專利名稱：：一種替米考星長效注射液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及獸禽類藥物制備
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體說是一種替米考星藥物的長效注射液及其制備方法。
背景技術(shù)：
：替米考星(Tilmicosin)是英國Elanco公司20世紀(jì)80年代開發(fā)的一種動(dòng)物專用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，90年代在我國批準(zhǔn)上市。其為白色或淡黃色結(jié)晶粉末，在甲醇、乙腈、丙酮中易溶，在乙醇中溶解，在正己垸中幾乎不溶。替米考星具有特殊的抗菌活性和藥動(dòng)學(xué)特征，并且對(duì)革蘭氏陽性菌和部分革蘭氏陰性菌、霉形體、螺旋體等均有抑制作用，尤其對(duì)胸膜肺炎放線桿菌、溶血性巴氏桿菌、多殺性巴氏桿菌以及畜禽支原體具有比泰樂菌素更強(qiáng)的抗菌活性；其藥動(dòng)學(xué)已在奶牛、奶山羊、綿羊、豬、雞等動(dòng)物進(jìn)行過研究，無論是內(nèi)服還是皮下注射給藥，均具有組織穿透力良好，吸收迅速，消除半衰期長，表觀分布容積大，乳中、肺中藥物濃度高且消除緩慢的特性。常用于牛、羊、豬、雞等動(dòng)物感染性疾病，特別是畜禽呼吸道疾病，放線桿菌性胸膜肺炎、巴氏桿菌病、支原體感染和乳房炎的臨床治療。目前，國內(nèi)外已有對(duì)替米考星飲水劑、片劑和普通注射劑的相關(guān)報(bào)道。蘭州獸藥研究所曾對(duì)國產(chǎn)替米考星飲水劑的藥效進(jìn)行研究。選用健康雞180只，隨機(jī)分為6組，15組雞用l個(gè)最小致死量的禽源多殺性巴氏桿菌C48-2菌液(含菌量約為6個(gè)/mL)，取0.6mL經(jīng)胸肌注射接種后2h,14組雞開始飲用加藥水連續(xù)給藥5d，所有試驗(yàn)繼續(xù)觀察至接種后第15d，13組分別給替米考星飲水劑100mg/L、200mg/L、300mg/L，第4組給泰樂菌素飲水劑500mg/L，第5組只接種但不給藥，第6組不接種也不給藥。結(jié)果表明該藥對(duì)人工感染引起的雞巴氏桿菌病有良好的治療作用，可降低死亡率，提高存活率，減少人工感染引起的病理損傷；釆用連續(xù)飲水給藥建議使用劑量為200mg/L連續(xù)使用35d后，替米考星高、中劑量治療組與泰樂菌素治療組對(duì)雞均具有明顯的增重效果，但兩者增重效果差異效果不顯著。替米考星與泰樂菌素相比具有用量少，抗感染效果顯著的優(yōu)點(diǎn)。替米考星飲水劑、片劑、普通注射劑等和大多數(shù)傳統(tǒng)制劑一樣，其藥物的釋放均按一級(jí)動(dòng)力學(xué)進(jìn)行，血液中藥物濃度起伏變化大，常出現(xiàn)"峰谷"現(xiàn)象，其血藥濃度均有可能超出最低中毒濃度，且有效血藥濃度維持時(shí)間短，往往需要多次重復(fù)給藥才能達(dá)到有效治療目的和減少副反應(yīng)，增加成本；并且有的劑型重復(fù)給藥對(duì)動(dòng)物的刺激較大，應(yīng)激反應(yīng)明顯，不利于動(dòng)物的健康生長。長效制劑(Prolonged-ReleaseMedication)亦稱延效制劑，是指在規(guī)定的環(huán)境中，通過適當(dāng)?shù)闹苿┓椒?，延長藥物在體內(nèi)的釋放、吸收、分布、代謝和排泄的過程，從而達(dá)到延長藥物作用目的的一類制劑，而長效制劑需根據(jù)藥物在體內(nèi)過程及其有效時(shí)間來設(shè)計(jì)合適的劑型，在臨床實(shí)際設(shè)計(jì)中以延緩藥物釋放和延緩藥物吸收的辦法較為簡單可行。