專利名稱：：使用陰離子交換樹脂做吸附劑治療內毒素血癥的方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于血液凈化吸附劑及其用途，尤其涉及一種使用陰離子交換樹脂做吸附劑治療內毒素血癥的方法。
背景技術：
：膿毒血癥及其？1起的休克是臨床最常見的疾病死亡原因之一，死亡率大約在20%~50%。膿毒血癥性疾病發(fā)生發(fā)展的主要因素是內毒素。內毒素可刺激多種細胞如單核/巨噬細胞、粒細胞和內皮細胞活化，產(chǎn)生大量細胞因子如TNF-a、IL-1-P、IL-6等；也能活化凝血系統(tǒng)與補體系統(tǒng)，最終導致全身炎癥反應綜合征(SIRS)、多器官功能不全綜合征(MODS)甚至多器官功能衰竭(MOF)。另外在慢性肝病、肝硬化和重型肝炎時，腸道中細菌及內毒素可穿過上皮屏障進入腸系膜淋巴結，進而進入血液和器官，同時肝病時腸道縣膜屏障損害和腸道菌群失調也可促進腸源性內毒素血癥的發(fā)生發(fā)展。另外肝病時往往合并黃疰，血中增高的膽紅素可抑制kupffer細胞功能，使其清除內毒素的能力下降，也促使內毒素血癥的形成。因此在內毒素血癥形成過程中，腸黏膜的完整性、門靜脈狀況及kupffer細胞功能狀態(tài)發(fā)揮著重要作用。因此及時有效的清除患者體內的內毒素是治療內毒素血癥的關鍵性問題。常用內毒素血癥的治療包括藥物治療和生物治療。藥物治療主要使用內毒素拮抗劑，包括類脂質A結構類似物、抗內毒素蛋白及多肽類抗內毒素蛋白及多肽、多價陽離子結構拮抗劑、F33、重組高密度脂蛋白等。但上述內毒素拮抗劑或是因為作用在內毒素生物學效應的某些方面，或是因為安全范圍窄，毒副作用大，都難以達到理想的臨床療效。生物治療主務使用抗內毒素特異性抗體，包括抗核心糖脂抗體、抗CD14/LBP的抗體，療效也未得到充分肯定。近年有人開始研究使用血液灌流的方法治療內毒素血癥，初步臨床應用取得了一定療效。使用的吸附劑主要包括中空纖維固定化多I占菌素B(PMX-DHP)、固定化人血清白蛋白(MATISSE)。但前者對腎臟和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的毒性極強，后者仍需進行深入研究，且這兩種使用吸附劑的方法成本均很高，患者難以承受。
發(fā)明內容本發(fā)明是為了克服現(xiàn)有技術中的不足，提供一種使用陰離子交換樹脂做吸附劑治療內毒素血癥的方法，采用具有特異性選擇功能的陰離子交換樹脂作為吸附劑通過血^血漿灌流清除內毒素治療內毒素血癥，對內毒素的吸附率可達90%以上，每毫升陰離子交換樹脂對內毒素的吸附率可達100000pg以上，證明陰離子交換樹脂是內毒素的高效吸附劑。本發(fā)明為實現(xiàn)上述目的，通過以下技術方案實現(xiàn)一種使用陰離子交換樹脂做吸附劑治療內毒素血癥的方法，其特征是血液灌流方法治療內毒素血癥，釆用陰離子交換樹脂作吸附劑的用途。所述使用的陰離子交換樹脂做吸附劑進行安全性預處理，具體步驟(1)、樹脂用80目過濾網(wǎng)過篩；(2)、用醫(yī)用級無水乙醇淋洗72小時以上；(3)、用lNNaOH淋洗24小時，再用1NHC1淋洗24小時，如此反復三次；(4)、用符合注射標準的蒸餾水淋洗24小時；(5)、用符合注射標準的蒸餾水煮沸、清洗2小時；(6)、用符合注射標準的蒸餾水漂洗三次；(7)、用符合醫(yī)用標準的0.9呢NaCl漂洗三次備用。所述陰離子交換樹脂的活性保存技術樹脂保存于37。C條件下及符合醫(yī)用標準的0.9%NaCl的液體中，并在37。C條件下運輸。本發(fā)明的有益效果:采用具有特異性選擇功能的陰離子交換樹脂通過血^/血漿灌流清除內毒素，具有高效、安全、價格低廉、制備容易和操作簡便的特點，體外實驗結果顯示陰離子交換樹脂對內毒素的吸附率可達90%以上，每毫升陰離子交換樹脂對內毒素的吸附率可達100000pg以上，對蛋白質有一定影響，對電解質無明顯影響，灌流對血漿蛋白有一定影響，對白細胞、紅細胞、血小板及電解質沒有明顯影響，證明選擇的陰離子交換樹脂是清除內毒素的高效吸附劑。