專利名稱：畜禽用甲磺酸達(dá)氟沙星微球制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于動物藥品領(lǐng)域，具體涉及一種動物專用的氟喹諾酮類抗菌藥甲磺酸達(dá)氟沙星 的微球制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
甲磺酸達(dá)氟沙星是達(dá)氟沙星的甲磺酸鹽，達(dá)氟沙星是動物專用的第三代氟喹諾酮類抗菌 藥，具有廣譜殺菌作用，對革蘭氏陽性菌、陰性菌、支原體、衣原體均有殺滅作用。臨床上 主要用于各種動物敏感菌引起的各種感染。
目前市場上出售的達(dá)氟沙星制劑僅有供口服的可溶性粉和肌內(nèi)注射的普通注射劑。然而由 于達(dá)氟沙星在動物體內(nèi)的消除半衰期較短，所以給臨床應(yīng)用帶來了不便。因此，本發(fā)明為獸 醫(yī)臨床提供了一種能夠延長達(dá)氟沙星在動物體內(nèi)的消除半衰期的微球制劑，并可為獸醫(yī)臨床 用藥提供了便捷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種甲磺酸達(dá)氟沙星微球制劑及其制備方法，將甲磺酸達(dá)氟沙星包 裹在微球內(nèi)，利用微球肌內(nèi)注射后能夠緩慢釋放，以達(dá)到延長藥物在體內(nèi)的消除半衰期的作 用。
本發(fā)明的技術(shù)方案是甲磺酸達(dá)氟沙星微球制劑，包含甲磺酸達(dá)氟沙星和可生物降解 的載體材料(最好還含有藥用輔料)，采用乳化冷凝法制備得到將甲磺酸達(dá)氟沙星包裹在內(nèi)的 微球。
所述的可生物降解的載體材料是明膠，藥用輔料是聚乙二醇或聚乙二醇和黃原膠。 本發(fā)明的甲磺酸達(dá)氟沙星微球制劑的制備方法，包括以下步驟
(1) 配制水相將明膠、或明膠與聚乙二醇、或明膠與聚乙二醇和黃原膠加入水中， 再加入甲磺酸達(dá)氟沙星溶解得到的水溶液即是水相；
(2) 配制油相將乳化劑加入液體石蠟中，混和均勻，得到油相；
(3) 乳化在40 65'C攪拌條件下，將水相加至油相中，然后至5'C以下乳化得到乳 化體系；(4) 脫水與固化攪拌下，向乳化體系中加入異丙醇進(jìn)行脫水，再滴加化學(xué)交聯(lián)劑， 繼續(xù)攪拌交聯(lián)固化；
(5) 洗滌、過濾與干燥棄去上清液，洗滌、過濾與干燥得淡黃色畜禽用甲磺酸達(dá)氟 沙星微球粉末。
所述乳化劑為司盤80,用量為油相總體積的1 4%。
步驟(3)、歩驟(4)所述的攪拌條件為500 1100r/min。
所述水相與油相的體積比為1: 5 15。
所述化學(xué)交聯(lián)劑用量為乳化體系體積的4 10%。
所述化學(xué)交聯(lián)劑為甲醛、右旋糖酐或戊二醛。
步驟(3)、步驟(4)所述的攪拌條件為500 1100r/min。
所述的甲磺酸達(dá)氟沙星微球平均粒徑為lO — llpm，藥物含量為2.0 6.3%。
本發(fā)明采用乳化冷凝法，將甲磺酸達(dá)氟沙星包裹在微球內(nèi)，利用微球肌內(nèi)注射后能夠緩 慢釋放，延長藥物在體內(nèi)的消除半衰期的作用。
本發(fā)明通過添加聚乙二醇增強(qiáng)藥物與載體之間的親和力，提高了藥物含量和包封率；另 外本發(fā)明將黃原膠與聚乙二醇合用可以進(jìn)一步提高藥物含量。本發(fā)明制備工藝操作簡單，對 制備設(shè)備、條件要求低，得到的微球形態(tài)圓整，在水溶液中分散性好；對豬肌內(nèi)注射該制劑 后可延長藥物在體內(nèi)的有效作用時間。


圖1為實施例4制得的甲磺酸達(dá)氟沙星微球100倍光鏡圖； 圖2為實施例4制得的甲磺酸達(dá)氟沙星微球3500倍電鏡圖3為甲磺酸達(dá)氟沙星注射液和甲磺酸達(dá)氟沙星微球制劑對豬肌內(nèi)注射后血漿中達(dá)氟沙星 的濃度一時間曲線。
具體實施例方式
