專利名稱：作為上皮來源的癌癥的生物標記物的adamts-7的制作方法
作為上皮來源的癌癥的生物標記物的ADAMTS-7相關(guān)申請的交叉引用
本申請要求2005年2月17日提交的美國臨時專利申請No. 60/653,818的35U.S.C. § 119 (e)之下的權(quán)益。發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明涉及通過評定從患者獲得的生物樣品ADAMTS-7的水 平用于上皮來源的癌癥的診斷和預(yù)后的方法。 發(fā)明背景
癌癥存活率中最重要的因素之一是在早期的檢測。檢測癌癥早 期事件的臨床分析提供了介入和防止癌癥發(fā)展的機會。隨著基因描繪和 蛋白質(zhì)組的發(fā)展，在可用于診斷和預(yù)測特定癌癥的分子標記物或"生物 標記物"的鑒定方面有了顯箸的進展。例如，對于前列腺癌來說，抗原 PSA (前列腺特異性抗原)可以在血液中檢測，是存在前列腺癌的指示。 因而，存在前列腺癌風險的男性的血液可以快速、容易和安全地篩選提 高的PSA水平。
雖然在癌癥檢測領(lǐng)域存在著顯箸的進展，本領(lǐng)域仍然需要鑒定 可以容易地用于臨床應(yīng)用的用于各種癌癥的新的生物標記物。例如，迄 今為止，對于使用易于檢測的生物標記物診斷乳腺癌，存在著相對較少 的可用選擇。EGFR的過量表達，特別是伴隨著雌激素受體的減量調(diào)節(jié)， 是乳腺癌患者中不良預(yù)后的標志.乳腺癌的其他已知標記物包括血液中 高水平的M2丙酮酸激酶(M2PK)(美國專利NO. 6,358,683 )、血液 中高的ZNF217蛋白水平(WO 98/02539)以及對于診斷有用的、乳腺 癌中新近鑒定的蛋白質(zhì)PDEBC的差異表達(美國專利申請No. 20030124543 )。這些生物標記物提供了診斷的可選擇方法，然而，它 們沒有被廣泛地使用。此外，盡管使用許多組織化學(xué)遺傳學(xué)的和免疫學(xué) 的標記物，臨床醫(yī)師仍然難以預(yù)測那些腫瘤將轉(zhuǎn)移到其他器官。[OO習生物標記物的鑒定對于改善診斷、預(yù)后以及疾病的治療是特別 相關(guān)的因而，本領(lǐng)域需要鑒定可以快速、容易和安全地檢測的選擇性 的生物標記物。這樣的生物標記物可以用于診斷、分期、或監(jiān)視患有癌
癥的個體的進展或治療，特別是疾病的侵入性的、可能的轉(zhuǎn)移階段。 發(fā)明概述
本發(fā)明基于這種發(fā)現(xiàn)，ADAMTS-7蛋白存在于尿液中，在患 有乳腺癌、前列腺、膀胱癌、腦癌和肝臟癌癥的患者中ADAMTS-7表 達和活性被增量調(diào)節(jié)。因而，本發(fā)明涉及預(yù)后評估的方法、便于診斷上 皮來源的癌癥的方法，和治療效力的標記物。特別地，在生物樣品例如 尿液中檢測的ADAMTS-7蛋白的存在預(yù)測了癌癥的存在，因為 ADAMTS-7蛋白在健康個體中不以顯著性水平檢測到。因而，測量生物 樣品(例如尿液或血液)中ADAMTS-7的存在或不存在提供了快速、 容易和安全的篩選，其可用于患者中上皮來源的癌癥，例如前列腺、乳 腺、肝臟、腦或膀胱癌癥的診斷和預(yù)后。
在一個實施方式中，提供了一種方法，用于便于患者中上皮來 源的癌癥的診斷。所述方法包括從患者獲得生物樣品，檢測所述生物樣 品中ADAMTS-7 (或其片段)的存在或不存在，其中ADAMTS-7的存 在是存在上皮來源的癌癥的指示。
在另 一個實施方式中，所述方法包括測量來自患者的測試生物 樣品中存在的ADAMTS-7水平，并比較觀察到的ADAMTS-7水平與相 同類型的對照樣品存在的ADAMTS-7水平。與對照樣品相比在測試樣 品中更高的ADAMTS-7水平，是癌癥的指示。優(yōu)選的，本發(fā)明的方法 用于上皮來源的癌癥的早期檢測。例如，可以在年度體檢期間由醫(yī)師來 篩選患者。
術(shù)語"對照樣品"是指從相信不患有癌癥的"正常的"或"健 康的"個體獲得的生物樣品。對照物可以使用本領(lǐng)域公知的方法來選 擇。 一旦很好地確定了對照群體的水平，來自測試生物樣品的陣列結(jié)果 可以直接與已知的水平比較。[OOIO]術(shù)語"測試樣品"是指從要檢測上皮來源的癌癥的患者獲得 的生物樣品。[OOll]例如，生物樣品可以獲自血液、組織(例如肺瘤或乳腺)、 血清、大便、尿液、痰、腦脊液、乳頭吸出物和細胞溶胞產(chǎn)物的上清液。 一種優(yōu)選的生物樣品是尿液。
在一個方面，要診斷的上皮來源的癌癥是乳腺癌、基底細胞
癌、腺癌、胃腸道癌癥，例如唇癌、口腔癌、食道癌、小腸癌癥和胃癌、 結(jié)腸癌、肝癌、膀胱癌、胰腺癌、卯巢癌、子宮頸癌、肺癌和皮膚癌， 例如扁平細胞和基底細胞癌癥、前列腺癌、腎臟細力包癌，和其他影響整 個身體的上皮細胞的已知的癌癥。
本發(fā)明進一步預(yù)期評定ADAMTS-7水平來監(jiān)視被設(shè)計以治 療患有上皮來源的癌癥的患者的治療方案的治療效力。
在一個優(yōu)選的實施方式中，所述生物樣品是尿液樣品。然而， 也可以使用血液、組織、血清、大便、痰、腦脊液、乳頭吸出物和細胞 溶胞產(chǎn)物的上清液的生物樣品。
在本發(fā)明的一個方面中，通過用特異性結(jié)合ADAMTS-7蛋白或其部分的基于抗體的結(jié)合部分接觸測試樣品或其制備物來測量生物 樣品中存在的ADAMTS-7水平?；诳贵w的結(jié)合部分與ADAMTS-7形 成可以被檢測的復(fù)合物，從而容許測量ADAMTS-7的水平。
基于抗體的免疫分析是測量ADAMTS-7蛋白水平的優(yōu)選的方式。然而，可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法來評定 ADAMTS-7水平。例如，在某些實施方式中，通過測量ADAMTS-7 mRNA 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物Cyr61水平來分析ADAMTS-7表達水平。做為選擇，通過質(zhì) 譜法，包括SELDI質(zhì)譜法來評定ADAMTS-7水平。ADAMTS-7水平也 可以通過生物學(xué)活性分析，包括但不限于基質(zhì)凝力交電泳(zymography) 來評定。
在進一步的實施方式中，本發(fā)明提供了試劑盒，其包含用于 測量生物樣品中的ADAMTS-7的手段。
