專利名稱：一種中藥組合物在制備改善細(xì)胞因子表達(dá)藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物的新用途，具體地，涉及一種中藥組合物在 制備改善心肌梗死患者心肌炎癥細(xì)胞因子表達(dá)的藥物中的應(yīng)用。
背暈技術(shù)
急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)是危害人類健康的常 見疾病。心肌梗死后心肌組織釋放或暴露出多種自身抗原，可以導(dǎo)致機(jī)體自 身免疫反應(yīng)，導(dǎo)致心肌損傷。
近年來研究發(fā)現(xiàn)，免疫炎性反應(yīng)參與AMI后心室重塑，是AMI后加重心 臟損害的重要機(jī)制。(廖玉華，陶榮，程翔，童丹，胡燕,王敏,王朝暉.急性心肌梗 塞后心肌炎癥反應(yīng)及其意義.中國分子心臟病雜志,2002年6月第2巻第3 期)不同的細(xì)胞因子表達(dá)水平在此過程的發(fā)展和轉(zhuǎn)歸中發(fā)揮不同功效，腫瘤 壞死因子(TNF-a)是一種促炎細(xì)胞因子，在AMI的發(fā)展中起加速心肌壞死， 惡化心功能的作用。白細(xì)胞介素-10 (IL-10)主要抑制Th細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-Y 及TNF-a，進(jìn)而抑制中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞的浸潤、游走、增殖及活化，在 免疫反應(yīng)中起抗炎作用。
炎癥引起心室重構(gòu)的機(jī)制為致炎細(xì)胞因子不但可以直接作用于心肌細(xì) 胞，引起細(xì)胞肥大，而且對心肌外基質(zhì)也有較大作用。在AMI后的心肌愈 合中，基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)能夠分解所有的心肌間質(zhì)成分，造成心肌細(xì) 胞外間質(zhì)(ECM)的丟失。最初炎癥細(xì)胞因子的過度表達(dá)會導(dǎo)致MMPs活性增 加、纖維膠原缺失、進(jìn)行性心力衰竭，但長期炎癥細(xì)胞因子刺激則會導(dǎo)致 TIMPs的增加，減少M(fèi)MP/TIMP比值，增加纖維膠原。細(xì)胞因子引起心室 重構(gòu)，主要是通過信號傳導(dǎo)途徑和細(xì)胞凋亡過程參與的，這些細(xì)胞因子其下 游都要經(jīng)核轉(zhuǎn)錄因子-kb(NF-kb)通路。NF-kB參與調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)及炎癥過 程，促進(jìn)前炎癥因子(IL-l，TNF-a,IL-6)、趨化因子(IL-8 ,巨噬細(xì)胞炎癥蛋白 -l)等炎性因子的基因及TGF-P基因的轉(zhuǎn)錄。
4心肌梗死炎癥反應(yīng)的西藥治療包括(1):糖皮質(zhì)激素類藥物?？寡姿幬?糖皮質(zhì)激素和非甾體類抗炎藥物在梗死的早期應(yīng)用限制了梗死的愈合，加重 心室重構(gòu)；(2)非甾體類抗炎藥物。已有研究發(fā)現(xiàn)此類藥物，特別是特異性 環(huán)氧合酶(COX) -2抑制劑能顯著增加心血管事件(充血性心力衰竭、高血 壓、心肌梗死等)的發(fā)生率；非甾體類抗炎藥物除阿司匹林外，許多藥物包 括芬必得、消炎痛等研究則對AMI后的炎癥反應(yīng)顯示出有害作用；(3)他
汀類藥物；(4)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI); (5)卩-受體阻滯劑。(杜 武勛,劉長玉,劉梅,朱林平.心肌梗死后免疫炎癥反應(yīng)及中西藥物治療.中國 中西醫(yī)結(jié)合雜志,2007年9月第27巻第9期.)
