專利名稱：：苯并噻唑苯胺類化合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一類新穎的苯并噻唑苯胺類化合物，以及其制備方法和在檢測或顯像動物或人體組織內(nèi)淀粉樣蛋白沉積中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：早老性癡呆(Alzheimer'disease,AD)是常見的一種老年性癡呆，該類病人占癡呆病人總數(shù)的6070%，其特征為不可逆的記憶損傷，持續(xù)的認(rèn)知衰退，以及行為紊亂。發(fā)病后病人一般可活5—20年，已成為繼心臟病、腫瘤和中風(fēng)之后的第四位死亡原因(盧祖能等主編，實(shí)用肌電圖學(xué).北京人民衛(wèi)生出版社，2000，p878880)。其病理學(xué)特征包括細(xì)胞外的P—淀粉樣蛋白(e-amyloid，Ag)纖維沉積，細(xì)胞內(nèi)的由高度磷酸化Tau蛋白形成的神經(jīng)纖維纏結(jié)，以及神經(jīng)遞質(zhì)的損傷(NordbergA.，Neurology,2004，3，519)。檢測死者腦中是否存在大量的淀粉樣蛋白沉積和神經(jīng)纖維纏結(jié)是目前臨床確診老年性癡呆的唯一方法。核黃素-S(Thioflavin-S，TFS)和核黃素-T(Thioflavin-T，TFT)是針對腦切片中P—淀粉樣蛋白斑塊的染料。核黃素曾被用作研發(fā)與3—淀粉樣蛋白結(jié)合化合物的藥物載體。其衍生物如3H—BTA—1([氳]2-(4，-甲胺苯基)-6-氫苯并噻唑)以及11<:一6—01€—8丁八一1(PIB)([碳-11]2-(4，-甲胺苯基)-6-羥基苯并噻唑)，在納米尺徑與早老性癡呆病人尸檢腦組織的結(jié)合有潛力。多光子顯微鏡活體轉(zhuǎn)基因鼠實(shí)驗(yàn)表明了有熒光發(fā)射的PIB能穿過血腦屏障，標(biāo)記淀粉樣蛋白沉積，然后從腦中清除。從核黃素-T發(fā)展起來的'251—丁20^1([碘-125]2-(4'-二甲胺苯基)-6-碘苯并噻唑)是目前為止與淀粉樣蛋白Ag,—4Q結(jié)合力最強(qiáng)的化合物(0.06nM)。Kung及其同事最近報(bào)道了一種新的核黃素衍生物125I—IMPY([碘-125]6-碘-2-(4，-N，N-二甲胺)苯基咪唑并[l，2-a]吡啶)，用于標(biāo)記轉(zhuǎn)基因鼠的老年斑獲得成功，此衍生物成為另一潛在單光子發(fā)射斷層顯像成像技術(shù)(SPECT)顯像的淀粉樣蛋白示蹤劑(NicholsL.，PikeV.W.，CaiL.-S.，etal，BiolPsychiatry,2006，59，940)。MakotoH.等人利用含有19F元素并與淀粉樣蛋白親和力較高的化合物作為核磁共振成像增強(qiáng)劑，在活體檢測淀粉樣斑塊的實(shí)驗(yàn)中取得突破進(jìn)展(Makoto，H.;Iwata，N.;Matsuba，Y.;Sato，K;Sasamoto，K.;Saido，T.C.Natureneuroscience2005，8，4，527)。但因?yàn)槭褂玫幕瘜W(xué)量較大，造成對活體的損傷，故目前還沒有可能進(jìn)入臨床研究，在動物體內(nèi)的研究有受到限制。W.E.克倫克和C.A.小馬蒂斯Y.王在2000年8月24日申請了US申請60/227601，并在2001年8月24日申請了中國專利，并于2004年10月6日公開。公開號CN15352/68A。該專利公開了系列化合物，及其制備方法和在成像體內(nèi)淀粉樣蛋白沉積中的醫(yī)藥用途。該專利涵蓋了如下結(jié)構(gòu)化合物結(jié)構(gòu)D<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>(01817884.7說明書第6/51頁)其中Z是S、NR，、0、或C(R')2;Y是NR"R2、0R2或SR2;其中每個R3-R14分別選自H、F、Cl、Br、I、低級烷基、(CH2)OR'(其中nH，2或3)、CF3、CH2-CH2X、O-CH2CH2X、O-CH2CH2CH2X(其中X-F、Cl、Br或I)等；在優(yōu)選實(shí)施方案中，結(jié)構(gòu)D的取代基R-R"至少一個選自mI、mI、76Br、75Br、18F、CH2CH2X*、0-CH2-CH2-CH2X*、OCH2-CH2-CH2-CH2X*(其中X*=13'I、123I、76Br、75Br、l8F)、19F、1251等。該專利中雖包含了本發(fā)明的化合物結(jié)構(gòu)，但是在其尤其優(yōu)選的實(shí)施方案和具體實(shí)施例中，并不包括此類化合物，同時該專利也沒有提供本專利化合物具有的靶向神經(jīng)纖維纏結(jié)的性質(zhì)。該專利中僅有涉及"C標(biāo)記的具體實(shí)施例，并未有涉及到"F標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和數(shù)據(jù)，且"F標(biāo)記與"C標(biāo)記對于本
技術(shù)領(lǐng)域：
