸泡過(guò)夜，提取3次，每次提取1小時(shí)，合并煎液；過(guò)濾，濃縮水提液；加乙醇至濃縮水提液，使乙醇濃度至70％，放置12小時(shí)；過(guò)濾，回收乙醇，干燥，得長(zhǎng)梗南五味子提取物。
實(shí)施例3用10倍長(zhǎng)梗南五味子根重量的水浸泡過(guò)夜，提取4次，每次提取0.5小時(shí)，合并煎液；過(guò)濾，濃縮水提液；加乙醇至濃縮水提液，使乙醇濃度至80％，放置24小時(shí)；過(guò)濾，回收乙醇，干燥，得長(zhǎng)梗南五味子提取物。
實(shí)施例4用6倍長(zhǎng)梗南五味子根重量的水浸泡過(guò)夜，提取3次，每次提取1.5小時(shí)，合并煎液；過(guò)濾，濃縮水提液；加乙醇至濃縮水提液，使乙醇濃度至60％，放置10小時(shí)；過(guò)濾，回收乙醇，干燥，得長(zhǎng)梗南五味子提取物。
實(shí)施例5用8倍長(zhǎng)梗南五味子根重量的水浸泡過(guò)夜，提取2次，每次提取1小時(shí)，合并煎液；過(guò)濾，濃縮水提液；加乙醇至濃縮水提液，使乙醇濃度至70％，放置16小時(shí)；過(guò)濾，回收乙醇，干燥，得長(zhǎng)梗南五味子提取物。
實(shí)施例6用10倍長(zhǎng)梗南五味子根重量的水浸泡過(guò)夜，提取4次，每次提取1小時(shí)，合并煎液；過(guò)濾，濃縮水提液；加乙醇至濃縮水提液，使乙醇濃度至80％，放置20小時(shí)；過(guò)濾，回收乙醇，干燥，得長(zhǎng)梗南五味子提取物。
實(shí)施例7用6倍長(zhǎng)梗南五味子根重量的水浸泡過(guò)夜，提取4次，每次提取1.5小時(shí)，合并煎液；過(guò)濾，濃縮水提液；加乙醇至濃縮水提液，使乙醇濃度至70％，放置8小時(shí)；過(guò)濾，回收乙醇，干燥，得長(zhǎng)梗南五味子提取物。
實(shí)施例8用8倍長(zhǎng)梗南五味子根重量的水浸泡過(guò)夜，提取3次，每次提取0.5小時(shí)，合并煎液；過(guò)濾，濃縮水提液；加乙醇至濃縮水提液，使乙醇濃度至80％，放置12小時(shí)；過(guò)濾，回收乙醇，干燥，得長(zhǎng)梗南五味子提取物。
實(shí)施例9用10倍長(zhǎng)梗南五味子根重量的水浸泡過(guò)夜，提取2次，每次提取0.5小時(shí)，合并煎液；過(guò)濾，濃縮水提液；加乙醇至濃縮水提液，使乙醇濃度至60％，放置24小時(shí)；過(guò)濾，回收乙醇，干燥，得長(zhǎng)梗南五味子提取物。
實(shí)施例10～14中所使用的藥物為實(shí)施例2中的長(zhǎng)梗南五味子提取物。
實(shí)施例10長(zhǎng)梗南五味子提取物體外抑菌、殺菌效果1菌種金黃色葡萄球菌，枯草芽孢桿菌，大腸桿菌，產(chǎn)氣腸桿菌，釀酒酵母2培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，沙氏培養(yǎng)基，沙氏培養(yǎng)液均有上海疾病預(yù)防控制中心提供。
3實(shí)驗(yàn)器材壓力蒸氣滅菌器(上海醫(yī)用核子儀器廠，型號(hào)YXQ-SG4b-280)、恒溫培養(yǎng)箱(太倉(cāng)市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠，型號(hào)THZ-C)、凈化工作臺(tái)(蘇州儀器廠，型號(hào)SW-CJ-2FD)、游標(biāo)卡尺等。
4實(shí)驗(yàn)方法1)抑菌圈測(cè)定無(wú)菌平皿內(nèi)加入20ml已熔化的固體培養(yǎng)基，固定后加入100μl含菌(106個(gè)/毫升)的生理鹽水溶液，用涂布棒將其均勻分散于固體培養(yǎng)基上。每平皿內(nèi)用直徑6mm的無(wú)菌金屬打孔器均勻打孔4～6個(gè)，去除孔內(nèi)瓊脂，加入受試藥液，細(xì)菌組置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24小時(shí)，真菌組置30℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48小時(shí)，觀察結(jié)果。
抗菌作用表現(xiàn)為孔周?chē)霈F(xiàn)無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的地帶，即抑菌圈，選擇均勻而完全無(wú)菌生長(zhǎng)的抑菌圈進(jìn)行測(cè)量，用游標(biāo)卡尺記錄抑菌圈的直徑(包括孔徑)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。阿齊霉素(6.4μg/片或孔)為陽(yáng)性對(duì)照，陰性對(duì)照為水。結(jié)果見(jiàn)表1。
2)最低抑菌濃度(MIC)及最低殺菌濃度(MBC)測(cè)定用蒸餾水對(duì)倍稀釋實(shí)驗(yàn)藥物，取各稀釋實(shí)驗(yàn)藥液2.5ml加入到含有2.5ml雙倍濃度營(yíng)養(yǎng)肉湯的試管中。取50μl含菌量為106個(gè)/毫升菌懸液分別接種于含藥液(實(shí)驗(yàn)組)及不含藥液(陽(yáng)性對(duì)照組)的試管中，另取3支含營(yíng)養(yǎng)肉湯的試管，作為陰性對(duì)照。細(xì)菌組置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24小時(shí)，真菌組置30℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48小時(shí)，觀察結(jié)果。陽(yáng)性對(duì)照管有菌生長(zhǎng)(渾濁)，陰性對(duì)照管無(wú)菌生長(zhǎng)(透明)，實(shí)驗(yàn)組以肉眼觀察無(wú)菌生長(zhǎng)的藥液濃度即為MIC。從無(wú)菌生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)管中取100μl，分別加入營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板內(nèi)，37℃培養(yǎng)24小時(shí)或30℃培養(yǎng)48小時(shí)，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況，無(wú)菌落形成的藥液最小濃度為MBC，實(shí)驗(yàn)重復(fù)4次。結(jié)果見(jiàn)表2。
5實(shí)驗(yàn)結(jié)果1)長(zhǎng)梗南五味子提取物的抑菌作用，結(jié)果見(jiàn)表1?？芍幰涸?0mg/ml時(shí)對(duì)受試菌均具有明顯的抑制作用，其中對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的抑制效果顯著優(yōu)于革蘭氏陰性菌及釀酒酵母。
表1長(zhǎng)梗南五味子提取物的抑菌作用