因此畜牧業(yè)的發(fā)展客觀上要求研制開發(fā)出優(yōu)良的長效制劑。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種替米考星藥物的長效注射液，以生產(chǎn)一種安全、經(jīng)濟(jì)、高效、毒副作用小的禽畜類常用抗生新藥。本發(fā)明又一目的在于提供一種制備過程簡單、成本低廉的替米考星長效注射液的制備方法。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為一種替米考星長效注射液，其在于每100ml替米考星長效注射液分別含有10g替米考星、10ml無水乙醇和90ml蓖麻油；所述的替米考星長效注射液為淡黃色、粘稠度較高的澄清油狀液體；上述的一種替米考星長效注射液的制備方法，包括以下步驟第一步，取10ml無水乙醇于干凈帶塞試管中，再取10g替米考星原料藥加入裝有無水乙醇的試管中，蓋上塞子，漩渦振蕩lmin,以保證替米考星原料藥完全溶解，得到一次混合液；第二步，取90ml蓖麻油于干凈燒杯中，將第一步制得的一次混合液加入其中，在燒杯上蓋上平皿，室溫磁力攪拌30min，保證一次混合液和蓖麻油完全混勻，得到二次混合液；第三步，將第二步制備好的二次混合液用自動(dòng)定量分注器分裝安瓿瓶中，封口，于100"C流通蒸氣滅菌30min，即得替米考星長效注射液。由于替米考星是脂溶性藥物，易溶于丙酮、乙醇、丙二醇等有機(jī)溶劑，在植物油中較難溶解，要配制替米考星的油制注射液，首先要解決其在油中溶解的問題。根據(jù)替米考星的理化特性及生產(chǎn)成本，本發(fā)明采用加入助溶劑無水乙醇(藥用級(jí))的方法來增溶，以使其在具有保護(hù)作用的蓖麻油中穩(wěn)定溶解，其優(yōu)點(diǎn)在于制備過程簡單、成本低廉，臨床使用效果顯著。并且其具有與泰樂菌素類似的分子結(jié)構(gòu)和抗菌譜和廣譜抗菌作用，對(duì)革蘭氏陽性菌、某些革蘭氏陰性菌、支原體、螺旋體等均有抑制作用，對(duì)胸膜肺炎放線桿菌、巴氏桿菌及畜禽支原體具有比泰樂菌素更強(qiáng)的抗菌活性。由于其特殊的抗菌活性和藥動(dòng)學(xué)特征，被廣泛用于治療牛、羊、豬、雞等動(dòng)物由敏感菌引起的感染疾病，尤其是在預(yù)防和治療畜禽呼吸道感染疾病方面效果更為明顯。具體實(shí)施方式取10ml無水乙醇于干凈帶塞試管中，再取IOg替米考星原料藥加入裝有無水乙醇的試管中，蓋上塞子，漩渦振蕩lmin，以保證替米考星原料藥完全溶解，得到一次混合液；再取90ml蓖麻油于干凈燒杯中，將一次混合液加入其中，蓋上燒杯平皿，室溫磁力攪拌30min，保證一次混合液和蓖麻油完全混勻，得到二次混合液；最后將制備好的二次混合液用自動(dòng)定量分注器分裝濃度為5Q/。的5ml、10ml的安瓿瓶中，封口，于IOO'C流通蒸氣滅菌30min，燈檢，包裝，檢驗(yàn)合格后投入市場。替米考星由于其具有特殊的抗菌活性和藥動(dòng)學(xué)特征，已被廣泛用于治療牛、羊、豬、雞等動(dòng)物由敏感菌引起的感染疾病，尤其是在預(yù)防和治療畜禽呼吸道感染疾病方面效果更為明顯。