專利名稱：：替尼泊甙脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥劑學(xué)領(lǐng)域，具體涉及含有抗腫瘤活性成分替尼泊甙的脂質(zhì)體，以及該脂質(zhì)體的制備方法。
背景技術(shù)：
：腫瘤是一種常見病與多發(fā)病，對人民的生命健康威脅很大，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中是越來越受到重視的研究課題。全世界每年死于癌癥者700萬以上，現(xiàn)在癌癥患者約3700萬。在我國，每年約有130萬人死于肺瘤，估計(jì)發(fā)病率在180-200萬之間，總的發(fā)病率在不斷上升。在我國多個大城市中，惡性腫瘤已超過心腦血管疾病，排在所有疾病死亡原因的第一位，而在35-59歲年齡段，腫瘤一直是第一殺手。由于過去許多威脅人民生命健康的烈性傳染病得到了控制，人均壽命逐漸延長，診斷技術(shù)不斷提高，但是人類環(huán)境中的致癌因素日漸增多，因此在很多國家，癌癥居死亡原因首位或第二位。目前胂瘤的治療有手術(shù)、放療、化療，很大程度上以化療為主。手術(shù)與放療的順應(yīng)性差，而化療又會給患者帶來極大的毒副作用，在抑制和毒害增生活躍的腫瘤細(xì)胞的同時，對骨髓細(xì)胞、腸上皮細(xì)胞、毛發(fā)細(xì)胞、生殖細(xì)胞也同樣產(chǎn)生抑制作用，同時容易產(chǎn)生耐藥性而失去治療作用。隨著社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人民生活水平的提高，人們對生命、生活質(zhì)量的要求也在不斷提高，高效低毒抗腫瘤藥物的出現(xiàn)也是眾望所歸。替尼泊甙(teniposide,VM-26)是一種鬼臼毒素的半合成衍生物，屬于植物來源的抗腫瘤藥物。它是周期特異性細(xì)胞毒藥物，抑制DNA6拓樸異構(gòu)酶II,導(dǎo)致雙鏈或單鏈破壞使細(xì)胞有絲分裂停于S晚期或G2前期，從而阻礙腫瘤細(xì)胞分裂，抑制腫瘤生長。替尼泊戒療效顯著，其生物活性是同類型藥物依托泊戒的5-10倍,且臨床資料表明替尼泊戒副作用少，毒性較小，對肝、腎功能無影響。由于在臨床具有廣泛的抗腫瘤活性，替尼泊甙現(xiàn)廣泛地應(yīng)用于神經(jīng)系統(tǒng)肺瘤、惡性淋巴瘤、白血病、多發(fā)性骨髓瘤、肺癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、卵巢癌、宮頸癌、進(jìn)展期胃癌等疾病的治療，更因其中性親脂特性，能透過血腦屏障，目前已成為治療腦瘤的首選化療藥物。然而，替尼泊甙在水中溶解度極低，因此在制備成制劑時存在一定困難。目前上市的替尼泊戒注射液，是50mg替尼泊戒溶解于5ml有機(jī)溶劑二曱基曱酰胺、苯曱醇、聚氧乙烯蓖麻油、馬來酸和乙醇，該注射液中含有大量聚氧乙烯蓖麻油，使用后可引起嚴(yán)重的過敏反應(yīng)。因此替尼泊甙注射液說明書中明確標(biāo)注使用本品期間或用藥后可發(fā)生過敏樣的反應(yīng)，主要表現(xiàn)為寒戰(zhàn)、發(fā)熱、心動過速、支氣管痙攣、呼吸困難以及低血壓，它們可能是由于溶媒中的聚氧乙烯蓖麻油組分或替尼泊戒本身引起的。為此，醫(yī)生在醫(yī)囑前必須了解病人的過敏史，如是否對替尼泊甙或聚氧乙烯蓖麻油過敏；在臨床使用時，醫(yī)務(wù)人員需密切觀察病人的情況，必要時使用抗組胺藥物以減輕過敏反應(yīng)，結(jié)果是臨床上使用十分不便，而且給病人帶來極大痛苦。因此，迫切需要改變替尼泊甙的劑型，以增加替尼泊戒的水溶性，避免溶媒聚氧乙烯蓖麻油引起的過敏反應(yīng)和替尼泊戒自身的毒副作用。為減少因聚氧乙烯蓖麻油及替尼泊甙自身帶來的不良反應(yīng)，提高替尼泊戒的抗腫瘤療效，國內(nèi)外藥學(xué)工作者致力于替尼泊戒新的給藥系統(tǒng)的研究。中國專利文獻(xiàn)(CN200610107688.8)將替尼泊武制成穩(wěn)定的注射用微乳制劑，該制劑保證替尼泊武達(dá)到藥效濃度的同時，基本消除了聚氧乙烯蓖麻油帶來大的過敏反應(yīng)；中國專利文獻(xiàn)(CN200710099846.5)公開了采用吐溫、二曱基乙酰胺、聚乙二醇、無機(jī)鹽制備的替尼泊甙的注射劑，顯著提高了替尼泊戒在水中的溶解度，避免或降低了臨床使用中的過敏反應(yīng)。盡管對替尼泊戒的制劑的研究取得了明顯的進(jìn)展。但目前這些新劑型多數(shù)處于實(shí)驗(yàn)室的研究階段，大都不符合用藥的安全性和工業(yè)化生產(chǎn)的要求，至今未見上臨床、上市的報(bào)道。因此，急需尋求一種有效的制劑，可以在不增加藥物劑量的情況下，延長藥物的半衰期，提高藥物的抗腫瘤效果，減少藥物的毒副作用，增強(qiáng)藥物的臨床應(yīng)用性。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個目的在于提供一種性質(zhì)穩(wěn)定且可采用現(xiàn)有技術(shù)工業(yè)化生產(chǎn)的替尼泊甙脂質(zhì)體。本發(fā)明增加了替尼泊武的水溶性，阻止藥物析出晶體，既能消除現(xiàn)有制劑因聚氧乙烯蓖麻油引起的過敏反應(yīng)，又能減少替尼泊甙自身的毒性反應(yīng)，還能提高替尼泊甙的生物利用度及其治療指數(shù)。