專利名稱：：一種抗腫瘤及輔助腫瘤放化療的中藥組合物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種用于抗腫瘤和輔助腫瘤放化療過程的中藥組合物，具體涉及一種由中藥原料藥黃芪、膠陀螺、斑蝥組成的中藥組合物，屬丁中藥抗癌藥物領域。
背景技術：
：據(jù)世界衛(wèi)生組織1997年報道，1996年全球58億人口中因癌癥死亡約有630萬人，約占總死亡人數(shù)的12%，是僅僅次于心血管疾病的第二大死因。從1996年以來全球每年新確診的腫瘤患者均在1000萬人以上，到1999年底全球腫瘤患者總數(shù)已超過4000萬。世界衛(wèi)生組織2001年報道，世界癌癥發(fā)病率和死亡率比1990年上升了22%，今后20年還將上升大約50%。因此，治療和預防腫瘤疾病的藥物成為整個醫(yī)藥行業(yè)的研發(fā)熱點。隨著腫瘤發(fā)病率的上升和新藥的不斷涌現(xiàn)，抗癌市場將發(fā)生巨大變化，研究開發(fā)和生產(chǎn)新型抗癌藥特別是天然抗癌藥物成為醫(yī)藥市場上增長的新熱點。在我國，中草藥及其活性成分的抗腫瘤藥物研究意識國家重點基礎研究發(fā)展規(guī)劃項目之一。我國20世紀90年代上市的抗腫瘤藥物中出米托蒽醌、烴基脲和順鉑等少數(shù)幾種抗腫瘤藥物為化學合成外，已上市(或扔在研制階段)的一些列抗腫瘤藥物(含人體免疫調(diào)節(jié)劑)均為從天然草藥中提取的成分。中草藥提取物抗癌的主要機制是(1)抑殺腫瘤細胞；(2)調(diào)整機體免疫等抗癌潛能，以改善患者的生命質(zhì)量，延長生命期；(3)提高放化療效果的增敏作用；(4)降低放化療毒副作用的減毒作用。黃芪是一味傳統(tǒng)中藥，能補虛，可固可托，具有益氣、補虛、升陽、固表排膿、效忠等功效。黃芪在中醫(yī)的應用，主要有以下四點一是補氣升陽，用于氣虛引起的脫肛、子宮脫垂、崩漏、眩暈乏力等；二是固表斂汗，多用于體虛表弱所致的自汗，如表氣不固，外感風寒而汗出。三是托瘡排膿，用于瘡瘍久不潰破而內(nèi)陷，有促進潰破及局限作用，用于瘡瘍潰破后久不收口，有生肌收口之作用；四是利尿消腫，用于陽氣不足所致的虛性水腫。黃芪多糖是黃芪中的生物活性成分，具有抗腫瘤作用。其抗腫瘤活性主要通過調(diào)節(jié)細胞免疫功能，增強IL-2/LAK抗腫瘤作用或促進抗癌細胞因子的分泌、IL-2受體的表達、LAK前提細胞的增生、防止過氧化等作用達到對腫瘤細胞的殺傷和抑制。近幾年的研究表明，黃芪多糖還可以通過誘發(fā)腫瘤細胞眺望的機制達到抗腫瘤作用。臨床上，以黃芪為原料制備黃芪多糖注射液具有益氣養(yǎng)元、扶正驅(qū)邪、養(yǎng)心通脈、健脾利濕作用，用于心氣虛損、血脈瘀阻之病毒性心肌炎、心功能不全及脾虛濕困之肝炎。膠陀螺，別名豬嘴菇，木海參，木海螺，為膠陀螺科真菌膠陀螺Budgariainguinans(Pers)的子實體，屬子囊菌類。產(chǎn)于吉林、遼寧、黑龍江，民間常食用。膠陀螺中含多種活性成分和營養(yǎng)元素及微量元素，如麥角甾醇、半乳糖醇、草酸、多種氨基酸、無機元素、糖、脂肪、蛋白質(zhì)等。斑蝥早在《仁齋直指方》中就有記載，可用于乳癌及腹部癌。古人常用"斑蝥煮雞蛋，棄斑蝥食蛋"的偏方治療肝癌及其它消化洗脫癌癥，至今仍在民間沿用。中醫(yī)學認為斑蝥性寒味辛，有毒。據(jù)《神農(nóng)本草經(jīng)》記載，斑蝥可以治療癰疽、潰瘍、廯瘡等病癥，具有攻毒蝕疸、破血散結的作用。