注“NA”表示無(wú)明顯抑菌效果。
2)最低抑菌濃度及殺菌濃度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。可知藥液濃度較低時(shí)即能對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌起到抑菌及殺菌作用，而對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌及釀酒酵母而言，則需較高的藥液濃度。
表2長(zhǎng)梗南五味子提取物的MIC及MBC

注“-”表示無(wú)菌生長(zhǎng)；“+”表示有菌生長(zhǎng)。
實(shí)施例11長(zhǎng)梗南五味子提取物體外抗氧化效果1抑制肝勻漿脂質(zhì)自氧化作用取SD大鼠，斷頭處死，取肝臟，于4℃的生理鹽水中洗凈，剪成小碎塊；稱(chēng)取10g組織，加100ml生理鹽水，用勻漿機(jī)制成肝勻漿(8000-10000rpm)。將離心管編號(hào)，取新鮮大鼠肝勻漿(100mg/ml)1.5ml分別加入各離心管中，實(shí)驗(yàn)管分別加入不同濃度長(zhǎng)梗南五味子提取物溶液或維生素C溶液0.1ml，對(duì)照管加入生理鹽水0.1ml，每組平行3管，37℃振蕩溫育2h，取出后加入1.5ml20％的三氯醋酸終止反應(yīng)。另設(shè)空白對(duì)照管，溫育前加入1.5ml20％的三氯醋酸，37℃振蕩溫育2h?；靹蚝箪o置10min，3000rpm離心10min。取上清溶液1.5ml，加入1ml硫代巴比妥酸，沸水浴加熱10min。冷卻后532nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。
表3長(zhǎng)梗南五味子提取物對(duì)大鼠肝勻漿自氧化的抑制作用

