專利名稱：使用血管發(fā)生抑制劑的聯(lián)合療法的制作方法
使用血管發(fā)生抑制劑的聯(lián)合療法 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
本申請(qǐng)要求2007年2月1日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)No. 60/887，688的權(quán) 益，通過述及將其公開內(nèi)容完整收入本文。
背景技術(shù)：
血管系統(tǒng)的發(fā)育是許多生理性和病理性過程的基本要求?；钴S生長(zhǎng)中的 組織諸如胚胎和腫瘤要求充足的血液供應(yīng)。它們通過生成促血管發(fā)生因子來 滿足這一需要，所述促血管發(fā)生因子經(jīng)由稱為血管發(fā)生(angiogenesis)的過程 促進(jìn)新血管形成。血管形成是復(fù)雜但有序的生物學(xué)事件，涉及所有或許多以 下步驟a)自已有的內(nèi)皮細(xì)胞(EC)增殖出EC或自祖細(xì)胞分化出EC; b) EC 遷移并接合以形成索樣結(jié)構(gòu)；c)血管索然后發(fā)生管發(fā)生(tubulogenesis)以形 成具有中央內(nèi)腔的血管；d)已有的索或血管伸出芽以形成次生血管；e)初 級(jí)血管叢發(fā)生進(jìn)一步重塑(remodeling)和整形(reshaping);及f)內(nèi)皮周細(xì)胞 (peri-endothdial cell)被募集來包圍內(nèi)皮管，為血管提供維持和調(diào)節(jié)功能，此 類細(xì)胞包括用于小毛細(xì)血管的周細(xì)胞、用于大血管的平滑肌細(xì)胞、和心臟中 的心肌細(xì)胞。Hanahan, D. Sc/e"ce 277:48-50 (1997); Hogan, B. L. & Kolodziej, P. A.胸匿i ev/繼G認(rèn)rics. 3:513-23 (2002); Lubarsky, B. & Krasnow, M. A. CW/. 112:19-28 (2003)。
現(xiàn)在完全確立了血管發(fā)生涉及多種病癥的發(fā)病才幾理。這些包4舌實(shí)體瘤和 轉(zhuǎn)移、動(dòng)脈粥樣硬化、晶狀體后纖維組織增生、血管瘤、慢性炎癥、眼內(nèi)新 血管疾病諸如增殖性視網(wǎng)膜病變例如糖尿病性視網(wǎng)膜病、年齡相關(guān)黃斑變性 (AMD)、新生血管性青光眼、移植角膜組織和其它組織的免疫排斥、類風(fēng)濕 性關(guān)節(jié)炎、和銀屑病。Folkman等，J. Biol. Chem., 267:10931-10934 (1992); Klagsbrun等，Annu. Rev. Physiol. 53:217-239 (1991); Garner A.， "Vascular diseases",在Garner A和Klintworth GK編的《Pathobiology of Ocular Disease. A Dynamic Approach》第2版(Marcel Dekker, NY, 1994)中，pp 1625-1710。
在腫瘤生長(zhǎng)的情況中，血管發(fā)生對(duì)于自增生至瘤形成的轉(zhuǎn)換，及為腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移提供營(yíng)養(yǎng)似乎是至關(guān)重要的。Folkman等，A^we 339:58(1989)。 新血管形成(neovascularization)讓腫瘤細(xì)胞獲得了與正常細(xì)胞相比的生長(zhǎng)優(yōu) 勢(shì)和增殖自治。腫瘤通常開始于單個(gè)異常細(xì)胞，由于與可利用毛細(xì)管床的距 離，該細(xì)胞只能增殖至幾立方毫米的尺寸，而且它能在較長(zhǎng)的一段時(shí)間里保 持"休眠，，狀態(tài)而不進(jìn)一步生長(zhǎng)和傳播。有些肺瘤細(xì)胞然后轉(zhuǎn)向血管發(fā)生表型 以激活內(nèi)皮細(xì)胞，所述內(nèi)皮細(xì)胞增殖并成熟成新的毛細(xì)血管。這些新形成的 血管不僅讓原發(fā)性腫瘤繼續(xù)生長(zhǎng)，而且讓轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞傳播并再建群 (recolonization)。因而，在腫瘤切片中的微血管密度與乳腺癌及數(shù)種其它腫 瘤的患者存活之間觀察到了相關(guān)性。Weidner等，W.五"g/. J MW 324:1-6 (1991); Horak等，丄朋c" 340:1120-1124 (1992); Macchiarini等，丄a"c^ 340:145-146(1992)。尚未完全了解控制血管發(fā)生轉(zhuǎn)換的精確機(jī)制，但是認(rèn)為 腫瘤塊的新血管形成源自眾多血管發(fā)生刺激物與抑制物的凈平衡(Folkman， ):27-31 (1995》。
血管發(fā)育的過程受到精密調(diào)節(jié)。迄今為止，多種分子，多為由周圍細(xì)胞 生成的分泌性因子，已顯示出調(diào)節(jié)EC分化、增殖、遷移和接合成索樣結(jié)構(gòu)。 例如，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)已鑒定為涉及刺激血管發(fā)生和誘導(dǎo)血管通透 性的關(guān)鍵因子。Ferrara爭(zhēng)，￡"tfocr. I8:4-25 (l997)。甚至單個(gè)VEGF等位基 因的遺失導(dǎo)致胚胎致死的發(fā)現(xiàn)指向此因子在血管系統(tǒng)的發(fā)育和分化中所發(fā) 揮的不可代替的作用。此外，VEGF已顯示為與肺瘤和眼內(nèi)病癥有關(guān)的新血 管形成的關(guān)鍵介導(dǎo)物。Ferrara爭(zhēng)，五w6/ock i ev. ^丄X。 VEGFmRNA在多數(shù) 所檢查的人腫瘤中過表達(dá)。Berkman等， / C7z'". /"ve" 91:153-159 (1993); Brown等，//m/w"" Pa決o/. 26:86-91 (1995); Brown爭(zhēng)'C朋cwi as. 53:4727-4735 (1993); Mattem等， / Ca"cw 73:931-934 (1996); Dvorak等，爿m. 尸"Ao/. 146:1029-1039(1995)。
抗VEGF中和性抗體在棵鼠中遏制多種人胂瘤細(xì)胞系的生長(zhǎng)(Kim等， 胸臟362:841-844 (1993); Warren爭(zhēng)，J C"". /騰"95:1789-1797 (1995); Borgstr6m等，C騰er L 56:4032-4039 (1996); Melnyk等，Omcw L 56:921-924(1996)),而且在缺血性視網(wǎng)膜病癥模型中還抑制眼內(nèi)血管發(fā)生。 Adamis等，^r/z. Op/^/ra/wo/. 114:66-71 (1996)。因此，抗VEGF單克隆抗體或 其它VEGF作用抑制劑是有希望用于治療腫瘤和多種眼內(nèi)新血管病癥的候選 物。此類抗體記載于例如1998年1月14日公開的EP 817,648和1998年10月15日公開的W098/45331和W098/45332。
盡管通過血管發(fā)生抑制劑諸如抗VEGF抗體在癌癥治療中實(shí)現(xiàn)了重大進(jìn) 步，但人們?nèi)匀辉趯で蟾牧嫉寞煼?，尤其是尋求那些進(jìn)一步增強(qiáng)整體功效的療法。
發(fā)明概述
本發(fā)明提供了用于治療腫瘤的聯(lián)合療法，其中將VEGF拮抗劑與至少具 有阻斷PDGFR活性的蛋白激酶抑制劑組合，由此產(chǎn)生抗腫瘤活性。在某些實(shí) 施方案中，VEGF拮抗劑是干擾VEGF對(duì)細(xì)胞受體的結(jié)合的化合物。此類
體、適體(aptamer)或肽體(peptibody)、和抗VEGF抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中， 抗VEGF抗體是貝伐單抗(bevacizumab)。
在一方面，蛋白激酶抑制劑是對(duì)PDGFR特異性的。在其它方面，蛋白 激酶抑制劑靶向多種RTK，包括PDGFR和VEGFR-2，由此阻斷PDGF和VEGF 二者途徑。在一個(gè)實(shí)施方案中，蛋白激酶抑制劑是sunitinib(SUTENT⑧)。
本發(fā)明的方法可用于治療不同的癌癥，實(shí)體瘤和軟組織腫瘤類腫瘤二 者。本發(fā)明的治療可改善的癌癥的非限制性例子包括乳A，癌(breast cancer)、 結(jié)腸直腸癌(colorectal cancer)、直腸癌(rectal cancer)、非小細(xì)月包肺癌(non-small cell lung cancer)、非4可杰金氏-淋巴瘤(non陽Hodgkin，s lymphoma, NHL)、腎細(xì) 月包癌(renal cell cancer)、前列A，癌(prostate cancer)、肝癌(liver cancer)、月夷A泉癌 (pancreatic cancer)、專欠纟且織肉瘤(soft-tissue sarcoma)、卡〉皮西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、 類癌癌瘤(carcinoid carcinoma)、 頭頸癌(head and neck cancer)、 黑 素瘤(melanoma)、 卵巢癌(ovarian cancer)、 間皮瘤(mesothelioma)、和多發(fā)性 骨髓瘤(multiplemyeloma)。在某些方面，癌癥是轉(zhuǎn)移的。在其它方面，癌癥 是非轉(zhuǎn)移的。