本發(fā)明提出的甲磺酸達(dá)氟沙星微球制劑的制備方法，具體步驟如下取明膠、或明膠與 聚乙二醇、或明膠與聚乙二醇和黃原膠加入水中，在恒溫水浴中待明膠完全溶脹，再加入甲 磺酸達(dá)氟沙星混勻溶解，然后逐滴加入(0.5—2ml/min)含有司盤80的液體石蠟中，在相同溫度的水浴中電磁攪拌，至乳白色，冰浴迅速降至5"C以下并繼續(xù)攪拌，再加入異丙醇脫水， 用化學(xué)交聯(lián)劑交連固化。最后用異丙醇反復(fù)沖洗，洗盡交聯(lián)劑，乙醚、石油醚洗去微球表面 的液體石蠟，抽濾，干燥，制得微黃色微球粉末。 下面結(jié)合具體實施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明。 實施例1
(1) 稱取1.2g明膠于8ml水中，置60'C恒溫水浴中，至明膠完全溶脹，向其中加入0.15g 甲磺酸達(dá)氟沙星，使其完全溶解在明膠水溶液中；
(2) 在250ml圓底燒瓶中加入60ml液體石蠟和1.8ml司盤80，攪拌，使之混合均勻；
(3) 在60'C恒溫水浴條件下將甲磺酸達(dá)氟沙星明膠水溶液緩慢滴加(0.8ml/分鐘)到含有 乳化劑的液體石蠟中，磁力攪拌，攪拌速度為800r/min，乳化15min，形成乳液，將乳液迅 速轉(zhuǎn)移到冰水浴中，使溫度降至5'C以下；
(4) 繼續(xù)攪拌，向其中滴加異丙醇60ml，繼續(xù)攪拌繼續(xù)攪拌lh。再向其中滴加化學(xué)交聯(lián) 劑甲醛4ml，滴加速度大約每分鐘1.5ml，繼續(xù)攪拌3h，停止攪拌，冰水浴中靜置30min;
(5) 棄去上清液，反復(fù)用異丙醇、乙醚和石油醚沖洗，抽濾，干燥，即得淡黃色甲磺酸達(dá) 氟沙星明膠微球干粉。
微球理化性質(zhì)穩(wěn)定，重復(fù)性好，平均粒徑為11.63pm，平均載藥量和包封率分別為1.01 %和8.1%。
實施例2
(1) 精密稱取0.8g明膠于8ml水中，置6(TC恒溫水浴中，至明膠完全溶脹，向其中加入 0.4g甲磺酸達(dá)氟沙星，使其完全溶解在明膠水溶液中；
(2) 在250ml圓底燒瓶中加入60ml液體石蠟和1.8ml司盤80，攪拌，使之混合均勻；
(3) 在6(TC恒溫水浴條件下將甲磺酸達(dá)氟沙星明膠水溶液緩慢滴加(2ml/分鐘)到含有乳 化劑的液體石蠟中，磁力攪拌，攪拌速度為900r/min，乳化15min，形成乳液，將乳液迅速 轉(zhuǎn)移到冰水浴中，使溫度降至5'C以下；
(4) 繼續(xù)攪拌，向其中滴加異丙醇60ml，繼續(xù)攪拌繼續(xù)攪拌lh。再向其中滴加化學(xué)交聯(lián) 劑右旋糖酐(dextran) 5ml，滴加速度大約每分鐘0.5ml，繼續(xù)攪拌3h，停止攪拌，冰水浴 中靜置30min;
(5) 棄去上清液，反復(fù)用異丙醇、乙醚和石油醚沖洗，抽濾，干燥，即得淡黃色甲磺酸達(dá) 氟沙星明膠微球干粉。微球理化性質(zhì)穩(wěn)定，重復(fù)性好，平均粒徑為12.58jim，平均載藥量和包封率分別為1.62 %和8.16%。
實施例3
(1) 精密稱取1.2g明膠和0.24g聚乙二醇于8ml水中，置6(TC恒溫水浴中，至明膠完全 溶脹，向其中加入0.30g甲磺酸達(dá)氟沙星，使其完全溶解；
(2) 在250ml圓底燒瓶中加入60ml液體石蠟和1.5ml司盤80，攪拌，使之混合均勻；
(3) 在6(TC恒溫水浴條件下將甲磺酸達(dá)氟沙星明膠水溶液緩慢滴加(1.5ml/分鐘)到含有 表面活性劑的液體石蠟中，磁力攪拌，攪拌速度為1000r/min，乳化15min，形成乳液，將乳 液迅速轉(zhuǎn)移到冰水浴中，使溫度降至5"C以下；
(4) 繼續(xù)攪拌，向其中滴加異丙醇60ml，繼續(xù)攪拌繼續(xù)攪拌lh。再向其中滴加化學(xué)交聯(lián) 劑戊二醛5ml，滴加速度大約每分鐘2ml，繼續(xù)攪拌3h，停止攪拌，冰水浴中靜置30min;