圖1灌流前后血漿內毒素變化。具體實施例方式以下結合較佳實施例，對依據(jù)本發(fā)明提供的具體實施方式詳述如下一種使用陰離子交換樹聘做吸附劑治療內毒素血癥的方法，血液灌流方法治療內毒素血癥，采用陰離子交換樹脂作吸附劑的用途。陰離子交換樹脂選用苯乙烯系陰離子交換樹脂常規(guī)合成法制備，苯乙烯系離子交換樹脂是苯乙烯和二乙烯苯在水相中進行懸浮聚合得到共聚物珠體，然后向共聚體引入可離子化的基團而合成的。共聚物珠體的制備采用單體是苯乙烯和二乙烯苯，珠體采用自由基懸浮共聚合制成；共聚物珠體的功能基化一大孔陰離子交換樹脂的制備苯乙烯系強堿性或弱堿性陰離子交換樹脂都是由氯曱基化交聯(lián)聚苯乙烯胺化制得，對交聯(lián)聚苯乙烯的氯曱基化可通過弗里德爾-克拉夫茨烷基化反應在交聯(lián)聚苯乙烯的苯環(huán)上引入氯曱基，當氯曱基樹脂再與叔胺反應則形成季胺型強堿性離子交換樹脂；或當氯曱基樹脂與氨、伯胺或仲胺反應則形成弱堿性陰離子交換樹脂。采用陰離子交換樹脂作血液灌流方法吸附劑治療內毒素血癥具體步驟A,陰離子交換樹脂安全性預處理做為吸附劑的醫(yī)用陰離子交換樹脂對安全性有更高的要求要求對血液有形成分(血小板、白細胞、紅細胞)的影響最小、對凝血機制無明顯影響、對血漿電解質無明顯影響、對血漿蛋白質影響盡量小、無毒性、無刺激性、無過敏、無熱源、無菌、盡量少的樣M立脫落等。因此為達到安全性的目的，需要對陰離子交換樹脂進行嚴格處理。(1)、樹脂用80目過濾網(wǎng)過篩；(2)、用醫(yī)用級無水乙醇淋洗72小時以上；(3)、用lNNaOH淋洗24小時，再用1NHC1淋洗24小時，如此反復三次；(4)、用符合注射標準的蒸餾水淋洗24小時；(5)、用符合注射標準的蒸餾水煮沸、清洗2小時；(6)、用符合注射標準的蒸餾水漂洗三次；(7)、用符合醫(yī)用標準的0.99&NaCl漂洗三次備用；B.灌流器的準備將裝有陰離子交換樹脂的灌流器垂直固定，用無菌生理鹽水自下而上沖洗灌流器，輕輕敲打灌流器排除氣泡，再用肝素生理鹽水溶液預充灌流器；血液灌流時，用動靜脈管路以常規(guī)方式連接灌流器；血漿灌流時，則需要連接血漿分離器；并連接動、靜脈壓監(jiān)測及氣泡檢測裝置及保溫裝置，調整保溫溫度至37。C;C.血液通^各(1)靜脈穿刺置雙腔管可選擇頸內靜脈、鎖骨下靜脈、股靜脈；(2)動靜脈直接穿刺可選擇橈動脈、肱動脈、足背動脈、股動脈、肘正中靜脈、股靜脈等；D.肝素的使用根據(jù)病人的具體情況使用肝素，肝素常用劑量首劑lmg~3mg/kg體重，追加維持劑量8mg~15mg/h。對肝素用量過大出現(xiàn)出血傾向時，應停用肝素并考慮使用魚精蛋白靜脈緩慢推注；E.灌流操作連接動脈血路，開動血泵，血流量控制在50ml~100ml/min，血液流至肝素管前，注入首劑肝素，調節(jié)肝素維持量(如做血漿灌流則需要連接血漿分離器)，連接靜脈管路或靜脈針，調節(jié)血流量至150ml~200ml/min、血漿流量25土5ml，或同時連接動、靜脈管路，每個灌流器治療時間為1~3小時；F.灌流結束關閉血泵，斷開動脈管路，連接生理鹽水250ml左右，開動血泵，流量為50ml100ml/min，將剩余血液回輸后，斷開靜脈管路，穿刺部位應加壓包4L止血。在常規(guī)保存條件下，樹脂的交換功能會逐漸衰減，為了較長期保存樹脂的交換功能，陰離子交換樹脂的活性保存技術，樹脂保存于37'C條件下及符合醫(yī)用標準的0.9yoNaCl的液體中，并盡量于37。C條件下運輸。以上兩項樹脂6長期保存技術可以保證樹脂的交換功能在兩年內不會下降。動物實驗記錄一、實-瞼動物健康成年雜種犬12只，體重14kg17kg，均為雄性。二、灌流器制備樹脂使用前均經(jīng)過篩、酸、堿、乙醇和冷熱水處理，裝入枸碳酸酯灌流器中，灌流器兩端裝有80目過濾網(wǎng)，超聲焊接，采用高壓蒸汽滅菌，并經(jīng)溶出物、熱源和急性毒性實驗合格后備用。