本發(fā)明是在中國專利ZL 02146573.8的基礎(chǔ)上進(jìn)行的改進(jìn)發(fā)明，在此全文 引用該專利文件記載的內(nèi)容。中國專利ZL 02146573.8未記載該中藥組合物在 制備改善心肌梗死患者心肌炎癥細(xì)胞因子表達(dá)的藥物中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種中藥組合物在制備改善心肌梗死患者心肌炎癥 細(xì)胞因子表達(dá)的藥物中的應(yīng)用；
優(yōu)選地，該中藥組合物通過有效減少腫瘤壞死因子(TNF-oO的表達(dá)， 增加白細(xì)胞介素-10 (IL-10)的表達(dá)，改善心肌梗死患者的心功能。
所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成
黃芪150-450份、附子40-120份、人參或黨參75-225份、丹參75-225
份、葶藶子50-150份、香加皮或南五加皮60-180份、澤瀉75-225份、
玉竹25-75份、桂枝30-90份、紅花30-90份、陳皮25-75份；
優(yōu)選地，所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成
黃芪450份、附子112.5份、人參或黨參225份、丹參225份、
葶藶子150份、香加皮或南五加皮180份、澤瀉225份、玉竹75份、
桂枝90份、紅花90份、陳皮75份；
優(yōu)選地，所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成
黃芪250份、附子112.5份、人參或黨參200份、丹參120份、
葶藶子135份、香加皮或南五加皮150份、澤瀉200份、玉竹60份、桂枝75份、紅花75份、陳皮60份。
本發(fā)明中藥組合物的活性成分可以由常規(guī)的提取工藝[如范碧亭《中藥 藥劑學(xué)》(上?？茖W(xué)出版社1997年12月第1版)]制得，更優(yōu)選地，所述
中藥組合物的活性成分由下列步驟制成
(1) 將黃芪、葶藶子、澤瀉、人參或黨參、香加皮或南五加皮用7-9 倍量70%乙醇提取，濾過，濃縮提取液至在6(TC熱測時(shí)相對密度為1.25-1.30 的清膏；
(2) 提取桂枝、陳皮的揮發(fā)油；
(3) 附子、丹參、玉竹、紅花加6-10倍量水煎煮2次，每次2小時(shí)，合 并提取液，濾過；桂枝、陳皮提油后的水溶液濾過，收集水溶液濾液，再加 6--IO倍量水煎煮殘?jiān)麵小時(shí)，濾過，合并水溶液；將上述所得的各種水溶液 合并，濃縮至相對密度為1.25-1.30清膏，攪拌中加入乙醇，至醇濃度70%， 靜置，濾過，濾液濃縮至在6(TC熱測時(shí)相對密度為1.25-1.30清膏。
本發(fā)明還提供了該中藥組合物膠囊劑的制備方法
(1) 將黃芪、葶藶子、澤瀉、人參或黨參、香加皮或南五加皮按照比 例量稱取加8倍量70%乙醇回流提取2次，第一次3小時(shí)，第二次2小時(shí)，合并 提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1.25-1.30 (60。C熱 測)的清膏，備用；
(2) 桂枝、陳皮按照比例量蒸餾提取揮發(fā)油，提油后的水溶液濾過， 備用，殘?jiān)偌?倍量水煎煮1小時(shí)，濾過，合并水煎液，備用；
(3) 附子、丹參、玉竹、紅花加水9倍量煎煮2次，每次2小時(shí)，合并提 取液，濾過，與步驟(2)中桂枝、陳皮水煎液合并，濃縮至相對密度為 1.25-1.30 (6(TC熱測)清膏，攪拌中加入乙醇，至醇濃度70%， 4"C以下靜置 24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1.25-1.30 (60。C熱 測)清膏，與歩驟(1)的醇提清膏混合，65-7(TC烘干；
(4) 將歩驟(3)所得干膏混合粉碎成100目粉，力卩70%乙醇適量制粒， 噴入桂枝、陳皮揮發(fā)油，混勻，裝膠囊，即得。
本發(fā)明中藥組合物中，作為活性組分的原料藥的拉丁名及其加工方法來 自《中藥大辭典》(1977年7月，第一版，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社)和《中國藥典》(2005年版，化學(xué)工業(yè)出版社)。
本發(fā)明中藥組合物還可以按常規(guī)的制劑工藝，例如，范碧亭《中藥藥劑
學(xué)》(上?？茖W(xué)出版社1997年12月第1版)記載的制備工藝，制成藥劑學(xué)可 接受的任意常規(guī)劑型，例如膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑等。 本發(fā)明的應(yīng)用中，所述中藥組合物制劑劑型為膠囊劑、片劑、顆粒劑、 散劑、口服液或丸劑，為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)，需在制備這些劑型時(shí)加入藥