在某些實(shí)施方案中，在癌癥諸如腎細(xì)胞癌瘤(renal cell carcinoma)、非小 纟田月包肺癌瘤(non-small cell lung carcinoma)、 結(jié)腸直腸癌瘤(colorectal carcinoma)、乳A袈癌瘤(breast carcinoma)或月夷&泉癌瘤(pancreatic carcinoma)的聯(lián) 合療法中使用貝伐單抗和sunitinib。在某些實(shí)施方案中，在組合4吏用時(shí)，以 大約0.05 mg/kg至大約15 mg/kg的范圍施用貝伐單抗。在一個(gè)實(shí)施方案中， 可以給受試者施用一劑或多劑的大約0.5 mg/kg、 1.0mg/kg、 2.0 mg/kg、 3.0mg/kg、 4.0mg/kg、 5.0mg/kg、 6.0mg/kg、 7.0mg/kg、 7.5 mg/kg、 8.0mg/kg、 9.0 mg/kg、 10 mg/kg或15 mg/kg (或其任意組合)。此類劑量可以間歇施用， 例如每天、每三天、每周或每?jī)芍寥?。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在組合使用 時(shí)，給受試者隔周以IO mg/kg或每三周以15 mg/kg靜脈內(nèi)施用貝伐單抗，且 給受試者以日劑量大約25 mg至大約50 mg口服施用sunitinib—至四周接著停 用一至兩周。在又一個(gè)實(shí)施方案中，以25 mg/天施用sunitinib兩周4妄著停用 一周。
取決于要治療的具體癌癥適應(yīng)癥，本發(fā)明的聯(lián)合療法可以與別的治療劑 諸如化療劑或別的療法諸如放療或手術(shù)組合?？梢栽诒景l(fā)明的聯(lián)合療法中使 用許多已知的化療劑。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的聯(lián)合療法可以與超過一 種的化療劑組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的聯(lián)合療法與化療劑帕利他塞 (paclitaxel)組合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的聯(lián)合療法與化療劑卡鉑 (carboplatin)和帕利他塞組合。在某些實(shí)施方案中，會(huì)使用那些對(duì)于特定適應(yīng) 癥的治療而言是標(biāo)準(zhǔn)的化療劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，要在組合中使用的每 一種治療劑的劑量和頻率與相應(yīng)藥劑在沒有其它藥劑的情況中使用時(shí)的劑 量和頻率相同，或比相應(yīng)藥劑在沒有其它藥劑的情況中使用時(shí)的劑量和頻率低。
附圖簡(jiǎn)述


圖1A和1B描繪了無胸腺棵鼠中已建立的LS174T人結(jié)腸癌瘤異種移植 物的生長(zhǎng)抑制(n40只每組)。sunitinib和抗VEGF (MAbB20-4.1 )的施用日 程分別以箭頭和箭標(biāo)示。服藥詳情見實(shí)施例l。圖1B是指明存活的 Kaplan-Meier圖。
圖2A和2B描繪了無胸腺棵鼠中已建立的H1299人非小細(xì)胞肺癌瘤 (NSCLC)異種移植物的生長(zhǎng)抑制(n40只每組)。圖2B是指明存活的 Kaplan-Meier圖。
圖3顯示了另一項(xiàng)H1299異種移植物生長(zhǎng)抑制研究的結(jié)果(11=10只每 組)。為單一療法和聯(lián)合療法二者使用兩種不同sunitinib劑量。服藥詳情見實(shí) 施例1 。
圖4描繪了無胸腺棵鼠中已建立的786-0腎細(xì)胞癌瘤(RCC)異種移植物 的生長(zhǎng)抑制(11=10只每組)。圖5A和5B描繪了無胸腺棵鼠中已建立的Bx-PC3人胰腺癌瘤異種移植物 的生長(zhǎng)抑制(n-lO只每組)。為單一療法和聯(lián)合療法二者使用兩種不同 sunitinib劑量。服藥詳情見實(shí)施例l。圖5B是指明存活的Kaplan-Meier圖。
圖6描繪了 SCID小鼠中已建立的Caki-2腎細(xì)胞癌瘤(RCC)異種移植物的 生長(zhǎng)抑制(n=l0只每組)。為單一療法和聯(lián)合療法二者使用兩種不同sunitinib 劑量。服藥詳情見實(shí)施例l。
圖7A和7B總結(jié)和比較了Caki-2RCC異種移植物(7A)和H1299NSCLC 異種移植物(7B)的生長(zhǎng)抑制。在每幅圖中，只顯示了低sunitinib劑量。服 藥詳情見實(shí)施例l。
圖8A-C圖示了所處理的H1299 NSCLC異種移;f直物中腫瘤的形態(tài)學(xué)變 化。8A顯示了不同處理下腫瘤壞死的程度(壞死百分比是通過H&E染色測(cè) 量的)；8B呈現(xiàn)了不同處理下血管密度的變化(是通過PECAM IHC測(cè)定的)； 而8C顯示了用抗VEGF ( B20-4.1)和sunitinib組合處理的H1299異種移植物中 的腫瘤和腫瘤血管系統(tǒng)。
發(fā)明詳述
I. 定義
為了解釋本說明書的目的，應(yīng)用以下定義，而且在任何適宜的時(shí)候，以 單數(shù)使用的術(shù)語也會(huì)包括復(fù)數(shù)，反之亦然。在下文所列任何定義與通過述及 收入本文的任何文件抵觸的情況中，應(yīng)當(dāng)以下文所列定義為準(zhǔn)。
術(shù)語"VEGF"或"VEGF-A"用于指165個(gè)氨基酸的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因 子及相關(guān)的121個(gè)、189個(gè)和206個(gè)氨基酸的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，如 Leung et al. 5W置e， 246:1306 (1989);及Houck et al. Mo/.五油chw., 5:1806 (1991)所述，及其天然存在的等位基因形式和加工形式。VEGF-A是包括 VEGF-B、 VEGF-C、 VEGF-D、 VEGF-E、 VEGF-F和P1GF在內(nèi)的基因家族的 一部分。VEGF-A主要結(jié)合兩種高親和力受體酪氨酸激酶，即VEGFR-1 (Flt-1) 和VEGFR-2 (Flk-1/KDR)，后者是VEGF-A血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂信號(hào)的主要 遞質(zhì)。另夕卜，神經(jīng)氈蛋白-l(neuropilin-l)已經(jīng)被鑒定為肝素結(jié)合VEGF-A同種 型(isoform)的受體，而且可在血管發(fā)育中發(fā)揮作用。術(shù)語"VEGF，或 "VEGF-A"還指來自非人物種諸如小鼠、大鼠或靈長(zhǎng)類動(dòng)物的VEGF。有時(shí)， 來自特定物種的VEGF表示如下，hVEGF表示人VEGF， mVEGF表示鼠VEGF。術(shù)語"VEGF，還用于指包含165個(gè)氨基酸的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子 的氨基酸第8-109位或第l-109位的截短形式多肽。本申請(qǐng)中可能通過例如 "VEGF (8-109)"、 "VEGF (l-109)"或"VEGF!65"來鑒別任何此類形式VEGF。 "截短的，，天然VEGF的氨基S臾位置如天然VEGF序列中所示編號(hào)。例如，截短 的天然VEGF中的第17位氨基酸(甲硫氨酸)也是天然VEGF中的第17位(曱 硫氨酸)。截短的天然VEGF具有與天然VEGF相當(dāng)?shù)膶?duì)KDR和Flt-1受體的結(jié) 合親和力。
術(shù)語"VEGF變體"如本文中所使用的指在天然VEGF序列中包括一處或 多處氨基酸突變的VEGF多肽。任選的是，所述一處或多處氨基酸突變包括 氨基酸替代。為了本文中所描述的VEGF變體的速記名稱的目的，應(yīng)注意數(shù) 字指沿推定天然VEGF氨基酸序列的氨基酸殘基位置(在Leung et al.，見上文 和Houck et al.,見上文中提供)。
"天然序列"多肽包括與衍生自自然界的多肽具有相同氨基酸序列的多 肽。如此，天然序列多肽可以具有來自任何哺乳動(dòng)物的天然存在多肽的氨基 酸序列。此類天然序列多肽可以從自然界分離，或者可以通過重組或合成手 段來生產(chǎn)。術(shù)語"天然序列"多肽明確涵蓋該多肽的天然存在的截短或分泌形 式(例如胞外結(jié)構(gòu)域序列)、天然存在的變體形式(例如可變剪接形式)、及 天然存在的等位變體。
多肽"變體"意指與天然序列多肽具有至少約80%氨基酸序列同一性的 生物學(xué)活性多肽。此類變體包括例如在多肽的N-末端或C-末端添加或刪除一 個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的多肽。通常，變體與天然序列多肽將具有至少約80% 的氨基酸序列同一性，更優(yōu)選的是，至少約90%的氨基西交序列同一性，和甚 至更優(yōu)選的是，至少約95%的氨基酸序列同一性。