每次灌流樹脂用量為330士10ml。三、內毒素注射用內毒素，10mg/支(美國sigma公司，貨號L2880)。四、方法將12只雜種犬隨機分為治療組與對照組，每組各6只。手術前12小時禁食水。采用氯安酮4mg/kg+安定10mg肌肉注射全身麻醉，術中氯安酮、安定靜脈輸入維持。麻醉后將犬固定于手術床上，連接心電監(jiān)護儀檢測心率與血氧飽和度，雙側腹股溝區(qū)備皮、常規(guī)消毒、鋪巾。切開兩側腹股溝區(qū)皮膚，分別解剖出兩側股靜脈與右側股動脈，經(jīng)左側股靜脈插入雙腔血透管，用于血液灌流治療；經(jīng)右側股靜脈插入中心靜脈導管，用于輸注液體及取血；經(jīng)右側股動脈插入動脈導管連接心電監(jiān)護儀動態(tài)監(jiān)測血壓。動物麻醉及操作完畢，取全血采樣完成后，經(jīng)中心靜脈用微量輸液泵勻速輸注內毒素0.5mg/kg，30分鐘輸完。用3000ml生理鹽水預沖洗灌流管路，將雙腔血透管與灌流管路和血透機連接，形成體外全血循環(huán)。治療組于以上連接過程中將HB-H-7樹脂吸附罐串聯(lián)接入血液灌流管路，對照組未串聯(lián)樹脂吸附罐。灌流開始前先用復方電解質液(血濾置換液含鈉135mmol/L、鉀2.Ommol/L、鈣2.5mmol/L、鎂l.5mmol/L、氯108隱ol/L)對灌流罐進行預充并沖洗。開放雙腔血透管開始灌流并持續(xù)2小時，灌流速度為150~200ml/h。于灌流開始前取全血標本，灌流開始后30分鐘、60分鐘、90分鐘和120分鐘分別取全血標本測定血漿內毒素、全血蛋白質、電解質和血常規(guī)。灌流結束后，拔除各血管內插管，以5-0血管縫線縫合修補股靜脈缺損，絲線縫合皮膚切口。實驗過程中補充乳酸鈉林格氏液8~10ml/kg.h，并按情況予以調整。肝素用量為全身肝素化40mg,維持量510mg/h。五、4企-瞼方法血漿內毒素使用MB-80型微生物快速動態(tài)檢測儀(天津醫(yī)科大學總醫(yī)院檢驗科)對血樣標本采用鱟試驗方法檢測；蛋白質、電解質使用TOSHIBATBA-120FR型全自動生化測定儀(天津市第三中心醫(yī)院檢驗科)檢測；血常規(guī)使用SIEMENSADVIA-2120型血常規(guī)分析儀(天津市第三中心醫(yī)院檢驗科)檢測。7\、統(tǒng)計學方法所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示，采用配對樣品的f檢驗。動物實驗結果顯示血液灌流前后比較，治療組血漿內毒素水平由9999pg/ml下降至平均867pg/ml(尸<0.05)，用不含樹脂的空灌流器灌流的對照組內毒素無明顯下降(戶>0.05);治療組與對照組比較差異有顯著性(戶<0.05)。灌流對血漿蛋白有一定影響，對白細胞、紅細胞、血小板及電解質沒有明顯影響。體外實驗結果顯示離子交換樹脂對內毒素的吸附率可達90。/。以上，每毫升離子交換樹脂對內毒素的吸附率可達100000pg以上，對蛋白質有一定影響，對電解質無明顯影響，證明選擇離子交換樹脂是內毒素的高效吸附劑，該樹脂通過血液灌流治療犬內毒素血癥安全有效。'試驗結果一、犬內毒素血癥動物模型所有實驗犬均順利實施麻醉、手術及血管內置管，實驗過程中呼吸、心率、血壓穩(wěn)定，均順利完成血液灌流，無意外死亡。二、實驗數(shù)據(jù)1.內毒素兩組實驗犬輸注內毒素前血漿內毒素測定均為陰性(<10pg/ml),靜脈輸注內毒素后30分鐘血漿內毒素測定均明顯增高(〉9999pg/ml)。治療組灌流前后比較血漿內毒素水平明顯下降(戶<0.05),對照組灌流后血漿內毒素水平充明顯下降(P>0.05)，兩組比較差異有顯著性(P<0.05),見表l。表l:灌流前后血漿內毒素變化(pg/ml)灌流前灌流30'灌流60'灌流120'尸值治療組>99994359±3752509±223867±105<0.05對照組>9999>9999>9999>9999>0.05尸值〉0.05<0.05<0.05<0.052.