人員來說是完全不同的兩種技術(shù)，位置選擇性的"F標(biāo)記的方法也并非本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)。其具體實(shí)施例中，合成噻唑環(huán)的方法步驟多，條件相對苛刻，不易應(yīng)用于常規(guī)生產(chǎn)。LockhartA.在近期的文獻(xiàn)中評價了目前已進(jìn)入臨床，用于早期診斷AD的PET小分子探針["C]-PIB,["C]-SB13和[I8F]-FDDNP(LockhartA.，DrugDiscoveryToday,2006.12Volume11，Numbers3/24,:1093-1099)?！窮]-FDDNP進(jìn)入臨床研究最早，它能同時靶向淀粉樣斑塊和神經(jīng)纖維纏結(jié)，但在感興趣區(qū)域的濃集只比參照區(qū)高出30%，特異性不強(qiáng)。["C]-PIB,["C]-SB13顯示出較高特異性(高出50-100%)，不過["C]-PIB臨床患者數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于["C]-SB13，結(jié)果更加可靠。這三種化合物的優(yōu)良性質(zhì)使它們成為潛在的早期診斷AD的PET小分子探針，尤其是["C卜PIB。但是另人驚訝的是[UC]-PIB在患者腦中的結(jié)果卻沒能在模型動物中顯現(xiàn)出來。MathisC.A等發(fā)表的文獻(xiàn)((KlunkW.E.，LoprestiB.J.，andMathisC.A.,etal;TheJournalofNeuroscience,November16，200525(46):10598-10606)中，將[HC]-PIB在早老基因l/淀粉樣前體蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠模型(該小鼠腦內(nèi)表達(dá)較多的淀粉樣蛋白沉積)腦中進(jìn)行小動物PET顯像實(shí)驗(yàn)表明，模型小鼠腦中分布并未比正常小鼠腦中顯著增加。體外實(shí)驗(yàn)表明，該小鼠模型腦內(nèi)的淀粉樣蛋白沉積不能與["C]-PIB特異結(jié)合?，F(xiàn)有技術(shù)在行為學(xué)和病理學(xué)均與癡呆病人相同的模型動物及其活體(如大鼠或小鼠)評價的研究中，還未見有成功的采用PET成像其與正常樣本差異成功的公開文獻(xiàn)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是公開了一類苯并噻唑苯胺類化合物如式I所示的2-(4，-二甲胺苯基)-6-氟苯并噻唑(F-N,N-Me,R=CH3)，或2-(4'-甲胺苯基)-6-氟苯并噻唑(F-N-Me,R=H);式11所示的2-(4，-甲胺苯基)-6-氟乙氧基苯并噻唑(O-FEt-PIB);及如式III所示的[氟-18]2-(4，-甲胺苯基)-6-氟乙氧基苯并噻唑([18F]0-FEt-PIB)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>式I<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中，R為H或CH3。本發(fā)明的另一目的是公開如式I所示的2-(4'-二甲胺苯基)-6-氟苯并噻唑類化合物的制備方法，包括如下步驟12020(TC下，將2-氨基-5-氟苯硫醇與4-甲胺苯甲酸或4-(二甲胺)苯甲醛，在惰性氣體如氮?dú)獗Ｗo(hù)下進(jìn)行反應(yīng)即可。其中，2-氨基-5-氟苯硫醇與4-甲胺苯甲酸或4-(二甲胺)苯甲醛的摩爾量比較佳的為10:1~1:10;反應(yīng)的時間較佳的為10分300分鐘。其中，所述的2-氨基-5-氟苯硫醇可由如下步驟制得在溫度160°C~180。C下，將2-氨基-6-氟苯并噻唑類化合物在堿性溶液中，進(jìn)行水解反應(yīng)，即可。所述的堿性溶液較佳的為質(zhì)量百分比為40~60%的KOH水溶液。本發(fā)明的又一目的是公開如式II所示的2-(4'-甲胺苯基)-6-氟乙氧基苯并噻唑的制備方法，包括如下步驟在非質(zhì)子溶劑中，將物質(zhì)的量量比為10:11:10的2-(4，-甲胺苯基)-6-羥基苯并噻唑和對甲基苯磺酸氟乙酯，加入無水堿金屬碳酸鹽(如碳酸鉀，碳酸鈉等)，堿金屬碘化物(如碘化鉀，碘化鈉等)使反應(yīng)溶劑飽和，進(jìn)行反應(yīng)，即可。其中，所述的溶劑可選自(二甲基甲酰胺，N，N-二甲基亞砜，乙腈等)，較佳的為二甲基甲酰胺；反應(yīng)的溫度較佳的為80120°C;反應(yīng)的時間可為10~25小時；反應(yīng)完成后，較佳的再將產(chǎn)物過柱純化。本發(fā)明的再一目的是公開如式111所示的[氟-18]2-(4'-甲胺苯基)-6-氟乙氧基苯并噻唑的制備方法，包括如下步驟堿金屬碳酸鹽(如碳酸鉀或碳酸鈉)飽和的無水乙腈或N，N二甲基亞砜中，l-10mg的2-(4'-甲胺苯基)-6-羥基苯并噻唑，與新鮮制備的11000mCi[氟-18]氟乙基對甲苯磺酸酯進(jìn)行反應(yīng)，即可。其中，反應(yīng)的溫度較佳的為80160°C;反應(yīng)的時間較佳的為260min。