其具體抑菌測試情況如下一、體外抑菌試驗(yàn)1、材料和儀器準(zhǔn)備SW-CJ-1F型潔凈工作臺(tái)，IOO級(jí)，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司QL-901Vortex漩渦振蕩器，其林貝爾儀器制造公司XSZ-4G生物顯微鏡，重慶麥克光電儀器有限公司隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海市躍進(jìn)醫(yī)療器械一廠YXQG02型電熱式蒸汽消毒器，山東新華醫(yī)療器械股份有限公司DRAG0N-MED10100uL微量移液器，大龍醫(yī)療設(shè)備有限公司DRAGON-MED1001000uL微量移液器，大龍醫(yī)療設(shè)備有限公司2、藥品和試劑準(zhǔn)備替米考星原料藥，武穴市龍翔藥業(yè)有限公司，批號(hào)20061226替米考星長效注射液(100g/L),西北農(nóng)林科技大學(xué)藥理研究室，批號(hào):20071023磷酸替米考星原料藥，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物藥廠，批號(hào)20070321泰樂菌素注射液(50g/L)，四川省簡陽愛迪飼料藥物有限公司，批號(hào):20060209乳糖酸紅霉素粉針劑(25萬單位)，大連美羅大藥廠，批號(hào)66070503牛肉膏，生化試劑，北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào)20051102蛋白胨，生化試劑，北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào)20060802瓊脂條，海南省瓊海市長坡瓊脂廠，批號(hào)20060521氯化鈉，分析純，天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠，批號(hào)20060721磷酸氫二鉀，分析純，天津市登峰化學(xué)試劑廠，20040506氫氧化鈉，分析純，西安化學(xué)試劑廠，批號(hào)050514精密試紙，pH5.59.0，上海經(jīng)濟(jì)區(qū)試劑公司，批號(hào)060218微孔濾膜，規(guī)格0.22um，上海新亞凈化器件廠3、菌種準(zhǔn)備金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌，均由西北農(nóng)林科技大學(xué)獸醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)室鑒定、提供。4、實(shí)驗(yàn)方法(1)普通肉湯的配制稱取牛肉膏IOg、蛋白胨20g、氯化鈉5g、磷酸氫二鉀lg,加入1000mL蒸餾水中，加熱溶解，用0.5mol/LNaOH溶液調(diào)pH7.4至7.6，再加fe15min，補(bǔ)足水分。涼后用濾紙過濾，分裝。置高壓滅菌鍋內(nèi)，121'C高壓蒸汽滅菌30min。(2)普通瓊脂的配制在1000mL普通肉湯中，加入瓊脂條20g，加熱使之融化，用0.5mol/LNaOH溶液調(diào)pH7.4至7.6，煮沸1015min，補(bǔ)足蒸發(fā)水分至原量。用墊有薄層脫脂棉的雙層紗布過濾，分裝于三角瓶內(nèi)，加塞，包裝，于121°C高壓蒸汽滅菌30min。(3)血清肉湯的配制按5%量將無菌血清加入滅菌普通肉湯中，混合均勻即可。(4)鮮血瓊脂平板的制備無菌操作采取健康綿羊血液，置于盛有玻璃珠的滅菌三角瓶內(nèi)，搖動(dòng)，制成脫纖血。將滅菌普通瓊脂融化待涼至5(TC左右，按5%量將脫纖血加入，混勻后傾注于平皿中，即為鮮血瓊脂平板。(5)藥液的配制1、取滅菌后替米考星長效注射液，用滅菌的蓖麻油稀釋成下列濃度備用50、25、12.5、6.25、3.125、1.562、0.781、0.391、0.195、0.098g/L。2、稱取磷酸替米考星原料藥和紅霉素60mg，加入20mL肉湯配制成3000"g/mL的溶液，用0.22um濾膜過濾除菌，分裝于多個(gè)滅菌小瓶中，置于一4'C保存。每次取一小瓶使用。