專利名稱：：羊角棉提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及羊角棉提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：肝癌是我國(guó)常見的惡性腫瘤之一，是我國(guó)位居第二的癌癥"殺手"，常見于中年男性。因其惡性度高、病情進(jìn)展快，病人早期一般沒有什么不適，但一旦出現(xiàn)癥狀就診，就已經(jīng)屬于中晚期。故肝癌的治療難度大，一般患者發(fā)病后生存時(shí)間僅為6個(gè)月，人稱"癌中之王"。根據(jù)調(diào)査結(jié)果表明，目前男性前三位的新發(fā)癌癥分別是肺癌、結(jié)腸癌和鼻咽癌，女性則是乳癌、結(jié)腸癌及肺癌，充分說明了肺癌和結(jié)腸癌在新發(fā)癌癥群中的危害性。從植物中尋找高效低毒的抗癌藥物，成為國(guó)內(nèi)外抗癌藥物研究的重點(diǎn)。有效的抗癌化合物和中草藥有效部位的抗癌復(fù)方制劑都具有重要的臨床價(jià)值。羊角棉(^^z^^ay^ireiL.C.)，又稱為鬧狗藥、見血飛(貴州)、雞舌頭樹(云南)，為夾竹桃科夾竹桃屬植物，產(chǎn)于云南、貴州、四川，生于海拔700-1500米山地疏林下巖石上。根據(jù)《中國(guó)植物志》記載，羊角棉的根、葉搗碎在民間被用于治療刀傷出血和治瘡毒。羊角棉在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用未見有報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供羊角棉提取物的一種新用途。本發(fā)明所提供的羊角棉提取物的用途是羊角棉提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用；所述羊角棉提取物按照如下方法制備用水和/或有機(jī)溶劑作為提取劑，從羊角棉中提取得到羊角棉提取物。其中，所述有機(jī)溶劑具體可為甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲垸、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯。所述提取劑具體可為體積百分含量為95%的乙醇水溶液。所述提取可為回流提取。所述提取中，提取的溫度可為60-100'C。所述提取至少提取一次，每次提取的時(shí)間為1-4小時(shí)。在如上任一所述中，所述腫瘤具體可為肝癌、結(jié)腸癌或肺癌，優(yōu)選為肝癌或結(jié)腸癌。。根據(jù)如上方法所制備的預(yù)防和/或治療腫瘤藥物可通過注射、噴射、滴鼻、滴眼、滲透、吸收、物理或化學(xué)介導(dǎo)的方法導(dǎo)入機(jī)體如肌肉、皮內(nèi)、皮下、靜脈、粘膜組織；或是被其他物質(zhì)混合或包裹后導(dǎo)入機(jī)體。需要的時(shí)候，在上述藥物中還可以加入一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。所述載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等。如上制備的預(yù)防和域治療腫瘤藥物可以制成注射液、片齊u、粉齊u、顆粒劑、膠囊、口服液、膏劑、霜?jiǎng)┑榷喾N形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。上述預(yù)防和/或治療腫瘤藥物的用量一般為200-800mg羊角棉提取物/kg體重/天，療程為10至15天。本發(fā)明的制備羊角棉提取物的方法簡(jiǎn)單、成本低廉。實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的羊角棉提取物能夠有效的抑制人腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，如人肝癌、結(jié)腸癌或肺癌細(xì)胞。因此本發(fā)明所提供的羊角棉提取物對(duì)制備抗腫瘤藥物，尤其是抗肝癌、肺癌、結(jié)腸癌藥物具有重要的意義。具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。實(shí)施例1、羊角棉提取物的制備取羊角棉(寧波德康生物制品有限公司)200g，將其以1:3(羊角棉95%乙醇)的重量份數(shù)比與95%乙醇(乙醇水=95:5，體積比)混合，在60。C條件下回流提取3h，抽濾，收集第一次回流提取液l和濾渣l;將得到的所有濾渣l與95%乙醇混合，95%乙醇的量與第一次相同，在6(TC條件下提取3h，收集第二次回流提取液2和濾渣2，并將提取液2與提取液1合并；將得到的所有濾渣2與95%乙醇混合，95%乙醇的量與第一次相同，60。C回流提取3h，抽濾，收集第三次回流提取液3;將提取液l、提取液2和提取液3合并，將所得的提取液進(jìn)行真空減壓濃縮、真空干燥(去除乙醇和水)至恒重，得到4.7g羊角棉提取物。實(shí)施例2、羊角棉提取物在抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)中的應(yīng)用將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的腫瘤細(xì)胞(人肝癌細(xì)胞HepG-2、人肝癌細(xì)胞BEL-7402、人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-8、人肺癌細(xì)胞A-549)用0.25%的胰蛋白酶消化，然后用含10%(體積百分含量)胎牛血清的DMEM完全培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液，并分別將各腫瘤細(xì)胞稀釋至1.0xl()S個(gè)/mL，再將其接種至96孔培養(yǎng)板中，每孔200uL，各腫瘤細(xì)胞分別接種6個(gè)孔，于37。C，5。/。