專(zhuān)利名稱(chēng)：作為fgf抑制劑的嘧啶基芳基脲衍生物的制作方法
作為FGF抑制劑的嘧咬基芳基脲衍生物發(fā)明概述本發(fā)明涉及新的化合物、制劑、方法和用途。具體地，本發(fā)明涉及新 的雜芳基芳基脲類(lèi)化合物，和/或使用可以被定義為雜芳基芳基脲類(lèi)化合物 的化合物在治療蛋白激SI^賴(lài)性疾病中的用途或方法，或在制備治療蛋白 激S^l賴(lài)性疾病的藥物制劑中的用途或方法。本發(fā)明還涉及使用這類(lèi)化合 物治療所述疾病的方法、包含雜芳基芳基脲類(lèi)化合物的藥物制劑以及制備 所述的新雜芳基芳基脲類(lèi)化合物的方法。本發(fā)明涉及如下所公開(kāi)的其他主 題。技術(shù)背景蛋白激酶(PK)是催化細(xì)胞蛋白質(zhì)中特定的絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸殘 基磷酸化的酶。這些底物蛋白質(zhì)的翻譯后修飾充當(dāng)了調(diào)控細(xì)胞增殖、活化 和/或分化的分子開(kāi)關(guān)。在許多疾病階段、包括良性和惡性增殖病癥中，已 經(jīng)觀察到了異?；蜻^(guò)度的PK活性。通過(guò)利用PK抑制劑，已經(jīng)可以在許 多情況下體外和體內(nèi)治療疾病，例如增生性病癥。這些激酶大致分為兩類(lèi)，特異性磷酸化絲氨酸和蘇氨酸的激酶以及特 異性磷酸化酪氨酸的激酶。此外， 一些稱(chēng)為"雙特異性"的激酶能夠磷酸化 酪氨酸和絲氨l蘇氨酸殘基。蛋白激酶還可以通過(guò)其在細(xì)胞內(nèi)的位置來(lái)進(jìn)行表征。 一些激酶是能夠 連接細(xì)胞外配基的跨膜受體蛋白質(zhì)。與配基的連接改變了受體蛋白激酶的 催化活性。其他激酶是沒(méi)有跨膜結(jié)構(gòu)域的非受體蛋白質(zhì)，其他另一些激酶 是具有位于跨膜蛋白質(zhì)細(xì)胞外部分的催化結(jié)構(gòu)域的外激酶或者是作為可溶 性細(xì)胞外蛋白質(zhì)分泌的外激酶。許多激酶涉及調(diào)控性級(jí)聯(lián)反應(yīng)，其中它們的底物可以包含活性通過(guò)其磷酸化狀態(tài)進(jìn)"f亍調(diào)節(jié)的其他激酶。因此，下游區(qū)效應(yīng)子的活性通過(guò)由通道 激活所引致的磷酸化來(lái)進(jìn)行調(diào)控。受體蛋白酪氨酸激酶(RPTK)是跨膜受體的一個(gè)亞類(lèi)，其具有內(nèi)在 的配體刺激的酪氨酸激酶活性。RPTK活性受到嚴(yán)密的控制。當(dāng)其突變或 結(jié)構(gòu)改變時(shí)，RPTK可以變成有效的癌蛋白，造成細(xì)胞轉(zhuǎn)化或至少是失控。 大體而言，對(duì)于所有涉及癌癥的RPTK來(lái)說(shuō)，致癌性的失控源于一種或多 種確保催化結(jié)構(gòu)域正常抑制的自動(dòng)控制機(jī)制的解除或混亂。數(shù)次發(fā)現(xiàn)超過(guò) 一半的已知RPTK的人類(lèi)惡性腫瘤(包括一些歉^L病例；Blume-Jensen等 人，；Va似"411: 355-365(2001))相關(guān)的突變或^^達(dá)形式。RPTK的超表達(dá)通過(guò)增加二聚體濃度導(dǎo)致組成型激酶活化。例如 Neu/ErbB2和表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)，其通常在乳腺癌和肺癌中增加， 以及骨骼疾病和增生性病癥相關(guān)的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Blume-Jensen等 人，2001).血管發(fā)生是一種從現(xiàn)有血管形成新毛細(xì)血管的機(jī)制。在需要時(shí)，血管 系統(tǒng)有能力產(chǎn)生新的毛細(xì)血管網(wǎng)絡(luò)，以維持組織和器官的正常功能。但是， 在成人中血管發(fā)生受到適當(dāng)?shù)南拗?，僅在傷口愈合和月經(jīng)期間子宮內(nèi)膜的 新血管形成中才出現(xiàn)。參見(jiàn)Merenmies等人，Cell Growth & Differentiation, 8,3-10(1997)。另一方面，不期望的血管生成是一些疾病如視網(wǎng)膜病變、銀 屑病、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)和癌癥(實(shí)體瘤)的標(biāo) 志。Folkman， Nature Med.， 1,27-31(1995)。已經(jīng)表明參與血管發(fā)生過(guò)程的 蛋白激酶包括生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶家族的三個(gè)成員VEGF-R2(血管 內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2，也稱(chēng)為KDR(激酶插入結(jié)構(gòu)域受體)和FLK-1; FGF-R(成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體)；和TEK(也稱(chēng)為T(mén)ie-2)。TEK(也稱(chēng)為T(mén)ie-2)是僅在內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)的受體酪氨酸激酶，已表明 其在血管發(fā)生中具有作用。與血管生成素-1因子的結(jié)合導(dǎo)致TEK激酶結(jié) 構(gòu)域的自身磷酸化，引起信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，其表現(xiàn)為介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞與內(nèi)皮周 圍的支持細(xì)胞間的相互作用，由此促進(jìn)新形成的血管成熟。另一方面，血 管生成素-2因子表現(xiàn)為拮抗血管生成素-1對(duì)TEK的作用并且中斷血管生成。Maisonpierre等人，Science, 277， 55-60(1997).在外科手術(shù)切除原發(fā)腫瘤的同時(shí)，將Ad-ExTek(—種可溶的、腺病毒 表達(dá)的Tie-2細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域)遞送施用給瘤轉(zhuǎn)移的臨^目關(guān)的小鼠模型，可 抑制瘤轉(zhuǎn)移(Lin等人，Proc Natl Acad Sci美國(guó)95， 8829-8834(1998))。 ExTek抑制Tie-2的功能可能是隔離血管生成素配體和/或阻止天然Tie-2 受體異二聚化的結(jié)果。該研究證明，首先，阻斷Tie-2信號(hào)通路在健康有 機(jī)體中是耐受良好的，其次，可以提供治療益處。費(fèi)城染色體是慢性骨髓性白血病(CML)的標(biāo)志且攜帶包含bcr基因N-端外顯子和c-abl基因主要的C-端部分(外顯子2-ll)的雜合基因。該基因 產(chǎn)物是210 kD的蛋白質(zhì)(p210 Bcr-Abl)。 Bcr-Abl蛋白質(zhì)的Abl部分包含 abl-酪氨酸激酶，其受到野生型c-abl的嚴(yán)格調(diào)控，但是在Bcr-Abl融合蛋 白質(zhì)中組成型激活。該失控的酪氨酸激酶與多個(gè)細(xì)胞信號(hào)通路相互作用， 導(dǎo)致細(xì)胞的轉(zhuǎn)化與增殖失控(Lugo等人，Science 247， 1079 [l990)。Bcr-Abl蛋白質(zhì)的突變型也已被鑒定。Bcr-Abl突變型的詳細(xì)綜述已經(jīng) 發(fā)表(Cowan-Jones等人，Mini Reviews in Medicinal Chemistry, 2004, 4 285-299)。EphB4(也稱(chēng)為HTK)及其配體，肝配蛋白B2(HTKL)在構(gòu)建和決定血 管網(wǎng)絡(luò)中具有重要作用。EphB4特異性表達(dá)在靜脈上皮細(xì)胞上，而在血管 發(fā)育早期階段，肝配蛋白B2特異性地并相反地表達(dá)在動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞上。 在肝配蛋白B2或EphB4缺陷的情況下，功能失調(diào)的基因引起小鼠胚胎致 死，并且這些胚胎在形成毛細(xì)血管連接時(shí)顯示出相同的缺陷。它們都， 胎發(fā)育期間在血細(xì)胞生成和血管發(fā)育的最初位點(diǎn)表達(dá)。確定了其對(duì)于正常 的造血發(fā)育、內(nèi)皮發(fā)育、成血管細(xì)胞發(fā)育和原始中胚層發(fā)育的重要作用。 EphB4缺陷導(dǎo)致胚胎干細(xì)胞的中胚層分化結(jié)果的改變。在乳房組織中 EphB4的異位表達(dá)造成結(jié)構(gòu)紊亂、組織功能異常和惡性腫瘤的易感性(參 見(jiàn)，例如N. Munarini等人，J. Cell. Sci. 115, 25-37(2002))。從這些數(shù)據(jù)和 其他數(shù)據(jù)可以得出結(jié)論，不恰當(dāng)?shù)腅phB4表達(dá)可以涉及惡性腫瘤的形成， 因此預(yù)期EphB4的抑制可以成為對(duì)抗惡性腫瘤如癌癥等的手段。c-Src(也稱(chēng)為p60 c-Src)是胞質(zhì)非受體酪氨酸激酶。c-Src參與了許多有絲分裂信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。c-Src在乳房癌、胰腺癌、或成神經(jīng)細(xì)胞瘤和其他癌 癥中超表達(dá)。在人類(lèi)結(jié)腸癌中已經(jīng)鑒定了突變的c-Src。 c-Src磷酸化多種cSrc活性可以涉及與細(xì)胞增殖、分化和死亡相關(guān)的疾病。參見(jiàn)Bjorge， J. D. 等人(2000) Oncogene 19(49): 5620-5635; Halpern， M. S.等人(1996)， Proc. Natl. Acad. Sci， U. S. A. 93(2)， 824-7; Belsches， A. P.等人(1997) Frontiers in Bioscience [電子出版物2: D501畫(huà)D518; Zhan， X.等人(2001) Chemical Reviews 101: 2477-2496; Haskell, M. D.等人(2001) Chemical Reviews 101: 2425-2440?，F(xiàn)在，fms-樣酪氨酸激酶3(FLT3)受體酪氨酸激酶被視為骨髓樣白血 病和一些淋巴樣白血病發(fā)病機(jī)制的重要介質(zhì)。FLT3配體激活白血病細(xì)胞 上的FLT3，導(dǎo)致受體二聚化和促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)并抑制凋亡的途徑中的信號(hào) 轉(zhuǎn)導(dǎo)(Blood，第98巻，第3期，885-887頁(yè)(200")。酪氨酸激酶抑制劑在AML治療中的用途由于在激酶催化結(jié)構(gòu)域中獲 得突變而受到阻礙，在BCR-ABL的情況下，這些突變導(dǎo)致了對(duì)伊馬替尼 的抗性。FLT3在AML和某些急性淋巴性白血病的病例中廣泛表達(dá)。FLT3中 的激活突變導(dǎo)致了 AML病人的中度危險(xiǎn)。因此，F(xiàn)LT3是用于治療干預(yù)的 有希望的靶點(diǎn)。血d、板衍生生長(zhǎng)因子受體(PDGFR)酪氨酸激酶在多種腫瘤中表達(dá)，所 述腫瘤例如小細(xì)胞肺癌、前列腺癌和成膠質(zhì)細(xì)胞瘤以及許多在基質(zhì)腫瘤和 血管間隙胂瘤。在胰腺癌中已經(jīng)觀察到PDGF和PDGF受體(PDGFR)的 表達(dá)(EbertM等人，Int J Cancer, 62: 529-535(1995))。Raf絲氨l蘇氨酸激酶是Ras/促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號(hào)模 塊(signaling module )的主要成分，該模塊響應(yīng)細(xì)胞外刺激而調(diào)控復(fù)雜的 轉(zhuǎn)錄程序。Raf基因編碼了已知與ras癌基因結(jié)合的高度保守的絲氨^/蘇氨酸特異性蛋白激酶。它們是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的一部分，所述信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路被認(rèn)為包括受體酪氨酸激酶、p21ras、 Raf蛋白激酶、Mekl(ERK活化劑 或MAPKK)激酶和ERK(MAPK)激酶，其最終將轉(zhuǎn)錄因子磷酸化。在該 通路中，Raf激酶被Ras激活，并且磷酸化和激活了促分裂原活化蛋白激 酶的兩個(gè)同種型(稱(chēng)作Mekl和Mek2),其屬于雙特異性絲氨^/蘇氨酸激 酶。Mek的兩個(gè)同種型激活了促分裂原活化蛋白激酶l和2(MAPK,也稱(chēng) 作細(xì)胞外信號(hào)配體激酶1和2，或Erkl和Erk2)。 MAPK磷酸化了包括轉(zhuǎn) 錄因子在內(nèi)的多種底物并且由此啟動(dòng)它們的轉(zhuǎn)錄程序。參與Ras/MAPK通 路的Raf激酶影響和調(diào)節(jié)許多細(xì)胞功能，例如增殖、分化、存活、致癌性 轉(zhuǎn)化和凋亡。式生物的生化和遺傳技術(shù)的研究，證實(shí)了 Raf在多個(gè)信號(hào)通路中的重要作 用和位置。在很多情況下，通過(guò)刺激細(xì)胞酪氨酸磷酸化的受體來(lái)活化Raf 取決于Ras的活性，表明Ras在Raf的上游起作用。Raf-l被激活后接著 磷酸化和激活Mekl，導(dǎo)致信號(hào)傳導(dǎo)至下游的效應(yīng)子，例如MAPK(促分裂 原活化蛋白激酶)(Crews等人，(1993) Ce//74: 215)。 Raf絲氨^/蘇氨酸激 酶被認(rèn)為是參與動(dòng)物細(xì)胞增殖的主要的Ras效應(yīng)子(Avruch等人，(1994) r柳A腸*附.19: 279)。Raf激酶有三種不同的同種型，Raf-l(c-Raf)、 A-Raf和B-Raf，通過(guò) 與Ras相互作用而激活MAPK激酶通路的能力、組織分布和亞細(xì)胞定位 來(lái)區(qū)分它們(Marias等人，J /0c/1e附./. 351: 289-305, 2000; Weber等人， Ortco^fie 19: 169-176， 2000; Pritchard等人，A^/. C"/. 5"/. 15: 6430-6442， 1995)。最近的研究已表明在皮膚痣中B-Raf突變是黑色素瘤形成的關(guān)鍵步驟 (Pollock等人，AW"" Gew"/cs 25: l畫(huà)2， 2002)。此夕卜，最新研究已顯示B-Raf 激酶結(jié)構(gòu)域的激活突變發(fā)生在約66%的黑素瘤、12%的結(jié)腸癌和14%的肝 癌中(Davies等人，7V"m" 417: 949-954, 2002)(Yuen等人，Z "e"/rA 62:6451-6455， 2002)(Brose等人，CV/w"r及"ewc/1 62: 6997-7000， 2002)。在Raf激酶水平上的Raf/MEK/ERK通路的抑制劑可作為有效的腫瘤 治療劑，對(duì)抗具有^4達(dá)的或突變的受體酪氨酸激酶、被激活的胞內(nèi)酪氨 酸激酶的腫瘤、具有Grb2(經(jīng)Sos交換因子刺激Ras的銜接蛋白)異常表達(dá) 的腫瘤以及含有Raf自身活化突變的腫瘤。在早期臨床診斷中，Raf-l激 酶抑制劑(其也抑制B-Raf)已預(yù)示在癌癥治療中作為治療劑(Cmmp， CYwrewf尸/rar附acew《/ca/Z)es/gfi 8: 2243-2248， 2002; Sebastien等人，Oiirew/ /^a/"廳固rica/Z)es/gw 8: 2249-2253， 2002)。通過(guò)應(yīng)用RNA反義技術(shù)在細(xì)胞系中中斷Raf的表達(dá)已顯示出抑制由 Ras和Raf介導(dǎo)的致肺瘤性(Kolch等人，Nature 349: 416-428， 1991; Monia 等人，Nature Medicine 2(6): 668-675, 1996)。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子正常的生長(zhǎng)以及組織修復(fù)和重構(gòu)需要對(duì)于激活生長(zhǎng)因子及其受體的特 異和精巧的控制。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGFs)包括超過(guò)20種結(jié)構(gòu)上相關(guān) 的多肽的家族，其受到發(fā)育的調(diào)控并且在多種組織中廣泛表達(dá)。FGF刺激 增殖、細(xì)胞遷移和分化在骨骼和四肢發(fā)育、傷口愈合、組織修復(fù)、血細(xì)胞 生成、血管發(fā)生和腫瘤形成中起到重要的作用(綜述于Ornitz， Novartis Found Svmp 232: 63-76;討論76-80， 272-82(2001)).FGF的生物學(xué)作用通過(guò)屬于RPTK蛋白激酶家族的特異性細(xì)胞表面 受體來(lái)介導(dǎo)。這些蛋白質(zhì)包括胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域、單跨膜結(jié)構(gòu)域和在結(jié) 合FGF后發(fā)生磷酸化胞內(nèi)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域。迄今已經(jīng)鑒定了四種 FGFR: FGFR1(也稱(chēng)為Flg、 fms-樣基因、flt-2、 bFGFR、 N誦bFGFR或 Cekl)， FGFR2(也稱(chēng)為Bek-細(xì)菌表達(dá)的激酶-、KGFR、 Ksam、 Ksaml和 Cek3)， FGFR3(也稱(chēng)為Cek2)和FGFR4。所有成熟的FGFR均具有包括 氨基端信號(hào)肽、三個(gè)胞外免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域(Ig結(jié)構(gòu)域I、 Ig結(jié)構(gòu)域II、 Ig結(jié)構(gòu)域lII)以及在Ig結(jié)構(gòu)域之間的酸性區(qū)域("酸性盒"結(jié)構(gòu)域)、跨膜 結(jié)構(gòu)域和胞內(nèi)激酶結(jié)構(gòu)域的共同結(jié)構(gòu)(Ullrich和Schlessinger， Cell 61: 203,1990'， Johnson和Williams(1992) Adv. Cancer Res. 60: 1-41)。不同的 FGFR同種型具有對(duì)于不同的FGF配體的不同結(jié)合親和性，因此，F(xiàn)GF8(雄激素誘導(dǎo)的生長(zhǎng)因子)和FGF9(神經(jīng)膠質(zhì)活化因子)表現(xiàn)為具有對(duì)FGFR3 更強(qiáng)的選擇性(Chellaiah等人J Biol. Chem 1994; 269: 11620)。另 一大類(lèi)細(xì)胞表面結(jié)合位點(diǎn)包括硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)的結(jié) 合位點(diǎn)，需要其高親和性的相互作用和激活FGF家族的所有成員。硫酸乙 酰肝素結(jié)構(gòu)變體的組織特異性表達(dá)賦予配體-受體特異性和FGF的活性。FGFR-相關(guān)的疾病近來(lái)的發(fā)現(xiàn)表明，由FGFR突變?cè)斐傻墓趋阑蔚臄?shù)量增加，包括軟 骨發(fā)育不全，這是人類(lèi)侏儒癥的最常見(jiàn)形式。在FGF-R1、 FGF-R2和FGFR3不同結(jié)構(gòu)域中特定的點(diǎn)突變與被劃分 為顱縫骨結(jié)合綜合征和侏儒綜合征的常染色體顯性人類(lèi)骨骼發(fā)育不良相關(guān) (Coumoul和Deng, Birth Defects Research 69: 286-304(2003)。 FGF-R3突 變相關(guān)的骨骼發(fā)育不良包括軟骨發(fā)育不良、與發(fā)育延W目關(guān)的重度軟骨發(fā) 育不全以及黑棘皮癥(SADDAN)和致死性發(fā)育不良(TD)(Webster等人， 7>w fc (7^i"/" 13(5): 178-182(1997); Tavormina等人，爿附./ 好m附.C7ew"" 64: 722-731(1999))。 FGFR3突變也被描述于兩種顱縫早閉癥的表型中 Muenke冠狀顱縫早閉癥(Bellus等人,A^"" GWi"/cs, 14: 174-176(1996); Muenke等人，爿附.丄H"附,G^"".， 60: 555-564(1997))和伴有黑棘皮癥的克 魯宗綜合征(Meyers等人，A^we Ge""/"， 11: 462-464(1995))?？唆斪诰C 合征與FGFR2特定的點(diǎn)突變相關(guān)，而且家族型的和散發(fā)型的斐弗綜合征 都與FGFR1和FGFR2的突變相關(guān)(Galvin等人，/WAS美萄，93: 7894-7899(1996); Schdl等人，J7"附iWW ( e"， 4: 323-328(1995))。 FGFR 的突變導(dǎo)致了突變受體的組成型激活并增加受體蛋白酪氨酸激酶活性，引 起細(xì)胞與組織無(wú)法分化。特別是，軟骨發(fā)育不全突變導(dǎo)致了突變受體的穩(wěn)定性增強(qiáng)，抑制受體 激活而阻止下調(diào)，引起軟骨細(xì)胞成熟受限并且抑制骨生長(zhǎng)(綜述于Vajo等 人，E"^CT7V^/^We將，21(1) : 23-39(2000))。有不斷增加的證據(jù)表明在多種類(lèi)型的癌癥中存在突變激活的FGFR3。在兩種常見(jiàn)的上皮癌即膀胱癌和宮頸癌以及多發(fā)性骨髓瘤中，組成性激活的FGFR3是FGFR3在癌癥中致癌作用的首要證據(jù)。此外，最近的研 究報(bào)道了在大部分的良性皮膚肺瘤中存在FGFR3激活突變(Logie等人， Hum Mol Genet 2005)。 FGFR3目前在膀胱癌中是最常突變的癌基因，其 在大約50%的全部膀胱癌病例中和大約70%的具有表皮膀胱胂瘤的病例 中發(fā)生了突變(Cappdlen等人，Nature Genetics 1999， 23; 19-20; van Rhijn 等人，Cancer Research 2001， 61: 1265-1268; Billerey等人,爿附.丄 2001,158: 1955-1959， WO 2004/085676)。在膀胱癌中也才艮道了 FGFR3的 超表達(dá)(表皮的和侵入性的)(Gomez-Roman等人，Clinical Cancer Research 2005)。由于染色體易位t(4，14)造成的FGFR3異常^Ji在10-25%的多發(fā)性 骨髓瘤病例中均有報(bào)道(Chesi等人，Nature Genetics 1997， 16: 260-264; Richelda等人，Blood 1997， 90: 4061-4070; Sibley等人，BJH 2002， 118: 514-520; Santra等人，Blood 2003， 101: 2374-2476)。 FGFR3激活突變?cè)?5-10%的具有t(4，14)的多發(fā)性骨髓瘤中可以見(jiàn)到，并且與進(jìn)行性腫瘤g 相關(guān)(Chesi等人，Nature Genetics 1997， 16: 260-264; Chesi等人，必Wrf， 97(3): 729-736(2001); Intini， et al， BJH 2001， 114: 362-364)。在本文中，F(xiàn)GFR3信號(hào)傳遞的后果通常表現(xiàn)為細(xì)胞類(lèi)型特異性的。在 軟骨細(xì)胞中，F(xiàn)GFR3的高活性導(dǎo)致生長(zhǎng)抑制(綜述于Omitz， 2001)，而在 骨髓瘤細(xì)胞中，其促進(jìn)腫瘤ii^(Chesi等人，2001)。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，抑制FGFR3活性代表了一種治療T細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥或自 身免疫性疾病的方法，例如用于治療T細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥或自身免疫性疾病 包括但不限于類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)、 II型膠原關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥(MS)、 系統(tǒng)性紅斑狼疳(SLE)、銀屑病、幼年型糖尿病、舍格倫病、甲狀腺病、 結(jié)節(jié)病、自身免疫性葡萄膜炎、炎性腸病(克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎)、乳 糜瀉和重癥肌無(wú)力。參見(jiàn)WO 2004/110487。FGFR3突變導(dǎo)致的病癥還描述于WO 03/023004和WO 02/102972。在由FGFR3和其他FGFR引起的疾病中(特別是與例如異常的FGF23 血清水平相關(guān)的)，還提及了常染色體顯性的血磷酸鹽過(guò)少的佝僂病(ADHR)、 X-染色體連鎖的血磷酸鹽過(guò)少的佝僂病(XLH)、胂瘤誘導(dǎo)的骨軟 化病(TIO)、骨纖維異樣增生癥(FH)(也參見(jiàn)X. Yu等人，Cytokine & Growth Factor Reviews 1^， 221-232(2005)，和X. Yu等人，Therapeutic Apheresis and Dialysis 2(4)， 308-312(2005))。在乳腺癌中涉及FGFR1、 FGFR2和FGFR4的基因擴(kuò)增和/或超表達(dá) (Penault-Llorca等人，Int J Cancer 1995; Theillet等人，Genes Chrom. Cancer 1993; Adnane等人,Oncogene 1991; Jaakola等人，Int J Cancer 1993; Yamada等人，Neuro Res 2002)。 FGFR1和FGFR4的^A達(dá)也與 胰腺癌和星形細(xì)胞瘤相關(guān)(Kobrin等人，Cancer Research 1993; Yamanaka 等人，Cancer Research 1993; Shah等人，Oncogene 2002; Yamaguchi等 人，PNAS 1994; Yamada等人，Neuro Res 2002)。前列腺癌也與FGFR1 的^^W目關(guān)(Giri等人，Clin Cancer Res 1999)。FGFs/FGFR還參與血管發(fā)生。因此，靶向FGFR系統(tǒng)也被預(yù)測(cè)為治 療原發(fā)性腫瘤和瘤轉(zhuǎn)移的抗血管生成療法(參見(jiàn)，例如Presta等人， Cytokine & Growth Factors Reviews M， 159-178(2005))。特別是FGFR3的突變(如FGFR3b)還被描述為在口腔扁平細(xì)胞癌病 例中造成這類(lèi)受體組成型激活的原因(參見(jiàn)，例如Y. Zhang等人，Int. J. Cancer 112， 166-168(2005)。FGFR的表達(dá)增強(qiáng)，特別是FGFR1的表達(dá)增強(qiáng)，已被報(bào)道為與慢性 梗阻性肺疾病(COPD)(尤其是支氣管)相關(guān)(參見(jiàn)，例如A. Kranenburg 等人，J. Pathol.巫，28-38(2005))。涉及FGF-R1基因座并造成FGR-R1的激活形式的染色體易位已被報(bào) 道為造成8pll骨髓增生綜合征嗜酸性骨髓增生綜合征(EMS)的原因(參見(jiàn) D. Macdonald等人，Cross NCP(2002) Acta Haematologica巡101-107)。拮抗FGFR、特別是FGFR1或FGFR4的方法也被描述用于治療肥胖 癥、糖尿病和/或其相關(guān)疾病，例如代謝綜合征、心血管疾病、高血壓、異 常的膽固醇和甘油三酯水平、皮膚病(如皮膚感染)、靜脈曲張、黑棘皮癥、 濕滲、運(yùn)動(dòng)不耐受、2型糖尿病、胰島素耐受、高膽固醇血癥、膽石病、矯形外科損傷、血栓栓塞疾病、冠脈或血管狹窄(如動(dòng)脈粥樣^埂化)、日間 嗜睡、睡眠呼吸暫停、晚期腎病、膽嚢疾病、痛風(fēng)、心臟病、免疫應(yīng)答受 損、呼吸功能受損、受傷后感染、不育癥、肝病、下腰痛、產(chǎn)科與婦科并 發(fā)癥、胰腺炎、中風(fēng)、手術(shù)并發(fā)癥、壓迫性尿失禁和/或胃腸道病癥(參見(jiàn)，例如WO 2005/037235 A2)。酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(特別是FGF-1)和FGFR1也被描述為參與 成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤的異常信號(hào)傳遞，導(dǎo)致結(jié)合FGF-1后增生(參見(jiàn)，例如S. Siffroi-Fernandez等人，Arch. Ophthalmology里,368-376(2005))。長(zhǎng)(參見(jiàn)，例如T. Ishibe等人，Clin. Cancer Res. U(7)， 2702-2712(2005))。 還可以證明FGFR參與了甲狀腺癌。表皮生長(zhǎng)因子家族和相關(guān)疾病表皮生長(zhǎng)因子受體(EGF-R)和ErbB-2激酶是蛋白質(zhì)酪氨酸激酶受體， 其與它們的家族成員ErbB-3和ErbB-4 —起在大量的哺乳動(dòng)物細(xì)胞包括人 類(lèi)細(xì)胞、特別是上皮細(xì)胞、免疫系統(tǒng)的細(xì)胞，以及中樞與外周神經(jīng)系統(tǒng)的 細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到關(guān)鍵作用。例如，在多種細(xì)胞類(lèi)型中，受體相關(guān)的 蛋白質(zhì)酪氨酸激酶的EGF誘導(dǎo)的激活是細(xì)胞分裂的必要M，因此對(duì)于 細(xì)胞群體的增殖是必要的。最重要的是，在許多人類(lèi)腫瘤的基本組分中觀 察到了 EGF-R(好E/ -7)和/或ErbB-2(iM:及-2)的超表達(dá)。例如，發(fā)現(xiàn)EGF-R 在非小細(xì)胞肺癌、鱗狀細(xì)胞癌(頭和頸部)、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、結(jié)腸 癌和前列腺癌以及神經(jīng)膠質(zhì)瘤中*達(dá)。發(fā)現(xiàn)ErbB-2在鱗狀細(xì)胞癌(頭和 頸部)、乳腺癌、胃癌和卵巢癌以及神經(jīng)膠質(zhì)瘤中超表達(dá)。在所有上述情況中，涉及蛋白激酶異?；钚缘恼{(diào)節(jié)(特別是抑制這類(lèi)激 酶的活性)的那些，可以合理地預(yù)期對(duì)所述疾病有效。因此，需要能夠阻斷異常的組成型受體蛋白酪氨酸激酶活性、特別是 FGFR活性，從而治療與上述突變相關(guān)的臨床表現(xiàn)并調(diào)節(jié)多種生物學(xué)功能 的高親和性和/或選擇性的分子。考慮到大量的蛋白激酶抑制劑，眾多的增生性疾病和其他PK-相關(guān)疾 病，現(xiàn)在有必要提供用作PK抑制劑的新型化合物，并由此用于治療這些 蛋白質(zhì)酪氨酸激酶(PTK)相關(guān)疾病。所需要的是新型的具有藥學(xué)優(yōu)點(diǎn)的PK 抑制性化合物。本發(fā)明的一般性描述現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在下文中更加詳細(xì)給出的定義為屬于雜芳基芳基脲類(lèi)的 化合物顯示對(duì)許多蛋白質(zhì)酪氨酸激酶的抑制作用，特別是對(duì)本文提到的任 意此類(lèi)激酶(更加特別是FGFR)的抑制作用。可以提到的本文的化合物抑制的激酶的實(shí)例具體是FGFR1、 FGFR2、 FGFR3和FGFR4。