"VEGF生物學(xué)活性"包括對(duì)任何VEGF受體的結(jié)合或任何VEGF信號(hào)傳 導(dǎo)活性，諸如調(diào)節(jié)正常的和異常的血管發(fā)生(angiogenesis)和脈管發(fā)生 (vasculogenesis) (Ferrara禾口Davis-Smyth (1997) Endocrine Rev. 18:4-25; Ferrara (1999) J. Mol. Med. 77:527-543);促進(jìn)胚胎脈管發(fā)生和血管發(fā)生(Carmeliet et al. (1996) Nature 380:435-439; Ferrara et al. (1996) Nature 380:439-442);及調(diào) 控雌性生殖道中的和為了骨生長(zhǎng)和軟骨形成的周期性血管增殖(Ferrara et al. (1998) Nature Med. 4:336匿340; Gerber et al. (1999) Nature Med. 5:623-628)。在 作為血管發(fā)生和脈管發(fā)生中的血管發(fā)生因子之外，VEGF,作為多效生長(zhǎng)因子，在生理過程諸如內(nèi)皮細(xì)胞存活、血管通透性和血管舒張、單核細(xì)胞趨化
性和4丐流入中展現(xiàn)出多種生物學(xué)效應(yīng)(Ferrara和Davis-Smyth (1997)，見上文; 及Cebe-Suarez et al. Cell. Mol. Life Sci. 63:601-615 (2006))。此外，最近的研 究報(bào)道了 VEGF對(duì)少數(shù)非內(nèi)皮細(xì)胞類型諸如視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞、胰導(dǎo)管細(xì) 胞、和許旺(Schwann)細(xì)胞的促有絲分裂效應(yīng)(Guerrin et al. (1995) J. Cell Physiol. 164:385-394; Oberg-Welsh et al. (1997) Mol. Cell. Endocrinol. 126:125-132; Sondell et al. (1999) J. Neurosci. 19:5731-5740)。
"血管發(fā)生抑制劑，，或"抗血管發(fā)生劑，，指或直接或間接抑制血管發(fā)生 (angiogenesis)、血管生成(vasculogenesis)、或不想要的血管通透性的小分子 量物質(zhì)、多核苷酸、多肽、分離的蛋白質(zhì)、重組蛋白、抗體、或其偶聯(lián)物或 融合蛋白。應(yīng)當(dāng)理解，抗血管發(fā)生劑包括那些結(jié)合并阻斷血管發(fā)生因子或其 受體的血管發(fā)生活性的藥劑。例如，抗血管發(fā)生劑是上文定義的血管發(fā)生劑 的抗體或其它拮抗劑，例如VEGF-A的抗體、VEGF-A受體(例如KDR受體 或Flt-1受體)的抗體、抗PDGFR抑制劑諸如GLEEVEC⑧(Imatinib Mesylate )。 抗血管發(fā)生劑還包括天然血管發(fā)生抑制劑，例如血管他丁(angiostatin)、內(nèi)皮 ^(也丁(endostatin)等。參見侈'J長(zhǎng)口Klagsbrun and D，Amore, ^w w. i ev. /Vzj^/o/. 53:217-39 (1991); Streit and Detmar， O"co取"e 22:3172-3179 (2003)(例如列舉 惡性黑素瘤中抗血管發(fā)生療法的表3); Ferrara & Alitalo, A^we Med"'"e 5(12): 1359-1364 (1999); Tonini等，22:6549-6556 (2003)(例如列舉已 知抗血管發(fā)生因子的表2); Sato, /"A C//". (9"co/. 8:200-206 (2003)(例如列 舉臨床試驗(yàn)中所使用的抗血管發(fā)生劑的表l)。
"VEGF拮抗劑"指能夠中和、阻斷、抑制、消除、降低或干擾VEGF活性 (包括其與一種或多種VEGF受體的結(jié)合)的分子(肽基或非肽基分子)。在
了至少10%、 20%、 30%、 40%、 50%、 60%、 70%、 80%、 90%或更多。在 一個(gè)實(shí)施方案中，受到VEGF拮抗劑抑制的VEGF是VEGF (8-109)、 VEGF (1-109)、或VEGF股。在本發(fā)明的方法中有用的VEGF拮抗劑包括特異性結(jié)合 VEGF的肽基或非肽基化合物，諸如抗VEGF抗體及其抗原結(jié)合片段、特異性 結(jié)合VEGF的多肽或其片段、和特異性結(jié)合VEGF由此使其隔絕與一種或多種 受體(例如可溶性VEGF受體蛋白質(zhì)或其VEGF結(jié)合片段，或嵌合VEGF受體 蛋白質(zhì))結(jié)合的受體分子及衍生物、至少與編碼VEGF多肽的核酸分子的片段互補(bǔ)的反義核酸寡聚物；至少與編碼VEGF多肽的核酸分子的片段互補(bǔ)的 小RNA;靶向VEGF的核酶；針對(duì)VEGF的肽體；及VEGF適體。
"抗VEGF抗體"指以足夠親和力和特異性結(jié)合VEGF的抗體。所選擇的抗 體通常會(huì)具有足夠強(qiáng)的對(duì)VEGF的結(jié)合親和力，例如，該抗體可以以介于 lOOnM- lpM之間的Kd值結(jié)合hVEGF。抗體親和力可通過例如基于表面等離 振子共振的測(cè)定法(諸如PCT申請(qǐng)公開文本No. WO2005/012359中所記載的 BIAcore測(cè)定法)；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA);和竟?fàn)帨y(cè)定法(例如RIA ) 來測(cè)定。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗VEGF抗體可用作治療劑，用于靶 向和干擾其中涉及VEGF活性的疾病或疾患。還有，可對(duì)該抗體進(jìn)行其它生 物學(xué)活性測(cè)定法，例如為了評(píng)估其作為治療劑的效力所進(jìn)行的生物學(xué)活性測(cè) 定法。此類測(cè)定法是本領(lǐng)域已知的，而且取決于抗體的靶抗原和預(yù)定用途。 例子包括HUVEC抑制測(cè)定法(如下文實(shí)施例中所描述的)；腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑 制測(cè)定法(如例如WO 89/06692中所記載的)；抗體依賴性細(xì)胞的細(xì)胞毒性 (ADCC)和補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(CDC)測(cè)定法(美國(guó)專利S,500，362);及激動(dòng)活 性或造血測(cè)定法(參見WO 95/27062)。抗VEGF抗體通常不會(huì)結(jié)合其它VEGF 同系物，諸如VEGF-B或VEGF-C,也不會(huì)結(jié)合其它生長(zhǎng)因子，諸如P1GF、 PDGF或bFGF。
在某些實(shí)施方案中，抗VEGF抗體包括與雜交瘤ATCCHB 10709所生成 的單克隆抗VEGF抗體A4.6.1;依照Presta et al. Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)生成的重組人源化抗VEGF單克隆抗體結(jié)合相同表位的單克隆抗體。在 一個(gè)實(shí)施方案中，抗VEGF抗體是"貝伐單抗"(Bevacizumab， BV)，也稱作 "rhuMAb VEGF，或"AVASTIN⑧"。它包含突變的人IgGl框架區(qū)和來自鼠抗 hVEGF單克隆抗體A.4.6.1 (其阻斷人VEGF對(duì)其受體的結(jié)合)的抗原結(jié)合互 補(bǔ)決定區(qū)。貝伐單抗大約93%的氨基酸序列，包括大部分框架區(qū)，衍生自人 IgGl，而大約7。/o的序列衍生自鼠抗體A4.6.1。貝伐單抗具有約149,000道爾 頓的分子量，而且是糖基化的。貝伐單抗已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)與化療方案聯(lián)合用 于治療轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌(CRC)和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC) (Hurwitz et al., N. Engl. J. Med. 350:2335-42 (2004); Sandler et al.， N. Engl. J. Med. 355:2542-50 (2006))。當(dāng)前，許多正在進(jìn)行的用于治療各種癌癥適應(yīng)癥的臨床試驗(yàn)中正在 研究貝伐單抗(Kerbel, J. Clin. Oncol. 19:45S國(guó)51S (2001); De Vore et al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 19:485a. (2000); Hurwitz et al" Clin. Colorectal Cancer6:66-69 (2006); Johnson et al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 20:315a (2001); Kabbi麗ar et al.， J. Clin. Oncol. 21:60-65 (2003》Miller et al.， Breast Can. Res. Treat. 94:Suppl 1:S6 (2005))。
