專利名稱：紅豆越橘提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及紅豆越橘提取物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
花青素、又稱花色苷元，屬于黃酮類化合物。能夠增加毛細(xì)血管的柔韌性，可以促進(jìn)血管膨脹和伸縮性，防止血管破裂；能夠消除使血管硬化的自由基，預(yù)防動(dòng)脈硬化；能強(qiáng)化眼睛及身體其他組織器官里的毛細(xì)血管，預(yù)防各部位器官的血管病變。目前已用于食品和藥品中，在食品中應(yīng)用的主要有天竺葵色素，矢車菊色素，飛燕草色素，芍藥色素，牽?；ㄉ睾湾\葵花色素，或者是這些花青素與葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖各自結(jié)合形成的花色苷。花色苷多為單糖和雙糖苷。
原花青素(procyanidin)是一類植物縮合性單寧，因其在酸性介質(zhì)中加熱可產(chǎn)生花青素而得名。原花青素可以有效降低膽固醇和低密度脂蛋白水平，預(yù)防血栓形成，心腦血管疾病的發(fā)生。還可以保護(hù)細(xì)胞DNA免遭自由基的氧化損傷，從而預(yù)防導(dǎo)致癌癥的基因突變。
白藜蘆醇(苷)是一類活性多酚物質(zhì)，在中藥虎杖中的含量最豐富。除了較強(qiáng)的抗氧化功能，白藜蘆醇和白藜蘆醇苷對癌變過程中細(xì)胞和組織變異的3個(gè)主要階段(誘發(fā)，起始和發(fā)展)都有抑制作用，成為抑制和治療組織癌變和腫瘤發(fā)生最有前途的物質(zhì)之一。最近報(bào)道研究表明，白藜蘆醇可通過保護(hù)細(xì)胞線粒體中的DNA(脫氧核糖核酸)免遭化學(xué)損害而發(fā)揮延緩衰老功效。此外，近期有關(guān)簡單有機(jī)體壽命實(shí)驗(yàn)研究了白藜蘆醇和限制熱量攝入兩者延長壽命的共同機(jī)制，研究人員觀察到白藜蘆醇通過激活Sir2酶表達(dá)能夠?qū)⒔湍傅膲勖娱L大約70％。因此白藜蘆醇通過對Sir2酶的激活作用在多層次、多途徑影響著機(jī)體的健康。
因此，從植物中提取花青素、原花青素和白藜蘆醇作為藥品和保健食品使用符合市場需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是從一種果實(shí)——紅豆越橘中提取富含花青素、原花青素和白藜蘆醇的提取物。
紅豆越橘(Vaccinium vitis-idaea L.)別名紅豆，小蘋果，牙疙瘩，熊果葉等。屬于杜鵑花科(Ericaceae)越橘屬(烏飯樹屬)，為多年生落葉或常綠灌木或小灌木樹種。原產(chǎn)于我國東北，前蘇聯(lián)，朝鮮，北美，北歐的高山地帶，常與篤斯越橘混生，為常綠小灌木。樹高15-30cm，葉片常綠，草質(zhì)?？购O強(qiáng)，抗旱。紅豆越橘果實(shí)為亮紅色，風(fēng)味酸澀，營養(yǎng)肺腑，具有很高的利用價(jià)值。
發(fā)明人通過對紅豆越橘的研究發(fā)現(xiàn)，紅豆越橘果實(shí)中富含花青素和原花青素和白藜蘆醇。并提供從紅豆越橘果實(shí)中提取這些天然成分的方法。因此本發(fā)明包括以下內(nèi)容提供制備紅豆越橘提取物的方法，包括以下步驟
(a)用第一溶劑對紅豆越橘果實(shí)進(jìn)行提取，然后分離得到第一提取液，所述第一溶劑為醇、醇水溶液、水、含酸水溶液、含酶水溶液或者含酸和醇的水溶液；(b)濃縮所述第一提取液，得到第一提取物粗產(chǎn)物；(c)從所述第一提取物粗產(chǎn)物中分離得到第一提取物，得到第一提取物。
(d)用第二溶劑對經(jīng)過所述第一溶劑提取過的紅豆越橘果實(shí)進(jìn)行再提取，得到第二提取液，所述第二溶劑選自乙酸乙酯、苯、甲苯、氯仿、二氯甲烷、正己烷、丙酮、甲醇、乙醇或其混合物，或者為含量在70-95％之間的甲醇或乙醇的水溶液，或者是含有重量比0.01～0.3％濃度纖維素酶或果膠酶的含酶水溶液；(e)濃縮所述第二提取液，得到第二提取物粗品。
(f)純化所述第二提取物粗品，得到主要成分為白藜蘆醇的紅豆越橘的所述第二提取物。
在一個(gè)
具體實(shí)施例方式
中，在步驟(a)中，所述第一溶劑為含酸水溶液或含酸和醇的水溶液，所述提取是在20-50℃下進(jìn)行的，或者所述第一溶劑為醇水溶液，所述提取是在40-90℃下進(jìn)行的，或者所述第一溶劑為含酶水溶液，酶解溫度在30-60℃下進(jìn)行；在步驟(c)中，將所述第一提取物粗產(chǎn)物上所述大孔吸附樹脂或離子交換樹脂，用30-95％的乙醇洗脫，濃縮所得乙醇溶液，干燥得到紅豆越橘的所述第一提取物，或者通過膜過濾法進(jìn)行所述純化，包括將所述第一提取物粗產(chǎn)物進(jìn)行超濾膜過濾處理，得到的濃縮液進(jìn)行減壓濃縮或納濾膜過濾。干燥后得到紅豆越橘第一提取物；或者通過上述兩種方法的結(jié)合進(jìn)行所述純化，包括將所述第一提取物粗產(chǎn)物進(jìn)行超濾膜過濾處理，然后用樹脂柱純化，干燥后得到紅豆越橘第一提取物，或者將所述第一提取物粗產(chǎn)物進(jìn)行樹脂柱純化后，再經(jīng)超濾膜過濾處理，干燥后得到紅豆越橘第一提取物。
在步驟(d)中，在避光和惰性氣氛下進(jìn)行所述再提取，得到所述第二提取液；在步驟(f)中，用正己烷、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、二氯甲烷、甲醇、乙醇或其混合溶劑，通過硅膠柱層析純化由步驟(e)得到的所述第二提取物粗品，以便得到紅豆越橘的所述第二提取物。
本發(fā)明的另一方面提供一種紅豆越橘提取物，其由5-35％重量、特別是5-20％重量的花青素，20-95％重量、特別是50-95％重量的原花青素，小于5％重量、特別是小于2％重量的白藜蘆醇以及余量的其他成分組成。
本發(fā)明的另一方面提供一種紅豆越橘提取物，其含有60-98％重量的白藜蘆醇。