學(xué)可接受的輔料，例如填充劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味 劑、矯味劑、防腐劑、基質(zhì)等。填充劑包括淀粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、甘 露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；崩解劑包括淀粉、預(yù)膠化淀粉、微 晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯(lián) 羧甲基纖維素鈉等；潤滑劑包括硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二 氧化硅等；助懸劑包括聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙 基甲基纖維素等；粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維 素等；甜味劑包括糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味 劑包括甜味劑及各種香精；防腐劑包括尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、 山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等；基質(zhì)包括PEG6000， PEG4000，蟲蠟等。為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)中藥藥劑學(xué)，需在制備這些劑型 時(shí)加入藥學(xué)可接受的其它輔料(范碧亭《中藥藥劑學(xué)》，上?？茖W(xué)出版社1997 年12月第1版中各劑型記載的輔料)。
本發(fā)明中藥組合物的用量，按活性組分原料藥總重量計(jì)，為4-20克/日， 可每日服用一次，優(yōu)選為分2-4次服用，還優(yōu)選為6-12克/日，分2-4次服用， 更優(yōu)選為7.59克/日，分3次服用。


圖l AMI大鼠1周、4周末治療前后超聲心動圖改變ED代表舒張末期 階段，ES代表收縮末期階段。與S組相比，超聲心動圖顯示MI組大鼠左心室 擴(kuò)大和收縮功能降低，Ml-Q組顯著減少左心室擴(kuò)張并提高射血分?jǐn)?shù)。
圖2 AMI大鼠治療前后心肌病理改變HE及免疫組化染色HE染色計(jì) 數(shù)心肌組織淋巴細(xì)胞，MI組梗死區(qū)和非梗死區(qū)均可見大量淋巴細(xì)胞浸潤，S
7組心肌組織未見明顯淋巴細(xì)胞浸潤，本發(fā)明藥物治療對MI后浸潤心肌組織的 淋巴細(xì)胞數(shù)無明顯影響。免疫組化染色顯示心肌組織細(xì)胞因子主要表達(dá)在梗
死區(qū)存活的心肌細(xì)胞和非梗死區(qū)心肌細(xì)胞胞漿內(nèi)，本發(fā)明藥物顯著降低TNF -a蛋白表達(dá)并增加IL-lO蛋白表達(dá)
為闡明本發(fā)明中藥組合物改善心肌梗死患者心肌炎癥細(xì)胞因子表達(dá)的
活性，用按實(shí)施例方法所制得的藥物(以下稱本發(fā)明藥物)進(jìn)行了下列試驗(yàn)。 1.材料與方法
1. 1建模分組
健康、雄性SD大鼠，體重180 250g，來自華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院動 物中心。鹽酸戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔內(nèi)注射麻醉。經(jīng)口氣管插管行小動物 呼吸機(jī)輔助呼吸，潮氣量2-3ml，吸呼比l: 2，呼吸頻率60次/分。經(jīng)左前 胸廓旁第3、 4肋間開胸，暴露心臟，剪開心包，在肺動脈圓錐和左心耳交 界處用3-0號絲線結(jié)扎左前降支(LAD)近端制成心肌梗死模型，縫合心腔。 術(shù)后存活者隨機(jī)分為本發(fā)明藥物(石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn))治療 (M工--Q)組及梗死組(MI)組，進(jìn)一歩分為一周治療亞組(Ml--Q丄 一周梗 死亞組(ML)、四周治療亞組(MI-Q，)及四周梗死亞組(ML,)，每組各15 只。另以心臟相同部位穿線但不結(jié)扎前降支的同種大鼠作為假手術(shù)(S)組， 一周亞組(SJ及四周亞組(S.,)各12只。
1.2給藥方法