貝伐單抗和其它人源化抗VEGF抗體進(jìn)一步記載于2005年2月26日公告 的美國(guó)專利No. 6,884,879。別的抗體包括G6或B20系列抗體(例如，G6-31 、 B20-4.1 )，如PCT公開文本No. WO2005/012359 、 PCT公開文本No. WO2005/044853、和US專利申請(qǐng)60/991，302中所記載的，通過述及將這些專 利申請(qǐng)的內(nèi)容明確收入本文。關(guān)于別的抗體，參見美國(guó)專利No. 7,060,269; 6,582,959; 6,703,020; 6，054,297; W098/45332; WO 96/30046; WO94/10202; EP 0666868B1;美國(guó)專利申請(qǐng)公開文本No. 2006009360， 20050186208, 20030206899， 20030190317, 20030203409，和20050112126;及Popkov et al" Journal of Immunological Methods 288:149-164 (2004)。其它抗體包4舌那些結(jié) 合人VEGF上功能性表位的抗體，所述功能性表位包含殘基F17、 M18、 D19、 Y21、 Y25、 Q89、 191、 K101、 E103、和C104或者包含殘基F17、 Y21、 Q22、 Y25、 D63、 183和Q89。
依照本發(fā)明的"G6系列抗體"指自G6抗體的序列衍生的抗VEGF抗體或 依照PCT公開文本No. WO2005/012359的圖7、 24-26、和34-35之任一的G6衍 生抗體，通過述及將其整個(gè)公開內(nèi)容收入本文。還可參見PCT公開文本No. WO2005/044853,通過述及將這些專利申請(qǐng)的內(nèi)容明確收入本文。在一個(gè)實(shí) 施方案中，G6系列抗體結(jié)合人VEGF上的功能性表位，該表位包含殘基F17、 Y21、 Q22、 Y25、 D63、 183和Q89。
依照本發(fā)明的"B20系列抗體"指自B20抗體的序列衍生的抗VEGF抗體 或依照PCT公開文本No. WO2005/012359的圖27-29之任一的B20衍生抗體， 通過述及將其整個(gè)公開內(nèi)容收入本文。還可參見PCT公開文本No. WO2005/044853和美國(guó)專利申請(qǐng)60/991 ，302,通過述及將這些專利申請(qǐng)的內(nèi) 容明確收入本文。在一個(gè)實(shí)施方案中，B20系列抗體結(jié)合人VEGF上的功能性 表位，其包含殘基F17、 M18、 D19、 Y21、 Y25、 Q89、 191、 K101、 E1(B、 和C104。
依照本發(fā)明的"功能性表位"指抗原中有力地促進(jìn)抗體結(jié)合的氨基酸殘 基。有力促進(jìn)抗原中殘基任一個(gè)的突變(例如，通過丙氨酸或同系物突變對(duì) 野生型VEGF進(jìn)行的突變)會(huì)破壞抗體的結(jié)合，使得抗體的相對(duì)親和力比值
12(IC50突變型VEGF/IC50野生型VEGF )會(huì)大于5 (參見WO2005/012359的實(shí)施例2)。在一個(gè)實(shí)施方案中，相對(duì)親和力比是通過溶液結(jié)合噬菌體展示ELISA測(cè)定的。簡(jiǎn)言之，將96孔Maxisorp免疫板(NUNC)用Fab形式的待測(cè)試抗體以PBS中2ug/ml的濃度于4。C包被過夜，并用PBS、 0.5% BSA、和0.05%Tween20(PBT)于室溫封閉2小時(shí)。首先將展示hVEGF丙氨酸點(diǎn)突變體(殘基8-109形式)或野生型hVEGF (8-109)的噬菌體在PBT中的連續(xù)稀釋液在Fab包被的板上于室溫溫育15分鐘，并用PBS、 0.05% Tween20 (PBST)清洗板。用在PBT中1:5000稀釋的抗M13單克隆抗體辣根過氧化物酶(AmershamPharmacia)偶聯(lián)物檢測(cè)所結(jié)合的噬菌體，用3,3，,5,5，-四曱基聯(lián)苯胺(TMB，Kirkegaard & Perry Labs, Gaithersburg, MD)底物顯色大約5分鐘，用l.O MH3P04淬滅，并以分光光度法于450nm讀數(shù)。IC50值的比(IC50，ala/IC50,wt)代表了結(jié)合親和力的降低倍數(shù)(相對(duì)結(jié)合親和力)。
貫穿本說明書和權(quán)利要求書，本文中免疫球蛋白重鏈殘基的編號(hào)方式是如Kabat等，《Sequences of Proteins of Immunological Interest》，第5版，PublicHealth Service, National Institutes of Health, Bethesda， Md. (1991)中的EU索引的編號(hào)方式，明確收入本文作為參考。"如Kabat中的EU索引"指人IgGl EU抗體的殘基編號(hào)方式。
術(shù)語"抗體，，在本文中以最廣義使用，明確覆蓋單克隆抗體(包括全長(zhǎng)單克隆抗體)、多克隆抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)、及抗體片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性。
在一個(gè)實(shí)施方案中，依照本發(fā)明的"Kd"或"Kd值"是通過如下測(cè)定法所述使用Fab型式的抗體和VEGF分子進(jìn)行的放射性標(biāo)記VEGF結(jié)合測(cè)定法(RIA)來測(cè)量的通過在存在未標(biāo)記VEGF的滴定系列的條件下，用最小濃度的1251標(biāo)記VEGF(109)平衡Fab，然后用抗Fab抗體包被的平板捕捉結(jié)合的VEGF來測(cè)量Fab對(duì)VEGF的溶液結(jié)合親和力(Chen, et al., J Mol Biol 293: 865-881(1999))。為了確定測(cè)定條件，用50mM碳酸鈉(pH9.6)中的5ixg/ml捕捉用抗Fab抗體(Cappel Labs)包被微量滴定板(Dynex)過夜，隨后用PBS中的2。/。 (w/v)牛血清清蛋白在室溫(約23。C)封閉2-5小時(shí)。在非吸附平板(Nunc #269620)中，將100pM或26pM [U5l]-VEGF(109)與連續(xù)稀釋的目的Fab(例如如Presta etal., Cancer Res. 57: 4593-4599 (1997)中的Fab-12)混合。然后將目的Fab保溫過夜；不過，保溫可持續(xù)65個(gè)小時(shí)以保證達(dá)到平衡。此后，將混合物轉(zhuǎn)移至捕捉板以進(jìn)行室溫保溫l小時(shí)。然后除去溶液，并用含0.1。/。Tween⑧20的PBS洗板8次。平斧反干燥后，加入150^il/孔閃爍液(MicroScint-20; Packard),然后在Topcount伽馬計(jì)數(shù)器(Packard)上對(duì)平板計(jì)數(shù)10分鐘。選擇各Fab給出小于或等于最大結(jié)合之20%的濃度用于竟?fàn)幮越Y(jié)合測(cè)定法。依照另一實(shí)施方案，IQ或Kd值是通過表面等離振子共振測(cè)定法使用BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000 (BIAcore， Inc., Piscataway， NJ)在25。C使用固定化hVEGF(8-109) CM5芯片在約10個(gè)響應(yīng)單位(RU)測(cè)量的。簡(jiǎn)而言之，依照供應(yīng)商的說明書用鹽酸N-乙基-N，-(3-二曱基氨基丙基)-碳化二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧曱基化右旋糖香生物傳感器芯片(CM5，BIAcore Inc.)。用10mM乙酸鈉pH 4.8將人VEGF稀釋至5pg/ml (約0.2jaM)，然后以5pl/分鐘的流速注入至獲得約IO個(gè)響應(yīng)單位(RU)的偶聯(lián)蛋白質(zhì)。注入人VEGF后，注入1M乙醇胺以封閉未反應(yīng)基團(tuán)。為了進(jìn)行動(dòng)力學(xué)測(cè)量，在25。C以約25|11/分鐘的流速注入在含0.05% Tween 20的PBS (PBST)中兩倍連續(xù)稀釋的Fab ( 0.78nM至500nM )。使用簡(jiǎn)單一對(duì)一 朗格繆爾(Langmuir)結(jié)合模型(BIAcore Evaluation Software version 3.2)通過同時(shí)擬合結(jié)合和解離傳感圖計(jì)
算結(jié)合速率(k。n)和解離速率(koff)。平衡解離常數(shù)(Kd)以比率k。g/k。n計(jì)算。參見
例如Chen, Y., et al.， J Mol Biol 293: 865-881 (1999)。如果根據(jù)上文表面等離振子共振測(cè)定法，結(jié)合速率超過106 M" S"，那么結(jié)合速率可使用熒光淬滅技術(shù)來測(cè)定，即根據(jù)分光計(jì)諸如配備了斷流裝置的分光光度計(jì)(a stop-flowequipped spectrophometer)(Aviv Instruments)或8000系歹l) SLM-AmincoTM分光光度計(jì)(ThermoSpectronic)中用攪拌比色杯的測(cè)量，在存在濃度漸增的人VEGF短形式(8-109)或小鼠VEGF的條件下，測(cè)量PBS， pH 7.2中的20nM抗VEGF抗體(Fab形式)在25。C的熒光發(fā)射強(qiáng)度(激發(fā)-295nm;發(fā)射二340nm，16nm帶通(bandpass))的升高或降低。
"阻斷性"抗體或抗體"拮抗劑"指抑制或降低其所結(jié)合的抗原的生物學(xué)活性的抗體。例如，VEGF特異性拮抗性抗體結(jié)合VEGF并抑制VEGF誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的能力。在某些實(shí)施方案中，阻斷性抗體或拮抗性抗體完全抑制抗原的生物學(xué)活性。