(5) 棄去上清液，反復(fù)用異丙醇、乙醚和石油醚沖洗，抽濾，干燥，即得淡黃色甲磺酸達(dá) 氟沙星明膠微球干粉。
微球理化性質(zhì)穩(wěn)定，重復(fù)性好，平均粒徑為10.75pm，平均載藥量和包封率分別為3.33 %禾卩16.5%。
實施例4
(1) 精密稱取1.2g明膠、0.24g聚乙二醇和0.02g黃原膠于8ml水中，置6(TC恒溫水浴中， 至明膠完全溶脹，向其中加入0.30g甲磺酸達(dá)氟沙星，使其完全溶解；
(2) 在250ml圓底燒瓶中加入60ml液體石蠟和1.5ml司盤80，攪拌，使之混合均勻；
(3) 在6(TC恒溫水浴條件下將甲磺酸達(dá)氟沙星明膠水溶液緩慢滴加(1.5ml/分鐘)到含有 表面活性劑的液體石蠟中，磁力攪拌，攪拌速度為1000r/min，乳化15min，形成乳液，將乳 液迅速轉(zhuǎn)移到冰水浴中，使溫度降至5'C以下；
(4) 繼續(xù)攪拌，向其中滴加異丙醇60ml，繼續(xù)攪拌繼續(xù)攪拌lh。再向其中滴加化學(xué)交聯(lián) 劑戊二醛5ml，滴加速度大約每分鐘1.5ml，繼續(xù)攪拌3h，停止攪拌，冰水浴中靜置30min;
(5) 棄去上清液，反復(fù)用異丙醇、乙醚和石油醚沖洗，抽濾，干燥，即得淡黃色甲磺酸達(dá) 氟沙星明膠微球干粉。
本發(fā)明制得的微球理化性質(zhì)穩(wěn)定，重復(fù)性好，平均粒徑為10.75pm，平均載藥量和包封 率分別為6.26%和36.5%。 制得的甲磺酸達(dá)氟沙星微球100倍光鏡下觀察如圖1所示，可 以觀察到微球大小均勻、光滑；3500倍掃描電鏡下如圖2所示，可以觀察到微球表面有微孔，是藥物釋放的通道。
甲磺酸達(dá)氟沙星微球制劑載豬體內(nèi)藥物動力學(xué)試驗 一、實驗材料
1. 主要試劑和藥品
甲磺酸達(dá)氟沙星注射液(安徽省康爾樂藥業(yè)有限公司，批號070814):甲磺酸達(dá)氟沙星微 球(臨用前用雙蒸水混勻配制成混懸液)；其他試劑均符合試驗要求。
2. 流動相的配制
取85X磷酸lml用適量雙蒸水稀釋，向其中加入lml三乙胺，用雙蒸水定容至250ml，然 后和乙腈按照82: 18 (v:v)的比例混合配成流動相，用0.22pm濾膜過濾，脫氣處理備用。
3. 主要儀器設(shè)備
AgilentllOO型高效液相色譜儀
YKH型液體快速混合器
島津AUY120型分析天平 HHS型不銹鋼電熱恒溫水浴鍋 KQ-100B型超聲波清洗機(jī) Eppendorf超速冷凍離心機(jī) TGL-16G型臺式離心機(jī) SZ-93型自動雙重純水蒸餾器
4.實驗動物
健康仔豬，體重為25士lkg，共12頭，
美國Agilent公司
江西醫(yī)療器械廠 島津國際貿(mào)易(上海)有限公司
武漢市琴臺醫(yī)療器械廠 昆山市超聲儀器有限公司 德國Eppendorf公司 上海安亭科技儀器廠 上海亞榮生化儀器廠
并將其隨機(jī)分為原料藥組(6頭)和微球組(6頭)。自由 采食飲水，飼喂不加抗菌藥物的全價配合飼料，試驗前暫養(yǎng)一周，以適應(yīng)環(huán)境。
二、實驗方法
1. 給藥
原料藥組以2.5mg/kgb.w.于耳后肌內(nèi)注射甲磺酸達(dá)氟沙星注射液，微球組以2.5mg/kgb.w. (以甲磺酸達(dá)氟沙星計)于耳后肌內(nèi)注射甲磺酸達(dá)氟沙星微球混懸液。
2. 樣品采集
給藥后按以下時間點前腔靜脈采血Omin、 15min、 30min、 45min、 lh、 1.5h、 2h、 4h、 6h、 8h、 12h、 24h、 48h、 72h，采集的血樣置于經(jīng)肝素鈉處理的塑料離心管中，3000r/min離心10min，分離血漿于-20。C冰箱保存，待測。
3. 血漿樣品處理