MI-Q組按照本發(fā)明藥物在臨床患者用量的50倍，即4g/kg/d溶于生理 鹽水總量約1. 5ml，于術(shù)后次日灌胃給藥，M工組和S組大鼠在相同時(shí)間點(diǎn)給 予等量生理鹽水灌胃。
1.3心臟超聲評價(jià)心功能
使用GEV工VID7超聲儀，探頭頻率lOMHz。將大鼠麻醉后仰臥固定，獲
取胸骨旁左室長軸和乳頭肌水平短軸切面。檢測指標(biāo)包括左室舒張末期內(nèi)徑 (LVEDd)、射血分?jǐn)?shù)(EF)和短軸縮短率(FS)。 1.4血流動力學(xué)測定
大鼠麻醉后，剪開頸部皮膚，分離出右側(cè)頸動脈，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，用動脈 夾夾住近心端。動脈穿刺插入lmm聚乙烯導(dǎo)管，松開動脈夾，將導(dǎo)管緩慢插 入左心室。通過同步描記電生理記錄儀上的壓力換能器測定心率(HR)、左室收縮末壓力(LVSP)、左室舒張末壓力(LVEDP)，并計(jì)算左室壓力最大升 降速率(±dp/dt)。
1.5心肌組織標(biāo)本留取經(jīng)導(dǎo)管注入10X氯化鉀2 3ml，使心臟停搏于 舒張期，開胸切取心臟，于左室長軸中點(diǎn)處垂直于長軸將心臟分為心尖半和 心底半。
1. 6組織病理石蠟包埋心肌標(biāo)本連續(xù)切片3 " m厚，經(jīng)H-E染色后封片 鏡檢。每張切片于高倍鏡下分別在梗死區(qū)和非梗死區(qū)隨機(jī)取五個(gè)視野計(jì)數(shù)淋 巴細(xì)胞，以均數(shù)/高倍鏡作為該切片的淋巴細(xì)胞浸潤數(shù)。
1.7免疫組化檢測心肌組織細(xì)胞因子表達(dá)將待檢心肌標(biāo)本用10%中性 緩沖甲醛液固定18h。脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋。連續(xù)切片3um厚，撈 片于多聚賴氨酸防脫處理過的載玻片上。切片脫蠟至水。3XHA室溫10分 鐘滅活內(nèi)源性過氧化物酶。沖洗后PBS浸泡5分鐘。95。C微波10分鐘修復(fù) 抗原活性。5%正常血清封閉，分別滴加1:200稀釋抗人鼠IL-10和TNF-a 抗體，4"C孵育過夜。PH7. 4磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗5分鐘，3次。滴加 生物素化相應(yīng)二抗(Santa Cruz, California, USA), 37。C孵育20分鐘。PBS 沖洗5分鐘，3次。滴加鏈霉親合素一生物素一過氧化物酶復(fù)合物一辣根過 氧化物酶(SABC-服P)， 37。C孵育20分鐘。PBS沖洗5分鐘，3次。二氨基 聯(lián)苯胺(DAB)室溫下顯色至滿意，自來水終止反應(yīng)。蘇木素復(fù)染細(xì)胞核30s， 洗去多余染液，酒精梯度脫水后封片，顯微鏡下觀察。在多功能真彩色病理 圖像分析系統(tǒng)的10X40倍光鏡下，每張切片選5個(gè)視域，測量各細(xì)胞因子 在各切片中的表達(dá)的單位面積積分光密度(IOD/Area)進(jìn)行半定量分析。
1.8實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測細(xì)胞因子表達(dá)分別取梗死區(qū)周邊心肌各 100mg剪碎，應(yīng)用Trizol 1000|4勻漿、抽提組織總RNA。。應(yīng)用RT-PCR法 逆轉(zhuǎn)錄至cDNA，所有引物均參照Gengbank提供的序列，用Primer5. 0合成， 由上海生物工程公司合成。引物設(shè)計(jì)如下TNF-a (465bp):上游5， -CTG GGC AGC GTT TAT TCT-3'，下游5' --TTG CTT CTT CCC TGT TCC-3'，退 火溫度54。C; IL—10(273bp):上游5， -AGT CAG CCA GAC CCA CAT-3，， 下游5， -GGC AAC CCA AGT AAC CCT-3，，退火溫度56。C; GAPDH(210bp): 上游5' -GAT GGT GAA GGT CGG TGT G--3，，下游5， -GAG GTC AAT GAA GGGGTCG-3'，退火溫度60。C。反應(yīng)條件應(yīng)用SYBR Green I熒光染料技術(shù)行實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)，按照下列程序第一次循環(huán)94"C2分鐘，其后以94 。C變性30秒；57。C退火30秒，72i:延伸30秒，循環(huán)45周期，最后72XM0 分鐘中止。以陰性對照GAPDH作參考，計(jì)算機(jī)分析Ct值，即每個(gè)反應(yīng)管內(nèi) 熒光強(qiáng)度達(dá)到系統(tǒng)認(rèn)為的有目的DNA合成時(shí)的循環(huán)數(shù)，用以評定各因子mRNA 的實(shí)時(shí)定量表達(dá)水平。