其中，所述的[氟-18]氟乙基可由下述方法制得1)由加速器生產(chǎn)得到含氟-18離子、K222和K2C03的溶液；或洗脫加速器生產(chǎn)[，]FDG([氟-18〗脫氧葡萄糖)后得到殘留有氟-18離子的QMA柱，溶入含&222和K2C03的溶液；2)干燥氟-18離子溶液，然后加入溶解有對二苯甲磺酸乙二醇的乙腈，吹干，重復(fù)3次，然后取出反應(yīng)瓶冷卻；3)加入CH3CN，油浴加熱反應(yīng)，溫度較佳的為90110°C;時間較佳的為5~10分鐘；產(chǎn)物較佳的再采用C18seppak柱分離，干燥后使用。其中，反應(yīng)完成后，較佳的再將產(chǎn)物經(jīng)高效液相色譜分離制備。較佳的高效液相色譜的條件為色譜柱為日本島津公司的Vydacds柱，直徑為2.5mm，長度為250mm，填料粒徑為lOpm;流動相A為甲醇；流動相B為0.1。/。三氟乙酸水溶液，pH二2.52;梯度條件為0-2min至ljl00。/。B，之后25min到30%B的水溶液；流速1mL/min;紫外254nm檢測；收集9-11min的流出液。本發(fā)明的進(jìn)一步目的是公開本發(fā)明的苯并噻唑苯胺類化合物在制備檢測或顯像動物、人體或組織內(nèi)淀粉樣蛋白沉積的藥物中的應(yīng)用，尤其是采用正電子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層成像技術(shù)(PET)或熒光顯像技術(shù)的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的苯并噻唑苯胺類化合物可以和藥學(xué)上可接受的任何載體制成藥物組合物，用于檢測或顯像動物、人體或組織內(nèi)，尤其是大腦內(nèi)淀粉樣蛋白沉積，或用于診斷早老性癡呆、家庭早老性癡呆和載脂蛋白APOEB4等位基因的純合體的疾病或綜合癥。給藥方式可有多種，如靜脈注射給藥；之后可采用磁共振成像技術(shù)(MRI)、正電子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層成像技術(shù)(PET)或單光子發(fā)射斷層顯像成像技術(shù)(SPECT)等成像技術(shù)進(jìn)行檢測。顯像結(jié)果的分析可通過比較藥物中本發(fā)明的化合物與除小腦之外大腦區(qū)域的結(jié)合，再與正常人的結(jié)合率進(jìn)行比較。使用PET顯像時，可通過比較藥物中本發(fā)明化合物中化合物與氟-18脫氧葡萄糖在海馬區(qū)域的分布之比率(或稱為海馬模數(shù))，建立標(biāo)準(zhǔn)，獲得診斷結(jié)果。本發(fā)明的化合物制備的藥物用于活組織檢査或死亡后人體或動物組織中檢測淀粉樣蛋白沉積時，可采用如下方法含有本發(fā)明化合物的溶液與福爾馬林固定或新鮮冷凍的或石蠟包埋好的組織切片共孵育，然后使用熒光或磷屏顯像的方法檢測沉積位置；其中，溶液的溶劑為5-95%的乙醇水溶液。本發(fā)明所用試劑和化合物除特殊說明外均市售可得。本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于(1)本發(fā)明的苯并噻唑苯胺類化合物，與淀粉樣蛋白具有較高的特異結(jié)合活性，且在動物或人體內(nèi)容易穿過血腦屏障。本發(fā)明的化合物均表現(xiàn)出比已知文獻(xiàn)化合物[碳-ll]PIB(2-(4，-甲胺苯基)-6-羥基苯并噻唑)更高的特異結(jié)合活性。(2)本發(fā)明的化合物除了與淀粉樣蛋白斑塊結(jié)合，還能與神經(jīng)纖維纏結(jié)特異性結(jié)合，這是在以往文獻(xiàn)或?qū)＠形丛峒暗摹?3)本發(fā)明的化合物為首次成功獲得采用正電子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層成像(PET)在活體嚙齒類動物癡呆模型與正常樣本腦中淀粉樣蛋白沉積的顯象差異，這可為癡呆動物模型篩選以及癡呆病人臨床診斷提供重要的參考信息。(4)本發(fā)明的式I、II中涉及的幾種化合物因其與淀粉樣蛋白和神經(jīng)纏結(jié)均有強(qiáng)的結(jié)合能力，可以減少用于體內(nèi)的化學(xué)量，因而可作為針對淀粉樣蛋白的潛在的磁共振掃描增強(qiáng)劑，同時避免因化學(xué)量太大而造成對活體的損傷。(5)本發(fā)明的制備方法簡單，無高溫、高壓或敏感試劑的特殊要求，其中新穎的位置選擇性的"F標(biāo)記方法為首次公開。圖1為實(shí)施例8中2-(4，-甲胺苯基)-6-[1￥]氟乙氧基苯并噻唑的放射性薄層色譜圖，R產(chǎn)0.65,放化純度100%，展開劑5%甲醇/二氯甲垸。圖2為實(shí)施例8中2-(4，-甲胺苯基)-6-[18巧氟乙氧基苯并噻唑([18F]OFEt-PIB)的放射性薄層色譜圖，R尸0.15，展開劑三氯甲烷。圖3為實(shí)施例8中2-(4，-甲胺苯基)-6-[18巧氟乙氧基苯并噻唑(18F]OFEt-PIB)的放射性高效液相圖，保留時間K48.2min，高效液相條件見實(shí)施例5。圖4為效果實(shí)施例1中2-(4，-甲胺苯基)-6-氟苯并噻唑與[3司？18在癡呆人腦勻漿中競爭結(jié)合實(shí)驗(yàn)的特異性結(jié)合(每分鐘衰變數(shù))2-(4'-甲胺苯基)-6-氟苯并噻唑摩爾比對數(shù)圖。