本發(fā)明的產(chǎn)品可用作抗衰老、減肥、抗氧化自由基、預(yù)防心腦血管疾病、抑制血栓形成和美容的功能食品


圖1為本發(fā)明一個(gè)具體實(shí)施例獲得的第一提取物的液相色譜圖；圖2為本發(fā)明一個(gè)具體實(shí)施例獲得的第二提取物的液相色譜圖；
圖3為本發(fā)明一個(gè)具體實(shí)施例獲得的第三提取物的液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式
定義術(shù)語“花青素”與術(shù)語“花色苷元”和“花色素”同意，是指使植物的花、果、葉、莖等呈現(xiàn)藍(lán)、紫、紅等顯著顏色的一種色原烯衍生物，大多數(shù)能與葡萄糖、半乳糖或者鼠李糖以及一些戊糖縮合形成花色苷，常見的花青素包括天竺葵色素(pelargonidin)、矢車菊色素(cyanidin)、飛燕草色素(delphinidin)、芍藥花色素(peonidin)、牽?；ㄉ?petunnidin)、錦葵花色素(malvidin)、櫻草花色素(hireutidin)和苦苣苔色素(gesnerin)。
術(shù)語“原花青素”(procyanidin)是指一類存在于植物中、在酸性介質(zhì)中加熱可產(chǎn)生花青素的多酚化合物。
在本發(fā)明的第一方面，提供一種紅豆越橘第一提取物，其基本上由花青素、原花青素和白藜蘆醇組成。更具體地，根據(jù)本發(fā)明第一方面的第一提取物由約5-35％重量的花青素、20-95％重量的原花青素、小于5％重量的白藜蘆醇以及余量的其他成分組成，所言其他成分是指在使用的提取條件下被一同提取出的可食用物質(zhì)，按照本發(fā)明一種方法制得的紅豆越橘第一提取物中含有5-20％重量的花青素、50-95％重量的原花青素、小于2％重量的白藜蘆醇以及余量的其他成分。其中，花青素主要包括3-半乳糖-矢車菊素、3-葡萄糖-矢車菊素和3-阿拉伯糖-矢車菊素，原花青素主要包括procyanidin B1、procyanidin B2和procyanidin C1。
在本發(fā)明的第二方面，提供一種紅豆越橘第二提取物，其含有60-98％重量的白藜蘆醇。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式
中，提供的紅豆越橘第二提取物含有75-85％重量的白藜蘆醇。在一個(gè)具體實(shí)施例中，提供的豆越橘第二提取物含有80％重量的白藜蘆醇。
根據(jù)本發(fā)明的第三方面，提供一種紅豆越橘提取物組合物，其由本發(fā)明提供的紅豆越橘第一提取物和紅豆越橘第二提取物以任一重量比組成。
在本發(fā)明的第四方面，提供制備上述各種紅豆越橘提取物的方法。
花青素和原花青素屬于多羥基黃酮，因此，原則上，現(xiàn)有技術(shù)中被用來提取多羥基黃酮的方法皆可以應(yīng)用于本發(fā)明。制備紅豆越橘第一提取物的方法常常包括提取和分離的步驟。這里，“提取”是指通過物理或者化學(xué)手段或者二者的結(jié)合從紅豆越橘原料中析出目標(biāo)成分的操作；“分離”或“純化”是指基本上通過物理的方法從粗提取物中分出目標(biāo)成分。提取的方法可以是溶劑提取法、超聲提取法、酶提取法和超臨界流體萃取法。本發(fā)明優(yōu)選溶劑提取法和酶提取法。
從第一提取物粗產(chǎn)物中分離花青素和原花青素的方法可以有多種，這些方法包括現(xiàn)有技術(shù)中用于分離黃酮類化合物的常用方法，例如溶劑萃取法、堿提酸沉法、聚酰胺柱層析法、硅膠柱層析法、鉛鹽法、硼酸絡(luò)合法、pH梯度萃取法、凝膠柱層析法，這些方法披露在肖崇厚等，中藥化學(xué)。上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1994，265，和李苑等，廣東藥學(xué)，1999，9(2)，P4中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)其教導(dǎo)并結(jié)合自身經(jīng)驗(yàn)，不需過度試驗(yàn)即能找到合適的方法從上述粗產(chǎn)物中分離出花青素和原花青素。本發(fā)明優(yōu)選膜分離法、吸附樹脂法。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，使用第一溶劑以提取紅豆越橘第一提取物，所述第一溶劑為醇、醇水溶液、水、含酸水溶液、或者含酸和醇的水溶液，提取方法可以是以下任意一種1)水提取法。熱水提取法常用于各種黃酮苷的提取，提取時(shí)常將原料投入熱水甚至沸水以破壞酶的活性，在提取過程中要考慮加水量、浸泡時(shí)間、煎煮時(shí)間及次數(shù)等。在本發(fā)明的這一實(shí)施方式中，可以使用1-5倍量的水，優(yōu)選1-3倍量的水，加熱至30-100℃之間、優(yōu)選30-80℃之間、再優(yōu)選30-60℃之間，更優(yōu)選40-50℃之間。提取的時(shí)間可以根據(jù)溫度作適當(dāng)變化，在較高的溫度下可以提取較短的時(shí)間，在較低的溫度下應(yīng)相應(yīng)延長提取時(shí)間，但從生產(chǎn)效率考慮，提取時(shí)間一般控制在24小時(shí)之內(nèi)，優(yōu)選在16小時(shí)之內(nèi)、更優(yōu)選在8小時(shí)之內(nèi)、最優(yōu)選在4小時(shí)以內(nèi)，例如用1或2小時(shí)。另外，可以多次重復(fù)上述提取操作。一般地，在提取操作中，提取時(shí)間、溫度和提取次數(shù)應(yīng)統(tǒng)一起來考慮，例如，對于較高的溫度和較長的提取時(shí)間，則可以進(jìn)行少次數(shù)的重復(fù)，甚至僅提取一次。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施例中，提取是在3-5倍量的水，60-80℃的溫度和16小時(shí)下提取2次。優(yōu)選地，可以在水中加入少量的無機(jī)酸或者有機(jī)酸，這里，“少量”是指酸的量按重量百分比計(jì)不超過10％，優(yōu)選不超過5％，最好不超過3％。但是其用量要足以將水溶液的pH值調(diào)節(jié)至不大于3。這里使用的酸并無嚴(yán)格限定，優(yōu)選成本較低的鹽酸和硫酸。其他優(yōu)選的酸包括乙酸、草酸和丙二酸、丁二酸和檸檬酸。在使用酸的情況下，可以在常溫下例如20℃進(jìn)行提取。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施例中，提取是在3-5倍量的水、pH值為1-2范圍、溫度為40-50℃、時(shí)間為60-90分鐘的條件下進(jìn)行1-2次。