1. 9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量數(shù)據(jù)以^ ±s表示，采用SPSS 10. 0軟件用t檢驗(yàn)、
方差分析和直線相關(guān)分析等處理。
2. 結(jié)果
2. 1本發(fā)明藥物對AMI大鼠心功能的影響與S組相比，超聲心動圖顯 示MI組大鼠左心室擴(kuò)大和收縮功能降低，Ml-Q組顯著減少左心室擴(kuò)張并提 高射血分?jǐn)?shù)(見圖1)。
血流動力學(xué)結(jié)果也顯示藥物治療后左室壓力最大升降速率(±dp/dt) 明顯增強(qiáng)(見表l)。
兩種方法檢測結(jié)果均顯示，用本發(fā)明藥物治療4周比用藥1周的心功能 改善效果更顯著。
表l: AMI大鼠1周、4周水治療甜后超聲、血流動力學(xué)改變(x土s)
組別MI,SiMI4MI-Q4s4
LVEDd(謹(jǐn))5.3±0.32'4.4±0.33.4±0.26.1土0.8"4.6±0.54'3.1 ±0.5
EF (%)54±17h75±64)85±843±3"80土8-"93土3
FS (%)27±I1')41±64)50±817±2"41±93)57±4
HR (bpm)408±18.8409±56.7376±8.5459 ±36430 ±7421 ±25
LVSP(睡Hg)97±8.32)85 ±18.9128±14.388±4')119±331133±5
LVEDP(mmHg)69±30.92)42±27.54)4±1.530土51)5±63)-4.6±5.5
+Dp/dt(mmHg/s)2037 ±2672)2197±3014)5312±4892560土1991)4435 ±547"6610±256
-Dp/dt(mmHg/s)-1944±3362)-1945士3214)-4675 ±226-2226± 199"-3538±2174)-5610 ±269
與假手術(shù)組比較，"PO.01, "PO.05: LjMI纟n相比較，"Po.oi，叩<0.05。 2. 2本發(fā)明藥物對認(rèn)I大鼠心臟淋巴細(xì)胞和心肌細(xì)胞因子表達(dá)的影響:
HE染色計(jì)數(shù)心肌組織淋巴細(xì)胞，M工組梗死區(qū)和非梗死區(qū)均可見大量淋巴細(xì) 胞浸潤，S組心肌組織未見明顯淋巴細(xì)胞浸潤，本發(fā)明藥物治療對MI后浸潤
心肌組織的淋巴細(xì)胞數(shù)無明顯影響。免疫組化染色顯示心肌組織細(xì)胞因子主 要表達(dá)在梗死區(qū)存活的心肌細(xì)胞和非梗死區(qū)心肌細(xì)胞胞漿內(nèi)，本發(fā)明藥物顯
著降低TNF-a蛋白表達(dá)并增加IL-10蛋白表達(dá)(見圖2)。與假手術(shù)組相比，MI組實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測心肌組織TNF-a和 IL-10mRNA表達(dá)顯著增加，TNF-a表達(dá)水平4周時(shí)較1周時(shí)升高，IL-10表 達(dá)4周時(shí)稍低于1周，TNF-a/IL-10比值明顯升高。MI-Q組本發(fā)明藥物治 療后心肌組織TNF-a表達(dá)顯著降低，IL-10表達(dá)顯著增加，TNF-a/ IL-IO 比值下降(見表2)
表2: AMI大鼠1周、4周末治療前后細(xì)胞因子mRNA表達(dá)改變("±s)
組別MI,sMI4MI-Q4s4
TNF-a26.44士7.112111.73士0.7094)0.63±0.181136.9士33.948"4.41±2.183>0.28±0.145
IL-107.19土3.0762)85.46±30.1904)0.84±0.1585.12土1.148')181.8士27.083'0.32±0.101
TNF-a/ IL-103.88士0.866')0.02±0.0053)0.78±0.32326.33±10.154n0.03土0.0073)0.94±0.132
與假手術(shù)組比較，')PO.Ol， 2'PO.05; -LjM!組相比較，3iP<001，叩<0.05。
3.結(jié)論
以上研究采用本發(fā)明藥物治療AMI大鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)心肌梗死區(qū)浸潤的
淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)在治療組與梗死組無顯著差異，即全身炎癥反應(yīng)招募的免疫反