圖5為效果實(shí)施例1中2-(4'-二甲胺苯基)-6-氟苯并噻唑與[311^18在癡呆人腦勻漿中競爭結(jié)合實(shí)驗(yàn)的特異性結(jié)合(每分鐘衰變數(shù))~2-(4'-二甲胺苯基)-6-氟苯并噻唑摩爾比對數(shù)圖實(shí)驗(yàn)圖。圖6為效果實(shí)施例1中2-(4，-甲胺苯基)-6-氟乙氧基苯并噻唑與[311，18在癡呆人腦勻漿中競爭結(jié)合實(shí)驗(yàn)的特異性結(jié)合(每分鐘衰變數(shù))2-(4'-甲胺苯基)-6-氟乙氧苯并噻唑摩爾比對數(shù)圖。圖7為效果實(shí)施例1中[氖]2-(4'-甲胺苯基)-6-羥基苯并噻唑(卩H]PIB)與癡呆人腦勻漿飽和結(jié)合實(shí)驗(yàn)的特異性結(jié)合(每分鐘衰變數(shù))[3H]PIB摩爾比對數(shù)圖。圖8為效果實(shí)施例2中2-(4，-甲胺苯基)-6-['SF]氟乙氧基苯并噻唑與癡呆病人尸檢腦海馬組織中的淀粉樣蛋白特異性結(jié)合的放射性自顯影圖。圖9為效果實(shí)施例3中F-N-Me和硫磺素S與癡呆病人尸檢腦組織淀粉樣蛋白及神經(jīng)纖維纏結(jié)特異性結(jié)合的熒光顯像10為效果實(shí)施例4中["F]FDG([氟-18]脫氧葡萄糖)與正常大鼠腦內(nèi)淀粉樣蛋白結(jié)合的正電子計(jì)算機(jī)斷層成像(PET)掃描圖。圖11為效果實(shí)施例4中2-(4，-甲胺苯基)-6-[18巧氟乙氧基苯并噻哇(["F]0-FEt-PIB)與癡呆模型大鼠腦內(nèi)淀粉樣蛋白結(jié)合的正電子計(jì)算機(jī)斷層成像(PET)掃描圖。圖12為效果實(shí)施例4中2-(4，-甲胺苯基)-6-[1￥]氟乙氧基苯并噻唑(「F]0-FEt-PIB)與正常對照大鼠腦內(nèi)淀粉樣蛋白結(jié)合的正電子計(jì)算機(jī)斷層成像(PET)掃描圖。具體實(shí)施方式下面通過實(shí)施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍之中。實(shí)施例12-氨基-5-氟苯硫醇化合物的合成將30.0g(合178mmol)2-氨基-6-氟基苯并噻唑溶于50wt%KOH(180gKOH溶于180ml水中)和40ml乙二醇中，攪拌，成懸浮渾濁液。該懸浮液加熱，回流，固體全部溶解，成淺黃色溶液?；亓?8小時后，在冷卻到室溫時加入300ml甲苯，再加入180ml的乙酸中和。分離有機(jī)相，水相由另外200ml甲苯萃取。甲苯相由水洗后再用硫酸鎂干燥。蒸干溶劑后得到淺黃色固體，產(chǎn)率50.1%，鑒定結(jié)果如下'HNMR(丙酮-d6，500MHz)，A6.81(dd，J=9，2.5Hz，1H)，6.56(t，2H)，3.6(br，s);IR(KBr)v:3427，2560，1615，1487，1406，1289，1200，1141，864，812，685，462cm";MS(m/z)(%)142(100)，98(37).C6H6FNS，計(jì)算值C50.33，H4.22,F13.27,N9.78,S22.39;測量值C50.51，H4.82,N9.26,S22.17。實(shí)施例22-(4，-甲胺苯基)-6-氟基苯并噻唑的合成2-氨基-5-氟基苯硫醇0.72g(5.0mmol)和4-甲胺苯甲酸0.80g(7.0mmol)，加入約lg多聚磷酸，機(jī)械攪拌，通N2，升高溫度至20(TC，反應(yīng)2h，冷卻，向反應(yīng)得到的固體中加入10%的碳酸鉀水溶液中和，并加乙酸乙酯萃取。旋干溶劑過flash柱(正己垸/乙酸乙酯=4:1)，初分離后重結(jié)晶，固體再次過flash柱，最后得到0.52g黃色固體，產(chǎn)率21.6%，鑒定結(jié)果如下'HNMR(CDCl3，500MHz)，^:7.84(3H，1H和2H重合)，7.44(dd，J=9.0，2.5Hz，1H)，7.10(t，1H)，6.68(d，J=8.5Hz，2H)2.81(s,3H);IR(KBr)K3312，3273，3289，1605，1564，1480，1450，1276，1250，1062，1049，1001，卯2，854，MSm/z(Q/。):258(100);MS:Cl4HnFN2S，計(jì)算值258.0627，測定值258.0631。實(shí)施例32-(4'-二甲胺苯基)-6-氟基苯并噻唑的合成2-氨基-5-氟基苯硫醇0.77g(5.4mmo1)和4-(二甲胺)苯甲醛0.799g(5.4mmo1)溶于5ml無水DMSO中，加熱到120°C，反應(yīng)25min，冷卻至室溫，傾入水中，用30ml的乙酸乙酯萃取兩次，有機(jī)層用水洗并用硫酸鎂干燥。旋干溶劑。flash柱分離(正己烷/乙酸乙酯=4:1)，得到0.373g淡黃色固體，產(chǎn)率37.5%，鑒定結(jié)果如下HNMR(acetone-d6，500顧z)，5:7.88(d，J=8.9Hz，2H)，7.70(d，J=8.9Hz，1H)，7.50(d，J=2.5Hz，1H)，7.04(dd，J=8.9，2,5Hz，1H)，6.即H)，3.05(d，J=9.0Hz，6H);IR(KBr)K'3447，2972，2917，1607，1489，1455，1365，1222，1166，賜5，936，819，593cm"MS(w/z)(%)272(100)，256(13);MS:C15H23FN2S，計(jì)算值272.0783，測定值272.0781。