從冰箱中取出血漿樣品，室溫下自然解凍。準(zhǔn)確吸取IOO(HU血漿于離心管中，加入5ml 二氯甲烷振蕩后，以10000r/min離心10min，收集上清液于另一離心管中，50'C水浴中氮氣 吹干。流動相定容至200^1，取20nl進(jìn)樣HPLC測定。
4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
準(zhǔn)確稱取甲磺酸達(dá)氟沙星0.0200g，用適量雙蒸水溶解后定容至100ml，配成20(^g/ml的 標(biāo)準(zhǔn)儲備液。取標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用雙蒸水稀釋成濃度分別為0.4、 1.0、 2.0、 5.0、 10、 20pg/ml 的系列工作液。向6只離心管中加入1000nl空白血漿，然后依次加入工作液10(^1，便得到 藥物濃度依次為0.04、 0.1、 0.2、 0.5、 1、 2pg/ml的血漿樣品。按照血漿樣品處理方法處理后 進(jìn)樣分析。以甲磺酸達(dá)氟沙星的峰面積(A)為橫坐標(biāo)，甲磺酸達(dá)氟沙星在樣品中的濃度(C) 為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出回歸方程C=0.0008A+0.0043(r=0.9993)。
5. 回收率和精密度試驗
取空白血漿，添加適量甲磺酸達(dá)氟沙星標(biāo)準(zhǔn)工作液，配制成含甲磺酸達(dá)氟沙星濃度分別為 1、 0.5、 0.1ng/ml的血槳樣品，按照血漿樣品的處理方法處理并進(jìn)行HPLC檢測，甲磺酸達(dá) 氟沙星在血漿樣品中的回收率大于75%，變異系數(shù)小，說明本方法可以用于樣品測定。高、 中、低3個濃度(1、 0.5、 0.1pg/ml)的日內(nèi)變異系數(shù)分別為4.4、 3.1、 4.1。％，日間變異系數(shù) 分別為3.9、 3.0、 5.6%。結(jié)果表明本方法可用于藥物動力學(xué)試驗。
6. 色譜條件
色譜柱AgilentTC-Ci8柱(250mmx4.6mm， 5fim)流動相乙腈水相(含磷酸0.4%，三乙胺0.4%) =18: 82 (v/v)
紫外檢測波長280nm
流速1.0ml/min
柱溫30°C
進(jìn)樣量5(^1
7. 數(shù)據(jù)處理
藥物動力學(xué)模型采用3P97藥動學(xué)軟件進(jìn)行擬合；藥時曲線圖采用Excel軟件繪制。 三、實驗結(jié)果 1.血槳中藥一時數(shù)據(jù)甲磺酸達(dá)氟沙星注射劑和甲磺酸達(dá)氟沙星微球混懸液給藥后血漿中達(dá)氟沙星的濃度一時間 曲線見附圖3，從圖中可知本發(fā)明微球和一般制劑相比具有較長的半衰期。
2.藥物動力學(xué)數(shù)據(jù)分析
給豬分別肌內(nèi)注射甲磺酸達(dá)氟沙星和甲磺酸達(dá)氟沙星微球后，藥物動力學(xué)參數(shù)見表1。經(jīng) 過房室模型分析，兩種制劑，其血藥濃度-時間數(shù)據(jù)均符合一級吸收二室開放模型。
表1豬肌注甲磺酸達(dá)氟沙星和甲磺酸達(dá)氟沙星微球的藥動學(xué)參數(shù)
參數(shù)數(shù)值
甲磺酸達(dá)氟沙星注射劑甲磺酸達(dá)氟沙星微球混懸液
a(l/h)0.96±0.280.32±0.05
P(l/h)0.10±0,020.03±0.01
Ka(l/h)4.83±0.450.77±0.11
Vd/F(L/kg)4.93±0.684.21±0.31
T脂(h)0.79±0.272.21±0.37
T卿(h)6.61士0.7424.32±1.61
T區(qū)a (h)0.15±0.010.91±0.12
AUC (fig/ml.h )3.34±0.439.97±0.81
T"h)0.64土0.132息0.U
Cmax (ng/ml)0.45±0.090.39±0.02
