專利名稱：從杜仲中提取環(huán)烯醚萜活性部位及單體的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種X寸杜仲(￡wcwwm》w/附oWm OIiv.)中環(huán)烯醚萜(iridoids) 類化合物及其活性單體京尼平甙酸(geniposidic acid, GPA)、京尼平甙(geniposide， GP)及桃葉珊瑚甙(aucubin, AU)進行制備的方法。
技術背景杜仲為我國特有的杜仲科杜仲屬多年生落葉喬木，是一種名貴的中藥材，具 有補肝腎、強筋骨、安胎和降壓作用。杜仲中化學成分十分復雜，其中最具有開 發(fā)前景的活性部位之一的就是環(huán)烯醚萜類化合物，包括京尼平甙酸(GPA)、京尼 平甙(GP)及桃葉珊瑚甙(AU)等，它們存在于杜仲皮、杜仲葉和杜仲籽(翅果)中。 已有研究表明，環(huán)烯醚萜類化合物具有防治高血壓、提神、抗疲勞、增強免疫功 能、抗肌肉骨骼老化、防癌抗癌、利肝保膽、預防性功能低下、增強記憶等優(yōu)異 功效。特別是其高純單體GPA及AU等對血壓有雙向調(diào)節(jié)作用，而且療效平穩(wěn)、 無副作用、持續(xù)時間長，所以杜仲己被日本健康與福利部確認為一種具有預防高 血壓作用的特殊食品。B本的許多藥品制劑已將GPA、 GP等的含量作為質(zhì)量控 制指標，它們還被用作生化、醫(yī)藥研究的重要試劑。但我國目前尚無生產(chǎn)GPA、 AU的廠家，所需均靠進口，價格昂貴。杜仲成分復雜，很多化合物結(jié)構(gòu)和性質(zhì)相近，因此，活性成分的提取分離較 為困難。目前國內(nèi)外對杜仲環(huán)烯醚萜類化合物的研究，一般采用傳統(tǒng)的提取工藝， 經(jīng)萃取、沉淀、反復硅膠柱層析或氧化鋁柱層析等方法純化得少量純品。存在產(chǎn) 率低、工藝復雜、操作繁瑣、成本高等不足，未見有適宜較大規(guī)模生產(chǎn)的研究報 道。雖然國內(nèi)杜仲產(chǎn)品品種多，但科技含量低，加工技術粗糙，多是在低水平重 復，對原材料的綜合利用率低(如葉的利用率不到三十分之一)。以往的研究未能提供一種獲得杜仲環(huán)烯醚萜活性部位的可行的方法，對于從 杜仲各種不同原料(特別是葉、籽)中同時提取分離得到多種環(huán)烯醚萜單體的方 法，也尚未見報道。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種從杜仲中提取環(huán)烯醚路活性部位及同時制備出 GPA、 GP、 AU三種單體的方法。它以杜仲為原料，采用常規(guī)浸提法或超聲波提 取法或微波提取法對原材料進行提収，以溶劑萃取或特種吸附劑吸附分離等方法 對提取液進行初步純化，得到環(huán)烯醚萜活性部位(含量不低于50%)，運用制備 高效液相色譜技術對GPA、 GP、 AU進行分離制備，得到以上三種單體產(chǎn)品， 含量均不低于90%。為達到上述目的，本發(fā)明的實施方案為 一種從杜仲中提取環(huán)烯醚砲活性部 位及單體的方法，其特征在于，包括以下歩驟(1) 將杜仲原料粉碎，加入醇-水溶液，采用加熱浸提或超聲波提取或微波 提取，得提取液，過濾、濃縮，濃縮液用鹽酸、硫酸或硝酸調(diào)至pH1.5-4.5，所 用醇為甲醇、乙醇或丙醇；(2) 將濃縮液用有機溶劑萃取，或者用吸附劑吸附，用70%-90%的醇-水溶 液洗脫，收集萃取液或洗脫液，濃縮，低溫真空干燥，得到環(huán)烯醚萜化合物，所 述有機溶劑為乙酸乙酯、氯仿、石油醚、乙醚、正丁醇或異戊醇，所述吸附劑為 大孔吸附樹脂、聚酰胺、活性碳、硅膠或葡聚糖凝膠，所述醇為甲醇、乙醇或丙 醇；(3) 運用高效液相制備色譜技術進行分離，所使用的柱填料為C,s或Q, 粒徑為5-50Pm，采用醇-水體系為流動相進行梯度洗脫，分別收集GPA、 GP、 AU餾分，所述梯度洗脫為臺階梯度洗脫方式，即先采用15-25%的醇-水體系為 流動相洗脫，在35-50 rnin時段收集組分AU，繼續(xù)洗脫至60min，開始收集GPA 組分至^t脫時間為80min,然后換用35-50%的醇-水體系為流動相，洗脫至110min 開始收集GP組分至125min，所用醇為甲醇、乙醇或丙醇。