實(shí)施例42-(4，-二甲胺苯基)-6-氟基苯并噻唑的合成2-氨基-5-氟基苯硫醇0.77g(5.4mmol)和4-(二甲胺)苯甲醛1.598gG0.8mmo1)溶于5ml無水DMSO中，加熱到180°C，反應(yīng)20min，冷卻至室溫，傾入水中，用30ml的乙酸乙酯萃取兩次，有機(jī)層用水洗并用硫酸鎂干燥。旋干溶劑。flash柱分離(正己垸/乙酸乙酯=4:1)，得到淡黃色固體，產(chǎn)率39%，鑒定結(jié)果同實(shí)施例3。實(shí)施例S2-(4，-甲胺苯基)-6-氟乙氧基苯并噻唑(O-FEt-PIB)的合成將103mg(0.4mmd)2-(4，-甲胺苯基)-6-羥基苯并噻唑，無水碳酸鉀(55.4mg，0.4mmo1)，碘化鉀(61mg，0.4mmo1)和二甲基甲酰胺(DMF)10ml依次加入三頸瓶中，攪拌加熱至80。C，滴加含有(14.8mg，0.06mmo1)對甲基苯磺酸氟乙酯的DMF溶液30ml。滴畢，恒溫反應(yīng)20h，趁熱過濾，濾液減壓濃縮，加水，過濾，水洗，乙醇洗，得到褐色固體。過flash柱(硅膠，正己烷/乙酸乙酯二4:1)純化，得到21mg黃色2-(4，-甲胺苯基)-6-氟乙氧基苯并噻唑，鑒定結(jié)果如下分析HPLC條件VydacC18柱，直徑為2.5mm，長度為250mm，其中填料粒徑為10pm(日本，島津公司)，條件1:流動相K70/30乙腈/TEA磷酸緩沖液(pH=7.20)流速0.5mL/min，紫外254nm檢測。保留時間k=6.98min，Purity85%;條件2:流動相A:HPLC甲醇，B:0.1%三氟乙酸水溶液(pH=2.52)梯度條件為0-2minl00%B，25min，30%的B，40minlOO%B。流速1mL/min，紫外254nm檢測，保留時間K=17.8min。薄層色譜(展開劑三氯甲烷)，Rf=0.22。'HNMR(CDC13，500MHz)S:8.2l(d，J=8.5Hz,2H)，8.12(d，J=9.0Hz，1H)，7.38(d，J=8.5Hz，IH)，7.34(d，J=9.3Hz，IH)，7.18(dd,J=8.6，2.5Hz，2H)，4.75(dd，J=5.5，9.0Hz，2H)，3.40(s，3H);IR(KBr)k'3443，3265，2958，2924，1744，1720，1609，1561，1543，1489，1460，1446，1333，1261，1227，1208，1181，1083，1021，964，940,876，802cm";MSm/z(%)302(42)，255(100)，227(16)，95(23);MS:C16H15FN2OS，計(jì)算值302.0889，測定值302.0887。實(shí)施例62-(4，-甲胺苯基)-6-氟乙氧基苯并噻唑(O-FEt-PIB)的合成將103mg(0.4mmd)2-(4，-甲胺苯基)-6-羥基苯并噻唑，無水碳酸鉀(55.4mg，0.4mmo1)，碘化鉀(61mg，0.4mmo1)和二甲基甲酰胺(DMF)10ml依次加入三頸瓶中，攪拌加熱至12(TC，滴加含有(256mg，1.2mmo1)對甲基苯磺酸氟乙酯的DMF溶液30ml。滴畢，恒溫反應(yīng)20h，趁熱過濾，濾液減壓濃縮，加水，過濾，水洗，乙醇洗，得到褐色固體。過flash柱(硅膠，正己垸/乙酸乙酯=4:1)純化，得到黃色2-(4'-甲胺苯基)-6-氟乙氧基苯并噻唑，鑒定結(jié)果同時實(shí)施例5。實(shí)施例72-(4，-甲胺苯基)-6-氟乙氧基苯并噻唑(O-FEt-PIB)的合成將14.5mg(0.06mmo1)2-(4，-甲胺苯基)-6-羥基苯并噻唑，無水碳酸鉀(55.4mg，0.4mmo1),碘化鉀(61mg，0.4mmo1)和二甲基甲酰胺(DMF)10ml依次加入三頸瓶中，攪拌加熱至10(TC，滴加含有(148mg，0.6mmo1)對甲基苯磺酸氟乙酯的DMF溶液30ml。滴畢，恒溫反應(yīng)20h，趁熱過濾，濾液減壓濃縮，加水，過濾，水洗，乙醇洗，得到褐色固體。過flash柱(硅膠，正己烷/乙酸乙酯=4:1)純化，得到黃色2-(4，-甲胺苯基)-6-氟乙氧基苯并噻唑，鑒定結(jié)果同時實(shí)施例5。實(shí)施例82-(4，-甲胺苯基)-6-18"氟乙氧基苯并噻唑(18F0-FEt-PIB)的合成1.從加速器生產(chǎn)["F]FDG([氟-18]脫氧葡萄糖)后得到殘留有'，的QMA柱，測量活度52.55mCi;2.使用事先配好的含40mgK222和6mgK2C03的乙腈水溶液(體積比3.54:0.46，共4ml)1.0ml，緩慢淋洗，做到逐滴落下，測量活度47.62mCi;3.把反應(yīng)瓶置入IO(TC油浴中，通入N210min，吹干水分，加入溶解有8.6mg的對二苯甲磺酸乙二醇的400ul乙腈，吹干，重復(fù)3次，然后取出反應(yīng)瓶冷卻；4.加入500^1CH3CN，IO(TC油浴加熱10min。點(diǎn)板走薄層色譜(展開劑三氯甲烷)及放射性高效液相鑒定中間產(chǎn)物，結(jié)果見圖1和圖2。(條件:VydacC18柱，直徑為2.5mm，長度為250mm，其中填料粒徑為10pm(日本，島津公司)，流動相A:HPLC甲醇，B:0.1%三氟乙酸水溶液(PH=2.52)梯度條件為0-2minl00%B，25min，30%的B。