專利名稱：：具有抗胃腸道致病菌、抗氧化和降血壓作用的短雙歧桿菌及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于微生物學(xué)領(lǐng)域，更具體的，本發(fā)明涉及一種新穎的具有抗胃腸道致病菌、抗氧化和降血壓功能的短雙歧桿菌，以及包含該菌株或其代謝產(chǎn)物的食物組合物或藥物組合物。
背景技術(shù)：
：雙歧桿菌為革蘭氏陽性菌，無芽孢，不運(yùn)動(dòng)，嚴(yán)格厭氧，形態(tài)多變，不同種或同種不同齡，不同生長環(huán)境而呈現(xiàn)彎曲桿狀、V和Y形等多種形態(tài)，并由此得名雙歧桿菌。雙歧桿菌于1899年由法國巴斯德研究所的Tisser首次在母乳喂養(yǎng)嬰兒糞便中發(fā)現(xiàn)并分離出來，后繼續(xù)研究又發(fā)現(xiàn)，在人體消化道中，其數(shù)量隨年齡增大呈動(dòng)態(tài)變化，并與機(jī)體的許多生理、病理現(xiàn)象關(guān)系密切，因此引起了包括微生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)、營養(yǎng)學(xué)等領(lǐng)域?qū)W者們的廣泛興趣，并對(duì)雙歧桿菌進(jìn)行了更廣泛的研究，其中包括雙歧桿菌的生理、生化特性，分類，對(duì)宿主的生理作用機(jī)制的研究等。近來大量的研究資料表明，具有優(yōu)良特性的雙歧桿菌必須來源于人類，因此在人體內(nèi)尋找出優(yōu)勢(shì)雙歧桿菌加以利用，對(duì)于維持人體健康、促進(jìn)機(jī)體正常功能、延緩衰老等，將較其它來源的雙歧桿菌具有更強(qiáng)大的功能。盡管目前本領(lǐng)域已經(jīng)分離了多種雙歧桿菌且這些雙歧桿菌均具有一定的功能，然而有些雙歧桿菌并非分離自人體，服用后可能會(huì)對(duì)人體造成一定的安全威脅；并且，大多雙歧桿菌的對(duì)致病菌的抑制作用不夠強(qiáng)，益生效果不夠明顯。因此，本領(lǐng)域迫切需要找到一種具有益生作用且安全性好、功效明顯的雙歧桿菌。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種新的來源于人體的短雙歧桿菌，該菌株可很好地粘附到胃和腸粘膜上，并可抵抗酸、膽汁，對(duì)病原性微生物(如幽門螺旋桿菌和大腸桿菌(更特別的為埃希氏大腸桿菌))具有良好的抗性，且具有良好的抗氧化和降血壓功能。本發(fā)明的另一目的是提供所述短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物的用途。本發(fā)明的另一目的是提供含有所述短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物的組合物。在本發(fā)明的第一方面，提供一種短雙歧桿菌(A'/Wo6sctei^'咖Z^ere)，所述的短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物具有血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)抑制活性。在另一優(yōu)選例中，所述的短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物具有降血壓作用，其血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制活性超過30%;更優(yōu)選的，所述的短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制活性超過40%。在另一優(yōu)選例中，所述的短雙歧桿菌接種到牛乳中，37士rc條件下發(fā)酵21士3小時(shí)(活菌數(shù)約為lX108cfu/ml)后，發(fā)酵乳的ACE抑制活性超過30Q/。，更優(yōu)選地為超過40%。在另一優(yōu)選例中，所述的短雙歧桿菌具有強(qiáng)的抗酸和抗膽鹽能力，在PH2.0，0.6%膽汁酸中放置5小時(shí)，活菌數(shù)量超過l(fcfu/ml。在另一優(yōu)選例中，所述的短雙歧桿菌具有強(qiáng)的抗氧化能力。在另一優(yōu)選例中，所述的短雙歧桿菌具有強(qiáng)的抑制胃腸道致病菌(如幽門螺桿菌和大腸桿菌(更特別的為埃希氏大腸桿菌))的能力。在另一優(yōu)選例中，所述的短雙歧桿菌，在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的保藏號(hào)為CGMCCNo.1993。在本發(fā)明的第二方面，提供所述的短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物的用途，用于制備預(yù)防或治療血管緊張素轉(zhuǎn)換酶異?；罨嚓P(guān)疾病的組合物。在另一優(yōu)選例中，所述的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶異?；罨嚓P(guān)疾病包括(但不限于)..心血管疾病，如高血壓等。在另一優(yōu)選例中，所述的短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物用于制備抑制胃腸道致病菌的組合物；或用于制備預(yù)防或治療細(xì)菌性消化道疾病的組合物。在另一優(yōu)選例中，所述的細(xì)菌性消化道疾病包括(但不限于)胃炎、胃潰瘍、十二指腸炎、大腸炎、小腸炎、結(jié)腸炎或直腸炎。在另一優(yōu)選例中，所述的短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物用于制備抗氧化的組合物。在本發(fā)明的第三方面，提供一種組合物，所述組合物含有(1)有效量的所述的短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物，以及(2)食品學(xué)上或藥學(xué)上可接受的載體。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物含有104-1012Cfu/ml或104-1012cfu/g的所述的短雙歧桿菌。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物含有105-10'°cfu/ml或105-l(Tcfu/g的所述的短雙歧桿菌；更優(yōu)選的，所述的組合物含有106-108cfu/ml或106-10scfu/g的所述的短雙歧桿菌。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物中還含有有效量的嗜熱鏈球菌、保加利亞乳桿菌、鼠李糖乳桿菌或其它各種適用于食品、藥品或保健品開發(fā)的菌株。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物為食物組合物，所述的食物組合物選自固體、乳品、溶液制品、粉末制品、或懸浮液制品。