C02的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h;然后傾去各孔培養(yǎng)液。將實(shí)施例1制得的羊角棉提取物溶解于DMSO中，然后用DMEM完全培養(yǎng)墓進(jìn)行稀釋，得到羊角棉提取物的溶液，羊角棉提取物的終濃度為50ug/mL，其中，DMSO的濃度為10%(體積百分含量)。同時(shí)設(shè)實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)組將羊角棉提取物溶液依次分別加入上述腫瘤細(xì)胞HepG-2、BEL-7402、HCT-8、A-549的培養(yǎng)孔內(nèi)，各自接種3個(gè)孔，每孔加入200ul;對(duì)照組向上述各腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)孔內(nèi)加入含10%(體積百分含量)DMSO的DMEM完全培養(yǎng)基，各自接種3個(gè)孔，每孔加入200ul;將以上各組的培養(yǎng)板同時(shí)置于37t:、5%032的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2天。2天后向每孔加入20ul新鮮配制的5mg/ml四甲基偶氮唑鹽(MTT)溶液，并在37t:、5。/。C02的條件下繼續(xù)培養(yǎng)4h;小心棄上清，每孔加入200uLDMSO，室溫放置15-20min，每5min振蕩一次；在酶標(biāo)儀上測(cè)定各孔在波長(zhǎng)490nm處的光密度值(OD值)，按公式計(jì)算腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。抑制率(％)=(OD聰-OD實(shí)驗(yàn))/OD對(duì)照x100%。實(shí)驗(yàn)設(shè)三次重復(fù)，結(jié)果取平均數(shù)。羊角棉提取物對(duì)人不同腫瘤細(xì)胞HepG-2、BEL-7402、HCT-8、A-549的抑制作用的結(jié)果如表1所示。表l、羊角棉提取物對(duì)人不同腫瘤細(xì)胞的抑制作用<table>complextableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>羊角棉提取物對(duì)多種腫瘤細(xì)胞的抑制作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(見表l)，羊角棉提取物在濃度為50ug/mL時(shí)對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-7402、結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-8均有一定程度的抑制作用，對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG-2和人肺癌細(xì)胞A-549的抑制作用較小。因此，羊角棉提取物可以用于制備抗肝癌和結(jié)腸癌的藥物。權(quán)利要求1、羊角棉提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用；所述羊角棉提取物按照如下方法制備用水和/或有機(jī)溶劑作為提取劑，從羊角棉中提取得到羊角棉提取物。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于所述有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯。3、根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于所述提取劑為體積百分含量為95%的乙醇水溶液。4、根據(jù)權(quán)利要求l-3中任一所述的應(yīng)用，其特征在于所述提取為回流提取。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述提取的溫度為60-10(TC。6、根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的應(yīng)用，其特征在于所述提取中，至少提取一次，每次提取的時(shí)間為l-4小時(shí)。7、根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一所述的應(yīng)用，其特征在于所述腫瘤為肝癌、結(jié)腸癌或肺癌，優(yōu)選為肝癌或結(jié)腸癌。8、一種羊角棉提取物，所述羊角棉提取物是以體積百分含量為95%的乙醇水溶液作為提取劑，從羊角棉中提取得到的。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的羊角棉提取物，其特征在于所述提取為回流提取;所述提取的溫度為60-100°C。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的羊角棉提取物，其特征在于所述提取中，至少提取一次，每次提取的時(shí)間為l-4小時(shí)。全文摘要本發(fā)明公開了羊角棉提取物的新用途。該新用途是羊角棉提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。所述提取物是按照如下方法制備的以羊角棉為原料，用水和/或有機(jī)溶劑提取得到的。本發(fā)明所提供的羊角棉提取物對(duì)制備抗腫瘤藥物，尤其是抗肝癌、肺癌、結(jié)腸癌藥物具有重要的意義。文檔編號(hào)A61P35/00GK101347475SQ200810119400公開日2009年1月21日申請(qǐng)日期2008年9月5日優(yōu)先權(quán)日2008年9月5日發(fā)明者巖劉,向俊鋒,唐亞林,瑋戴,莉譚申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院化學(xué)研究所