2)乙醇或甲醇提取法。乙醇或甲醇是最常用的黃酮類化合物提取劑，高濃度的醇(如90-95％)適用于提取苷元，60％左右的醇適用于提取苷類。提取的時(shí)間可以根據(jù)溫度作適當(dāng)變化，在較高的溫度下可以提取較短的時(shí)間，在較低的溫度下應(yīng)相應(yīng)延長提取時(shí)間，但從生產(chǎn)效率考慮，提取時(shí)間一般控制在16小時(shí)之內(nèi)，優(yōu)選在10小時(shí)之內(nèi)、更優(yōu)選在6小時(shí)之內(nèi)，例如用1或2小時(shí)。另外，可以多次重復(fù)上述提取操作，例如可以重復(fù)是2-4次。一般地，在提取操作中，提取時(shí)間、溫度和提取次數(shù)應(yīng)統(tǒng)一起來考慮，例如，對于較高的溫度和較長的提取時(shí)間，則可以進(jìn)行少次數(shù)的重復(fù)，甚至僅提取一次。通常，醇含量在30-70％重量范圍的醇水溶液是適用的。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施例中，提取是在3-5倍量的60％甲醇的水溶液中，在60-70℃的溫度下和提取2次，每次進(jìn)行90分鐘。
在本發(fā)明中也使用了酶法提取花青素和原花青素成分。可以使用的酶的例子包括葡萄糖氧化酶和纖維素酶。使用酶法提取黃酮類化合物的例子披露在李苑等，《廣東藥學(xué)》，1999，9(2)4；楊慶隆等，《中成藥》，1995，17(6)4；和徐蓮英等，《中成藥》，2001，32(1)37中，本發(fā)明在此引入這些內(nèi)容作為參考。在本發(fā)明的具體實(shí)施例中，酶解條件選擇為含有重量比0.05～0.2％纖維素酶或果膠酶的水溶劑，酶解溫度為30-60℃，乙醇濃度為60％。
此外還可以采用膜過濾方法進(jìn)行花青素和原花青素的提取將紅豆越橘果提取液進(jìn)行陶瓷膜分離，分離后的透析液進(jìn)行超濾膜過濾，透析液再進(jìn)行納膜分離。使用膜過濾方法分離黃酮，多酚類化合物的例子披露在郭宏等，《膜科學(xué)與技術(shù)》，2003，23(4)197；日本專利WO01/001798披露了一種富含多酚類物質(zhì)的膜過濾提取花青素的方法，本發(fā)明在此引入這些內(nèi)容作為參考。
然后，使用一種第二溶劑制備紅豆越橘第二提取物，通常地，第二溶劑的極性低于第一溶劑。適宜的第二溶劑可以選自乙酸乙酯、苯、甲苯、氯仿、二氯甲烷、正己烷、丙酮、甲醇、乙醇或其混合物，或者為含量在70-95％之間的甲醇或乙醇的水溶液。
在一個(gè)
具體實(shí)施例方式
中，使用乙酸乙酯；在另一個(gè)具體實(shí)施方式
中，使用70-95％的乙醇水溶液；在另一個(gè)具體實(shí)施方式
中，使用正己烷。在后一種情況下，產(chǎn)品的得率會(huì)有所降低，但提取物中白藜蘆醇的含量相對較高。
在實(shí)際生產(chǎn)中，可以首先使用第一溶劑對紅豆越橘進(jìn)行提取，以從中析出紅豆越橘第一提取物，然后使用第二溶劑對經(jīng)過第一溶劑提取的原料進(jìn)行二次提取，以獲得紅豆越橘第二提取物。這種提取順序也可以顛倒。但是優(yōu)選使用上述第一種順序。
在本發(fā)明的純化步驟中，可以使用大孔吸附樹脂或者離子交換樹脂柱層析、硅膠柱層析，超濾法或上述方法的組合進(jìn)行。可以使用的大孔樹脂的型號包括但不限于HP-20、ADS-F8、HPD-500、YWD-06、SP850、HP-30、S-861、D-101、DA-201、GDX-105、MD05271、CAD-40、XAD-4、XAD-6等?？梢允褂玫碾x子交換樹脂的型號包括但不限于CHPA-20、WK1、CK08S、SP-550C、DEAE-650S、SP-5PW。
硅膠柱層析的方法在現(xiàn)有技術(shù)中是熟知的，在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式
中，該方法被用來分離紅豆越橘第二提取物。主要根據(jù)白藜蘆醇的性質(zhì)選擇洗脫溶劑。所用的溶液可以為正己烷、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、二氯甲烷、甲醇、乙醇或其混合溶劑，利用硅膠柱層析分離白藜蘆醇在現(xiàn)有技術(shù)中也是熟知的，在此不再贅述。
在純化步驟之后通常需要一個(gè)干燥步驟，優(yōu)選采用真空干燥。
在本發(fā)明中，對于用溶劑提取的情況，優(yōu)選地將紅豆越橘原料先用第一溶劑提取，濾出第一提取液，然后用第二溶劑提取該固體殘留物，濾出第二提取液，然后分別處理第一處理液和第二處理液，得到紅豆越橘第一和第二提取物。
因此，在本發(fā)明的第四方面的一種實(shí)施方式中，上述紅豆越橘提取物的制備包括以下步驟(a)提取用第一溶劑從新的紅豆越橘原料中提取紅豆越橘第一提取物；(b)純化純化處理所得的第一提取液；(c)干燥干燥在步驟(b)中所得的純化物，得到紅豆越橘第一提取物；(d)提取用第二溶劑對已被第一溶劑提取的原料進(jìn)行再提取，得到第二提取液；(e)純化將第二提取液進(jìn)行純化，得到紅豆越橘第二提取物(高含量白藜蘆醇)。