除非另有說明，表述"多價(jià)抗體，，貫穿本說明書用于指包含三個(gè)或更多抗原結(jié)合位點(diǎn)的抗體。多價(jià)抗體優(yōu)選改造成具有三個(gè)或更多個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，而且一般不是天然序列IgM或IgA抗體。
14"Fv"片段是包含完整抗原識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)的抗體片段。該區(qū)域由緊密結(jié)合(該結(jié)合的本質(zhì)可以是共價(jià)的，例如在scFv中)的一個(gè)重鏈可變域(區(qū))和一個(gè)輕鏈可變域(區(qū))的二聚體組成。正是在這種構(gòu)造中，每個(gè)可變域(區(qū))的三個(gè)CDR相互作用而在Vh-Vl二聚體表面上限定了 一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。六個(gè)CDR或其子集一起賦予抗體以抗原結(jié)合特異性。然而，即使是單個(gè)可變域(區(qū))(或是只包含對(duì)抗原特異性的三個(gè)CDR的半個(gè)Fv)也具有識(shí)別和結(jié)合抗原的能力，只是通常親和力低于完整結(jié)合位點(diǎn)。
在用于本文時(shí)，"抗體可變域(區(qū))"指抗體分子的輕鏈和重鏈中包含互補(bǔ)決定區(qū)(CDR;即CDR1、 CDR2、和CDR3)和框架區(qū)(FR)氨基S吏序列的那部分。VH指重鏈可變域(區(qū))。Vj旨輕鏈可變域(區(qū))。依照本發(fā)明所使用的方法，歸為CDR和FR的氨基酸位置可以依照Kabat (Sequences of Proteins ofImmunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda， Md.， 1987和1991))來限定?？贵w或抗原結(jié)合片段的氨基酸編號(hào)方式也依照Kabat的氨基酸編號(hào)。
在用于本文時(shí)，術(shù)語"互補(bǔ)決定區(qū)(CDR;即CDR1、 CDR2、和CDR3)指抗體可變域(區(qū))中其存在是抗原結(jié)合所必需的氨基酸殘基。每個(gè)可變域通常具有三個(gè)CDR,鑒定為CDR1、 CDR2和CDR3。每個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)可以包含來自如Kabat定義的"互補(bǔ)決定區(qū)"的氨基酸殘基(即大約是輕鏈可變域的殘基24-34 (Ll)、 50-56 (L2)和89-97 (L3)及重鏈可變域的殘基31-35 (Hl)、 50-65 (H2)禾口95-102 (H3); Kabat等，Se《we"cas o//Vofe/"s o//mmw"o/og/ca/7""fereW, 5thEd. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))和/或來自"高變環(huán)"的殘基(即大約是輕鏈可變域的殘基26-32 (Ll)、 50-52 (L2)和91-96 (L3)及重鏈可變域的殘基26-32 (Hl)、 53-55 (H2)和96-101 (H3);Chothia and Lesk， J! Mo/.所o/. 196:901-917(1987))。在有些情況中，互補(bǔ)決定區(qū)可以包含來自Kabat定義的CDR和高變環(huán)二者的氨基酸。例如，抗體4D5重鏈的CDRH1包含氨基酸26-35。
"才匡架區(qū)，，(以下的FR)指可變域中CDR殘基以外的殘基。每個(gè)可變域通常具有四個(gè)FR，鑒定為FR1、 FR2、 FR3和FR4。如果CDR是依照Kabat定義的，那么輕鏈FR殘基位于大約輕鏈殘基l-23 (LCFR1)、 35-49 (LCFR2)、57-88 (LCFR3)、和98-107 (LCFR4)，而重鏈FR殘基位于大約重鏈殘基l-30(HCFR1)、 36-49 (HCFR2)、 66-94 (HCFR3)、和103-113 (HCFR4)。如果CDR包含來自高變環(huán)的氨基酸殘基，那么輕鏈FR殘基位于大約輕鏈殘基l-25 (LCFR1)、 33-49 (LCFR2)、 53-90 (LCFR3)、和97畫107 (LCFR4)，而重鏈FR 殘基位于大約重鏈殘基1-25 (HCFR1)、 33-52 (HCFR2)、 56-95 (HCFR3)、和 102-113 (HCFR4)。在有些情況中，在CDR包含來自Kabat定義的CDR和高變 環(huán)二者的氨基酸時(shí)，F(xiàn)R殘基將做相應(yīng)的調(diào)整。例如，當(dāng)CDRH1包含氨基酸 H26-H35時(shí)，重鏈FRl殘基位于l-25位，而FR2殘基位于36-49位。
"Fab"片段包含輕4連的可變域和恒定域及重鏈的可變域和第一恒定域 (CH1)。 F(ab')2抗體片段包含一對(duì)Fab片段，它們一般在它們羧基末端附近通 過它們之間的鉸鏈半胱氨酸共價(jià)連接。本領(lǐng)域還知道抗體片段的其它化學(xué)偶 聯(lián)形式。
"單鏈Fv"或"scFv，，抗體片段包含抗體的VH和V^結(jié)構(gòu)域，其中這些結(jié)構(gòu)域 存在于一條多肽鏈上。
一般而言，F(xiàn)V多肽在VH與VL結(jié)構(gòu)域之間進(jìn)一步包含 多肽接頭，其使得scFv能夠形成結(jié)合抗原的期望結(jié)構(gòu)。關(guān)于scFv的綜述參見 Pluckthun, 于《The Pharmacology of Monoclonal Antibodies》，第113巻, Rosenburg和Moore編，Springer-Verlag， New York, 第269-315頁，1994。
術(shù)語"雙抗體(diabody)"指具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的小型抗體片段，該片 段在同一條多肽鏈(Vh及Vl)中包含相連的重鏈可變域(VH)和輕鏈可變域 (Vl)。通過使用過短的接頭使得同一條鏈上的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間不能配對(duì)，迫 使這些結(jié)構(gòu)域與另 一條鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對(duì)，從而產(chǎn)生兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。 雙抗體更完整的記載于例如EP 404,097; WO 93/11161; Hollinger等，尸rac. Ato/. y4cad L/5"y4 90:6444-6448 (1993)。
表述"線性抗體，，指Zapata等，8(10):1057-1062 (1995)中所描 述的抗體。簡(jiǎn)言之，這些抗體包含一對(duì)串聯(lián)的Fd區(qū)段(VH-CHl-VH-CHl)，該
區(qū)段與互補(bǔ)的輕鏈多肽一起形成抗原結(jié)合區(qū)對(duì)。線性抗體可以是雙特異性 的，或者是單特異性的。
術(shù)語"單克隆抗體"在用于本文時(shí)指從一群基本上同質(zhì)的抗體獲得的抗 體，即構(gòu)成群體的各抗體個(gè)體是相同的，除了可以以極小量存在的可能的天 然存在突變形式外。單克隆抗體是高度特異性的，針對(duì)單一抗原性位點(diǎn)。此 外，與典型的包含針對(duì)不同決定簇(表位)的不同抗體的常規(guī)(多克隆)抗 體制備物不同，每種單克隆抗體針對(duì)抗原上的單一決定簇。修飾語"單克隆" 指示抗體從基本上同質(zhì)的抗體群獲得的特征，不應(yīng)解釋為要求通過任何特定方法來生成抗體。例如，將依照本發(fā)明使用的單克隆抗體可通過最初由Kohler 等A^ww 256:495, (1975)記載的雜交瘤方法來制備，或者可通過重組DNA方 法來制備(參見例如美國(guó)專利No. 4,816,567)。"單克隆抗體"還可使用例如 Clackson等7V^we 352:624-628, (1991)和Marks等乂 Mo/.所o/. 222:581-597,
(1991) 中記載的技術(shù)從噬菌體抗體庫(kù)分離。 單克隆抗體在本文中明確包括"嵌合"抗體(免疫球蛋白)，其中重鏈和/
或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或?qū)儆谔囟贵w類別或亞類的抗體中的 相應(yīng)序列相同或同源，而鏈的剩余部分與衍生自另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類 別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，以及此類抗體的片段，只要它們 展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性(美國(guó)專利No. 4,816,567; Morrison等Ato/. Jed 5W.園81:6851-6855)， (1984)。
