專(zhuān)利名稱(chēng)：甘氨酸在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甘氨酸的用途，尤其涉及在制藥領(lǐng)域中的用途。
背景技術(shù)：
甘氨酸是已經(jīng)公開(kāi)了的一種化合物，本品為氨酸乙酸，其結(jié)構(gòu)式為 分子式為C2H5NO2，白色結(jié)晶性粉末；無(wú)臭、味甜。分子量為75.07。在水中溶解，在乙醇或乙醚中幾乎不溶。
該化合物已知可以與多種氨基酸混合而成氨基酸注射液(如11種、14種或17種氨基酸注射液)。用于手術(shù)前后、創(chuàng)傷、燒傷、骨折以及急性低蛋白血癥患者；因肝病引起的組織蛋白的合成和利用紊亂的患者；胃腸道功能失調(diào)引起的蛋白質(zhì)攝取不足所致?tīng)I(yíng)養(yǎng)不良患者以及傳染病恢復(fù)期等腸道外補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)的患者(見(jiàn)高濯風(fēng)等編著.營(yíng)養(yǎng)藥.臨床藥物實(shí)用大全.北京中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，第一版，1996，722～725)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供甘氨酸的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用。
技術(shù)方案本發(fā)明涉及甘氨酸作為制備治療急性和慢性肝炎的藥中的應(yīng)用。涉及甘氨酸作為制備治療酒精性脂肪肝疾病的藥中的應(yīng)用。涉及甘氨酸作為制備治療降低各種肝炎、肝病所伴之血漿腸源性?xún)?nèi)毒素的藥物中的應(yīng)用。涉及甘氨酸在制備防止肝炎慢性化，即肝炎——脂肪肝——肝纖維化——肝硬化的藥中的應(yīng)用。涉及甘氨酸作為制備治療各種休克患者所伴之血漿腸源性?xún)?nèi)毒素藥中的應(yīng)用。
為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面將用甘氨酸的藥理試驗(yàn)及結(jié)果來(lái)說(shuō)明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。
1、甘氨酸對(duì)硫代乙酰胺(TAA)所致大鼠急性肝損傷的影響。用常規(guī)藥理試驗(yàn)觀察了甘氨酸(灌胃劑量為500mg/100g/d)對(duì)大鼠血漿轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、內(nèi)毒素與TNFα水平的影響(表1)并作了組織學(xué)觀察。發(fā)現(xiàn)TAA組大鼠肝臟肝小葉中央靜脈周?chē)渭?xì)胞大面積壞死，并有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，而經(jīng)甘氨酸治療大鼠肝小葉中央靜脈附近僅有少量肝細(xì)胞壞死與炎性浸潤(rùn)。
表1甘氨酸組與TAA組結(jié)果比較

上述結(jié)果表明，經(jīng)甘氨酸防治大鼠肝組織損傷明顯減輕，反映在血漿轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性明顯下降，這與血漿內(nèi)毒素與TNFα水平下降密切相關(guān)。
2、甘氨酸對(duì)TAA所致大鼠肝損傷時(shí)腸粘膜及腸血管通透性的影響。用常規(guī)藥理試驗(yàn)觀察了經(jīng)甘氨酸防治后腸道Evans藍(lán)含量為0.96±0.47，而TAA組為2.14±0.64ug/ml，P＜0.05；腸粘膜通透性(δ)為1.23±0.47，而TAA組為1.78±0.51，P＜0.05。此結(jié)果說(shuō)明TAA在損傷肝組織同時(shí)也使腸粘膜屏障受損，致使腸粘膜通透性增加，而甘氨酸可抑制TAA所致的腸粘膜通透性增加。