(f)將第一和第二提取物以任何期望的比例混合，得到紅豆越橘提取物組合物。
在步驟(f)中，是根據(jù)目標(biāo)產(chǎn)品的用途設(shè)計(jì)第一和第二提取物的比例。例如，對于用于抗氧化目的的產(chǎn)品，可以較多含有第一提取物，或者不含有第二提取物，對于延緩衰老目的的產(chǎn)品，可以以第一提取物為主，適當(dāng)提高第二提取物的比例，如第一提取物第二提取物為10∶1。對于減肥目的的產(chǎn)品，可以使該組合物各含有基本上相同重量的第一提取物和第二提取物。
在本發(fā)明第四方面的一個(gè)具體實(shí)施方式
中，上述方法包括以下步驟
(a)提取用含酸的水溶劑對紅豆越橘加熱提取，或者醇水溶液或者酶水溶液對紅豆越橘加熱提取，過濾得到的第一提取液；(b)純化對所得的第一提取液進(jìn)行樹脂純化處理或膜過濾純化處理；(c)干燥對步驟(b)所得的純化物進(jìn)行干燥，得到紅豆越橘第一提取物；(d)提取對酸水(或醇水，酶水)提取過濾后得到的果渣，用第二溶劑進(jìn)行再提取，得到第二提取液；(e)純化將第二提取液進(jìn)行純化，得到紅豆越橘第二提取物(高含量白藜蘆醇)。
(f)將第一和第二提取物以0.001∶100～100∶0.001的比例混合，得到紅豆越橘第三提取物。
在本發(fā)明方法的一個(gè)更加具體的實(shí)施方式中，上述紅豆越橘提取物的制備包括以下步驟(a)提取用質(zhì)量百分比1～5％之間的鹽酸、硫酸或醋酸的水溶液；或者甲醇或乙醇的水溶液(優(yōu)選在30-70％的含量之間)；或者重量比0.05～0.2％纖維素酶或果膠酶的水溶液進(jìn)行提取，減壓過濾得到第一提取液；(b)純化濃縮以基本上除去溶劑，將濃縮物上大孔吸附樹脂或離子交換樹脂柱，水洗至中性后用30-95％的乙醇洗脫；或者進(jìn)行膜過濾純化處理；或者通過上述兩種方法的結(jié)合進(jìn)行所述純化，包括將所述第一提取物粗產(chǎn)物進(jìn)行超濾膜過濾處理，然后用樹脂柱純化，干燥后得到紅豆越橘第一提取物，或者將所述第一提取物粗產(chǎn)物進(jìn)行樹脂柱純化后，再經(jīng)超濾膜過濾處理，干燥后得到紅豆越橘第一提取物。
(c)干燥真空濃縮步驟(b)得到的乙醇溶液，干燥得到紅豆越橘提取物I；(d)提取對步驟(a)中過濾后得到的果渣，用乙酸乙酯、正己烷、丙酮、甲醇、乙醇或其與水組成的任一比例的水溶液提取。該步驟可在避光和惰性氣氛下進(jìn)行1-2次，得到第二提取液；(e)純化硅膠柱層析純化步驟(d)得到的第二提取液，層析使用的溶劑是選自正己烷、乙酸乙脂、丙酮、甲醇、乙醇或任一比例的混合溶劑，以便得到紅豆越橘第二提取物(高含量白藜蘆醇)。
(f)將第一和第二提取物以0.001∶100～100∶0.001的比例混合，得到紅豆越橘第三提取物。
分析在本發(fā)明中，紅豆越橘第一和第二提取物以及其組合物的定性分析通過高效液相色譜法進(jìn)行。
對于第一提取物，采用的色譜條件(條件1)為色譜柱 ODS-C18梯度洗脫流動(dòng)相 A相，水∶甲酸＝90∶10B相，水∶乙睛∶甲醇＝45∶22.5∶22.5檢測波長540nm或者采用條件2色譜柱 ODS-C18梯度洗脫流動(dòng)相 A相，乙腈B相，磷酸∶水＝67∶31檢測波長280nm對于第二提取物，采用的色譜條件(條件1)為
色譜柱 ODS-C18梯度洗脫流動(dòng)相 A相，乙腈B相，水∶甲酸＝270∶1檢測波長303nm另外，在本發(fā)明中，采用HPLC法進(jìn)行花青素和白藜蘆醇的定量分析，對于原花青素的定量分析，我們參照葡萄籽類植物多酚的一種檢測方法——酒石酸鉀鈉法，即，使多酚與酒石酸鐵在PH＝7.5的磷酸鹽緩沖溶液中發(fā)生特異性反應(yīng)，然后在540nm的最大吸收波長處定量反應(yīng)產(chǎn)物，得到多酚的總量，從該總量中扣除用HPLC法得到的花青素的含量，即得到原花青素的量。
應(yīng)用紅豆越橘提取的色素主要成分為花青素和原花青素，花青素主要為3-半乳糖矢車菊素?；ㄇ嗨鼐哂锌寡趸饔谩Ｔㄇ嗨卦谒嵝运芤褐屑訜崽幚砜梢苑纸獬苫ㄇ嗨?，且其本身可以有效降低膽固醇和低密度脂蛋白水平，預(yù)防血栓形成，心腦血管疾病的發(fā)生。還可以保護(hù)細(xì)胞DNA免遭自由基的氧化損傷，從而預(yù)防導(dǎo)致癌癥的基因突變。
紅豆越橘提取物還含有白藜蘆醇及白藜蘆醇苷，白藜蘆醇(苷)是一類活性多酚物質(zhì)，除了較強(qiáng)的抗氧化功能外，白藜蘆醇和白藜蘆醇苷對癌變過程中細(xì)胞和組織變異的3個(gè)主要階段(誘發(fā)，起始和發(fā)展)都有抑制作用，成為抑制和治療組織癌變和腫瘤發(fā)生最有前途的藥物之一。最近報(bào)道研究表明，白藜蘆醇可通過保護(hù)細(xì)胞線粒體中的DNA(脫氧核糖核酸)免遭化學(xué)損害而發(fā)揮延緩衰老功效。此外，近期有關(guān)簡單有機(jī)體壽命實(shí)驗(yàn)研究了白藜蘆醇和限制熱量攝入兩者延長壽命的共同機(jī)制，研究人員觀察到白藜蘆醇通過激活Sir2酶表達(dá)能夠?qū)⒔湍傅膲勖娱L大約70％。因此白藜蘆醇通過對Sir2酶的激活作用多層次、多途徑影響著機(jī)體的健康。
本發(fā)明的范疇內(nèi)，也包含對紅豆越橘提取物的抗氧化活性及其在抗衰老、減肥、美容、治療心血管疾病方面的應(yīng)用。
我們采用鄰二氮菲Fe2+氧化法檢測羥自由基及紅豆越橘提取物對羥自由基的清除作用，發(fā)現(xiàn)紅豆越橘提取物對羥自由基具有清除作用，清除能力與藥物濃度具明顯的量效關(guān)系，其清除率同其濃度呈明顯正相關(guān)，其IC50遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于同等實(shí)驗(yàn)條件下抗壞血酸(Vc)的IC50，說明其對羥自由基的清除能力強(qiáng)于抗壞血酸，具有明顯的體外抗氧化作用。