臨床發(fā)現(xiàn)其還有多種新用途，治療一些疑難雜癥具有獨特的療效，如治療風濕痛、神經(jīng)痛、梅核氣、斑禿、乳腺增生、鼻炎、肝炎、腫瘤等。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種具有抗腫瘤作用和能夠抑制腫瘤放化療后白細胞減少、機體免疫降低的中藥組合物。本發(fā)明的研究人員在研究過程中發(fā)現(xiàn)，將黃芪、膠陀螺和斑蝥組合使用，不僅能夠抑制腫瘤細胞的生長，還能提高腫瘤患者的機體免疫力，升高因放化療而導致的白細胞減少數(shù)目，具有很好的協(xié)同治療作用。本發(fā)明中藥組合物由中藥原料藥黃芪、膠陀螺和斑蝥組成，具體組成比例為黃甚80-200份膠陀螺10-80份斑蝥0.1-1份優(yōu)選地組成比例為黃芪100-180份膠陀螺30-80份斑蝥0.3-0.8份更優(yōu)選的原料藥的組成比例為黃甚150份膠陀螺60份斑蝥0.5份本發(fā)明的還一目的是提供制備本發(fā)明組合物活性成分的方法。本發(fā)明中，組合物可以是各自原藥材經(jīng)粉碎成細粉后直接入藥，也可以是提取其有效成分后組合入藥。本發(fā)明中，當以提取的有效成分組合入藥時，提取的方法可以是合并提取，也可以是分別提取，還可以是合并其中兩者提取再與第三味藥材的提取物合并。優(yōu)選地，本發(fā)明組合物活性成分的提取制備方法為黃芪先以60%80%的乙醇回流提取兩次后，合并乙醇提取液，減壓濃縮，除去乙醇，將濃縮物上大孔吸附樹脂柱，先以蒸餾水洗脫至無糖，收集水洗脫液備用；水洗至無糖后，再用70%的乙醇洗脫至無黃芪皂苷，合并收集70%乙醇洗脫部分，減壓濃縮，干燥，得黃芪皂苷總提物，備用；黃芪藥渣和膠陀螺合并，以上述收集的水洗脫液為溶媒，煎煮提取2-3次，合并水煎煮提取液，減壓濃縮至相對密度約為1.15-1.30，加入95%的乙醇，調(diào)節(jié)濃縮液使?jié)饪s液乙醇相對含量約為80%，攪拌均勻后，室溫靜置12小時以上，過濾或離心，不容物加適量蒸餾水溶解，再往水溶解后的藥液中加95%的乙醇，使藥液乙醇相對含量為60%，充分攪拌均勻，室溫靜置12小時以上，過濾或離心，不容物干燥，得多糖提取物，備用；斑蝥粉碎成粗粉，以蒸餾水浸泡提取3-4次，合并浸泡提取液，減壓濃縮，干燥，得斑蝥提取物，備用；將上述三步驟中所得的提取物混合均勻，即得組合物活性提取物。本發(fā)明組合物活性成分的提取還可以通過如下步驟制備稱取黃芪、膠陀螺，粉碎合并，以水煎煮提取2-3次，過濾，合并濾液，濾液減壓濃縮至相對密度約為1.20，加95%的乙醇，調(diào)節(jié)使?jié)饪s液中乙醇相對含量約為80%，充分攪拌均勻，室溫靜置12小時以上，過濾或離心，濾液或上清液備用，沉淀以適量水溶解，繼續(xù)加入95%的乙醇使藥液中乙醇相對含量為60%，充分攪拌均勻，室溫靜置12小時以上，離心或過濾，上清液或濾液備用，沉淀真空干燥，得多糖提取物，備用；兩次醇沉的上清液或濾液合并，減壓濃縮至無醇味，濃縮液上大孔吸附樹脂柱，先以蒸餾水洗脫除樹脂柱去除一些水溶性成分，再改用60%的乙醇洗脫約3個柱床體積，收集60%的乙醇洗脫部分，合并，減壓濃縮，干燥，得皂苷提取物，備用；斑蝥加水浸泡提取2-4次，合并水浸泡提取液，減壓濃縮，干燥，得斑蝥提取物，備用；將上所得提取物合并，充分混合均勻，即得本發(fā)明組合物活性提取物組合物。本發(fā)明中，斑蝥還可以以斑蝥素或去甲斑蝥素替代。