注“-”表示未進(jìn)行該組實(shí)驗(yàn)。
結(jié)果見(jiàn)表3，表明長(zhǎng)梗南五味子提取物對(duì)大鼠肝勻漿具有明顯的抑制作用，且該抑制作用隨藥液濃度的增加而增強(qiáng)。其半數(shù)有效量(IC50)為0.2mg/ml，低于對(duì)照品維C的IC50(0.8mg/ml)。
2抑制過(guò)氧化氫誘發(fā)的大鼠紅細(xì)胞氧化溶血作用紅細(xì)胞的制備SD大鼠尾靜脈取血，肝素抗凝，2000rpm離心5min，生理鹽水洗滌3次，配成10％(v/v)的紅細(xì)胞懸液。實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組(不加藥液，加入同樣量的生理鹽水)、藥物組(藥物濃度分別為50.0和25.0mg/ml)，每組平行三管。取紅細(xì)胞懸液0.5ml，分別加入生理鹽水或藥物溶液0.15ml，37℃溫育10min后，加入100mmol/L的過(guò)氧化氫溶液0.5毫升(空白管不加過(guò)氧化氫)，繼續(xù)溫育2h，加入3倍量的生理鹽水稀釋?zhuān)?000rpm離心6min，取上清液，541nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。以對(duì)照組為100％溶血計(jì)算對(duì)照組和藥物組的溶血度和抑制度。
表4長(zhǎng)梗南五味子提取物對(duì)過(guò)氧化氫誘發(fā)的大鼠紅細(xì)胞氧化溶血的抑制作用


結(jié)果見(jiàn)表4，表明長(zhǎng)梗南五味子提取物對(duì)過(guò)氧化氫誘發(fā)的大鼠紅細(xì)胞氧化溶血具有明顯的抑制作用，藥物濃度為50.0mg/ml時(shí)，其抑制率達(dá)82％。隨著藥物濃度的增加，其對(duì)紅細(xì)胞氧化溶血的抑制作用增強(qiáng)。
3提取物還原力的測(cè)定取不同濃度的藥物溶液0.1ml，加入0.2mol/L pH6.6的磷酸緩沖溶液0.5ml、1％的鐵氰化鉀溶液0.5ml，混勻，50℃保溫20min，再加入10％的三氯乙酸溶液0.5ml，振蕩混勻后，4000rpm下離心10min。取上清溶液1ml，加入1ml蒸餾水和0.2ml 0.1％的氯化鐵溶液，靜置10min后，體系由黃色變?yōu)樗{(lán)色，700nm處測(cè)定吸收度。陽(yáng)性對(duì)照為0.2mg/ml的維生素C溶液。
表5長(zhǎng)梗南五味子提取物的還原力

結(jié)果見(jiàn)表5，表明隨著長(zhǎng)梗南五味子提取物濃度的增加，其還原力提高。藥物濃度為2.5mg/ml時(shí)，其還原力高于陽(yáng)性對(duì)照。
實(shí)施例12長(zhǎng)梗南五味子提取物對(duì)大黃致腹瀉小鼠的治療作用取小鼠40只，雌雄各半，體重20±2g，由復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。禁食12h后，隨機(jī)分為4組正常對(duì)照組、大黃組、低劑量給藥組和高劑量給藥組。正常對(duì)照組和大黃組灌胃給予生理鹽水，低劑量給藥組和高劑量給藥組分別灌胃給予長(zhǎng)梗南五味子提取物4.8g/kg和6.0g/kg。給藥1h后，除正常對(duì)照組外，其余各組均灌胃給予大黃水浸液(1g生藥/ml)12.5g生藥/kg。單只分籠觀察，給予大黃水煎液2h后，記錄排便點(diǎn)數(shù)，共記錄6h。
表6長(zhǎng)梗南五味子提取物對(duì)大黃致小鼠腹瀉的抑制作用

結(jié)果見(jiàn)表6，表明給藥劑量為6.0g/kg時(shí)，長(zhǎng)梗南五味子提取物對(duì)大黃所致腹瀉有明顯的止瀉作用。
實(shí)施例13長(zhǎng)梗南五味子提取物對(duì)大黃致腹瀉小鼠的治療作用1)對(duì)鹽酸-乙醇致大鼠急性胃粘膜損傷的影響取SD大鼠，雌雄各半，由復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為5組正常大鼠組、高劑量給藥組、中劑量給藥組、低劑量給藥組、洛賽克組。實(shí)驗(yàn)前，大鼠禁食24h，可自由飲水。正常對(duì)照組灌胃給予生理鹽水，低劑量給藥組、中劑量給藥組和高劑量給藥組分別灌胃給予長(zhǎng)梗南五味子提取物0.7g/kg、1.4g/kg和2.0g/kg，洛賽克組灌胃給予奧美拉唑鎂10mg/kg。給藥1h后，每只大鼠灌胃給予鹽酸-乙醇溶液1.5ml(每100毫升鹽酸-乙醇溶液含鹽酸1.7毫升，無(wú)水乙醇60毫升，蒸餾水配制)。1h后處死大鼠，結(jié)扎賁門(mén)端，自幽門(mén)端注入1％甲醛溶液5ml，結(jié)扎幽門(mén)端，固定10min，取出胃，沿胃大彎剪開(kāi)胃壁，以胃粘膜損傷長(zhǎng)度總和作為潰瘍指數(shù)(直徑超過(guò)1毫米者長(zhǎng)度加倍)，計(jì)算潰瘍抑制百分率。
表7長(zhǎng)梗南五味子提取物對(duì)鹽酸乙醇致胃粘膜損傷的抑制作用