本發(fā)明的另一目的是提供上述替尼泊戒脂質(zhì)體的制備方法，且制備方法靈活多樣，均采用常規(guī)的工藝設(shè)備，可工業(yè)化規(guī)模、高效率生產(chǎn)，產(chǎn)品質(zhì)量保持穩(wěn)定，可直接或二次加工制備注射或口服制劑。本發(fā)明的又一目的是提供一種替尼泊戒脂質(zhì)體固體制劑，該固體制劑是上述替尼泊甙脂質(zhì)體加入支架劑并采用冷凍干燥或噴霧干燥的工藝制成的。本發(fā)明的再一目的是提供一種替尼泊武注射劑或口服制劑，其是由上述的替尼泊甙脂質(zhì)體制備而成的。本發(fā)明所述的替尼泊甙脂質(zhì)體，由包含以下重量份的原料制備而成8替尼泊戒l-10份磷脂類物質(zhì)l-100份固醇0-5(M分附加劑0-50份。優(yōu)選地，上述的替尼泊甙脂質(zhì)體，由包含以下重量份的原料制備而成替尼泊戒1份磷脂類物質(zhì)2-30f分固醇0-10份附加劑O-l(M分。進(jìn)一步地，上述替尼泊戒脂質(zhì)體的原料還可包含修飾材料0.1-50重量份。當(dāng)脂質(zhì)體原料中含有上述的修飾材料時，即為替尼泊戒長循環(huán)脂質(zhì)體。上述的磷脂類物質(zhì)選自磷脂酰膽堿、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酸、二油酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰乙醇胺、卵磷脂、大豆磷脂、氫化卵磷脂、氫化大豆磷脂、心磷脂和腦磷脂及其混合物，其中優(yōu)選卵磷脂、大豆磷脂、心磷脂和腦磷脂及其混合物。所述的固醇選自膽固醇、二氨膽固醇、大豆甾酰糖苷、大豆甾醇和麥角固醇，其中優(yōu)選膽固醇。所述的附加劑包括抗氧劑、表面活性劑和穩(wěn)定劑。其中所述的抗氧劑選自維生素E、維生素E酯、亞硫酸鈉、亞疏酸氬鈉、焦亞辟u酸鈉、碌t^代硫酸鈉、沒食子酸丙酯、叔丁基對羥基茴香醚、二叔丁基對甲酚、半胱氨酸和蛋氨酸中的一種或多種。其中所述的表面活性劑選自脫氧膽酸鹽、膽酸鹽、脫氧膽酸、?；悄懰猁}、膽酸、吐溫-80、泊洛沙姆、汴澤和司盤中的一種或多種；其中所述的穩(wěn)定劑選自硬脂胺、磷脂酸、十四酸、油酸和甘油中的一種或多種。所述的修飾材料包括聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、神經(jīng)節(jié)鞘酯、聚丙烯酰胺、殼聚糖、聚乙二醇-磷脂衍生物或它們的混合物；其中聚乙二醇-磷脂衍生物可選用聚乙二醇-二硬酯酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰膽堿、聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-氫化大豆磷脂酰乙醇胺和聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰膽堿；其中所述的聚乙二醇的平均分子量為200-20000，優(yōu)選平均分子量為2000-5000。所述的替尼泊戒脂質(zhì)體的粒徑小于1000nm,優(yōu)選粒徑小于500nm。本發(fā)明所述的替尼泊戒脂質(zhì)體的制備方法，可以采用下述方法中的任意一種方法一薄膜分散法將替尼泊戒、磷脂類物質(zhì)、固醇、脂溶性附加劑按上述比例溶解于適量有機(jī)溶劑中，20-60。C下減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，形成一層脂質(zhì)薄膜，加入適量含水溶性附加劑的水相介質(zhì)溶解脂膜，水合、超聲或高壓均質(zhì)處理，即得替尼泊甙脂質(zhì)體。方法二注入法將替尼泊甙、磷脂類物質(zhì)、固醇、脂溶性附加劑溶于適量有機(jī)溶劑中制成脂質(zhì)溶液，吸取該溶液緩緩注入含水溶性附加劑的水相介質(zhì)中，注入完畢去除有機(jī)溶媒，然后可進(jìn)行超聲或高壓均質(zhì)處理得到替尼泊戒脂質(zhì)體。這里水相介質(zhì)的溫度為20-60。C。方法三逆向蒸發(fā)法將替尼泊戒、磷脂類物質(zhì)、固醇、脂溶性附加劑按比例溶于有機(jī)溶劑，滴入含水溶性附加劑的水相介質(zhì)，通過超聲或高速剪切使形成穩(wěn)定的W/0型乳刑，減壓蒸去有機(jī)溶劑，滴加水相介質(zhì)，旋轉(zhuǎn)幫助器壁上的凝膠脫落，然后在減壓下繼續(xù)蒸發(fā)，制得水性混懸液，然后可進(jìn)行超聲或高壓均質(zhì)處理得到替尼泊甙脂質(zhì)體。方法四熔融法按比例稱取替尼泊武、磷脂類物質(zhì)、固醇、脂溶性附加劑于60-80。C加熱熔融，加入含水溶性附加劑的水相介質(zhì)混合，然后可進(jìn)行超聲或高壓均質(zhì)處理得到替尼泊戒脂質(zhì)體。上述制備方法中，所述的有機(jī)溶劑選自乙醇、曱醇、乙醚、丙酮、乙酸乙酯、氯仿和二氯曱烷及其混合物；所述的水相介質(zhì)可以為純水、磷酸鹽緩沖液、枸櫞酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液、三羥曱基氨基曱烷緩沖液、生理鹽水溶液、甘露醇溶液或葡萄糖溶液，其中上述緩沖液的pH為4-8。為進(jìn)一步延長替尼泊戒脂質(zhì)體的血液循環(huán)時間，提高替尼泊戒脂質(zhì)體的靶向性和生物利用度，降低毒副作用，可進(jìn)一步在上述制備脂質(zhì)體的過程中(最好在磷脂類物質(zhì)溶解熔融或水相介質(zhì)配制過程)加入修飾材料，采用同樣的工藝條件，制備成替尼泊戒長循環(huán)脂質(zhì)體。