本發(fā)明組合物根據(jù)用藥需要，加入制藥上可接受的常規(guī)輔料，可制成各種所需的口服劑型，如制成片劑、膠囊劑、顆粒劑等。以下從本發(fā)明組合物藥理藥效實施例來說明本發(fā)明所取得的有益效果。以下藥理實施例中，均采用制備實施例1所得的組合物活性提取物為實驗藥。給藥的三個劑量組為高劑量組80mg/kg、40mg/kg、20mg/kg。一、抗腫瘤作用1、對小鼠移植性肉瘤的抑制作用取接種傳代小鼠S^，在勻漿器中加入生理鹽水，制成小鼠Swo瘤勻漿液，再以生理鹽水l:3稀釋，然后以0.2ml/只諸如小鼠左腋下皮下，24小時后將已接種的小鼠隨機分為對照組、本發(fā)明組合物三個劑量組，每組10只。給藥組小鼠每日灌胃給藥1次，每次0.2mL，對照組給予等量生理鹽水，共7天。停藥次日處死小鼠，稱體重并細心剝離皮下瘤塊，與EM50電子天平上稱取瘤重，按照公式"抑瘤率=(對照組瘤重平均值-給藥組瘤重平均值)/對照組瘤重平均值xlOO"，計算抑瘤率。本發(fā)明組合物三個劑量組對小鼠移植性肉瘤S18()的瘤體生長均有明顯的抑制作用。其中高劑量組的抑瘤率為59.8%，與對照組比較具有顯著性差異(PO.Ol)，說明本發(fā)明組合物對小鼠移植性肉瘤S，具有抑制或殺傷作用。見表1。表1對小鼠S18。肉瘤生長抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與對照組相比*P<0.05，**P<0.012、對小鼠移植性肝癌H22的抑制作用無菌抽取接種七天后的肝癌H22荷瘤小鼠腹水，用生理鹽水按l:3的比例稀釋成肝癌H22懸液，立即接種于小鼠右前肢腋窩處皮下，每只接種0.2mL，接種24小時后隨機分為對照組、本發(fā)明高、中、低二個劑量組，每組10只。給藥組小鼠每日灌胃給藥l次，0.2mL/只，對照組給予等量生理鹽水，每組連續(xù)給藥7天。于末次給藥24小時后脫頸椎處死小鼠，剝?nèi)∧[瘤稱重，求出抑瘤率。結果表明，本發(fā)明組合物三個劑量組對小鼠肝癌H22腹水轉實體的瘤體生長均有明顯的抑制作用，其中高劑量組的抑瘤率為73.4%，與對照組比較差異具有顯著性(PO.Ol)，說明本發(fā)明組合物對小鼠一致性肝癌H22具有抑制或殺傷作用，見表2。表2對移植性肝癌H22的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與對照組相比*P<0.05，**P<0.01二、對小鼠免疫功能的影響1、對荷瘤小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響取小鼠40只，隨機分為4組，每組10只正常對照組、腫瘤對照組，受試藥高劑量組和受試藥低劑量組，除正常對照組外，其余小鼠按S咖項下小鼠操作造模，末次給藥后30min，每鼠腹腔注射5。/。CRBC生理鹽水懸浮液0.2mL，24小時后處死動物，用2.5mLHank's液沖洗每組腹腔，滴約0.2mL沖洗液于載玻片上，37。C溫孵30min，用NS沖去玻片上未貼壁的細胞。甲醇固定，Giemsa-PBS液染色(PH6.5)，晾干，油鏡下觀察IOO個巨噬細胞，并計算吞噬CRBC的百分率及吞噬指數(shù)。結果表明，腫瘤對照組的巨噬細胞的吞噬功能明顯降低，而本品兩個劑量組能提高腫瘤模型小鼠的吞噬功能，從而提高機體的免疫力。