結(jié)果見(jiàn)表7，表明高、中、低給藥劑量時(shí)，長(zhǎng)梗南五味子提取物對(duì)鹽酸乙醇溶液所致胃粘膜損傷具有明顯的抑制作用。給藥量為2.0g/kg時(shí)，抑制效果與市售藥物洛賽克相近。
2)對(duì)大鼠應(yīng)激性胃潰瘍的影響(水浸拘束法)
取SD大鼠，雌雄各半，由復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為5組正常大鼠組、高劑量給藥組、中劑量給藥組、低劑量給藥組、洛賽克組。實(shí)驗(yàn)前，大鼠禁食24h，可自由飲水。正常對(duì)照組灌胃給予生理鹽水，低劑量給藥組、中劑量給藥組和高劑量給藥組分別灌胃給予長(zhǎng)梗南五味子提取物0.7g/kg、1.4g/kg和2.0g/kg，洛賽克組灌胃給予奧美拉唑鎂10mg/kg。給藥1h后，將大鼠固定在金屬網(wǎng)制的小籠內(nèi)，浸于(20±1)℃的水中，液面保持在大鼠胸骨劍突水平。18h后，取出大鼠，處死，結(jié)扎賁門(mén)端，自幽門(mén)端注入1％甲醛溶液5ml，結(jié)扎幽門(mén)端，固定10min，取出胃，沿胃大彎剪開(kāi)胃壁，放大鏡下測(cè)量潰瘍長(zhǎng)度總和，作為潰瘍指數(shù)，計(jì)算潰瘍抑制百分率。
表8長(zhǎng)梗南五味子提取物對(duì)冷水拘浸致胃潰瘍的抑制作用

結(jié)果見(jiàn)表8，表明高、低給藥劑量時(shí)，長(zhǎng)梗南五味子提取物對(duì)冷水應(yīng)激潰瘍具顯著的抑制作用。
實(shí)施例14長(zhǎng)梗南五味子提取物的急性毒性預(yù)實(shí)驗(yàn)中，灌胃給于長(zhǎng)梗南五味子提取物溶液，小鼠均未出現(xiàn)死亡，無(wú)法測(cè)出半數(shù)致死量，故測(cè)定其最大耐受量。
取昆明小鼠，20±2g，由復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。分為三組，每組15只，灌胃給藥，每天2次，間隔8h，連續(xù)觀察14天，記錄小鼠死亡個(gè)數(shù)。
表9長(zhǎng)梗南五味子提取物小鼠口服急性毒性