為延長替尼泊武脂質(zhì)體的存放時間，便于運(yùn)輸，可將本發(fā)明的替尼泊戒脂質(zhì)體或其長循環(huán)脂質(zhì)體通過噴霧干燥或冷凍干燥工藝制成固體制劑；為防止干燥工藝中脂質(zhì)體的聚集需加入支架劑，可以選擇的支架劑為甘氨酸、絲氨酸、蔗糖、乳糖、甘露醇、葡萄糖、海藻糖、麥芽糖、阿拉伯膠、木糖醇、山梨醇、果糖、右旋糖苷、氯化鈉和白蛋白及其混合物，其用量按磷脂類物質(zhì)重量比計(jì)算為l份磷脂加0.1-4份。本發(fā)明制得的替尼泊戒脂質(zhì)體加一定量的注射用水、生理鹽水或葡萄糖注射液振蕩水合后，即得本發(fā)明替尼泊戒脂質(zhì)體注射劑。當(dāng)然，也可以采用常規(guī)方法制備成口服制劑。本發(fā)明的替尼泊甙脂質(zhì)體能夠以注射或口服方式給藥，其中注射方式可以為靜脈輸注、靜脈注射，優(yōu)選靜脈輸注方式給予患者。脂質(zhì)體屬于超微粒藥物載體，具有淋巴系統(tǒng)定向性，屬于把向給藥系統(tǒng)的一種新劑型。它具有類細(xì)胞結(jié)構(gòu)，或是通過內(nèi)吞作用進(jìn)入溶酶體，然后被酶消化釋放藥物，或是通過細(xì)胞融合作用，即脂質(zhì)膜材與細(xì)胞膜構(gòu)成物相似而融合進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，繼而被消化釋放藥物，使藥物在靶區(qū)組織中維持較高濃度，并改變被包封藥物的體內(nèi)分布，使藥物主要在肝、脾、肺和骨髓等組織器官中蓄積，從而提高藥物的治療指數(shù)、減小藥物的給藥劑量和降低藥物的毒性；經(jīng)脂質(zhì)體攜帶后，可保護(hù)藥物活性基團(tuán)在內(nèi)環(huán)境中不被降解，還可延長藥物血中循環(huán)時間。本發(fā)明將替尼泊甙包封于類脂雙分子層中，制成一種超微球狀脂質(zhì)體，增加了藥物的水溶性和穩(wěn)定性，使包裹的替尼泊武具有靶向性，能選擇性到達(dá)病變部位、組織和細(xì)胞，且在更長時間內(nèi)維持有效血藥濃度，提供持續(xù)的治療效果，從而增加替尼泊戒的療效，降低不良反應(yīng)。對替尼泊甙脂質(zhì)體修飾得到的替尼泊戒長循環(huán)脂質(zhì)體，緩慢釋放藥物，在體內(nèi)可以逃匿MPS的捕獲，延長脂質(zhì)體在血液中的循環(huán)時間，達(dá)到緩釋、靶向、長效的作用，從而提高替尼泊戒抗胂瘤活性。采用本發(fā)明方法所制備的替尼泊甙脂質(zhì)體和替尼泊甙長循環(huán)脂質(zhì)體不含聚氧乙烯蓖麻油，能消除過敏反應(yīng)；其平均粒徑在1000nm以下，包封率大于80%;所得制劑穩(wěn)定性好；且該制劑制備工藝成熟，方法簡便易行，材料來源廣，成本低，便于工業(yè)化生產(chǎn)。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:取替尼泊戒50mg、卵磷脂500mg、膽固醇40mg于50ml茄形瓶中，加入20ml乙醇:丙酮(2:1)超聲使其充分溶解。茄形瓶置于40。C恒溫水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，在瓶內(nèi)壁上形成一層脂質(zhì)薄膜，緩慢加入10ml磷酸鹽緩沖液(pH7.0)，水合，渦旋振蕩，使茄形瓶上的脂質(zhì)薄膜完全溶解下來?；旌弦航?jīng)室溫超聲分散(超聲功率600W)30min,即制得替尼泊戒脂質(zhì)體。其平均粒徑為257nm,全部粒子均在500nm以下，粒徑分布狹窄，表明脂質(zhì)體大小較為均一；該脂質(zhì)體可在室溫下穩(wěn)定數(shù)天并在4。C下穩(wěn)定至少3個月，貯存期間觀察不到沉淀。實(shí)施例2精密稱取50mg替尼泊戒、200mg大豆磷脂、50mg腦磷脂、20mg大豆甾酰糖苷、10mg維生素E，用10ml乙醚將之溶解。然后將此溶液用注射器緩慢注入30ml含0,5。/。膽酸鈉的生理鹽水(40°C)中，用電子恒速攪拌器以2000r/min的轉(zhuǎn)速攪拌至乙醚除盡，混合液高壓均質(zhì)(均質(zhì)壓力10000psi)5次，即得替尼泊戒脂質(zhì)體，置4。C冰箱中保存?zhèn)溆?。?shí)施例3準(zhǔn)確稱取100mg替尼泊甙、2000mg氫化卵磷脂、800mg大豆甾醇、50mg心磷脂、50mg硬脂胺于三角燒瓶中，加熱熔融，置于75。C水浴中備用。將100mg泊洛沙姆188、400mg甘油、100mg維生素C溶于20ml5%葡萄糖溶液中，加熱至75。C，加入脂質(zhì)熔融液中，高速剪切混合，經(jīng)高壓均質(zhì)(均質(zhì)壓力15000psi)3次，即得替尼泊甙脂質(zhì)體。實(shí)施例4準(zhǔn)確稱取100mg替尼泊戒、1500mg氫化豆磷脂、200mg二硬脂酰磷脂酰膽石咸、300mg麥角固醇、50mg油酸溶于30ml氯仿:甲醇(1:1)混合溶劑中使完全溶解成澄明溶液，得有機(jī)相；另稱取100mg吐溫-80、100mg焦亞硫酸鈉溶于10ml醋酸鹽緩沖液(pH6.0)中，得水相；再將有機(jī)相與水相混合，經(jīng)高速剪切(Fluko,12000rpm)5min得W/0初乳，然后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，即得替尼泊武脂質(zhì)體。