在另一個實施方式中，提供了指導(dǎo)個體的治療的方法。所述 方法包括讓個體測試獲自所述個體的生物樣品中的ADAMTS-7的存 在，其中臨床醫(yī)師審查該結(jié)果，如果對于ADAMTS-7的存在所述生物 樣品是陽性的，所述臨床醫(yī)師因而指導(dǎo)所述個體治療。所述測試可以在 所述個體居留的同一國家、或在其他國家進行，所述結(jié)果例如通過網(wǎng)站 變?yōu)榭捎玫?，或被傳送給臨床醫(yī)師。
下文中公開了本發(fā)明的其他方面。附圖的簡要說明
附隨的圖畫，合并到本說明書中并作為本說明書的一部分，
與說明書一同說明了本發(fā)明的實施方式，用來解釋本發(fā)明的目的、益處和原理。
附

圖1顯示了通過zymography在來自膀胱癌患者的尿液中約 190 kDa高分子量明膠酶種類的存在。
附圖2A和2B顯示了來自膀胱癌患者尿液的約190kDa高分 子量明膠酶種類的部分純化。附圖2A，酶語。附圖2B，銀黃染色凝膠。
附圖3顯示了富集了 HMW明膠酶種類的樣品用Sypro Ruby Stain染色的SDS-PAGE。
附圖4顯示了 ADAMTS-7的氨基酸序列(SEQIDNO: 1 )。
附圖5A和5B顯示了在來自癌癥患者的尿液樣品中通過 zymography的ADAMTS-7檢測，和它在獲自健康個體的尿液樣品中的 缺乏。附圖5A,在來自癌癥患者的尿液樣品中高MW明膠酶種類的明 膠酶譜；第一泳道代表分子量標記物(MW) ， l-9指示的泳道代表來自 單獨的患者的尿液樣品，使用50 yL未濃縮的尿液，泳道l是來自前 列腺癌患者的尿液樣品，泳道2是來自腦癌患者的尿液樣品，泳道3是 來自膀胱癌患者的尿液樣品，泳道4是來自乳腺癌患者的尿液樣品，泳 道5是來自乳腺癌患者的尿液樣品，泳道6是來自肝癌患者的尿液樣 品，泳道7是來自肝癌患者的尿液樣品，泳道8是來自乳腺癌患者的尿 液樣品，以及泳道9是來自乳腺癌患者的尿液樣品。箭頭指向大約190 kDa的ADAMTS-7。附圖5B顯示了來自正常的年齡/性別匹配對照、沒 有癌癥的患者的尿液樣品的平行zymographic分析。在所有情況下 ADAMTS-7是不可檢測的。
附圖6A和6B顯示了在來自患有或不患有癌癥的患者的尿液 樣品中ADAMTS-7蛋白的代表性的免疫印跡染色。附圖6B,在4-12% 梯度SDS-PAGE凝膠上跑動的來自癌癥患者的尿液分析泳道l，來自 前列腺癌患者的濃縮的尿液樣品，泳道2，來自前列腺癌患者的濃縮的 尿液樣品，泳道3,來自乳腺癌患者的濃縮的尿液樣品，泳道4,來自 乳腺癌患者的濃縮的尿液樣品，泳道5,來自膀胱癌患者的濃縮的尿液 樣品，泳道6,來自乳腺癌患者的濃縮的尿液樣品，泳道7,來自乳腺 癌患者的濃縮的尿液樣品，泳道8，來自乳腺癌患者的濃縮的尿液樣。 附圖6B顯示了來自正常的年齡/性別匹配對照、沒有癌癥的患者的濃縮 尿液樣品的平行免疫印跡分析。在來自患有乳腺癌、膀胱癌和前列腺癌
的患者的尿液樣品中檢測到190kDa種類。 發(fā)明詳述
我們發(fā)現(xiàn)，患者的生物樣品中存在的ADAMTS-7水平與上皮 來源的癌癥的存在或不存在相關(guān)。
如在此使用的，"上皮來源的癌癥"是指由上皮細胞產(chǎn)生的 癌癥，其包括但不限于，乳腺癌、基底細胞癌、腺癌、胃腸癌、唇癌、 口腔癌、食道癌、小腸癌和胃癌、結(jié)腸癌、肝癌、膀胱癌、胰腺癌、卵 巢癌、子宮頸癌、肺癌、乳腺癌和皮膚癌，例如扁平細胞和基底細胞癌、 前列腺癌、腎臟細胞癌、和其他影響整個身體的上皮細胞的已知癌癥。
術(shù)語"侵略性的"或"侵入的"對于癌癥是指腫瘤擴展超過 它的邊界進入鄰近組織的傾向(Darnell, J.( 1990), Molecular Cell Biology, Third Ed., W. H. Freeman, NY)。侵入性癌癥可以與器官限制的癌癥形 成對照，其中腫瘤被限制在特定的器官。腫瘤的侵入性質(zhì)常常伴有蛋白 水解酶的作用，例如膠原酶，其降解基質(zhì)和基底膜材料來允許腫瘤擴展 超出被嚢的限制，并超出腫瘤位于其中的特定組織的限制。
如在此使用的術(shù)語"轉(zhuǎn)移，，是指癌癥從起源器官向患者中其 他遠端位點的散布的情況。腫瘤轉(zhuǎn)移的過程是多級的事件，涉及局部侵 入和細胞間基質(zhì)的石皮壞、進入血管的入血管內(nèi)滲、淋巴的或其他通道的 轉(zhuǎn)運、在循環(huán)中的存活、在第二位點中的血管的出血管滲出，以及在新 位置的生長(Fidler,等人,Adv. Cancer Res. 28, 149-250 ( 1978 ) ， Liotta, et al, Cancer Treatment Res. 40， 223-238 ( 1988 ), Nicolson, Biochim. Biophy. Acta948,175-224( 1988 )和Zetter,N. Eng. J. Med. 322, 605-612( 1990))。提高的惡性細胞運動性已經(jīng)與動物以及人類腫瘤中增強的轉(zhuǎn)移可能性 相關(guān)聯(lián)(Hosaka,等人，Gann 69, 273-276 ( 1978)和Haemmerlin, et al, Int. J. Cancer 27, 603-610 ( 1981 ))。
如在此使用的，"生物樣品"是指從患者、優(yōu)選的人類患者 獲得的生物材料的樣品，包括組織、組織樣品、細胞樣品(例如，組織 活檢，例如穿刺活檢、刷試活檢、表面活檢、針吸活檢、穿孔活檢、切 除活檢、開口活檢、切割活檢或經(jīng)內(nèi)窺鏡活檢)和腫瘤樣品。生物樣品 還可以是生物液體樣品。在一個優(yōu)選的實施方式中，所述生物樣品是尿 液。然而，也可以使用血液、血清、唾液、腦脊液、乳頭吸出物和細胞
溶胞產(chǎn)物的上清液。
本發(fā)明還包括在本發(fā)明的方法中使用生物樣品的分離物。如在此使用的，生物樣品的"分離物"(例如，組織或腫瘤樣品的分離物) 是指一種材料或組合物(例如，生物材料或組合物)，其以及從樣品分離、衍生、提取、純化或分離，并且優(yōu)選的基本上沒有不希望的與該生 物樣品相關(guān)的組合物和/或混雜物或雜質(zhì)。
在優(yōu)選的實施方式中，所述生物樣品被處理以防止 ADAMTS-7蛋白或ADAMTS-7 mRNA的降解。抑制或防止降解的方法 包括但不限于，用蛋白酶或RNAase抑制物處理生物樣品、冷凍生物樣 品或?qū)⑸飿悠分糜诒?。?yōu)選的，在分析之前，將生物樣品或分離物 持續(xù)地保持在條件下以防止ADAMTS-7蛋白或ADAMTS-7 RNA的降 解。