其他被抑制的激酶是受體酪氨酸激酶VEGF-R，具體 而言是VEGF受體KDR(VEGF-R2)。爿>開(kāi)的化合物適用于抑制一種或多 種這些和/或其他蛋白質(zhì)酪氨酸激酶和/或抑制這些酶的變異體?？紤]到這 些活性，所述化合物特別可用于治療涉及此類(lèi)型激酶(特別是提到的那些 激酶)錯(cuò)亂或過(guò)度活性的疾病。本文公開(kāi)的化合物可以以不同的形式，例如游離酸、游離堿、酯類(lèi)和 例如其他前藥、鹽和互變異構(gòu)體的形式存在，且本文包含所有不同形式的 所述化合物。保護(hù)范圍包括贗品或欺詐品，其包含或聲稱(chēng)包含本發(fā)明化合物，不考治療有效量。因此保護(hù)范圍包括包裝，包含表明其包含了本發(fā)明的種類(lèi)或 藥物制劑或組合物的描述和說(shuō)明書(shū)，以及作為或包含或聲稱(chēng)包含此類(lèi)制劑、 組合物或種類(lèi)的產(chǎn)品。本說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)全文，除非上下文另有需要，單數(shù)形式都包含 復(fù)數(shù)。具體而言，除非上下文另有需要，任何所使用的不確定的冠詞在本 說(shuō)明書(shū)中都理解為考慮了復(fù)數(shù)和單數(shù)。除非與本文所述的內(nèi)容不相容，與本發(fā)明的具體方面、實(shí)施方案或?qū)嵤├嚓P(guān)的特征、整數(shù)、特性、化合物、化學(xué)部分或基團(tuán)應(yīng)當(dāng)理解為可用于本文描述的任何其他的方面、實(shí)施方案或?qū)嵤├１菊f(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中，詞語(yǔ)"包含"和"包括"及其不同的變體是才i "包含但不限于"，其不意味著(并且不)排除其他部分、添加物、成分、 整體或步驟。本文的其他方面和實(shí)施方案將在以下的描述和權(quán)利要求中進(jìn)行說(shuō)明。 發(fā)明詳述現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)式IA的新化合物，X、 Y和Z中的兩個(gè)是N(氮)，第三個(gè)是CH或N(優(yōu)選地，Y和Z是 N，且Z是CH);并且 或者其中，R1是被羥基、苯基-C廣CV烷氧基、哌溱-l-基或4-(苯基-d-C"烷基)畫(huà) 哌溱-l-基所取代的苯基；或者被(i)鹵素或C廠(chǎng)C7-烷氧基以及除此之外被(ii) 羥基、苯基-d-CV烷氧基、N-單-或N，N-二-(C廣C7-烷基)-^J^C廣C"烷基、 吡咯烷子基(pyrrolidino)-C廣C7-烷氧基、l-(C廣CV烷基)-哌啶4-基、嗎啉代 -d畫(huà)C7畫(huà)烷氧基、硫嗎啉代-d-CV烷緣、哌溱畫(huà)l-基、4-(苯基-C廣C7-烷基)-哌嗪-l-基、4-(d-Cr烷基)-哌嗪-l-基、[4-(d-C7-烷基)-哌嗪-l-基卜d-C7-烷基、N-單-或N，N-二-(d-C7-烷基)-氨基-C，-C7-烷基、N-單-或N,N-二 -(d-Cr烷基)-氨基-CrC7-烷氧基、[4-(d-C"烷基)-哌溱-l-基-CVC7-烷氧 基4-(Q-C7-烷基)-哌^(guò)l-基l-羰基所取代的苯基；R2是氫、d-C"烷基、d-CV烷氧基或鹵素；其中R3是氫、CVCV烷基或苯基-CVCT烷基，R4各自獨(dú)立地是C廠(chǎng)CV烷基、S素-d-CV烷基、自素或c,-cv烷氧基，且n是0、 1、 2、 3、 4或5j 或者R1是被羥基、苯基-d-CV烷氧基、哌溱-l-基、4-(苯基-d-C7-烷基)-哌嗪-l-基所取代的苯基；N-單-或N，N-二-(C,-CT烷基)-氨基-d-CV烷基、 吡咯烷子基-C,-C7-烷氧基、l-(C,-CV烷基)-哌啶-4-基、嗎啉代-C,-CV烷氧 基、硫嗎啉代-C廣CV烷氧基、4-(d-Cr烷基)-哌溱-l-基、[4-(C廣C7-烷基)-哌溱-l-基-CVC7-烷基、N-單-或N，N-二-(d-C7-烷基)-氨基-C廣C7-烷基、 N-單-或N，N-二-(C「C7-烷基)-tJ^CVC7-烷氧基、[4-(<:1-0烷基)-旅噪誦1-基卜OC"烷氧基、[4-(C,-C7-烷基)-p底溱-l-基卜羰基所取代的苯基；或者帶 有一個(gè)本段中提到的取代基和除此之外的選自卣素和C,-Cr烷氧基的取代基的苯基；R2是氫、d-Cr烷基、CVCV烷氧基或鹵素； R3是氫、d-CV烷基或苯基-d-C7-烷基， R5是氫(優(yōu)選)、d-C7-烷基或苯基-C,-C7-烷基， 并且或者n是3、 4或5且R4選自d-O烷基、d-CV烷氧基和囟素，條 件是C廠(chǎng)Cr烷基、d-CV烷氧基和囟素中各自至少存在一個(gè)；或者n是2且一個(gè)1^是卣素-d-C7-烷基，另 一個(gè)R"是C廠(chǎng)CV烷氧基;或者n是3、 4或5且R4選自鹵素、碘代和d-Cr烷氧基，M是鹵 素、碘代和d-CV烷氧基中各自至少存在一個(gè)；或者n是3、4或5且R"選自卣素、鹵素畫(huà)C廣Cr-烷基和CVC7-烷氧基， 條件是鹵素、鹵素-d-CV烷基和d-C「烷氧基中各自至少存在一個(gè)；或者Y和Z是N(氮)且X是CH， 或者其中R1是被N-C廣C"烷基-哌溱-l-基單取代的3-吡錄，R2是氫， R3是氫，R4各自獨(dú)立地是CKV烷基、卣素-d-CV烷基、卣素或Q-CV烷氧基，R5是氫且n是l、 2、 3、 4或5; 或者式IA的化合物，其中W是4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基絲，W是 氫，R3是氫，R4是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，n是4， R5是氫，Y和Z 是N且X是CH;或者式IA的化合物，其中Ri是3-(4-甲基-哌喚-l-基甲基)-苯基氨基，R2 是氫，RS是曱基，W是2-和6-氯及3-和5-曱氧基，n是4， RS是氫，Y和 Z是N且X是CH,或者式IA的化合物，其中R'是3-(4-乙基-旅瘵-l-基)-苯基氨基，W是氫， Rs是曱基，W是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，n是4， R5是氫，Y和Z是N 且X是CH，或者式IA的化合物，其中R!是4-(2-嗎啉4-基-乙氧基)-苯基氨基，R"是 氫，RS是甲基，R"是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，n是4，議5是氫，Y和Z 是N且X是CH,或者式IA的化合物，其中R，是4-(l-乙基-哌咬4-基)-苯基氨基，W是氫， W是甲基，R"是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，n是4，議5是氫，Y和Z是N 且X是CH，或者式IA的化合物，其中W是4-(4-乙基-哌溱-l-基)-苯基氨基，W是氫， Rs是乙基，W是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，n是4， R5是氫，Y和Z是N且X是CH，和/或 或者式IA的化合物，其中Ri是4-(4-乙基-哌溱-l-羰基)-苯基氨基，W是 氫，Rs是甲基，R"是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，n是4， R5是氫，Y和Z 是N且X是CH;或者兩個(gè)或多個(gè)式IA化合物的混合物；或者各種情況的式IA化合物(如上下文提到的)的鹽、其前藥、N-氧 化物或酯，其對(duì)于治療與蛋白激酶活性相關(guān)的病癥，特別是與可以通過(guò)蛋白質(zhì)酪 氨酸激酶調(diào)節(jié)化合物進(jìn)行治療的疾病相關(guān)的病癥，更加特別地是FGFR調(diào) 節(jié)化合物進(jìn)4于治療的疾病相關(guān)的病癥是有用的。因此，本發(fā)明涉及一種或多種此類(lèi)的式IA化合物、其鹽、前藥、N-氧化物或酯，以及上文提到的用途、方法和藥物制劑。具體而言，本發(fā)明涉及式IA的化合物，其中X、 Y和Z中的兩個(gè)是N(氮)，第三個(gè)是CH或N(優(yōu)選地，Y和Z是 N且Z是CH);并且 或者(A) W是被羥基、被苯基-C廣C7-烷緣(特別是芐氧基)、被哌溱-l-基 或被4-(苯基-d-C7-烷基)-旅臻-l-基(特別是4-芐基-哌溱-l-基)所取代的苯 基；或者(i)(一次)被卣素(特別是氟或氯)或d-CV烷氧基(特別是甲氧基) 以及另外(ii)(一次)被羥基、苯基-C,-CV烷氧基(特別是芐氧基)、N-單-或 N，N-二-(C,-C7-烷基)-氨基-CVCV烷基(特別是二甲基氨基甲基)、吡咯烷子 基-d-CV烷氧基(特別是2-吡咯烷子基-乙氧基)、l-(d-CV烷基)-哌咬-4-基 (特別是l-乙基-哌啶-4-基)、嗎啉代-d-CV烷氧基(特別是2-嗎啉代-乙氧 基)、硫嗎啉代-C廣CV烷氧基(特別是2-硫嗎啉代-乙氧基)、哌，秦-l-基、4-(苯基-<:廣<:7-烷基)-派溱-1-基(特別是4-芐基哌溱-1-基)、4-(<:1-0烷基)-旅"秦畫(huà)1-基(特別是4-(甲基、乙基或異丙基)-哌嗪-l-基)、[4-(Q-C7-烷基)-哌嗪-l-基卜d-Cr烷基(特別是2-[4-(甲基或乙基)-哌溱-l-基-乙基)、N-單-或N，N-二-(C廣CV烷基)-氨基-CVC7-烷基(特別是二甲基氨基甲基)、N-單-或N，N-二-(C廣CV烷基)-氨基-CVC7-烷氧基(特別是2-(二甲基氨基)-乙氧基)、 [^(C廣C7陽(yáng)烷基)畫(huà)派溱-l-基-C廣0烷氧基(特別是2-(4-甲基哌喚-l曙基)-乙氧 基)或4-(C廣CV烷基)-哌溱-l-基-羰基(特別是4-乙基哌喚-l-羰基)所取代的苯基；W是氫(優(yōu)選)、C廣CV烷基、C,-CV烷氧基或(較不優(yōu)選)鹵素；R3是氫(優(yōu)選)、d-C7-烷基(優(yōu)選)或苯基-d-C7-烷基，R"各自獨(dú)立地是d-C7-烷基、卣素-d-C7-烷基、卣素或C廣CV烷氧基， R5是氫(優(yōu)選)、d-C7-烷基或苯基-C廣0烷基， 且n是0、 1、 2、 3、 4il5; 或者(B)其中R1是4皮以下基團(tuán)所取代的苯基，所述基團(tuán)包括羥基、苯 基-d-C7-烷氧基(特別是節(jié)氧基)、哌,-l畫(huà)基、4-(苯基-d誦C7-烷基)-哌溱醫(yī)l-基(特別是4-芐基誦哌溱-l畫(huà)基)、N-單畫(huà)或N，N陽(yáng)二陽(yáng)(C廠(chǎng)C7-烷基)-iJ^CVC"烷 基(特別是二甲基氨基甲基)、吡咯烷子基-d-CV烷氧基(特別是2-吡咯烷子 基-乙氧基)、l-(d-CV烷基)-哌啶-4-基(特別是l-乙基-哌啶斗基)、嗎啉代-C廣CV烷氧基(特別是2-嗎啉代-乙氧基)、硫嗎啉代-c廣cv烷氧基(特別是2-硫嗎啉代-乙氧基)、4-(C廣Cr烷基)-哌溱-l-基(特別是4-(甲基、乙基或異 丙基)-旅溱-l-基)、[4-(d-C7-烷基)-哌喚-l-基-C廣C7-烷基(特別是2-[4-(甲 基或乙基)-哌溱-l-基I-乙基)、N-單-或N，N-二-(d-C「烷基)-氨基-C廣C7-烷 基(特別是二甲基氨基甲基)、N-單-或N，N-二-(d-Cr烷基)-氨基-C廣CV烷氧 基(特別是2-(二甲基#^)-乙氧基)、[4-(C廣C7-烷基)-哌溱-l-基卜C廣C"烷氧 基(特別是2-(4-甲基哌嗪-1-基)-乙氧基)或[4-(C廣C7-烷基)-哌嗪-l-基-羰基 (特別是4-乙基p底溱-l-羰基)；或者帶有一個(gè)a中提到的W的取代基和除 此之外選自卣素和d-C"烷氧基的取代基的苯基；W是氫(優(yōu)選)、C,-CV烷基、OCr烷氧基或(較不優(yōu)選)鹵素； R3是氫(優(yōu)選)、C廣C7-烷基(優(yōu)選)或苯基-C廣C7-烷基，R5是氫(優(yōu)選)、C廣C7畫(huà)烷基或苯基-C廣C7-烷基，且或者n是3、 4或5且R4選自C廣C7-烷基、C廣Cr烷氧基和囟素，條 件是C，-C7-烷基、d-CV烷氧基和卣素中各自至少存在一個(gè)；或者n是2且一個(gè)！^是卣素-d-C7-烷基，另 一個(gè)R"是d-CV烷l^;或者n是3、 4或5且R4選自鹵素、碘代和C廣CV烷I^， M是卣 素、碘代和d-C7-烷氧基中各自至少存在一個(gè)；或者n是3、4或5且I^選自卣素、卣素-C廣C7-烷基和C廣CV烷lL&， 條件是鹵素、鹵素-Q-CV烷基和d-CV烷氧基中各自至少存在一個(gè)；(C)或者式IA的化合物，其命名為l-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-3-{6誦[4-(2畫(huà)嗎啉國(guó)4-基-乙氧基)國(guó)苯基氨 基卜嘧咬-4-基}-脲(其中，對(duì)于式IA， R，是4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基氨 基，W是氫，R"是氫，W是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，且n是4且R5是氫)，3-(2，6-二氯-3，5-二曱氧基-苯基)-l-甲基-1-{6-[3-(4-甲基-哌嗪-l-基甲 基)-苯基氨基-嘧吱-4-基}-脲(其中，對(duì)于式IA， Ri是3-H-甲基-P底溱-l-基 甲基)-苯基氨基，W是氫，Rs是甲基，114是2-和6-氯及3-和5-甲氧基， 且n是4，且R5是氬)，3-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-1-{6-3-(4-乙基-哌嗪-l-基)-苯基氨基]-嘧咬-4-基}-1-曱基-脲(其中，對(duì)于式IA， R1是3-(4-乙基-哌溱-l-基)-苯基氨 基，W是氫，RS是甲基，R"是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，且n是4，且 R5是氫)，3-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-l-甲基-1-{6-[4-(2-嗎啉-4_基-乙氧基)-苯基氨基]-嘧咬畫(huà)4畫(huà)基}-脲(其中，對(duì)于式IA， W是吝p-嗎啉4-基-乙氧基)國(guó) 苯基氨基，W是氫，Rs是甲基，議4是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，且ii是 4，且R5是氫)，3陽(yáng)(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(1-乙基-哌啶-4-基)-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基-脲(其中，對(duì)于式IA， W是4-(l-乙基-哌咬-4-基)-苯基氨 基，W是氫，RS是甲基，R"是2-和6-氯及3-和5-甲氧基且n是4，且R5是氬)，3-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-l-乙基-1-{6-[4-(4-乙基-哌嘸-l-基)-苯 基氨基-嘧咬-4-基}-脲(其中，對(duì)于式IA， R1是4-(4-乙基-哌溱-l-基)-苯基氨 基，W是氫，RS是乙基，W是2-和6-氯及3-和5-甲氧基且n是4，且R5是氫)或者3-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-l-羰基)-苯基氨 基卜嘧啶-4畫(huà)基}-1-甲基畫(huà)脲(其中，對(duì)于式IA， R'是4-(4畫(huà)乙基-哌溱-l-絲)畫(huà) 苯基氨基，R2是氫，R3是甲基，R4是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，且n是 4，且R5是氬)，(其中這些化合物中對(duì)應(yīng)于式IA中的R1、 R2、 R3、 R4、 R5、 X、 Y和Z的部分以及n是通過(guò)給出的這些化合物各自的含義來(lái)分別 進(jìn)行定義)；其中這些化合物中各自的Y和Z是氮且X是CH; 以及各種情況的式IA的化合物(如上下文所述)的鹽、前藥、N-氧化物 或其酯。在一個(gè)實(shí)施方案中本發(fā)明提供了式IA化合物，其中Y和Z是N(氮)且X是CH，或者其中R1是被N-d-CV烷基-哌溱-l-基單取代的3-吡#，R2是氫，R3是氫，R"各自獨(dú)立地是C廠(chǎng)CV烷基、囟素-C廣C7-烷基、卣素或d-CV烷氧基， R5是氫，且n是l、 2、 3、 4或5。在該實(shí)施方案中，優(yōu)選R"各自獨(dú)立地是fi素或d-CV烷氧基，且n 優(yōu)選地是3、 4或5，最優(yōu)選4。 優(yōu)選的定義除非另外指明，本文中所用的一般術(shù)語(yǔ)優(yōu)選地具有本文中所公開(kāi)的下 列含義字首"低級(jí)"或"d-C7"是指具有直至7 (含最大值7)個(gè)鏈原子、特別是直至4 (含最大值4 )個(gè)鏈原子的基團(tuán)。烷基和脂肪族的具體類(lèi)別包含1、 2、 3或4個(gè)碳原子。所討論的基團(tuán)是直鏈或者具有單個(gè)或多個(gè)分支的支鏈。低級(jí)烷基或d-CV烷基優(yōu)選地是包含1-7(含1和7 )個(gè)碳原子的烷基， 優(yōu)選l、 2、 3或4個(gè)碳原子，并且是直鏈或支鏈；例如，低級(jí)烷基是丁基， 如正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基；丙基，如正丙基或異丙基；乙基或 甲基。舉例的烷基是甲基、乙基或異丙基。當(dāng)化合物、鹽等使用復(fù)數(shù)形式時(shí)，其也用來(lái)表示單個(gè)化合物、鹽等。當(dāng)苯基在式IA中作為連接R，和NRS的環(huán)存在于R1中時(shí)，取代基羥 基、苯基-d-CV烷氧基、哌喚-l-基、4-(苯基-d-C7-烷基)-哌嗪-l-基；N-單-或N，N-二-(C廣C7-烷基)-^J^-C廣CV烷基、吡咯烷子基-C廣CV烷氧基、 HCVCV烷基)-哌咬-4-基、嗎啉代-d-CV烷氧基、硫嗎啉代-C廠(chǎng)CV烷氧基、 4-(d-CV烷基)-哌喚-l-基、[4-(d-C7-烷基)-哌嗪-l-基-d-CV烷基、N-單-或N，N-二-(d-CV烷基)-氨基-d-Cr烷基、N-單-或N,N-二-(d-CV烷基)-氨 基-C-C廠(chǎng)烷氧基、[4-(C廣C7-烷基)-哌嗪-l-基畫(huà)d畫(huà)C7-烷氧基、[4-(d陽(yáng)C7畫(huà)烷 基)-旅，秦-l-基l-羰基優(yōu)選位于相對(duì)于連接NR3的苯環(huán)的3-或4-位。任何不對(duì)稱(chēng)碳原子都可以以(R)-、 (S)-或(R，S)-構(gòu)型存在，優(yōu)選以(R)-或(S)-構(gòu)型存在。任何不飽和基團(tuán)都以順-、反-或(順，反)形式存在。因此這 些化合物可以以異構(gòu)體混合物或純異構(gòu)體的形式存在，優(yōu)選以對(duì)映異構(gòu)體-純非對(duì)映異構(gòu)體形式存在。本發(fā)明還涉及所公開(kāi)化合物的可能的互變異構(gòu)體。如果沒(méi)有另外指明，游離形式及其鹽形式的式IA化合物，包括那些 例如在純化或鑒定新化合物中可以用作中間體的鹽，考慮到其與互變異構(gòu) 體或互變異構(gòu)混合物及其鹽的親密關(guān)系，本文中任何這些化合物適當(dāng)且便的鹽。例如，在各自連有至少一個(gè)氫的氮基或羥基與通過(guò)雙鍵與相鄰原子相 連的碳原子連接的情況中，可以存在互變異構(gòu)體(如酮-烯醇或亞胺-烯胺 互變異構(gòu)體)。當(dāng)提到"化合物......，其互變異構(gòu)體；或其鹽，，或類(lèi)似的話(huà)時(shí)，其含義是"化合物......，其互變異構(gòu)體；或該化合物和/或該互變異構(gòu)體的鹽"。鹵素具體而言是指氟、氯、溴或碘，特別是(優(yōu)選在式I化合物中)氟、氯或硪o鹵素-d-C7-烷基的含義是C廠(chǎng)CV烷基，其中一個(gè)或多個(gè)氫原子被鹵素原子取代，如三氟甲基。4-((:1-<:7-烷基)-哌嗪-1-基1-羰基的含義是[4-(<:1-<:7-烷基)-哌溱-1-基l-c(-o)畫(huà)。本發(fā)明涉及如上文所述的式IA化合物及其鹽、酯、N-氧化物或前藥。 因此，在一方面本發(fā)明提供了作為式IA化合物和/或鹽、酯、N-氧化物或前藥的產(chǎn)物。鹽具體是式IA(或其例舉的式)化合物的可藥用鹽，特別是當(dāng)其形成 成鹽基團(tuán)時(shí)如此。成鹽基團(tuán)是具有堿性或酸性特性的基團(tuán)。具有至少 一個(gè)堿性基團(tuán)或至 少一個(gè)堿性原子團(tuán)的化合物，例如堿性氮，如氨基、沒(méi)有形成肽鍵的仲氨 基或叔氨基，可以例如與無(wú)機(jī)酸(如鹽酸、硫酸或磷酸)或合適的有機(jī)羧 酸或磺酸，例如脂肪族單-或二羧酸(如三氟乙酸、乙酸、丙酸、羥基乙酸 (glycolic acid)、琥珀酸、馬來(lái)酸、富馬酸、羥基馬來(lái)酸、蘋(píng)果酸、酒石酸、 檸檬酸或草酸)或氨基酸(如精氨酸或賴(lài)氨酸)、芳香羧酸(如苯甲酸、2-苯氧基-苯甲酸、2-乙氧基苯甲酸、水楊酸、4-氨基水楊酸)、芳香-脂肪族 羧酸(如扁桃酸或肉桂酸)、雜芳香族羧酸(如煙酸或異煙酸)、脂肪族磺 酸(如甲-、乙-或2-羥基乙磺酸)或芳香族磺酸(如苯-、對(duì)甲苯-或萘-2-磺酸)形成酸加成鹽。當(dāng)存在幾個(gè)堿性基團(tuán)時(shí)，可以形成單-或多-酸加成 鹽。具有酸性基團(tuán)、羧基或酚羥基的化合物可以形成金屬或銨鹽，例如堿 金屬或堿土金屬鹽，如鈉、鉀、鎂或鈣鹽，或者與氨或合適的有機(jī)胺如叔 單胺(如三乙胺或三-(2-羥基乙基)-胺)，或者雜環(huán)堿，如7V-乙基-哌啶或 yV，7V'一二甲基派，秦所形成的銨鹽。同時(shí)可能形成鹽的混合物。同時(shí)具有酸性和堿性基團(tuán)的化合物可以形成內(nèi)鹽。出于分離或純化的目的，以及進(jìn)一步用作中間體的化合物，也可能使 用非可藥用鹽，例如苦味酸鹽。然而，僅可藥用的、無(wú)毒的鹽才可用于治 療目的，因此優(yōu)選使用這些鹽?？紤]到新化合物或其N(xiāo)-氧化物的游離形式及其鹽形式，包括那些例如 在純化或鑒定新化合物中可以用作中間體的鹽的親密關(guān)系，本文中任何游 離化合物(包括式IA化合物、中間體和原料)適當(dāng)且便利地都將理解為 也涉及其所對(duì)應(yīng)的N-氧化物和/或鹽、水合物、溶劑合物和/或此類(lèi)化合物 或其N(xiāo)-氧化物的結(jié)晶形式。式IA化合物(或其例舉的式)如上下文所述具有有價(jià)值的藥理特性。生物學(xué)作為Bcr-Abl、 c畫(huà)KIT、 EphB4、 EGF-R、 VEGF-R2(KDR)、 FGF-R、 Tie-2(Tek)、 Ret、 PDGFR、 raf、 FLT3、 c-src和/或FGFR3受體酪氨酸激 酶活性抑制劑的本發(fā)明化合物的功效可以證明如下在下文中，"抑制劑"、"活性化合物"等是指式IA的化合物。抗Bcr-Abl活性的試驗(yàn)p210 Bcr-Abl表達(dá)載體pGDp210Bcr/Abl(32D-bcr/abl)轉(zhuǎn)染的鼠骨髓 祖細(xì)胞系32Dcl3獲自J Griffin(Dana Faber癌癥研究所，Bosten， MA，美 國(guó))。該細(xì)胞表達(dá)具有組成型激活的abl激酶的融合bcr-Abl蛋白質(zhì)并且進(jìn) 行非生長(zhǎng)因子依賴(lài)性的增殖。該細(xì)胞在RPMI 1640(AMIMED)、 10%胎牛 血清、2 mM谷氨酰胺(Gibco)("完全培養(yǎng)基，，)中擴(kuò)增，并通過(guò)在冷凍培養(yǎng) 基(95%胎牛血清、5%DMSO (SIGMA))中冷凍的每小瓶2xl06個(gè)細(xì)胞的 整分試樣來(lái)制備工作儲(chǔ)備液。解凍后，在最多10-12代內(nèi)采用該細(xì)胞進(jìn)行 實(shí)驗(yàn)。使用來(lái)自Upstate Biotechnology的抗abl SH3結(jié)構(gòu)域的抗體(目錄 號(hào)06-466)進(jìn)4亍ELISA。采用標(biāo)記了來(lái)自ZYMED(目錄號(hào)03-7722)的堿 性磷酸酶(PY10(AP))的抗-磷酸酪氨酸的抗體Ab PY20測(cè)定bcr-abl的磷酸 化。使用(N-{5-4-(4-甲基-哌嗪子基-甲基)-苯曱酰氨基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶-胺的甲磺酸鹽(單甲磺酸鹽)(STI571)(市售為Gleevec⑧或 Glivec , Novartis)作為對(duì)比和參考化合物。在DMSO中制備10 mM的儲(chǔ) 備液并將其存放于-2(TC。對(duì)于細(xì)胞試驗(yàn)，將儲(chǔ)備液在完全培養(yǎng)基中進(jìn)行兩 步稀釋(1:100和1:10)得到10|nM的初始濃度，然后在完全培養(yǎng)基中制備系 列的3倍稀釋液。應(yīng)用該方法沒(méi)有遇到溶解度的問(wèn)題。對(duì)待測(cè)的化合物進(jìn) 行類(lèi)似的處理。將200,000 32D-bcr/abl細(xì)胞以每孔50 的量接種于96 孔的圓底組織培養(yǎng)板中進(jìn)行分析。將每孔50 nL測(cè)試化合物的系列3倍稀 釋液加入細(xì)胞中， 一式三份。測(cè)試化合物的終濃度范圍為例如5 pM至0.01 ILiM。未處理的細(xì)胞用作對(duì)照。將化合物與細(xì)胞一起于37。C、 5V。C02中溫 育90分鐘，隨后以1300轉(zhuǎn)/分鐘離心組織培養(yǎng)板(Beckman GPR離心機(jī))， 并小心抽吸除去上清液，注意不要移出任何沉淀的細(xì)胞。加入150pL裂解 緩沖液(50mM Tris/HCl pH 7.4、 150 mM氯化鈉、5mM EDTA、 lmM EGTA 、 1% NP畫(huà)40(非離子型去污劑，Roche Diagnostics GmbH ， Mannheim,德國(guó))、2mM原釩酸鈉、1 mM苯曱基磺酰氟、50 |ig/mL抑 肽酶和80嗎/mL亮抑酶肽)使細(xì)胞沉淀裂解，或者將其直接用于ELISA或 者凍存于-20。C備用。將抗-abl SH3結(jié)構(gòu)域的抗體以每孔SO PBS中200 ng的量包被黑色ELISA板(Packard HTRF-96黑色板，6005207)，于4°C 過(guò)夜。用含有0.05% Tween20(PBST)和0.5 %TopBlock(Juro，目錄號(hào)TB 232010)的200 juL/孔PBS洗滌三次后，將剩余的蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)用200 pL/ 孔的PBST、 3% TopBlock于室溫下封閉4小時(shí)，隨后與50 未處理的 或測(cè)試化合物處理的細(xì)胞的裂解物(每孔總蛋白質(zhì)20照)一起于4'C溫育 3-4小時(shí)。洗滌三次后，以50nL/孔的量。加入在封閉緩沖液中稀釋至0.5 iLig/mL的PY20(AP)(Zymed)并培養(yǎng)過(guò)夜(4。C)。對(duì)于所有的培養(yǎng)步驟，均采 用平板密封器(Costar，目錄號(hào)3095)將平板密封。最后，用洗滌緩沖液將 平板再洗滌三次，并在以90 ^L/孔的量加入含有Emerald II的AP底物 CPDStar RTU前用去離子水洗滌一次?，F(xiàn)在將采用Packard Top SealTM-一種平板密封器(目錄號(hào)6005185)密封的平板在黑暗中于室溫下溫育45分 鐘，用Packard Top Count微孔板閃爍計(jì)數(shù)器(Top Count)測(cè)定每秒計(jì)數(shù)(CPS)來(lái)對(duì)發(fā)光進(jìn)行定量。對(duì)于最終的優(yōu)化形式的ELISA，將50pL在96 孔組織培養(yǎng)板中生長(zhǎng)、處理和裂解的細(xì)胞的裂解物直接從這些平板轉(zhuǎn)移到 預(yù)先用來(lái)自Upstate的兔抗-abl-SH3結(jié)構(gòu)域的多克隆抗體AB 06-466包被 的ELISA板上?？?磷酸酪氨酸的抗體AB PY20(AP)的濃度可以降低到0.2 pg/mL。如上所述洗滌、封閉以及與發(fā)光底物一起溫育。采用如下的方法 完成定量計(jì)算從未處理的32D-bcr/abl細(xì)胞的裂解物得到的ELISA讀數(shù) (CPS)與試驗(yàn)背景(含有所有成分，但沒(méi)有細(xì)胞裂解物)的讀數(shù)之間的差異并 以此作為100% ，以反映這些細(xì)胞中存在的組成型磷酸化的bcr-abl蛋白質(zhì)。 化合物在bcr-abl激酶活性中的活性以bcr-abl磷酸化降低的百分率來(lái)表 示。通過(guò)圖解的內(nèi)插法或外推法從劑量效應(yīng)曲線(xiàn)測(cè)定ICs。的值。本發(fā)明的 化合物優(yōu)選ICs。值范圍是從15nM至500|iM之間，最優(yōu)選是從15nM至 200 |iM之間。在細(xì)胞試驗(yàn)中，在DMSO中溶解化合物并用完全培養(yǎng)基稀釋以獲得 10pM的起始濃度，然后在完全培養(yǎng)基中制備系列的3倍稀釋液。將表達(dá) 'wt，-Bcr-Abl或Bcr-Abl突變體的32D或Ba/F3細(xì)胞(例如T-315-I)以50|iL 完全培養(yǎng)基中200000個(gè)細(xì)胞/孔的量接種于96孔的圓底組織培養(yǎng)板中。 將每孔50 juL的測(cè)試化合物的系列3倍稀釋液加入細(xì)胞中， 一式三份。未 處理的細(xì)胞用作對(duì)照。將化合物與細(xì)胞一起于37°C、 5% C02中溫育卯 分鐘，隨后以1300轉(zhuǎn)/分鐘離心組織培養(yǎng)板(BeckmanGPR離心機(jī))，并小 心抽吸除去上清液，注意不要移出任何沉淀的細(xì)胞。加入150pL裂解緩沖 液(50mMTris/HClpH7.4、 150mM氯4匕鈉、5mM EDTA、 lmM EGTA、 1% NP-40、 2 mM原釩酸鈉、lmMPMSF、 50pg/mL抑肽酶和80|iig/mL 亮抑酶肽)使細(xì)胞沉淀裂解，或者將其直接用于ELISA或者凍存于-20。C備 用。將來(lái)自Upstate的兔抗-abl-SH3結(jié)構(gòu)域的多克隆抗體06_466以每孔 50jiL PBS中50ng的量包被黑色ELISA板(Packard HTRF-96黑色板， 6005207)， 于4。C過(guò)夜。用含有0.05% Tween20(PBST)和0.5% TopBlock(Juro)的200 iaL/孔PBS洗滌三次后，將剩余的蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)用200 pL/孔的PBST、 3% TopBlock于室溫封閉4小時(shí)，隨后與50L未處 理的或測(cè)試化合物處理的細(xì)胞的裂解物(每孔總蛋白質(zhì)20嗎)一起于4°C wy3-4小時(shí)。洗滌三次后，以50ixL/孔的量加入在封閉緩沖液中稀釋至0.2 Hg/mL的用堿性磷酸酶(Zymed)標(biāo)記的抗-磷酸酪氨酸的抗體PY20(AP)并 溫育過(guò)夜(4。C)。對(duì)于所有的培養(yǎng)步驟，均采用平板密封器(Costar)將平板 密封。最后，用洗滌緩沖液將平板再洗滌三次，并在以90nL/孔的量加入 含有Emerald II的AP底物CPDStar RTU前用去離子水洗滌一次?，F(xiàn)在 將采用Packard Top SealTM-—種平板密封器密封的平板在黑暗中于室溫下 溫育45分鐘，用Packard Top Count微孔板閃爍計(jì)數(shù)器(Top Count)測(cè)定 每秒計(jì)數(shù)(CPS)來(lái)對(duì)發(fā)光進(jìn)行定量。計(jì)算未處理的32D-Bcr/Abl細(xì)胞的裂解物得到的ELISA讀數(shù)(CPS)與 試驗(yàn)背景(含有所有成分，但沒(méi)有細(xì)胞裂解物)的讀數(shù)之間的差異并以此作 為100%,以反映這些細(xì)胞中存在的組成型磷酸化的Bcr-Abl蛋白質(zhì)?；?合物在Bcr-Abl激酶活性中的活性以Bcr-Abl磷酸化降低的百分率來(lái)表示。通過(guò)圖解外推法從劑量效應(yīng)曲線(xiàn)測(cè)定IC50 (和IC90)的值。在抑制自身磷酸化作用和抑制在Ba/F3轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、特別是T3151中 Bcr-Abl突變體的IL-3非依賴(lài)的增殖方面，本發(fā)明的化合物優(yōu)選ICso值范 圍是從50nM至500nM之間。