實(shí)施例5準(zhǔn)確稱取100mg替尼泊戒、二肉豆蔻酰磷脂酰膽石威1800mg、二棕櫚酰磷脂酸100mg、二氨膽固醇400mg、十四酸100mg溶于30ml二氯曱烷得有機(jī)相。另稱取500mg脫氧膽酸鈉、100mg亞硫酸鈉溶于10ml枸櫞酸鹽緩沖液(pH6.2)中得水相；再將有機(jī)相與水相混合，經(jīng)水浴式超聲處理8min，直至形成穩(wěn)定的W/0型乳劑(水浴溫度控制在20。C),然后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，達(dá)到膠態(tài)后滴力口5ml枸櫞酸鹽緩沖液，水化，繼續(xù)短時減壓蒸發(fā)，經(jīng)超聲處理20min后，即得替尼泊戒脂質(zhì)體。實(shí)施例6取替尼泊戒100mg、卵磷脂1000mg、二硬脂酰磷脂酰甘油100mg、膽固醇100mg、叔丁基對羥基茴香醚50mg于梨形瓶中，用10ml乙酸乙脂溶解后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，30。C減壓除去有機(jī)溶劑。真空干燥2-3天得恒重薄膜。加入10ml含10。/。蔗糖、10Q/。甘露醇的tris-HCl緩沖液(20mmol/L，pH7.0,含0.15mol/LNaCl),旋轉(zhuǎn)搖動梨形瓶，得到脂質(zhì)體懸液。經(jīng)高壓均質(zhì)處理(均質(zhì)壓力12000psi)5次，藥液于-40。C預(yù)凍24小時，于冷凍干燥機(jī)中凍干，凍干程序?yàn)?40°C,8小時;-30°C,6小時;-20。C,6小時;-10。C，5小時;0°C,5小時;15°C，5小時。所得替尼泊戒脂質(zhì)體凍干制劑加水復(fù)溶后平均粒徑為136士31nm,全部粒子均在300nm以下。實(shí)施例714精密稱取100mg替尼泊甙、1500mg大豆磷脂、150mg聚乙二醇(平均分子量4000)-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG柳(rDSPE)、50mg沒食子酸丙酯，用10ml乙醇將之溶解。然后將此溶液用注射器緩慢注入30ml含0.5%?；悄懰徕c溶液(60°C)中，用電子恒速攪拌器以1000r/min的轉(zhuǎn)速攪拌至乙醇除盡，混合液經(jīng)高壓均質(zhì)(均質(zhì)壓力10000psi)5次，即得替尼泊甙長循環(huán)脂質(zhì)體，置4。C冰箱中保存?zhèn)溆?。?shí)施例8稱取替尼泊戒100mg、卵磷脂1000mg、聚乙二醇(平均分子量200)-氬化大豆磷脂酰乙醇胺(PEG20(rHSPE)100mg、膽固醇100mg、叔丁基對羥基茴香醚50mg于梨形瓶中，用10ml乙酸乙脂溶解后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，30。C減壓除去有機(jī)溶劑。真空干燥2-3天得恒重薄膜。加入10ml含10。/0山梨醇、5%右旋糖苦、5%白蛋白的溶液，旋轉(zhuǎn)搖動梨形瓶，得到脂質(zhì)體懸液。經(jīng)超聲處理(超聲功率600W)20min，藥液于噴霧干燥才幾中干燥，噴霧干燥條件為進(jìn)風(fēng)溫度120。C,進(jìn)料速度50mL/min,旋風(fēng)分離器壓差50mm水，霧化盤轉(zhuǎn)速2500r/min，收集得到替尼泊戒長循環(huán)脂質(zhì)體固體制劑。實(shí)施例9準(zhǔn)確稱取100mg替尼泊甙、氫化卵磷脂1600mg、聚乙二醇(平均分子量IOOO)-二棕櫚酰磷脂酰膽堿(PEG咖(rDPPC)160mg溶于30ml二氯曱烷得有機(jī)相。另稱取100mg硫代硫酸鈉溶于10ml水中得水相；再將有機(jī)相與水相混合，經(jīng)水浴式超聲處理10min，直至形成穩(wěn)定的W/0型乳劑(水浴溫度控制在20。C),然后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，加入1000mg乳糖、500mg葡萄糖、500mg海藻糖超聲溶解，即得替尼泊戒長循環(huán)脂質(zhì)體混懸液。該混懸液于微型噴霧干燥器中減壓干燥，進(jìn)口溫度130~140°C,出口溫度5060。C，空氣壓力1.2Atm，加料速度60mL/min,即得替尼泊甙長循環(huán)脂質(zhì)體噴霧干燥制劑。實(shí)施例IO準(zhǔn)確稱取100mg替尼泊甙、2000mg卵磷脂、200mg聚乙二醇(平均分子量4000)-二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(PEG柳o-DPPE)于三角燒弁瓦中，加熱熔融，置于80。C水浴中備用。將1000mg甘氨酸、500mg麥芽糖、1000mg甘露醇溶于20ml水中，加熱至80。C，加入脂質(zhì)熔融液中，高速剪切混合，經(jīng)高壓均質(zhì)(均質(zhì)壓力15000psi)3次，即得替尼泊戒長循環(huán)脂質(zhì)體。該混懸液于-8(TC預(yù)凍10小時，于冷凍干燥器中凍干(凍干程序?yàn)?40。C，IO小時；-20°C,8小時；0°C,8小時；20°C，5小時)，即得替尼泊戒長循環(huán)脂質(zhì)體凍干制劑。