在觀察甘氨酸防治組腸管與血中組胺含量時(shí)，發(fā)現(xiàn)分別為4.59±1.47和3.0±0.55ug/g，而TAA組分別為9.39±3.38和6.95±1.96(ug/g)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P＜0.05。此結(jié)果提示甘氨酸是通過(guò)降低血與腸組織中組胺含量來(lái)抑制腸粘膜通透性的，因而腸內(nèi)之內(nèi)毒素不能被吸收入血。
3、甘氨酸對(duì)內(nèi)毒素和TAA所致肝細(xì)胞直接損傷作用。按常規(guī)進(jìn)行肝細(xì)胞分離和培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)①內(nèi)毒素(LPS)對(duì)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞有直接損傷作用，可使原代培養(yǎng)的肝細(xì)胞損傷而漏出ALT。甘氨酸則可減輕LPS對(duì)肝細(xì)胞的直接損傷作用；②TAA對(duì)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞有直接損傷作用，可使原代培養(yǎng)的肝細(xì)胞損傷而漏出ALT，而甘氨酸對(duì)TAA所致的直接損傷無(wú)作用。上述結(jié)果提示甘氨酸可能通過(guò)直接破壞內(nèi)毒素結(jié)構(gòu)或與內(nèi)毒素結(jié)合使內(nèi)毒素失活而減輕其對(duì)肝細(xì)胞的損傷。
4、甘氨酸對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用。用高脂膳食+酒精灌胃給大鼠一個(gè)月，血漿ALT活性?xún)?nèi)毒素與TNFα水平明顯升高，肝組織與血漿甘油三酯含量增高，而經(jīng)過(guò)甘氨酸防治均明顯下降(表2)表2甘氨酸組與酒精組血漿各項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果比較(x±s)

以上結(jié)果表明，甘氨酸可以顯著減輕高脂膳食+酒精而引起的脂肪肝，其肝組織的損傷可能與腸源性?xún)?nèi)毒素、TNFα水平升高有關(guān)。
5、甘氨酸對(duì)高脂膳食+酒精所致肝組織LBPmRNA、CD14mRNA及CD14蛋白的影響。應(yīng)用RT-PCR法及Western blot法對(duì)LBP(脂多糖連接蛋白)mRNA、CD14mRNA和CD14蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，甘氨酸可使高脂膳食+酒精組大鼠肝組織的LBPmRNA與CD14mRNA表達(dá)明顯下調(diào)，CD14蛋白合成減少。此結(jié)果提示甘氨酸可阻斷肝細(xì)胞的內(nèi)毒素受體(CD14)，從而使內(nèi)毒素不能發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。
6、觀察甘氨酸在CCl4引起肝硬化形成過(guò)程中對(duì)肝組織表達(dá)CD14mRNA和CD14蛋白的影響。應(yīng)用RT-PCR和Western blot法檢測(cè)大鼠肝組織的表達(dá)。結(jié)果表明在用含甘氨酸食物喂養(yǎng)而形成的脂肪肝和肝硬化大鼠肝組織CD14mRNA和CD14蛋白表達(dá)明顯減弱，在實(shí)驗(yàn)第8周末的表達(dá)最弱。證明甘氨酸是肝細(xì)胞膜CD14(內(nèi)毒素受體)的阻滯劑，使內(nèi)毒素的生物學(xué)效應(yīng)難以發(fā)揮，故可防止脂肪肝與肝硬化的發(fā)生與發(fā)展。
7、靜脈注射甘氨酸對(duì)創(chuàng)傷性休克大鼠腸源性?xún)?nèi)毒素血癥的影響。用骨鉗夾致左側(cè)股骨中下1/3粉碎性骨折，并在頸總動(dòng)脈放血，使動(dòng)脈血壓下降至40mmHg，維持1h，然后在20分內(nèi)回輸全部失的血使其復(fù)蘇。分別于0h、6h、12h、24h采血測(cè)定血漿ALT、內(nèi)毒素、TNFα.休克復(fù)蘇后在0h血漿內(nèi)毒素開(kāi)始增高，6h達(dá)到高峰，12h-24h逐漸下降。經(jīng)注射甘氨酸(150mg/kg)動(dòng)物的各時(shí)間組血漿ALT、內(nèi)毒素與TNFα水平均明顯低于對(duì)照組。CD14mRNA、LBP mRNA表達(dá)明顯降低。通過(guò)硝酸鑭染色用透射電鏡觀察腸道通透性經(jīng)甘氨酸防治也明顯降低。