32D c13細(xì)胞可以從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC CRL11346)獲 得，Ba/F3細(xì)胞從德國(guó)孩i生物和細(xì)胞培養(yǎng)物收藏中心(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures)(DSMZ， Braunschweig和DSMZ No. ACC 300)獲得。戶(hù)"/""V 爭(zhēng)人7Vfl似"，3"6，戶(hù)"6Af^/ 7Z> 749。 爭(zhēng)人C"/，乾.渭5， 727, P"Mfe"Z) M2"跌B(niǎo)a/F3.p210細(xì)胞和鼠造血32D c13細(xì)胞(32D p210 cells)通過(guò)用包含 p210BCR-ABL(B2A2) cDNA的pGD載體轉(zhuǎn)染IL-3依賴(lài)的鼠造血Ba/F3 細(xì)胞系而獲得。<formula>formula see original document page 35</formula>?？筩-KIT活性的試驗(yàn)使用桿狀病毒供體載體pFbacG01(GIBCO)產(chǎn)生表達(dá)人c-Kit胞質(zhì)激酶 結(jié)構(gòu)域的第544-976位氨基酸的氨基酸區(qū)域的重組桿狀病毒。通過(guò)PCR從 人子宮c-DNA文庫(kù)(Clontech)中擴(kuò)增C-Kit胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域的編碼序列。通過(guò) 用BamH I和EcoR I消化使擴(kuò)增的DNA片段和pFbacGOl載體相容連接。 這些DNA片段的連接產(chǎn)生桿狀病毒供體質(zhì)粒c-Kit。病毒的產(chǎn)生、sf9細(xì) 胞中蛋白質(zhì)的表達(dá)和GST融合蛋白質(zhì)的純化如下進(jìn)行病毒的產(chǎn)生將含c-Kit激酶結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)移載體pFbacG01-c-Kit轉(zhuǎn)染 DH10Bac細(xì)胞系(GIBCO)并將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞涂布選擇性瓊脂平板。沒(méi)有在病 毒基因組中插入融合序列(由細(xì)菌攜帶)的菌落為藍(lán)色。挑取單個(gè)白色菌 落并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)粒純化程序從細(xì)菌中分離病毒DNA (桿狀病毒穿梭栽 體)。然后在25cm2搖瓶中使用Cellfectin試劑將病毒DNA轉(zhuǎn)染Sf9或Sf21 細(xì)胞(美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心)。Sf9細(xì)胞中小^f莫蛋白質(zhì)表達(dá)的測(cè)定從轉(zhuǎn)染的細(xì)胞培養(yǎng)物中收集含 病毒的培養(yǎng)基并用于感染以增加其滴度。兩輪感染之后獲得的含病毒的培 養(yǎng)基用于大規(guī)模的蛋白質(zhì)表達(dá)。為大規(guī)模的蛋白質(zhì)表達(dá)，用5xl(f個(gè)細(xì)胞/ 平板接種100cm2的圓形組織培養(yǎng)板并用1 mL含病毒的培養(yǎng)基(大約5MOI )感染。3天后從平板上刮下細(xì)胞并500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。將來(lái)自10-20 個(gè)100cm2平板的細(xì)胞沉淀重懸于50 mL水冷的裂解緩沖液(25mM Tris國(guó)HCI， pH7,5， 2mM EDTA， 1% NP畫(huà)40， 1 mM DTT， 1 mM PMSF )中。 冰上攪拌細(xì)胞15分鐘然后5000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘。GST標(biāo)記的蛋白質(zhì)的純化將經(jīng)離心的細(xì)胞裂解物上樣到2 mL谷胱 甘肽-瓊脂糖柱(Pharmacia)上并用10mL 25 mM Tris-HCI， pH 7.5， 2 mM EDTA， 1 mM DTT， 200 mM NaCl洗滌3次。然后通過(guò)25mM Tris-HCI， pH7.5, lOmM還原型谷胱甘肽，100mMNaCl， lmMDTT， 10%甘油洗 脫GST標(biāo)記的蛋白質(zhì)10次(每次1 mL)并存于-70X:。酶活性的測(cè)量在30^1終體積中進(jìn)行純化GST-c-Kit的酪氨酸蛋白激 酶測(cè)定，其中所述的30^1終體積中含200-1800ng酶蛋白質(zhì)(取決于比活 性)，20 mM Tris-HCl， pH 7.6， 3 mM MnCl2， 3 mM MgCl2， 1 mM DTT， IOHM Na3V04， 5 ng/mL聚(Glu， Tyr) 4: 1， 1 % DMSO， 1.0 nM ATP和 0.1nCi[ 3PATP。在存在或不存在抑制劑條件下通過(guò)測(cè)量[,PATP的33P 至聚(Glu， Tyr)4: 1底物的摻入來(lái)測(cè)定活性。在如下所述的條件下在96孔 板中室溫20分鐘進(jìn)行測(cè)定(30nL)并通過(guò)加入20nl的l25 mM EDTA終止。 隨后將40^L反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到預(yù)先用甲醇浸泡5分鐘的 Immobilon-PVDF膜上(Millipore， Bedford, MA，美國(guó))，用水漂洗，然后用 0.5% H3P04浸泡5分鐘并且將其置于斷開(kāi)真空源的多頭真空抽吸裝置上。 點(diǎn)上所有的樣品后，連接真空并用200nL0.5。/。H3PO4漂洗每一個(gè)孔。移出 膜并在搖床上用1.0% H3P04洗滌4次，用乙醇洗滌一次。在環(huán)境溫度下 干燥并置于Packard TopCoimt 96孑L架上，加入10 pL/孔的Microscint TM(Packard)后，對(duì)膜進(jìn)行計(jì)數(shù)。通過(guò)一式兩份的每一種化合物的四個(gè)濃 度(通常為0.01、 0.1、 1和10nM)的抑制百分比的線(xiàn)性回歸分析計(jì)算ICso 值。 一個(gè)蛋白激酶活性單位定義為37。C下每分鐘1納摩爾33PATP從[Y"P
ATP轉(zhuǎn)移到每毫克底物蛋白質(zhì)。本發(fā)明式IA化合物的ICs。值優(yōu)選為 50nM-500nM?？笶DhB4活性的試驗(yàn)式IA的化合物作為肝配蛋白B4受體(EphB4)激酶抑制劑的功效證明 如下Bac-to-BacTM (Invitrogen Life Technologies,巴塞爾，瑞士) GST-融合 表達(dá)載體的生成借助PCR從來(lái)自人胎盤(pán)或腦的cDNA文庫(kù)擴(kuò)增EphB 類(lèi)的完整胞質(zhì)編碼區(qū)。產(chǎn)生重組桿狀病毒，它們表達(dá)人EphB4受體 (SwissProt數(shù)據(jù)庫(kù)，登記號(hào)P54760)的第566 - 987位氨基酸區(qū)域。將GST 序列克隆入pFastBacl⑧栽體(Invitrogen Life Technologies,巴塞爾，瑞士) 并進(jìn)行PCR擴(kuò)增。將可讀框3'端連有GST序列的編碼EphB4受體結(jié)構(gòu) 域的cDNA分別克隆到這種經(jīng)修飾的FastBacl載體，生成pBac-to-BacTM 供體載體。接種轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的單一菌落，得到過(guò)夜培養(yǎng)物，用于小,的質(zhì) 粒制備。質(zhì)粒DNA的限制酶分析揭示了若干菌落含有預(yù)期大小的插入片 段。借助自動(dòng)測(cè)序，在兩條鏈上都證實(shí)有插入片段和約50bp的側(cè)翼栽體 序列。病毒的產(chǎn)生除非另行說(shuō)明，按照由GIBCO提供的方案制備用于各 激酶的病毒。簡(jiǎn)言之，將含有激酶結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)移載體轉(zhuǎn)染DH10Bac細(xì)胞 系(GIBCO)，涂布選擇性瓊脂平板。融合序列未插入病毒基因組(由細(xì)菌攜 帶)的菌落是藍(lán)色的。挑取單一的白色菌落，借助標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒純化程序從細(xì)菌 中分離病毒DNA(桿狀病毒穿梭載體)。然后按照該方案，使用Cellfectin 試劑，用有病毒DNA的25 112培養(yǎng)瓶中轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞或Sf21細(xì)胞。GST標(biāo)記的激酶的純化將經(jīng)離心的細(xì)胞裂解物上樣到2 mL谷胱甘 肽-瓊脂糖柱(Pharmacia)上并用10mL 25 mM Tris-HCI， pH 7.5， 2 mM EDTA， 1 mM DTT， 200 mM NaCl洗滌3次。然后通過(guò)25mM Tris-HCI， pH7.5， lOmM還原型谷胱甘肽，100mMNaCl， lmMDTT， 10%甘油洗 脫GST標(biāo)記的蛋白質(zhì)10次(每次1 mL)并存于-70。C。蛋白激酶測(cè)定通過(guò)測(cè)定"P從[y"P]ATP向谷氨酸與酪氨酸的聚合物 (poly(Glu，Tyr))底物的摻入，在有或沒(méi)有抑制劑的存在下測(cè)定蛋白激酶的 活性。環(huán)境溫度下在最終體積30pL中用純化GST-EphB (30ng)進(jìn)行激酶測(cè)定達(dá)15-30min，所述最終體積30^L含有20mM Tris,HCl， pH 7.5， 10mM MgCl2， 3-50mM MnCl2， O.OlmM Na3V04， 1% DMSO， ImM DTT, 3pg/mL聚(Glu，Tyr) 4:1 (Sigma; St. Louis, Mo"美國(guó))和2.0-3.0|iiM ATP (H33PI-ATP0.1nCi)。加入20nL125mMEDTA終止測(cè)定。隨后將40nL反 應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到預(yù)先用甲醇浸泡5分鐘的Immobilon-PVDF膜上(Millipore， Bedford, MA,美國(guó))，用水漂洗，然后用0.5% 11^04浸泡5分鐘并且將其 置于斷開(kāi)真空源的多頭真空抽吸裝置上。點(diǎn)上所有的樣品后，連接真空并 用200fiL0.5。/oH3PO4漂洗每一個(gè)孔。移出膜并在搖床上用1.0。/oH:jP04洗 滌4次，用乙醇洗滌一次。室溫干燥后對(duì)膜計(jì)數(shù)并置于Packard Top Count 96孔支架中，加入10 jiL/孔的Microscint TM (Packard)。通過(guò)一式兩份的 每一種化合物的四個(gè)濃度(通常為0.01、 0.1、 l和10jiM)的抑制百分比 的線(xiàn)性回歸分析計(jì)算ICs。值。 一個(gè)蛋白激酶活性單位定義為37'C下每分鐘 1納摩爾33P ATP從[y"PATP轉(zhuǎn)移到每毫克底物蛋白質(zhì)。本發(fā)明式IA化 合物的ICs。值優(yōu)選為50nM-500nM。 抗EGF-R活性的試驗(yàn)可以使用已知方法證明EGF-R酪氨酸激酶活性的抑制，例如使用 EGF-受體的重組細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域EGF-RICD;參見(jiàn)，例如E.McGlynn等 人，Europ. J. Biochem. 207， 265-275(1992)。與沒(méi)有抑制劑的對(duì)照相比，式 IA化合物抑制酶活性達(dá)到50%(1(:5())的濃度為例如0.05-500pM。除了抑制EGF-R酪氨酸激酶活性外，式IA化合物還抑制該受體家族 的其他成員，如ErbB-2。抑制活性(ICso)約為0.01-5(%iM?？梢詼y(cè)定ErbB-2 酪氨酸激酶(/f^ -2)的抑制，例如類(lèi)似用于EGF-R蛋白質(zhì)酪氨酸激酶的方 法[參見(jiàn)C. House等人，Europ. J. Biochem. 140， 363-367(1984)。ErbB-2 激酶可以通過(guò)本身已知的方法^皮分離并測(cè)定其活性，例如按照T. Akiyama 等人的方法Science 232， 1644(1986)?？筕EGF-R2(KDR)活性的試驗(yàn)VEGF-誘導(dǎo)的受體自身磷酸化的抑制可以采用另一細(xì)胞中的體外試驗(yàn)證實(shí)，例如將轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞(其永久性表iiA VEGF-R2受體(KDR)) 接種于6-孔細(xì)胞培養(yǎng)板中的完全培養(yǎng)基(含有10。/。胎牛血清-FCS)中，于 37。C在5% C02中培養(yǎng)直到它們顯示約80%匯合。然后將待測(cè)化合物在培 養(yǎng)基(不含F(xiàn)CS，含有0.1。/。牛血清白蛋白)中稀釋并加入細(xì)胞中。(對(duì)照含 有培養(yǎng)基但不含受試化合物)。在37'C下培養(yǎng)2小時(shí)后，加入重組VEGF， 使VEGF的終濃度為20 ng/mL。再于37。C溫育5分鐘后，將細(xì)胞用冰冷 的PBS(磷酸鹽緩沖液)洗滌兩次，立即在每孔IOO !xL的裂解緩沖液中裂解。 然后將裂解物離心除去細(xì)胞核，上清液中蛋白質(zhì)的濃度采用商業(yè)化的蛋白 質(zhì)分析法(BIORAD)進(jìn)行測(cè)定。然后，裂解物可以立即使用，或者如果需 要的話(huà)，存放于-2(TC。進(jìn)行夾心ELISA以測(cè)定VEGF-R2的磷酸化作用將VEGF-R2的單 克隆抗體(例如Mab 1495.12.14，由H. Towbin， Novartis制備，或類(lèi)似的 單克隆抗體)固定在黑色的ELISA板(OptiPlateTM HTRF-96，得自Packard) 上。然后洗滌平板，剩余的游離蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)在含有Tween20⑧(聚氧乙 烯(20)脫水山梨糖醇單月桂酸酯，ICI/Uniquema)(PBST)的磷酸鹽緩沖液中 用3% TopBlock (Juro，目錄號(hào)TB232010)進(jìn)行飽和。然后將細(xì)胞裂解物 (每孔20嗎蛋白質(zhì))和與堿性磷酸酶偶聯(lián)的抗磷酸酪氨酸抗體(PY20:AP, 得自Zymed)—起在這些板中于4。C溫育過(guò)夜。將平板再次洗滌后，采用發(fā) 光AP底物(CDP-Star，即開(kāi)即用型，含有Emerald II， Applied Biosystems) 證明抗磷酸酪氨酸抗體與捕獲的磷酸化受體的結(jié)合。在Packard Top Count Microplate閃爍計(jì)數(shù)器中測(cè)定發(fā)光。陽(yáng)性對(duì)照(采用VEGF刺激)的信號(hào)和 陰性對(duì)照(沒(méi)有采用VEGF刺激)的信號(hào)的差異對(duì)應(yīng)于VEGF-誘導(dǎo)的 VEGF-R2磷酸化(=100%)。受試物質(zhì)的活性以VEGF-誘導(dǎo)的VEGF-R2 磷酸化的抑制百分率進(jìn)行計(jì)算，其中誘導(dǎo)產(chǎn)生最大抑制的一半的物質(zhì)濃度 定義為ICs。(達(dá)到50。/。抑制的抑制劑量)。可以發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的式IA化合物優(yōu) 選的IQ。值的范圍為20pM至500|liM之間?？怪亟M蛋白激酶Ret(Ret-Men2A)、 Tie-2(Tek)和FGFR3-K650E活性 的試驗(yàn)重組蛋白激酶的克隆和表達(dá)(Ret);采用桿狀病毒供體栽體 pFB-GSTX3產(chǎn)生重組桿狀病毒，其表iiA RET-Men2A的胞質(zhì)激酶結(jié)構(gòu) 域的第658-1072位氨基酸區(qū)域，該激酶結(jié)構(gòu)域?qū)?yīng)Ret的野生型激酶結(jié)構(gòu) 域。使用獲自 Dr. James Fagin， College of Medicine, University of Cincinnati(Novartis 7>司)的質(zhì)粒pBABEpuro RET曙Men2A經(jīng)PCR擴(kuò)增 Ret胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域的編碼序列。使所擴(kuò)增的DNA片段和pFB-GSTX3載體適 于通過(guò)Sail和Kpnl消化的連接。這些DNA片段的連接產(chǎn)生桿狀病毒供 體質(zhì)粒pFB-GX3-Ret(-Men2A)。(Tie曙2/Tek): 4吏用桿狀病毒供體載體pFbacGOl產(chǎn)生表i^A Tek胞質(zhì) 激酶結(jié)構(gòu)域第773-1124位氨基酸的氨基酸區(qū)域、N-末端融合了 GST的重 組桿狀病毒(由Marm6博士根據(jù)研究協(xié)作提供，Institute of Molecular Medicine, Frdburg，德國(guó))。將Tek通過(guò)EcoRI切割并與被EcoRI消化的 pFbacG01(FBG-Tie2/Tek)連接，重新克隆到pFbacGOl轉(zhuǎn)移載體中。(FGFR-3-K650E):使用桿狀病毒供體載體pFastBacGST2產(chǎn)生表iiA FGFR-3胞質(zhì)激酶結(jié)構(gòu)域第411-806位氨基酸的氨基酸區(qū)域、N-端融合了 GST的重組桿狀病毒(由Jim Griffin博士根據(jù)研究協(xié)作提供，Dana Farber Cancer Institute, Boston,美國(guó))。通過(guò)PCR擴(kuò)增編碼第411-806位氨基酸 的DNA，插入pFastBac-GT2載體，得到pFB-GT2-FGFR3-wt。隨后通過(guò) 使用Stratagene XL-Site定點(diǎn)突變?cè)噭┖?，用該質(zhì)粒產(chǎn)生在K650有突變， 編碼FGFR3(411-806)的載體，即pFB-GT2-FGFR3-K650E。病毒的生產(chǎn)、 sf9細(xì)胞中蛋白質(zhì)的表達(dá)和GST融合蛋白的純化按照下述部分進(jìn)行。病毒的制備將含有激酶結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)移載體轉(zhuǎn)染DH10Bac細(xì)胞系 (GIBCO),并將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞涂布選擇性的瓊脂平板。病毒基因組(由細(xì)菌攜 帶)中未插入融合序列的菌落為藍(lán)色。挑取白色的單菌落，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)粒 純化方法從細(xì)菌中分離病毒DNA(桿狀病毒穿梭栽體)。然后在25cm2培養(yǎng) 瓶中，使用Cellfectin試劑以病毒DNA轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞或SOI細(xì)胞。Sf9細(xì)胞中小規(guī)^f莫蛋白質(zhì)表達(dá)的測(cè)定從轉(zhuǎn)染的細(xì)胞培養(yǎng)物中收集含 病毒的培養(yǎng)基并用于感染以增加其滴度。兩輪感染之后獲得的含病毒的培養(yǎng)基用于大M的蛋白質(zhì)表達(dá)。為大,的蛋白質(zhì)表達(dá)，用5xl(f個(gè)細(xì)胞/ 平板接種100cm2的圓形組織培養(yǎng)板并用1 mL含病毒的培養(yǎng)基(大約5 MOI )感染。3天后從平板上刮下細(xì)胞并500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。將來(lái)自10-20 個(gè)100cm2平板的細(xì)胞沉淀重懸于50 mL冰冷的裂解緩沖液(25mM Tris-HCI， pH7.5， 2mM EDTA， 1% NP-40， 1 mM DTT， 1 mM PMSF )中。 冰上攪拌細(xì)胞15分鐘然后5000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘。GST標(biāo)記的蛋白質(zhì)的純化將經(jīng)離心的細(xì)胞裂解物上樣到2 mL谷胱 甘肽-瓊脂糖柱(Pharmacia)上并用10mL 25 mM Tris國(guó)HCI， pH 7.5， 2 mM EDTA， 1 mM DTT， 200 mM NaCl洗滌3次。然后通過(guò)25mM Tris-HCI， pH7.5, lOmM還原型谷胱甘肽，100mM NaCl， lmMDTT， 10%甘油洗 脫GST標(biāo)記的蛋白質(zhì)10次(每次1 mL)并存于-70X:。酶活性的測(cè)量在30nl終體積中進(jìn)行用純化的GST-Ret、 GST-Tek或 GST-FGFR-3-K650E的酪氨酸蛋白激酶測(cè)定，其中所述的30jU終體積中 含有15ng GST-Ret的Ret、 20mM Tris國(guó)HCl pH 7.5、 lmM MnCl2、 10 mM MgCl2、 lmM DTT、 3|Lig/mL聚(Glu，Tyr) 4:1、 1% DMSO和2.0 pM ATP(0.1pCi的Y-[33p-ATP)的終濃度。Tek包含150 ng GST-Tek、 20mM Tris-HCl pH 7.5、 3mM MnCl2、 3 mM MgCl2、 lmM DTT、 O.OlmM Na3V04、 250 ng/mLPEG20，000、 10 pg/mL聚(Glu，Tyr) 4: 1、 1% DMSO和4.0 ATP(0.1|uCi 的y-[33P]-ATP) 。
FGFR-3-K650E 包含 10 ng GST-FGFR-3-K650E、 20mM Tris畫(huà)HCl pH 7.5、 3mM MnCl2、 3 mM MgCl2、 lmM DTT、 O.OlmM PEG 20，000、 10 jtg/mL多聚(Glu，Tyr) 4: 1、 1% DMSO和4.0 ATP(0.1|nCi的Y-卩3p-ATP)。在存在或不存在抑制劑條件 下通過(guò)測(cè)量[Y"P]ATP的33P至聚(Glu， Tyr)4: 1底物的摻入來(lái)測(cè)定活性。 試驗(yàn)在環(huán)境溫度下按下述條件于96孔板中進(jìn)行30分鐘，通過(guò)加入50 的125mM EDTA終止試驗(yàn)。隨后將60^L反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到預(yù)先用甲醇浸 泡5分鐘的Immobilon-PVDF膜上(Millipore， Bedford, MA，美國(guó))，用水 漂洗，然后用0.5% H3P04浸泡5分鐘并且將其置于斷開(kāi)真空源的多頭真 空抽吸裝置上。點(diǎn)上所有的樣品后，連接真空并用200nL0.5。/oH3PO4漂洗每一個(gè)孔。移出膜并在搖床上用1.0%11^04洗滌4次，用乙醇洗滌一次。 在環(huán)境溫度下干燥并置于Packard TopCount 96孔架上，加入10 ^L/孔的 Microscint TM(Packard)后，對(duì)膜進(jìn)行計(jì)數(shù)。通過(guò)一式兩份的每一種化合 物的四個(gè)濃度(通常為0.01、 0.1、 l和10jiM)的抑制百分比的線(xiàn)性回歸 分析計(jì)算ICso值。一個(gè)蛋白激酶活性單位定義為37'C下每分鐘1納摩爾33P ATP從[ 4ATP轉(zhuǎn)移到每毫克底物蛋白質(zhì)。本發(fā)明式IA化合物的IC50 值優(yōu)選為50nM-500jiM。 FGFR3(酶試驗(yàn))在^f^積為lOfiL的含有0.25|ng/mL酶的激酶緩沖液(30mM Tris-HCI pH7.5、 15mM MgCl2、 4.5mM MnCl2、 15pM Na3V04和50|ig/mL BSA) 和底物(5jig/mL生物素-聚-EY(Glu，Tyr)(CIS-US，Inc.)和3nM ATP)的溶液 中，使用純化的FGFR3(Upstate)進(jìn)行激酶分析。制備兩種溶液首先將含 有在激酶緩沖液中的FGFR3酶的5pL的第一種溶液加入384-型 ProxiPlate⑧(Perkin-Elmer)板，隨后加入溶于DMSO的50nL的化合物， 然后，將含有在激酶緩沖液中的底物(聚-EY)和ATP的5^1的第二種溶液 加入每一孔中。反應(yīng)于室溫下溫育1小時(shí)，加入10pL的HTRF測(cè)試混合 物終止，所述HTRF測(cè)試混合物含有30mMTris-HClpH7.5、 0.5MKF、 50mMETDA、 0.2mg/mLBSA、 15|Hg/mL鏈霉抗生物素-XL665(CIS誦US， lnc.)和150ng/mL綴合穴合物的抗磷酸酪氨酸抗體(CIS-US， Inc.)。于室 溫下溫育1小時(shí)后，使鏈霉抗生物素-生物素相互作用，在Analyst GT(Molecular Devices Corp.)上讀取隨時(shí)間改變的熒光信號(hào)。根據(jù)每一化 合物在12個(gè)濃度下(從50|aM到0.28nM的1:3稀釋)的抑制百分率的線(xiàn)性 回歸分析計(jì)算ICso值。在該分析中，例如本發(fā)明化合物優(yōu)選的ICs。的范圍 是2nM至400pM之間，更加優(yōu)選的范圍是5 nM至100pM之間。FGFR3(細(xì)胞試驗(yàn))測(cè)試本發(fā)明化合物(=式IA化合物)抑制轉(zhuǎn)化的Ba/F3-TEL-FGFR3 細(xì)胞增殖(取決于FGFR3細(xì)胞激酶的活性)的能力。Ba/F3-TEL-FGFR3在 懸浮液中培養(yǎng)至多達(dá)800,000細(xì)胞/mL，用補(bǔ)充10%胎牛血清的RPMI1640作為培養(yǎng)基。將50pL培養(yǎng)基中的細(xì)胞以每孔5000個(gè)細(xì)胞的密度分別加入 384-孔板中。本發(fā)明化合物在二甲基亞砜(DMSO)中溶解和稀釋。用DMSO 制備12個(gè)1:3的系列稀釋液以產(chǎn)生范圍通常在lOmM到0.05|iM的濃度 梯度。將50nL的稀釋化合物加到細(xì)胞中，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。 將AlamarBlue (TREK Diagnostic Systems)(可用于監(jiān)測(cè)由增殖細(xì)胞產(chǎn)生 的還原性環(huán)境)加入細(xì)胞，終濃度達(dá)到10%。在37'C的細(xì)胞培養(yǎng)器中再培 養(yǎng)4小時(shí)后，在Analyst GT(Molecular Devices Corp.)上定量測(cè)定被還原的 AlamarBlue⑧的熒光信號(hào)(于S30nm激發(fā)，于580nm發(fā)射)。根據(jù)每個(gè)化合 物12個(gè)濃度的抑制百分率的線(xiàn)性回歸分析來(lái)計(jì)算IC知值?？梢园l(fā)現(xiàn)本發(fā) 明的式IA化合物優(yōu)選的IC5。的范圍是2nM至400jiM之間。Upstate KinaseProfileTM-放射-誇波濾膜(filter)結(jié)合測(cè)定法 對(duì)本發(fā)明化合物抑制一組激酶的各成員(部分的非限定性的激酶名單 包括Abl、 BCR畫(huà)Abl、 BMX、 FGFR3、 Lck、 JNK1、 JNK2、 CSK、 RAF、 MKK6和P38)的能力進(jìn)行評(píng)價(jià)。按照常規(guī)方法兩次測(cè)定終濃度為10pM 的化合物。需要注意的是激酶緩沖液成分和底物隨"Upstate KinaseProfilerTM"組中包含的激酶的不同而變化。在置于水上的eppendorf 管中混合激酶緩沖液(2.5nL， 10x,必要時(shí)可含有MnCl2)、活化的激酶 (0.001-0.01單位；2.5pL)、在激酶緩沖液中的特異性或聚(Glu4-Tyr)的肽 (5-500jiM或0.01mg/ml)，以及激酶緩沖液(50pM; 5|Lil)。加入Mg/ATP混 合物(10pL; 67.5(或33.75) mM MgCl2、 450(或225) |iM ATP和ljuCi/pl [Y-"P]-ATP(3000Ci/mmol))并在約30。C下溫育反應(yīng)物約10分鐘。將反應(yīng)混 合物(20pl)點(diǎn)在2cmx2cm P81(磷酸纖維素，用于帶正電的肽底物)或 Whatman No.l(用于聚(Glu4-Tyr)肽底物)方形紙上。用0.75%磷酸洗滌該 方形紙4次，每次5分鐘，并用丙酮洗滌一次，洗滌5分鐘。將該方形紙 轉(zhuǎn)移到閃爍管中，加入5ml閃爍混合液并用Beckman閃爍計(jì)數(shù)器定量摻 入肽底物中的"P(cpm)。計(jì)算每個(gè)反應(yīng)的抑制百分率。式IA化合物也可以抑制其他酪氨酸蛋白激酶，例如特別是c-Src激酶， 其在動(dòng)物、特別是哺乳動(dòng)物細(xì)胞(包括人類(lèi)細(xì)胞)的生長(zhǎng)調(diào)控和轉(zhuǎn)化中起到一定作用。適宜的試驗(yàn)描述于Andrejauskas-Buchdunger等人，Cancer Res. 52， 5353-8(1992)。使用該檢測(cè)體系，式IA化合物可以顯示出抑制c-Src 的IC5o值的范圍為例如0.05-500nM。另外，式IA化合物還可以用于抑制b-raf(V599E)。 B-Raf-V599E的 活性通過(guò)測(cè)量33P從[y"PATP向(His)-InB的摻入，在有或沒(méi)有抑制劑的 存在下進(jìn)行測(cè)定。將待測(cè)化合物溶于DMSO(10mm)并儲(chǔ)存于-2(TC。新鮮 制備在DMSO中的系列稀釋液，用純水進(jìn)一步稀釋以獲得在3% DMSO 中的3倍濃縮的測(cè)試溶液。試驗(yàn)的終體積(30 pl)包括10pL的待測(cè)溶液(1% DMSO)、 10|nl測(cè)試混合物(20 mM Tris畫(huà)HCl， pH 7.5， 3 mM MnCl2， 3 mMmgCl2， 1 iiM DTT， 3 pg/ml的(His)-lKB、 1% DMSO和3.5 ^VI ATP |y33p_ATp o.i pCi)以及l(fā)Opl酶稀釋液(600ng的GST-B-Raf-V599E)。在96-孔形式的MultiPROBE Iix、 MultiPROBE IILx或HamiltonSTAR自動(dòng)裝 置上進(jìn)行程序性的移取步驟，按照文獻(xiàn)所述進(jìn)行試驗(yàn)(參見(jiàn)C. Garcia-Echeverria等人，Cancer Cel.. & 231-9(2004))，通過(guò)加入20 pi 125 mMEDTA來(lái)終止。通過(guò)如下的濾膜結(jié)合方法進(jìn)行磷酸化的肽的捕獲將 40fiL反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到預(yù)先用甲醇浸泡5分鐘的Immobilon-PVDF膜上， 用水漂洗，然后用0.5% H3P04浸泡5分鐘并且將其置于斷開(kāi)真空源的多 頭真空抽吸裝置上。點(diǎn)上所有的樣品后，連接真空并用200nL0.5%H3PO4 漂洗每一個(gè)孔。移出膜并在搖床上用1.0% H3P04洗滌4次，用乙醇洗滌 一次。在環(huán)境溫度下干燥并置于Packard TopCount %孔架上，加入10 jnL/ 孔的MicroscintTM(Packard)后，對(duì)膜進(jìn)行計(jì)數(shù)。最后密封平板并在微孔 板閃爍計(jì)數(shù)器(TopCount NXT， TopCount NXT HTS)中進(jìn)行計(jì)數(shù)。在閃板 方法(flash plate method)的情況下，首先在聚苯乙烯基質(zhì)的塑料平板上進(jìn) 行激酶反應(yīng)，隨后于60分鐘后加入20^1的125mM EDTA終止。