(4) 將以上餾分分別進行減壓濃縮、冷凍干燥，得到粉未狀GPA、 GP、AU。本發(fā)明采用原料為杜仲鮮干皮，陳干皮、陳枝皮、炮制皮、杜仲葉和杜仲籽粕。歩驟(1)中，所述常規(guī)浸提法是在室溫至90。C條件下，以6-15倍的液固比 加入40-80%的醇進行，提取時間為0-3小時，時間延長不限，提取次數(shù)為卜3 次，次數(shù)增加不限。此方法更適應杜仲皮為原料。步驟n)中，所述超聲波提取法是采用溫度為30-6(TC條件下，以10-25倍 的液固比加入20-70%的醇，在頻率為10-80KHz范圍內(nèi)，提取10-40分鐘，時I'曰J延長不限。重復處理l-3次，次數(shù)增加不限。此法相對于常規(guī)浸提法，可明顯縮 短提取時間。此方法更適應杜仲葉為原料。步驟(1)中，所述微波提取法是采用10-40%的醇為溶劑，以30-60倍的液 固比加入，微波處理10-120 s，時間延長不限。提取次數(shù)為l-4次，次數(shù)增加不 限。此法更加省時高效，穩(wěn)定性強，能耗低。此方法更適應杜仲籽粕為原料。步驟(2)中，所述低溫真空干燥的方法是，首先將濃縮液冷卻到-lv) -20 °C，再置丁冷凍干燥器中冷卻到-45 -65'C，真空度《20Pa，時間24 48小時。收集完畢后，用00%醇溶液洗去色素等雜質(zhì)。步驟(3)中，在洗脫收集AU及GPA時，流動相中添加有0.1%-0.5%的酸 性物質(zhì)，所述酸性物質(zhì)為甲酸、乙酸、鹽酸或磷酸。步驟(4)中，所述低溫真空干燥的方法是，首先將濃縮液冷卻到-10 -20 °C，再置于冷凍干燥器中冷卻到-45 -65'C，真空度《10Pa，時間24 48小時。本發(fā)明提供了一種從杜仲中提取環(huán)烯醚萜活性部位及GPA、 GP、 AU三種 單體的制備方法，以微波、超聲波提取技術代替常規(guī)浸提法，快速、高效；采用 溶劑萃取法、大孔吸附樹脂分離純化法以及特種吸附劑純化法富集工藝，能明顯 提高產(chǎn)品質(zhì)量、節(jié)約有機試劑、降低能耗；活性單體的分離采用新型制備高效液 相色譜分離體系，實現(xiàn)了多種單體的快速同歩分離，并同時提高了產(chǎn)品純度及生 產(chǎn)效率。


附圖為本發(fā)明流程圖。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的說明。 實施例1(1) 杜仲皮烘干、粉碎、過篩，以杜仲鮮皮為佳。稱取處理后的杜仲皮20 千克，采用常規(guī)浸提，以15倍的液固比加入70°/。乙醇-水溶液為提取劑，在60 'C條件下提取2小時，重復3次。將提取液過濾、濃縮，用鹽酸調(diào)至pHl.5-4.5;(2) 采用正丁醇萃取，收集萃取液，濃縮液冷卻到-10 -20'C，再置于冷 凍干燥器中冷卻到-45 -65'C，真空度《20Pa，時間24 48小時低溫真空干燥， 得到環(huán)烯醚萜活性部位480.5克，總環(huán)烯醚萜化合物含量為53.20%;(3) 將環(huán)烯醚萜活性部位溶解2.5000克，用制備高效液相色譜分離，所使 用的柱填料為ds或C8，粒徑為5-50um，采用流動相為乙醇-水體系進行梯度洗脫，梯度洗脫的方法是先采用15-25%的醇-水體系為流動相洗脫，在35-50min 時段收集組分AU，繼續(xù)洗脫至60min，丌始收集GPA組分至洗脫時間為80min， 然后換用35-50%的醇-水體系為流動相，洗脫至110min丌始收集GP組分至 125min，收集完畢后，用100%醇溶液洗去色素等雜質(zhì)。