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物為藥物組合物，所述的藥物組合物選自顆粒劑、膠囊、片劑、粉末劑、口服液、混懸液、或乳劑。本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。圖1A和IB顯示了XJH301菌株經(jīng)革蘭氏染色的情況。其中，圖IA為1000倍顯微拍攝的革蘭氏染色圖片；圖IB為光學(xué)電鏡拍攝的圖片。圖2顯示了使用雙歧桿菌的特異性引物(Bif1和Bif2)對(duì)XJH301菌株迸行PCR，將PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖電泳的結(jié)果。泳道1為重蒸水的電泳結(jié)果，泳道2為巻曲乳桿菌的電泳結(jié)果，泳道3為植物乳桿菌的電泳結(jié)果，泳道4為DL2000Marker的電泳結(jié)果，泳道5為本發(fā)明菌株的電泳結(jié)果，泳道6為短雙歧桿菌C101的電泳結(jié)果。圖3顯示了XJH301菌株中的16SrRNA的部分核苷酸序列測(cè)定結(jié)果。圖4顯示了XJH301菌株中的16SrRNA的部分核苷酸序列。圖5顯示了采用引物BF1和BF2擴(kuò)增XJH301菌株的16SrRNA后，擴(kuò)增產(chǎn)物的1%瓊脂糖電泳結(jié)果；其中，泳道M為DL2000，泳道1為空白，泳道2-10為雙歧桿菌的擴(kuò)增結(jié)果。圖6顯示了XJH301菌株粘附到人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系Caco-2細(xì)胞的體外粘附性試驗(yàn)的觀察結(jié)果。圖7顯示了XJH301菌株對(duì)致病性埃希氏大腸桿菌的抑制效果。圖8顯示了XJH301菌株對(duì)幽門螺旋桿菌的抑制效果。具體實(shí)施例方式本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究和實(shí)驗(yàn)，最終找到了一株具有優(yōu)異的抗細(xì)菌特性、抗氧化功能和降血壓功能的短雙歧桿菌菌株(保藏號(hào)為CGMCCNo.1993)，本發(fā)明人將該菌株命名為"短雙歧桿菌XJH301"。多種試驗(yàn)表明，所述的短雙歧桿菌具有抗致病菌以及降血壓功能，具有耐受低pH值和高膽汁酸鹽的能力，并具有很強(qiáng)的消化道粘附能力和降血壓能力。基于此完成了本發(fā)明。如本文所用，術(shù)語"本發(fā)明的短雙歧桿菌"，"本發(fā)明的菌株"，"短雙歧桿菌XJH301"，"菌株XJH301"可互換使用，都指保藏號(hào)為CGMCCNo.1993的短雙歧桿菌。菌株篩選本發(fā)明的短雙歧桿菌是通過以下方法、經(jīng)過長期的分析和篩選而獲得(1)從新疆和田地區(qū)長壽老人糞便中分離獲得500多株細(xì)菌；(2)對(duì)分離獲得的細(xì)菌進(jìn)行產(chǎn)酸和牛乳發(fā)酵試驗(yàn)，獲得301株產(chǎn)酸、凝乳菌株；(3)選用特異性培養(yǎng)基、結(jié)合生長特性等，初步確定為乳酸菌類群；(4)從初步確定的乳酸菌中，比較它們的加工和生長特性，篩選具有優(yōu)異的抗細(xì)菌特性、耐酸和膽汁酸鹽能力、抗氧化能力、降血壓功能的安全乳酸菌，從而獲得所述菌株。菌株鑒定本發(fā)明采用以下途徑對(duì)所述菌株進(jìn)行鑒定(l)利用生理、生化特性進(jìn)行分析；(2)進(jìn)行糖發(fā)酵分析；(3)通過進(jìn)行16SrKNA序列分析，將本發(fā)明的菌株與標(biāo)準(zhǔn)的菌株進(jìn)行比較，以便確切證實(shí)所述細(xì)菌菌株。結(jié)果，鑒別出所述菌株是一種新的短雙歧桿菌。本發(fā)明的短雙歧桿菌具有如下生理生化特征呈革蘭氏陽性菌，為無芽孢，棒狀或分枝，大小為1.0-1.5yra。這是雙歧桿菌的典型特征。本發(fā)明的短雙歧桿菌具有如下培養(yǎng)特征在MRS瓊脂平板上長成直徑為l-2mm的乳脂色菌落，最佳培養(yǎng)溫度在37°C。使用雙歧桿菌特異性的引物進(jìn)行PCR時(shí)，本發(fā)明的菌株和標(biāo)準(zhǔn)的雙歧桿菌中都發(fā)現(xiàn)了大約600bp的類似片段，這證明了本發(fā)明的菌株屬于雙歧桿菌。通過使用16SrRNA測(cè)序和核苷酸序列BLAST分析，所述菌株以95.5%以上的精確度被證實(shí)屬于短雙歧桿菌，然后使用糖發(fā)酵分析，與《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》比較，進(jìn)一步證實(shí)所述菌株屬于短雙歧桿菌。另一方面，BLAST核苷酸序列比較顯示，本發(fā)明的菌株與目前已知的其它所有短雙歧桿菌的相應(yīng)序列皆不同，但具有一定的同源性。與標(biāo)準(zhǔn)菌株短雙歧桿菌(Az'/7^^ctei^"/77Z^reye)JCM1273(其16SrRNA序列參見Genebank登錄號(hào)AF491832)比較16SrRNA序列的結(jié)果顯示，本發(fā)明的菌株與所述標(biāo)準(zhǔn)菌株存在序列上的不同。因此可見，本發(fā)明的菌株是一種以往未被分離的新的短雙歧桿菌。菌株的安全性及有益功能A.安全性本發(fā)明的菌株是分離自健康人體的，因此具有良好的安全性。為了進(jìn)一步證實(shí)所述菌株的安全性，本發(fā)明人選擇ICR小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，觀察小鼠在服用了本發(fā)明的菌株后的反應(yīng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小鼠在服用期間和服用后未出現(xiàn)不適癥狀，在整個(gè)觀察期間精神狀態(tài)良好，心、肝、脾、肺、腎等內(nèi)臟器官也均未見任何異常。B.耐酸和膽汁酸鹽能力本發(fā)明的短雙歧桿菌還具有耐低pH值和高膽汁酸鹽能力。試驗(yàn)證明，本發(fā)明的菌株可以在pH2、含0.6%膽汁酸的MRS培養(yǎng)基中放置5小時(shí)活菌數(shù)量超過106cfU/raL，說明具有很強(qiáng)的抵抗酸和膽鹽雙重能力。c.粘附能力本發(fā)明的短雙歧桿菌菌株還具有較強(qiáng)的粘附能力。為了檢測(cè)菌株的粘附能力，本發(fā)明人采用一種典型的腸道上皮細(xì)胞(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系Caco-2細(xì)胞)進(jìn)行了的體外粘附性試驗(yàn)，并與標(biāo)準(zhǔn)菌株短雙歧桿菌作比較。結(jié)果證實(shí)本發(fā)明的菌株具有比標(biāo)準(zhǔn)菌株更強(qiáng)的腸道上皮細(xì)胞粘附能力。