為了捕 獲(60分鐘，RT)，將生物素化的底物轉(zhuǎn)移至Nickel-包被的閃板上。將測(cè)試 平板用PBS洗滌三次，并在室溫下干燥。隨后，將平板密封，在微孔板閃 爍計(jì)數(shù)器(TopCount NXT， TopCount NXT HTS)中進(jìn)行計(jì)數(shù)。通過(guò)每個(gè)化 合物四種濃度(通常為0.01、 0.1、 1和l(HiM)下(一式兩份)的抑制百分率或按照從10^M開(kāi)始、隨后1: 3稀釋度的8個(gè)單一點(diǎn)的抑制百分率的線(xiàn) 性回歸分析來(lái)計(jì)算ICs。值。對(duì)于b-raf抑制，式IA化合物優(yōu)選顯示范圍從 0.05到500|iiM的ICs。值。FLT3受體激酶為了尋找靶向于FLT3的化合物，可以采用兩種不同類(lèi)型的試驗(yàn)Flt3激酶活性測(cè)定如下使用桿狀病毒供體載體pFbacG01(GIBCO) 產(chǎn)生重組桿狀病毒，其表達(dá)人Flt3的細(xì)胞質(zhì)激酶結(jié)構(gòu)域的第563-993位氨 基酸的氨基酸區(qū)域。從人cDNA文庫(kù)(Clontech)中通過(guò)PCR擴(kuò)增Flt3胞質(zhì) 結(jié)構(gòu)域的編碼序列。使所擴(kuò)增的DNA片斷和pFbacGOl栽體適于通過(guò) BamHl和HindIII消化的連接。這些DNA片斷的連接產(chǎn)生桿狀病毒M 質(zhì)粒Flt-3(1.1)。按照如下描述進(jìn)行病毒的制備、在Sf9細(xì)胞中表達(dá)蛋白質(zhì) 和純化GST-融合蛋白病毒的制備將含有Flt-3激酶結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)染載體(pFbacG01-Flt-3)轉(zhuǎn) 入DH10Bac細(xì)胞系(GIBCO)并將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞涂布于選擇性的瓊脂平板。 病毒基因組(由細(xì)菌攜帶)中未插入融合序列的菌落為藍(lán)色。湘t取單個(gè)白色 菌落并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)粒純化程序從細(xì)菌中分離病毒DNA(桿狀病毒穿梭載 體)。然后在25cm2搖瓶中使用Cellfectin試劑將病毒DNA轉(zhuǎn)染Sf9或Sf21 細(xì)胞(美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心)。Sf9細(xì)胞中小^f莫蛋白質(zhì)表達(dá)的測(cè)定從轉(zhuǎn)染的細(xì)胞培養(yǎng)物中收集含 病毒的培養(yǎng)基并用于感染以增加其滴度。兩輪感染之后獲得的含病毒的培養(yǎng)基用于大^!^莫的蛋白質(zhì)表達(dá)。為大M^莫的蛋白質(zhì)表達(dá)，用5xl(T個(gè)細(xì)胞/ 平板接種100cm2的圓形組織培養(yǎng)板并用1 mL含病毒的培養(yǎng)基(大約5 MOI )感染。3天后從平板上刮下細(xì)胞并500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。將來(lái)自10-20 個(gè)100cm2平板的細(xì)胞沉淀重懸于50 mL冰冷的裂解緩沖液(25mM Tris-HCI， pH7.5， 2mM EDTA， 1% NP-40,1 mM DTT， 1 mM PMSF )中。 水上攪拌細(xì)胞15分鐘然后5000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘。GST標(biāo)記的蛋白質(zhì)的純化將經(jīng)離心的細(xì)胞裂解物上樣到2 mL谷胱甘肽-瓊脂糖柱(Pharmacia)上并用10mL 25 mM Tris-HCI， pH 7.5， 2 mM EDTA， 1 mM DTT， 200 mM NaCl洗滌3次。然后通過(guò)25mM Tris-HCI， pH7.5， 10mM還原型谷胱甘肽，lOOmMNaCl， lmMDTT， 10%甘油洗 脫GST標(biāo)記的蛋白質(zhì)10次(每次1 mL)并存于-70"C 。酶活性的測(cè)量在30^1終體積中進(jìn)行純化GST-Flt2的酪氨酸蛋白激 酶測(cè)定，其中所述的30pl終體積中含200-1800ng酶蛋白質(zhì)(取決于比活 性)，20 mM Tris誦HCl， pH 7.6， 3 mM MnCl2， 3 mM MgCl2， 1 mM DTT， 10nM Na3V04， 3 jig/mL聚(Glu， Tyr) 4: 1， 1 % DMSO， 6.0 jiM ATP和 0.1nCi[ 3Pl ATP。在存在或不存在抑制劑條件下通過(guò)測(cè)量[ SpATP的33P 至聚(Glu， Tyr)4: 1底物的摻入來(lái)測(cè)定活性。在如下所述的條件下在96孔 板中室溫20分鐘進(jìn)行測(cè)定(30nL)并通過(guò)加入20jd的125 mM EDTA終止。 隨后將40jiL反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到預(yù)先用曱醇浸泡5分鐘的 Immobilon-PVDF膜上(Millipore， Bedford, MA，美國(guó))，用水漂洗，然后用 0.5% H3P04浸泡5分鐘并且將其置于斷開(kāi)真空源的多頭真空抽吸裝置上。 點(diǎn)上所有的樣品后，連接真空并用200nL0.5。/。H3PO4漂洗每一個(gè)孔。移出 膜并在搖床上用1.0% H3P04洗滌4次，用乙醇洗滌一次。在環(huán)境溫度下 干燥并置于Packard TopCount 96孑L架上，加入10 pL/孔的Microscint TM(Packard)后，對(duì)膜進(jìn)行計(jì)數(shù)。通過(guò)一式兩份的每一種化合物的四個(gè)濃 度(通常為0.01、 0.1、 1和10 nM)的抑制百分比的線(xiàn)性回歸分析計(jì)算ICso 值。 一個(gè)蛋白激酶活性單位定義為37。C下每分鐘1納摩爾33PATP從Y"P
ATP轉(zhuǎn)移到每毫克底物蛋白質(zhì)。式IA化合物在此優(yōu)選地顯示ICso值范圍 從0.05到500 ^M之間。替代地或另外地，基于細(xì)胞的試驗(yàn)可用于鑒定突變的FLT3酪氨酸激 酶受體的抑制劑。常規(guī)方法包括對(duì)依賴(lài)突變的FLT3進(jìn)行增殖的細(xì)胞系與 不依賴(lài)突變的FLT3進(jìn)行增殖的細(xì)胞系，將可能的抑制劑的作用進(jìn)行比較。 使用表達(dá)兩種不同類(lèi)型突變的、激活的FLT3的細(xì)胞系在受體近膜結(jié)構(gòu)域內(nèi)表達(dá)具有"內(nèi)部串聯(lián)重復(fù)"(ITD)的FLT3突變體 的Ba/F3-FLT3-ITD細(xì)胞。表達(dá)含有第835位的天冬酰胺轉(zhuǎn)變成酪氨酸突變的FLT3受體的 Ba/F3畫(huà)FLT3畫(huà)D835Y細(xì)胞。IC5o值在50nM至500|iM的式IA化合物優(yōu)選顯示出抑制 Ba/F3-FLT3-ITD和Ba/F3-D835Y細(xì)胞的增殖，另一方面，它們?cè)诟哌_(dá) 500nM的濃度下通常不抑制未轉(zhuǎn)化的Ba/F3細(xì)胞的生長(zhǎng)，且式IA化合物 對(duì)Ba/F3-FLT3-ITD細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用可通過(guò)加入高濃度的IL-3以提供 替代的生存信號(hào)而逆轉(zhuǎn)。在抑制FLT3-依賴(lài)性細(xì)胞系增殖所需的濃度下， 式IA的化合物顯示出對(duì)于一些不具有突變的FLT3受體(過(guò)度活化的激酶) 的人類(lèi)白血病與淋巴瘤細(xì)胞系沒(méi)有細(xì)胞毒性，提示該藥物作為細(xì)胞毒的藥 物具有意料不到的高度特異性。總體而言，這些結(jié)果說(shuō)明式IA化合物可 以成為突變的FLT3受體酪氨酸激酶活性的有效抑制劑，是用于治療具有 突變的FLT3受體的患者的有希望的候選物。具體而言，式IA化合物可以 在0.05到500|aM的濃度范圍內(nèi)顯示出抑制FLT3受體酪氨酸激酶的活性。根據(jù)上文所述的抑制性研究，本發(fā)明的式IA(或其例舉的式)化合物表 現(xiàn)出特別是對(duì)依賴(lài)(尤其是對(duì)蛋白激酶的調(diào)節(jié)有響應(yīng)、更特別是抑制)蛋白 激酶的疾病的治療功效，所述疾病尤其是增生性疾病，如上文在"發(fā)明背 景"中所述的疾病。還有一些試驗(yàn)證明式I化合物的體內(nèi)抗腫瘤活性。例如，為了檢測(cè)式 IA的化合物是否抑制膀胱癌的生長(zhǎng)，可以采用以下檢測(cè)系統(tǒng)使用RT-112人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞系作為檢測(cè)本發(fā)明所述化合物體 內(nèi)活性的體內(nèi)模型。該細(xì)胞系源自在1973年具有未治療的原發(fā)性膀胱癌的 女性患者(年齡未知)。該細(xì)胞系表達(dá)高水平的FGF-R3。將5 x106細(xì)胞與基質(zhì)膠同時(shí)接種在雌性棵鼠的脅部(11=8)，并使腫瘤發(fā) 育。每2或3天使用卡尺手工測(cè)量腫瘤尺寸。將動(dòng)物重量作為動(dòng)物健康的 量度進(jìn)行監(jiān)測(cè)。當(dāng)肺瘤體積達(dá)到約100mmS(約7天)時(shí)，開(kāi)始用抑制劑治療。將小鼠根 據(jù)腫瘤體積隨機(jī)分配，用介質(zhì)(NMP/PEG300)或待測(cè)化合物(i^8)處理14 天。給藥途徑為口腔管飼，時(shí)間表為每天l次/每周7次。將抗腫瘤活性計(jì)算為T(mén)/C %((處理組動(dòng)物腫瘤體積的平均改變/對(duì)照動(dòng)物腫瘤體積的平均改 變)x 100)。用卡尺手工測(cè)量異種移植物腫瘤的尺寸，并采用式(W x H x L) x 7t/6 估計(jì)腫瘤的體積，其中寬度(W)、高度(H)和長(zhǎng)度(L)是三個(gè)最大直徑。使用SigmaStat 2.03進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)。如果一項(xiàng)試驗(yàn)中包括了超過(guò)兩 組動(dòng)物，則在評(píng)價(jià)當(dāng)天采用單因素方差分析檢驗(yàn)，進(jìn)行腫瘤絕對(duì)體積和體 重的統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)。當(dāng)對(duì)照組與所有其他處理組比較時(shí)，使用Dunnett事后 檢驗(yàn)法(Dunnett，s ad hoc post test)。當(dāng)所有組相互之間進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí)，使用 Tukey和SNK(Student-Newman曙Keuls)事后檢驗(yàn)法。腫瘤樣品被切碎并迅速在液氮中冷凍。在保持冷凍的同時(shí)將腫瘤粉末 化。將一小份凍干粉在包含蛋白酶和磷酸酶抑制劑的1。/。Triton提取緩沖 液中裂解。通過(guò)離心^f吏裂解液澄清，測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。使用蛋白質(zhì)裂解物 測(cè)定腫瘤中的FGFR受體和通路的抑制程度。本發(fā)明所述的式IA化合物可以在等于和大于10mg/kg的劑量上抑制 腫瘤生長(zhǎng)和誘導(dǎo)消退。作為被公開(kāi)的式IA化合物抑制的激酶例子可以是c-Abl和Bcr-Abl， 特別是Bcr-Abl。另一種被抑制的激酶是受體酪氨酸激酶VEGF-R，特別 是VEGF受體KDR(VEGF-R2)。本發(fā)明的化合物還抑制Bcr-Abl激酶的 突變形式。所公開(kāi)的化合物適宜用于抑制一種或多種這類(lèi)蛋白質(zhì)酪氨酸激 酶和/或其他蛋白質(zhì)酪氨酸激酶和/或非受體酪氨酸激酶Raf，和/或用于抑 制這些酶的突變體?？紤]到這些活性，所述化合物可以用于治療涉及這些 類(lèi)型的激酶、特別是所述激酶的異?；蜻^(guò)度的活性的疾病(特別是所提及 的那些疾病)。調(diào)節(jié)這類(lèi)蛋白激酶活性的能力優(yōu)選涉及抑制這類(lèi)蛋白激酶的活性。 例如，作為VEGF-受體酪氨酸激酶活性抑制劑，本發(fā)明的化合物能基 本抑制血管的生長(zhǎng)，并因此對(duì)于大量與血管發(fā)生失控相關(guān)的疾病有效，所 述疾病特別是由目艮部新生血管生成造成的疾病，特別是視網(wǎng)膜病變，例如 糖尿病視網(wǎng)膜病或年齡相關(guān)的黃斑變性、銀屑病、成血管細(xì)胞瘤，例如血48管瘤、腎小球膜細(xì)胞增生性病癥，如慢性或急性腎病，例如糖尿病腎病， 惡性腎硬化、血栓性fc&L管病綜合征或移植排斥，或特別是炎性腎病如腎 小球腎炎，特別是腎小球膜增生性腎小球腎炎，溶血性尿毒癥綜合征、糖 尿病腎病、高血壓腎硬化、粥樣斑、動(dòng)脈再狹窄、自身免疫性疾病、糖尿 病、子宮內(nèi)膜異位癥、慢性哮喘以及特別是腫瘤疾病(實(shí)體瘤，還有白血病和其他"液體腫瘤"，特別是那些表達(dá)c-kit、 KDR、 Flt-l或Flt-3的肺 瘤)，例如特別是乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌(特別是小細(xì)胞肺癌)、前列腺癌 或卡波西肉瘤。式IA(或其例舉的式)的化合物(或其N(xiāo)-氧化物)抑制腫瘤的 生長(zhǎng)并特別適于預(yù)防腫瘤的轉(zhuǎn)移性傳播和孩i轉(zhuǎn)移灶的生長(zhǎng)。本發(fā)明化合物的一類(lèi)激酶靶點(diǎn)是Bcr-Abl的突變體。特別是突變體 Glu255—亮氨酸、Glu255—纈氨酸或Thr315—異亮氨酸，更特別的是 Thr315—異亮氨酸突變體。其他Bcr-Abl突變體包括Met244—Val、 Phe317—Leu、 Leu248—Val、 Met343—Thr、 Gly250—Ala、 Met351—Thr、 Gly250—Glu、 Glu355—Gly、 Gln252—His、 Phe358—Ala、 Gln252—Arg、 Phe359—Val、 Tyr253—His、 Val379—Ile、 Tyr253—Phe、 Phe382—Leu、 Glu255—Lys、 Leu387—Met、 Glu255—Val、 His396—Pro、 Phe311—Ile、 His396—Arg、 Phe311~>Leu、 Ser417—Tyr、 Thr315—Ile、 Glu459—Lys和Phe486—Ser。式IA化合物特別用于通過(guò)抑制Flt-3的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域來(lái)治療 AML。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是治療急性骨髓性白血病(AML)的方 法，其包括施用治療有效量的所述化合物。式IA化合物(或其特別是可藥用鹽)，由于它們抑制FGFR的活性，尤 其可用于治療(尤其是異常的)生長(zhǎng)、組織修復(fù)、重構(gòu)；細(xì)胞遷移、細(xì)胞 分化、骨骼肌和/或四肢發(fā)育、傷口愈合、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、血細(xì)胞生成和/或血 管發(fā)生以及腫瘤發(fā)生，或者腫瘤或癌癥，包括轉(zhuǎn)移灶和轉(zhuǎn)移灶的形成，特 別是用于治療人類(lèi)腫瘤，如非小細(xì)胞肺癌、鱗狀細(xì)胞癌(頭和頸部)、乳腺 癌、胃癌，例如胰腺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌和/或前列腺癌以及星形細(xì)胞瘤、 神經(jīng)膠質(zhì)瘤、膀胱癌、上皮癌，例如膀胱或子宮內(nèi)膜上皮癌，多發(fā)性骨髓瘤、鱗狀細(xì)胞癌(頭和頸部)，例如口腔鱗狀細(xì)胞癌，成視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，肉瘤，例如滑膜癌和/或皮膚腫瘤；8pl1骨髄增生綜合征-嗜酸性骨髓增生 綜合征(EMS);骨骼畸形、人類(lèi)侏儒癥，包括軟骨發(fā)育不全、顱縫早閉綜 合征和侏儒綜合征、骨骼發(fā)育不良，包括軟骨發(fā)育不良、伴有發(fā)育延遲的 重度軟骨發(fā)育不全、黑棘皮癥、致死性骨發(fā)育不全、顱縫早閉表型，例如 Muenke冠狀顱縫早閉或伴有黑棘皮癥的克魯宗綜合征，變弗綜合征、軟 骨細(xì)胞成熟受限、骨生長(zhǎng)抑制；炎性或自身免疫疾病，例如類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 (RA)、 II型膠原關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥(MS)、系統(tǒng)性紅斑狼疳(SLE)、銀 屑病、幼年型糖尿病、舍格倫病、曱狀腺疾病、肉瘤病、自身免疫性眼葡 萄膜炎、炎性腸病(克羅恩病或和潰癡性結(jié)腸炎)、乳糜瀉和/或重癥肌無(wú)力； 常染色體顯性的血磷酸鹽過(guò)少的佝僂病(ADHR)、 X-染色體連鎖的血磷酸 鹽過(guò)少的佝僂病(XLH)、腫瘤誘導(dǎo)的骨軟化癥(TIO)、骨纖維性結(jié)構(gòu)不良 (FH);慢性梗阻性肺疾病(COPD);肥胖癥、糖尿病和/或與其相關(guān)的疾病， 例如代謝綜合征、心血管疾病、高血壓、異常的膽固醇和甘油三酯水平、 皮膚病(例如感染)、靜脈曲張、黑棘皮癥、濕疹、運(yùn)動(dòng)不耐受、2型糖尿病、 胰島素抗性、高膽固醇血癥、膽石病、矯形外科損傷、血栓栓塞性疾病、 冠脈或血管狹窄(例如動(dòng)脈粥樣硬化)、日間嗜睡、睡眠呼吸暫停、晚期腎 病、膽嚢疾病、痛風(fēng)、心臟病、免疫應(yīng)答受損、呼吸功能受損、創(chuàng)傷后感 染、不育癥、肝病、下腰痛、產(chǎn)科和婦科并發(fā)癥、胰腺炎、中風(fēng)、手術(shù)并 發(fā)癥、壓迫性尿失禁和/或胃腸疾病。在哺乳動(dòng)物軟骨中促進(jìn)局部新生軟骨生成的方法包括向軟骨局部施用 某些激酶抑制劑，這種方法描述于WO2006/038U2。令人驚奇地是，發(fā)現(xiàn) 本文所定義的式IA化合物可以以同樣方式使用。因此，本發(fā)明還涉及促 進(jìn)哺乳動(dòng)物軟骨中局部新生軟骨生成的方法，其包括以有效促進(jìn)局部新生 軟骨生成的量向軟骨局部施用如上文所定義的式IA的脲衍生物或其可藥 用鹽、水合物、溶劑合物、酯、N-氧化物保護(hù)的衍生物、單一異構(gòu)體和異 構(gòu)體的混合物或其前藥。式IA的化合物還用于治療在新生軟骨生成背景 下的骨關(guān)節(jié)炎。術(shù)語(yǔ)"治療"也包括預(yù)防，其包括例如在發(fā)現(xiàn)有突變或改變的病人中 預(yù)防性的治療，所述突變或改變說(shuō)明它們易于或可能易于發(fā)展為疾病，或 者優(yōu)選對(duì)所述疾病、尤其是上述的一種或多種疾病治療性的(包括但不限于 緩和性的、治愈性的、減輕癥狀的、減緩癥狀的、抑制疾病或癥狀的、延遲i^艮的、調(diào)控激酶或抑制激酶的)治療。優(yōu)選治療動(dòng)物。動(dòng)物優(yōu)選溫血?jiǎng)游?，更?yōu)選哺乳動(dòng)物。人(其通常也涵 蓋于通用術(shù)語(yǔ)"動(dòng)物"中)特別是指患者或(例如由于某些突變或其他特征) 易患上下文所定義的疾病風(fēng)險(xiǎn)的人。藥物制劑、方法和用途本發(fā)明還涉及包含式IA(或其例舉的式)的化合物或其N(xiāo)-氧化物作為 活性成分并且可以特別用于治療上述疾病的藥物組合物。本發(fā)明的可藥用化合物可以用于，例如制備包含作為有效成分的藥物 有效量的式IA(或其例舉的式)化合物或其可藥用鹽，與一種或多種無(wú)機(jī)或 有機(jī)、固體或液體的可藥用載體一起或混合的藥物組合物。本發(fā)明還涉及適于對(duì)溫血?jiǎng)游?，特別是人(或者源自溫血?jiǎng)游?，特別是 人的細(xì)胞或細(xì)胞系，例如淋巴細(xì)胞)進(jìn)行給藥，以用于治療(在本發(fā)明的廣 義的方面還包括預(yù)防)對(duì)抑制蛋白激酶活性有響應(yīng)的疾病的藥物組合物，特 別是上文提到的疾病之一優(yōu)選使用式IA(或其例舉的式)化合物，其包含所 述抑制有效量的新的式IA(或其例舉的式)化合物或其可藥用的鹽(其對(duì)所 述抑制有效)和至少一種可藥用的載體。特別優(yōu)選經(jīng)腸給藥例如鼻、口腔、直腸或特別是口服給藥，胃腸外給 藥，例如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下給藥，對(duì)溫血?jiǎng)游?特別是人)給藥的藥物組 合物。該組合物僅包含活性成分或者還優(yōu)選地包含可藥用的載體?；钚猿?分的劑量取決于所治療的疾病及對(duì)象的種類(lèi)、年齡、體重和個(gè)體情況、個(gè) 體的藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)和給藥方式。本發(fā)明尤其涉及包含式IA(或其例舉的式)化合物、互變異構(gòu)體、N-氧 化物或其可藥用鹽或7JC合物或溶劑合物以及至少一種可藥用載體的藥物組合物。本發(fā)明還涉^A類(lèi)或動(dòng)物體的預(yù)防或特別是治療方法中的藥物組合物 的用途、其制備方法(特別是以腫瘤治療的組合物形式)和治療(特別是 腫瘤)疾病、特別是那些上文所提到的疾病的方法。本發(fā)明還涉及式IA(或其例舉的式)化合物或其N(xiāo)-氧化物在制備包含 作為活性成分的式IA(或其例舉的式)化合物或其N(xiāo)-氧化物的藥物制劑的 方法和用途。該藥物組合物包含約1%至約95。/。的活性成分，在優(yōu)選的實(shí)施方案中 單劑量給藥形式包含約20%至約90%的活性成分，在優(yōu)選的實(shí)施方案中非 單劑量型給藥形式包含約5%至約20%的活性成分。單位劑量形式是例如 包衣和非包衣的片劑、安瓿劑、小瓶、栓劑或膠嚢。其他劑型是例如軟骨 劑、乳劑、貼劑、泡沫劑、酊劑、噴霧劑等。膠嚢的實(shí)例包含約0.05g至 約l.Og的活性成分。本發(fā)明的藥物組合物采用自身已知的方法來(lái)制備，例如通過(guò)常規(guī)的混 合、制粒、包衣、溶解或冷干方法來(lái)進(jìn)行制備。優(yōu)選使用活性成分的溶液，還可以使用其混懸液或M液，特別是等 滲的水性溶液、分歉液或混懸液，在例如僅包含活性成分或者包含活性成 分和栽體的冷凍干燥組合物的情況中，可以在使用前進(jìn)行配制。該藥物組 合物可進(jìn)行滅菌和/或可包含賦形劑，例如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑和/或 乳化劑、增溶劑、用于調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑，并且可以用本身已知 的方式進(jìn)行制備，例如可以通過(guò)常規(guī)溶解和冷凍干燥方法制備。所述溶液 或混懸液可包含增加粘度的試劑或增溶劑，如羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖 維素、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮或明膠。油中的混懸液包含作為油性組分的植物油、常用于注射目的的合成或 半合成油類(lèi)?？商峒暗奶貏e是液體脂肪酸酯，其包含具有8-22個(gè)，特別是 12-22個(gè)碳原子的長(zhǎng)鏈月旨肪酸(作為酸組分)，例如月桂酸、十三烷酸、肉 豆蔻酸、十五烷酸、棕櫚酸、十七烷酸、硬脂酸、花生酸、正二十二烷酸 或相應(yīng)的不飽和酸，例如油酸、反油酸、芥酸、brasidic acid或亞油酸，如果需要的話(huà)，可加入抗氧化劑，例如維生素E、 p-胡蘿卜素或3，5-二-叔-丁基-4-羥基甲苯。 這些脂肪酸酯的醇組分具有最多6個(gè)碳原子并且是單-或多-羥基例如單-、二-或三-羥基醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇 或其異構(gòu)體，但特別是乙二醇和甘油。因此，可提及的脂肪酸酯的實(shí)例如 下油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、"Labrafil M 2375"(聚氧 乙烯甘油三油酸酯，Gattefoss6，巴黎)、"Miglyol 812"(具有Q至C12的鏈 長(zhǎng)度的飽和脂肪酸的甘油三酯，HtilsAG，德國(guó))，但是特別是植物油，如 棉籽油、杏仁油、橄欖油、蓖麻油、t昧油、豆油且特別是花生油。注射組合物是以常規(guī)方式在無(wú)菌條件下制備的；也同樣適用于無(wú)菌條 件下將該組合物引入安瓿或管形瓶中并將該容器密封。用于口服給藥的藥物組合物可以通過(guò)將活性成分與固體栽體組合來(lái)獲 得，如果需要的話(huà)，將所得的混合物制粒并且如果需要或必需的話(huà)，在加 入適宜的賦形劑后將該混合物加工成片劑、糖錠劑核或膠嚢。還可以將其 混入到可以使得活性成分以可檢測(cè)的量擴(kuò)散或釋放的塑性載體中。適宜的載體特別是填充劑，例如糖類(lèi)，例如乳糖、蔗糖、甘露醇或山 梨醇、纖維素制劑和/或磷酸鉤類(lèi)，例如磷酸三鈣或磷酸氫鈣；和粘合劑， 例如淀粉糊，例如使用玉米、小麥、7jc稻或馬鈴薯淀粉的淀粉糊、明膠、 西黃蓍膠、曱基纖維素、羥丙甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡 咯烷酮；和/或如果需要的話(huà)，崩解劑，如上述淀粉類(lèi)、和/或羧甲基淀粉、 交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、海藻酸或其鹽，例如海藻酸鈉。賦形劑特別 是流動(dòng)調(diào)節(jié)劑和潤(rùn)滑劑，例如硅酸、滑石粉、硬脂酸或其鹽，如硬脂酸鎂 或硬脂酸釣、和/或聚乙二醇。為糖錠劑核提供適宜的、任選為腸溶的包衣， 特別是，可采用可包含阿拉伯膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/ 或二氧化鈦的濃縮的糖溶液，或者在適宜有機(jī)溶劑中的包衣溶液，或者， 為了制備腸溶包衣，可采用適宜的纖維素制劑溶液，例如鄰苯二曱酸乙基 纖維素或鄰苯二甲酸羥丙甲基纖維素溶液。膠嚢有由明膠制得的干填充的膠嚢和由明膠和增塑劑例如甘油或山梨醇制成的密封的軟膠嚢。該干填充 的膠嚢可包含顆粒形式的活性成分，所說(shuō)的顆粒形式例如可以具有填充劑如乳糖、粘合劑如淀粉類(lèi)，和/或助流劑如滑石粉或硬脂酸鎂，并且如果需 要的話(huà)還可以具有穩(wěn)定劑。在軟膠嚢的情況中，優(yōu)選將活性成分溶解或混 懸于適宜的油性賦形劑，如脂肪油、石蠟油或液體聚乙二醇中，還可以向 其中加入穩(wěn)定劑和/或抗菌劑。可以向片劑或糖錠劑包衣或膠嚢殼中加入染 料或顏料，例如為了識(shí)別目的或表明活性成分的不同劑量。為片劑核提供適宜的、任選為腸溶的包衣，特別是，可釆用可包含阿 拉伯膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦的濃縮的糖溶 液，或者在適宜有機(jī)溶劑或溶劑混合物中的包衣溶液，或者，為了制備腸 溶包衣，可采用適宜的纖維素制劑溶液。用于口服給藥的藥物組合物還包括由明膠構(gòu)成的硬膠嚢和由明膠和增 塑劑構(gòu)成的密封的軟膠嚢。硬膠嚢可包含顆粒形式的活性成分，所說(shuō)的顆 粒形式例如可以具混有填充劑、粘合劑和/或助流劑，并任選地具有穩(wěn)定劑。 在軟膠嚢中，優(yōu)選將活性成分溶解或混懸于適宜的液體賦形劑中，還可以 向其中加入穩(wěn)定劑和去垢劑。適于直腸給藥的藥物組合物例如是由活性成分和栓劑基質(zhì)組合構(gòu)成的 栓劑。特別適宜用于胃腸外給藥的是水溶形式的活性成分(例如水溶性鹽) 的水溶液，或者包含增加粘度的物質(zhì)(例如羧甲基纖維素鈉、山梨醇和/ 或葡聚糖)，以及如果需要的話(huà)還包含穩(wěn)定劑的水性注射混懸液。任選地具 有賦形劑的活性成分還可以以冷干的形式，并可以在胃腸外給藥前通過(guò)加 入適宜的溶劑來(lái)將其配制成溶液。所用的溶液，例如用于胃腸外給藥的溶液還可以用作輸注液。 本發(fā)明同樣涉及對(duì)本文提到的疾病(藥理學(xué)病癥)之一，特別是對(duì)酪 氨酸激酶抑制有響應(yīng)的疾病，更加特別是如上文提到的疾病，更加特別是FGFR，特別是對(duì)應(yīng)的腫瘤性疾病的治療的過(guò)程和方法。式IA(或其例舉的 式)的化合物或其N(xiāo)-氧化物(其還包括鹽、酯或類(lèi)似化合物)可以以所述形 式或特別是以藥物組合物的形式，優(yōu)選以對(duì)所述疾病有效的量來(lái)向動(dòng)物、 優(yōu)選是向溫血?jiǎng)游?，例如人?lèi)，優(yōu)選需要此類(lèi)治療的人類(lèi)來(lái)進(jìn)行預(yù)防性或治療性給藥。對(duì)于具有約70kg體重的個(gè)體而言，每日給藥劑量例如約 O.OOlg至約12g，優(yōu)選例如約O.lg至約3g的本發(fā)明化合物。"大約"優(yōu)選地 表示最多10%的偏差，更加優(yōu)選分別少于所給數(shù)據(jù)l。/。的偏差。 "有響應(yīng)的"疾病是指能夠顯示可發(fā)現(xiàn)的一些有益效果的疾病。 本發(fā)明還提供了治療蛋白激S^賴(lài)性疾病的方法，其包括同時(shí)或分別 向溫血?jiǎng)游?例如人類(lèi))聯(lián)合施用一種或多種細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的或細(xì)胞毒的 化合物如Glivec⑧和本發(fā)明的化合物。術(shù)語(yǔ)"同時(shí)"的含義是快速連續(xù)地或 在一次給藥后立即再次給藥。本發(fā)明還特別涉及式IA(或其例舉的式)的化合物或其N(xiāo)-氧化物、或其 可藥用鹽，特別是所述優(yōu)選的式IA(或其例舉的式)的化合物或其可藥用鹽 以所述形式或以與至少一種可藥用載體形成的藥物制劑形式，用于一種或 多種上文提到的疾病，優(yōu)選對(duì)蛋白激酶抑制有響應(yīng)的疾病、特別是腫瘤性 疾病、更特別是對(duì)Abl酪氨酸激酶抑制有響應(yīng)的白血病的治療和預(yù)防性處 理的用途。所用的藥物制劑(藥物)的優(yōu)選的劑量、組合及其制備方法分別在上 文中描述。式IA(或其例舉的式)的化合物還可以與advantage p49其他抗增殖藥 物組合。這些抗增殖藥物包括但不限于芳香酶抑制劑、抗雌激素藥物、拓 樸異構(gòu)酶I抑制劑、拓樸異構(gòu)酶II抑制劑、；錄管活性藥物、烷化劑、組蛋 白去乙酰酶抑制劑、法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、COX-2抑制劑、MMP抑制劑、 mTOR抑制劑、抗腫瘤的抗代謝物、鉑化合物、降低蛋白激酶活性和ATP 酶活性的化合物、進(jìn)而抗血管生成的化合物、戈那瑞林激動(dòng)劑、抗雄激素 藥物、bengamides、 二膦酸鹽、抗增殖的抗體、替莫唑胺(TEMODAL⑧)、 甾類(lèi)藥物(如地塞米松)、蛋白酶體抑制劑(如萬(wàn)珂和/或反應(yīng)停)。本文中所用的術(shù)語(yǔ)"芳香酶抑制劑"涉及抑制雌激素生成，即抑制底物 雄甾烯二酮和睪酮各自轉(zhuǎn)化為雌素酮和雌二醇的化合物。該術(shù)語(yǔ)包括但不 限于甾類(lèi)，特別是依西美坦和福美坦；以及特別是非甾類(lèi)，特別是氨魯米 特、氟氯唑、法倔唑、阿納托峻；且非常特別的是來(lái)曲唑。依西美坦可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為aromasin )來(lái)給藥。福美坦可以例如
以市售的形式(如商標(biāo)名為lentaron )來(lái)給藥。法倔喳可以例如以市 售的形式(如商標(biāo)名為afema )來(lái)給藥。阿納托唑可以例如以市售的 形式(如商標(biāo)名為arimidex )來(lái)給藥。來(lái)曲唑可以例如以市售的形式 (如商標(biāo)名為femara 或femar )來(lái)給藥。來(lái)曲唑可以例如以市售 的形式(如商標(biāo)名為femara 或femar )來(lái)給藥。氨魯米特可以例