見表3表3對荷S18o肉瘤小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響結果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>2、對荷S^肉瘤小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)的碳粒廓清能力的影響取小鼠40只，隨機分為4組，每組10只正常對照組、腫瘤對照組、本發(fā)明組合物高、低劑量組，造模同試驗l，末次給藥后30min，各組小鼠均iv20M印度墨汁0.1ml/10g，于注射后2min及12min分別由眼眶取學20W，溶于2ml0.1%*2<:03溶液中，波長600nm處測定各樣本的光密度值(OD)，用0.1%Na2CO3溶液作空白對照。末次取血后，立即脫頸椎處死小鼠，取出肝臟、脾臟，分別稱重記錄，計算清除速度和吞噬指數(shù)。結果表明，腫瘤對照組的小鼠在造模后RES功能顯著降低，表現(xiàn)為RES對碳粒的清除速度和吞噬指數(shù)下降；本發(fā)明組合物的兩個劑量組與腫瘤對照組比較，碳粒廓清能力得到顯著增強，提示本發(fā)明組合物能提高荷瘤小鼠的RES功能。見表4。表4對荷S，肉瘤小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的碳粒廓清能力的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與腫瘤對照組相比，**P<0.01三、對放、化療小鼠白細胞的影響本發(fā)明組合物臨用前先以1%的羧甲基纖維素(CMC)配制成懸浮液，對照組給予空白的1%羧甲基纖維素。1、對化療小鼠升高白細胞的作用NIH小鼠按表5分組與給藥，灌胃給藥本發(fā)明組合物后第5天開始，給環(huán)磷酰胺90mg/kg腹腔注射連續(xù)三天，實驗結束時，尾靜脈采血比較各組實驗前后白細胞數(shù)。2、對放療小鼠的升高白細胞作用NIH小鼠雌雄各半眼球采血，先測定10只小鼠的白細胞(9.98±1.12)xl09/L作為參考數(shù)按表6分組及給藥，給本發(fā)明組合物后第5天，將小鼠作^Co-Y射線輻照，源強為6根品字形疊加式，462鐳克當量，中心距離100cm，劑量率59倫琴/min,—次全身照射總劑量為500倫琴，于照射后第8天、第20天分批測定小鼠白細胞數(shù)。結果由表5可知，給環(huán)磷酰胺前4組小鼠的白細胞均值無顯著性差異，于實驗結束時，給藥組的白細胞數(shù)明顯升高，與對照組相比，差異有顯著性。由表6可知，^Co-Y射線照射后第8天，給藥組和對照組比較，前者白細胞樹脂隨較高，但與后者相比無明顯差異。在折射后20d，給藥組的白細胞數(shù)比對照組顯著提高，表明本發(fā)明組合物對6()c0-7射線照射所致小鼠的白細胞降低有明顯對抗作用，但恢復緩慢。表5本發(fā)明組合物不同劑量對化疔小鼠升高白細胞的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表6本發(fā)明組合物對放療小鼠的升高白細胞作用<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>具體實施例以下從制備實施例來說明本發(fā)明的制備實施步驟，需要說明的是，所列舉的制備實施方式不是為了限制本發(fā)明的具體實施方式，而是為了對本發(fā)明的實施過程做一個詳細的說明，其它類似于本發(fā)明步驟，也屬于本發(fā)明實施的范圍。