(6)最小抑菌濃度(minimalinhibitoryconcentration,MIC)的測定1、采用試管二倍稀釋法。根據(jù)替米考星的抑菌試驗(yàn)資料，確定試管二倍稀釋法的最大濃度為1500ug/mL。每種藥均做10個(gè)濃度，分別為1500、750、375、187.5、93.75、46.875、23.438、11.719、5.860、2.930ug/mL。2、挑取鮮血瓊脂平板上典型生長菌落，接種于肉湯中，35。C培養(yǎng)18h后，菌液用35mL生理鹽水校正濃度至0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)，再用肉湯1:10稀釋(含菌量約107CFU/mL)。稀釋后菌液應(yīng)在15min內(nèi)盡快接種。3、用微量加樣器取0.1mL檢測菌液由低到高濃度依次加到各試管中，加樣時(shí)加樣器槍頭必須插到管內(nèi)液面下加菌，并注意避免與管內(nèi)壁接觸，加好菌液的試管應(yīng)當(dāng)避免晃動(dòng)。4、35"C培養(yǎng)24h后閱讀結(jié)果。抑制檢測菌肉眼未見生長的最低濃度為各藥對(duì)檢測菌的最小抑菌濃度參見表1。表1MIC試驗(yàn)結(jié)果(pg/mL)Table1TheresultsofMIC(pg/mL)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>5、結(jié)果與分析(1)替米考星長效注射液對(duì)畜禽常見的5種致病菌均有抑制作用。(2)替米考星長效注射液對(duì)金黃色葡萄球菌和無乳鏈球菌的抑菌作用強(qiáng)于泰樂菌素和紅霉素，弱于磷酸替米考星；對(duì)大腸桿菌的抑制作用強(qiáng)于磷酸替米考星和泰樂菌素，和紅霉素相當(dāng)；對(duì)沙門氏菌的抑制作用強(qiáng)于泰樂菌素，弱于磷酸替米考星和紅霉素；對(duì)巴氏桿菌的抑菌效果和磷酸替米考星、泰樂菌素相當(dāng)，弱于紅霉素。(3)替米考星較老一代大環(huán)內(nèi)酯類，其抗菌譜進(jìn)一步擴(kuò)大，對(duì)革蘭氏陽性菌的作用增強(qiáng)，其對(duì)無乳鏈球菌的抗菌效果較好。其體外抑菌作用與磷酸替米考星和泰樂菌素相當(dāng)。二、體內(nèi)抗菌試驗(yàn)替米考星具有廣譜抗菌作用，對(duì)革蘭氏陽性菌、某些革蘭氏陰性菌、支原體、螺旋體等均有抑制作用，對(duì)胸膜肺炎放線桿菌、巴氏桿菌及畜禽支原體具有比泰樂菌素更強(qiáng)的抗菌活性在實(shí)驗(yàn)一中已經(jīng)驗(yàn)證，試驗(yàn)二主要研究替米考星長效注射液對(duì)試驗(yàn)性感染巴氏桿菌雞的療效，為本品的臨床應(yīng)用提供有力依據(jù)。1、材料和儀器準(zhǔn)備SW-CJ-1F型潔凈工作臺(tái)，100級(jí)，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司XSZ-4G生物顯微鏡，重慶麥克光電儀器有限公司隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海市躍進(jìn)醫(yī)療器械一廠YXQG02型電熱式蒸汽消毒器，山東新華醫(yī)療器械股份有限公司DRAGON-MED10100^L微量移液器，大龍醫(yī)療設(shè)備有限公司托盤天平，江蘇常熟衡器廠2、藥品和試劑準(zhǔn)備同體外抑菌試驗(yàn)相同。3、菌種準(zhǔn)備巴氏桿菌由西北農(nóng)林科技大學(xué)獸醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)室鑒定、提供。