流速1mL/min，紫外254nm檢測；收集9-11min的流出液)。合成結(jié)束時，加入4ml的水，渦旋，取出全部液體過C18seppak柱，去掉淋出的液體。用2ml5:1正己烷/乙酸乙酯淋洗C18seppak柱子，再用2ml正己烷/乙酸乙酯淋洗，收集全部淋出液，測得淋洗液活度3.95mCi。5.置入10(TC油浴中，通入N2吹干，冷卻，加入200ul超干乙腈，再加入3mg6-OH-BTA-l(2-(4，-甲胺苯基)-6-羥基苯并噻唑)、200ul二甲基亞砜和適量K2C03，反應(yīng)20min，點(diǎn)板，走薄層色譜和放射性高效液相鑒定產(chǎn)物，并利用高效液相分離提純目標(biāo)產(chǎn)物(條件同上)，結(jié)果見圖3和圖4。實(shí)施例92-(4，-甲胺苯基)-6-[18巧氟乙氧基苯并噻唑([18F10-FEt-PIB)的合成1.由加速器生產(chǎn)得到F-18離子1Ci，其中含K222和K2C03，IO(TC油浴中，通入N210min，吹干水分，加入溶解有8.6mg的對二苯甲磺酸乙二醇的400ul乙腈，吹干，重復(fù)3次，然后取出反應(yīng)瓶冷卻；2.加入500[AlCH3CN，ll(TC下加熱8min。合成結(jié)束時，加入4ml的水，渦旋，取出全部液體過C18seppak柱，去掉淋出的液體。用2ml5:1正己垸/乙酸乙酯淋洗C18seppak柱子，再用2ml正己烷/乙酸乙酯淋洗，收集全部淋出液，測得淋洗液活度500mCi。3.120。C下，通入N2吹干，冷卻，加入200iil超干乙腈，再加入3mg6-0H-BTA-l(2-(4'-甲胺苯基)-6-羥基苯并噻唑)、100ul二甲基亞砜和適量K2C。3，反應(yīng)10min，即得。實(shí)施例IO2-(4，-甲胺苯基)-6-[^氟乙氧基苯并噻唑(18F10-FEt-PlB)的合成1.由加速器生產(chǎn)得到F-18離子2Ci，其中含&22和K2C03，J00。C油浴中，通入N210min，吹干水分，加入溶解有8.6mg的對二苯甲磺酸乙二醇的400ul乙腈，吹干，重復(fù)3次，然后取出反應(yīng)瓶冷卻；2.加入50(HilCH3CN，90。C油浴加熱5min。合成結(jié)束時，加入4ml的水，渦旋，取出全部液體過C18seppak柱，去掉淋出的液體。用2ml5:1正己烷/乙酸乙酯淋洗C18seppak柱子，再用2ml正己烷/乙酸乙酯淋洗，收集全部淋出液，測得淋洗液活度1000mCi。3.8CTC下，通入N2吹干，冷卻，加入500ul超干乙腈，再加入lmg6-OH-BTA-l(2-(4'-甲胺苯基)-6-羥基苯并噻唑)、300ul二甲基亞砜和適量K2C03，反應(yīng)30min，鑒定結(jié)果同實(shí)施例8。效果實(shí)施例1苯并噻唑類化合物與fH-PIB針對早老性癡呆患者腦勻漿中淀粉樣蛋白的競爭結(jié)合實(shí)驗(yàn)下列實(shí)驗(yàn)步驟以2-(4'-甲胺苯基)-6-氟基苯并噻唑?yàn)槔?-(4，-(二甲胺)苯基)-6-氟基苯并噻唑和2-(4，-甲胺苯基)-6-氟乙氧基苯并噻唑的實(shí)驗(yàn)步驟與之相同。1.溶液的配制1)配制1x1(^M的2-(4，-甲胺苯基)-6-氟基苯并噻唑的二甲基亞砜溶液。根據(jù)表1配置各濃度的2-(4'-甲胺苯基)-6-氟基苯并噻唑的二甲基亞砜溶液。表l2-(4，-甲胺苯基)-6-氟基苯并噻唑的二甲基亞砜溶液配制表<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>2)取lml已勻漿好的人腦勻漿(分裝在1.5ml指形管中，-S(TC保存，由美國NIH的蔡利生博士提供)加入lml磷酸緩沖液(PBS)稀釋，加入到15ml勻漿器中并手動來回勻漿5次(來回算一次)，操作需在冰上完成。另外用8mlPBS淋洗勻漿器，得到10ml溶液保存在50ml燒杯中；3)取40^1lmCi/mL[3H]-PIB溶液，用4.0ml的乙醇稀釋，得到4ml比活度1.00nCi/100pLA溶液；(1)280|alA溶液，加入6.72mlPBS稀釋，得到4.00xl(T2pCi/lOO|uL溶液保存在蛋形瓶中；(2)準(zhǔn)備4LPBS(0.2mol/l，pH=7.27.4)作細(xì)胞收集器淋洗液。2.結(jié)合實(shí)驗(yàn)(1)裝管按表2所示，在12x75mm硼硅烷管中分別加入10ul不同濃度的6-F-BTA-l(2-(4'-甲胺苯基)-6-氟基苯并噻唑)的二甲基亞砜溶液和800ulPBS。渦旋，直至液面離試管口一英寸的距離。加入100|^[3司6-0H-BTA-1(2-(4，-甲胺苯基)-6-羥基苯并噻唑)的PBS溶液禾口100|iL腦勻漿溶液。渦旋。注意，6-F-BTA-l可以直接加入管中，其他的溶液應(yīng)該從低于管口一英寸的地方沿著管壁加入，管口用封口膜封好；表2結(jié)合實(shí)驗(yàn)溶液配制表<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>(2)孵育37°C水浴中，管中液面高度低于水面高度，以60次/每分鐘的頻率振蕩兩小時。同時，WhatmanGF/B濾紙上作上標(biāo)記區(qū)分正反面，用0.5%的聚亞胺浸泡；(3)用1mlPBS清洗細(xì)胞收集器管路，濾紙貼在相應(yīng)位置上。