實施例1黃芪1500g膠陀螺600g斑蝥5g取黃芪、膠陀螺，粉碎成粗粉，合并，以10被重量的蒸餾水煎煮提取3次，每次1.5小時，過濾，合并濾液，濾液減壓濃縮至相對密度為約為1.10，往濃縮液中加95%的乙醇，邊加邊攪拌，至濃縮液中乙醇相對含量為80%，室溫靜置24小時，離心，上清液收集備用，沉淀加適量蒸餾水加熱溶解，溶解后的藥液中加95%的乙醇，邊加邊攪拌，至藥液中相對密度約為1.25，室溫靜置24小時，離心，上清液收集備用，沉淀真空干燥，得多糖提取物，備用；將兩次醇沉后的上清液合并，減壓濃縮，至濃縮液無醇，上已處理后的HP-20型大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫樹脂柱月4個柱床體積，棄水洗液，改用60%的乙醇洗脫樹脂柱約3個柱床體積，收集60%的乙醇洗脫部分，合并，減壓濃縮，干燥，得皂苷提取物；斑蝥粉碎成粗粉，以水浸泡提取4次，每次浸泡12小時，合并水浸泡部分，20ml/kg7.29±1.3220mg/kg7.62±1.2740mg/kg7.18±1.6580mg/kg7.74±1.463.48±0.287.08±0.684.19±0.348.21±0.54*4.41±0.229.89土0.49**4.98±0.3911.01±0.51**召"nlplmilrTT.IiS;經(jīng)經(jīng)自對遣量懂型劑劑劑模低中高減壓濃縮低溫真空干燥，得斑蝥提取物；合并上述提取物，混勻，加入制藥上可接受的輔料或賦形劑，制成所需的口服劑型。實施例2黃芪2000g膠陀螺200g斑蝥8g取黃芪藥材，粉碎，以10倍量60%的乙醇回流提取兩次，每次2小時，過濾，合并乙醇提取液，減壓濃縮至無醇味，濃縮液上已處理好的AB-8i大孔吸附樹脂柱，先以蒸餾水洗脫至無糖，收集水洗脫液，備用；再改用70°/。的乙醇洗脫樹脂柱，至無皂苷，收集70%的乙醇洗脫部分，合并，減壓濃縮，干燥得黃芪總皂苷提取物，備用；經(jīng)乙醇提取后的黃芪藥渣與膠陀螺合并，以上述洗脫樹脂柱的水為溶媒煎煮提取2-3次，合并水煎煮提取液，減壓濃縮至相對密度約為1.10，加入95%的乙醇，邊加邊攪拌，至濃縮液中乙醇相對含量為80%，室溫靜置24小時，過濾，沉淀以適量蒸餾水加熱溶解，再往溶解后的藥液中加入95%的乙醇，邊加邊攪拌，至藥液中乙醇相對含量為60%，室溫靜置24小時，過濾，不容物干燥，得多糖提取物；斑蝥粉碎，以蒸餾水浸泡提取3-4次，過濾，合并水浸泡提取液，減壓濃縮，低溫干燥，得斑蝥提取物，備用；合并上述各提取物，混勻，加入制藥上可接受的輔料或賦形劑，制成所需的口服劑型。權利要求1、一種抗腫瘤和輔助腫瘤放化療的中藥組合物，其特征是所述組合物由原料藥黃芪、膠陀螺和斑蝥組成，其中原料藥的組成比例為黃芪80-200份，膠陀螺10-80份，斑蝥0.1-1份。2、根據(jù)權利要求l所述的中藥組合物，其特征是所述原料藥的組成比例為黃芪100-180份，膠陀螺30-80份，斑蝥0.3-0.8份。3、根據(jù)權利要求l所述的中藥組合物，其特征是所述原料藥的組成比例為黃芪150份，膠陀螺60份，斑蝥0.5份。全文摘要本發(fā)明涉及一種抗腫瘤和輔助腫瘤放化療作用的中藥組合物，具體由原料藥黃芪、膠陀螺和斑蝥組成，經(jīng)提取制備其有效成分。本發(fā)明組合物具有抑制腫瘤細胞生長、增強腫瘤小鼠免疫力和升高放化療小鼠白細胞水平的作用，可用于腫瘤的治療和輔助治療。文檔編號A61K35/56GK101322740SQ200810117369公開日2008年12月17日申請日期2008年7月30日優(yōu)先權日2008年7月30日發(fā)明者張樹祥,熊國裕申請人:北京星昊醫(yī)藥股份有限公司