此外，本發(fā)明人還測(cè)定本發(fā)明的菌株對(duì)致病性大腸桿菌(更特別的為埃希氏大腸桿菌)粘附的競爭性粘附抑制作用，并與其它多株短雙歧桿菌比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的菌株的競爭性粘附抑制作用最強(qiáng)。D.抑菌能力本發(fā)明的短雙歧桿菌還具有抑制胃腸道致病菌的作用。所述的胃腸道致病菌比如幽門螺旋桿菌、埃希氏大腸桿菌。在本發(fā)明的實(shí)例中，本發(fā)明人培養(yǎng)了幽門螺桿菌和埃希氏大腸桿菌，在含有幽門螺桿菌和埃希氏大腸桿菌的培養(yǎng)基平板上打孔注入本發(fā)明的短雙歧桿菌，觀察產(chǎn)生的抑菌圈，并以標(biāo)準(zhǔn)菌株短雙歧桿菌作對(duì)照。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的菌株具有比標(biāo)準(zhǔn)菌株更強(qiáng)的致病菌抑制作用。本領(lǐng)域人員均了解，幽門螺桿菌是導(dǎo)致胃腸炎癥的主要致病菌，其生長和繁殖可引起胃炎、胃潰瘍、十二指腸炎等的發(fā)生。大腸桿菌是導(dǎo)致腸道炎癥的重要致病菌，其生長和繁殖可引起大腸炎、小腸炎、結(jié)腸炎或直腸炎等的發(fā)生。因此可見，本發(fā)明的短雙歧桿菌可被應(yīng)用于防治細(xì)菌性消化道疾病，如胃炎、胃潰瘍、十二指腸炎、腸炎、結(jié)腸炎或直腸炎。E.抗氧化能力本發(fā)明的短雙歧桿菌菌株還具有顯著的抗氧化的能力。在本發(fā)明的實(shí)例中，本發(fā)明人利用ICR小鼠灌胃菌株培養(yǎng)物，連續(xù)8天，末次灌胃后l小時(shí)，摘眼球取血，分離血清測(cè)試SOD活力和MDA含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該菌株培養(yǎng)物能夠顯著提高小鼠抗氧化能力，減少體內(nèi)脂質(zhì)過氧化物的生成。F.降血壓功能本發(fā)明的短雙歧桿菌菌株具有降血壓功能，具體為在熱處理的原料乳中加入5-10%的本發(fā)明菌株發(fā)酵劑，在37。C發(fā)酵17-24小時(shí)，體外測(cè)定發(fā)酵乳的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制(ACEI)的活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明菌株的發(fā)酵乳具有明顯抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiotensin-convertingenzyme,ACE)活性的功能，其血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制活性超過30%;更優(yōu)選的超過40%。本領(lǐng)域人員均了解，血管緊張素轉(zhuǎn)化酶在血壓調(diào)節(jié)過程中起著非常重要的作用。ACE可以水解無活性的血管緊張素I形成有活性的血管緊張素II，血管緊張素II是已知最強(qiáng)的縮血管物之一，具有收縮血管平滑肌的效應(yīng)，可以導(dǎo)致血管收縮，引發(fā)高血壓等心血管疾病。由上述機(jī)制可見，抑制ACE的活性可防止血管緊張素I水解為血管緊張素II，從而防止高血壓等心血管疾病的發(fā)生或發(fā)展。因此，本發(fā)明的短雙歧桿菌可通過抑制ACE的活性而達(dá)到防止高血壓發(fā)生或發(fā)展、降低血壓的效果。短雙歧桿菌的代謝產(chǎn)物所述的"短雙歧桿菌的代謝產(chǎn)物"是指在本發(fā)明的短雙歧桿菌生長或繁殖過程中產(chǎn)生的、具有抗氧化、抑菌或降血壓活性的代謝物質(zhì)。例如，所述的代謝產(chǎn)物包括但不限于所述短雙歧桿菌的發(fā)酵產(chǎn)物(如發(fā)酵乳、發(fā)酵液)；所述短雙歧桿菌產(chǎn)生的活性成分(如有機(jī)酸、胞外糖苷酶)。所述的代謝產(chǎn)物還可以是從菌株培養(yǎng)物中分離出來的一類活性成分或活性成分混合物。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，雙歧桿菌的抑菌作用主要是細(xì)胞代謝產(chǎn)生的有機(jī)酸使腸道PH值降低，抑制了致病菌的生長繁殖。此外，雙歧桿菌產(chǎn)生的胞外糖苷酶，可以降解腸粘膜上皮細(xì)胞的雜多糖，由于這些糖既是潛在致病菌的受體也是結(jié)合細(xì)菌毒素的受體，所以通過這種酶可阻止?jié)撛谥虏【捌涠舅卦谀c粘膜上皮細(xì)胞的粘附，對(duì)宿主起到保護(hù)作用。組合物本發(fā)明還提供一種組合物，所述組合物含有(1)有效量本發(fā)明的短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物，以及(2)食品學(xué)上或藥學(xué)上可接受的載體。所述的組合物具有抑菌、抗氧化以及降血壓功能。本發(fā)明的組合物可以是藥物組合物、食物組合物或保健品組合物。本發(fā)明中，術(shù)語"含有"表示各種成分可一起應(yīng)用于本發(fā)明的混合物或組合物中。因此，術(shù)語"主要由...組成"和"由….組成"包含在術(shù)語"含有"中。本發(fā)明中，"藥學(xué)上可接受的"或"食品上可接受的"的成分是適用于人和/或動(dòng)物而無過度不良副反應(yīng)(如毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng))的，即有合理的效益/風(fēng)險(xiǎn)比的物質(zhì)。"藥學(xué)上可接受的載體"或"食品上可接受的載體"是用于將本發(fā)明的短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物傳送給動(dòng)物或人的藥學(xué)上或食品上可接受的溶劑、懸浮劑或賦形劑。載體可以是液體或固體，較佳的是能夠較高程度保持短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物活性的載體。所述的短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物可與一種或多種食品上或藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑混合，如溶劑、稀釋劑等，而且可以用如下形式口服施用片劑、膠囊、可分散的粉末、顆粒或懸浮液(含有如約0.05%-5%懸浮劑)、糖漿(含有如約10%-50%糖)、和酏劑(含有約20%-50%乙醇)。作為本發(fā)明的一種方式，所述的組合物為食物組合物，所述的食物組合物選自固體、乳品、溶液制品、粉末制品、或懸浮液制品。例如，所述食物組合物可以是含有所述短雙歧桿菌或其培養(yǎng)產(chǎn)物的發(fā)酵乳產(chǎn)品，粉末狀食品，冷凍食品，飲料等等。