打開合適的通道，開始收集；(4)用鑷子取出附有蛋白的濾紙，放入液閃測量瓶中，各加入4mlCytoScintTM閃爍液，另外三只瓶子放擦拭以檢測有無沾污，再另外三只加入100|xL4.00xl(r2nCi/100fiL的[3H]PIB，并各加入4ml閃爍液。每只管渦漩lmin，靜置避光過夜；(5)使用液體閃爍測量儀測量計(jì)數(shù)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)通過GraphPadPrism4軟件處理，用單位點(diǎn)擬合得到了一系列反S曲線(2-(4'-甲胺苯基)-6-氟基苯并噻唑(圖5)，2-(4'-(二甲胺)苯基)-6-氟基苯并噻唑(圖6)和2-(4，-甲胺苯基)-6-氟乙氧基苯并噻唑(圖7))，并計(jì)算出各化合物的最適IC5o值，再通過卩H]PIB([氖]2-(4'-甲胺苯基)-6-羥基苯并噻唑)與癡呆腦勻漿結(jié)合的飽和曲線(圖8)，得到各化合物K,值，結(jié)果如表3所示。表3苯并噻唑苯胺類化合物與癡呆病人腦勻漿中淀粉樣蛋白的親和常數(shù)&<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>由此表可見，PIB的Ki值在上表中數(shù)值最大，比本發(fā)明的化合物約高出一個數(shù)量級。由此說明，本發(fā)明的幾種化合物均表現(xiàn)出比已知文獻(xiàn)化合物PIB更高的親和力。效果實(shí)施例2[18FjO-FEt-PIB與癡呆病人尸檢腦海馬組織中的淀粉樣蛋白特異性結(jié)合的放射性自顯影6um厚癡呆病人尸檢腦海馬組織石蠟連續(xù)切片，經(jīng)二甲苯，乙醇脫蠟后，用中性樹膠在組織邊緣劃圈，再浸入乙醇中除去多余的樹膠，然后一半與200uL60ixG/200nL的[，]0-FEt-PIB的PBS溶液在室溫下共孵育25min，另一半切片多加入PIB配成飽和溶液，其余相同。用PBS洗去表面的PBS溶液，再分別浸入乙醇和水中各lmin。使用磷屏顯像10min，結(jié)果如圖9所示。圖中黑色區(qū)域?yàn)榉派湫詽饧瘏^(qū)，左圖未加PIB。圖中可明顯看出加入PIB后放射性濃集區(qū)明顯減少，表明["F]0-FEt-PIB能與人腦組織中的淀粉樣蛋白特異性結(jié)合。效果實(shí)施例3F-N-Me和硫磺素S與癡呆病人尸檢腦組織淀粉樣蛋白及神經(jīng)纖維纏結(jié)特異性結(jié)合的熒光顯像圖癡呆病人尸檢腦組織處理同效果實(shí)施例2，除去中性樹膠的腦切片經(jīng)磷酸緩沖液洗滌，在分別含有100ixMF-N-Me和硫磺素S的40%乙醇和60%蒸餾水，pH二10的溶液中室溫下孵育10分鐘。用蒸餾水洗滌，再浸入含有0.2^NaOH的80X的乙醇溶液中2分鐘，然后再浸入蒸餾水中10分鐘。片子晾干后在熒光顯微鏡下觀察。如圖9所示，左圖為F-N-Me的熒光顯像圖，箭頭所示為淀粉樣斑塊的位置，圓形區(qū)域?yàn)樯窠?jīng)纖維纏結(jié)的位置。右圖為硫磺素S的熒光顯像圖，箭頭所示為淀粉樣斑塊，與中間圖斑塊位置吻合。效果實(shí)施例4[18F0-FEt-PIB在模型大鼠腦內(nèi)的小動物正電子計(jì)算機(jī)斷層成像(PET)實(shí)驗(yàn)在模型大鼠右半腦海馬處注射6微克淀粉樣蛋白，左半腦作為自體對照；正常對照組右半腦注射同等量的生理鹽水。通過免疫組化檢測其右腦是否表達(dá)過量的淀粉樣蛋白，通過水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測其行為學(xué)上是否改變。結(jié)果表明該模型符合右腦淀粉樣含量高于左腦，記憶力比正常對照差。2mCi[18F0-FEt-PIB的PBS溶液由靜脈注射到模型大鼠與正常對照中，5min后進(jìn)行microPET掃描10min，結(jié)果如圖11和12所示。由圖可見，[18F]0-FEt-PIB在模型鼠右腦中比在左腦中多出0.0001mCi(左0.0006379mCi，右0.0007445mCi)，而在正常對照組中左右腦分布基本相同(左0.0005269mCi，右0.0005372mCi)。圖10為["F〗FDG([氟-18]脫氧葡萄糖)與正常大鼠腦內(nèi)淀粉樣蛋白結(jié)合的PET掃描圖。由圖10、U和12可以清楚地看出，[18F]OFEt-PIB顯示了與['V]FDG不同的腦內(nèi)分布，后者是目前經(jīng)美國FDA批準(zhǔn)上市的唯一一個含18F的正電子放射性藥物。本發(fā)明具體實(shí)施例中，用于合成的試劑2-氨基-6-氟-苯并噻唑、氨甲基苯甲酸購自Fluka化學(xué)試劑公司；氨甲基苯甲酸購自AldrichChemicalCompany;N，N-二甲基苯甲醛由浙江臺州耀業(yè)醫(yī)化有限公司免費(fèi)提供；癡呆病人腦勻漿由美國NIH蔡利生博士提供(使用前再次勻漿)；模型大鼠由江蘇原子醫(yī)學(xué)研究所提供；其它試劑均購自上?；瘜W(xué)試劑公司(使用前未經(jīng)處理)。使用儀器為AVANCE500核磁共振儀(BRUKER);AVATAR370FT-IR紅外光譜儀(ThermoNicolet);MicroMassGCTCA055質(zhì)譜儀；BeckmanLC-6500液體閃爍測量儀(美國)；ZTII型多頭細(xì)胞收集器。