自由基在人體衰老以及多種疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮非常重要的作用。由于紅豆越橘提取物良好的抗氧化作用，根據(jù)本發(fā)明的方法獲得的紅豆越橘提取物在抗衰老、減肥、美白抗皺和治療心血管疾病方面功效是可以預(yù)見的。
生物體細(xì)胞代謝過程中會(huì)不斷產(chǎn)生自由基，外界環(huán)境各種刺激因素，如紫外線、化學(xué)物質(zhì)等也會(huì)促進(jìn)機(jī)體自由基的產(chǎn)生。這些自由基過多地積累會(huì)對生物大分子物質(zhì)，例如DNA、蛋白質(zhì)等產(chǎn)生損傷，進(jìn)而造成生物機(jī)體的衰老。紅豆越橘提取物中含有豐富的花青素、原花青素及白藜蘆醇等抗氧化物質(zhì)。能有效地清除自由基，進(jìn)而在人體抗衰老方面發(fā)揮作用。實(shí)驗(yàn)證實(shí)紅豆越橘提取物飼喂的老齡小鼠，其血中過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物MDA的含量會(huì)顯著降低，同時(shí)血清中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性顯著升高。說明紅豆越橘提取物能通過其抗氧化作用而發(fā)揮抗衰老作用。
在對高脂飼料造成的營養(yǎng)性肥胖大鼠模型飼喂紅豆越橘提取物的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)肥胖大鼠體重增長減慢，但對動(dòng)物的攝食量幾乎沒有影響；導(dǎo)致睪丸及腎周圍脂肪量有顯著性的減少，說明紅豆越橘提取物能抑制脂肪在體內(nèi)的堆積而對攝入量沒有明顯抑制作用，可以作為健康的減肥食品來運(yùn)用。
臺灣學(xué)者(國植等，國外醫(yī)藥·植物藥分冊，1996；11(5)196～204)研究發(fā)現(xiàn)原花青素能通過抑制血栓素TXA2而抑制血小板的凝聚。由倍安等，中國心血管雜志，2003；8(6)383～385，實(shí)驗(yàn)表明葡萄籽原花青素雖然不能明顯影響實(shí)驗(yàn)性高脂血癥家兔血脂的水平，但是，可以通過其抗氧化作用明顯抑制血漿低密度脂蛋白的氧化，對動(dòng)脈粥樣硬化的防治具有重要意義。有研究表明，葡萄籽中的原花青素對家兔離體主動(dòng)脈環(huán)有舒張作用，并分析這種作用同促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞釋放NO有關(guān)(張團(tuán)笑等，中草藥，2006；37(1)87～89)。紅豆越橘提取物中含有豐富的花青素和原花青素，以及少量白藜蘆醇，因此具有良好的抑制血栓形成、降低血脂和舒張血管的作用，可用在防治高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、血栓性疾病等保健品和功能性食品中。
此外，紅豆越橘的抗氧化活性可以用于美容系列產(chǎn)品的開發(fā)。皮膚屬于結(jié)締組織，其中所含有的膠原蛋白和彈性蛋白對皮膚的整個(gè)結(jié)構(gòu)起重要作用。膠原蛋白的適度交聯(lián)，可以維持皮膚的完整性，而體內(nèi)自由基氧化可使其過度交聯(lián)，在皮膚上表現(xiàn)為皺紋和囊泡，花青素、原花青素可促使膠原蛋白的適度交聯(lián)，有效清除自由基，從而保持皮膚柔順、光滑。另外，彈性蛋白可使皮膚具有彈性，缺乏彈性蛋白的皮膚松馳無力，使人顯得老態(tài)龍鐘。彈性蛋白可被自由基或彈性蛋白酶所降解，花青素、原花青素具有清除自由基，阻斷彈性蛋白酶的產(chǎn)生并抑制其活性，從而改善皮膚健康狀況。在對紫外線照射皮膚光老化模型小鼠皮膚羥脯氨酸的含量及SOD活性測定中發(fā)現(xiàn)，服用紅豆越橘提取物的小鼠皮膚中羥脯氨酸含量和SOD活性均明顯高于模型動(dòng)物。說明越橘提取物能通過其良好的抗氧化作用，保護(hù)皮膚膠原蛋白，來達(dá)到抗皺美容的作用。
實(shí)施例1 紅豆越橘第一提取物的制備以1000g紅豆越橘為原料，用pH值為1的鹽酸水溶液作為溶劑提取，提取液上樹脂柱。樹脂采用HP20大孔吸附樹脂，再用95％的乙醇洗脫產(chǎn)品。收集醇洗脫液，50℃真空濃縮，然后進(jìn)行噴霧干燥，得到紅豆越橘提取物約8克。
所得紅豆越橘提取物含有花青素36.8％，原花青素52.7％，白藜蘆醇3.2％。
實(shí)施例2 紅豆越橘第一提取物的制備以1000g紅豆越橘為原料，用80％乙醇水溶液作為溶劑，提取液濃縮除去乙醇后上樹脂柱。樹脂采用CHPA20離子交換樹脂。用60％的乙醇洗脫產(chǎn)品。收集醇洗脫液，濃縮后進(jìn)行噴霧干燥，得到紅豆越橘提取物約9.5克。
所得紅豆越橘提取物含有花青素19.6％，原花青素72.0％，白藜蘆醇1.4％。
實(shí)施例3 紅豆越橘第一提取物的制備以1000g紅豆越橘為原料，用60％乙醇水溶液作為溶劑，60℃提取90分鐘，提取液濃縮除去乙醇，加水稀釋后上樹脂柱。樹脂采用HP-20大孔吸附樹脂。用95％的乙醇洗脫產(chǎn)品。收集醇洗脫液，真空濃縮后進(jìn)行噴霧干燥，得到紅豆越橘提取物約8.1克。
所得紅豆越橘提取物含有花青素24.5％，原花青素67.7％，白藜蘆醇1.5％。
實(shí)施例4 紅豆越橘第一提取物的制備以1000g紅豆越橘為原料，用pH值為3，30％乙醇水溶液作為溶劑，提取液上樹脂柱。樹脂采用HP20大孔吸附樹脂，再用95％的乙醇洗脫產(chǎn)品。收集醇洗脫液，濃縮后進(jìn)行噴霧干燥，得到紅豆越橘提取物7.6克。
所得紅豆越橘提取物含有花青素27.8％，原花青素68.9％，白藜蘆醇0.7％。
實(shí)施例5 紅豆越橘第一提取物的制備將1000g紅豆越橘用3倍量的水浸泡，加0.08％果膠素酶的水溶液，置于40℃恒溫水浴內(nèi)保溫2小時(shí)，過濾得到提取液。提取液經(jīng)過大孔吸附樹脂處理后，得到紅豆越橘提取物6.3g。