血漿蛋白治療組灌流前后，血漿蛋白有一定下降，至灌流結束，總蛋白下降25.9%，白蛋白下降18.2%,球蛋白下降34.2%，統(tǒng)計學差異有顯著性(尸<0.05),見表2。表2:治療組灌流前后蛋白質變化(g/L)蛋白質總蛋白白蛋白球蛋白灌流前灌流30'灌流60，灌流120，65.6±4.923.6±3.243.6±5.150.7±5.120.2±3.729.1±4.346.3±3.819.1±3.327.6±4.748.6±4.819.3±2.928.7±3.6表2-1:灌流前后總蛋白變化(g/L)總蛋白灌流前灌流30'灌流60'灌流120'尸*值治療組65.6±4.9*50.7±5.146.3±3.848.6±4.8*<0.05對照組63.8±5.6*64.7±5.961.3±4.861.9±4.6*>0.05P值〉0.05<0.05<0.05<0.05表2-2:灌流前后白蛋白變化(g/L)白蛋白灌流前灌流30'灌流60'灌流120'尸值治療組23.6±3.220.2±3.719.1±3.319.3±2.9<0.05對照組23.8±4.724.7±4.923.3±4.823.9±4.6〉0.05尸值>0.05>0.05>0.05>0.059表2-3:灌流前后球蛋白變化(g/L)球蛋白灌流前灌流30'灌流60，灌流120'~~治療組43,6±5.1~29.1±4.3~27.6±4.7~~28.7±3.6<0.05對照組43.8±4.744.7±4.943.3±4.843.9±4.6>0.05尸值>0.05<0.05<0.05<0.053.電解質灌流對治療組血電解質鉀、鈉、氯、鈣、<漢和磷均無明顯影響(尸〉0.05)，見表3。表3:治療組灌流前后電解質變化(mmol/L)電解質灌流前灌流30，灌流60，灌流120，鉀4.19±0.894.11±0.654.02±0.764.09±0.85鈉141.5±6.1133.5±5.3138.9±6.5146.0±3.8鼠115.6±4.1117.5±2.8127.0±4.0120.3±3.1鈣2,55±0.182.43±0.332.37±0.282.41±0.22鎂0.91±0.120.89±0.310.82±0.260.85±0.10磷2.06±0.221.97±0.181.91±0,301.87±0.21表3-1:灌流前后血鉀變化(mmol/L)鉀灌流前灌流30'灌流60，灌流120，P值治療組4.19±4.11±4.02±4.09±>0.050.890.650.760.85對照組4.23±4.21±4.08±4.15±>0.050.920.850.960.68尸值>0.05>0.05>0.05〉0.0510<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表3-5:灌流前后血鎂變化(咖ol/L)鎂灌流前灌流30'灌流60'灌流120，尸值治療組0.91±0.89±0.82±0.85±>0.050.120.310.260.10對照組0.86±0.81±0.79士0.83±>0.050.050.230.210.18戶值>0.05>0.05>0.05〉0.05表3-6:灌流前后血磷變化(mmol/L)磷灌流前灌流30，灌流60，灌流120，P值治療組2.06±1.97±1.91±1.87±>0.050.220.180.300.21對照組2.35±1.99土1.93±1.89±>0.050.320.190.260.28p值>0.05>0.05>0.05>0.054.血常規(guī)治療組灌流前后相比，白細胞升高4.2%，紅細胞下降3.0%，血小板降低9.4%(P〉0.05),見表4。