如在此使用的，"組織樣品"是指從個體、優(yōu)選的人類個體 的完整組織獲得或移除的組織的部分、碎片、局部、片段或級分。 一種 優(yōu)選的組織樣品是乳腺組織。
如在此使用的，"胂瘤樣品，，是指肺瘤，例如從個體、優(yōu)選 的人類個體獲得或移除(例如，從個體的組織移除或提取的)的腫瘤的 部分、碎片、局部、片段或級分。
如在此使用的，"原發(fā)腫瘤"是在患者體內(nèi)的第一位點出現(xiàn) 的腫瘤，可以不同于"轉(zhuǎn)移性腫瘤"，其在遠離原發(fā)腫瘤的遠端位點出 現(xiàn)在個體的身體中。
如在此使用的，"LCIS"是指小葉原位癌。LCIS也稱為小葉 瘤形成，有時被分類為非擴散乳腺癌的種類。它不滲透穿過小葉的壁。 雖然它本身通常不變?yōu)榍秩胄缘陌┌Y，有這種狀況的女性具有在同一個 或?qū)?cè)乳腺中發(fā)展侵入性乳腺癌的更高的風險。
如在此使用的，"DOS"是指導(dǎo)管原位癌。導(dǎo)管原位癌是最 常見的非擴散乳腺癌種類。在DCIS中，惡性細胞已經(jīng)轉(zhuǎn)移通過導(dǎo)管的 壁進入乳腺的脂肪組織。粉刺狀癌是一種DCIS，其比其他種類的DCIS 更可能在乳房腫瘤切除術(shù)后回到相同的區(qū)域，并且與其他形式的DCIS 相比更緊密地關(guān)聯(lián)著侵入性導(dǎo)管癌的最終發(fā)展。
如在此使用的，"ADAMTS-7"是指Genebank登記號protein, NP—055087.2 ( Homosapiens ) ( SEQ ID NO: 1 )(附圖4 )的ADAMTS-7
蛋白。ADAMTS-7是具有1型凝血栓蛋白基序7的disintegrin樣和金屬 蛋白酶(reprolysin型)。術(shù)語"ADAMTS-7"還涵蓋物種變體、同源物、等位形式、突變形式和其等同物。本發(fā)明涉及便于在患者中診斷上皮來源的癌癥的方法。在一 個實施方式中，所述方法包括從患者獲得生物樣品，檢測所述生物樣品 中ADAMTS-7 (或其片段)的存在或不存在，其中ADAMTS-7的存在 是存在上皮來源的癌癥的指示。在另一個實施方式中，所述方法包括測量從懷疑患有癌癥的 患者獲得的測試樣品中的ADAMTS-7水平，比較觀察到的水平與對照 樣品中分析的ADAMTS-7水平，所述對照樣品例如從相信不患有癌癥 的單個患者或個體群體獲得的樣品。ADAMTS-7的水平高于正常的對照 中觀察到的水平指示癌癥的存在。ADAMTS-7的水平可以通過任何單位 來表示，例如，從密度計、活性分析或Elisa平板讀數(shù)器獲得的單如在此使用的，"與對照樣品中的水平相比在測試樣品中更 高的ADAMTS-7水平"是指ADAMTS-7的數(shù)量，其高于對照樣品中存 在的ADAMTS-7數(shù)量。術(shù)語"更高水平"是指一種水平，其統(tǒng)計學(xué)上 顯著地或顯著地高于對照樣品中發(fā)現(xiàn)的水平。優(yōu)選的，"更高水平"是 至少2倍或更高。術(shù)語"統(tǒng)計學(xué)上顯著的"或"顯著地"是指統(tǒng)計顯著性，一 般意味著兩倍標準誤差(2SD)在正常的標記物濃度之上，或更高。為了比較的目的，測試樣品和對照樣品是相同的類型，也就 是，獲自相同的生物來源。然而，對照樣品也可以是標準樣品，其含有 與獲自健康個體的相同類型生物樣品中通常發(fā)現(xiàn)的相同濃度的 ADAMTS-7。例如，對于通常在生物樣品例如尿液、血液、腦脊液或組 織中發(fā)現(xiàn)的ADAMTS-7數(shù)量，可以有標準的正常對照樣品。在本發(fā)明的一個方面，可以進行第二診斷步驟。例如，如果 發(fā)現(xiàn)ADAMTS-7水平指示癌癥存在，則可以進行檢測所述癌癥的其他 方法來確認癌癥的存在?？梢允褂酶鞣N其他的診斷步驟的任一種，例如 乳房造影法(乳腺癌)、超聲、PET掃描、MRI或任何其他成像技術(shù)、 活組織4全查、臨床4全查、ductogram或4壬<可其他方法。本發(fā)明的方法對于確定患有癌癥的患者的適當療程也是有用 的。治療過程是指在診斷之后或在治療癌癥之后對患者采取的治療辦
法。例如，確定癌癥復(fù)發(fā)、散布或患者存活的可能性，可以幫助確定是 否應(yīng)當采取更保守的或更激進的方法來治療，或者是否應(yīng)當組合治療形 式。例如，當癌癥復(fù)發(fā)是可能的時，有益的是在外科治療之前或之后進 行化學(xué)療法、放射、免疫治療、生物學(xué)修飾治療、基因治療、疫苗等等， 或在患者被治療期間調(diào)整時間跨度。
ADAMTS-7水平可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法來 測量。在本發(fā)明中， 一般優(yōu)選的是使用抗體、或抗體等同物來檢測生物 標記物蛋白的水平。然而，也可以使用用于生物標記物表達的檢測的其 他方法。例如，通過分析mRNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可以監(jiān)視ADAMTS-7表達水 平。例如，當生物樣品是肺瘤或組織樣品時，測量ADAMTS-7 mRNA 是優(yōu)選的。
評定mRNA水平的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員^^知的。例如，通 過Northern印跡可以實現(xiàn)RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的檢測，其中RNA的制備物在 變性瓊脂糖凝膠上跑動，轉(zhuǎn)移到適合的支持物，例如活化的纖維素、硝 化纖維或玻璃或尼龍膜上。標記的(例如，放射性標記的)cDNA或RNA 然后與所述制備物雜交，洗滌，并通過例如放射自顯影的方法來分析。
RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的檢測可以進一步使用已知的擴增方法來實 現(xiàn)。例如，在本發(fā)明的范圍內(nèi)的是將mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，隨后聚合 酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR);或如美國專利No. 5,322,770描述的對兩個步 驟使用單個酶，或?qū)RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，隨后對稱性缺口脂肪酶鏈 式反應(yīng)(RT畫AGLCR)，如R. L. Marshall，等人，PCR Methods and Applications 4: 80-84 ( 1994 )所描述的。在參考文件Pabic et. al. Hepatology, 37 ( 5 ) : 1056-1066， 2003中描述了才企測ADAMTS-7 mRNA 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的一種適合的方法，通過將完全引用將其合并在此。
可以在此使用的其他已知的擴增方法包括但不限于在PNAS USA 87: 1874-1878 ( 1990)中描述的和也在Nature 350 (No. 6313): 91-92 ( 1991 )中描述的所謂"NASBA"或"3SR"技術(shù)；在歐洲專利申 請(EPA)No. 4544610中描述的Q畫P擴增；鏈置換擴增，如G. T. Walker 等人，Clin. Chem. 42 : 9畫13 ( 1996)和歐洲專利申請No. 684315所描述 的；以及目標介導(dǎo)的擴增，如PCT公開WO 9322461所描述的。
還可以采用原位雜交可視化，其中放射活性標記的反義RNA
探針探針與活檢樣品的薄片雜交，洗滌，用RNase裂解，并暴露于感光 乳劑用于放射自顯影。樣品可以用蘇木精染色來表現(xiàn)樣品的組織學(xué)組 成，使用適合的濾光器暗視野成像來顯示發(fā)展的乳劑。也可以使用非放 射性標記，例如毛地黃毒苷。
做為選擇，可以在DNA陣列、芯片或微陣列上檢測mRNA 表達。相應(yīng)于ADAMTS-7的寡核苷酸被固定在芯片上，芯片然后與從 患者獲得的測試樣品的標記的核酸雜交。用含有ADAMTS-7轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 的樣品獲得陽性的雜交信號。制備DNA陣列的方法和它們的使用是本 領(lǐng)域公知的。(參見，例如，美國專利NO.: 6,618,67%; 6,379,897; 6,664,377; 6,451,536; 548,257; U.S. 20030157485和Schena等人，1995 Science 20:467-470; Gerhold等人，1999 Trends in Biochem. Sci. 24, 168-173;和Lennon等人，2000 Drug discovery Today 5: 59-65,通過完全引用 將它們合并在此)。也可以進行基因表達的系列分析(SAGE)(參見 例如美國專利申請20030215858)。
為了監(jiān)視mRNA水平，例如，從要測試的生物樣品提取 mRNA,逆轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生熒光標記的cDNA探針。能夠與ADAMTS-7 cDNA 雜交的微陣列然后使用標記的cDNA探針來試探，掃描載玻片，測定熒 光強度。這種強度與雜交強度和表達水平相關(guān)。
特別地，當生物樣品是液體樣品例如血液或尿液時，也可以 測量ADAMTS-7蛋白水平或ADAMTS-7活性。在一個實施方式中， ADAMTS-7蛋白的水平通過使生物樣品與基于抗體的結(jié)合部分接觸來 測量，所述基于抗體的結(jié)合部分特異性地結(jié)合ADAMTS-7或ADAMTS-7 的片段。然后檢測抗體-ADAMTS-7復(fù)合物的形成作為ADAMTS-7水平 的度量。
術(shù)語"基于抗體的結(jié)合部分"或"抗體"包括免疫球蛋白分 子和免疫球蛋白分子的免疫活性決定簇，例如，含有特異性結(jié)合(免疫 反應(yīng))ADAMTS-7、或本發(fā)明的其他生物標記物的抗原結(jié)合位點的分 子。術(shù)語"基于抗體的結(jié)合部分"意圖包括完整的抗體，例如，任何同 種型的抗體(IgG、 IgA、 IgM、 IgE,等等)，并包括也特異性地與ADAMTS-7 蛋白反應(yīng)的其片段?？贵w可以使用常規(guī)技術(shù)來片斷化。因而，該術(shù)語包 括抗體分子的蛋白水解裂解的或重組制備的部分的片段，其能夠與某些 蛋白選擇性地反應(yīng)。這種蛋白水解的和/或重組片段的非限制性實例包括Fab、 F(ab')2、 Fab'、 Fv、 dAbs以及含有由肽接頭連接的VL和VH結(jié) 構(gòu)域的單鏈抗體(scFv) 。 scFv's可以共價地或非共價地連接來形成具 有兩個或多個結(jié)合位點的抗體。因而，"基于抗體的結(jié)合部分"包括抗 體和重組抗體的多克隆的、單克隆的或其他純化的制品。術(shù)語"基于抗 體的結(jié)合部分"進一步意圖包括人源化的抗體、雙特異性抗體和具有來 自抗體分子的至少一個抗原結(jié)合決定簇的嵌合分子。在優(yōu)選的實施方式 中，可4企測地標記基于抗體的結(jié)合部分。
如在此使用的，"標記的抗體"包括通過可檢測的方式標記 的抗體，包括但不限于，酶學(xué)地、放射性地、熒光地和化學(xué)發(fā)光地標記 的抗體?？贵w也可以用可檢測的標簽，例如c-Myc、 HA、 VSV-G、 HSV、 FLAG、 V5或HIS來標記。
在使用基于抗體的結(jié)合部分用于檢測生物標記物水平(例如 ADAMTS-7或附圖5的生物標記物)的本發(fā)明的診斷和預(yù)后方法中，生 強度相關(guān)。 '一 。
，、 、、 、
在一個優(yōu)選的實施方式中，基于抗體的結(jié)合部分通過將抗體 與酶連接來可檢測地標記。隨后，當暴露于其底物時，所述酶將與所述 底物反應(yīng)，這樣來產(chǎn)生化學(xué)部分，其可以通過例如分光光度法、熒光或 通過可見裝置來檢測?？捎糜诳蓹z測標記本發(fā)明的抗體的酶包括但不限 于，蘋果酸脫氫酶、葡萄球菌的核酸酶、A-V-類固醇異構(gòu)酶、酵母乙醇 脫氫酶、oc-磷酸甘油脫氫酶、磷酸丙糖異構(gòu)酶、辣根過氧化酶、堿性磷 酸酶、天冬酰胺酶、葡萄糖氧化酶、p-半乳糖苷酶、核糖核酸酶、尿酶、 過氧化氫酶、葡萄糖-VI-磷酸脫氳酶、葡糖淀粉酶和乙酰膽堿酯酶?；?學(xué)發(fā)光是可用于檢測基于抗體的結(jié)合部分的另一種方法。