實(shí)施例ll取替尼泊甙50mg、卵磷脂1200mg、聚乙二醇(平均分子量3350)-二硬脂酰磷脂酰膽堿(PEG335(rDSPC)50mg溶于1Oml乙醇，混合溶液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器內(nèi)40。C減壓除去溶媒，形成薄膜。然后加入含1°/。聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的水溶液10ml，超聲處理30min，制得替尼泊甙長循環(huán)脂質(zhì)體懸液。加入8%乳糖和8%甘露醇作支架劑，經(jīng)冷凍干燥得替尼泊戒長循環(huán)脂質(zhì)體的凍干制劑。替尼泊戒長循環(huán)脂質(zhì)體的凍干制劑臨用前只需充分水化短時振蕩，就能重新形成脂質(zhì)體。實(shí)施例12將聚乙二醇(平均分子量5000)-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG500(rDSPE)50mg、氫化大豆磷脂200mg、膽固醇100mg、a-生育酚20mg和替尼泊戒50mg溶于30ml氯仿，置梨形瓶內(nèi)，在氮?dú)饬飨滦D(zhuǎn)蒸發(fā)，減壓除去溶媒。真空干燥23天，得恒重薄膜。加入含0.5%PEG4000水溶液10ml，旋轉(zhuǎn)搖動梨形瓶，得到脂質(zhì)體懸液。用氮?dú)鉀_16洗后，封口室溫下平衡l天，探針超聲處理15min，然后在10000psi均質(zhì)壓力下高壓均質(zhì)處理3次，使脂質(zhì)體粒徑逐漸減小。然后加入5°/。葡萄糖、5%甘露醇、6%海藻糖，冷凍干燥得替尼泊甙長循環(huán)脂質(zhì)體。實(shí)施例13取實(shí)施例1中的替尼泊武脂質(zhì)體進(jìn)行形態(tài)觀察、并測定粒徑及其分布。取脂質(zhì)體適量，加入適量注射用水稀釋，用2%磷鎢酸染色，透射電鏡下觀察粒子形態(tài)。取脂質(zhì)體懸液適量，加入適量水稀釋，以Zetamaster光子相關(guān)光譜儀測定脂質(zhì)體的粒徑大、和分布以及Zeta電位。結(jié)果電鏡下觀察替尼泊甙脂質(zhì)體呈均勻規(guī)則的球形粒子，無聚集和粘聯(lián)。實(shí)驗(yàn)測得的替尼泊戒脂質(zhì)體粒徑分布均勻，平均粒徑為257nm，多分散指數(shù)為0.158，zeta電位為-26.4mv。實(shí)施例14取實(shí)施例l中的替尼泊戒脂質(zhì)體進(jìn)行包封率的測定。包封率利用RP-HPLC方法測定，替尼泊甙脂質(zhì)體溶液經(jīng)透析法分離未包裹的替尼泊甙，用RP-HPLC測定游離替尼泊甙含量。色譜條件用苯基-己基珪烷鍵合硅膠為填充劑(PhenomenexRLUNAPhenyl-Hexyl,250mmx4.6mm,5pm),以乙腈-水(20:80)為流動相A，乙腈-水(56:44)為流動相B,流速為1.25mL/min。先以流動相A100%維持4min，流動相8以每分鐘約3%的速率增加至35.5%，維持20min,流動相B再以每分鐘約2.7。/。的速率增加至100。/。，維持30min，進(jìn)樣量10nl，220nm才企測，按下列公式計(jì)算包封率。包封率(％)=(脂質(zhì)體中替尼泊甙總量-游離替尼泊甙量)/替尼泊戒總量結(jié)果測得包封率為87.32%。實(shí)施例15取實(shí)施例6中的凍干品適量，密封，于冰箱4。C放置，于0、1、2、3、6月取樣，對粒徑、包封率、滲漏率、含量等指標(biāo)進(jìn)行測定，評價替尼泊甙脂質(zhì)體凍干品的穩(wěn)定性。結(jié)果見表l。表l批號測定項(xiàng)目o個月l個月2個月3個月6個月外觀色澤符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定有關(guān)物質(zhì)(％)1.111.211.251.361.58平均粒徑(nm)136±31132±40141±43143±41150±51070901多分散指數(shù)0.0890.1040.1030.0910.107包封率(％)89.4489.3189.2489.1088.95滲漏率(％)00.150.220.380.55含量(％)99.8999.8599.8199.7599.70外觀色澤符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定有關(guān)物質(zhì)(％)1.141.221.281.381.55平均粒徑(nm)132±23134±39136±32141±38147±54070902多分散指數(shù)0.0720.1010扁0.0870.114包封率(％)87.6587.4187.1487.0686.99滲漏率(％)00.270.580.670.75含量(％)100.0299.85100.1999.8999.78外觀色澤符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定有關(guān)物質(zhì)(％)U21.21.261.401.5618平均粒徑(nm)140±32136±42145±33148±42155±58多分散指數(shù)0.0690.1000.0730細(xì)0.112包封率(％)87.6687.4487.3687.2587.10滲漏率(％)00.250.340.470.64含量(％)100.0599.9699.8799.8599.81表l說明，替尼泊甙脂質(zhì)體凍干品在冰箱4。