非人(例如鼠)抗體的"人源化，，形式指最低限度包含衍生自非人免疫 球蛋白的序列的嵌合抗體。在極大程度上，人源化抗體指人免疫球蛋白(受 體抗體)中的高變區(qū)殘基用具有期望特異性、親和力和能力的非人物種(供 體抗體)諸如小鼠、大鼠、兔或非人靈長(zhǎng)類的高變區(qū)殘基替換的免疫球蛋白。 在有些情況中，將人免疫球蛋白的Fv框架區(qū)(FR)殘基用相應(yīng)的非人殘基替 換。此外，人源化抗體可包含在受體抗體或供體抗體中沒有發(fā)現(xiàn)的殘基。進(jìn) 行這些修飾是為了進(jìn)一步改進(jìn)抗體的性能。通常，人源化抗體包含至少一個(gè)、 通常兩個(gè)基本上整個(gè)如下可變區(qū)，其中所有或基本上所有高變環(huán)對(duì)應(yīng)于非人 免疫球蛋白的高變環(huán)，且所有或基本上所有FR區(qū)是人免疫球蛋白序列的FR。 人源化抗體任選還包含至少部分免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc),通常是人免疫球蛋 白的恒定區(qū)。更多細(xì)節(jié)參見Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332: 323-329 (1988); Presta, Curr. Op. Struct Biol. 2: 593-596
(1992) 。
"人抗體"指擁有與由人生成的抗體的氨基酸序列對(duì)應(yīng)的氨基酸序列和
定義明確排除包含非人抗原結(jié)合殘基的人源化抗體。人抗體可使用本領(lǐng)域已 知的多種技術(shù)來生成。在一個(gè)實(shí)施方案中，人抗體是從噬菌體文庫(kù)選擇的， 該p盆菌體文庫(kù)表達(dá)人抗體(Vaughan et al., TV^wre 5/o&c/2"o/ogy 14:309-314 (1996); Sheets et al"脂/.」cd 95:6157-6162 (1998); Hoogenboom and Winter, / Mo/. 227:381 (1991); Marks et al.，Tkfo/. 222:581(1991) )。人抗體還可通過將人免疫球蛋白基因座導(dǎo)入內(nèi)源免疫球蛋白基因已 經(jīng)部分或完全滅活的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如小鼠)來生成。在受到攻擊時(shí)，觀察 到人抗體生成，它在所有方面與在人體中看到的極其相似，包括基因重排、 裝配和抗體全集。這種方法記載于例如美國(guó)專利No. 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5，633，425; 5,661,016,及以下科學(xué)出版物Marks et al" 5/0/rec/7"o/ow 10:779-783 (1992); Lonberg et al" Atoww 368:856-859 (1994); Morrison, A^wre 368:812-13 (1994); Fishwild et al" 7V齒re所0&c/2w0/0gy 14:845-51 (1996); Neuberger，淑匿腸fec/wo/， 14:826 (1996); Lonberg and Huszar，/Mfer". i ev./wmwo/. 13:65-93 (1995)?；蛘?，人抗體可通過生成針對(duì) 靶抗原的抗體的人B淋巴細(xì)胞的永生化來制備(此類B淋巴細(xì)胞可從個(gè)體回 4史，或者可在體夕卜免疫)。參見例^口Cole et al., Mo"oc/owa/ j""6c^/as a"t/ Ga"cer 777era/7_y, Alan R. Liss， p.77 (1985); Boerner et al" //wwwwo/. 147(l):86-95 (1991);及美國(guó)專利No. 5,750,373。
"親和力成熟的"抗體指在抗體的一個(gè)或多個(gè)CDR中具有一處或多處改 變、導(dǎo)致該抗體對(duì)抗原的親和力與沒有這些改變的親本抗體相比有所改進(jìn)的 抗體。優(yōu)選的親和力成熟的抗體具有納摩爾或甚至皮摩爾量級(jí)的對(duì)靶抗原的 親和力。親和力成熟的抗體可通過本領(lǐng)域已知M4呈來生成。Marks d S/o/Tec/z朋/ogy 10:779-783 (1992)記載了通過VH和VL結(jié)構(gòu)域改組進(jìn)行的親和 力成熟。以下文獻(xiàn)記載了 CDR和/或框架殘基的隨機(jī)誘變Barbas ^ a/.,戶rac. Ato. ^cad 5W. 91:3809-3813 (1994); Schier " a/" 169:147-155
(1995); Yelton a/.， / /附mww /. 155:1994-2004 (1995); Jackson d a/., / /國(guó)畫/, 154(7):3310-9 (1995); Hawkins & a/.， J Mo/.脂.226:889-896
(1992) 。
抗體的"功能性抗原結(jié)合位點(diǎn)"指能夠結(jié)合靶抗原的位點(diǎn)。抗原結(jié)合位 點(diǎn)的抗原結(jié)合親和力不必像衍生該抗原結(jié)合位點(diǎn)的親本抗體那樣強(qiáng)，但是結(jié) 合抗原的能力必須是使用已知用于評(píng)估抗體對(duì)抗原結(jié)合的多種方法之任一 可測(cè)量到的。此外，本文中多價(jià)抗體的每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的抗原結(jié)合親和力 不必在量上相同。對(duì)于本文中的多聚體抗體，功能性抗原結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)目可 以使用超速離心分析來評(píng)估，如美國(guó)專利申請(qǐng)公開文本No. 20050186208中所 記載的。依照這種分析方法，將靶抗原與多聚體抗體以不同比例混合，并計(jì) 算復(fù)合物的平均分子量，其中假設(shè)不同數(shù)目的功能性結(jié)合位點(diǎn)。將這些理論值與得到的實(shí)際實(shí)驗(yàn)值進(jìn)行比較以評(píng)估功能性結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)目。
具有指定抗體的"生物學(xué)特征"的抗體指擁有該指定抗體區(qū)別于其它結(jié)
合相同抗原的抗體的 一 項(xiàng)或多項(xiàng)生物學(xué)特征的抗體。
為了篩選結(jié)合抗原上感興趣抗體所結(jié)合的表位的抗體，可以實(shí)施常規(guī)交
叉阻斷觀寸定法,諸^口Jw^70(i/as，爿丄a6onato^7 Afowwa/, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)中所記載的。
"物種依賴性抗體"指這樣一種抗體，其對(duì)來自第一哺乳動(dòng)物物種的抗 原具有強(qiáng)于對(duì)來自第二哺乳動(dòng)物物種的該抗原同系物的結(jié)合親和力。通常， 物種依賴性抗體"特異性結(jié)合，，人類抗原(即具有不超過約lxl0;M,優(yōu)選 不超過約l x l(T8 M，最優(yōu)選不超過約l x 10'9 M的結(jié)合親和力(Kd) )， ^f旦對(duì)來 自第二非人哺乳動(dòng)物物種的該抗原同系物具有比其對(duì)人類抗原的結(jié)合親和 力弱至少約50倍，或至少約500倍，或至少約1000倍的結(jié)合親和力。物種依 賴性抗體可以是如上定義的各種類型的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，物種依賴 性抗體是人源化抗體或人抗體。
在用于本文時(shí)，"抗體突變體"或"抗體變體，，指物種依賴性抗體的氨基酸 序列變體，其中物種依賴性抗體的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基發(fā)生了修飾。此類 突變體與物種依賴性抗體必然具有小于100%的序列同一性或相似性。在一 個(gè)的實(shí)施方案中，抗體突變體所具有的氨基酸序列與物種依賴性抗體的重鏈 或輕鏈可變域的氨基酸序列具有至少75%、更優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少 85%、更優(yōu)選至少90%、最優(yōu)選至少95。/。的氨基酸序列同一性或相似性。關(guān)
口以實(shí)現(xiàn)最大百分比序列同一性后，候選序列中與物種依賴性抗體殘基相同 (即相同殘基)或相似(即根據(jù)共同側(cè)鏈特性來自同一組的氨基酸殘基，見 下文)的氨基酸殘基的百分比。N-末端、C-末端、或內(nèi)部的延伸、刪除、或 插入可變域(區(qū))以外的抗體序列都不應(yīng)視為影響序列同一性或相似性。
為了延長(zhǎng)包含本發(fā)明氨基酸序列的抗體或多肽的半衰期，可如例如美國(guó) 專利No. 5,739，277中所記載的將補(bǔ)救受體結(jié)合表位附著于抗體(尤其是抗體 片段)。例如，可以將編碼補(bǔ)救受體結(jié)合表位的核酸分子與編碼本發(fā)明多肽 序列的核酸在同 一讀碼框內(nèi)相連接，使得由改造后的核酸分子編碼的融合蛋 白包含補(bǔ)救受體結(jié)合表位和本發(fā)明的多肽序列。在用于本文時(shí)，術(shù)語"補(bǔ)救 受體結(jié)合表位"指IgG分子(例如IgGp IgG2、 IgG3或IgG4)的Fc區(qū)中負(fù)責(zé)延長(zhǎng)lgG分子體內(nèi)血清半衰期的表^f立(例》口Ghetie et al., Ann. Rev. Immunol. 18:739-766(2000),表l)。其Fc區(qū)中有替代且血清半衰期延長(zhǎng)的抗體還記載于 WO00/42072; WO 02/060919; Shields et al.， J. Biol. Chem. 276:6591-6604 (2001); Hinton, J. Biol. Chem. 279:6213-6216 (2004》。在另一個(gè)實(shí)施方案中， 還可以通過例如附著其它多肽序列來延長(zhǎng)血清半衰期。例如，可以將在本發(fā) 明的方法中有用的抗體或其它多肽附著于血清清蛋白或血清清蛋白中結(jié)合 FcRn受體或血清清蛋白結(jié)合肽的那部分，使得血清清蛋白結(jié)合該抗體或多 肽，例如此類多肽序列披露于W001/45746。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，待 附著的血清清蛋白肽包含氨基酸序列DICLPRWGCLW 。在另一個(gè)實(shí)施方案 中，F(xiàn)ab的半衰期通過這些方法得到了延長(zhǎng)。血清清蛋白結(jié)合肽序列還可參 見Dennis et al., J. Biol. Chem. 277:35035-35043 (2002)。