檢測也可以使用各種其他的免疫分析的任一種來實現(xiàn)。例 如，通過放射性地標記抗體，有可能通過使用放射免疫分析來檢測抗 體。放射性同位素可以通過例如使用Y計數(shù)器或閃爍計數(shù)器或通過放射 照相的手段來檢測。對于本發(fā)明的目的特別有用的同位素是3H、 1311、 35S、 "C和優(yōu)選的1251。
還可能的是用萸光化合物標記抗體。當熒光標記的抗體暴露 于適當波長的光線時，然后由于熒光可以檢測它的存在。在最常用的熒 光標記化合物之中有CYE染料、異硫氰酸熒光素、羅丹明、phycoerytherin、藻青蛋白、別藻藍蛋白、o-phthaldehyde和熒光胺。抗體也可以使用熒光發(fā)射金屬，例如152Eu或其他鑭系元素 來可檢測地標記。這些金屬可以使用金屬螯合基團如二亞乙基三胺五乙 酸(DTPA)或乙二胺四乙酸(EDTA)來附著于抗體。抗體也可以通過將它連結(jié)到化學(xué)發(fā)光化合物來可檢測地標 記。然后通過檢測在化學(xué)反應(yīng)過程期間出現(xiàn)的發(fā)光的存在，來確定化學(xué) 發(fā)光物-抗體的存在。特別有用的化學(xué)發(fā)光標記化合物的實例有魯米諾、 螢光素、isoluminol、 theromatic acridinium ester、咪哇、acridinium鹽和 草酸酯。如上所述，通過免疫分析，例如酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)、 放射免疫分析(RIA)、免疫放射分析(IRMA) 、 Western印跡或免疫 組織化學(xué)，可以檢測ADAMTS-7水平，以下詳細地說明每一種方法。 免疫分析例如及其快速的ELISA或RIA，是更一般地優(yōu)選的。也可以采 用抗體陣列或蛋白芯片，參見，例如美國專利申請NO: 20030013208A1; 20020155493A1; 20030017515和美國專利No: 6,329,209; 6,365,418; 通過完全引用將它們合并在此。
免疫分析"放射免疫分析"是使用抗原的標記的(例如，放射性標記 的)形式用于檢測和測量抗原濃度的技術(shù)。用于抗原的放射性標記物的 實例包括"H、 14C和1251。通過使生物樣品中的抗原與標記的(例如， 放射性地)抗原竟爭結(jié)合針對所述抗原的抗體，來測量生物樣品中抗原 ADAMTS-7的濃度。為了確保標記的抗原和未標記的抗原之間的竟爭結(jié) 合，標記的抗原以足以飽和所述抗體的結(jié)合位點的濃度存在。樣品中的 抗原濃度越高，將結(jié)合所述抗體的標記的抗原的濃度越低。在放射免疫分析中，為了確定結(jié)合了抗體的標記的抗原的濃 度，必需從游離抗原中分離抗原抗體復(fù)合物。從游離抗原分離抗原抗體 復(fù)合物的一種方法是通過使用抗同種型抗血清從游離抗原分離抗原抗 體復(fù)合物的另一種方法是通過使用福爾馬林滅活的S. aw^z^沉淀抗原 抗體復(fù)合物。從游離抗原分離抗原抗體復(fù)合物的再另 一種方法是通過進 行"固相放射免疫分析"，其中抗體被連接(例如，共價地)到Sepharose 珠子、聚苯乙烯孔、聚氯乙烯孔或微滴定孔。通過比較結(jié)合了抗體的標 記的抗原的濃度和基于具有已知抗原濃度的才羊品的
生物樣品中抗原的濃度。
"免疫放射分析"(IRMA)是一種免疫分析，其中抗體試劑 被放射性地標記。IRMA需要產(chǎn)生多價的抗原結(jié)合物，通過例如與蛋白 質(zhì)如兔血清白蛋白(RSA)結(jié)合的技術(shù)。多價的抗原結(jié)合物必需具有每 分子至少2個抗原殘基，所述抗原殘基必須有足夠的距離間隔以容許至 少兩個抗體與所述抗原的結(jié)合。例如，在IRMA中，多價的抗原結(jié)合物 可以附著于固體表面，例如塑料球體。將未標記的"樣品"抗原以及被 放射性標記的針對所述抗原的抗體添加到含有多價抗原結(jié)合物包被的 球體的試管中。樣品中的抗原與所述多價抗原結(jié)合物竟爭抗原抗體結(jié)合 位點。在適合的孵育期之后，通過洗滌除去未結(jié)合的反應(yīng)物，測定在固 相上的放射性的數(shù)量。結(jié)合的放射性抗體的數(shù)量與樣品中抗原的濃度成 反比。
最常見的酶免疫分析是"酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)"。 ELISA是使用標記(酶連接)形式的抗體用于檢測和測量抗原的濃度的 技術(shù)。存在各種形式的ELISA,其是本領(lǐng)域的技術(shù)人員公知的。在 "Methods in Imrnunodiagnosis", 2nd Edition, Rose and Bigazzi, eds. John Wiley & Sons, 1980; Campbell et al, "Methods and Immunology", W. A. Benjamin, Inc., 1964;和Oellerich, M. 1984， J. Clin. Chem. Clin. Biochem.， 22:895-904中描述了本領(lǐng)域已知的標準技術(shù)。
在"夾心ELISA"中，抗體(例如，抗-ADAMTS-7)與固相 (即，微量滴定板)連接，并暴露于含有抗原(例如，ADAMTS-7)的 生物樣品。然后洗滌固相來除去未結(jié)合的抗原。然后標記的抗體(例如， 酶連接的)與結(jié)合的抗原(如果存在)結(jié)合形成抗體-抗原-抗體夾心。 可以與抗體連接的酶的實例是堿性磷酸酶、辣根過氧化酶、熒光素酶、尿酶和p -半乳糖苷酶。酶連接的抗體與底物反應(yīng)來產(chǎn)生可以測量的有色 反應(yīng)產(chǎn)物。
在"竟爭ELISA"中，抗體與含有抗原(例如，ADAMTS-7) 的樣品孵育。然后抗原-抗體混合物與包被了抗原(即，ADAMTS-7)的 固相(例如，微量滴定板)接觸。樣品中存在的抗原越多，越少的游離 抗體可用于結(jié)合固相。然后向所述固相添加標記的(例如，酶連接的) 二級抗體來確定結(jié)合到固相的初級抗體的數(shù)量。
在"免疫組織化學(xué)分析，，中，通過將所述組織暴露于對要分
析的蛋白是特異性的抗體，測試組織的切片的特定蛋白質(zhì)。然后通過許 多已知方法的任一種來顯現(xiàn)抗體，來確定蛋白質(zhì)的存在和存在的數(shù)量。 用于顯現(xiàn)抗體的方法的實例有，例如，通過與所述抗體連接的酶(例如， 熒光素酶、堿性磷酸酶、辣根過氧化酶或|3半乳糖苷酶)或化學(xué)方法(例如，DAB/底物顯色)。