小鼠給藥后無(wú)體重減少、食欲減退等不良反應(yīng)，觀察14天未見(jiàn)小鼠死亡，尸檢未見(jiàn)主要器官異常。結(jié)果表明長(zhǎng)梗南五味子提取物小鼠口服最大耐受量大于30g/kg，毒性較低。
由實(shí)施例10～14可知1)本發(fā)明的長(zhǎng)梗南五味子提取物對(duì)常見(jiàn)微生物具有明顯的抑制及殺滅作用，其中對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的抑制作用較為明顯，其在60及120μg時(shí)即能對(duì)金黃色葡萄球菌及枯草芽孢桿菌產(chǎn)生抑制作用。
2)本發(fā)明的長(zhǎng)梗南五味子提取物具有明顯的抗氧化活性。體外能夠顯著抑制肝勻漿自氧化程度、過(guò)氧化氫引起的紅細(xì)胞溶血，且具有一定的還原力。
3)本發(fā)明的長(zhǎng)梗南五味子提取物能在一定程度上減輕大黃致小鼠腹瀉癥狀，具抗脾虛、抗腹瀉作用。
4)本發(fā)明的長(zhǎng)梗南五味子提取物抗?jié)冃Ч@著，能有效抑制鹽酸-乙醇溶液及冷水拘浸引起的胃粘膜損傷及潰瘍的發(fā)生。
5)大鼠急性毒性試驗(yàn)表明本發(fā)明的長(zhǎng)梗南五味子提取物口服毒性較小，最大耐受量超過(guò)30g/kg，具良好的開(kāi)發(fā)前景。
實(shí)施例15長(zhǎng)梗南五味子提取物膠囊劑將長(zhǎng)梗南五味子提取物粉碎，過(guò)篩，加入5％的微粉硅膠，混勻，加入60％乙醇制軟材，制粒，干燥，過(guò)20～40目篩，裝入明膠硬膠囊即得。
實(shí)施例16長(zhǎng)梗南五味子提取物顆粒劑將長(zhǎng)梗南五味子提取物粉碎，過(guò)篩，加入4倍量的糖粉和1倍量糊精，混勻，加入60％乙醇制軟材，制粒，干燥，整粒，即得。
實(shí)施例17長(zhǎng)梗南五味子提取物片劑將長(zhǎng)梗南五味子提取物粉碎，過(guò)篩，加入10％淀粉，混勻，加入60％乙醇制制軟材，制粒，干燥，整粒，加入1％硬脂酸，混勻，壓片，即得。
實(shí)施例16長(zhǎng)梗南五味子提取物糖漿劑將長(zhǎng)梗南五味子提取物粉碎，過(guò)篩，加入100倍量的單糖漿和適量防腐劑，加熱溶解，冷卻，即得。
權(quán)利要求
1.一種長(zhǎng)梗南五味子提取物，其特征在于按如下步驟制備獲得用6～14倍長(zhǎng)梗南五味子根重量的水浸泡長(zhǎng)梗南五味子根12-24小時(shí)，然后煎煮提取2-4次，每次提取0.5-1.5小時(shí)，合并各次水提液；過(guò)濾，濃縮水提液；加乙醇至濃縮水提液，使乙醇濃度至60～80％，放置醇沉8～24小時(shí)；過(guò)濾，回收乙醇，干燥，得長(zhǎng)梗南五味子提取物。
2.一種長(zhǎng)梗南五味子提取物的制備方法，其特征在于具體步驟如下用6～14倍長(zhǎng)梗南五味子根重量的水浸泡長(zhǎng)醒南五味子根12-24小時(shí)，然后煎煮提取2-4次，每次提取0.5-1.5小時(shí)，合并各次水提液；過(guò)濾，濃縮水提液；加乙醇至濃縮水提液，使乙醇濃度至60～80％，放置醇沉8～24小時(shí)；過(guò)濾，回收乙醇，干燥，得長(zhǎng)梗南五味子提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的長(zhǎng)梗南五味子提取物的制備方法，其特征在于水的用量為藥材重量的8～12倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的長(zhǎng)梗南五味子提取物的制備方法，其特征在于所說(shuō)的煎煮提取為提取3次，每次提取1小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的長(zhǎng)梗南五味子提取物的制備方法，其特征在于乙醇濃度為70％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的長(zhǎng)梗南五味子提取物在制備治療胃痛、胃腸炎和胃潰瘍制劑中的應(yīng)用。
7.一種治療胃腸道疾病的藥物組合物，其特征在于，含有權(quán)利要求1所述的長(zhǎng)梗南五味子提取物及藥學(xué)上可接受的載體。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于為片劑、顆粒劑、膠囊劑或糖漿劑。
全文摘要
本發(fā)明屬中醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體為長(zhǎng)梗南五味子提取物，其制備方法及用途。本發(fā)明的長(zhǎng)梗南五味子提取物，按如下步驟制備獲得將長(zhǎng)梗南五味子根部洗凈、切碎、加水煎煮，濃縮水提液，醇沉，過(guò)濾，回收乙醇，干燥即得。其具有抗菌、抗氧化、抗?jié)兗翱垢篂a的作用，且毒性較低。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的長(zhǎng)梗南五味子提取物具水溶性，可用于胃痛、胃腸炎和胃潰瘍的治療。
文檔編號(hào)A61P29/00GK1969956SQ20061011929
公開(kāi)日2007年5月30日 申請(qǐng)日期2006年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月7日
發(fā)明者印春華, 宋蕾, 唐翠 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)