4、試驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備雄性蛋雞，試驗(yàn)前常規(guī)飼養(yǎng)3d，臨床檢査健康者，即為試驗(yàn)雞。5、實(shí)驗(yàn)方法(1)試驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥途徑將240只雞隨機(jī)分為8組，每組30只。第1組為替米考星長效注射液低劑量治療組(20mg/kg)，2組為中劑量組(40mg/kg)，3組為高劑量組(50mg/kg)，4組為泰樂菌素治療組(10mg/kg)，5組為磷酸替米考星(10mg/kg)治療組，6組為紅霉素(5mg/kg)治療組，7組為陽性對(duì)照組，8組為陰性對(duì)照組。16組均為頸部皮下注射給藥。(2)活菌計(jì)數(shù)試驗(yàn)將保存菌種接種于滅菌血清肉湯中，于37t培養(yǎng)1618h。將此培養(yǎng)的菌懸液依IO倍順序稀釋為10-1、10-2、10-3、……、10-10，即9ml.無菌生理鹽水加lmL菌懸液為10-1，依此類推。選取10-5、10-6、10-7、10-8、10-95個(gè)濃度的0.1mL菌液放于鮮血瓊脂平板上，輕輕推開菌液，不要接觸平板邊緣，平行做2個(gè)平板。置37"C培養(yǎng)1820h，計(jì)算菌落數(shù)目，挑選平板上生長30300個(gè)菌落的計(jì)數(shù)。共數(shù)兩個(gè)平板，求其平均數(shù)，根據(jù)稀釋濃度，算出每mL菌液的活菌數(shù)。(3)預(yù)試驗(yàn)取12只5日齡健康蛋雞，隨機(jī)分成4組，將活菌計(jì)數(shù)后的菌液分別注射于各組雞的腹腔內(nèi)，注射劑量不同。第1組注射0.05mL，第2組注射0.1mL，第3注射0.5mL，第4組注射lmL。根據(jù)臨床癥狀及死亡率，決定攻毒劑量。(4)治療試驗(yàn)攻毒前，所有雞進(jìn)行稱重。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，最終確定攻毒劑量為0.05mL。稱重完畢后，17組每只雞腹腔注射巴氏桿菌菌液0.05mL。注射巴氏桿菌2h后，按2.3項(xiàng)下方法給藥，泰樂菌素、磷酸替米考星、紅霉素治療組，每日給藥2次，連用3d;替米考星長效注射液高、中、低劑量組頸部皮下給藥1次。接種及給藥后仔細(xì)觀察和記錄各組雛雞的臨床癥狀及死亡情況等，連續(xù)觀察5d。5d后，將雞稱重后處死，解剖死亡雞，觀察病理變化。6、結(jié)果與分析(1)活菌計(jì)數(shù)結(jié)果10-5濃度的菌液培養(yǎng)后菌落數(shù)大于300，10-7、10-8、10-9濃度的菌液培養(yǎng)后菌落平均數(shù)不足30，均不作為計(jì)數(shù)范圍。10-6濃度菌液的菌落平均數(shù)為128，推算出原菌液中活菌數(shù)為1.28X109個(gè)/mL。(2)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果2h后，4組雞均出現(xiàn)精神沉郁、食欲不振、縮頸、扎堆、拉稀等臨床癥狀，24h后，第2、3、4組雞全部死亡，第1組雞2只死亡，l只存活，故確定攻毒劑量為0.05mL。(3)治療試驗(yàn)結(jié)果1.臨床癥狀2h后，大部分雞出現(xiàn)精神沉郁、縮頸、閉眼、呆立、食欲下降、飲欲下降、拉黃褐色水樣稀糞、扎堆等癥狀。2024h后感染巴氏桿菌雞開始出現(xiàn)死亡。2.