_表4治療組灌流前后血常規(guī)變化_血細胞灌流前灌流30，灌流60'灌流120'白細胞(xl07L)7.2±1.76.8±1.27.4±2.77.5±2.1紅細胞(x5.35±0.325.05±0.205.26±0.315.19±0.27107L)血小板(xl07L)212±17.2182±18.6196±22.8192±12.212表4-1:灌流前后白細胞(x107L)變化白細胞灌流前灌流30，灌流60，灌流120'尸值(xio7U治療組5.35±0.325.05±0.205.26±0.315.19±0.27〉0.05對照組7.6±1.96.9±1.47.8±2.37.3±2.2>0.05iM直>0.05>0.05>0.05>0.05表4-2:灌流前后紅細胞(x107L)變化紅細胞(x灌流前灌流30'灌流60'灌流120，P值10l2/l)治療組5.35±5.05±5.26±5.19±>0.050.320.200.310.27對照組5.86±5.53±5.18±5.26±>0.050.330.28(/.210.25p值>0.05〉0,05>0.05>0.05表4-3:灌流前后血小板(x107U變化血小板(x灌流前灌流30，灌流60'灌流120'P值io7l)治療組212±17.2182±18.6196±22.8192±12.2>0.05對照組206±13.2196±17.9186±16.8193±15.6>0.05尸值>0.05>0.05>0.05>0.05圖4-3:灌流前后血小板(x107L)變化、三、存活率'灌流結束時所有實驗犬均生命體征平穩(wěn)，治療組6只犬均長期健康存活，對照組6只犬于實驗后不久出現(xiàn)倦怠萎靡、毛發(fā)戧亂、厭食，繼而出現(xiàn)煩躁、呼吸急促、四肢無力、二^f更失禁，并分別于實l^后1422h死亡。以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非對本發(fā)明的結構作任何形式上的限制。凡是依據(jù)本發(fā)明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明的技術方案的范圍內。權利要求1.一種使用陰離子交換樹脂做吸附劑治療內毒素血癥的方法，其特征是血液灌流方法治療內毒素血癥，采用陰離子交換樹脂作吸附劑的用途。2、根據(jù)權利要求1所述的使用陰離子交換樹脂做吸附劑治療內毒素血癥的方法，其特征是使用陰離子交換樹脂做吸附劑進行安全性預處理，具體(1)、樹脂用80目過濾網(wǎng)過篩；(2)、用醫(yī)用級無水乙醇淋洗72小時以上；(3)、用lNNaOH淋洗24小時，再用1NHC1淋洗24小時，如此反復三次；(4)、用符合注射標準的蒸餾水淋洗24小時；(5)、用符合注射標準的蒸餾水煮沸、清洗2小時；(6)、用符合注射標準的蒸餾水漂洗三次；(7)、用符合醫(yī)用標準的0.9呢NaCl漂洗三次備用。3、根據(jù)權利要求1所述的使用陰離子交換樹脂做吸附劑治療內毒素血癥的方法，其特征是所述陰離子交換樹脂的活性保存技術樹脂保存于37。C條件下及符合醫(yī)用標準的0.9%NaCl的液體中，并在37。C條件下運輸。全文摘要本發(fā)明涉及一種使用陰離子交換樹脂做吸附劑治療內毒素血癥的方法，其特征是使用的陰離子交換樹脂進行安全性預處理，具體步驟樹脂用80目過濾網(wǎng)過篩用醫(yī)用級無水乙醇淋洗72小時以上；用1NNaOH淋洗24小時，再用1NHCl淋洗24小時，如此反復三次；用符合注射標準的蒸餾水淋洗24小時；用符合注射標準的蒸餾水煮沸、清洗2小時；用符合注射標準的蒸餾水漂洗三次；用符合醫(yī)用標準的0.9％NaCl漂洗三次備用。本發(fā)明的有益效果采用具有特異性選擇功能的陰離子交換樹脂通過血液/血漿灌流清除內毒素，陰離子交換樹脂對內毒素的吸附率可達90％以上，每毫升陰離子交換樹脂對內毒素的吸附率可達100000pg以上，陰離子交換樹脂是清除內毒素的高效吸附劑。文檔編號A61M1/00GK101642591SQ200810054060公開日2010年2月10日申請日期2008年8月5日優(yōu)先權日2008年8月5日發(fā)明者濤李申請人:濤李