所得紅豆越橘提取物含有花青素34.8％，原花青素53.9％，白藜蘆醇1.2％。
實(shí)施例6 紅豆越橘第一提取物的制備將1000g紅豆越橘用3倍量的水浸泡，加0.1％的纖維素酶攪拌，置于40℃恒溫水浴內(nèi)保溫2小時(shí)，過濾得到提取液。將提取液進(jìn)行超濾膜過濾(分子量2000)。膜過濾后的濃縮液采用CHPA20離子交換樹脂樹脂純化，用30％的乙醇洗脫產(chǎn)品，濃縮后進(jìn)行噴霧干燥，得到紅豆越橘提取物約8.5克。
所得紅豆越橘提取物含有花青素5.2％，原花青素94.0％，白藜蘆醇0.5％。
實(shí)施例7 紅豆越橘第一提取物的制備將1000g紅豆越橘，用純水浸泡提取，提取液進(jìn)行陶瓷膜過濾(分子量15萬)。過膜后的透析液再進(jìn)行超濾膜過濾(分子量2000)。濃縮液進(jìn)行噴霧干燥或者進(jìn)行納濾膜處理，得到紅豆越橘提取物15.9g。
所得紅豆越橘提取物含有花青素5.2％，原花青素22.3％，白藜蘆醇0.5％。圖1以該實(shí)施例的產(chǎn)品為例示出第一提取物的液相色譜圖，其采用前述條件1的色譜條件。
實(shí)施例8 紅豆越橘第二提取物的制備以實(shí)施例2中經(jīng)過提取過的果實(shí)原料(200g)為原料，在避光和氮?dú)夥障拢靡宜嵋阴ヌ崛?，得?.8g的黃白色膏狀物。將膏狀物進(jìn)行硅膠柱層析，用正己烷洗脫雜質(zhì)，然后用正己烷和乙酸乙酯的混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，利用TLC分析方法監(jiān)控。收集富集白藜蘆醇的組分，得到白藜蘆醇含量為80％的白藜蘆醇粗品。用乙醇重結(jié)晶該粗品，得到白色白藜蘆醇晶體1.8g，所得紅豆越橘第二提取物中含有白藜蘆醇98％。
實(shí)施例9 紅豆越橘第二提取物的制備以實(shí)施例2中經(jīng)過提取過的果實(shí)原料(200g)為原料，在避光和氮?dú)夥障拢?00毫升95％的乙醇水溶液提取，得到黃白色膏狀物。將膏狀物進(jìn)行硅膠柱層析，用正己烷洗脫雜質(zhì)，然后用正己烷和乙酸乙酯的混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，利用TLC分析方法監(jiān)控。收集富集白藜蘆醇的組分，得到白藜蘆醇含量為50％的白藜蘆醇粗品。用乙醇重結(jié)晶該粗品，得到白色白藜蘆醇晶體約3.1g，所得紅豆越橘第二提取物中含有白藜蘆醇65％。圖2以該實(shí)施例的產(chǎn)品為例示出第二提取物的液相色譜圖。
實(shí)施例10 紅豆越橘第二提取物的制備以實(shí)施例2中經(jīng)過提取過的果實(shí)原料(200g)為原料，在避光和氮?dú)夥障?，用正己烷提取，提取液直接進(jìn)行硅膠柱層析，正己烷洗脫雜質(zhì)，然后用正己烷和乙酸乙酯的混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，利用TLC分析方法監(jiān)控。收集富集白藜蘆醇的組分，得到白藜蘆醇粗品，其中白藜蘆醇含量為70％。用乙醇重結(jié)晶該粗品，得到白色白藜蘆醇晶體約2.0g，所得紅豆越橘第二提取物中含有白藜蘆醇80％。
實(shí)施例11 紅豆越橘第三提取物的制備將第一提取物0.89g(實(shí)施例3)(含有花青素24.5％，原花青素67.7％，白藜蘆醇1.5％)和第二提取物0.11g(實(shí)施例10)(含有80％白藜蘆醇)混合，用乙醇溶解后，真空濃縮，噴霧干燥即可得到第三提取物1.00g(含有花青素21.8％，原花青素60.2％，白藜蘆醇10.0％)。
圖3以該實(shí)施例的產(chǎn)品為例示出第三提取物的液相色譜圖，其采用前述條件2的色譜條件。
實(shí)施例12 紅豆越橘第一提取物體外抗氧化作用紅豆越橘第一提取物(按照實(shí)施例7方法制備，其中含花青素5.2％，原花青素22.3％，白藜蘆醇0.5％)，用雙蒸水配制，并稀釋成0.5，0.25，0.125，0.0625，0.03125，0.015625，0.0078125mg/ml濃度系列；抗壞血酸用雙蒸水配制成2，1，0.5，0.25，0.125，0.0625mg/ml濃度系列。
采用鄰二氮菲Fe2+氧化法檢測羥自由基及受試藥物對羥自由基的清除作用，證實(shí)紅豆越橘的抗氧化性能。
總反應(yīng)體積為4.7ml。故抗壞血酸的終濃度分別為0.851、0.426、0.213、0.106mg/ml，紅豆越橘提取物的終濃度0.106、0.053、0.027、0.013mg/ml。每組測試5個(gè)樣本，分別計(jì)算·OH的清除率，并計(jì)算平均值。
2結(jié)果，見下表表1抗壞血酸對羥自由基的清除作用(n＝4)

本實(shí)驗(yàn)在檢測紅豆越橘提取物對羥自由清除作用的同時(shí)，用已知的·OH清除劑抗壞血酸作陽性對照，以驗(yàn)證此方法的可靠性。IC50為0.3078mg/ml。
表2紅豆越橘第一提取物對羥自由基的清除作用(n＝4)


紅豆越橘提取物對羥自由基清除的IC50為0.1181mg/ml。
3討論在本實(shí)驗(yàn)反應(yīng)體系中，紅豆越橘提取物水溶液可與Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的羥自由基結(jié)合，減少羥自由基對Fe2+的氧化，通過測定反應(yīng)體系的吸光度值檢測其對羥自由基的清除作用。
紅豆越橘提取物可能與羥自由基結(jié)合，減少羥自由基對Fe2+的氧化，提高反應(yīng)體系中鄰二氮菲-Fe2+結(jié)合物的濃度，從而顯示出清除羥自由基作用。其清除能力與藥物濃度具明顯的量效關(guān)系，清除率同其濃度呈明顯正相關(guān)，IC50為0.1181mg/ml，而同等實(shí)驗(yàn)條件下，抗壞血酸(Vc)的IC50為0.3078mg/ml，說明其對羥自由基的清除能力強(qiáng)于抗壞血酸，具有明顯的體外抗氧化作用。