應(yīng)無明顯差別；而心肌梗死后健存心肌細(xì)胞表達(dá)的細(xì)胞因子治療組與梗死組 存在顯著差異。心肌梗死后心肌細(xì)胞表達(dá)TNF-ou IL-10等細(xì)胞因子，說明 心肌細(xì)胞在病理狀態(tài)下具有炎癥因子自分泌作用，這些細(xì)胞因子參與AMI后 炎癥反應(yīng)，當(dāng)促炎因子高于抗炎因子時(shí)，可導(dǎo)致心肌壞死后心室重塑，心功 能下降。心肌梗死大鼠給予本發(fā)明藥物治療，尤其是在持續(xù)用藥4周后，心 肌細(xì)胞促炎因子TNF-a表達(dá)水平降低，抗炎因子IL/-10表達(dá)水平升高，TNF-a / IL-10比值顯著降低，同時(shí)監(jiān)測這組大鼠心功能參數(shù)如左室舒張末期內(nèi) 徑、射血分?jǐn)?shù)、短軸縮短率和左室壓力最大升降速率等皆明顯改善。
綜上所述，本發(fā)明藥物能夠顯著減少腫瘤壞死因子(TNF-ot)的表達(dá)， 增加白細(xì)胞介素-10 (IL-10)的表達(dá)，改善心肌梗死患者心肌炎癥細(xì)胞因子 表達(dá)，改善心肌梗死患者的心功能。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例h本發(fā)明藥物膠囊劑的制備 處方黃芪450g 附子112.5g人參225g丹參225g葶藶子150g 香加皮180g澤瀉225g 紅花90g玉竹75g陳皮75g桂枝90g 制備方法
(1) 將黃芪、葶藶子、澤瀉、人參、香加皮按照上述處方加8倍量70% 乙醇回流提取2次，第一次3小時(shí)，第二次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液 減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1.25-L30 (6CTC熱測)的清膏，備用；
(2) 桂枝、陳皮按照處方蒸餾提取揮發(fā)油，提油后的水溶液濾過，備 用，殘?jiān)偌?倍量水煎煮1小時(shí)，濾過，合并水煎液，備用；
(3) 附子、丹參、玉竹、紅花加水9倍量煎煮2次，每次2小時(shí)，合并提 取液，濾過，與步驟(2)中桂枝、陳皮水煎液合并，濃縮至相對密度為 1.25-1.30 (6(TC熱觀U)清膏，攪拌中加入乙醇，至醇濃度70%， 4。C以下靜置 24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1.25-1.30 (6(TC熱 測)清膏，與歩驟(1)的醇提清膏混合，65-7(TC烘干；
(4) 干膏混合粉碎成100[l粉，力U70。/。乙醇適量制粒，噴入桂枝、陳皮 揮發(fā)油，混勻，裝膠囊，制成1000粒，即得。
實(shí)施例2:本發(fā)明藥物片劑的制備 處方
黃芪150g 附子40g人參225g丹參225g 葶藶子50g 香加皮180g 澤瀉75g 玉竹75g 桂枝30g 紅花90g 陳皮25g 制備方法
(1) 將黃芪、葶藶子、澤瀉、人參、香加皮按照上述處方加8倍量70% 乙醇回流提取2次，第一次3小時(shí)，第二次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液 減與歩驟(1)的醇提清膏混合，65-7(TC烘干；
(2) 桂枝、陳皮按照處方量蒸熘提取揮發(fā)油，提油后的水溶液濾過， 備用，殘?jiān)偌?倍量水煎煮1小時(shí)，濾過，合并水煎液，備用；
(3) 附子、丹參、玉竹、紅花加水9倍量煎煮2次，每次2小時(shí)，合并提 取液，濾過，與步驟(2)中桂枝、陳皮水煎液合并，濃縮至相對密度為 1.25-1.30 (6(TC熱測)清膏，攪拌中加入乙醇，至醇濃度70%， 4。C以下靜置 24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1.25-1.30 (6(TC熱測)清膏，與步驟(1)的醇提清膏混合，65-7(TC烘干； (4)按常規(guī)制劑方法制成片劑。
實(shí)施例3:本發(fā)明藥物口服液的制備
處方
黃芪250g附子112.5g黨參200g丹參120g葶藶子135g 南五加皮150g澤瀉200g玉竹60g桂枝75g紅花75g 陳皮60g 制備方法按常規(guī)制劑方法制成口服液。
權(quán)利要求
1、一種中藥組合物在制備改善心肌梗死患者心肌炎癥細(xì)胞因子表達(dá)的藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成黃芪150-450份、附子40-120份、人參或黨參75-225份、丹參75-225份、葶藶子50-150份、香加皮或南五加皮60-180份、澤瀉75-225份、玉竹25-75份、桂枝30-90份、紅花30-90份、陳皮25-75份。