作為本發(fā)明的另一種方式，所述的組合物為藥物組合物，所述的藥物組合物選自顆粒劑、膠囊、片劑、粉末劑、口服液、混懸液、或乳劑。從易于制備和給藥的立場看，優(yōu)選的藥物組合物是固態(tài)組合物，尤其是片劑和固體填充或液體填充的膠囊。"有效量"是指可對(duì)人和/或動(dòng)物產(chǎn)生功能或活性的且可被人和/或動(dòng)物所接受的量。作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的組合物含有104-1012cfu/ml或10M0fu/g的所述的短雙歧桿菌。更優(yōu)選的，所述的組合物含有10M(A:fu/ni1或105-10'Vfu/g的所述的短雙歧桿菌；進(jìn)一步優(yōu)選的，所述的組合物含有106-108cfu/ml或106-108cfu/g的所述的短雙歧桿菌。為了達(dá)到更好的效果，本發(fā)明的短雙歧桿菌還可與其它菌株(如其它益生菌)聯(lián)用。因此，所述的組合物中還可含有其它功能性菌株，例如嗜熱鏈球菌、保加利亞乳桿菌、鼠李糖桿菌等。當(dāng)用于制備藥物組合物時(shí)，所用的短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物的有效劑量可隨施用的模式、施用的人群或待治療的疾病的嚴(yán)重程度而變化。適用于內(nèi)服的劑量形式，包含與固態(tài)或液態(tài)藥學(xué)上可接受的載體密切混合的約104-1012cfu/g的活性短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物。可調(diào)節(jié)此劑量方案以提供最佳治療應(yīng)答。例如，可每天給予若干次分開的劑量，或?qū)┝堪幢壤販p少。所述的短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物可通過口服等途徑給予。固態(tài)載體包括淀粉、乳糖、磷酸二鈣、微晶纖維素、蔗糖和白陶土，而液態(tài)載體包括培養(yǎng)基、聚乙二醇、非離子型表面活性劑，只要適合短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物特性和所需的特定給藥方式。在制備藥物組合物中通常使用的佐劑也可有利地被包括，例如調(diào)味劑、色素、防腐劑和抗氧化劑如維生素E、維生素C、BHT和BHA。本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于(a)本發(fā)明的短雙歧桿菌具有優(yōu)異的抗細(xì)菌特性、具有優(yōu)異的耐酸和膽汁酸鹽能力、以及具有降血壓功能，從而可廣泛用于乳品加工、功能食品生產(chǎn)、增進(jìn)健康的添加劑及新藥開發(fā)等。(b)本發(fā)明的短雙歧桿菌具有預(yù)防和治療由幽門螺旋桿菌引起的胃炎、胃潰瘍和十二指腸炎以及由致病性大腸桿菌和其它腸道致病性細(xì)菌引起的腸炎、結(jié)腸炎和直腸炎的功能。(c)本發(fā)明的短雙歧桿菌分離自健康長壽人的體內(nèi)，因此安全有效，對(duì)人體沒有任何毒副作用。下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的條件，或按照《微生物實(shí)驗(yàn)手冊(cè)》(JamesCappuccino禾口NatalieSherman編，PearsonEducation出版社)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。實(shí)施例l:樣品的來源和采集本發(fā)明菌株來源于中國的長壽村一新疆和田地區(qū)長壽老人糞便。和田位于新疆最南端，古稱于闐，藏話意思為"產(chǎn)玉石的地方"。是絲綢之路南道上的重鎮(zhèn)。和田地區(qū)總面積為24.8萬平方公里，人口150萬。其中維吾爾族占總?cè)丝诘?7%以上。早在商周時(shí)期，古于闐就和中原有過物質(zhì)交流。公元前68年，漢宣帝"遣衛(wèi)司護(hù)鄯以西之諸國"，于闐正式納入漢朝中央政府的統(tǒng)轄之下。古于闐是西域最早的佛教中心，有豐厚的佛文化遺產(chǎn)；許多著名高僧如晉時(shí)法顯、唐時(shí)玄奘都曾涉足和田。而濃郁、獨(dú)特的民俗風(fēng)情，更使人耳目一新，飽領(lǐng)異域風(fēng)采。和田氣候溫暖，特產(chǎn)豐富，民風(fēng)淳樸，素以"金玉之邦、糧棉之倉、絲綢之路、瓜果之鄉(xiāng)著稱于世。并以玉石、地毯、絲綢等傳統(tǒng)物產(chǎn)享譽(yù)海內(nèi)外。這里有世界第二大沙漠的勝景，兩千年歷史的絲綢古跡，以及人與大自然搏斗創(chuàng)造的沙漠綠洲、千里葡萄長廊等人文景觀。樣品采自于新疆和田地區(qū)周邊50公里范圍內(nèi)，分布在3個(gè)區(qū)的18位90歲以上的長壽老人。實(shí)施例2:從長壽老人糞便中分離出乳酸菌菌種篩選共進(jìn)行了6年(2000-2005)，將新疆和田長壽老人(90歲以上)的26個(gè)糞便樣品浸入MRS肉湯培養(yǎng)物中，在37"C培養(yǎng)24小時(shí)。將該培養(yǎng)物涂布在MRS瓊脂平板上，然后在37。C培養(yǎng)3天。培養(yǎng)后，收集在瓊脂培養(yǎng)基上出現(xiàn)的菌落，并進(jìn)一步純化，利用菌落形態(tài)篩選共獲得301株產(chǎn)酸菌，通過對(duì)其產(chǎn)物測(cè)定獲得乳酸菌，根據(jù)生長特點(diǎn)、代謝特征，并選用特異性培養(yǎng)基，獲得優(yōu)勢(shì)乳酸菌。從優(yōu)勢(shì)乳酸菌中，根據(jù)其特性，獲得優(yōu)良特性乳酸菌一株。所述的短雙歧桿菌(命名為短雙歧桿菌XJH301)已經(jīng)保藏于中國微生物菌種保藏管理管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，保藏號(hào)為CGMCCNo.1993，保藏日為2007年4月6日。檢測(cè)細(xì)菌特征，包括生理生化反應(yīng)，以及如下文所述的革蘭氏染色、糖發(fā)酵能力等(特性鑒定方法如下文所述)。分離菌株添加10%脫脂乳的肉湯培養(yǎng)物，培養(yǎng)、凍干、保存在-18°C，然后用于檢測(cè)細(xì)菌各種特征試驗(yàn)。實(shí)施例3:革蘭氏染色和培養(yǎng)特征采用革蘭氏染色法檢測(cè)菌株的特征。革蘭氏染色的結(jié)果如圖1A和圖1B所示，所述的菌株XJH301呈革蘭氏陽性菌，為無芽孢，棒狀或分枝，長度為1.0-1.5um，這是雙歧桿菌的典型特征。然后，研究該菌，以闡明其培養(yǎng)特征。結(jié)果是，該菌種在MRS瓊脂平板上長成直徑為1-2mm的乳脂色菌落，最佳培養(yǎng)溫度在37°C。所述的菌株XJH301遺傳性狀穩(wěn)定，經(jīng)數(shù)代培養(yǎng)，未發(fā)現(xiàn)性狀的變異。