(4)將分別收集到的GPA、 GP、 AU餾分，濃縮、冷凍干燥，得到粉水狀 GPA408毫克、GP181毫克、AU375毫克。將得到的GPA、 GP、 AU三種單體采用反相高效液相色譜法(RP-HPLC) 測定C,8色譜柱(250mmX4.6mmi.d，粒徑5um)，甲醇-水-冰乙酸(14.5:85:0.5) 為流動相，流速lmL/min，柱溫25'C，檢測波長220 nm，靈敏度:0.08AUFS， 進樣體積6iiL。結(jié)果AU (93.6%)、 GPA (96.5%)、 GP (95.2%)三種單'本的含 量均不低于90%。實施例2(1) 杜仲葉烘干、粉碎、過篩，以11月采摘杜仲葉為佳。稱取處理后的杜 仲葉500克采用超聲波提取，以18倍的液固比加入50%乙醇，在溫度為60°C， 頻率為80KHz時超聲提取30min，重復處理3次。將提取液過濾、濃縮；(2) 采用弱極性吸附劑吸附洗脫，將洗脫液濃縮,采用實施例1的方法低溫 真空干燥，得到環(huán)烯醚萜活性部位(含量51.21%);(3) 將環(huán)烯醚萜活性部位溶解2.5000克，運用高效液相制備色譜技術進行 分離(方法同實施例l)，分別收集GPA、 GP、 AU餾分；(4) 將以上餾分分別進行濃縮、冷凍干燥，得到粉水狀GPA461毫克、GP 51毫克、AU410毫克。高效液相色譜分析表明，三種單體的含量均不低于90%。實施例3(1) 杜仲籽烘干、粉碎、過篩。稱取處理后的杜仲籽，先用超臨界二氧f七 碳萃取亞麻酸后，得到籽粕。稱取杜仲籽粕200克，采用微波提取，以40倍的 液固比加入25%乙醇微波處理35秒，重復處理4次。將提取液過濾、濃縮，用 鹽酸調(diào)pH1.5-4.5;(2) 采用乙酸乙酯及正丁醇萃取，收集萃取液，采用實施例1的方法低溫 真空干燥，得到環(huán)烯醚萜活性部位(含量51.11%);(3) 將環(huán)烯醚萜活性部位溶解2.5000克，采用實施例1的方法用高效液相 制備色譜技術進行分離，分別收集GPA、 GP、 AU餾分；(4) 將以上餾分分別進行濃縮、冷凍干燥，得到粉末狀GPA55毫克、GP 18毫克、AU 915毫克，進行高效液相色譜分析，三種單體的含量均不低于90% (主要產(chǎn)品為AU)。
權(quán)利要求
1、一種從杜仲中提取環(huán)烯醚萜活性部位及單體的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)將杜仲原料粉碎，加入醇-水溶液，采用加熱浸提或超聲波提取或微波提取，得提取液，過濾、濃縮，濃縮液用鹽酸、硫酸或硝酸調(diào)至pH1.5-4.5，所用醇為甲醇、乙醇或丙醇；(2)將濃縮液用有機溶劑萃取，或者用吸附劑吸附，用70％-90％的醇-水溶液洗脫，收集萃取液或洗脫液，濃縮，低溫真空干燥，得到環(huán)烯醚萜化合物，所述有機溶劑為乙酸乙酯、氯仿、石油醚、乙醚、正丁醇或異戊醇，所述吸附劑為大孔吸附樹脂、聚酰胺、活性碳、硅膠或葡聚糖凝膠，所述醇為甲醇、乙醇或丙醇；(3)運用高效液相制備色譜技術進行分離，所使用的柱填料為C18或C8，粒徑為5-50μm，采用醇-水體系為流動相進行梯度洗脫，分別收集GPA、GP、AU餾分，所述梯度洗脫為臺階梯度洗脫方式，即先采用15-25％的醇-水體系為流動相洗脫，在35-50min時段收集組分AU，繼續(xù)洗脫至60min，開始收集GPA組分至80min，然后換用35-50％的醇-水體系為流動相，洗脫至110min開始收集GP組分至125min，所用醇為甲醇、乙醇或丙醇。(4)將以上餾分分別進行減壓濃縮、冷凍干燥，得到粉末狀GPA、GP、AU產(chǎn)品。