2、 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物由如下重量份的 原料藥制成黃芪450份、附子112.5份、人參或黨參225份、丹參225份、 葶藶子150份、香加皮或南五加皮180份、澤瀉225份、玉竹75份、 桂枝90份、紅花90份、陳皮75份。
3、 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物由如下重量份的 原料藥制成黃芪150份、附子40份、人參或黨參225份、丹參225份、 葶藶子50份、香加皮或南五加皮180份、澤瀉75份、玉竹75份、 桂枝30份、紅花90份、陳皮25份。
4、 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物由如下重量份的 原料藥制成黃芪250份、附子112.5份、人參或黨參200份、丹參120份、 葶藶子135份、香加皮或南五加皮150份、澤瀉200份、玉竹60份、 桂枝75份、紅花75份、陳皮60份。
5、 如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述中藥組合物的活 性成分由下列歩驟制成(1) 將黃芪、葶藶子、澤瀉、人參或黨參、香加皮或南五加皮用7-9 倍量70%乙醇提取，濾過，濃縮提取液至在6(TC熱測時(shí)相對密度為1.25-1.30 的清膏；(2) 提取桂枝、陳皮的揮發(fā)油；(3) 附子、丹參、玉竹、紅花加6-10倍量水煎煮2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過；桂枝、陳皮提油后的水溶液濾過，收集水溶液濾液，再加6-10倍量水煎煮殘?jiān)?小時(shí)，濾過，合并水溶液；將上述所得的各種水 溶液合并，濃縮至相對密度為1.25-1.30清膏，攪拌中加入乙醇，至醇濃度 70%,靜置，濾過，濾液濃縮至在6(TC熱測時(shí)相對密度為1.25-1. 30清膏。
6、 如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述中藥組合物作 為活性成分的藥物制劑為膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑。
7、 根據(jù)權(quán)利要求6所述藥物膠囊劑的制備方法，其特征在于，它是由以下 步驟組成(1) 將黃芪、葶藶子、澤瀉、人參或黨參、香加皮或南五加皮按照比 例量稱取加8倍量70%乙醇回流提取2次，第一次3小時(shí)，第二次2小時(shí)，合并 提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1.25-1.30 (6(TC熱 測)的清膏，備用；(2) 桂枝、陳皮按照比例蒸餾提取揮發(fā)油，提油后的水溶液濾過，備 用，殘?jiān)偌?倍量水煎煮1小吋，濾過，合并水煎液，備用；(3) 附子、丹參、玉竹、紅花加水9倍量煎煮2次，每次2小時(shí)，合并提 取液，濾過，與步驟(2)中桂枝、陳皮水煎液合并，濃縮至相對密度為 1.25-1.30 (60。C熱測)清膏，攪拌中加入乙醇，至醇濃度70%， 4"C以下靜置 24小時(shí)，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對密度為1.25-1.30 (6(TC熱 測)清膏，與歩驟(1)的醇提清膏混合，65-7(TC烘干；(4) 將步驟(3)所得干膏混合粉碎成100目粉，加70%乙醇適量制粒， 噴入桂枝、陳皮揮發(fā)油，混勻，裝膠囊，即得。
8、 如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，該中藥組合物在制 備減少腫瘤壞死因子表達(dá)藥物中的應(yīng)用。
9、 如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，該中藥組合物在制 備增加白細(xì)胞介素-10表達(dá)藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中藥組合物在制備改善心肌梗死患者心肌炎癥細(xì)胞因子表達(dá)的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明中藥組合物由黃芪、人參、丹參等11味中藥組成，能夠有效減少心肌梗死患者腫瘤壞死因子(TNF-α)的表達(dá)，增加白細(xì)胞介素-10的表達(dá)，改善心肌梗死患者的心功能。
文檔編號A61K36/8969GK101590181SQ20081005518
公開日2009年12月2日 申請日期2008年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月30日
發(fā)明者安軍永, 李向軍, 超 王, 鄭立發(fā) 申請人:河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司