C放置6個月，其粒徑、包封率、含量等質(zhì)量指標(biāo)基本不變，表明替尼泊戒脂質(zhì)體凍干品穩(wěn)定性好。實(shí)施例16取上述實(shí)施例中的替尼泊甙脂質(zhì)體或長循環(huán)脂質(zhì)體制劑進(jìn)行刺激性實(shí)驗(yàn)。(1)對家兔耳緣靜脈血管刺激試驗(yàn)將替尼泊甙注射液的兩種不同劑型按臨床用藥量(50mg/次)進(jìn)行體表面積換算得出實(shí)驗(yàn)兔用劑量(2.5mg/kg)。實(shí)驗(yàn)前按lml/kg的給藥量用無菌生理鹽水注射液新鮮配制。選用體重2.5-3.0kg的健康新西蘭白兔6只，雌雄兼有。注射部位用碘酊和乙醇消毒后，3只白兔于右耳耳緣靜脈注射替尼泊甙注射液，左耳注射相同體積無菌生理鹽水注射液作對照；另3只白兔于右耳耳緣靜脈注射替尼泊戒脂質(zhì)體，左耳注射相同體積無菌生理鹽水注射液作對照，注射速度為2.8ml/min(相當(dāng)于人臨床注射速度)。每日一次，連續(xù)3天，末次給藥24小時后，由耳緣靜脈注入空氣處死白兔，肉眼觀察注射部位的反應(yīng)情況，并解剖兔耳血管及周圍組織作石蠟切片(注射部位下向心段lcm及5cm處)，染色，光鏡檢查。肉眼觀察注射部位反應(yīng)情況。結(jié)果見表2。表21制劑序號右耳左耳1正常正常替尼泊戒脂質(zhì)體2正常正常3正常輕微充血1充血輕微充血替尼泊甙注射液2充血正常3充血輕微充血結(jié)果，如表2所示，替尼泊戒脂質(zhì)體血管刺激性明顯弱于替尼泊戒注射液。(2)肌肉刺激性試驗(yàn)替尼泊戒注射液的劑量換算、藥物配制、新西蘭白兔的選擇同上(共4只，每種劑型2只)。剪去白兔兩側(cè)股四頭肌部位的兔毛，用碘酊和乙醇消毒后，分別在右側(cè)股四頭肌注射替尼泊戒脂質(zhì)體和替尼泊戒注射液lml，左側(cè)股四頭肌注射等量無菌生理鹽水注射液作對照，注射48小時后，由耳緣靜脈注入空氣處死白兔，解剖股四頭肌，縱向切開，觀察注射部位肌肉組織的反應(yīng)情況，確定反應(yīng)級數(shù)。0級無變化l級輕度充血，其范圍在0.5cmxl.0cm以下2級中度充血，其范圍在0.5cmxl.0cm以上3級重度充血，伴有肌肉變性4級出現(xiàn)壞死，有褐色變性5級出現(xiàn)廣泛性壞死然后算出4塊股四頭肌反應(yīng)級數(shù)總和，如果股四頭肌反應(yīng)級數(shù)的最高值與最低值之差大于2,則應(yīng)另取2只白兔重新實(shí)驗(yàn)。得到結(jié)果后，若四塊股四頭"幾反應(yīng)級數(shù)總和小于IO,則認(rèn)為供試品的局部刺激性實(shí)驗(yàn)符合規(guī)定。表3劑型序號右側(cè)股四頭肌左側(cè)股四頭肌100替尼泊戒脂質(zhì)體200120替尼泊戒注射液220結(jié)果(見表3)表明，替尼泊甙脂質(zhì)體的肌肉刺激性明顯弱于替尼泊戒注射液。實(shí)施例17過敏試驗(yàn)給藥方法取適量替尼泊武注射液用生理鹽水稀釋一定倍數(shù)，為樣品A;取自制替尼泊戒脂質(zhì)體用生理鹽水稀釋一定倍數(shù)，為樣品B。替尼泊戒給藥劑量為2.5mg/kg。取豚鼠12只，分成A、B兩組，分別供樣品A和B進(jìn)行過敏性試驗(yàn)用。每組豚鼠6只，體重250350g。隔天ip供試品0.5mL,連續(xù)3次。然后將A、B組豚鼠再分別平均分成A1、A2及B1、B2組，其中A1、Bl組于首次注射后的第14天由后腳掌外側(cè)靜脈注入供試品lmL進(jìn)行攻擊，觀察注射后動物有無用爪搔鼻、噴嚏、豎毛、抽搐、呼吸困難、大小便失禁、休克、死亡等反應(yīng)，A2、B2組于首次注射后的第21天同樣由后腳掌外側(cè)靜脈注入供試品并進(jìn)行觀察。結(jié)果替尼泊甙注射液多次抓鼻、多次顫抖、噴嚏、豎毛、抽搐、呼吸困難，兩例動物出現(xiàn)大小便失禁；替尼泊甙脂質(zhì)體豎毛、少凄t動物顫才牛。根據(jù)豚鼠過敏反應(yīng)級數(shù)標(biāo)準(zhǔn)表，對本試驗(yàn)進(jìn)行評定，反應(yīng)級數(shù)達(dá)2級以上(包括2級)時，可認(rèn)為該供試品過敏反應(yīng)試^"陽性。結(jié)果A組為3級，B組為l級。即A組(市售替尼泊甙注射液)可導(dǎo)致明顯的過敏反應(yīng)，為陽性，而B組(自制替尼泊武脂質(zhì)體)過敏試驗(yàn)為陰性。實(shí)施例18溶血實(shí)驗(yàn)自新西蘭白兔的頸總動脈取血20ml，置于燒瓶內(nèi)，用玻璃棒輕輕攪動數(shù)分鐘后，除去纖維蛋白，取出血液，加等量生理鹽水注射液，離心(1500rpm，10min)，除去上清液；沉淀的紅細(xì)月包再加生理鹽水注射液清洗。如此反復(fù)直到上清液透明，按紅細(xì)胞的容量用生理鹽水配成2%的混懸液。取干凈試管7支，分別編號，依次加入各液，第6管不加供試品作空白對照管，第7管用蒸餾水代替生理鹽水，搖勻，置于37。C水浴中，分別于0.5、1、2、3小時觀察是否有溶血現(xiàn)象發(fā)生。結(jié)果表明，替尼泊戒注射液和替尼泊戒脂質(zhì)體都未見溶血發(fā)生，兩種劑型的溶血性實(shí)驗(yàn)均合格。實(shí)施例19取實(shí)施例10中的替尼泊戒脂質(zhì)體凍干制劑溶于蒸餾水中，制成lmg/ml的溶液，在4。C，25。C和36。