實(shí)施例4:總基因組DNA的抽提將所述的菌株XJH301接種到脫脂乳培養(yǎng)基活化，平板劃線分離(MRS瓊脂培養(yǎng)基)，挑取單菌落接種液體培養(yǎng)基，置于C02恒溫箱深層厭氧培養(yǎng)(溫度37°C,濃度10%)，48小時(shí)后收集試管底部的乳酸菌細(xì)胞，用于基因組DNA的抽提。取1.5mL細(xì)胞培養(yǎng)液于離心管，6000g離心5min棄上清；沉淀用3mL生理鹽水(85%NaCl)洗滌菌體細(xì)胞3-5次；沉淀細(xì)胞加1200uL抽提緩沖液，并使之懸浮，250"L10%SDS和750uL氯化芐。振蕩混勻，6(TC振蕩水浴保溫40min，期間每隔10min顛倒混勻數(shù)次，可適當(dāng)延長時(shí)間至1小時(shí)，效果更好；超聲波處理10min;加入750uL3M的Na2Ac(pH5.0)，冰浴20min;8000g離心10min收集上清，加0.8倍體積的異丙醇10000g離心10min沉淀；得到的DNA用70%的乙醇洗滌，溶于150uL的TE緩沖液，加入認(rèn)ase在37。C消化1小時(shí)進(jìn)一步去除RNA。將提取的乳酸菌基因組DNA樣品，各取10uL用1%的瓊脂糖進(jìn)行凝膠電泳，EB染色后，在凝膠成像系統(tǒng)上觀測(cè)，分析純度和基因組DNA的完整性。然后將提取的乳酸菌基因組DNA樣品在紫外分光光度計(jì)上測(cè)量0D260nra和OD280nm，對(duì)DNA濃度進(jìn)行定量。實(shí)施例5:雙歧桿菌屬特異性的分子鑒定采用一對(duì)腸道雙歧桿菌屬特異性引物Bif,和Bif2(見表l)對(duì)初步鑒定的菌株XJH301進(jìn)行常規(guī)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction,PCR)擴(kuò)增，特異性引物的PCR擴(kuò)增程序?yàn)閷⑶笆鲋苽涞募?xì)菌的基因組DNA作為PCR擴(kuò)增的模板，采用50uL反應(yīng)體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增。其中模板DNA5jiL(大約100ng)、2.5raMdNTPs4uL、IOX緩沖液5uL、50uM引物Bif,、Bif2各luL，713(7DNA聚合酶1.5U，以ddH20補(bǔ)至50yL。PCR循環(huán)參數(shù)如下94。C預(yù)變性5min;94。C變性lmin，60。C退火45s，72。C延伸lmin;72。C延伸8min。表1引物<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>接著，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳鑒定，通過觀察產(chǎn)物電泳圖譜是否有一條600bp的特異性條帶來判斷其是否屬于雙歧桿菌。以標(biāo)準(zhǔn)雙歧桿菌菌株l(短雙歧桿菌ClOl，購自揚(yáng)州大學(xué)乳品研究所)為陽性對(duì)照；以重蒸水、巻曲乳桿菌(巻曲乳桿菌072，購自揚(yáng)州大學(xué)乳品研究所)、植物乳桿菌(植物乳桿菌189，購自揚(yáng)州大學(xué)乳品研究所)為陰性對(duì)照。電泳結(jié)果如圖2所示，本發(fā)明的菌株XJH301與標(biāo)準(zhǔn)雙歧桿菌菌株1均有一條約600bp的特異性條帶(見泳道5和6)，而巻曲乳桿菌072(泳道2)、植物乳桿菌189(泳道3)在相應(yīng)的位置均沒有條帶，表明本發(fā)明的菌株XJH301屬于雙歧桿菌。實(shí)施例6:16SrRNA測(cè)序分析由于對(duì)于細(xì)菌來說，16SrRNA是比較穩(wěn)定的，因此16SrRNA的序列分析是細(xì)菌鑒定的很好方法。將提取的實(shí)驗(yàn)菌株的基因組DNA作為模板用于PCR擴(kuò)增16SrRNA序列。用于本發(fā)明雙歧桿菌的16SrRNA分析的引物為上游引物(BF1):5，-AGGGTTCGATTCTGGCTCAG-3，(SEQIDNO:3);下游引物(BF2):5，-ACGGTTACCTTGTTACGACTT-3，(SEQIDNO:4)。PCR反應(yīng)體系組成為PCR反應(yīng)的總體積50uL，其中含10XPCR緩沖液5uL，2.5mmol/LdNTPs4.OnL，5U/uLTag酶2.0uL，50pmol/uL上游引物4.0wL，50pmol/nL下游引物4.OuL，20ng/uL模板DNA5.0yL，ddH2026uL。PCR反應(yīng)程序?yàn)?95。C預(yù)變性5niin，95'C變性lmin，64。C退火50s，72°C延伸lmin30次循環(huán)；72'C后延伸10min1次循環(huán)。擴(kuò)增產(chǎn)物在1.0%瓊脂糖凝膠上電泳分離，用0.5Ug/mL的溴化乙錠染色，在凝膠成像系統(tǒng)上觀察分析后用凝膠抽提試劑盒(購自上海博彩生物工程公司)，擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳結(jié)果見圖5。回收1500bp大小的DNA片段，常規(guī)方法克隆到pEGM-T載體(購自申能博彩公司)中，按分子克隆手冊(cè)上提供的方法轉(zhuǎn)化DH5a大腸桿菌，在含有氨芐青霉素的IPTG/X-galLB平板上進(jìn)行篩選，挑取陽性克隆經(jīng)鑒定后，測(cè)定16SrRNA序列。部分測(cè)序結(jié)果見圖3，16SrRNA部分序列見圖4(SEQIDNO:5)。實(shí)施例7:使用BLAST分析核苷酸序列數(shù)據(jù)將上述測(cè)定的菌株XJH301的16SrRNA序列使用BLAST程序(美國生物信息中心網(wǎng)站，NCBI，www.ncbi.nlm.nih.gov)同已知的多種短雙歧桿菌進(jìn)行同源性比較，根據(jù)獲得的遺傳距離值，建立系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的菌株XJH301的16SrRNA序列與目前已知的其它所有短雙歧桿菌的相應(yīng)序列皆不同，有多株短雙歧桿菌與本發(fā)明菌株同源性值在90%以上，說明本發(fā)明的菌株是一種以往未被分離的新短雙歧桿菌。實(shí)施例8:本發(fā)明菌株和短雙歧桿菌JCM1273DNA的核苷酸序列比較將本發(fā)明的菌株XJH301和標(biāo)準(zhǔn)雙歧桿菌菌株2(短雙歧桿菌JCM1273)的16SrRNA核苷酸序列比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明菌株與短雙歧桿菌JCM1273的16SrRNA存在部分核苷酸序列的差異。實(shí)施例9:屬內(nèi)種水平糖發(fā)酵鑒定在37°C，在厭氧條件下將本發(fā)明的菌株XJH301在MRS瓊脂平板上培養(yǎng)48小時(shí)，然后用懸浮培養(yǎng)基將所得培養(yǎng)物懸浮，然后，將該培養(yǎng)細(xì)胞接種到厭氧菌專用糖發(fā)酵管中，在其上層覆蓋一層無菌石蠟，以便觀察糖的發(fā)酵能力。