如以市售的形式(如商標(biāo)名為orimeten )來(lái)給藥。
本發(fā)明的包含為芳香酶抑制劑的抗腫瘤藥的組合對(duì)于激素受體陽(yáng)性乳 腺腫瘤治療特別有用。
如本文所用的術(shù)語(yǔ)"抗雌激素藥物"涉及在雌激素受體水平對(duì)抗雌激素 作用的化合物。該術(shù)語(yǔ)包括但不限于它莫西芬、氟維司群、雷洛昔芬和雷 洛昔芬鹽酸化物。它莫西芬可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為
nolvadex )來(lái)給藥。雷洛昔芬鹽酸化物可以例如以市售的形式(如商 標(biāo)名為evista )來(lái)給藥。氟維司群可以如us 4,659,516中所公開(kāi)的方 法來(lái)配制或者可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為faslodex，)來(lái)給藥。
如本文所用的術(shù)語(yǔ)"拓樸異構(gòu)酶i抑制劑"包括但不限于托泊替康、依 立替康、9-硝基喜樹(shù)堿和大分子喜樹(shù)堿偶聯(lián)物pnu-l66148 (WO99/17804 中的化合物Al)。依立替康可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為 camptosar )來(lái)給藥。托泊替康可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為 hycamtin )來(lái)給藥。
如本文所用的術(shù)語(yǔ)"拓樸異構(gòu)酶ii抑制劑，，包括但不限于安曲非寧亞 得里亞霉素(包括脂質(zhì)體制劑，例如caelyx )、表柔比星、去曱氧正 定霉素和奈莫柔比星、蒽醌類(lèi)(米托蒽醌和洛索蒽醌)以及鬼臼毒素類(lèi)(鬼
臼乙叉戒和鬼臼乙叉戒)。鬼臼乙叉甙可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為 etopophos )來(lái)給藥。鬼臼參呤甙可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名 為vm 26-BRISTOLtm )來(lái)給藥。亞得里亞霉素可以例如以市售的形式(如 商標(biāo)名為adriblastin頂)來(lái)給藥。表柔比星可以例如以市售的形式(如 商標(biāo)名為farmorubicin )來(lái)給藥。去甲氧正定霉素可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為ZAVEDOS )來(lái)給藥。米托蒽醌可以例如以市售的 形式(如商標(biāo)名為NOVANTRON )來(lái)給藥。
術(shù)語(yǔ)"微管活性藥物，，涉及微管穩(wěn)定及微管去穩(wěn)定藥物，包括但不限于 紫杉烷類(lèi)(紫杉醇和紫杉萜)、長(zhǎng)春花堿類(lèi)(例如長(zhǎng)春喊、特別是硫酸長(zhǎng)春 堿；長(zhǎng)春新堿、特別是疏酸長(zhǎng)春新堿；以及長(zhǎng)春瑞濱)、discodermolide和 埃坡霉素類(lèi)(例如埃坡霉素B和D)。紫杉萜可以例如以市售的形式(如 商標(biāo)名為T(mén)AXOTERE )來(lái)給藥。硫酸長(zhǎng)^U5^可以例如以市售的形式(如 商標(biāo)名為VINBLASTIN R.P. )來(lái)給藥。硫酸長(zhǎng)春新堿可以例如以市售的 形式(如商標(biāo)名為FARMISTIN )來(lái)給藥。
如本文所用的術(shù)語(yǔ)"烷化劑，，包括但不限于環(huán)磷酰胺、異磷酰胺和美法 倉(cāng)。環(huán)磷酰胺可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為CYCLOSTIN )來(lái)給 藥。異磷酰胺可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為HOLOXAN很)來(lái)給藥。
術(shù)語(yǔ)"組蛋白去乙酰酶抑制劑，，涉及抑制組蛋白去乙酰酶且具有抗增殖 活性的化合物。
術(shù)語(yǔ)"法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑"涉及抑制法尼基轉(zhuǎn)移酶且具有抗增殖活性 的化合物。
術(shù)語(yǔ)"COX-2抑制劑"涉及抑制環(huán)氧化酶2型(COX-2)且具有抗增殖活 性的化合物，例如塞來(lái)考昔(Celebrex⑧)、羅非考西(Vioxx⑧)和蘆米考昔 (COX189)。
術(shù)語(yǔ)"MMP抑制劑"涉及抑制基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)且具有抗增殖活 性的化合物。
術(shù)語(yǔ)"mTOR抑制劑"涉及抑制雷怕霉素的哺乳動(dòng)物靶點(diǎn)(mTOR)且具 有抗增殖活性的化合物，例如西羅莫司(Rapamune )、依維莫司 (Certican )、 CCI-779和ABT578。
術(shù)語(yǔ)"抗腫瘤的抗代謝物"包括但不限于5-氟尿嘧啶、喃氟啶、卡培他 濱、克拉屈濱、阿糖胞苷、磷酸氟達(dá)拉濱、氟尿嘧咬、吉西他濱、6-巰基 嘌呤、幾基脲、甲氨喋呤、依達(dá)曲沙以及這些化合物的鹽，還有ZD 1694 (RALTITREXEDTM)、 LY231514 (ALIMTATM)、 LY264618(LOMOTREXOI/m)和OGT719。如本文所用的術(shù)語(yǔ)"賴(lài)化合物"包括但不限于碳鉑、順柏和奧沙利柏。 碳鉑可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為CARBOPLAT )來(lái)給藥。奧沙 利鉑可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為ELOXATIN )來(lái)給藥。如本文所用的術(shù)語(yǔ)"降低蛋白激酶活性并進(jìn)而抗血管生成的化合物，，包括但不限于降低蛋白激酶(例如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、表皮生長(zhǎng)因子 (EGF)、 c-Src、蛋白激酶C、血小板衍生的生長(zhǎng)因子(PDGF)、 Bcr-Abl、 c-Kit、 Flt-3、胰島素樣生長(zhǎng)因子I受體(IGF-IR)和細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性蛋 白激酶(CDK)、磷脂酰肌醇3激酶抑制劑(PI3K)和蛋白激酶B(PKB)抑制劑 (例如在WO 2005/054238和WO 2005/054237中所提到的)、熱休克蛋白 卯(HSP90)抑制劑(一種ATP酶))和具有其他不同于降低蛋白激酶活性的 作用機(jī)制的抗血管生成的化合物。降低VEGF活性的化合物具體而言是抑制VEGF受體，特別是VEGF 受體的酪氨酸激酶活性的化合物，與VEGF連接的化合物、以及具體而言 是那些在WO 98/35958、 WO 00/09495、 WO 00/27820、 WO 00/59509、 WO 98/11223、 WO 00/27819、 WO 01/55114、 WO 01/58899和EP 0 769 947 中概括和具體公開(kāi)的化合物、蛋白質(zhì)和單克隆抗體；那些如M,Prewett等 人在Cancer Research ^2(1999) 5209-5218中、F. Yuan等人在Proc. Natl. Acad. Sci.美國(guó)，93巻，14765-14770頁(yè)，1996年12月中、Z. Zhu等人在 Cancer Res. 58， 1998， 3209-3214中以及J. Mordenti等人在Toxicologic Pathology, 27巻，第1期，14-21頁(yè)，1999中；在WO 00/37502和WO 94/10202中；AngiostatinTM ， M. S. O'Reilly等人在Cell 79， 1994， 315-328 中；以及Endostatin , M. S. O'Reilly等人在Cell 88， 1997， 277-285中所 描述的化合物、蛋白質(zhì)和單克隆抗體；降低EGF活性的化合物具體而言是抑制EGF受體，特別是EGF受 體的酪氨酸激酶活性的化合物，與EGF連接的化合物、以及具體而言是 那些在WO 97/02266、 EP 0 564 409、 WO 99/03854、 EP 0520722、 EP 0 566 226、 EP 0 787 722、 EP 0 837 063、 WO 98/10767、 WO 97/30034、 WO97/49688、 WO 97/38983以及特別是在WO 96/33980中概括和具體公開(kāi)的 化合物；降低c-Src活性的化合物包括但不限于如下文所定義的抑制c-Src蛋白 質(zhì)酪氨酸激酶活性的化合物，以及SH2相互作用抑制劑例如那些在 WO97/07131和W097/08193中所公開(kāi)的那些；抑制c-Src蛋白質(zhì)酪氨酸激酶活性的化合物包括但不限于屬于吡咯并 嘧啶類(lèi)(特別是吡咯并[2，3-d嘧啶類(lèi))、嘌呤類(lèi)、吡唑并嘧啶類(lèi)(特別是吡 唑并3，4-dl嘧啶類(lèi))、吡啶并嘧啶類(lèi)(特別是吡啶并2，3-dl嘧啶類(lèi))的結(jié)構(gòu) 類(lèi)型的化合物。優(yōu)選地，該術(shù)語(yǔ)涉及那些在WO 96/10028、 WO 97/28161、 W097/32879和WO97/49706中所公開(kāi)的化合物；降低蛋白激酶C活性的化合物具體而言是那些在EP 0 296 IIO(在WO 00/48571中所述的藥物制劑)中所公開(kāi)的作為蛋白激酶C抑制劑的星形孢 菌素衍生物；物是伊馬替尼(Gleevec⑧/Glivec⑧)、PKC412、 IressaTM(ZD1839)、 PKI166、 PTK787、 ZD6474、 GW2016 、 CHIR-200131 、 CEP 7055/CEP-5214 、 CP-547632、 KRN-633和SU5416;包括但不限于例如反應(yīng)停(THALOMID)、塞來(lái)考昔(Celebrex)和ZD6126。 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"戈那瑞林激動(dòng)劑"包括但不限于阿巴瑞克、戈舍瑞林和醋酸高錫林。戈舍瑞林是在US 4,100,274中公開(kāi)且可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為ZOLADEX )來(lái)給藥。阿巴瑞克可以如US 5，843，卯1中所7>開(kāi)的方法來(lái)配制。如本文所用的術(shù)語(yǔ)"抗雄激素藥物"包括但不限于比卡魯胺(CASODEX ),其可以如US 4,636,505中所公開(kāi)的方法來(lái)配制。術(shù)語(yǔ)"bengamides"涉及具有抗增殖特性的bengamides及其衍生物 如本文所用的術(shù)語(yǔ)"二膦酸鹽"包括但不限于etridonicacid、氯甲雙磷酸、替魯膦酸、帕米膦酸、阿侖棒酸、伊班膦酸、利塞膦酸和唑來(lái)膦酸。"Etridonic acid"可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為DIDRONEL )來(lái) 給藥。"氯甲雙磷酸，，可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為BONEFOS頂) 來(lái)給藥。"替魯膦酸，，可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為SKELID )來(lái) 給藥。"帕米膦酸，，可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為AREDIA )來(lái)給 藥。"阿侖棒酸"可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為FOSAMAX tm)來(lái)給 藥。"伊班膦酸"可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為BONDRANAT ) 來(lái)給藥。"利塞膦酸，，可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為ACTONEL ) 來(lái)給藥。"唑來(lái)膦酸，，可以例如以市售的形式(如商標(biāo)名為ZOMETA ) 來(lái)給藥。如本文所用的"抗增殖的抗體"包括但不限于曲妥珠單抗(Herc印tin )、曲妥珠單抗-DMl、埃羅替尼(TarcevaTM)、貝伐單抗(Avasth^)、利妥 昔單抗(Rituxan⑧)、PRO64553(抗-CD40)和2C4抗體。為了治療急性骨髓性白血病(AML)，式IA(或其例舉的式)化合物可 以與標(biāo)準(zhǔn)的白血病療法聯(lián)合使用，特別是與用作AML治療的療法聯(lián)合使 用。具體而言，式IA(或其例舉的式)化合物可以與例如法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制 劑和/或其他對(duì)AML治療有用的藥物(例如柔紅霉素、阿霉素、阿糖胞苷、 VP-16、鬼臼噻吩甙、米托蒽醌、去甲氧正定霉素、碳鉑和PKC412)聯(lián) 合給藥。通過(guò)代號(hào)、通用名或商品名來(lái)識(shí)別表征的活性藥物的結(jié)構(gòu)可以從 "Merck索引，，的標(biāo)準(zhǔn)摘要的現(xiàn)行版本、或者從數(shù)據(jù)庫(kù)如國(guó)際專(zhuān)利(如IMS 世界出版物)獲得?？梢耘c式IA(或其例舉的式)的化合物聯(lián)合使用的上文提到的化合物， 可以如本領(lǐng)域(例如上文引用的文獻(xiàn))中所描述的方法來(lái)制備和給藥。如本文所用的術(shù)語(yǔ)"聯(lián)合給藥，，的含義是包括向單個(gè)患者施用所選擇的 治療藥物，并期望包括不必要按照相同途徑給藥或同時(shí)給藥的治療用藥方 法。由于適當(dāng)且^f更利，如沒(méi)有另外說(shuō)明，隨后或上文所提到(作為動(dòng)詞或 名詞)的術(shù)語(yǔ)"用途"(涉及式IA的化合物或其(特別是可藥用的)鹽的用途)，其(如果上下文沒(méi)有不同地指明或不同地建議)分別(如果沒(méi)有另外說(shuō)明)包括下述任何一個(gè)或多個(gè)本發(fā)明的實(shí)施方案在治療蛋白(特別 是酪氨酸)激酶調(diào)控(特別是抑制)響應(yīng)性疾病中的用途、制備用于治療 蛋白激酶調(diào)控(特別是抑制)響應(yīng)性疾病的藥物組合物的用途、在治療蛋 白激酶調(diào)控(特別是抑制)響應(yīng)性和/或增生性疾病中使用一種或多種式IA 化合物的方法、包含一種或多種用于治療所述蛋白激酶調(diào)控(特別是抑制) 響應(yīng)性疾病的式IA化合物的藥物制劑、以及一種或多種用于治療所述蛋 白激酶調(diào)控(特別是抑制)響應(yīng)性疾病的式IA化合物。具體而言，治療 的疾病及因此優(yōu)選用于"用途"的式IA化合物選自上文提到的蛋白(特別 是酪氨酸)激酶調(diào)控(特別是抑制)響應(yīng)性(含義是不僅"依賴(lài)"，而且"支 持，，，包括疾病對(duì)蛋白激酶調(diào)控(特別是抑制)響應(yīng)的情況，因此蛋白激酶 的活性支持或甚至引發(fā)疾病顯現(xiàn))疾病，或者特別是上文或下文提到的增 生性疾病。優(yōu)選地，蛋白激酶調(diào)控(特別是抑制)響應(yīng)性疾病是對(duì)上文和 下文提到的一種或多種激酶(更加優(yōu)選FGFR)的抑制響應(yīng)的疾病。制備方法式IA化合物采用類(lèi)似于本領(lǐng)域公知的用于其他化合物的方法來(lái)制備，因此對(duì)于式IA的新化合物的制備作為類(lèi)似方法而言是新方法，優(yōu)選地通過(guò)在雙反應(yīng)性的碳酸衍生物的存在下將IIA化合物(苯胺)H。N、(HA)(R4)n其中W和n如式IA的化合物所定義，與式IIIA(胺)反應(yīng)，<formula>formula see original document page 62</formula>其中R1、 R2、 R3、 R5、 X、 Y和Z如式IA化合物所定義。 并且，如果需要，將式IA化合物轉(zhuǎn)化為不同的式IA化合物，將可獲 得的式IA化合物的鹽轉(zhuǎn)化為游離化合物或不同的鹽，將可獲得的游離式 IA化合物轉(zhuǎn)化為其鹽，和/或?qū)⒖色@得的式IA化合物的異構(gòu)體混合物分離 成單個(gè)異構(gòu)體。在該反應(yīng)中，雙反應(yīng)性的碳酸衍生物優(yōu)選碳酸酸酐或更加優(yōu)選碳酸二 面化物，特別是碳酰氯(光氣)。該反應(yīng)可以?xún)?yōu)選通過(guò)首先將式IIA化合物進(jìn)行，隨后向其加入其他化合物(分別為式IIIA或IIA化合物)。首個(gè)反 應(yīng)優(yōu)選在合適的溶劑，例如醚(如二嗜、烷)，在升高的溫度下(如從20。C 至反應(yīng)混合物的回流溫度)進(jìn)行，并可以?xún)?yōu)選隨后通過(guò)濃縮所得的異氰酸 鹽溶液以提供優(yōu)選為固體或油形式的異氰酸鹽。隨后異氰酸鹽的第二個(gè)反 應(yīng)在加入合適的溶劑(特別是N-甲基吡咯烷酮(NMP)和/或甲苯)后，在 升高的溫度下(如從20。C至反應(yīng)混合物的回流溫度)分別加入補(bǔ)充的式 IIIA或IIA的胺來(lái)進(jìn)4亍。兩個(gè)反應(yīng)都優(yōu)選在保護(hù)性氣體、特別是氮?dú)饣驓鍤庀逻M(jìn)行。任選的反應(yīng)和轉(zhuǎn)化式IA的化合物可以轉(zhuǎn)化為不同的式I化合物。例如，式IA化合物中，其中W是千氧基苯基M或4-節(jié)基-旅溱-1-基-苯基氨基，千基部分可以通過(guò)氫化作用去除，例如在貴金屬催化劑(例 如把碳)的存在下，在合適的溶劑(例如醇類(lèi)，如甲醇)中，在合適的溫 度下(例如從0至50°C ),在額外的酸(如HC1)的存在下從哌溱的氮上去除以獲得對(duì)應(yīng)的化合物，其中的千基部分被氫代替。式IA化合物可以轉(zhuǎn)化為對(duì)應(yīng)的N-氧化物。該反應(yīng)通過(guò)與合適的氧化 劑(優(yōu)選過(guò)氧化物，例如間氯過(guò)氧苯甲酸)，在合適的溶劑(例如卣代烴， 通常為氯仿或二氯甲烷，或者低級(jí)烷羧酸，通常為乙酸)中，優(yōu)選在0°C 和反應(yīng)混合物沸點(diǎn)之間的溫度下，特別是在大約室溫下進(jìn)行。非氧化形式的本發(fā)明化合物可以從本發(fā)明化合物的N-氧化物來(lái)制備， 通過(guò)將其用還原劑(例如硫、二氧化硫、三苯基膦、硼氫化鋰、硼氫化鈉、 三氯化磷、三溴化物等)在合適的惰性有機(jī)溶劑(例如乙腈、乙醇、水性 二W悉烷等)中在0-80'C下進(jìn)行處理。具有至少一個(gè)成鹽基團(tuán)的式IA化合物的鹽可以以其自身已知的方式 來(lái)制備。例如，具有堿性基團(tuán)(如堿性氮)的式IA化合物的酸加成鹽可 以以常規(guī)方式獲得，例如通過(guò)用酸或合適的陽(yáng)離子交換劑處理式IA化合 物。具有酸性基團(tuán)的式IA化合物的鹽可以通過(guò)用金屬化合物，例如合適 的有機(jī)羧酸的堿金屬鹽(如2-乙基己酸的鈉鹽)，用有機(jī)堿金屬或堿土金 屬化合物，例如對(duì)應(yīng)的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽(如鈉或鉀的氫氧化 物、碳酸鹽或碳酸氫鹽)，用對(duì)應(yīng)的鈣化合物或用氨或合適的有機(jī)胺處理該 化合物，所用的化學(xué)計(jì)算量?jī)?yōu)選僅相對(duì)成鹽試劑少量過(guò)量。例如通過(guò)鹽(例 如酸加成鹽)的中和作用，例如用弱堿或通過(guò)用離子交換劑處理使之到達(dá) 等電點(diǎn)，可以形成包含酸性和堿性成鹽基團(tuán)(例如游離羧基和游離氨基) 的式IA化合物的內(nèi)鹽。式IA化合物(=本發(fā)明化合物)的鹽可以以常規(guī)方式轉(zhuǎn)化為游離化合 物；金屬或銨鹽例如通過(guò)用合適的酸和酸加成鹽處理，例如通過(guò)用合適的 堿性試劑處理可以轉(zhuǎn)化為不同的鹽。在兩種情況下，都可以使用合適的離 子交換劑。立體異構(gòu)體混合物(例如非對(duì)映異構(gòu)體混合物)可以通過(guò)合適的分離 方法以自身已知的方式分離成它們對(duì)應(yīng)的異構(gòu)體。例如非對(duì)映異構(gòu)體混合 物可以通過(guò)分步結(jié)晶法、色語(yǔ)法、溶劑分配法以及類(lèi)似的方法來(lái)分離成它 們的單一非對(duì)映異構(gòu)體。該分離可以在一種原料化合物水平上或在式IA化合物自身的水平上進(jìn)行。對(duì)映異構(gòu)體可以通過(guò)形成非對(duì)映異構(gòu)體的鹽， 例如通過(guò)與對(duì)映異構(gòu)體純的手性酸成鹽來(lái)進(jìn)行分離，或者通過(guò)色鐠法(例如HPLC)，使用具有手性配基的色語(yǔ)基質(zhì)。將化合物的立體異構(gòu)體從它 們的外消旋混合物中分離的適用技術(shù)的更加詳細(xì)的描述可以在Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen， "Enantiomers， Racemates and Resolutions", John Wiley And Sons, Inc.， 1981中找到。本發(fā)明化合物的前藥衍生物可以通過(guò)本領(lǐng)域一般技術(shù)人員已知的方法 (例如進(jìn)一步詳見(jiàn)Saulnier等人，(1994)， Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 4巻，1985頁(yè))來(lái)制備。例如，合適的前藥可以通過(guò)將 非衍生的本發(fā)明化合物與合適的氨甲?；噭?例如l，l-酰氧基烷基M 碳酰氯(l，l-acyloxyalkylcarbanochloridate)、對(duì)硝基苯基碳酸鹽等)反應(yīng)來(lái) 制備。本發(fā)明化合物被保護(hù)的衍生物可以通過(guò)本領(lǐng)域那些一般技術(shù)人員已知 的方法來(lái)制備。保護(hù)基團(tuán)的建立及其去除的適用技術(shù)的詳細(xì)描述可以在T. W. Greene, "Protecting Groups in Organic Chemistry",第3版，John Wiley and Sons, Inc., 1999中找到。作為本發(fā)明化合物的溶劑合物(例如水合物)可以在本發(fā)明的方法中 方便地制備或形成。本發(fā)明化合物的水合物可以通過(guò)從水/有機(jī)溶劑混合物 中用有機(jī)溶劑(例如二 惡英、四氫呋喃或甲醇)重結(jié)晶來(lái)方便地制備。中間體和終產(chǎn)物可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法，例如使用色鐠方法、分配方法、 (重)結(jié)晶法等來(lái)進(jìn)行后處理和/或純化。原料原料和中間體(兩者均各自包含其鹽)，特別是式IIA和HIA的原料 和中間體可以按照與實(shí)施例中所描述的類(lèi)似的方法，根據(jù)或類(lèi)似于本領(lǐng)域 已知的方法來(lái)制備，和/或其作為商品獲得。例如，原料可以?xún)?yōu)選地按照以下方法來(lái)制備如果沒(méi)有另外指明，在原料和中間體中所用的R1、 R2、 R3、 R4、 R5、X、 Y、 Z和n，這些符號(hào)優(yōu)選地具有式IA的化合物所提供的含義。例如，帶有一個(gè)或多個(gè)卣素基團(tuán)的式IIA的化合物可以通過(guò)卣化作用， 例如與無(wú)機(jī)酸囟化物(如磺酰氯)，在合適的溶劑(如乙腈、二氯甲烷和/ 或四氫呋喃)中，優(yōu)選地在-40至25。C范圍內(nèi)的溫度下制備，對(duì)于式IIA 對(duì)應(yīng)的化合物，其中存在至多4個(gè)其他基團(tuán)R4 (選自d-CV烷基、卣素 -d-C7-烷基、卣素和CKV烷氧基)，且M被保護(hù)，例如通過(guò)乙酰基或 叔丁氧基羰基(保護(hù)基團(tuán)的引入?yún)⒁?jiàn)例如實(shí)施例中或下文的一般加工條 件)，隨后去除保護(hù)基團(tuán)(例如乙?；ㄟ^(guò)在合適的溶劑(如乙醇)中，在 升高的溫度(如從30'C至所述混合物的回流溫度)下，用堿金屬氫氧化物 (如氫氧化鉀)處理來(lái)去除；叔丁氧基羰基通過(guò)在合適的溶劑(如二噁烷) 中，在溫度如-20至30。C下與酸(如HC1)反應(yīng)來(lái)去除)。j^-d—Cr烷基，特別是曱基，可以通過(guò)用d-CV烷基囟化物(如-碘 化物)在合適的溶劑(如四氫呋喃)中，在優(yōu)選從-50'C至25。C的溫度下 對(duì)也為式IIA (具有如前一段所述的氨基的保護(hù)和去保護(hù))的對(duì)應(yīng)的前體 化合物中的苯環(huán)(特別是已經(jīng)存在d-Cr烷氧基部分R4)進(jìn)行烷基化來(lái)引 入。以上反應(yīng)在式IIA的化合物前體與強(qiáng)堿(如丁基或叔丁基鋰)在合適 的溶劑(如戊烷和四氫呋喃)中，在優(yōu)選的從-80。C至0。C范圍的溫度下反 應(yīng)之后進(jìn)行。例如，式IIIA化合物可以如下文通過(guò)將式IVA化合物其中Hal是卣素，特別是氯或溴，在酸(如乙酸或鹽酸)的存在下， 在合適的溶劑(如水或二 悉烷)中，在升高的溫度(如在50-160。C的范圍 內(nèi))下(必要時(shí)在試管中)與式VA的胺反應(yīng)。R1RNH(VA)或者，其中的W是被[4-(d-C7-烷基)-哌溱-l-基-羰基取代的苯基的式 iiia化合物可以通過(guò)將如上文定義的式iva化合物與式via化合物反應(yīng) 來(lái)獲得，COOHH。NA(VIA)其中A是氫、d-Cr烷氧基或卣素，優(yōu)選在酸(如鹽酸)的存在下， 在合適的溶劑(如二噁烷)中，在升高的溫度(如在50-17(TC)下(例如在微波爐中)進(jìn)行反應(yīng)，！51^所得的式VIIA化合物，HOOC、1 R3(VIIA)其中各部分如式iva和via所定義，將其在偶合試劑(如丙基磷酸 酐)的存在下，在合適的溶劑(如dmf)中，在氮堿(如三乙胺和/或4-二甲基氨基-吡咬)的存在下，優(yōu)選在0-50。C范圍的溫度下進(jìn)行反應(yīng)生成對(duì) 應(yīng)的式IIIA4匕合物。例如，其中Rs是氫的式VA化合物可以通過(guò)還原其中氨基(NR"被硝 基替代的對(duì)應(yīng)的化合物來(lái)獲得，例如將其用鐵粉在乙醇、水和乙酸中，在 升高的溫度(如30-100。C)下，或者用氫氣在催化劑(如拉尼鎳)的存在 下，在甲醇中，在溫度如0-50。C下進(jìn)行反應(yīng)。在兩種情況下都可使用其他慣常的溶劑。其中RS是d-CV烷基所對(duì)應(yīng)的式VA化合物可以通過(guò)例如用 對(duì)應(yīng)的C,-CV烷基離化物的烷基化作用來(lái)獲得。對(duì)應(yīng)的原料和其他式VA化合物可以按照實(shí)施例中所描述的或與其類(lèi) 似的方法，才艮據(jù)本領(lǐng)域已知的方法來(lái)制備或其作為商品獲得。一般方法條件一般情況下，下文的內(nèi)容適用于上下文所提到的所有方法，而上下文 所特別提到的反應(yīng)條件是優(yōu)選的反應(yīng)條件在上下文所提到的任意反應(yīng)中，盡管沒(méi)有特別提到，如果適宜或需要 的話(huà)可以使用保護(hù)基團(tuán)來(lái)保護(hù)不期望參加所給出反應(yīng)的功能基團(tuán)，并且它 們可以在適宜或需要的階段引入和/或去除。因此在本說(shuō)明書(shū)中任何可能沒(méi)除非在上下文中另外指明，在本文公開(kāi)范圍之內(nèi)僅作為容易離去的基 團(tuán)，其不是具體所需的式IA的終產(chǎn)物的組成部分的基團(tuán)命名為"保護(hù)基 團(tuán)"。通過(guò)此保護(hù)基團(tuán)對(duì)功能基團(tuán)的保護(hù)，該保護(hù)基團(tuán)自身以及適宜于它們 離去的反應(yīng)例如在標(biāo)準(zhǔn)參考著作中有描述，例如J. F. W. McOmie，" Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London and New York 1973、 T. W. Greene和P. G， M. Wuts， " Protective Groups in Organic Synthesis",第三版，Wiley, New York 1999、 " The Peptides";第3巻(編輯 E. Gross和J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981 、 "Methoden der organischen Chemie"， Houben Weyl，第四版,15/1巻，Georg Thieme Verlag， Stuttgart 1974、 H.畫(huà)D. Jakubke和H. Jeschkeit， "Amino-s5uren， Peptide, Proteine"， Verlag Chemie， Weinheim, Deerfidd Beach和 Basel 1982、 以及Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate"， Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974。特征性 的保護(hù)基團(tuán)可以例如通過(guò)溶劑解、還原、光解或可選擇地在生理?xiàng)l件(如 通過(guò)酶裂解)下容易地離去(即不發(fā)生不需要的二次反應(yīng))。所有上述方法步驟都可以在其自身已知的反應(yīng)條件下進(jìn)行，優(yōu)選那些特別提到的反應(yīng)條件，在沒(méi)有或者慣常地有溶劑或稀釋劑的存在下，優(yōu)選地是對(duì)所用和溶解它們的試劑呈現(xiàn)惰性的溶劑或稀釋劑；沒(méi)有或存在催化 劑、濃縮或中和試劑，例如離子交換劑(例如陽(yáng)離子交換劑，如以H+形式)， 取決于反應(yīng)和/或反應(yīng)物的性質(zhì)；在降低的、正常的或升高的溫度下，例如 在約-100。C至約190。C范圍的溫度下，優(yōu)選在從約-80。C至約150。C下，例 如在從-80至-60。C下，室溫下、在從-20至40。C下或者在回流溫度下；在 大氣壓下或在封閉的容器中，酌情在壓力下，和/或在惰性氣體中，例如在 氬氣或氮?dú)庵小３窃谒龇椒ǖ拿枋鲋辛硗庵该?，?lái)自那些適用于任何特殊反應(yīng)的 溶劑可所選自包括那些特別提到的溶劑，或例如水、酯類(lèi)(例如低級(jí)烷基-低級(jí)鏈烷基酯，如乙酸乙酯)、醚類(lèi)(例如脂肪醚，如二乙基醚；或環(huán)醚， 例如四氫呋喃或二巧悉烷)、液態(tài)芳香烴(例如苯或甲苯)、醇類(lèi)(例如曱醇、 乙醇或l-或2-丙醇)、腈類(lèi)(例如乙腈)、卣代烴類(lèi)(例如二氯甲烷或氯仿)、 酰胺類(lèi)(例如二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺)、堿類(lèi)(例如雜環(huán)氮堿，如吡 啶或N-曱基吡咯烷-2-酮)、羧酸酐(例如低級(jí)鏈烷酸酐，如乙酸酐)、環(huán)、 直鏈或支鏈烴(例如環(huán)己烷、己烷或異戊烷)、或者這些溶劑的混合物(例 如水溶液)。該溶劑混合物還可以用于后處理，例如通過(guò)色譜法或分配法來(lái) 進(jìn)行。本發(fā)明還涉及所述方法的那些形式，其中在該方法的任何階段中作為 中間體可獲得的化合物用作原料并進(jìn)行剩余的方法步驟，或者其中的原料 在反應(yīng)條件下形成或以衍生物的形式(例如已被保護(hù)的形式或鹽形式)使 用，或者通過(guò)根據(jù)本發(fā)明的方法可獲得的化合物是在方法條件下產(chǎn)生并進(jìn) 一步就地進(jìn)行反應(yīng)。