C放置四周，于8、12、16、20、24和28天高速離心收集沉淀，用HPLC法測定替尼泊戒含量，結(jié)果見表4。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>結(jié)果(表4)表明，替尼泊戒脂質(zhì)體在4。C放置一個月，基本無滲漏；在25。C存放兩周基本無滲漏；在35。C放置8天，濃度僅下降3%左右，放置12天，濃度變化10°/。；在環(huán)境溫度不高于35。C的情況下，該脂質(zhì)體能保持8天以上的穩(wěn)定性，表明替尼泊戒脂質(zhì)體穩(wěn)定性好。實(shí)施例20利用實(shí)施例10中所述的制劑評價替尼泊戒脂質(zhì)體的毒性。取體重1822g性別一致的昆明小鼠60只，隨機(jī)分成6組，每組IO只，分別尾靜脈注射替尼泊戒脂質(zhì)體和替尼泊戒注射液，組間劑量按等比級數(shù)排列，比值1:0.8，觀察并記錄給藥10天內(nèi)各組動物的反應(yīng)和死亡率，用簡化機(jī)率單位法計(jì)算LD50，其95%的可信限為替尼泊戒注射液LD5o=18.2±1.2mg/kg，替尼泊戒脂質(zhì)體LD50=38.4±1.6mg/kg。LDso毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，替尼泊戒脂質(zhì)體與替尼泊戒注射液相比，毒性明顯降低。實(shí)施例21藥動學(xué)實(shí)-瞼將12只SD大鼠隨機(jī)分成2組，實(shí)驗(yàn)前禁食一夜。曱組為對照組，于右后股靜脈注射替尼泊戒注射液(lmg/ml);乙組為受試組，于右后股靜脈注射替尼泊戒脂質(zhì)體，分別于0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24小時眼眶取血0.5ml，置預(yù)先肝素化的尖底離心試管中，離心，分離出血漿。按一定方法處理后，取20nl進(jìn)樣，測定各血漿樣品中替尼泊戒的濃度。將實(shí)驗(yàn)所得血藥濃度-時間數(shù)據(jù)用kinetita軟件包處理，判斷房室模型，同時進(jìn)行統(tǒng)計(jì)矩分析，并將所得藥動學(xué)參數(shù)經(jīng)spss統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t才t驗(yàn)。其中AUCo-24和AUC"均為梯形法計(jì)算結(jié)果，Cmax為實(shí)測值。結(jié)果見表5。表523<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>*P<0.05;**P<0.01。結(jié)果替尼泊甙脂質(zhì)體的MRT、AUC。.24和AUC"分別是參比制劑替尼泊戒注射液的3.8、5.94和5.95倍，具有極顯著差異；CL是參比制劑的0.38倍，具有極顯著差異；這說明在同樣劑量條件下，藥物被脂質(zhì)體包裹后延長了藥物在血液中的滯留時間，使藥物在體內(nèi)消除速度變慢并保持了較高的血藥濃度，從而有可能發(fā)揮長效作用。替尼泊甙脂質(zhì)體改變了替尼泊戒在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)性質(zhì)，具有一定的緩釋和長循環(huán)特征。權(quán)利要求1、一種替尼泊甙脂質(zhì)體，其特征在于，由包含以下重量份的原料制備而成替尼泊甙1-10份磷脂類物質(zhì)1-100份固醇0-50份附加劑0-50份。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的替尼泊甙脂質(zhì)體，其特征在于，由包含以下重量份的原料制備而成替尼泊戒l份磷脂類物質(zhì)2-30份固醇O-l(H分附加劑0-10份。3、才艮據(jù)權(quán)利要求1所述的替尼泊甙脂質(zhì)體，其特征在于，所述原料進(jìn)一步包含0,1-50重量份的修飾材料。4、根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)所述的替尼泊戒脂質(zhì)體，其特征在于，所述的磷脂類物質(zhì)選自磷脂酰膽堿、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酸、二油酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰乙醇胺、卵磷脂、大豆磷脂、氫化大豆磷脂、氫化卵磷脂、腦磷脂和心磷脂及其混合物；所述的固醇選自膽固醇、二氨膽固醇、大豆甾酰糖苷、大豆甾醇和麥角固醇；所述的附加劑包括抗氧劑、表面活性劑和穩(wěn)定劑；其中所述抗氧劑選自維生素E、維生素E酯、亞辟u酸鈉、亞石危酸氫鈉、焦亞石克酸鈉、硫代硫酸鈉、沒食子酸丙酯、叔丁基對羥基茴香醚、二叔丁基對曱酚、半胱氨酸和蛋氨酸中的一種或多種，所述表面活性劑選自脫氧膽酸鹽、膽酸鹽、脫氧膽酸、?；悄懰猁}、膽酸、吐溫-80、泊洛沙姆、汴澤和司盤中的一種或多種，所述穩(wěn)定劑選自硬脂胺、磷脂酸、十四酸、油酸和甘油中的一種或多種。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的替尼泊戒脂質(zhì)體，其特征在于，所述的磷脂類物質(zhì)選自卵磷脂、大豆磷脂、腦磷脂和心磷脂及其混合物；所述的固醇為膽固醇。