實(shí)施例13 評價(jià)紅豆越橘提取物對小鼠血中MDA含量和GSH-Px活性的影響采用10月齡老年昆明小鼠60只，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為4組，分別為老齡對照組，紅豆越橘高、中、低劑量組。高、中、低各給藥組分別灌服200、100、50mg/kg bw的紅豆越橘第一提取物(按照實(shí)施例7方法制備，其中含花青素5.2％，原花青素22.3％，白藜蘆醇0.5％)，對照組給予同體積蒸餾水。8周后，處死小鼠，測血清中過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物MDA和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)。結(jié)果，紅豆越橘提取物能顯著降低老齡小鼠MDA的含量，顯著提高老齡小鼠血清中的GSH-Px活性。(參見表3)
表3紅豆越橘提取物對小鼠血中MDA含量和GSH-Px活性的影響

*與對照組比較P＜0.05實(shí)施例14 評價(jià)紅豆越橘提取物對營養(yǎng)性肥胖大鼠模型的影響SD雄性大鼠50只，體重150～200g，基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，根據(jù)體重水平隨機(jī)分為5組，即基礎(chǔ)飼料對照組，高脂飼料對照組，紅豆越橘提取物高、中、低3個(gè)劑量組?；A(chǔ)飼料對照組喂普通大鼠飼料。其余各組進(jìn)食高脂飼料，。高脂飼料的組成為普通飼料55％，豬油12％，蔗糖5％，奶粉8％，花生5％，雞蛋10％，麻油3％，食鹽2％。高、中、低各給藥組分別灌服200、100、50mg/kg bw的紅豆越橘第一提取物(按照實(shí)施例7方法制備，其中含花青素5.2％，原花青素22.3％，白藜蘆醇0.5％)，對照組給予同體積蒸餾水。每目測實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重、食量。8周后，處死動(dòng)物，取腎周和睪丸周圍脂肪組織，稱重。
實(shí)驗(yàn)過程中各組大鼠生長良好，無死亡動(dòng)物，無異常表現(xiàn)，進(jìn)食量均正常，沒有明顯異常。實(shí)驗(yàn)前后各組大鼠體重及體脂含量、體脂比(腎和睪丸周圍脂肪重量/體重)的變化情況，見表4。
表4紅豆越橘提取物對營養(yǎng)性肥胖大鼠體重和脂肪含量的影響

*與高脂飼料對照組比較P＜0.05可以看出，紅豆越橘提取物可以在不影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲食的情況下，顯著抑制營養(yǎng)過剩造成的超重，降低組織周圍脂肪含量和體脂比。因此可以應(yīng)用于具有減肥功能的保健品食品中。
實(shí)施例15 紅豆越橘提取物對皮膚光老化模型小鼠皮膚SOD活性和HYP(羥脯氨酸)含量的影響昆明種小鼠50只，體重15～20g，隨機(jī)分為5組正常對照組，模型對照組，紅豆越橘高、中、低3個(gè)劑量組。除正常對照組外，其余各組均剃去背部毛，每日用UVA燈管照射，造成光老化模型。高、中、低各給藥組分別灌服200、100、50mg/kg bw的紅豆越橘第一提取物(按照實(shí)施例7方法制備，其中含花青素5.2％，原花青素22.3％，白藜蘆醇0.5％)，對照組給予同體積蒸餾水。8周后，處死動(dòng)物，立即取下背部脫毛處全層皮膚，用生化方法測定局部SOD活性及HYP含量。具體結(jié)果見表5。
表5紅豆越橘提取物對光老化模型小鼠皮膚SOD和HYP的影響

*與模型對照組比較，P＜0.05可以看出，紅豆越橘提取物能抑制光照造成的皮膚老化過程，提高皮膚中SOD的活性和HYP的含量，恢復(fù)皮膚活力和彈性，因而可以應(yīng)用于具有美容功效的保健品和化妝品中。
以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種制備紅豆越橘提取物的方法，包括以下步驟(a)用第一溶劑對紅豆越橘果實(shí)進(jìn)行提取，然后分離得到第一提取液，所述第一溶劑為醇、醇水溶液、水、含酸水溶液、含酶水溶液或者含酸和醇的水溶液；(b)濃縮所述第一提取液，得到第一提取物粗產(chǎn)物；(c)從所述第一提取物粗產(chǎn)物中分離得到第一提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，在步驟(a)中，所述第一溶劑是含有不超過10％重量鹽酸、硫酸、醋酸或檸檬酸的含酸水溶液或者含酸醇水溶液，或者是含有重量比0.05～0.2％纖維素酶或果膠酶的水溶劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，在步驟(a)中，所述第一溶劑為含酸水溶液或含酸和醇的水溶液，所述提取是在20-50℃下進(jìn)行；當(dāng)所述第一溶劑為醇水溶液，所述提取是在40-90℃下進(jìn)行；或者所述第一溶劑為含酶水溶液，所述酶解溫度在30-60℃下進(jìn)行。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，在步驟(c)中，通過吸附樹脂或離子交換樹脂法純化所述第一提取物粗產(chǎn)物，包括將所述第一提取物粗產(chǎn)物上吸附樹脂柱或離子交換樹脂柱，用30-95％的乙醇洗脫，以及濃縮所得乙醇溶液，干燥后得到紅豆越橘第一提取物；或者通過膜過濾法進(jìn)行所述純化，包括將所述第一提取物粗產(chǎn)物進(jìn)行超濾膜過濾處理，得到的濃縮液進(jìn)行減壓濃縮或納濾膜過濾，干燥后得到紅豆越橘第一提取物；或者通過上述兩種方法的結(jié)合進(jìn)行所述純化，包括將所述第一提取物粗產(chǎn)物進(jìn)行超濾膜過濾處理，然后用樹脂柱純化，干燥后得到紅豆越橘第一提取物，或者將所述第一提取物粗產(chǎn)物進(jìn)行樹脂柱純化后，再經(jīng)超濾膜過濾處理，干燥后得到紅豆越橘第一提取物。