上述結(jié)果表明，經(jīng)靜脈注射甘氨酸可增強(qiáng)腸道的屏障作用，從而抑制腸粘膜對(duì)內(nèi)毒素的吸收，致使血漿腸源性?xún)?nèi)毒素水平下降。由于甘氨酸可阻斷肝細(xì)胞膜上內(nèi)毒素受體CD14，故內(nèi)毒素?zé)o法發(fā)揮其損傷細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)，使肝細(xì)胞損傷明顯減輕，這對(duì)搶救休克有重要意義。
8、甘氨酸治療慢性病毒性肝炎的臨床研究。研究對(duì)象是在山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院傳染科住院病人進(jìn)行的。分為對(duì)照組(24例)，應(yīng)用甘利欣、門(mén)冬氨基酸鉀鎂等治療，甘氨酸治療組(24例)在對(duì)照組所用藥物基礎(chǔ)上加用甘氨酸治療?？诜拾彼崮z囊(內(nèi)含0.5g甘氨酸)4個(gè)，每日3次，共20天。治療前后采血測(cè)定血漿內(nèi)毒素、TNFα、IL-6水平。甘氨酸治療組患者血漿內(nèi)毒素、TNFα、IL-6水平均明顯下降(表3、4、5)肝功能明顯改善(表4)表3甘氨酸對(duì)慢肝患者血漿內(nèi)毒素水平的影響(x±s，EU/ml)


從表3可看出，經(jīng)甘氨酸治療后與治療前比較血漿內(nèi)毒素水平明顯下降(P＜0.02)，而對(duì)照組幾乎未見(jiàn)差異(P＞0.20)。治療組治療前后的差值與對(duì)照組治療前后差值比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P＜0.05。由此可見(jiàn)，甘氨酸具有明顯降低患者血漿內(nèi)毒素水平的作用。
表4甘氨酸治療對(duì)患者血漿TNFα水平的影響(x±s，ng/ml)

表5甘氨酸治療對(duì)患者血漿IL-6水平的影響(x±s，pg/ml)

內(nèi)毒素激活肝枯否細(xì)胞后釋放促炎細(xì)胞因子TNFα和IL-6等，這些促炎細(xì)胞因子的釋放使得肝臟發(fā)生炎癥反應(yīng)，并同時(shí)發(fā)生肝細(xì)胞的變性與壞死。表4、5的結(jié)果表明，經(jīng)甘氨酸治療后隨血漿內(nèi)毒素水平降低伴有TNFα和IL-6水平的下降，故使肝臟炎癥反應(yīng)減輕或受到控制，有利于肝功能的改善與恢復(fù)。
表6甘氨酸治療對(duì)患者肝功能的影響


表6表明，經(jīng)甘氨酸治療血漿轉(zhuǎn)氨酶(ALT、AST)活性、總膽紅素水平明顯低于治療前、而前白蛋白(PA)則明顯升高。血漿轉(zhuǎn)氨酶活性反映肝細(xì)胞壞死程度，故應(yīng)稱(chēng)肝損傷指標(biāo)。AST長(zhǎng)期升高表示病變轉(zhuǎn)為慢性，故甘氨酸降低AST活性是很有價(jià)值的。肝功能主要有分泌、合成與解毒功能。血漿膽紅素水平降低反映分泌功能的改善；血漿前白蛋白(PA)水平增高反映肝細(xì)胞合成能力的恢復(fù)，這對(duì)慢性肝炎而言是至關(guān)重要的。
9、甘氨酸對(duì)失代償肝硬化患者的療效觀察。研究對(duì)象是在山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院消化內(nèi)科住院病人20例(多為伴有上消化道出血，肝性腦病患者)進(jìn)行的。采用配對(duì)方法，隨機(jī)分為兩組，各10例。一組為常規(guī)治療，即治療對(duì)照組；一組為甘氨酸治療組，在常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用甘氨酸。治療時(shí)間平均7天(4-10日)。結(jié)果表明，經(jīng)甘氨酸治療后血漿內(nèi)毒素水平明顯下降，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理治療前后內(nèi)毒素水平差異顯著。對(duì)照組在治療前后未見(jiàn)內(nèi)毒素水平有明顯差異。根據(jù)臨床觀察患者癥狀隨內(nèi)毒素血癥的減輕也有相應(yīng)改善。