6、根據(jù)權(quán)利要求3所述的替尼泊武脂質(zhì)體，其特征在于，所述的修飾材料包括聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、神經(jīng)節(jié)鞘酯、聚丙烯酰胺、殼聚糖和聚乙二醇-磷脂衍生物或它們的混合物；其中所述的聚乙二醇-磷脂衍生物選自聚乙二醇-二硬酯酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰膽堿、聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-氫化大豆磷脂酰乙醇胺和聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰膽堿；其中所述聚乙二醇的平均分子量為200-20000。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的替尼泊武脂質(zhì)體，其特征在于，所述的聚乙二醇平均分子量為2000-5000。8、根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)所述的替尼泊戒脂質(zhì)體，其特征在于，所述脂質(zhì)體的粒徑小于1000nm。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的替尼泊戒脂質(zhì)體，其特征在于，所述脂質(zhì)體的粒徑小于500nm。10、權(quán)利要求1或2所述的替尼泊戒脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，可以采用下述不同方法中的任意一種1>薄膜分散法將替尼泊甙、磷脂類物質(zhì)、固醇、脂溶性附加劑按比例溶于有機(jī)溶劑，并在20-60。C下減壓揮去有機(jī)溶劑，形成薄膜，然后加入含水溶性附加劑的水相介質(zhì)水合，超聲或高壓均質(zhì)后即得替尼泊戒脂質(zhì)體；或2)注入法將替尼泊甙、磷脂類物質(zhì)、固醇、脂溶性附加劑溶于適量有機(jī)溶劑中制成脂質(zhì)溶液，吸取該溶液緩緩注入20-60。C含水溶性附加劑的水相介質(zhì)，注入完畢繼續(xù)攪拌去除有機(jī)溶劑，然后可進(jìn)行超聲或高壓均質(zhì)處理得到替尼泊甙脂質(zhì)體；或3)逆向蒸發(fā)法將替尼泊甙、磷脂類物質(zhì)、固醇、脂溶性附加劑按比例溶于有機(jī)溶劑，加入含水溶性附加劑的水相介質(zhì)，進(jìn)行超聲或高速剪切使形成穩(wěn)定的W/0型初乳，減壓蒸去有機(jī)溶劑，加入水相介質(zhì)，旋轉(zhuǎn)幫助器壁上的凝膠脫落，然后在減壓下繼續(xù)蒸發(fā)，制得水性混懸液，然后可進(jìn)行超聲或高壓均質(zhì)處理得到替尼泊甙脂質(zhì)體；或4)熔融法按比例稱取替尼泊甙、磷脂類物質(zhì)、固醇、脂溶性附加劑于60-80。C加熱熔融，加入含水溶性附加劑的水相介質(zhì)混合，然后可進(jìn)行超聲或高壓均質(zhì)處理得到替尼泊戒脂質(zhì)體；上述制備方法中，所述的水相介質(zhì)為純水、磷酸鹽緩沖液、枸櫞酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液、三羥曱基氨基曱烷緩沖液、生理鹽水溶液、甘露醇溶液或葡萄糖溶液，且上述緩沖液的pH為4-8;所述的有機(jī)溶劑選自乙醇、曱醇、乙醚、丙酮、乙酸乙酯、氯仿和二氯甲烷及其混合物。11、根據(jù)權(quán)利要求IO所述的替尼泊戒脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，在磷脂類物質(zhì)的溶解或熔融過程或水相介質(zhì)的配制過程中可進(jìn)一步加入修飾材料。12、一種替尼泊戒脂質(zhì)體固體制劑，其特征在于，該固體制劑是權(quán)利要求1-3中的替尼泊甙脂質(zhì)體加入支架劑并采用冷凍干燥或噴霧干燥的工藝制成的。13、根據(jù)權(quán)利要求12所述的替尼泊戒脂質(zhì)體固體制劑，其特征在于，所述的支架劑選自甘氨酸、絲氨酸、蔗糖、乳糖、甘露醇、葡萄糖、海藻糖、麥芽糖、阿拉伯膠、木糖醇、山梨醇、果糖、右旋糖苷、氯化鈉和白蛋白及其混合物，并且其用量按磷脂類物質(zhì)重量比計(jì)算為1份磷脂加0.1-4份。14、一種替尼泊甙注射劑或口服制劑，其特征在于，是由權(quán)利要求1-3中的替尼泊戒脂質(zhì)體制備而成的。全文摘要本發(fā)明提供了一種可用于注射或口服的替尼泊甙脂質(zhì)體。它的特點(diǎn)是用磷脂類物質(zhì)包封替尼泊甙，制得粒徑小、包封率高、穩(wěn)定性好、毒副作用低的替尼泊甙脂質(zhì)體。本發(fā)明制備的替尼泊甙脂質(zhì)體提高了替尼泊甙的溶解度和穩(wěn)定性，并降低其毒性，延長藥物在血液中的循環(huán)時間，從而提高了藥物的療效，使本脂質(zhì)體制成的制劑在臨床應(yīng)用上具有低毒性、低過敏性和高效性的特點(diǎn)。本發(fā)明還涉及替尼泊甙脂質(zhì)體的制備方法，該制備工藝簡單、成本低廉，適合工業(yè)化生產(chǎn)。文檔編號A61K31/7048GK101579312SQ20081003755公開日2009年11月18日申請日期2008年5月16日優(yōu)先權(quán)日2008年5月16日發(fā)明者李亞平,陳伶俐,顧王文申請人:中國科學(xué)院上海藥物研究所