5.一種制備紅豆越橘提取物的方法，包括以下步驟(d)用第二溶劑對經(jīng)過第一溶劑提取過的紅豆越橘果實(shí)進(jìn)行再提取，得到第二提取液，所述第一溶劑為醇、醇水溶液、水、含酸水溶液、含酶水溶液或者含酸和醇的水溶液，所述第二溶劑選自乙酸乙酯、苯、甲苯、氯仿、二氯甲烷、正己烷、丙酮、甲醇、乙醇或其混合物，或者為含量在70-95％之間的甲醇或乙醇的水溶液，或者是含有濃度0.01-0.3％纖維素酶或果膠酶的含酶水溶液；(e)濃縮所述第二提取液，得到第二提取物粗品。(f)純化所述第二提取物粗品，得到紅豆越橘第二提取物，其主要成分為白藜蘆醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中在步驟(f)中，使用硅膠柱層析法進(jìn)行純化，使用正己烷、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、二氯甲烷、甲醇、乙醇或其混合溶劑作為洗脫劑，以便從所述第二提取物粗品得到紅豆越橘的所述第二提取物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，步驟(d)是在避光和惰性氣氛下進(jìn)行1-2次，得到所述第二提取液。
8.一種制備紅豆越橘提取物的方法，包括以下步驟(a)用第一溶劑對紅豆越橘果實(shí)進(jìn)行提取，然后分離得到第一提取液，所述第一溶劑為醇、醇水溶液、水、含酸水溶液、含酶水溶液或者含酸和醇的水溶液；(b)濃縮所述第一提取液，得到第一提取物粗產(chǎn)物；(c)從所述第一提取物粗產(chǎn)物中分離得到第一提取物，得到第一提取物。(d)用第二溶劑對經(jīng)過所述第一溶劑提取過的紅豆越橘果實(shí)進(jìn)行再提取，得到第二提取液，所述第二溶劑選自乙酸乙酯、苯、甲苯、氯仿、二氯甲烷、正己烷、丙酮、甲醇、乙醇或其混合物，或者為含量在60-95％之間的甲醇或乙醇的水溶液，或者是含有濃度0.01-0.3％之間的纖維素酶或果膠酶的含酶水溶液；(e)濃縮所述第二提取液，得到第二提取物粗品。(f)純化所述第二提取物粗品，得到主要成分為白藜蘆醇的紅豆越橘的所述第二提取物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中在步驟(a)中，所述第一溶劑為含酸水溶液或含酸和醇的水溶液，所述提取是在20-50℃下進(jìn)行的，當(dāng)所述第一溶劑為醇水溶液，所述提取是在40-90℃下進(jìn)行的；或者所述第一溶劑為含酶水溶液，酶解溫度在30-60℃下進(jìn)行。在步驟(b)中，濃縮所述第一提取液，得到第一提取物粗產(chǎn)物；在步驟(c)中，將所述第一提取物粗產(chǎn)物上所述大孔吸附樹脂或離子交換樹脂，用30-95％的乙醇洗脫，濃縮所得乙醇溶液，干燥得到紅豆越橘的所述第一提取物，或者通過膜過濾法進(jìn)行所述純化，包括將所述第一提取物粗產(chǎn)物進(jìn)行超濾膜過濾處理，得到的濃縮液進(jìn)行減壓濃縮或納濾膜過濾。干燥后得到紅豆越橘第一提取物；或者通過上述兩種方法的結(jié)合進(jìn)行所述純化，包括將所述第一提取物粗產(chǎn)物進(jìn)行超濾膜過濾處理，然后用樹脂柱純化，干燥后得到紅豆越橘第一提取物，或者將所述第一提取物粗產(chǎn)物進(jìn)行樹脂柱純化后，再經(jīng)超濾膜過濾處理，干燥后得到紅豆越橘第一提取物。在步驟(d)中，在避光和惰性氣氛下進(jìn)行所述再提取，得到所述第二提取液；在步驟(e)中，濃縮所述第二提取液，得到所述第二提取物粗品。在步驟(f)中，用正己烷、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、二氯甲烷、甲醇、乙醇或其混合溶劑，通過硅膠柱層析純化由步驟(e)得到的所述第二提取物粗品，以便得到紅豆越橘的所述第二提取物。
10.一種紅豆越橘提取物。其由5-35％重量的花青素、20-95％重量的原花青素、小于5％重量的白藜蘆醇以及余量的其他成分組成。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的紅豆越橘提取物，其由5-20％重量的花青素、50-95％重量的原花青素、小于2％重量的白藜蘆醇以及余量的其他成分組成。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的紅豆越橘提取物，其中，所述花青素主要為3-半乳糖-矢車菊素、3-葡萄糖-矢車菊素和3-阿拉伯糖-矢車菊素。
13.一種紅豆越橘提取物，含有60-98％重量的白藜蘆醇。
14.一種紅豆越橘提取物組合物，其由權(quán)利要求11所述的紅豆越橘提取物和權(quán)利要求13所述的紅豆越橘提取物組成。
15.一種用于抗衰老、減肥、抗氧化自由基、預(yù)防心腦血管疾病、抑制血栓形成和美容的功能食品，其含有權(quán)利要求10至14任一項(xiàng)所述的紅豆越橘提取物。
16.根據(jù)權(quán)利要求10至14任一項(xiàng)所述的紅豆越橘提取物在抗衰老、減肥、抗氧化自由基、預(yù)防心腦血管疾病、抑制血栓形成和美容發(fā)明的應(yīng)用。
全文摘要
提供紅豆越橘第一提取物，其由5－35％重量的花青素、20－95％重量的原花青素、小于5％重量的白藜蘆醇以及余量的其他成分組成，以及第二提取物，其含有60－98％重量的白藜蘆醇。本發(fā)明還提供制備上述提取物的方法。本發(fā)明提供的提取物可作為用于抗衰老、減肥、抗氧化自由基、預(yù)防心腦血管疾病、抑制血栓形成和美容目的的功能食品。
文檔編號A61K36/45GK101077864SQ20071012274
公開日2007年11月28日 申請日期2007年7月4日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月4日
發(fā)明者李艷梅, 竇夏睿, 程巧姐 申請人:北京綠色金可生物技術(shù)股份有限公司