從以上結(jié)果，可以得出本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于(1)本發(fā)明對(duì)已知化合物甘氨酸發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開(kāi)拓了一個(gè)新的應(yīng)用領(lǐng)域。
(2)本發(fā)明的甘氨酸安全無(wú)毒、藥理作用強(qiáng)，預(yù)示著很好的藥用前景。
(3)本發(fā)明的物質(zhì)原料來(lái)源豐富、價(jià)廉、未見(jiàn)毒副作用，制備工藝簡(jiǎn)單，并可作成口服劑型(沖劑、片劑)、注射劑型等，使用方便。注射液能作肌肉注射，可作靜脈點(diǎn)滴。
(4)本發(fā)明的藥物能有效降低血漿腸源性?xún)?nèi)毒素水平，減輕對(duì)肝枯否細(xì)胞與血竇內(nèi)皮細(xì)胞激活，減少TNFα與IL-6的釋放，致使肝損傷與炎癥反應(yīng)減輕。這些藥理作用使大多數(shù)伴有腸源性?xún)?nèi)毒互血癥的肝病患者得以治愈，從而有效阻斷肝炎的慢性化(急性肝炎→慢性肝炎→肝硬化→肝癌)發(fā)展的危險(xiǎn)性。
(5)本發(fā)明的甘氨酸可使各種休克(如創(chuàng)傷、出血等)所伴之腸源性?xún)?nèi)毒素水平下降，有效改善休克的病情與預(yù)后，防止向多器官功能衰竭發(fā)展。
(6)經(jīng)臨床試驗(yàn)，表明甘氨酸治療急、慢性肝炎、脂肪肝與肝硬化均有顯著療效，且無(wú)毒副作用。與同時(shí)設(shè)立的對(duì)照組相比，結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，兩者呈顯著性差異，明顯優(yōu)于對(duì)照組。說(shuō)明本發(fā)明的療效顯著，藥理作用強(qiáng)。值得提出的是，當(dāng)前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)理想降低血中腸源性毒素水平的藥物，故預(yù)示著有很好的開(kāi)發(fā)前景。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1、甘氨酸在制備治療慢性肝炎的藥中的應(yīng)用。臨床研究在山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院傳染科住院病人中進(jìn)行的，分為對(duì)照組，24例，應(yīng)用甘利欣、門(mén)冬氨基酸基酸鉀鎂治療；甘氨酸治療組，24例，在對(duì)照組所用藥物基礎(chǔ)上加用甘氨酸治療，口服甘氨酸膠囊(內(nèi)含0.5g甘氨酸)4粒，每日3次，共服20天。經(jīng)甘氨酸治療后與治療前比較血漿內(nèi)毒素水平明顯下降(P＜0.02)；而對(duì)照組幾乎未風(fēng)變化(P＞0.20)。
權(quán)利要求
1.甘氨酸在制備治療急性和慢性肝炎的藥中的應(yīng)用。
2.甘氨酸在制備治療酒精性脂肪肝的藥中的應(yīng)用。
3.甘氨酸在制備降低各種肝炎、肝病所伴之血漿腸源性?xún)?nèi)毒素的藥物中的應(yīng)用。
4.甘氨酸在制備防止肝炎慢性化，即肝炎→脂肪肝→肝纖維化→肝硬化的藥中的應(yīng)用。
5.甘氨酸在制備治療各種休克患者所伴之血漿腸源性?xún)?nèi)毒素藥中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及甘氨酸在制藥中的應(yīng)用。該物質(zhì)具有明顯降低血漿腸源性?xún)?nèi)毒素水平,致使細(xì)胞因子TNFα、IL－6分泌減少,血漿轉(zhuǎn)氨酶活性明顯下降,肝損傷明顯減輕,肝功能明顯改善。經(jīng)分子生物學(xué)方法研究在國(guó)內(nèi)外首次證實(shí)本藥可明顯下調(diào)肝組織LBP(脂多糖結(jié)合蛋白)mRNA和CD
文檔編號(hào)A61K31/185GK1370525SQ0211002
公開(kāi)日2002年9月25日 申請(qǐng)日期2002年2月11日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月11日
發(fā)明者韓德五, 克明, 劉近春, 陳璽華, 趙龍鳳, 黃彤, 張巍 申請(qǐng)人:韓德五