CL"L/(kg-h))0.69±0.040.25±0.02
從結(jié)果可以看出，甲磺酸達(dá)氟沙星微球肌內(nèi)注射后，達(dá)氟沙星的T^p較肌內(nèi)注射甲磺酸達(dá) 氟沙星普通注射劑延長了 3倍，由于微球在給藥部位對藥物的緩釋作用，使Tp由普通制劑的 0.64h推遲到了 2.62h。因此甲磺酸達(dá)氟沙星微球制劑的緩釋效果較好。
權(quán)利要求
1. 畜禽用甲磺酸達(dá)氟沙星微球制劑的制備方法，包括以下步驟(1)配制水相將明膠、或明膠與聚乙二醇、或明膠與聚乙二醇和黃原膠加入水中，再加入甲磺酸達(dá)氟沙星溶解得到的水溶液即是水相；(2)配制油相將乳化劑加入液體石蠟中，混和均勻，得到油相；(3)乳化在40～65℃攪拌條件下，將水相加至油相中，然后至5℃以下乳化得到乳化體系；(4)脫水與固化攪拌下，向乳化體系中加入異丙醇進(jìn)行脫水，再加入化學(xué)交聯(lián)劑，繼續(xù)攪拌交聯(lián)固化；(5)棄去上清液，洗滌、過濾和干燥得畜禽用甲磺酸達(dá)氟沙星微球。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于明膠在水相中的濃度為10 30wt%、聚 乙二醇的濃度是2 5wt。/。、黃原膠的濃度是0.1 0.5wt。/。、甲磺酸達(dá)氟沙星與明膠的質(zhì)量 比為h 1 8。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述乳化劑為司盤80，用量為油相 總體積的1 4%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述水相與油相的體積比為1: 5 15。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述化學(xué)交聯(lián)劑用量為乳化體系體積 的4 10%。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述化學(xué)交聯(lián)劑為甲醛、右旋糖酐或戊二醛。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于步驟(3)、歩驟(4)所述的攪拌條 件為500 1100r/min。
8. 權(quán)利要求1或2所述方法制得的畜禽用甲磺酸達(dá)氟沙星微球制劑。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的畜禽用甲磺酸達(dá)氟沙星微球制劑，其特征在于甲磺酸達(dá)氟沙星微 球平均粒徑為10 — lltim，藥物含量為2.0 6.3wt%。
全文摘要
本發(fā)明涉及甲磺酸達(dá)氟沙星微球制劑，由下法制得將明膠、或明膠與聚乙二醇、或明膠與聚乙二醇和黃原膠加入水中，再加入甲磺酸達(dá)氟沙星溶解得水相；將乳化劑加入液體石蠟中，混和均勻得油相；將水相加至油相中，乳化、交聯(lián)固化、棄去上清液得畜禽用甲磺酸達(dá)氟沙星微球制劑。本發(fā)明采用乳化冷凝法，將甲磺酸達(dá)氟沙星包裹在微球內(nèi)，利用微球肌內(nèi)注射后能夠緩慢釋放，延長藥物在體內(nèi)的消除半衰期的作用。本發(fā)明制備工藝操作簡單，對制備設(shè)備、條件要求低，得到的微球形態(tài)圓整，在水溶液中分散性好；對豬肌內(nèi)注射該制劑后可延長藥物在體內(nèi)的有效作用時間。
文檔編號A61K9/16GK101411689SQ20081019794
公開日2009年4月22日 申請日期2008年11月28日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月28日
發(fā)明者張衛(wèi)元, 操繼躍, 王春梅 申請人:湖北省豬用獸藥工程技術(shù)研究中心