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從杜仲中提取環(huán)烯醚萜活性部位及單體的方法， 其特征在于，采用原料為杜仲鮮干皮，陳干皮、陳枝皮、炮制皮、杜仲葉和杜仲 籽粕。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從杜仲中提取環(huán)烯醚萜活性部位及單體的方法， 其特征在于，所述常規(guī)浸提法是在室溫至9(TC條件下，以6-15倍的液固比加入 40-80%的醇進行，提取時間為0-3小時，時間延長不限，提取次數(shù)為1-3次，次 數(shù)增加不限。此方法更適應杜仲皮為原料。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從杜仲中提取環(huán)烯醚萜活性部位及單體的方法， 其特征在于，所述超聲波提取法是采用溫度為30-6(TC條件下，以10-25倍的液 固比加入20-70%的醇，在頻率為10-80KHz范圍內(nèi)，提取10-40分鐘，時間延長不限。重復處理1-3次，次數(shù)增加不限。此法相對于常規(guī)浸提法，可明顯縮短提 取時間。此方法更適應杜仲葉為原料。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從杜仲中提取環(huán)烯醚萜活性部位及單體的方法， 其特征在于，所述微波提取法是采用10-40%的醇為溶劑，以30-60倍的液固比 加入，微波處理10-120 s，時間延長不限。提取次數(shù)為l-4次，次數(shù)增加不限。 此法更加省時高效，穩(wěn)定性強，能耗低。此方法更適應杜仲籽粕為原料。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從杜仲中提取環(huán)烯醚萜活性部位及單體的方法， 其特征在于，步驟(2)及(4)中，所述低溫真空干燥的方法是，首先將濃縮液 冷卻到-10 -20°C，再置于冷凍干燥器中冷卻到-45 -65。C，真空度《20Pa，時 間24 48小時。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從杜仲中提取環(huán)烯醚萜活性部位及單體的方法， 其特征在于，歩驟(3)中，在洗脫收集AU及GPA時，流動相中添加有0.1%-0.5% 的酸性物質(zhì)，所述酸性物質(zhì)為甲酸、乙酸、鹽酸或磷酸。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從杜仲中提取得到環(huán)烯醚萜活性部位及單體京尼平甙酸(geniposidic acid，GPA)、京尼平甙(geniposide，GP)及桃葉珊瑚甙(aucubin，AU)的方法。以杜仲(皮、葉或籽)為原料，采用常規(guī)浸提法、超聲波提取法或微波提取法對原材料進行提取，以溶劑萃取、特種吸附劑吸附分離等方法對提取液進行初步純化，得到環(huán)烯醚萜活性部位(環(huán)烯醚萜總量不低于50％)，再采用制備高效液相色譜技術，以醇-水溶液為流動相，對GPA、GP和AU進行分離，低溫濃縮并冷凍干燥，得到以上三種單體，其含量均不低于90％。本發(fā)明公開的制備方法，運用了提取、分離新工藝，可同時制備多種杜仲單體產(chǎn)品，為杜仲綜合開發(fā)利用提供了科學依據(jù)，在整個工藝中不使用對人體有害溶劑，可實現(xiàn)綠色制備。
文檔編號A61K36/46GK101260131SQ20081003112
公開日2008年9月10日 申請日期2008年4月19日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月19日
發(fā)明者周春山, 敏 張, 勝 彭, 彭密軍 申請人:吉首大學