在本發(fā)明的方法中優(yōu)選那些可獲得所述優(yōu)選的式IA 化合物的原料。本發(fā)明還涉及新的中間體和/或原料。特別優(yōu)選的反應(yīng)條件 和新中間體與實(shí)施例中所提到的那些一致或類(lèi)似。本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案在優(yōu)選的實(shí)施方案以及更廣泛范圍的之前和之后的實(shí)施方案中，同樣也在權(quán)利要求中，任何一種或多種或者所有的一般表達(dá)或符號(hào)，各自獨(dú)立 地可以4皮對(duì)應(yīng)的上下文提供的更加特異的定義所代替，因此產(chǎn)生本發(fā)明更 加優(yōu)選的實(shí)施方案。優(yōu)選的是權(quán)利要求中給出的實(shí)施方案，其因此引入本文作為參考。特別優(yōu)選的是上文中A、 B或C任何一組所給出的式IA的化合物。非常優(yōu) 選的是在實(shí)施例中給出的一種或多種式IA的化合物及其(特別是可藥用 的)鹽。實(shí)施例以下實(shí)施例是為了闡述本發(fā)明而不限制其范圍。溫度按照攝氏度計(jì)量。 除非另外指明，所述反應(yīng)在室溫下進(jìn)行。表示各個(gè)物質(zhì)移動(dòng)的距離與洗脫 劑前沿移動(dòng)的距離的比值的Rf值是在珪膠薄層板5 x 10cm的TLC板、硅 膠F254(Merck， Darmstadt,德國(guó))上使用下文指定的溶劑系統(tǒng)通過(guò)薄層色語(yǔ) 法來(lái)確定。分析性HPLC條件 系統(tǒng)1線(xiàn)性梯度20-100% CH3CN CH3CN(0.1%TFA); 215nm下檢測(cè)， Nucleosil 100-3 C18(70 x 4.0mm)?？s寫(xiě)與首字母縮寫(xiě)在5分鐘 + 1.5分鐘100% 流速在30。C下lmL/分鐘。Column:AcOH 乙酸API-MS 大氣壓電離質(zhì)^脊鹽水 飽和NaCl水溶液硅藻土 0"^@(西萊特公司)=基于硅藻土的助濾劑CH3CN 乙腈DCM 二氯甲烷cone, 濃縮的DIEA 二異丙基乙基胺DM AP 4-二甲基^J^-吡咬DMF 二甲基甲酰胺DMP 1 ，3-二甲基-3，4，5，6-四氫-2-(lH)-嘧啶酮DMSO 二甲基亞砜equiv 當(dāng)量ESI-MS電噴射離子化質(zhì)鐠Et20乙醚Et3N三乙胺EtOAc乙酸乙酯EtOH乙醇HN03辨酸H2S04硫酸h小時(shí)Hex己坑HC1鹽酸H20水HPLC高壓液相色鐠升LiOH氫氧化鋰Me甲基MeOH甲醇mL毫升min分鐘m.p.熔點(diǎn)MPLC中壓液相色"i普MS 質(zhì)譜 NaH 氫化鈉 Na2C03 碳酸鈉 NaHC03 碳酸氫鈉 Na2S04 硫酸鈉 NH3aq 氨水NMP l-曱基-2-吡咯烷酮 NMR 核磁共振PdCl2(dppf)[l，l ，-聯(lián)(二苯基膦基)二茂鐵二氯鈀(H)Pd(PPh3)4四(三苯基膦)鈀(O)Pd(PhCN)2Cl2 二(千腈)氯化把(II)Ph 苯基Rf 比移值(TLC)RT 室溫TBTU O-(苯并三唑-l-基)-N，N，N，，N，-四甲基脲錯(cuò)四氟硼酸鹽TFA CF3COOH (三氟乙酸)THF 四氬呋喃TLC 薄層色i普TR 保留時(shí)間wt. S重量微波裝置:Emrys優(yōu)化器(Biotage) 反應(yīng)方案實(shí)施例AcOH,H!O0 。xx +眾實(shí)施例1: l-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-3-{6-『4-(2-嗎啉-4-基-乙氣 基)-苯基氨基1-嘧啶-4-基}-脲將光氣(在甲苯中20%， 0.8mL， 1.58mmo1, 2.4當(dāng)量)在氬氣中加 入2,6-二氯-3，5-二曱氧基苯胺(175mg， 0.79mmo1， 1.2當(dāng)量)在二 悉烷(2.5mL) 的溶液中。將該混合物加熱至回流，攪拌1小時(shí)，冷卻至室溫，并在真空 下濃縮。在75。C下在氬氣中將所得異氰酸鹽加入N-4-(2-嗎啉-4-基-乙氧 基)-苯基-嘧咬-4，6-二胺(208.5mg， 0.66mmol)在NMP(2mL)的溶液。該反 應(yīng)混合物在75。C攪拌2小時(shí)，冷卻至室溫，并隨后將其用DCM和飽和 NaHC03水溶液稀釋。分離水層并用DCM萃取。有機(jī)相用鹽水洗滌，干 燥(Na2S04 )，過(guò)濾并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 96: 4)純化，隨后將所得材料在MeOH中研磨，提供為白色固體的標(biāo)題化 合物ESI-MS: 562.9 / 564.9 [MH+; tR= 2.99分鐘(純度100%，系統(tǒng) 1); TLC: Rf = 0.36(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 93: 7)。步驟1.1: N-f4-(2-嗎啉-4-基-乙猛V苯基l-嘧咬-4,6-二胺 將6-氯-嘧梵-4-基胺(194mg, 1.5mmo1, 1.3當(dāng)量)、4-(2-嗎#>4-基-乙 氧基)-苯基胺(256mg， 1.15mmol)在H20(lmL)和水醋酸(5mL)的混合物在 IO(TC下攪拌16小時(shí)。蒸干溶劑后，將殘余物溶于DCM中并用飽和 NaHC03水溶液稀釋。分離水層并用DCM萃取。有機(jī)相用鹽水洗滌，干 燥(Na2S04)，過(guò)濾并濃縮。殘余物用EtOAc研磨以提供為灰色固體的標(biāo) 題化合物ESI畫(huà)MS: 316.MH+; tR= 1.00分鐘(純度95%，系統(tǒng)l); TLC: Rf = 0.22(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 93: 7)。步驟1.2: 4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基胺在氬氣中將4-(2-氯-乙基)-嗎啉鹽酸化物(4.2g， 22mmo1， 1.2當(dāng)量)一 次加入4-氨基苯酚(2g， 18.3mmol)和氫氧化鈉細(xì)粉(1.87g, 45.8mmo1， 2.5 當(dāng)量)在DMF(32mL)的混合物中。在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物23.5小時(shí)。 過(guò)濾所得黑色混懸液。濾液用DCM(200mL)稀釋并用鹽水(2 x 60mL)洗滌。 干燥有機(jī)相(硫酸鈉)，過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜(DCM/EtOH，9S: 5 4 7: 3)純化以提供為黃褐色固體的標(biāo)題化合物API-MS: 223.2 [MH廣，TLC: Rf = 0.31(DCM/EtOH， 9: 1)。歩驟1.3: 2,6-二氯-3,5-二甲猛苯胺向A42，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-乙酰胺(34.5g，264mmol)在乙醇(1.3 L)的溶液中加入2M的KOH(0.72L)。然后，將該反應(yīng)混合物加熱至回流， 在回流下攪拌44小時(shí)，然后冷卻至室溫。將所得混懸液冷卻至0。C攪拌1 小時(shí)并過(guò)濾。殘余物用一小部分冷EtOH/H20(l: l)洗滌，并用冷1120洗 滌直至中和，干燥以提供為白色固體的標(biāo)題化合物ESI-MS: 222.0 / 224.0 [MH〗+， TLC: Rf = 0.52(己烷/EtOAc， 1: 1)。步驟1.4: N-(2，6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-乙酰胺在氬氣中將磺酰氯(26.9mL， 325mmol， 1.93當(dāng)量)加入(在7分鐘內(nèi)) 冷卻的(0°C) A43，5- 二甲氧基苯基)-乙酰胺(32.9g ， 169mmol)在 CH3CN(500mL)的混懸液中。將所得黃色混合物攪拌30分鐘并通過(guò)逐滴加 入飽和碳酸氫鈉水溶液(250mL)來(lái)淬滅反應(yīng)。經(jīng)真空過(guò)濾收集所得沉淀， 用H2O(300mL)洗滌并干燥以提供20g所需產(chǎn)物(第1批)。用飽和NaHC03 7K溶液(300mL)稀釋并用EtOAc(2 x 300mL)萃取。用H20和鹽水洗滌有機(jī) 相，干燥(Na2S04),過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)珪膠粗色i普(EtOAc/己烷，l: 1 ~> 2: l)純化以提供8.8g產(chǎn)物(第2批)。將第1和2批合并并在己烷中攪拌。 通過(guò)過(guò)濾收集固體，用己烷洗滌并干燥以提供為白色固體的標(biāo)題化合物。 ESI畫(huà)MS: 264.0/266.0 [MH+， TLC: Rf = 0.15(己烷/EtOAc， 1: 1)。步驟1.5: N-(3,5-二曱氧基-苯基V乙酰胺將乙酸酐(13mL， 137mmo1, 1.05當(dāng)量)加入(在15分鐘內(nèi))3，5-二曱氧 基苯胺(20g， 131mmol)在甲苯(110mL)的混懸液中，保持內(nèi)部溫度在 35-45。C范圍內(nèi)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌20小時(shí)。用己烷(55mL)稀 釋所得粘稠、灰色混懸液并過(guò)濾。將過(guò)濾器中的殘余物用甲苯/己烷(2: 1, 70mL)和己烷洗滌，干燥以提供為白色固體的標(biāo)題化合物。API-ES-MS: 196.1 [MH+， tR= 3.03分鐘(純度100%,系統(tǒng)1)。實(shí)施例2: 3-(2,6-二氯-3,5-二曱氧基-苯基)-l-甲基-H6-〖3-(4-甲基-哌 嗪-l-基甲基)-苯基氨基l-嘧咬-4-基V脲在氬氣中將光氣(在甲苯中20%, lmL， 2.0mmo1， 2.4當(dāng)量)加入2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯胺(221mg, l.Ommol， 1.2當(dāng)量)在二 惡烷(2.5mL)的溶 液中。將該混合物加熱至回流，攪拌1小時(shí)，冷卻至室溫，并在真空中濃 縮。在回流下在氬氣中，將所得異氰酸鹽加入N-甲基-N，-[3-(4-甲基-哌, -1-基甲基)-苯基]-嘧啶-4，6-二胺(步驟2.1)(259mg， 0.83mmol)在甲苯(5mL) 的溶液中。將該反應(yīng)混合物在回流下攪拌3小時(shí)，冷卻至室溫，并用DCM 和飽和NaHC03水溶液稀釋。分離水層并用DCM萃取。有才A^目用鹽水洗滌，干燥(Na2S04)，過(guò)濾并濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)珪膠柱色i普(DCM/MeOH + l %NH3aq，95: 5)純化以提供為黃色固體的標(biāo)題化合物ESI-MS: 560.0 / 562,0 [MHI+; tR= 3.26分鐘(純度99%,系統(tǒng)1); TLC: Rf = (U7(DCM/MeOH + 1 %冊(cè)3叫，9: 1)。步驟2.1: N-甲基-N，43-(4-甲基-哌喚-l-基甲基)-苯基l-嘧啶-4,6-二胺 將(6-氯-嘧咬-4-基)-曱基-胺(385mg， 2.68mmo1， 1.1當(dāng)量)、3-(4-曱基-哌喚-l-基甲基)-苯基胺(500mg， 2.44mmol)和4N的HC1在二 悉烷(7mL) 中的混合物在封閉的試管中加熱至150。C歷經(jīng)17.5小時(shí)。去除溶劑并將殘 余物用DCM和飽和NaHC03水溶液稀釋。分離水層并用DCM和 DCM/MeOH(95: 5)萃取。有機(jī)相用鹽水洗滌，干燥(Na2S04)，過(guò)濾并濃 縮。殘余物經(jīng)珪膠MPLC(DCM/MeOH + l %NH3aq， 95: 5)純化以提供 為駝色固體的標(biāo)題化合物ESI-MS: 313.MH+; tR= 1.00分鐘(純度 100%,系統(tǒng)l); TLC: Rf=0.05(DCM/MeOH + l %NH/q，9: 1)。歩驟2.2: 3-(4-曱基-哌喚-l-基甲基V苯基胺在氫氣中將l-甲基-4-(3-硝基-芐基)-派溱(6.9g， 29.14mmol)和拉尼鎳(2 g)在MeOH(150mL)的混懸液在室溫下攪拌5小時(shí)。反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻土 墊過(guò)濾并濃縮以提供為黃色固體的標(biāo)題化合物ESI-MS: 206.1 [MH廣。歩驟2.3: l-甲基-4-(3-硝基-爺基)-哌溱將3-硝基節(jié)基氯化物(5g,29.14mmol)、N-甲基旅噪(3.9mL， 34.97mmo1， 1.2當(dāng)量)、碳酸鉀(8g, 58.28， 2當(dāng)量)和丙酮(100mL)的混合物在回流下攪 拌15小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠 MPLC(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 95: 5)純化以提供為棕色油的標(biāo)題化合 物ESI-MS: 236.0 [MH+; tR= 1.40分鐘(純度100%,系統(tǒng)1);TLC: Rf = 0.31(DCM/MeOH + 1 % NH/q， 9: 1)。實(shí)施例3: 3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-l-(6-『3-(4-乙基-P底喚-l-基V 苯基絲1-嘧咬-4-基"-甲基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 559.9 / 561.9 [MH]+; tR= 3.75分鐘(純度100%,系統(tǒng)1); TLC: Rf = 0.37(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 92: 8)。步驟3.1: N-〖3-(4-乙基-哌喚-l-基)-苯基l-N，-曱基-嘧啶-4，6-二胺 標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟2.1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 313.MH+; tR= 1.20分鐘(純度100%,系統(tǒng)1);TLC: Rf = 0.10(DCM/MeOH+ 1 %冊(cè)3叫，9: 1)。步驟3.2: 3-(4-乙基-哌喚-l-基)-苯基胺標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟2.2所述的方法來(lái)制備API-MS: 206.2 [MH+; TLC: Rf = 0.31(DCM/EtOH， 9: 1)。歩驟3.3:1-乙基-4-(3-硝基-苯基)-哌嗪將l-氟-3-硝基苯(3.2mL，29.7mmol)和N國(guó)乙基-旅喚(7.6mL，59.4mmo1，2 當(dāng)量)的混合物加熱至回流并攪拌117小時(shí)。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫 并用H2O(40mL)和DCM/MeOH(9: 1， 80mL)稀釋。分離水層并用 DCM/MeOH(9: l)萃取。有機(jī)相用鹽水洗滌，干燥(Na2S04)，過(guò)濾并濃 縮。粗產(chǎn)物經(jīng)珪膠柱色i普(DCM/MeOH， 1: 0 > 95: 5)純化以提供為棕色 油的標(biāo)題化合物ESI-MS: 236.0 [MH]+; tR= 2.49分鐘(純度99%,系 統(tǒng)l); TLC: Rf = 0.26(DCM/MeOH， 95: 5)。實(shí)施例4: 3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-笨基)-1-甲基-1-{6-14-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基氨基l-嘧吱-4-基V脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 577.0 / 579.0 [MH+; tR= 3,53分鐘(純度95%，系統(tǒng)1); TLC:Rf =0.40(DCM/MeOH + 1 % NH/q， 93: 7)。步驟4.1: N-甲基-N，-4-(2-嗎啉-4-基-乙氣基)-苯基l-嘧咬-4，6-二胺 標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟1.1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 330.2 [MH+; tR= 1.10分鐘(純度100%,系統(tǒng)1);TLC: Rf = 0.16(DCM/MeOH+ 1 %冊(cè)3叫，93: 7)。實(shí)施例5: W6-f4-芐氧基-苯基絲)-嘧啶-4-基l-3-G,6-二氯-3,5-二甲 氣基-苯基Vl-甲基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 553.9 / 555.9MH+; tR= 5.16分鐘(純度100%,系統(tǒng)l)。步驟5.1: N-(4-爺氧基-苯基)-N，-曱基-嘧咬-4,6-二胺 標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟1.1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 307.MH+; tR= 3.72分鐘(純度100%,系統(tǒng)l)。實(shí)施例6: 3-(2,6-二氯-3,5-二曱氧基-苯基)-l-『6-"-羥基-苯基氨基)-嘧 啶_4_基1_1-曱基-脲在氫氣中將l-6-(4-芐氧基-苯基M)-嘧啶-4-基]-3-(2，6-二氯-3，5-二甲 氧基-苯基)-l-甲基-脲(實(shí)施例5)(67mg， 0.121mmo1)、鈀碳(20mg)和 MeOH(3.5mL)的混懸液在室溫下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻土墊過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜純化以提供為棕色固體的標(biāo)題化合物 ESI-MS: 464.2 / 466.2 [MH+; tR= 3.91分鐘(純度100%，系統(tǒng)l)。實(shí)施例7: l-(2誦氯畫(huà)3,5畫(huà)二甲氧基畫(huà)6-曱基畫(huà)苯基)畫(huà)3-{6誦4-(4-乙基-旅喚-l畫(huà) 基)-苯基氨基1-嘧咬-4-基}-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 526.1 / 528.1 [MH+; tR= 3.12分鐘(純度100%，系統(tǒng)1); TLC:Rf =0.13(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 93: 7)。步驟7.1: N-『4-(4-乙基-派溱-l-基)-苯基l-嘧咬-4,6-二胺 標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟1.1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 299.1 [MH+; tR= 1.00分鐘(純度>95%，系統(tǒng)l)。步驟7.2: 4-(4-乙基哌喚-l-基)-苯胺在氫氣中將l-乙基-4-(4-硝基-苯基)-哌喚(6.2g， 26.35mmol)和拉尼鎳(2 g)在MeOH(120mL)的混懸液在室溫下攪拌7小時(shí)。將反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻 土墊過(guò)濾并濃縮以提供為紫色固體的標(biāo)題化合物ESI-MS: 206.MH+; TLC: Rf = 0.15(DCM/MeOH + 1 % NH/q, 9: 1)。步驟7.3:1-乙基-4-(4-硝基-苯基V哌喚將l-溴畫(huà)4-硝基苯(6g， 29.7mmol)和l-乙基旅喚(7.6mL，59.4mmo1，2當(dāng) 量)的混合物加熱至80""C歷經(jīng)15小時(shí)。冷卻至室溫后，將該反應(yīng)混合物用 水和DCM/MeOH， 9: 1稀釋。分離水層并用DCM/MeOH， 9: 1萃取。有 機(jī)相用鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)，過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜 (DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 9: l)純化以提供為黃色固體的標(biāo)題化合物 ESI畫(huà)MS: 236.0MH]+; tR= 2,35分鐘(純度100%，系統(tǒng)l); TLC: Rf 二 0.50(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 9: 1)。歩驟7.4: 2-氯-3,5-二曱氧基-6-甲基-苯基-胺在氬氣中將HCl(91mL， 360mmo1， 8當(dāng)量，4N在二巧惡烷中)逐滴加入冷 卻的(10。C)(2-氯-3，5-二甲氧基-6-甲基-苯基)-氨基甲酸叔丁基酯(13.8g, 45.7mmol)在二 惡烷(150mL)的溶液中。將該反應(yīng)混合物溫至室溫，攪拌 24小時(shí)并濃縮。殘余物用EtOAc稀釋?zhuān)蔑柡蚇aHC03水溶液和鹽水洗 滌，干燥(Na2S04),過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)從DCM/己烷中結(jié)晶純化以提 供標(biāo)題化合物。ESI-MS: 202.0 [MH]，TLC: Rf = 0.37(DCM)。步驟7.5: (2-氯-3,5-二甲lL^-6-曱基-苯基)-氨基甲酸叔丁基酯 在氬氣中將磺酰基氯化物(6.7mL， 79.8mmo1， 1,05當(dāng)量)在 DCM(140mL)的溶液逐滴(75分鐘)加入冷卻的(-15。C)(3，5-二甲氧基-2-曱 基-苯基)-tJ^甲酸叔丁基酯(20.4g， 76.3mmol)在THF(330mL)的溶液中。 反應(yīng)混合物在-15。C攪拌3小時(shí)并隨后倒在冰/H2O(400mL)、飽和NaHC03 水溶液(400mL)和EtOAc(400mL)的混合物上。分離各層并用EtOAc(2 x 200mL)萃取水相。用H2O(3x200mL)和鹽水(200mL)洗滌合并的有;W目， 干燥(Na2S04),過(guò)濾并濃縮。殘余物在乙醚中研磨并隨后經(jīng)硅膠柱色i普(己 烷/丙酮，95: 5)純化以提供標(biāo)題化合物。ESI-MS: 302.MH廣，TLC: Rf =0.13(己烷/丙酮，9: 1)。步驟7.6: (3,5-二甲氧基-2-曱基-苯基)-絲曱酸叔丁基酯 在氬氣中將叔丁基鋰(200mL， 340mmo1， 2.4當(dāng)量，在戊烷中1.7M)溶 液逐滴加入冷卻的(-65。C)(3，5-二甲氧基-苯基)-氨基甲酸叔丁基酯(36.1g， H2mmol)在THF(250mL)的溶液中。在-65。C下攪拌該混合物15分鐘并隨 后溫至-25。C。隨后加入械甲烷(10.7mL， 171mmo1， 1.2當(dāng)量)在THF(140mL) 的溶液。將反應(yīng)混合物在-25。C攪拌1小時(shí)后倒在冰/H2O(300mL)和 EtOAc(300mL)的混合物上。分離各層并用EtOAc(2 x 150mL)萃取水相。 用H20(3 x 150mL)和鹽水(200mL)洗滌合并的有機(jī)相，干燥(Na2S04)，過(guò) 濾并濃縮。殘余物經(jīng)珪膠柱色譜(己烷/丙酮，95: 5 — 9: 1—4: l)純化以 提供標(biāo)題化合物。ESI-MS: 268.1 [MH]+，TLC: Rf = 0.25(己烷/丙酮，9:1)。步驟7.7: (3，5-二曱氧基-苯基)-氨基甲酸叔丁基酯在氬氣中將二叔丁基二碳酸酯(145g， 651mmol， 1.3當(dāng)量)在 THF(200mL)的溶液在室溫下逐滴加入3，5-二甲氧基苯胺(78.2g， 500mmo1) 在THF(1.5L)的溶液。加熱該反應(yīng)混合物至回流歷經(jīng)4.5小時(shí)(加熱時(shí)，見(jiàn)察到大量的氣體放出)，冷卻至室溫并濃縮。用EtOAc(800mL)和H2O(800mL) 稀釋殘余物。分離各層并用EtOAc(2 x 200mL)萃取水相。用0.1N的 HCl(200mL)、 H20和鹽水洗滌合并的有;M目，干燥(Na2S04)，過(guò)濾并濃縮。 殘余物經(jīng)DCM/己烷結(jié)晶以提供標(biāo)題化合物。ESI-MS: 252.1 [M-HJ-， TLC: Rf-0.34(己烷/EtOAc，3: 1)。實(shí)施例8: 3-(2-氯-3,5-二曱氧基-6-甲基-苯基)-1-{6-『4-(4-乙基-旅喚-l-基)-苯基絲1-嘧咬-4-基}-1-甲基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例1所述的方法來(lái)制備ES1-MS: 540.1 / 542.1 [MH+; tR= 3.56分鐘(純度100%,系統(tǒng)1); TLC: Rf = 0.13(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 93: 7)。實(shí)施例9: 3-(2-氯-3,5-二曱氧基-6-甲基-苯基)-1 - {6-4-(2-二甲基氛基-乙氧基)-苯基氨基卜嘧啶-4-基卜1-甲基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 515.2 / 517.2 [MH+; tR= 3.47分鐘(純度>95%，系統(tǒng)l)。歩驟9.1: N-4-(2-二曱基絲-乙氧基)-苯基l-N，-甲基-嘧啶-4,6-二胺 標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟1.1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 288.2 [MH]+; tR= 0.95分鐘(純度95%,系統(tǒng)l)。歩驟9.2: 4-(2-二甲基氨基-乙氧基〗-苯基胺標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟1.2所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 181.MH]+; TLC: Rf = 0.18(DCM/MeOH， 7: 3)。實(shí)施例10: 3-(2-氯-3,5-二甲氧基-6-甲基-苯基)-l-曱基-(6-{4-〖2-(4-曱 基-p底喚-l-基)- 乙氧基卜苯基氨基卜嘧咬-4-基)-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 570.0[MH+; tR= 3.20分鐘(純度卯％，系統(tǒng)1)， TLC: Rf = 0，13(DCM/MeOH + 1 %冊(cè)3叫，93: 7)。步驟10.1: N-甲基-N，-M-『2-(4-甲基-哌嗪-l-基)-乙氧基l-苯基i-嘧咬 一4，6畫(huà)二胺標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟1.1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 343.2 [MH+; tR= 100分鐘(純度95%，系統(tǒng)1)， TLC: Rf = 0.23(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 9: 1)。實(shí)施例11: 3-(2-氯-6-碘-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-4-(4-乙基-哌嗪-l-基)-苯基氨基卜嘧咬-4-基Vl-甲基-脲標(biāo)題4匕合物以類(lèi)似于實(shí)施例1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 651.8 / 653.7 [MH+; tR= 3.20分鐘(純度95%,系統(tǒng)1)， TLC: Rf = 0.18(DCM/MeOH + 1 %冊(cè)3叫，93: 7)。步驟11.1 N-『4-(4-乙基-哌喚-l-基)-苯基l-N，-甲基-嘧啶-4，6-二胺 標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟1.1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 313.2 [MH]+; tR-1.10分鐘(系統(tǒng)l); TLC: Rf = 0.21(DCM/MeOH， 93: 7)。歩驟11.2: 2-氯-6-碘-3,5-二曱氣基-苯基-胺在氬氣中將HCl(6.46mL，26mmo1，9.1當(dāng)量，在二 悉烷中4N)加入冷卻 的(10。C)(2-氯-3，5-二甲氧基-6-甲基-苯基)-氨基甲酸叔丁基酯(1.28g， 2.85mmol，92%純度)在二5悉烷(10mL)的溶液中。將該反應(yīng)混合物溫至室 溫并隨后攪拌1.5小時(shí)。用EtOAc和冰/水稀釋該殘余物，并通過(guò)加入飽和 NaHC03水溶液將其調(diào)至堿性。分離各層。水層用EtOAc萃取。有機(jī)相用 鹽水洗涂，干燥(Na2S04)，過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠柱色i普(DCM) 純化以提供標(biāo)題化合物。API陽(yáng)ES-MS: 314.0MH]+， TLC: Rf = 0.53(DCM)。步驟11.3: (2-氯-6-碘-3,5-二甲氧基-苯基)-氨基甲酸叔丁基酯 在氬氣中將碌?；然?0.92mL， ll.Ommol， 1.16當(dāng)量)在 DCM(20mL)的溶液逐滴(30分鐘)加入冷卻的(-15。C)(2-碟-3，5-二甲l^-苯 基)-氨基甲酸叔丁基酯(3.6g， 9.49mmol)在THF(48mL)的溶液中。在-15。C 攪拌該反應(yīng)混合物1小時(shí)并隨后將其倒在水/H2O(100mL)、飽和NaHC03 水溶液(80mL)和EtOAc(100mL)的混合物上。分離各層并用EtOAc(2 x 100mL)萃取水相。用H2O(3x60mL)和鹽水(60mL)洗滌合并的有;M目，干 燥(Na2S(X0，過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)珪膠柱色鐠(DCM)純化后經(jīng)DCM/ 己烷結(jié)晶以提供標(biāo)題化合物。ESI畫(huà)MS: 411.9， 413.9 [M-H卩，TLC: Rf = (U8(DCM/己烷，7: 3)。步驟11.4: (2-碘-3,5-二甲氧基-苯基)-氨基曱酸叔丁基酯 在氬氣中將叔丁基鋰(14.1mL，24mmo1，2.4當(dāng)量，在戊烷中1.7M)溶液 逐滴(15分鐘)加入冷卻的(-65。C)(3，5-二甲氧基-苯基)-氨基甲酸叔丁基酯 (2.53g， 10mmol)在THF(18mL)的溶液中。在-65。C下攪拌該混合物15分 鐘后將其升溫至-25。C。將過(guò)量的三氟碘甲烷通入該黃色反應(yīng)混合物。將所 得黑色混合物倒在冰/H2O(60mL)和EtOAc(60mL)的混合物上。分離各層 并用EtOAc(2 x 30mL)萃取7jC相。用H20(3 x 40mL)和鹽水(60mL)洗滌合 并的有機(jī)相，干燥(Na2S04)，過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜(DCM/己 烷，2: l)純化以提供標(biāo)題化合物。ESI-MS: 380.1 [MH+， TLC: Rf = 0.27(DCM/己烷，2: 1)。