將結(jié)果與《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》(R.E布坎南、W.E吉木斯著，北京科學(xué)出版社出版(1984))比較，糖反應(yīng)的結(jié)果見表2。該結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)本發(fā)明的菌株屬于短雙歧桿菌。表2糖反應(yīng)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注表中+表示待測(cè)菌株陽性，-表示待測(cè)菌株陰性實(shí)施例10:本發(fā)明菌株對(duì)ICR小鼠的安全性為了檢測(cè)本發(fā)明的菌株XJH301的安全性，選擇使用ICR小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。具體是，將菌株XJH301接種到11%脫脂乳中培養(yǎng)24小時(shí)(濃度為5X109cfu/mL)，取健康小鼠20只，雌雄各半，體重20土2g，飼養(yǎng)觀察一日，活動(dòng)正常，進(jìn)食狀況良好，實(shí)驗(yàn)前禁食12小時(shí)后稱重，分別按0.4mL/10g灌服樣品，給藥后即對(duì)動(dòng)物的精神狀態(tài)、毛色、自主活動(dòng)、呼吸、飲食、二便、口鼻分泌物等一般狀況及死亡情況進(jìn)行觀察，連續(xù)喂養(yǎng)7天，2個(gè)月后檢測(cè)其安全性。以未給藥的同種小鼠作為對(duì)照。結(jié)果如表3所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>結(jié)果可見，給藥后小鼠未出現(xiàn)不適癥狀，小鼠活動(dòng)有所減少，其它情況基本正常，在整個(gè)觀察期間精神狀態(tài)良好、毛色光潔、活動(dòng)自如、呼吸均勻、口鼻內(nèi)無異常分泌物，動(dòng)物飲食量正常，便軟，小便無異常。觀察一周后，稱體重，周體重增長率為25.1%。于2個(gè)月后脫頸椎處死動(dòng)物，并對(duì)所有動(dòng)物進(jìn)行尸檢，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等內(nèi)臟器官均未見任何異常。將給藥小鼠的胃、小腸和大腸中的粘液涂布到NPNL瓊脂平板上，于37。C培養(yǎng)48小時(shí)，從給藥組中分離出大量的短雙歧桿菌菌株，但是在對(duì)照組中未檢測(cè)到。實(shí)施例11:本發(fā)明菌株的耐酸及耐膽鹽能力研究了菌株XJH301的耐酸和耐膽鹽能力，將MRS培養(yǎng)基分別調(diào)節(jié)成pH2.0MRS培養(yǎng)基、pH3.OMRS培養(yǎng)基，在pH2.0MRS培養(yǎng)基、pH3.0MRS培養(yǎng)基中各加入O.2%、0.4%、0.6%的膽汁酸鹽。在不同的培養(yǎng)基中，按2%的接種量(約1.2X108Cfu/mL)接種試驗(yàn)菌的培養(yǎng)液，置37。C分別厭氧培養(yǎng)lh、2h、3h、4h、5h、6h、16h，以O(shè)h為對(duì)照，檢測(cè)活性短雙歧桿菌數(shù)。結(jié)果表明，菌株XJH301可以在pH2、0.6%膽汁酸中放置5小時(shí)，活菌數(shù)量超過106cfu/mL，證明本發(fā)明菌株具有很強(qiáng)的耐酸及耐膽鹽能力。實(shí)施例12:短雙歧桿菌對(duì)人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系Caco-2細(xì)胞的體外粘附性試驗(yàn)為了檢測(cè)本發(fā)明的菌株XJH301的粘附能力，本發(fā)明人進(jìn)行了人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系Caco-2細(xì)胞(購自中科院上海生化細(xì)胞所，是一種腸道上皮細(xì)胞)的體外粘附性試驗(yàn)，以標(biāo)準(zhǔn)短雙歧桿菌l(短雙歧桿菌CIOI)作為對(duì)照。將Caco-2細(xì)胞與本發(fā)明的菌株或短雙歧桿菌C101共同培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在Caco-2細(xì)胞表面緊密粘附了大量的菌株XJH301(見圖6)。通過計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn)，每個(gè)Caco-2細(xì)胞表面粘附的菌株XJH301平均達(dá)到11.2±2.21個(gè)/細(xì)胞，平均較短雙歧桿菌C101高出約1.0個(gè)/細(xì)胞。同時(shí)，本發(fā)明人還測(cè)定了菌株XJH301對(duì)致病性埃希氏大腸桿菌粘附的競爭性抑制作用，并與其它多株短雙歧桿菌作了比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明菌株競爭性粘附抑制作用最強(qiáng)。實(shí)施例13:短雙歧桿菌的抗氧化能力本實(shí)施例中，研究菌株XJH301對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠抗氧化能力的影響。采用正常ICR小鼠分別灌胃給予受試品(菌株XJH301的發(fā)酵乳，活菌數(shù)5X108cfu/ml，設(shè)三個(gè)劑量組)和陽性對(duì)照品維生素E(VitE)，以同時(shí)灌胃生理鹽水的小鼠為對(duì)照組(NS)，每組小鼠10只。連續(xù)灌胃8天，末次灌胃后1小時(shí)摘眼球取血，分離血清測(cè)試S0D活力和MDA含量。按黃嘌呤氧化酶法(S0D試劑盒購自南京聚力生物制品公司)測(cè)定血清中的SOD含量；按硫代巴比妥酸法(MDA試劑盒購自南京聚力生物制品公司)測(cè)定血清中的MDA。結(jié)果顯示，給予菌株XJH301發(fā)酵乳以及對(duì)照品維生素E的小鼠的S0D活力增高，MDA含量降低，且與對(duì)照組比較差異非常顯著，如表4所示。說明本發(fā)明的菌株XJH301可顯著增強(qiáng)小鼠的抗氧化能力，顯著減少體內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的生成。18表4<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>與對(duì)照組比較，*P<0.05，林P<0.01。實(shí)施例14:短雙歧桿菌對(duì)致病性埃希氏大腸桿菌的抑制作用將致病性埃希氏大腸桿菌013(購自揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院)接種于營養(yǎng)肉湯中，37匸培養(yǎng)18小時(shí)后，平板計(jì)數(shù)法計(jì)活菌數(shù)?？