根據(jù)實踐者的偏愛和基于本公開，可以使用其他技術(shù)來檢測 本發(fā)明的生物標記物。這種技術(shù)之一是Western印跡(Towbin等人，Proc. Nat Acad. Sci. 76:4350 ( 1979)),其中適當處理的樣品在SDS-PAGE 凝膠上跑動，之后轉(zhuǎn)移到固相支持物，例如硝酸纖維素膜。然后可檢測 標記的特異性結(jié)合ADAMTS-7的抗體可以用于評定生物標記物水平， 其中來自可檢測標記的信號的強度相應(yīng)于存在的生物標記物的數(shù)量。例 如通過密度測定法可以測定所述水平。j謬法
此外，可以使用質(zhì)譜法，例如MALDI/TOF (飛行時間)、 SELDI/TOF、液相色譜-質(zhì)譜法(LC-MS )、氣相色語-質(zhì)語法(GC-MS )、 高效液相層析-質(zhì)語法(HPLC-MS)、毛細管電泳-質(zhì)謙法、核磁共振波 譜法或串聯(lián)的質(zhì)譜法(例如，MS/MS、 MS/MS/MS、 ESI-MS/MS,等等) 來^r測本發(fā)明的生物標記物。參見，例如，美國專利申請NO: 20030199001、 20030134304、 20030077616，通過引用將它們合并在此。
質(zhì)譜方法是本領(lǐng)域公知的，已經(jīng)被用于定量和/或鑒定生物分 子，例如蛋白質(zhì)(參見，例如Li等人,(2000) Tibtech 18:151-160; Rowley 等人,(2000 ) Methods 20: 383-397;和Kuster and Mann( 1998 ) Curr. Opin. Structural Biol. 8: 393-400 )。進一步的，已經(jīng)開發(fā)了允許分離的蛋白質(zhì) 的至少部分起始測序的質(zhì)譜技術(shù)。Chait等人，Science 262:89-92( 1993 ); Keough等人，Proc, Natl. Acad. Sci. USA. 96:7131-6 ( 1999 ) ; reviewed in Bergman, EXS 88:133-44 ( 2000 )。
在某些實施方式中，使用氣相離子分光光度計。在其他實施 方式中，使用激光-脫附/電離質(zhì)譜法來分析樣品?，F(xiàn)代的激光脫附/電離 質(zhì)譜法("LDI-MS")可以按兩種主要的變體來操作基質(zhì)幫助的激光 脫附/電離("MALDI")質(zhì)譜法和表面增強的激光脫附/電離("SELDI")。 在MALDI中，被分析物與含有基質(zhì)的溶液混合， 一滴所述液體置于基 底的表面上。然后基質(zhì)溶液與所述生物分子共結(jié)晶?；妆徊迦氲劫|(zhì)譜 儀中。將激光能量導(dǎo)向基底表面，在此它脫附并離子化所述生物分子而不顯著地破碎它們。然而，MALDI作為分析工具有局限性。它不提供 分餾樣品的手段，基質(zhì)材料可能影響檢測，特別是對于低分子量的被分 析物。參見，例如，美國專利No, 5， 118,937 (Hillenkamp等人，)，和美 國專利No. 5,045，694 ( Beavis & Chait)。
在SELDI中，基底表面被修飾，使得它是脫附過程中的主動 參與者。在一個變體中，所述表面用選擇性結(jié)合目標蛋白的吸附試劑和 /或捕獲試劑衍生化。在另一種變體中，所述表面用激光轟擊時不脫附的 能量吸收分子來衍生化。在另一種變體中，所述表面用分子衍生化，所 述分子結(jié)合目標蛋白質(zhì)，并且含有在應(yīng)用激光時被打斷的光解的鍵。在 這些方法的每一種中，衍生化試劑一般被定位在施加樣品的基底表面上 的特定位置。參見，例如，美國專利No.5,719,060和WO98/59361。例 如，通過使用SELDI親和性表面來捕獲被分析物并向捕獲的被分析物添 加含有基質(zhì)的液體來提供能量吸收材料，可以組合這兩種方法。
關(guān)于質(zhì)譜儀的其他信息，參見，例如，Principles of Instrumental Analysis, 3rd edition., Skoog, Saunders College Publishing, Philadelphia, 1985;和Kirk-Othmer Encyclopedia of Chemical Technology, 4.sup.th ed. Vol. 15 ( John Wiley & Sons, New York 1995 ) , pp. 1071-1094。
檢測標記物或其他物質(zhì)的存在一般將包括信號強度的檢測。 隨后，這可以反映結(jié)合到基底上的多肽的數(shù)量和性質(zhì)。例如，在某些實 施方式中，可以比較第一樣品和第二樣品的光譜的峰值信號強度(例 如，視覺地，通過計算機分析，等等)，來確定特定生物分子的相對數(shù) 量?？梢允褂密浖绦蚶鏐iomarker Wizard程序(Ciphergen Biosystems, Inc., Fremont, Calif.)來幫助分析質(zhì)謙。質(zhì)谫儀和它們的技術(shù)是本領(lǐng)域的 技術(shù)人員公知的。
本領(lǐng)域的任何技術(shù)人員理解，質(zhì)譜儀的任何組件(例如，脫 附源、質(zhì)量分析器、檢測，等等)和各種樣品制品可以與在此描述的其 他適合的組件或制品，或與本領(lǐng)域已知的那些組合。例如，在某些實施 方式中對照樣品可以含有重原子(例如，13C),從而允許測試樣品在同 一質(zhì)譜法進行中與已知的對照樣品混合。
在一個優(yōu)選的實施方式中，使用激光脫附時間飛行(TOF) 質(zhì)譜儀。在激光脫附質(zhì)譜法中，具有結(jié)合的標記物的基底被導(dǎo)入進氣系 統(tǒng)中。通過來自電離源的激光將標記物脫附和電離成氣相。通過離光學(xué) 的組件收集產(chǎn)生的離子，然后在時間飛行質(zhì)量分析器中，離子被加速通 過短的高壓電場并飄入高真空倉室中。在高真空倉室的遠端，被加速的 離子在不同的時間擊打在靈敏的檢測器表面。由于飛行的時間是離子質(zhì) 量的函數(shù)，在離子形成和離子檢測器撞擊之間經(jīng)過的時間可用于鑒定特 定的質(zhì)量電荷比的分子的存在或不存在。