歩驟11.5: (3,5-二甲氧基-苯基)-氨基甲酸叔丁基酯將二叔丁基二碳酸酯(69.5g， 312mmo1， 1.3當(dāng)量)在THF(100mL)的溶 液加入3,5-二甲氧基苯胺(37.5g， 240mmol)在THF(600mL)的溶液中。加 熱該反應(yīng)混合物至回流歷經(jīng)3小時(shí)，將其冷卻至室溫，攪拌過(guò)夜并濃縮。 將殘余物在EtOAc(500mL)和H2O(500mL)之間分配。分離各層并用EtOAc(2 x 100mL)萃取水相。用0.1N HC1(2 x 100mL)、 H20和鹽水洗滌 合并的有才M目，干燥(Na;tS04)，過(guò)濾并濃縮。殘余物用己烷研磨純化以提 供標(biāo)題化合物。ESI-MS: 254.1 [MH+， TLC: Rf = 0，42(己烷/EtOAc， 3: 1)。實(shí)施例12: 3-(2-氯-3,5-二曱氧基-6-曱基-苯基)-1-{6-4-(4-異丙基-哌 溱-1-基)-苯基氨基1-嘧咬-4-基}-1-曱基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 554.0 / 555.0 [MH+; tR= 3.49分鐘(純度>95%，系統(tǒng)1)， TLC: Rf = 0.13(DCM/MeOH + 1 % NH/q， 93: 7)。步驟12,1: N-4-(4-異丙基-哌喚-l-基V苯基l-N，-甲基-嘧咬-4,6-二胺 標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟1.1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 288.MH+; tR= 0.95分鐘(純度95%，系統(tǒng)l)。步驟12,2: 4-(4-異丙基派，秦-l-基)-苯胺在氫氣中將l-異丙基-4-(4-硝基-苯基)-哌溱(5.18g， 20.80mmol)和5% 釔碳(0.5 g)在MeOH(100mL)的混懸液在室溫下攪拌2.7小時(shí)。將反應(yīng)混合 物經(jīng)硅藻土墊過(guò)濾并濃縮以提供為紫色固體的標(biāo)題化合物ESI-MS: 220.1 [MH]+; tR= 0.95分鐘(系統(tǒng)1)。歩驟12.3:1-異丙基-4-(4-硝基-苯基)-P底噢將l-溴畫(huà)4-硝基苯(6g， 29.7mmol)和l曙乙基旅嚷(7.6mL， 59.4mmo1， 2當(dāng) 量)的混合物加熱至80。C歷經(jīng)15小時(shí)。冷卻至室溫后，濃縮該反應(yīng)混合物。 殘余物經(jīng)硅膠柱色i普(DCM/MeOH ， 95: 5)純化以提供為黃色固體的標(biāo)題 化合物ESI-MS: 250.1 [MH+; tR= 2.57分鐘(純度100%，系統(tǒng)1); TLC: Rf=0.16(DCM/MeOH，95: 5)。實(shí)施例13: 1-{6-4-"-芐基-哌喚-1-基)-苯基氨基1-嘧咬-4-基}-3"2.6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-l-甲基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 621.9 / 623.9 [MHj+; tR= 4.04分鐘(純度100%,系統(tǒng)l)。步驟13.1: N44-(4-芐基-哌喚-l-基)-苯基l-N，-曱基-嘧咬-4，6-二胺 標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟1.1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 375.1 IMH]+; tR= 2.36分鐘(純度95%,系統(tǒng)1)。歩驟13.2: 4-(4-爺基-旅喚-l-基V苯基胺將鐵粉(5.4g， 97mmo1， 4當(dāng)量)分成幾部分加入80。C的l-千基-4-(4-硝 基-苯基)-p底噪(7.2g ， 24.2mmo1) 、 EtOH(l 50mL) 、 H2O(40mL)和AcOH(20mL) 的混合物中。將該反應(yīng)混合物在80。C下攪拌1.75小時(shí)，冷卻至室溫并濃縮。 用EtOAc和飽和Na2C03水溶液稀釋該殘余物。分離各層并用EtOAc萃 取水相。用鹽水洗滌合并的有機(jī)相，干燥(Na2S04)，過(guò)濾并濃縮以提供標(biāo) 題化合物ES-MS: 268，MH廣；在tR= 1.30分鐘時(shí)單峰(系統(tǒng)1)。歩驟13.3: l-爺基-4-(4-硝基-苯基)-派溱將l-溴陽(yáng)4-硝基苯(5g， 24,8mmol)和l畫(huà)千基派漆(8.6mL， 49.5mmo1， 2當(dāng)量)的混合物加熱至80。C歷經(jīng)17小時(shí)。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并用 DCM/H20稀釋。分離各層并用DCM萃取水相。用鹽水洗滌合并的有機(jī) 相，干燥(Na2S04)，過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜(己烷/EtOAc， 1: l)純化以提供為黃色固體的標(biāo)題化合物ESI-MS: 298.3 [MH+; tR= 3.25 分鐘(純度100%,系統(tǒng)l)。實(shí)施例14: 3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-甲基-1-『6-(4-哌溱-1-基-苯基氨基)-嘧咬-4-基l-脲在氫氣中將1-{6-[4-(4-芐基-哌溱-1-基)-苯基#^-嘧啶-4-基}-3-(2，6-二氯隱3，5-二甲氧基-6-甲基-苯基)-l-甲基-脲(100mg， 0.161mmol)(實(shí)施例13)、 釔碳(30mg)、 MeOH(6mL)和HC1(37%， 16L)的混懸液在室溫下攪拌5天。 過(guò)濾并濃縮該反應(yīng)混合物。殘余物經(jīng)珪膠柱色鐠(DCM/2NNH3在MeOH 中，95: 5)純化以提供為駝色固體的標(biāo)題化合物ESI-MS: 532.0/534.0MH+; tR= 3.39分鐘(純度100%，系統(tǒng)l)。實(shí)施例15: 3-(2-氯-3,5-二曱氧基-6-曱基-苯基M-6-(3-二甲基絲曱 基-苯基絲)-嘧咬-4-基1-1-甲基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 485.0 / 487.0 [MH]+; tR= 3.69分鐘(純度100%，系統(tǒng)1)。實(shí)施例16: 3-(2-氯-3，5-二曱氧基-6-甲基-苯基)-1-{6-『3-(4-乙基-派喚 -1-基)-苯基氨基1-嘧咬-4-基"-曱基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 540.0 / 542.0 [MH]+; tR= 3.74分鐘(純度100%,系統(tǒng)l)。實(shí)施例17: 3-(2-氯-3，5-二甲IU^6-甲基-苯基)-l-曱基-l-(6-f4-(2-吡咯 烷-l-基-乙氧基)-苯基氨基l-嘧咬-4-基Vl-曱基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 541.0 / 543.0 [MH+; tR= 3.66分鐘(純度100%,系統(tǒng)l)。步驟17.1: N-甲基-N，-4-(2-吡咯烷-l-基-乙氧基)-苯基l-嘧咬-4，6-二胺 標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟2.1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 314.MH廣；tR= 1.15分鐘(系統(tǒng)1); TLC: Rf = 0.15(DCM/MeOH + 1 % NH3aq，9: 1)。歩驟17.2: 4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基胺標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟1.2所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 207.1[MH+; TLC: Rf = 0.22(DCM/MeOH， 1: 1)。實(shí)施例18: 3-(2-氯-3,5-二甲氧基-6-甲基-苯基)-1-曱基-1-{6-3-氟-4"2-吡咯烷-l-基-乙緣)-苯基絲l-嘧咬-4-基卜l-甲基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 578.9 / 580.9 [MH+; tR= 3.96分鐘(純度100%,系統(tǒng)1); TLC: Rf = 0.38(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 92: 8)。步驟18.1: N-3-氟-4-(2-吡咯烷-l-基-乙氧基)-苯基l-N，-甲基-嘧咬-4.6-二胺標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟1.1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 332.2 1MHj+; tR= 130分鐘(系統(tǒng)1); TLC: Rf = 0.37(DCM/MeOH + 1 % NH/q， 99: 1)。步驟18.2: 3-氟-4-(2-吡咯烷-1-基-乙氣基)-苯基胺在氫氣中將l-[2-(2-氟-4-硝基-苯氧基)-乙基-吡咯烷(1.25g， 4.92mmo1) 和10%釔碳(0.2 g)在EtOH(20mL)的混懸液在室溫下攪拌1小時(shí)。將反應(yīng) 混合物經(jīng)硅藻土墊過(guò)濾并濃縮以提供為棕色油的標(biāo)題化合物ESI-MS: 225.1 [MH+; tR= 0.80分鐘(系統(tǒng)1)。歩驟18.3: 142-(2-氟-4-硝基-苯氧基)-乙基l-吡咯烷 將l-(2-氯-乙基)-吡咯烷鹽酸化物(1.2g，7.0mmo1， 1.1當(dāng)量)加入2-氟-4-硝基苯酚(lg, 6.4mmol)和碳酸銫(5.2g， 15.9mmo1， 2.5當(dāng)量)在DMF(20mL) 的混懸液中。將所得混合物加熱至80。C并攪拌18小時(shí)。加入額外的1-(2-氯-乙基)-吡咯烷鹽酸化物(lg)并在80。C下攪拌該混合物3小時(shí)。將反應(yīng)混 合物冷卻至室溫，用EtOAc和H20稀釋。分離各層并用EtOAc萃取水層。 用H20洗滌有機(jī)相，干燥(Na2S04)，過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜 (DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 95: 5)純化以提供為黃色固體的標(biāo)題化合物。ESI-MS : 255.MH+ ; tR= 2.57分鐘(系統(tǒng)1) ; TLC : Rf = 0.55(DCM/MeOH + 1 % NH3aq, 95: 5)。實(shí)施例19: 342,6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-1-{6-14"1-乙基-哌啶-4-基)-苯基絲1-嘧咬-4-基}-1-甲基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 558.9 / 560.9MH廣；tR= 3.85分鐘(純度100%，系統(tǒng)1); TLC: Rf = 0.14(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 95: 5)。步驟19.1: N-4-(l-乙基-哌咬-4-基)-苯基-1\，-甲基-嘧咬-4,6-二胺 標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟1.1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 312.MH1+; tR= 1.3分鐘(系統(tǒng)1); TLC: Rf = 0.27(DCM/MeOH + 1 % NH/q，92: 8)。步驟19.2: 4-(1-乙基-哌咬-4-基)-苯基胺在氫氣中將l-乙基-4-(4-硝基-苯基)-哌啶(0.8g, 4，92mmol)和10%鈀 碳(O.l g)在EtOH(10mL)中的混懸液在室溫下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)混合物 經(jīng)硅藻土墊過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠柱色譜(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 95: 5)純化以提供標(biāo)題化合物。ESI-MS: 205.1 [MH+; TLC: Rf = 0.29(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 95: 5)。歩驟19.3:1-乙基-4-(4-硝基-苯基)-哌啶將三乙酰氧基硼氬化鈉(3.1g， 14.6mmo1，3當(dāng)量)加入冷卻的(5。C)4-(4-硝基-苯基)-派咬(lg， 4.9mmol)和乙醛(0.82mL， 14.6mmo1， 3當(dāng)量)在 DCM(20mL)的溶液中。將該反應(yīng)混合物在5'C下攪拌1小時(shí)后用DCM和 NaHC03飽和水溶液稀釋。分離各層并用DCM萃取水層。有才^4目用鹽水 洗滌，干燥(Na2S04)，過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠柱色鐠(DCM/MeOH + l%NH3aq，98: 2)純化以提供為黃色油的標(biāo)題化合物。ESI-MS: 235.1[MHI; tR= 2.64分鐘(純度85%，系統(tǒng)1);TLC: Rf = 0.14(DCM/MeOH + 1 % NH/q， 98: 2)。步驟19.4: 4-f 4-硝基-苯基)-哌咬將濃H2S04(2.65mL)在AcOH(40mL)的溶液和濃HNO:j(2.1mL)在 AcOH(20mL)的溶液依此逐滴加入4-苯基哌咬在AcOH(40mL)的溶液中， 保持溫度低于20。C。然后，加入濃H2SO4(40mL)(不進(jìn)行冷卻；內(nèi)部溫度 達(dá)到60'C)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，將其倒在冰/水(100 g)上，通itia 入固體NaHC03(150 g)中和，并用DCM萃取。有才;^目用鹽水洗滌，干燥 (Na2S04)，過(guò)濾并濃縮。殘余物在Et20中研磨純化以提供為黃色固體 的標(biāo)題化合物。ESI-MS: 207.1 [MH+; tR= 2.42分鐘(系統(tǒng)1)。實(shí)施例20: 3-(2,6-二氯-3,5-二曱氧基-苯基)-l-乙基-1-{6-4-(4-乙基-哌嗪-l-基)-苯基絲l-嘧咬-4-基V脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 573.9 / 575.9 [MH]+; tR= 3.69分鐘(純度100%，系統(tǒng)l)。歩驟20.1: N-乙基-N'-4-(4-乙基-哌噢-l-基)-苯基卜嘧咬-4,6-二胺 標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟1.1所述的方法來(lái)制備 ESI-MS: 327.MH]+; 、=1.5分鐘(系統(tǒng)1)。實(shí)施例21: 3-(2,6-二氯-3,5-二曱猛-苯基)-1-{6-〖2-氟-4-(2-處咯烷-1-基-乙氧基)-苯基氨基1-嘧啶-4-基卜1-曱基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 578.9 / 580.9 [MH]+; tR= 3.79分鐘(純度100%,系統(tǒng)1)。歩驟21.1: N畫(huà)『2-氟-4畫(huà)(2-吡咯烷-l畫(huà)基畫(huà)乙氧基)-苯基l畫(huà)N，-曱基畫(huà)嘧啶畫(huà)4,6隱二胺標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟2.1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 332.2 [MH+。步驟21.2: 2-氟-4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基胺在氫氣中將l-[2-(3-氟-4-硝基-苯氧基)-乙基-吡咯烷(1.96g， 7.7mmo1) 和10%把碳(0.2 g)在MeOH(40mL)中的混懸液在室溫下攪拌0.5小時(shí)。將 反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻土墊過(guò)濾并濃縮以提供標(biāo)題化合物。ESI-MS: 225.1 [MH+; tR= 0'95分鐘(系統(tǒng)1)。歩驟21,3: 1-『2-(3國(guó)氟-4-硝基-苯猛)-乙基l-吡咯烷 將l-(2-氯-乙基)-吡咯烷鹽酸化物(2.6g， 15.4mmo1， 1.3當(dāng)量)加入2-氟 -4-硝基苯酚(1.84g， 11.7mmol)和碳酸銫(9.1g， 27，9mmo1， 2.5當(dāng)量)在 DMF(40mL)的混合物中。將所得混合物加熱至8(TC并攪拌3小時(shí)。將反 應(yīng)混合物冷卻至室溫后，用DCM和H20稀釋。分離各層并用DCM萃取 水層。有機(jī)相用鹽水洗滌，干燥(Na2SOj，過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠 柱色語(yǔ)(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 97: 3)純化以提供1.96g為暗黃的固體 的標(biāo)題化合物。ESI-MS: 255.1 [MH]+; tR= 2.55分鐘(純度93%，系統(tǒng) 1); TLC: Rf = 0.40(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 93: 7)。實(shí)施例22: 3-(2,6-二氯-3,5-二曱氧基-苯基)-1-{6-『4-(4-乙基-哌嗪-l-基)-2-甲氧基-苯基氨基卜嘧咬-4-基1-1-甲基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方法來(lái)制備API-MS: 589.9 / 591.8MH+; tR= 3.59分鐘(系統(tǒng)1); TLC: Rf = 0.13(DCM/MeOH + 0.5 %NH3aq，95: 5)。步驟22.1: N-4-(4-乙基-哌溱-l-基)-2-甲氧基-苯基l-N'-曱基-嘧咬-4,6-二胺標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟1.1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 343.2[MH+; 、=1.30分鐘(系統(tǒng)1)。步驟22.2: 4-(4-乙基-哌喚-1-基)-2-甲絲-苯基胺在氫氣中將l-乙基-4-(3-甲氧基-4-硝基-苯基)-哌噪(4g， 15.1mmol)和拉 尼鎳(l g)在MeOH(80mL)中的混懸液在室溫下攪拌10.5小時(shí)。將反應(yīng)混合 物經(jīng)硅藻土墊過(guò)濾并濃縮以提供為棕色油的標(biāo)題化合物ESI-MS: 236.2 [MH+; tR= 0.95分鐘(系統(tǒng)1)。步驟22.3:1-乙基-4-(3-曱氧基-4-硝基-苯基)-旅喚 標(biāo)題化合物以類(lèi)似于在步驟248.3中所述的方法來(lái)制備ESI-MS:266.1 [MH]+。實(shí)施例23: 3-(2,6-二氯-3,5-二曱氧基-苯基)-146-4-(4-乙基-咪喚-l-羰基)-苯基氨基1-嘧咬-4-基}-1-甲基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例233所述的方法來(lái)制備API-MS: 587.8 / 589.8 [MH]+; tR= 3.58分鐘(純度94.8%,系統(tǒng)1); TLC: Rf = 0.47(DCM/2N NH3在MeOH中，9: 1)。歩驟23.1: (4-乙基-哌嗪-l-基)-4-(6-曱基氨基-嘧啶-4-基M)-苯基l-曱酮在氬氣中在室溫下將丙基磷酸酐(50% in DMF， 2.72mL， 4.7mmol， 2當(dāng) 量)加入4-(6-甲基氨基-嘧咬-4-基M)-苯甲酸(0.570g, 2.33mmol)、 N-乙基 4#<0.33mL， 2.57mmol， 1.1當(dāng)量)、DMAP(7mg)和Et3N(3.3mL， 23.3mmol, 10當(dāng)量)在DMF(25mL)的溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，用 EtOAc稀釋并用H20洗滌。用EtOAc萃取水層。用鹽水洗涂合并的有機(jī) 相，干燥(Na2S04),過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠柱色語(yǔ)(DCM — DCM/2N NHb在MeOH中，86: 14)純化以提供為黃的泡沐的標(biāo)題化合物ES-MS:341.2 [MH]+; tR= 1.00分鐘(系統(tǒng)1); Rf = 0.33(CH2Cl2/2 N冊(cè)3在MeOH中，9: 1)。步驟23.2: 4-(6-甲基絲-嘧咬-4-基絲V苯甲酸 標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟2.1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 245.0MH+; 、=1.58分鐘(系統(tǒng)1)。實(shí)施例24: 3-a6漏二氯羅3,5羅二甲氧基-苯基)-1-{6-4"4畫(huà)乙基-哌湊-l畫(huà) 基)-3-氟-苯基氨基l-嗜咬-4-基Vl-曱基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方法來(lái)制備API-MS: 577.9 / 579.9 [MH+; tR= 3.87分鐘(純度卯％，系統(tǒng)1); TLC: Rf = 0.20(DCM/MeOH + 1 %冊(cè)3叫，95: 5)。步驟24.1: N-4-(4-乙基-哌喚-l-基)-3-氟-苯基l-N'-甲基-嘧咬-4,6-二胺 標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟2.1所述的方法來(lái)制備，但在微波裝置中在160。C攪拌該反應(yīng)混合物15分鐘。粗產(chǎn)物經(jīng)在EtOAc中研磨純化以提供標(biāo)題化合物ESI-MS: 331.2 [MH]+。歩驟24.2: 4-(4-乙基-旅喚-l-基)-3-氟-苯基胺在氫氣中將l-乙基4-(2-氟4-硝基-苯基)-哌嗪(l.!2化，1S.lmmol)和拉 尼鎳(13mg)在MeOH(6mL)中的混懸液在室溫下攪拌17小時(shí)。將反應(yīng)混合 物經(jīng)硅藻土墊過(guò)濾并濃縮以提供為紫紅色油的標(biāo)題化合物ESI-MS: 224.1 [MH+; 、=0.90分鐘(系統(tǒng)1)。歩驟24.3:1-乙基-4-(2-氟-4-硝基-苯基)-哌喚將N-乙基旅噪(0.96mL， 7.6mmo1， 1.2當(dāng)量)加入3，4-二氟硝基苯(0.7mL 6.32mmol)和碳酸鉀(1.74g， 12.6mmo1， 2當(dāng)量)在DMF(10mL)的混合物中。 將該反應(yīng)混合物在9(TC攪拌17小時(shí)，冷卻至室溫，用H20稀釋并用DCM 萃取。有機(jī)相用鹽水洗滌，干燥(Na2S04)，過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)珪膠柱色譜(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 97: 3)純化以提供為黃色固體的標(biāo)題化 合物ES-MS: 254.1 [MH+; tR= 2.65分鐘(系統(tǒng)1); Rf = 0.30(DCM/MeOH + 1 % 93: 7)。實(shí)施例25: 3-(2,4-二氯-5-甲氧基-3-三氟甲基-苯基)-1-{6-4-(4-乙基-哌喚-1-基)-苯基絲1-嘧咬-4-基}-1-曱基-脲在氮?dú)庵袑⒐鈿?在甲苯中20%, 0.54mL， l.Ommol， 2.0當(dāng)量)加入2，4-二氯-5-甲氧基-3-三氟曱基苯胺(156mg， 0.60mmo1, 1.2當(dāng)量)在二嚅烷(2mL) 的溶液中。將該混合物加熱至回流，攪拌75分鐘，冷卻至室溫，并在真空 中濃縮。在氮?dú)庵袑⑺玫墓腆w2，4-二氯-5-甲氧基-3-三氟甲基-苯基異氰酸 酯分幾部分加入沸騰的N-4-(4-乙基-哌溱-l-基)-苯基卜N，-甲基-嘧啶-4，6-二 胺(156mg， 0.50mmol;制備方法參見(jiàn)步驟25.5)在6mL甲苯的溶液中。將 該反應(yīng)混合物在110。C攪拌3.3小時(shí)，冷卻至室溫，并用DCM和飽和 NaHC03水溶液稀釋。分離水層并用dcm萃取兩次。有機(jī)相用鹽水洗滌， 干燥(Na2SOj，過(guò)濾并濃縮。用兩部分MeOH研磨所得固體以獲得標(biāo)題 化合物ESI-MS: 598/600 [MH+; tR= 5.1分鐘(純度97%,系統(tǒng)l)。步驟25.1: 2,4-二氯-5-甲氧基-3-三氟曱基苯胺將2M的KOH水(1.87mL)溶液加入N-(2，4-二氯-5-甲^J^3-三氟甲基 -苯基)-乙酰胺(104mg， 0.344mmol)在EtOH(3mL)的溶液中。在80。C攪拌 3.5小時(shí)后冷卻至室溫，蒸干溶劑并將殘余物溶于EtOAc和飽和NaHC03 水溶液中。分離的水層用EtOAc萃取兩次。有機(jī)相用鹽水洗滌，干燥 (Na2S04)，過(guò)濾并濃縮，以提供標(biāo)題化合物ESI-MS: 258/260 [M-H-; tR= 4.8分鐘(系統(tǒng)1); TLC: Rf = 0.54(EtOAc)。步驟25.2: N-(2，4-二氯-5-曱氧基-3-三氟甲基-苯基)-乙酰胺 在氮?dú)庵袑-(5-甲氧基-3-三氟甲基-苯基)-乙酰胺(233mg， l.Ommol)溶液在冰浴中冷卻(沉淀)。然后加入im的so2a2& dcm中的溶液1.93mL。 2小時(shí)后，再加入1.93mL的S02Cl2溶液并在0。C連續(xù)攪拌共4 小時(shí)。用DCM和飽和NaHC03水溶液稀釋該混懸液。用DCM萃取分離 的無(wú)機(jī)相兩次。用水和鹽水洗滌有樹(shù)目，干燥(Na2S04)，過(guò)濾并濃縮。柱 色譜(己烷/EtOAc，7: 3)以提供標(biāo)題化合物mp: 143-144。C; API-MS: 300 / 302 [M畫(huà)H；TLC: Rf = 0.23(己烷/EtOAc， 1: 1); 'H畫(huà)NMR(DMSO-d6) 5 2.13(s， H3C)， 3.88(s, H3C)， 7.84(s, H苯基)，9.81(s， HN)。步驟25.3: N-(5-曱氧基-3-三氟甲基-苯基)-乙酰胺在25-33。C的溫度下將乙酸酐(1.22mL， 12.8mmol)歷經(jīng)10分鐘加入5-甲氧基-3-三氟甲基-苯胺(2.29g， 12.0mmol)在甲苯(10mL)的溶液中。在室 溫下90分鐘后，加入己烷(10mL)并將該混懸液攪拌20分鐘。過(guò)濾，用甲 苯/己烷2: 1和己烷洗滌以提供標(biāo)題化合物mp: 123-124°C; API-MS: 234[MH+; TLC: Rf = 0.27(己烷/EtOAc， 1: 1)。歩驟25.4: 5-甲氣基-3-三氟甲基-苯胺在Pd-C(0.62g， 10%)的存在下將3_甲氧基-5-硝基三氟甲基苯(6.19經(jīng)， 28mmol)在MeOH(140mL)的溶液進(jìn)行氫化，經(jīng)過(guò)濾除去催化劑并在真空 下濃縮所得濾液以提供標(biāo)題化合物API-MS: 190 [M-H]-; TLC: Rf = 0.7(EtOAc)。歩驟25.5: N-4-(4-乙基-派喚-l-基V苯基l-N，-曱基-嘧啶-4,6-二胺 將4-(4-乙基哌療-l-基)-苯胺(lg，4.8811111101)(類(lèi)似于實(shí)施例"8的方法 制備，步驟238.1)、 (6-氯-嘧咬-4-基)-甲基-胺(1.81g， 12.68mmo1，1.3當(dāng)量) 和4N的HC1在二巧悉烷(15mL)的混合物在封閉的試管中加熱至150。C歷經(jīng) 5小時(shí)。濃縮該反應(yīng)混合物，用DCM和飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋。分離水層并用dcm萃取。用鹽水洗滌有4;i4目，干燥(硫酸鈉)，過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)珪膠柱色譜(DCM/MeOH， 93: 7)純化后經(jīng)在乙醚中研磨以提供 為白色固體的標(biāo)題化合物ESI-MS: 313.2 [MH]+; ^=1.10分鐘(系統(tǒng)1); TLC: Rf = 0.21(DCM/MeOH， 93: 7)。實(shí)施例26: 3-(5-甲猛-3-三氟甲基-苯基Vl-f6-4-(4-乙基-p底溱-l-基V 苯基氨基1-嘧咬-4-基}-1-曱基-脲在氮?dú)庵袑⒐鈿?在甲苯中20%， 1.62mL， 3.0mmo1， 2.0當(dāng)量)加入5-曱 氧基-3-三氟曱基苯胺(344mg， 1.8mmo1， 1.2當(dāng)量)在二巧悉烷(6mL)的溶液中。 將該混合物加熱至回流，攪拌80分鐘，冷卻至室溫，并在真空中濃縮。 45分鐘內(nèi)，在氮?dú)庵袑饪s的所得油狀5-甲氧基-3-三氟曱基-苯基異氰酸 酯在甲苯中的溶液分幾部分加入沸騰的]\-[4-(4-乙基-腺喚-1-基)-苯基1-]\'-甲基-嘧啶-4，6-二胺(468mg， 1.50mmol;步驟242.1)在18mL曱苯的溶液中。 將反應(yīng)混合物在110。C攪拌4小時(shí)，冷卻至室溫，并用DCM和飽和NaHC03 水溶液稀釋。分離水層并用DCM萃取兩次。用鹽水洗滌有機(jī)相，干燥 (Na2S04),過(guò)濾并濃縮。柱色譜(DCM/MeOH，49: 1 — 24: l)以提供標(biāo)題 化合物API-MS: 530 / 532 [MH+; TLC: Rf = 0.4(DCM/MeOH， 9: 1); t^4.3分鐘(純度100%，系統(tǒng)l)。實(shí)施例27: 3-(5-曱氧基-3-三氟甲基-苯基)-1-{6-3-氯-4-(4-乙基-哌喚 -1-基)-苯基氨基1-嘧啶-4-基}-1-曱基-脲歷經(jīng)27小時(shí)，將0.4mL的1M的S02Ch在DCM的溶液分幾部分重 復(fù)加入水冷卻的3-(5-甲|^-3-三氟甲基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌溱-1-基)-苯基氨基卜嘧咬-4-基)-l-曱基-脲(105mg， 0.20mmol)(實(shí)施例26)在乙腈(6mL) 的混懸液中。隨后該反應(yīng)經(jīng)HPLC分析。用DCM和飽和NaHC03水溶液 稀釋反應(yīng)混合物(仍包含原料)。分離水層并用DCM萃取兩次。用鹽水洗 滌有機(jī)相，干燥(Na2S04)，過(guò)濾并濃縮。反相MPLC(H20/CH3CN + 0.1 % TFA)，用NaHC03中和包含產(chǎn)物的流份后，部分濃縮并用DCM萃取以提 供標(biāo)題化合物API-MS: 564 / 566 [MH；TLC: Rf = 0.28(DCM/MeOH + 1 %冊(cè)3叫，95: 5);H-匪R(DMSO-d6) 5 1.02 (t， H3C)， 2.37 (q， H2C), 2.51(m， 4H)， 2.92(m， 4H)， 3.33(s， H3C)， 3.82(s， H3C)， 6.48(s， 1H)， 6辟，1H)，7.12(d， 1H)， 7.43(m， 2H)， 7.59(s， 1H)， 7.82(s， 1H)， 8.55(s， 1H)， 9.66(s， HN)， 12.33(s， HN)。