刂破浠罹鷶?shù)在106Cfu/mL，此濃度易致病。吸取大腸桿菌菌液0.5mL于相應(yīng)固體培養(yǎng)基平板上，用無菌涂抹棒，于超凈工作臺(tái)內(nèi)通無菌空氣，放置1小時(shí)待表面的菌液固定在平板的表面后打孔，孔的直徑4ram?？咨?mm，將調(diào)整好濃度(5X108cfu/ml)的菌株XJH301菌液注至滿孔，不可溢出孔外，于各自生長環(huán)境培養(yǎng)48小時(shí)觀察結(jié)果、測(cè)量抑菌圈直徑。測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)短雙歧桿菌U短雙歧桿菌C101)在相同條件下的抑菌情況作為對(duì)照。菌株XJH301對(duì)致病性大腸桿菌013的抑菌圈平均直徑為11.6ram，如圖7所示。而短雙歧桿菌C101對(duì)致病性大腸桿菌013的抑菌圈平均直徑為9.2ram，表明菌株XJH301對(duì)致病性大腸桿菌具有很強(qiáng)的抑制作用。實(shí)施例15:短雙歧桿菌對(duì)幽門螺旋桿菌的抑制作用將凍融后的幽門螺旋桿菌11637(購自中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所)吸取少量于Skirrow氏培養(yǎng)基表面，稍推開后，置于密封罐中37。C培養(yǎng)，密封罐內(nèi)創(chuàng)造微氧環(huán)境(85%N2，10%C02，5%02)。培養(yǎng)72h后，用生理鹽水將培養(yǎng)皿表面的菌落洗脫下來，同麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管進(jìn)行比濁，確定菌數(shù)，使其濃度控制在l05cfu/mL。吸取菌液0.5mL于相應(yīng)固體培養(yǎng)基平板上，用無菌涂抹棒，于超凈工作臺(tái)內(nèi)通無菌空氣，放置l小時(shí)待表面的菌液固定在平板的表面后打孔，孔的直徑4醒?？咨?mm，將調(diào)整好濃度(5X108cfu/ml)的菌株XJH301菌液注至滿孔，不可溢出孔外，于各自生長環(huán)境培養(yǎng)48小時(shí)觀察結(jié)果并測(cè)量抑菌圈直徑。測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)雙歧桿菌1(短雙歧桿菌C101)在相同條件下的抑菌情況作為對(duì)照。本發(fā)明菌株對(duì)幽門螺旋桿菌抑菌圈直徑為11.6mm(圖8)，而短雙歧桿菌C101平均僅為8.6mm，表明本發(fā)明的短雙歧桿菌對(duì)幽門螺旋桿菌具有很強(qiáng)的抑制作用。實(shí)施例16:短雙歧桿菌降血壓作用將活化的菌株XJH301接種到熱處理后的牛乳中，在37'C條件下發(fā)酵18-24小時(shí)(活菌數(shù)約為lX10scfu/ml)，測(cè)定發(fā)酵乳的ACE抑制活性(ACEI)，具體測(cè)定方法和操作步驟如表5所示。表5ACE抑制活性測(cè)定試劑3樣品/bcd血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)015015HC101500150馬尿酰組氨酰亮氨酸(HHL)100100100100抑制劑002525硼酸緩沖液25250037卩水浴預(yù)熱5分鐘ACE15015037°。水浴反應(yīng)30分鐘HC115001500抑制劑252500硼酸緩沖液002525取a、b、c、d四只試管，依據(jù)表4向各管依次加入相應(yīng)試劑，37'C水浴預(yù)熱5分鐘，再加入ACE，37"C水浴反應(yīng)30分鐘，反應(yīng)結(jié)束后各管加入lmol/LHC1以終止反應(yīng)，然后于各試管中加入乙酸乙酯1.5tnL吸收反應(yīng)產(chǎn)生的馬尿酸，旋渦混合后4000g離心10分鐘；吸取lmL乙酸乙酯層移入另一試管中，放入烘箱10(TC揮發(fā)溶劑30分鐘，冷卻后加入2.5mL去離子水，旋渦混合半分鐘后在228nm下測(cè)定其吸光值，計(jì)算公式如下抑制活性(％)=(A-B:A:B()C-D)X100%式中，A:樣a的光密度值，樣a在反應(yīng)中不加抑制劑，反應(yīng)結(jié)束后添加抑制劑以維持整個(gè)反應(yīng)體系平衡，是ACE與HHL完全反應(yīng)的對(duì)照；B:樣b的光密度值，樣b在反應(yīng)中不加抑制劑，在反應(yīng)前先失活A(yù)CE，反應(yīng)結(jié)束后添加抑制劑以維持整個(gè)反應(yīng)體系平衡，是樣a反應(yīng)的空白；C:樣c的光密度值，樣c在反應(yīng)中加抑制劑，是ACE與HHL同時(shí)反應(yīng)的樣品；D:樣d的光密度值，樣d在反應(yīng)中加抑制劑，在反應(yīng)前先失活A(yù)CE，是樣c反應(yīng)的空白。結(jié)果測(cè)得，菌株XJH301發(fā)酵乳的ACEI活性達(dá)到43.2%。實(shí)施例17:含短雙歧桿菌的食物組合物原料配比如表6所示。表6原料配料表原料質(zhì)量百分比(%)鮮牛奶92.0白砂糖8,0按表6配方比例，將鮮奶加熱到5(TC以上，加入白砂糖攪拌至完全，預(yù)熱到60-65°C，20Mpa壓力均質(zhì)，9CTC左右殺菌5-10分鐘，冷卻至40-43°C，接種。接種數(shù)量為每lg上述混合物接種嗜熱鏈球菌(如嗜熱鏈球菌ATCC14485)1-500X106cfu/mL、保加利亞乳桿菌(如保加利亞乳桿菌ATCC11842)1-500X106cfu/mL、短雙歧桿菌XJH3011-5000X106cfu/mL。40-42t:發(fā)酵至pH值為4.2-4.5，攪拌，冷藏，即制成含活性短雙歧桿菌酸奶。實(shí)施例18:含短雙歧桿菌的藥物組合物原料配比如表7所示。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>按照比例將脫脂奶粉、乳糖、酵母粉、蛋白胨以純凈水混合均勻，預(yù)熱到60-65°C，20Mpa壓力均質(zhì)，9(TC左右殺菌20-30分鐘，冷卻至36-38°C，接種入短雙歧桿菌XJH301活菌(1-50X106cfu/mL)，36-38。C發(fā)酵至pH值為4.2-4.5，離心，冷凍干燥至水份含量小于3%。即制備成短雙歧桿菌冷凍干燥物，稱取1.5克短雙歧桿菌冷凍干燥物與麥芽糊精等量混合后裝入膠囊中，即制成含短雙歧桿菌XJH301的藥物組合物。菌種保藏本發(fā)明的短雙歧桿菌G9i/Wo/ac^rj'咖6re7e)XJH301已經(jīng)保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC，中國北京)，保藏號(hào)為CGMCCNo.1993，保藏日為2007年4月6日。