在某些實施方式中，在第一和第二樣品中存在的一種或多種 生物分子的相對數(shù)量通過使用可編程的數(shù)字計算機執(zhí)行算法來部分地 確定。所述算法在第一質(zhì)譜和第二質(zhì)譜中鑒定至少一個分值。所述算法 然后比較第一質(zhì)語的峰值信號強度和第二質(zhì)譜的峰值的信號強度。相對 信號強度是存在于第一和第二樣品中的生物分子數(shù)量的指示。含有已知 數(shù)量的生物分子的標準物可以作為第二樣品被分析來提供對第 一樣品 中存在的生物分子數(shù)量的更好的定量。在某些實施方式中，也可以測定 第一和第二樣品中生物分子的同一性。
在一個優(yōu)選的實施方式中，通過MALDI-TOF質(zhì)譜法來測量 生物標記物水平。
ADAMTS-7水平也可以使用其他生物分析來測量，例如測量 活性的生物分析，包括但不限于zymography。 Zymography是本領(lǐng)域技 術(shù)人員公知的分析,在Heusen et al, Anal. Biochem., ( 1980 ) 102:196-202; Wilson等人，Journal of Urology, ( 1993 ) 149:653-658; Hernon等 人，J. Biol. Chem. ( 1986 ) 261: 2814-2828, Braunhut等人，J. Biol. Chem. (1994) 269: 13472-13479;和Moses等人，Cancer Research 58, 1395-1399: April 1, 1998中描述，通過完全引用將它們合并在此?！秱?br> 用于本發(fā)明的抗體可以從商業(yè)來源獲得。做為選擇，可以針 對ADAMTS-7、或生物標記物多肽的一部分來產(chǎn)生抗體。在美國申請 NO. 2002/0182702; 2003/0212256; 20020110894和WO 01/11074中公開 了用于ADAMTS-7抗體生產(chǎn)的有用方法，通過引用將它們合并在此。如，通過單克隆抗體生產(chǎn)(Campbell, A.M., Monoclonal Antibodies Technology: Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology,
Elsevier Science Publishers, Amsterdam, the Netherlands ( 1984 ); St Groth etal, J. Immunology, ( 1990 ) 35-21;和Kozbor et al, Immunology Today(1983 ) 4:72)。通過本領(lǐng)域^^知的方法，通過使用蛋白質(zhì)的抗原性部 分來篩選抗體庫，例如噬菌體顯示庫，也可以容易地獲得抗體。例如， 美國專利5,702,892 (U.S.A. Health & Human Services )和W0 01/18058(Novopharm Biotech Inc.)公開了用于產(chǎn)生抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域片段的噬菌 體展示庫和選4奪方法。
本發(fā)明還涉及用于上皮來源的癌癥的檢測和預(yù)后評估的商業(yè) 性試劑盒。所述試劑盒可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何結(jié)構(gòu)，并且對 于進行在此描述的檢測ADAMTS-7的一種或多種方法是有用的。所述 試劑盒是方便的，因為它們提供了如果不是全部也是大多數(shù)的基本試 劑，用于進行生物樣品中ADAMTS-7檢測的分析。此外，所述分析優(yōu) 選的與標準物或多個標準物同時進行，所述標準物被包括在試劑盒內(nèi)， 例如，預(yù)定數(shù)量的ADAMTS-7蛋白或核酸，使得測試的結(jié)果可以被定 量或校準。
所述試劑盒包括檢測ADAMTS-7水平的手段，例如選擇性地 結(jié)合ADAMTS-7蛋白的抗體或抗體片段，或容許合成編碼所述蛋白質(zhì) 的cDNA的DNA寡核苷酸引物組，或例如，檢測ADAMTS-7 mRNA表 達的DNA探針。所述診斷分析試劑盒優(yōu)選的配置為標準的雙抗體結(jié)合 形式，其中一個ADAMTS-7特異性抗體捕獲患者樣品中的ADAMTS-7， 另一個ADAM特異性抗體被用于檢測捕獲的ADAMTS-7。例如，捕獲 抗體被固定在固相上，例如分析平板、分析孔、硝化纖維膜、珠子、量 液桿、或洗脫柱的成分。所述第二抗體，即檢測抗體， 一般用可檢測的 標記來標簽，例如量熱試劑或放射性同位素。
在一個優(yōu)選的實施方式中，所述試劑盒包含檢測尿液樣品中 ADAMTS-7水平的手段。在特定的實施方式中，所述試劑盒包括具有固 定在其上的抗ADAMTS-7抗體的"量液桿"，所述抗體同一性結(jié)合 ADAMTS-7蛋白。然后可以使用例如，用量熱試劑或放射性同位素可檢 測標記的第二抗體來檢測特異性結(jié)合的ADAMTS-7蛋白。
在其他實施方式中，分析試劑盒可以采用(但不限于)以下 技術(shù)竟爭性和非竟爭性分析、放射免疫分析(RIA)、生物發(fā)光和化
學(xué)發(fā)光分析、熒光分析、夾心分析、免疫放射分析、斑點印跡、酶連接分析，包括ELISA、微量滴定板和免疫細胞化學(xué)。對于每種試劑盒，分 析的范圍、敏感性、精確度、可靠性、特異性和重現(xiàn)性通過本領(lǐng)域技術(shù) 人員/>知的方法來確定。
以上描述的分析試劑盒將進一步提供使用說明書。
通過以下非限制性的實施例進一步說明本發(fā)明。
提供這些實施例來幫助理解本發(fā)明，不看作是本發(fā)明的限制,實施例IADAMTS-7作為在癌癥患者的尿液中存在的高分子量明膠酶的 鑒定尿ADAMTS-7的鑒定
我們已經(jīng)鑒定了在來自膀胱癌患者的尿液樣品中分析的約 190 kDa高分子量明膠酶(附圖1)為ADAMTS-7。
使用親和層析和離子交換層析的組合來部分地純化所述明膠 酶。富集了高分子量明膠酶種類的樣品(來自膀胱癌患者)通過SDS-PAGE來分辨，并用Sypro Ruby Stain染色(附圖3)。切下約190kDa 的蛋白條帶，進行凝膠內(nèi)的胰蛋白酶消化，隨后串聯(lián)的(MS-MS )質(zhì)語 分析。約190 kDa明膠酶種類的質(zhì)語分析表明，存在1%肽覆蓋度的 ADAMTS-7 (具有凝血栓蛋白1型基序7的disintegrin和金屬蛋白酶 (r印rolysin型)；具有凝血栓蛋白基序7前原蛋白的disintegrin和金屬 蛋白酶)。Blast分析和文獻檢索確認了質(zhì)語法鑒定處的肽相應(yīng)于 ADAMTS醫(yī)7 ( NP—055087.2 )。實施例II在患有乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、腦癌和肝癌的患者中 ADAMTS-7表達和活性被增量調(diào)節(jié)