實(shí)施例28: 1-{6-2-氯-4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基1-嘧啶-4-基V3-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-l-甲基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方法來(lái)制備(在回流下攪拌1小時(shí) 20分鐘)ESI-MS: 593.8 / 595.8 [MH+; tR= 3.80分鐘(純度95%,系 統(tǒng)l); TLC: Rf = 0.45(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 95: 5)。步驟28.1: ]\42-氯-4-(4-乙基-咪喚-l-基)-苯基l-N'-甲基-嘧咬-4,6-二胺 標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟1.1所述的方法來(lái)制備ESI-MS: 347.1 / 349.1 [MH+; TLC: Rf = 0.15(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 95: 5)。歩驟28.2: 2-氯-4-(4-乙基-哌喚-l-基)-苯基胺在氫氣中將l-(3-氯-4-硝基-苯基)-4-乙基-哌喚(lg， 3.7mmol)和拉尼鎳 (0.1 g)在MeOH(20mL)中的混懸液在室溫下攪拌8小時(shí)。將反應(yīng)混合物經(jīng) 硅藻土墊過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠柱色謙(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 95: 5)純化以提供為米色固體的標(biāo)題化合物ESI-MS: 240.1 / 242.1 [MH+; tR= 0，卯分鐘(系統(tǒng)1); TLC: Rf = 0.46(DCM/MeOH + 1 % NH/q， 95: 5)。歩驟28.3:l-(3-氯陽(yáng)4-硝基畫(huà)苯基)-4曙乙基國(guó)哌喚將N-乙基旅,(4.3mL， 34.3mmo1， 1.2當(dāng)量)加入2畫(huà)氯-4-氟硝基苯(5g， 28.6mmol)和碳酸鉀(7.9g， 57.1mmo1， 2當(dāng)量)在DMF(50mL)的混合物中。 在100。C下攪拌該反應(yīng)混合物6小時(shí)，冷卻至室溫，用1120稀釋并用EtOAc 萃取。有機(jī)相用鹽水洗滌，干燥(Na2S04)，過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)在乙 醚中研磨純化以提供5.6g為黃色固體的標(biāo)題化合物ES-MS: 270.0 [MH]+; tR= 2.90分鐘(系統(tǒng)1)。實(shí)施例29: 3-f2,6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-4-(4-乙基-哌喚-l-基)-2-氟-苯基#^卜嘧咬-4-基}-1-甲基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例2所述的方法來(lái)制備(在回流下攪拌1小 時(shí)，并用EtOAc代替DCM萃取產(chǎn)物)ESI-MS: 577.9 / 579.9 [MH+; tR= 4.00分4中(純度>95%，系統(tǒng)1); TLC: Rf = 0.35(DCM/MeOH + 1 % 冊(cè)3叫，97: 3)。步驟29.1: N-14"4陽(yáng)乙基-哌喚-l醫(yī)基)-2國(guó)氟-苯基l-N'曙甲基-嘧咬-4,6-二胺 標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟2.1所述的方法來(lái)制備，但在微波裝置中在 160。C攪拌該反應(yīng)混合物1小時(shí)，并用EtOAc代替DCM萃取產(chǎn)物。標(biāo)題 化合物ESI-MS: 331.1 [MH+; TLC: Rf = 0.10(DCM/MeOH + 1 % NH/q，95: 5)。步驟29.2: 4-(4-乙基-哌喚-l-基)-2-氟-苯基胺在氫氣下將l-乙基-4-(3-氟-4-硝基-苯基)-哌嗪(7g, 27.7mmol)和 Pd(10。/。)碳(0.35 g)在MeOH(140mL)中的混懸液在室溫下攪拌3小時(shí)。將 反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻土墊過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠柱色語(yǔ)(DCM/MeOH + 1 %NH3aq，95: 5)純化以提供為白色固體的標(biāo)題化合物ESI-MS: 224.1 1MH+; TLC: Rf = 0.54(DCM/MeOH + 1 %冊(cè)3叫，95: 5)。歩驟29.3:1-乙基-4-(3-氟-4-硝基-苯基)-哌溱將N-乙基艱療(4.8mL， 37.7mmo1， 1.2當(dāng)量)加入2，4-二氟硝基苯(5g, M.4mmol)和碳酸鉀(8.7g, 62.9mmo1， 2當(dāng)量)在DMF(50mL)的混合物中。 將反應(yīng)混合物在100。C下攪拌6小時(shí)，冷卻至室溫，用1120稀釋并用EtOAc 萃取。有機(jī)相用鹽水洗涂，干燥(Na;tS04)，過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠 柱色譜(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 95: 5)純化以提供為黃色油的標(biāo)題化合 物ES-MS: 254.1 [MH+; TLC: Rf = 0.67(DCM/MeOH + 1 % NH3aq， 95: 5)。實(shí)施例30: 3-(2,6-二氯-3，5-二甲絲-苯基)-1-{6-6-(4-異丙基,底湊-1-基)-吡咬-3-基氨基l-嘧咬-4-基Vl-甲基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例1所述的方法來(lái)制備(2當(dāng)量光氣用于形成 異氰酸酯，在隨后的步驟中在70。C攪拌16小時(shí)，并用EtOAc代替DCM 萃取產(chǎn)物)ESI-MS: 574.8 / 576.8 [MH+; tR= 3.32分鐘(系統(tǒng)1); TLC: Rf = 0.10(DCM/MeOH/NH/q，94: 5: 1)。步驟30.1: N-6-(4-異丙基-派喚-1-基)-吡啶-3-基1-!^'-甲基-嘧啶-4,6-二胺標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟1.1所述的方法來(lái)制備。標(biāo)題化合物 ESI-MS: 328.2 [MH+。歩驟30.2: 6-(4-異丙基-哌喚-l-基)-吡咬-3-基胺將鐵粉(1.4g， 25.3mmo1，4當(dāng)量)、l-異丙基-4-(5-硝基-吡咬-2-基)-派噪 (1.58g， 6.32mmo1)、 EtOH(20mL)、 H20(5mL)和AcOH(2.5mL)的混合物 在卯。C下攪拌2小時(shí)，冷卻至室溫，通過(guò)加入氨水調(diào)至堿性，經(jīng)硅藻土墊 過(guò)濾并部分的濃縮除去EtOH。殘余物水溶液用氯化鈉飽和并用EtOAc和 DCM萃取。用鹽水洗涂合并的有機(jī)相，千燥(Na2S04),過(guò)濾并濃縮。殘余 物經(jīng)硅膠柱色語(yǔ)(DCM/MeOH/NH3叫，91: 8: l)純化以提供為紫紅色固體的 標(biāo)題化合物ESI-MS: 221.1 [MH+; TLC: Rf = 0.20(DCM/MeOH/NH3aq， 91: 8: 1)。步驟30.3: l-異丙基-4-(5-硝基-吡咬-2-基)-哌嗪(NVP-BKT293) 將N-異丙基旅噪(1.8mL， 12.7mmo1， 2當(dāng)量)加入冷卻的(5。C)2-氯-5-硝 基吡咬(lg， 6.3mmol)在DCM(5mL)的混合物中。將反應(yīng)混合物溫至室溫， 攪拌16小時(shí)，用DCM/H20稀釋并用DCM萃取。用鹽水洗滌有才M目，干 燥(Na2SCM，過(guò)濾并濃縮以提供為黃色固體的標(biāo)題化合物ES-MS: 251.2[MH+; tR= 2.20分鐘(系統(tǒng)1)。實(shí)施例31: 3-(2,6-二氯-3,5-二甲氣基-苯基)-1-{6-6-(4-乙基-哌噢-l-基)-吡啶-3-基絲1-嘧咬-4-基}-1-甲基-脲標(biāo)題化合物以類(lèi)似于實(shí)施例1所述的方法來(lái)制備(2當(dāng)量光氣用于形成 異氰酸酯，在隨后的步驟中在回流下攪拌4小時(shí)，并用EtOAc代替DCM 萃取產(chǎn)物)ESI-MS: 560.8 / 562.8 [MHj+; tR= 3.20分鐘(系統(tǒng)1); TLC: Rf=0.35(DCM/MeOH/NH3aq，94: 5: 1)。步驟31.1: N-6-(4-乙基-哌喚-l-基)-吡啶-3-基l-N'-曱基-嘧咬-4,6-二胺 標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟1.1所述的方法來(lái)制備。標(biāo)題化合物 ESI MS: 314.2 [MH+; TLC: Rf = 0.20(DCM/MeOH/NH3aq， 91: 8: 1)。步驟31.2: 6-(4-乙基-派溱-l-基)-吡咬-3-基胺在氫氣下將1-乙基-4-(5-硝基-吡咬-2-基)-哌*(1.4 g)和拉尼鎳(140mg) 在MeOH(30mL)的混懸液在室溫下攪拌10小時(shí)。將反應(yīng)混合物經(jīng)珪藻土 墊過(guò)濾并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠柱色傳(DCM/MeOH/NH3aq,94: 5: l)純化以 提供為紫紅色油的標(biāo)題化合物ESI-MS: 207.1 [MH]+; TLC: Rf = 0.26(DCM/MeOH/NH/q， 94: 5: 1)。步驟31.3:1-乙基-4-(5-硝基-吡咬-2-基)-旅喚標(biāo)題化合物以類(lèi)似于步驟30.3所述的方法來(lái)制備，但使用N-乙基哌 溱。標(biāo)題化合物 ES-MS : 237.1 [MH+ ; TLC : Rf = 0.25(DCM/MeOH/NH3aq， 96: 3: 1)。實(shí)施例32:軟膠嚢5000個(gè)軟膠嚢，各自包含作為活性成分的在之前實(shí)施例1-29中任何 一個(gè)提到的任何一個(gè)式IA化合物0.05g，或者其按照下述內(nèi)容來(lái)制備組成活性成分 250 gLauroglycol 2升制備方法將粉化的活性成分懸浮在LauroglykoF(丙烯乙二醇月桂 酸酯，Gattefoss6 S.A.， Saint Priest,法國(guó))中并在濕潤(rùn)的粉碎機(jī)內(nèi)研磨以生 產(chǎn)大小約l-3pm的顆粒。然后用裝膠嚢機(jī)將每部分0.419g的混合物裝入軟 膠嚢中。實(shí)施例33:包含式IA化合物的片劑片劑包含作為活性成分的在之前實(shí)施例1-29中任何一個(gè)的任何一個(gè) 式IA化合物100mg，其按照下述組成、下述標(biāo)準(zhǔn)方法來(lái)制備 組成活性成分 100mg 結(jié)晶性乳糖 240mg Avicel 80mg PVPPXL 20mg Aerosil 2mg 硬脂酸鎂 5mg447mg制備將活性成分與栽體材料混合并通過(guò)壓片機(jī)壓制(Korsch EKO， 壓才莫直徑10 mm)。Avice條是微晶纖維素(FMC，美國(guó)費(fèi)城)。PVPPXL是聚乙烯聚吡咯烷 酮，交叉相連(BASF，德國(guó))。Aerosil⑧是二氧化硅(Degussa，德國(guó))。
權(quán)利要求
1.式IA的化合物，其中X、Y和Z中的兩個(gè)是N(氮)，第三個(gè)是CH或N(優(yōu)選地，Y和Z是N，且Z是CH)；并且或者其中，R1是被羥基、苯基-C1-C7-烷氧基、哌嗪-1-基或4-(苯基-C1-C7-烷基)-哌嗪-1-基所取代的苯基；或者被(i)鹵素或C1-C7-烷氧基以及除此之外被(ii)羥基、苯基-C1-C7-烷氧基、N-單-或N，N-二-(C1-C7-烷基)-氨基-C1-C7-烷基、吡咯烷子基-C1-C7-烷氧基、1-(C1-C7-烷基)-哌啶-4-基、嗎啉代-C1-C7-烷氧基、硫嗎啉代-C1-C7-烷氧基、哌嗪-1-基、4-(苯基-C1-C7-烷基)-哌嗪-1-基、4-(C1-C7-烷基)-哌嗪-1-基、[4-(C1-C7-烷基)-哌嗪-1-基]-C1-C7-烷基、N-單-或N，N-二-(C1-C7-烷基)-氨基-C1-C7-烷基、N-單-或N，N-二-(C1-C7-烷基)-氨基-C1-C7-烷氧基、[4-(C1-C7-烷基)-哌嗪-1-基]-C1-C7-烷氧基、[4-(C1-C7-烷基)-哌嗪-1-基]-羰基所取代的苯基；R2是氫、C1-C7-烷基、C1-C7-烷氧基或鹵素；R3是氫、C1-C7-烷基或苯基-C1-C7-烷基，R4各自獨(dú)立地是C1-C7-烷基、鹵素-C1-C7-烷基、鹵素或C1-C7-烷氧基，且n是0、1、2、3、4或5；或者R1是被羥基、苯基-C1-C7-烷氧基、哌嗪-1-基、4-(苯基-C1-C7-烷基)-哌嗪-1-基；N-單-或N，N-二-(C1-C7-烷基)-氨基-C1-C7-烷基、吡咯烷子基-C1-C7-烷氧基、1-(C1-C7-烷基)-哌啶-4-基、嗎啉代-C1-C7-烷氧基、硫嗎啉代-C1-C7-烷氧基、4-(C1-C7-烷基)-哌嗪-1-基、[4-(C1-C7-烷基)-哌嗪-1-基]-C1-C7-烷基、N-單-或N，N-二-(C1-C7-烷基)-氨基-C1-C7-烷基、N-單-或N，N-二-(C1-C7-烷基)-氨基-C1-C7-烷氧基、[4-(C1-C7-烷基)-哌嗪-1-基]-C1-C7-烷氧基、[4-(C1-C7-烷基)-哌嗪-1-基]-羰基所取代的苯基；或者帶有一個(gè)本段中提到的取代基，和除此之外選自鹵素以及C1-C7-烷氧基的取代基的苯基；R2是氫、C1-C7-烷基、C1-C7-烷氧基或鹵素；R3是氫、C1-C7-烷基或苯基-C1-C7-烷基，R5是氫(優(yōu)選)、C1-C7-烷基或苯基-C1-C7-烷基，并且或者n是3、4或5且R4選自C1-C7-烷基、C1-C7-烷氧基和鹵素，條件是C1-C7-烷基、C1-C7-烷氧基和鹵素中各自至少存在一個(gè)；或者n是2且一個(gè)R4是鹵素-C1-C7-烷基，另一個(gè)R4是C1-C7-烷氧基；或者n是3、4或5且R4選自鹵素、碘代和C1-C7-烷氧基，條件是鹵素、碘代和C1-C7-烷氧基中各自至少存在一個(gè)；或者n是3、4或5且R4選自鹵素、鹵素-C1-C7-烷基和C1-C7-烷氧基，條件是鹵素、鹵素-C1-C7-烷基和C1-C7-烷氧基中各自至少存在一個(gè)；或者Y是Z是N(氮)且X是CH，或者其中R1是被N-C1-C7-烷基-哌嗪-1-基單取代的3-吡啶基，R2是氫，R3是氫，R4各自獨(dú)立地是C1-C7-烷基、鹵素-C1-C7-烷基、鹵素或C1-C7-烷氧基，R5是氫且n是1、2、3、4或5；或者式IA的化合物，其中R1是4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基氨基，R2是氫，R3是氫，R4是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，n是4，R5是氫，Y和Z是N且X是CH；或者式IA的化合物，其中R1是3-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯基氨基，R2是氫，R3是甲基，R4是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，n是4，R5是氫，Y和Z是N且X是CH，或者式IA的化合物，其中R1是3-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基，R2是氫，R3是甲基，R4是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，n是4，R5是氫，Y和Z是N且X是CH，或者式IA的化合物，其中R1是4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基氨基，R2是氫，R3是甲基，R4是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，n是4，R5是氫，Y和Z是N且X是CH，或者式IA的化合物，其中R1是4-(1-乙基-哌啶-4-基)-苯基氨基，R2是氫，R3是甲基，R4是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，n是4，R5是氫，Y和Z是N且X是CH，或者式IA的化合物，其中R1是4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基，R2是氫，R3是乙基，R4是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，n是4，R5是氫，Y和Z是N且X是CH，和/或或者式IA的化合物，其中R1是4-(4-乙基-哌嗪-1-羰基)-苯基氨基，R2是氫，R3是甲基，R4是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，n是4，R5是氫，Y和Z是N且X是CH；或者兩個(gè)或多個(gè)式IA化合物的混合物；或其鹽、前藥、N-氧化物和/或酯。
2.如權(quán)利要求1所述的式IA化合物，其中X、 Y和Z中的兩個(gè)是N(氮)，第三個(gè)是CH或N(優(yōu)選地，Y和Z是 N，且Z是CH);并且 或者其中，r1是被羥基、苯基-c廣C7-烷氧基、哌溱-i-基或4-(苯基-<:1-<:7-烷基)-哌溱-l-基所取代的苯基；或者被(i)鹵素或d-CV垸氧基以及除此之外被(ii) 羥基、苯基-C，畫(huà)C7畫(huà)烷IL^、 N-單-或N，N-二-(C廣CV烷基)-^J^d畫(huà)C7匿烷基、 吡咯烷子基-C,-CV烷氧基、l-(C,-CV烷基)-哌啶-4-基、嗎啉代-C廣CV烷氧 基、硫嗎啉代-d-O烷氧基、哌喚-l-基、4-(苯基-d-CV烷基)-哌噪-l-基、 4-(d誦C7畫(huà)烷基)誦哌喚畫(huà)l畫(huà)基、[4-(d漏C7-烷基)陽(yáng)哌嗪-l-基]國(guó)C廣C7-烷基、N-單畫(huà) 或N，N-二-(d-C7-烷基)-氨基-d-C7-烷基、N-單-或N，N-二-(C，-C7-烷基)-氨 基-d-Cr烷氧基、[4-(C廣C7-烷基)-哌嗪-l-基]-d-CV烷氧基、[4-(d-CV烷基)-哌溱-l-基-羰基所取代的苯基；R2是氫、C廣CV烷基、d-Cr烷氧基或鹵素； R3是氫、d-C7-烷基或苯基-d-C7-烷基，1^各自獨(dú)立地是C廣Cr烷基、面素-C廠(chǎng)C7-烷基、卣素或C廣CV烷氧基， RS是氫(優(yōu)選)、d-C7-烷基或苯基-CrC7-烷基， 且n是0、 1、 2、 3、 "5'， 或者R1是被羥基、苯基-CVO烷氧基、哌嗪-l-基、4-(苯基-d-C7-烷基)-哌嗪-l-基；N-單-或N，N-二-(d-CV烷基)-氨基-d-C7-烷基、吡咯烷子基 -d-CV烷氧基、l-(d-C"烷基)-哌咬-4-基、嗎啉代-d-CV烷氧基、硫嗎啉代—d一C7一烷氧基、4-(d-c"烷基)-哌嗪-i-基、[4-(<:1-(:7-烷基)-哌嗪-1-基]-OO烷基、N-單-或N，N-二-(d-C7-烷基)-氨基-CVC7-烷基、N-單-或 N，N- 二 -(d-CV烷基)-氨基-d-CV烷氧基4-(d-(V烷基)-哌嗪-1-基l-C廣C7-烷氧基、[4-(C廣C7-烷基)-哌溱-l-基-羰基所取代的苯基；或者帶有一個(gè)本段中提到的取代基，以及除此之外選自卣素和c,-cv烷氧基的取代基的苯基；R2是氫、d-CV烷基、d-CV烷氧基或鹵素； R3是氫、C!-C"烷基或苯基-d-C7-烷基， R5是氫(優(yōu)選)、CVC7-烷基或苯基-d-0烷基， 并且或者n是3、 4或5且R"選自C廣CV烷基、C廣C7-烷H^和面素，條 件是d-CV烷基、d-Cr烷^L^和鹵素中各自至少存在一個(gè)；或者n是2且一個(gè)R"是卣素-C廣C7-烷基，另 一個(gè)R"是C廣CV烷氧基；或者n是3、 4或5且R4選自卣素、碘代和d-CV烷氧基，M是面 素、碘代和C,-C7-烷氧基中各自至少存在一個(gè)；或者n是3、 4或5且W選自囟素、卣素-d-C7-烷基和d-C7-烷氧基， 條件是卣素、閨素-C,-CV烷基和d-CV烷氧基中各自至少存在一個(gè)；或者式IA的化合物，其中W是4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基氨基，W是 氫，R3是氫，114是2-和6-氯及3-和5-曱氧基，n是4， 115是氫，Y和Z 是N且X是CH;或者式IA的化合物，其中R，是3-(4-曱基-哌溱-l-基曱基)-苯基氨基，R2 是氫，W是甲基，R"是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，i!是4， R5是氫，Y和 Z是N且X是CH，或者式IA的化合物，其中W是3-(4-乙基-哌溱-l-基)-苯基絲，W是氫， R3是甲基，R4是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，n是4，議5是氫，Y和Z是N 且X是CH，或者式IA的化合物，其中W是4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基氨基，ie是 氫，RS是甲基，W是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，n是4， 115是氫，Y和Z是N且X是CH， 或者式IA的化合物，其中R'是4-(l-乙基-哌咬-4-基)-苯基氨基，議2是氫， W是甲基，R"是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，n是4， 115是氫，Y和Z是N 且X是CH，或者式IA的化合物，其中RJ是4-(4-乙基-哌溱-l-基)-苯基^Jo W是氬， R"是乙基，W是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，n是4， RS是氫，Y和Z是N 且X是CH，和/或或者式IA的化合物，其中W是4-(4-乙基-哌噪-l-羰基)-苯基絲，W是 氫，R"是甲基，R"是2-和6-氯及3-和5-甲氧基，n是4， Rs是氫，Y和Z 是N且X是CH;或者兩個(gè)或多個(gè)式IA化合物的混合物；或其鹽、前藥、N-氧化物和/或酯。
3.如權(quán)利要求1所述的式IA化合物，其選自以下化合物 l-[6-(4畫(huà)節(jié)氧基-苯基氨基)畫(huà)嘧啶-4-基l-3-(2，6誦二氯畫(huà)3，5-二甲氧基-苯 基)_1_甲基_脲，3-(2,6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-1-[6-(4-羥基-苯基氨基)-嘧啶-4-基]-1-甲基-脲，1_{6-[4-(4-千基-旅溱-1-基)-苯基氨基-嘧啶-4-基}-3-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-l-甲基-脲，3畫(huà)(2,6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-l-甲基-l-[6-(4-哌嗪-l-基-苯基氨基)-嘧咬-4-基]-脲，3-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[2-氟-4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基氨基]-嘧咬-4-基}-1-甲基-脲，3-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-2-甲氧基-苯基氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基-脲，3-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-1-{6-4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-3-氟-苯基 氨基卜嘧咬-4-基}-1-曱基-脲，3-(5-曱氧基-3-三氟甲基-苯基)-1-{6-[3-氯-4-(4-乙基-哌嗪-l-基)-苯基氨 基卜嘧啶-4-基}-1-甲基-脲，1-{6-[2-氯-4-(4-乙基-哌嗪-1-基)-苯基氨基-嘧啶-4-基}-3-(2，6-二氯-3，5畫(huà) 二甲氧基-苯基)-l-甲基-脲，和3-(2，6-二氯-3,5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌噪-1-基)-2-氟-苯基 氨基]-嘧啶-4-基}-1-甲基-脲；或其鹽、前藥、N-氧化物和/或酯。
4.如權(quán)利要求1所述的式IA化合物，其選自以下化合物l-(2-氯-3，5畫(huà)二甲氧基-6-甲基-苯基)-3-{6-[4-(4-乙基畫(huà)哌嗪-l-基)-苯基氨 基-嘧咬-4-基}-脲，3-(2-氯-3，5-二甲氧基-6-甲基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-l-基)-苯基氨 基卜嘧啶-4-基}-1-甲基-脲，3-(2-氯-3，5-二甲氧基-6-甲基-苯基)-1-{6-[4-(2-二甲基氨基-乙氧基)畫(huà)苯基氨基卜嘧啶-4-基}-1-甲基-脲，3-(2-氯-3，5-二甲氧基-6-甲基-苯基)-l-甲基-(6-{4-[2-(4-甲基-哌嗪-l-基)-乙氧基-苯基#^}-嘧咬-4-基)-脲，3-(2-氯-6畫(huà)碘-3，5-二曱氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基陽(yáng)哌嗪畫(huà)l-基)曙苯基氨 基}-嘧啶-4-基}-1-甲基-脲，3-(2-氯-3，5-二甲氧基-6-甲基-苯基)-1-{6-[4-(4-異丙基-哌嗪-l-基)-苯基 氨基卜嘧咬-4-基}-1-甲基-脲，3-(2-氯-3,5-二甲氧基-6-甲基-苯基)-l-[6-(3-二甲基氨基甲基-苯基氨 基)-嘧咬-4-基卜l-甲基-脲，3-(2-氯-3，5-二曱氧基-6-甲基-苯基)-1-{6-[3-(4-乙基-哌嗪-l-基)-苯基氨 基卜嘧咬_4-基}-1-甲基-脲，3-(2-氯-3，5-二甲氧基-6-甲基-苯基)-1-曱基-1-{6-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙 氧基)-苯基氨基-嘧啶-4-基}-1-甲基-脲，3-(2-氯-3，5-二甲氧基-6-甲基-苯基)-1-甲基-1-{6-[3-氟-4-(2-吡咯烷-1-基 -乙氧基)-苯基^J+嘧咬-4-基卜l-甲基-脲，3-(2，4-二氯-5-曱氧基-3-三氟甲基-苯基)-1-{6-4-(4-乙基-哌嗪-l-基)-苯 基氨基-嘧咬-4-基}-1-甲基-脲，和3-(5-甲氧基-3-三氟甲基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-l-基)-苯基氨基l-嘧啶-4-基}-1-甲基-脲；或其鹽、前藥、N-氧化物和/或酯。
5. 如權(quán)利要求1所述的式IA化合物，其選自以下化合物 l-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-3-{6-[4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基氨基]-嘧咬-4-基}-脲，3-(2，6-二氯-3，5-二曱氧基-苯基)-l-甲基-1-{6-[3-(4-甲基-哌嗪-l-基曱 基)-苯基氨基-嘧吱-4-基}-脲，3-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[3-(4-乙基-哌嚷-l-基)-苯基氨基j曙 嘧啶-4-基}-1-曱基-脲，3-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-l-曱基-1-{6-[4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基氨基P密啶-4-基}-脲，3-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[4-(1-乙基-哌啶-4-基)-苯基氨基-嘧啶-4-基}-1-曱基-脲，3-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-l-乙基-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-l-基)-苯 基氨基1-嘧咬-4-基}-脲；和3陽(yáng)(2,6-二氯-3，5-二曱氧基-苯基)-1-{6-[4-(4-乙基-哌嗪-l-羰基)-苯基氨 基卜嘧咬-4-基}-1-甲基-脲；或其鹽、前藥、N-氧化物和/或酯。
6. 如權(quán)利要求1所述的式IA化合物，其選自以下化合物 3-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[6-(4-乙基-哌嗪-l-基)-吡啶-3-基氨基-嘧啶-4-基}-1-甲基-脲；和3-(2,6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-1-{6-[6-(4-異丙基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基氨基卜嘧咬-4-基}-1-甲基-脲，或其鹽、前藥、N-氧化物和/或酯。
7. 藥物制劑，其包含如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的式IA化合物， 或其可藥用鹽、前藥、N-氧化物或酯，以及至少一種可藥用載體。
8. 如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的式IA的化合物，或其可藥用鹽、 前藥、N-氧化物或酯用于動(dòng)物或人體治療中的用途，特別是用于對(duì)FGFR 抑制有響應(yīng)的疾病的治療中的用途。
9. 如權(quán)利要求1所述的式IA的化合物，或其可藥用鹽、前藥、N-氧 化物或酯在制備用于治療蛋白激酶，特別是FGFR依賴(lài)性疾病的藥物制劑 中的用途。
10. 制備如權(quán)利要求l-6中任一項(xiàng)所述的式IA化合物的方法，其包括 在雙反應(yīng)性碳酸衍生物的存在下，將式IIA的苯胺化合物，("A)其中W和n如式IA的化合物所定義，與式IIIA的胺反應(yīng)， FT 『Y Y (…A) YR2其中R1、 R2、 R3、 X、 Y和Z如式IA化合物所定義； 并且，如果需要，將式IA化合物轉(zhuǎn)化為不同的式IA化合物，將可獲 得的式IA化合物的鹽轉(zhuǎn)化為游離化合物或不同的鹽，將可獲得的游離式 IA化合物轉(zhuǎn)化為其鹽，和/或?qū)⒖色@得的式IA化合物的異構(gòu)體混合物分離 成單個(gè)異構(gòu)體。
11. 一種治療酪氨酸激酶(特別是FGFR)依賴(lài)性疾病的方法，其包 含對(duì)需要此種治療的人施用有效量的如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的式IA 的化合物、其N(xiāo)-氧化物、鹽、酯或前藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(IA)的雜芳基芳基脲類(lèi)化合物，其中的基團(tuán)和符號(hào)具有本文所給出的含義；涉及此類(lèi)化合物在治療蛋白激酶依賴(lài)性疾病中的用途；涉及包含所述雜芳基芳基脲類(lèi)化合物的藥物制劑；涉及此類(lèi)新化合物的制備方法以及包含使用此類(lèi)雜芳基芳基脲類(lèi)化合物的治療方法。
文檔編號(hào)A61K31/506GK101336237SQ200680051955
公開(kāi)日2008年12月31日 申請(qǐng)日期2006年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月21日
發(fā)明者G·博爾德, P·菲雷, V·瓜格納諾 申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司