病理剖檢變化急性死亡(2448h死亡的雞只)雞剖檢變化主要表現(xiàn)為腹腔積液、腹膜有出血點(diǎn)、肝稍腫、質(zhì)脆，肝臟邊緣呈淡黃色，表面有灰白色針尖大的壞死點(diǎn)，部分淤血，脾臟稍腫大、質(zhì)地較柔軟、發(fā)黑。腸黏膜、肌胃、腺胃、十—指腸有出血點(diǎn)，嗉囊充盈，腎臟稍腫脹。3.各組雞死亡及增重情況替米考星長效注射液、泰樂菌素、磷酸替米考星、紅霉素對(duì)雞巴氏桿菌感染均有一定的治療作用，恢復(fù)比陽性對(duì)照組快，其中以替米考星長效注射液中、低組和紅霉素組的療效較為突出。各組雞的死亡率、治愈率及增重情況參見表2。表2藥物對(duì)雞巴氏桿菌感染的療效Table2EfficacyofmedicationincontrolofinfectionwithPasteurellainchickens<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>(4)結(jié)果分析:1、替米考星長效注射液中、低劑量組和紅霉素治療組的治愈率顯著高于泰樂菌素和磷酸替米考星治療組(P<0.05)。替米考星長效注射液低劑量組的增重顯著高于陽性對(duì)照組，與陰性對(duì)照組相當(dāng)，顯著高于其它各組(p<0.01或0.05)。2、替米考星長效注射液中、低劑量和紅霉素對(duì)雞巴氏桿菌感染具有較明顯的治療作用，并且替米考星長效注射液中、低劑量和紅霉素的治療效果較好，尤以替米考星長效注射液低劑量組效果更突出，且不影響增重。3、感染雞臨床癥狀明顯、剖檢病變典型，證明本試驗(yàn)巴氏桿菌感染的疾病模型復(fù)制是成功的。權(quán)利要求1.一種替米考星長效注射液，其特征在于每100ml替米考星長效注射液分別含有10g替米考星、10ml無水乙醇和90ml蓖麻油。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的替米考星長效注射液為淡黃色、粘稠度較高的澄清油狀液體。3、一種權(quán)利要求1所述的替米考星長效注射液的制備方法，其特征在于包括以下步驟第一步，取10ml無水乙醇于干凈帶塞試管中，再取IOg替米考星原料藥加入裝有無水乙醇的試管中，蓋上塞子，漩渦振蕩lmin，以保證替米考星原料藥完全溶解，得到一次混合液；第二步，取90ml蓖麻油于干凈燒杯中，將第一步制得的一次混合液加入其中，在燒杯上蓋上平皿，室溫磁力攪拌30min，保證一次混合液和蓖麻油完全混勻，得到二次混合液；第三步，將第二步制備好的二次混合液用自動(dòng)定量分注器分裝安瓿瓶中，封口，于100'C流通蒸氣滅菌30min，即得替米考星長效注射液。全文摘要本發(fā)明涉及獸禽類藥物制備
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體說是一種替米考星長效注射液及其制備方法。目前，國內(nèi)外已有對(duì)替米考星飲水劑、片劑、普通注射劑中，替米考星高、中劑量治療組與泰樂菌素治療組對(duì)雞均具有明顯的增重效果的報(bào)道，但兩者增重效果差異效果不顯著，替米考星與泰樂菌素相比具有用量少，抗感染效果顯著的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明提供一種替米考星藥物長效注射液及其制備方法，它是將替米考星原料藥先后通過無水乙醇和蓖麻油中溶解、混勻、分裝，最后滅菌所得到的一種長效注射液。其制備過程簡單、成本低廉、臨床使用效果顯著，是一種安全、經(jīng)濟(jì)、高效、毒副作用小的禽畜類抗生新藥。文檔編號(hào)A61K47/44GK101249069SQ20081001781公開日2008年8月27日申請(qǐng)日期2008年3月27日優(yōu)先權(quán)日2008年3月27日發(fā)明者衛(wèi)孫申請(qǐng)人:衛(wèi)孫