我們在患有和不患有癌癥的患者中測試了 ADAMTS-7活性 和表達。從患有乳腺癌、腦癌、前列腺癌、膀胱癌和肝癌的患者收集尿 液樣品。50 m L的未濃縮的尿液樣品通過明月交zymograpy來分析以^r測 ADAMTS-7活性。
對于ADAMTS-7的Western印跡分析，使用具有10 kDa截斷
膜的微離心旋轉(zhuǎn)柱(Vivaspin, Vivascience )濃縮尿液樣品。所有分析的 樣品被標準化為20 yg總蛋白。從規(guī)則的BisTris 4-12%梯度凝膠，而 不是zymogram產(chǎn)生免疫印跡。使用的ADAMTS-7抗體是來自Triple Point Biologies的兔多克隆抗體-RPl-ADAMTS-7,針對所述蛋白質(zhì)的羧基末端o
如附圖5A所述，在患有乳腺癌、腦癌、前列腺癌、腦癌、膀 胱癌和肝癌的患者中ADAMTS-7活性被增量調(diào)節(jié)。在來自正常的年齡/ 性別匹配對照、沒有癌癥的患者的濃縮尿液樣品的平行zymographic分 析中沒有檢測到ADAMTS-7活性。
附圖6A和6B顯示了在來自患有或不患有癌癥的患者的尿液 樣品中ADAMTS-7蛋白的代表性的免疫印跡染色。如附圖6B所示，在 來自患有乳腺癌、膀胱癌和前列腺癌的患者的尿液樣品中檢測到 ADAMTS-7蛋白。在來自正常的年齡/性別匹配對照、沒有癌癥的患者 的濃縮尿液樣品的平行免疫印跡分析沒有檢測到任何ADAMTS-7(附圖 6A)。
在此和整個說明書中引用的參考文獻通過引用將它們合并在此。
權(quán)利要求
1.一種用于促進患者的上皮來源的癌癥的診斷的方法，所述方法包括a.從所述患者獲得生物樣品；和b.檢測所述生物樣品中ADAMTS-7的存在或不存在，其中ADAMTS-7存在是存在上皮來源的癌癥的指示。
2. 權(quán)利要求1的方法，其中所述生物樣品選自血液、組織、血清、 大便、尿液、痰、腦脊液、乳頭吸出物和細胞溶胞產(chǎn)物的上清液。
3. 權(quán)利要求l的方法，其中所述生物樣品是尿液。
4. 一種用于在患者中診斷上皮來源的癌癥的方法，所述方法包括a. 測量在獲自所述患者的測試樣品中存在的ADAMTS-7水平；b. 比較所述測試樣品中的ADAMTS-7水平與對照樣品中存在的 ADAMTS-7水平；其中與對照樣品中ADAMTS-7水平相比在測試樣品中更高的 ADAMTS-7水平是上皮來源的癌癥的指示。
5. 權(quán)利要求4的方法，其中所述測試樣品和所述對照樣品選自血 液、組織、血清、大便、尿液、痰、腦脊液、乳頭吸出物和細胞溶胞產(chǎn) 物的上清液。
6. 權(quán)利要求4的方法，其中所述測試和對照樣品是尿液。
7. 權(quán)利要求1或4的方法，其中所述上皮來源的癌癥選自乳腺癌、 基底細胞癌、腺癌、胃腸癌、唇癌、口腔癌、食道癌、小腸癌癥、胃癌、 結(jié)腸癌、肝癌、腦癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、肺癌、皮 膚癌、前列腺和腎臟細胞癌。
8. 權(quán)利要求l的方法，其中使用特異性結(jié)合ADAMTS-7蛋白的基 于抗體的結(jié)合部分來檢測ADAMTS-7的存在或不存在。
9. 權(quán)利要求4的方法，其中ADAMTS-7的水平通過測量 ADAMTS-7蛋白的水平來測量。
10. 權(quán)利要求4的方法，其中ADAMTS-7的水平通過測量 ADAMTS-7的活性來測量。
11. 權(quán)利要求9的方法，其中ADAMTS-7蛋白的水平通過包括以下 步驟的方法來測量a.用特異性結(jié)合ADAMTS-7的基于抗體的結(jié)合部分接觸所述測試 樣品或其制備物來形成抗體-ADAMTS-7復(fù)合物；以及b.檢測所述復(fù)合物的存在，從而測量存在的ADAMTS-7的水平。
12. 根據(jù)權(quán)利要求8或9的方法，其中使用可檢測的標記物來標記 所述基于抗體的結(jié)合部分。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述標記物選自放射性標記物、 半抗原標記物、熒光標記物和酶標記物。
14. 根據(jù)權(quán)利要求8或9的方法，其中所述基于抗體的結(jié)合部分是 抗體。
15. 根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。
16. 用于檢測尿液樣品中的ADAMTS-7的試劑盒，其包含容納尿液 樣品的容器，和至少一種特異性結(jié)合ADAMTS-7的抗體。
17. 權(quán)利要求18的試劑盒，其中所述試劑盒包含特異性結(jié)合 ADAMTS-7的兩種抗體， 一種抗體固定在固相上， 一種抗體被可檢測地 標記。
18. 權(quán)利要求18的試劑盒，其進一步包括使用說明書。
19. 一種指導(dǎo)個體的治療的方法，其包括讓個體測試獲自所述個體 的生物樣品中ADAMTS-7的存在，其中臨床醫(yī)師審查該結(jié)果，如果所 述生物樣品對于ADAMTS-7的存在是陽性的，所述臨床醫(yī)師指導(dǎo)所述 個體治療上皮來源的癌癥。
20. 權(quán)利要求19的方法，其中所述生物樣品是尿液。
全文摘要
ADAMTS-7表達和活性在患有上皮來源癌癥的患者中被增量調(diào)節(jié)。因此，本發(fā)明涉及上皮來源的癌癥(例如，乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、腦癌和肝癌)的診斷方法。特別地，在生物樣品中ADAMTS-7的存在是上皮來源癌癥的指示。因而，測量生物樣品(例如尿液或血液)中的ADAMTS-7水平提供了快速、簡單和安全的篩選，其可以用于診斷患者中的癌癥。
文檔編號A61K39/395GK101120016SQ200680005166
公開日2008年2月6日 申請日期2006年2月13日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月17日
發(fā)明者M·A·摩西, R·羅伊 申請人:兒童醫(yī)療中心有限公司