在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。序列表<110〉統(tǒng)一企業(yè)(中國)投資有限公司統(tǒng)一企業(yè)(中國)投資有限公司昆山研究開發(fā)中心<120>具有抗胃腸道致病菌、抗氧化和降血壓作用的短雙歧桿菌及其用途<130〉073001<160>5<170〉Patentlnversion3.3<210>1<211>19<212〉DNA<213〉人工序列<220><221〉misc—feature<223〉引物<400>1tccagggcttcacgcatgc19<210>2<211〉20<212〉腿<213>人工序列<220〉<221〉misc一feature<223〉引物<400〉2tccagttctcaaaccaccac20<210>3<211>20<212〉DNA<213〉人工序列<220〉<221〉misc—feature<223〉引物〈400〉3agggttcgattctggctcag20<210〉4〈211〉21〈212〉腿<213〉人工序列〈220〉<221〉misc—feature<223〉引物<400〉4acggttaccttgttacgactt21〈210>5<211〉961〈212〉聽<213>Bifidobacteriumbreve〈220〉<221〉misc一feature<223>16Sr腿<400〉5cacttcggaatcttcactttagacggctccccccacaagggtcgggccaccggcttcggg60tgctacccactttcatgacttgacgggcggtgtgtacaaggcccgggaacgcattcaccg120cggcgttgctgatccgcgattactagcgactccgccttcacgcagtcgagttgcagactg180cgatccgaactgagaccggttttcagcgatccgccccacgtcaccgtgtcgcaccgcgtt240gtaccggccattgtagcatgcgtgaagccctggacgtaaggggcatgatgatctgacgtc300atccccaccttcctccgagttgaccccggcggtcccacatgagttcccggcatcacccgc360tggcaacatgcggcgagggttgcgctcgttgcgggacttaacccaacatctcacgacacg420agctgacgacgaccatgcaccacctgtgaaccggccccgaagggaaaccgtgtctccacg480gcgatccggcacatgtcaagcccaggtaaggttcttcgcgttgcatcgaattaatccgca540tgctccgccgcttgtgcgggcccccgtcaatttctttgagtttteigccttgcggccgtac600tccccaggcgggatgcttaacgcgttggctccgacacgggacccgtggaaagggccccac660atccagcatccaccgtttacggcgtggactaccagggtatctaatcctgttcgctcccca720cgctttcgctcctcagcgtcagtgacggcccagagacctgccttcgccattggtgttctt780cccgatatctacacattccaccgttacaccgggaattccagtctcccctaccgcactcca840gcccgcccgtacccggcgcagatccaccgttaggcgatggactttcacaccggacgcgac900gaaccgcctacgagccctttacgcccaataaatccggataacgctcgcaccctacgtatt960a96權(quán)利要求1.一種短雙歧桿菌，其特征在于，所述的短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物具有血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制活性。2.如權(quán)利要求1所述的短雙歧桿菌，其特征在于，它在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的保藏號(hào)為CGMCCNo.1993。3.權(quán)利要求1所述的短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物的用途，其特征在于，用于制備預(yù)防或治療血管緊張素轉(zhuǎn)換酶異?；罨嚓P(guān)疾病的組合物。4.如權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，所述的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶異?；罨嚓P(guān)疾病包括心血管疾病。5.權(quán)利要求1所述的短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物的用途，其特征在于，用于制備抑制胃腸道致病菌的組合物；或用于制備預(yù)防或治療細(xì)菌性消化道疾病的組合物。6.如權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于，所述的細(xì)菌性消化道疾病包括胃炎、胃潰瘍、十二指腸炎、大腸炎、小腸炎、結(jié)腸炎或直腸炎。7.權(quán)利要求1所述的短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物的用途，其特征在于，用于制備抗氧化的組合物。8.—種組合物，其特征在于，所述組合物含有(1)有效量的權(quán)利要求l所述的短雙歧桿菌或其代謝產(chǎn)物，以及(2)食品學(xué)上或藥學(xué)上可接受的載體。9.如權(quán)利要求8所述的組合物，其特征在于，所述的組合物含有104-1012Cfu/ml或104-10'2cfu/g的權(quán)利要求1所述的短雙歧桿菌。10.如權(quán)利要求8所述的組合物，其特征在于，所述的組合物中還含有有效量的嗜熱鏈球菌，保加利亞乳桿菌，和/或鼠李糖乳桿菌。全文摘要本發(fā)明公開了一種新的具有優(yōu)異益生作用的短雙歧桿菌。本發(fā)明的菌株從新疆和田地區(qū)長壽老人的排泄物中篩選獲得，具有突出的耐酸和耐膽汁酸鹽能力，對(duì)腸道上皮細(xì)胞具有粘附特性，并具有優(yōu)異的抗菌特性、優(yōu)良的抗氧化能力，以及降血壓功能，食用安全，從而可廣泛用于功能性添加物、乳品、飲料、功能食品及藥品生產(chǎn)等領(lǐng)域。文檔編號(hào)A61P9/00GK101314763SQ20071004159公開日2008年12月3日申請(qǐng)日期2007年6月1日優(yōu)先權(quán)日2007年6月1日發(fā)明者余哲禮,李正華,琴沈,陳順利,顧瑞霞,麻文博申請(qǐng)人:統(tǒng)一企業(yè)(中國)投資有限公司;統(tǒng)一企業(yè)(中國)投資有限公司昆山研究開發(fā)中心