權(quán)利要求1.一類苯并噻唑苯胺類化合物如式I所示的2-(4’-(甲胺或二甲胺)苯基)-6-氟苯并噻唑，如式II所示的2-(4’-甲胺苯基)-6-氟乙氧基苯并噻唑，及如式III所示的[氟-18]2-(4’-甲胺苯基)-6-氟乙氧基苯并噻唑；id="icf0001"file="A2007100399850002C1.tif"wi="66"he="17"top="59"left="54"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>式Iid="icf0002"file="A2007100399850002C2.tif"wi="83"he="16"top="81"left="53"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>式IIid="icf0003"file="A2007100399850002C3.tif"wi="85"he="17"top="102"left="45"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>式III其中，R為H或CH3。2.如權(quán)利要求1所述的如式1所示的2-(4，-(甲胺或二甲胺)苯基)-6-氟苯并噻唑的制備方法，包括如下步驟12020(TC下，將2-氨基-5-氟苯硫醇與4-甲胺苯甲酸或4-(二甲胺)苯甲醛在惰性氣體保護(hù)下，進(jìn)行反應(yīng)即可。3.如權(quán)利要求1所述的如式11所示的2-(4'-甲胺苯基)-6-氟乙氧基苯并噻唑的制備方法，包括如下步驟在非質(zhì)子溶劑中，將物質(zhì)的量量比為10:11:10的2-(4'-甲胺苯基)-6-羥基苯并噻唑和對甲基苯磺酸氟乙酯，加入無水堿金屬碳酸鹽(如碳酸鉀，碳酸鈉等)，堿金屬碘化物(如碘化鉀，碘化鈉等)使反應(yīng)溶劑飽和，進(jìn)行反應(yīng)，即可。4.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于所述的反應(yīng)的溫度為80120°C5.如權(quán)利要求1所述的如式111所示的[氟-18]2-(4，-甲胺苯基)-6-氟乙氧基苯并噻唑的制備方法，包括如下步驟堿金屬碳酸鹽(如碳酸鉀或碳酸鈉)飽和的無水乙腈或N，N二甲基亞砜中，110mg的2-(4，-甲胺苯基)-6-羥基苯并噻唑，與新鮮制備的11000mCi[氟-18]氟乙基對甲苯磺酸酯進(jìn)行反應(yīng)，即可。6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于所述反應(yīng)溫度為80160°C。7.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述反應(yīng)的時間為260分鐘。8.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述的反應(yīng)完成后，將產(chǎn)物經(jīng)高效液相色譜分離制備，即可。9.如權(quán)利要求1所述的苯并噻唑苯胺類化合物在制備檢測或顯像動物、人體或組織內(nèi)淀粉樣蛋白沉積的藥物或其藥物有效成分中的應(yīng)用。10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物為正電子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層成像技術(shù)顯像(PET)或熒光顯像技術(shù)或磁共振顯像技術(shù)(MRI)藥物。全文摘要本發(fā)明公開了一類新穎的如式I-III所示的苯并噻唑苯胺類化合物；以及上述化合物的制備方法；其中，R為H或CH₃。本發(fā)明還公開了上述化合物在檢測或顯像動物、人體或組織內(nèi)淀粉樣蛋白沉積中的應(yīng)用。本發(fā)明的苯并噻唑苯胺類化合物，與淀粉樣蛋白具有較高的特異結(jié)合活性，且在動物或人體內(nèi)容易穿過血腦屏障，具有比現(xiàn)有化合物PIB([碳-11]2-(4’-甲胺苯基)-6-羥基苯并噻唑)更高的特異結(jié)合活性。本發(fā)明的制備方法簡單，無高溫、高壓或敏感試劑的特殊要求，其中新穎的位置選擇性的¹⁸F標(biāo)記方法為首次公開。本發(fā)明的應(yīng)用中，首次成功獲得采用正電子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層成像(PET)在模型大鼠腦中淀粉樣蛋白沉積顯象；首次發(fā)現(xiàn)應(yīng)用核黃素類衍生物(式I結(jié)構(gòu))可以同時靶向淀粉樣蛋白沉積和神經(jīng)纖維纏結(jié)。本發(fā)明的應(yīng)用，可為癡呆動物模型篩選以及癡呆病人臨床診斷提供重要的參考信息。文檔編號A61B5/00GK101293878SQ20071003998公開日2008年10月29日申請日期2007年4月25日優(yōu)先權(quán)日2007年4月25日發(fā)明者喬金平,尹端沚,嵐張,鄭明強(qiáng)申請人:中國科學(xué)院上海應(yīng)用物理研究所