"嵌合VEGF受體蛋白"指具有衍生自至少兩種不同蛋白質(zhì)(其中至少一 種是VEGF受體蛋白)的氨基酸序列的VEGF受體分子。在某些實(shí)施方案中， 嵌合VEGF受體蛋白能夠結(jié)合VEGF并抑制VEGF的生物學(xué)活性。
"分離的"多肽或"分離的"抗體指已經(jīng)鑒定且自其天然環(huán)境的一種成 分分開和/或回收的多肽或抗體。其天然環(huán)境的污染性成分指將會(huì)干擾該多肽 或抗體的診斷或治療用途的物質(zhì)，可包括酶、激素、和其它蛋白質(zhì)性質(zhì)或非 蛋白質(zhì)性質(zhì)的溶質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，將多肽或抗體純化至(l)才艮據(jù)Lowry 法的測(cè)定，多肽或抗體重量超過95%，最優(yōu)選重量超過99%, (2)足以通過使 用轉(zhuǎn)杯式測(cè)序儀獲得至少15個(gè)殘基的N-末端或內(nèi)部氨基酸序列的程度，或(3)
達(dá)到同質(zhì)。既然多肽或抗體天然環(huán)境的至少一種成分不會(huì)存在，那么分離的 多肽或抗體包括重組細(xì)胞內(nèi)的原位多肽或抗體。然而，分離的多肽或抗體通 常將通過至少一個(gè)純化步驟來制備。
"片段"指多肽和核酸分子的一部分，其含有參比核酸分子或多肽全長(zhǎng)的 至少10%、 20%、 30%、 40%、 50%、 60%、 70%、 80%、卯％、 95%、或更 多。所述片段可含有10、 20、 30、 40、 50、 60、 70、 80、 90、或100、 200、 300、 400、 500、 600、或更多個(gè)核苷酸，或者10、 20、 30、 40、 50、 60、 70、 80、 90、 100、 120、 140、 160、 180、 l卯、200或更多個(gè)氨基酸。
"處理"和"治療"(treatment)指治療性處理和預(yù)防性措施二者。需要 治療的受試者包括那些早就患有良性、癌前、或非轉(zhuǎn)移性腫瘤的受試者以及要預(yù)防腫瘤發(fā)生或復(fù)發(fā)的受試者。
術(shù)語"治療有效量"指在哺乳動(dòng)物中治療或預(yù)防疾病或病癥的治療劑量。
在癌癥的情況中，治療有效量的治療劑可減少癌細(xì)胞的數(shù)目；縮小原發(fā)性腫 瘤的大?。灰种?即一定程度的減緩，優(yōu)選阻止)癌細(xì)胞浸潤(rùn)入周圍器官； 抑制(即一定程度的減緩，優(yōu)選阻止)腫瘤轉(zhuǎn)移； 一定程度的抑制腫瘤生長(zhǎng)； 和/或一定程度的減輕一種或多種與病癥有關(guān)的癥狀。#4居藥物可阻止現(xiàn)有癌 細(xì)胞生長(zhǎng)和/或殺死現(xiàn)有癌細(xì)胞的程度，它可以是細(xì)胞抑制性的和/或細(xì)胞毒 性的。對(duì)于癌癥療法，體內(nèi)功效可以通過例如評(píng)估存活持續(xù)時(shí)間、距疾病進(jìn) 展的時(shí)間(time to disease progression, TTP)、響應(yīng)率(RR)、響應(yīng)持續(xù)時(shí)間、和 /或生活質(zhì)量來測(cè)量。
術(shù)語"癌(癥)"和"癌(性)的"指向或描述哺乳動(dòng)物中典型的以不受調(diào) 節(jié)的細(xì)胞生長(zhǎng)為特征的生理疾患。此定義中包括良性和惡性癌癥。"早期癌 癥"或"早期腫瘤"指非侵入性的或非轉(zhuǎn)移性的，或者歸為0期、I期、或II 期癌癥的癌癥。
術(shù)語"癌前"指典型地在癌之前或發(fā)展成癌的疾患或生長(zhǎng)。"癌前"生長(zhǎng)會(huì) 具有以異常細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、增殖、或分化為特征的細(xì)胞，這些可通過細(xì)胞周 期調(diào)節(jié)、細(xì)胞增殖、或分化的標(biāo)志物來測(cè)定。
"發(fā)育異常"指組織、器官、或細(xì)胞的任何異常生長(zhǎng)或發(fā)育。優(yōu)選的是， 發(fā)育異常是高級(jí)的或癌前的。
"轉(zhuǎn)移"指癌自其原發(fā)部位傳播至身體中的其它位置。癌細(xì)胞能脫離原發(fā) 性腫瘤，滲透入淋巴和血管，經(jīng)由血流而循環(huán)，和在身體中其它地方的正常 組織中的遠(yuǎn)端病灶(轉(zhuǎn)移)中生長(zhǎng)。轉(zhuǎn)移可以是當(dāng)?shù)氐幕蜻h(yuǎn)端的。轉(zhuǎn)移是一 個(gè)連續(xù)過程，視腫瘤細(xì)胞自原發(fā)性腫瘤脫落、經(jīng)由血流而傳播、并在遠(yuǎn)端部 位停止而定。在新的部位，該細(xì)胞建立血供且能生長(zhǎng)至形成危及生命的團(tuán)塊。
腫瘤細(xì)胞內(nèi)的刺激性和抑制性分子途徑調(diào)節(jié)這種行為，而且腫瘤細(xì)胞與 遠(yuǎn)端部位中的宿主細(xì)胞之間的相互作用也是重要的。
"非轉(zhuǎn)移的"指良性的或保留在原發(fā)部位且尚未滲透入淋巴或血管系統(tǒng)
或滲透至原發(fā)部位以外的組織的癌癥。 一般而言，非轉(zhuǎn)移性癌癥指作為o期、 i期、或n期癌癥和偶爾的m期癌癥的任何癌癥。
"原發(fā)性腫瘤"或"原發(fā)性癌"指初始的癌癥，而不是位于受試者身體中另 一組織、器官、或位置中的轉(zhuǎn)移病灶。"良性腫瘤"或"良性癌"指仍然局限于起源部位且沒有能力滲透、侵入、 或轉(zhuǎn)移至遠(yuǎn)端部位的腫瘤。
"腫瘤載荷"指身體中癌細(xì)胞的數(shù)目、腫瘤的大小、或癌的量。腫瘤載荷 也稱作肺瘤負(fù)荷。
"腫瘤數(shù)目"指肺瘤的數(shù)目。
"受試者"指哺乳動(dòng)物，包括但不限于人或非人哺乳動(dòng)物，諸如牛、馬、 犬、綿羊、或貓。在一個(gè)實(shí)施方案中，受試者指人。
術(shù)語"抗癌療法"指在治療癌癥中有用的療法?？拱┲委焺┑睦影ǖ?不限于例如化療劑、生長(zhǎng)抑制劑、細(xì)胞毒劑、放射療法中所使用的藥劑、抗
血管發(fā)生劑、凋亡劑、抗微管蛋白劑、和其它治療癌癥的藥劑，諸如抗HER-2 抗體、抗CD20抗體、表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)拮抗劑(例如酪氨酸激酶抑 制劑)、HER1/EGFR抑制劑(例如erlotinib (Tarceva ))、血小板衍生生長(zhǎng)因 子抑制劑(例如GleevecTM (Imatinib Mesylate)), COX-2抑制劑(例如 celecoxib)、干擾素、細(xì)胞因子、結(jié)合一種或多種以下靶物的拮抗劑(例如 中和性抗體)(ErbB2、 ErbB3、 ErbB4、 PDGFR畫卩、BlyS、 APRIL、 BCMA 或VEGF受體、TRAIL/Apo2)、和其它生物活性和有機(jī)化學(xué)劑，等。本發(fā)明 還包括它們的組合。
術(shù)語"細(xì)胞毒劑，，在用于本文時(shí)指抑制或阻止細(xì)胞功能和/或引起細(xì)胞破 壞的物質(zhì)。該術(shù)語意圖包括放射性同位素(例如I131、 I125、 Y^和Re186)、化 療劑、和毒素諸如細(xì)菌、真菌、植物或動(dòng)物起源的酶活毒素或其片段。
"化療劑"指可用于治療癌癥的化學(xué)化合物。化療劑的例子包括可用于治 療癌癥的化學(xué)化合物。化療劑的例子包括烷化劑類(alkylating agents),諸如 塞替派(thiotepa)和CYTOXAN⑧環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide);磺酸烷基酯類 (alky 1 sulfonates) ， i者如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和p底泊舒凡 (piposulfan); 氮丙口定類(aziridines) ， i者長(zhǎng)口苯佐替》泉(benzodepa)、 卡；皮酉昆 (carboquone)、 美妥替派(meturedepa)和烏瑞替派(uredepa); 乙撐亞胺類 (ethylenimines)和曱基蜜胺類(methylamelamines)，包4舌六曱蜜胺(altretamine)、 三乙撐蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撐石奔酰胺(triethylenephosphoramide)、 三乙撐碌l代磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三羥曱蜜胺 (trimethylolomelamine); 番篇對(duì)支內(nèi)面旨類(acetogenins)(尤其是布4立 <也辛 (bullatacin)和布4^也辛酮(bullatacinone));喜杉于石咸(camptothecin)(包4舌合成類似物托泊替康(topotecan));苔蘚抑素(bryostatin); callystatin; CC-1065 (包 括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)和比折來新(bizelesin)合成類 似物)；隱藻素類(ciyptophycins)(特別是隱藻素1和隱藻素8);多拉司他汀 (dolastatin); duocarmycin (包括合成類似物，KW-2189和CB1-TM1 );艾榴 塞》各素(eleutherobin); pancratistatin; sarcodictyin; 海纟帛4中素(spongistatin); 氮芥類(nitrogen mustards) ， ^者長(zhǎng)口苯丁酉吏氮芥(chlorambucil)、 萘氮芥 (chlornaphazine)、月旦石粦酰胺(cholophosphamide)、處,莫司汀(estramustine)、 異 環(huán)磷酰胺(ifosfamide)、雙氯乙基曱胺(mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥 (mechlorethamine oxide hydrochloride)、 美法侖(melphalan)、 新氮芥 (novembichin)、苯芥膽甾醇(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲石岸 胺(trofosfamide)、尿嘧口定氮芥(uracil mustard); 亞硝'脲類(nitrosoureas), i者如 卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛 莫司汀(Iomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimustine);抗生素類， 諸如烯二炔類抗生素(enediyne)(例如加利車霉素(calicheamicin),尤其是加 利車霉素YlI和加利車霉素(oIl (參見例如Agnew (l"4) Chem. Intl. Ed. Engl. 33:183-186);蒽環(huán)類抗生素(dynemicin),包括dynemicin A; 二膦酸鹽類 (bisphosphonates), i者長(zhǎng)口氯膦酸鹽(clodronate);》矣^b皮霉素(esperamicin); 以 及新制癌素(neocarzinostatin)發(fā)色團(tuán)和相關(guān)色蛋白烯二炔類抗生素發(fā)色團(tuán))、 阿克拉霉素(aclacinomycin)、放線菌素(actinomycin)、氨茴霉素(anthramycin)、 偶氮絲氨酸(azaserine)、博來霉素(bleomycin)、 i欠線菌素C (cactinomycin)、 carabicin 、 洋紅霉素(carminomycin)、 嗜癌霉素(carzinophilin)、 色霉素 (chromomycin)、放線菌素D (dactinomycin)、柔紅霉素(daunorubicin)、地托比 星(detorubicin) 、 6- 二氮-5-氧-L-正亮氨酸、ADRIAMYCIN 多柔比星 (doxorubicin)(包括嗎啉代多柔比星、氰基嗎啉代多柔比星、2-吡咯代多柔 比星和脫氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達(dá)比 星(idarubicin)、麻西羅霉素(marcellomycin)、絲裂霉素類(mitomycins)諸如絲 裂霉素C、霉酚酸(mycophenolic acid)、諾拉霉素(nogalamycin)、橄欖霉素 (olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素 (puromycin)、 三鐵阿霉素(quelamycin)、 羅多比星(rodorubicin)、 鏈黑菌素 (streptonigrin)、 4連佐星(streptozocin)、 殺結(jié)菌素(tubercidin)、 烏苯美司 (ubenimex)、凈司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin);抗代謝物類，諸如曱氨蝶呤(methotrexate)和5-氟尿嘧啶(5-FU);葉酸類似物，諸如二甲葉酸 (denopterin)、 曱氨蟲栗 令(methotrexate)、蟲菜羅卩令(pteropterin)、 三曱曲沙 (trimetrexate); 噤 令類似物，^者如氟達(dá)4立濱(fludarabine) 、 6畫悉乾基嘌"令 (mercaptopurine)、石克咪嘌呤(thiamiprine)、碌u鳥口票呤(thioguanine);嘧咬類似 物，諸如安西他濱(ancitabine)、阿扎月包香(azacitidine)、 6-氮尿苷(azauridine)、 卡莫氟(carmofur)、阿沖唐月包普(cytarabine)、只又脫氧尿香(dideoxyuridine)、去氧 氟尿芬(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苦(floxuridine);雄激素類， 諸^口卡魯睪西同(calusterone)、 丙酸屈他i^酉同(dromostanolone propionate)、表石危 雄醇(epitiostanol)、美力,烷(mepitiostane)、睪內(nèi)酉旨(testolactone);抗腎上尿袈類， 》者如氨魯米特(aminoglutethimide)、米4乇坦(mitotane)、曲》各司坦(trilostane); 葉酸補(bǔ)充劑，諸如亞葉酸(folinicacid);醋葡醛內(nèi)酯(aceglatone);醛磷酰胺糖 苦(aldophosphamide glycoside); 氨基乙酰丙商臾(aminolevulinic acid); 恩尿口密 咬(eniluracil); 安吖咬(amsacrine); bestrabucil; 比生群(bisantrene); 依達(dá)曲 沙(edatraxate); 地磷酰胺(defosfamide); 地美可辛(demecolcine); 地吖酉昆 (diaziquone); elfornithine;依利醋4妄(elliptinium acetate); i矣i皮審素(epothilone); 依托格魯(etoglucid);硝酸鎵；羥脲(hydroxyurea);香菇多糖(lentinan);氯尼 達(dá)明(lonidamine);美登木素生物堿類(maytansinoids),諸如美登素(maytansine) 和安絲菌素(ansamitocin); 米4乇胍月宗(mitoguazone); 米4乇蒽酉昆(mitoxantrone); 莫艱達(dá)醇(mopidamol); 二胺硝吖。定(nitracrine);噴司他丁(pentostatin);蛋氨 氮芥(phenamet); p比柔比星(pirarubicin); 洛索蒽醌(losoxantrone); 鬼臼酸 (podophyllinic acid); 2畫乙基酰肼(ethylhydrazide); 丙卡巴肼(procarbazine); PSK⑧多糖復(fù)合物(JHS Natural Products, Eugene, OR);雷佐生(razoxane);才艮 霉素(rhizoxin); 西佐喃(sizofiran); 螺; 走4者(spirogermanmm);纟田交《連孑包菌酉同 酸(tenuazonic acid);三亞胺醌(triaziquone); 2,2'，2"-三氯三乙胺；單端孢菌素 類(trichothecenes)(尤其是T-2毒素、疾孢菌素(verrucarin) A、桿孢菌素(roridin) A和蟲它行菌素(anguidin)); 烏拉坦(urethan); 長(zhǎng)春地辛(vindesine); 達(dá)卡巴口秦 (dacarbazine); 甘露莫司汀(mannomustine); 二溴甘露醇(mitobronitol); 二溴 衛(wèi)矛醇(mitolactol);派泊溴坑(pipobroman); gacytosine;阿糖月包苦(arabinoside) ("Ara-C");環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide);塞替派(thiotepa);類紫杉醇類 (taxoids)，例如TAXOL⑧帕利4也塞(paclitaxel) (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N丄)、ABRAXANE 不含克列莫佛(Cremophor)、清蛋白改造納米茅貞斗立齊ij型巾白利j也塞(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois) 和TAXOTERE⑧多西他塞(doxetaxel) (Rh6ne-Poulenc Rorer， Antony, France); 苯丁酸氮芥(chlorambucil); GEMZAR⑧吉西他濱(gemcitabine); 6-硫鳥嘌呤 (thioguanine);巰基噪p令(mercaptopurine);曱氨蟲萊p令(methotrexate);賴類似物， 諸^。力頃4白(cisplatin)和卡4白(carboplatin); 長(zhǎng)春石威(vinblastine); 4白(platinum); 依托泊苷(etoposide) (VP-16); 異環(huán)磷酰胺(ifosfamide); 米托蒽醌 (mitoxant歷e);長(zhǎng)春新堿(vincristine); NAVELBINE⑧長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine); 能滅瘤(novantrone);替尼泊香(teniposide);依達(dá)曲沙(edatrexate);道諾霉素 (daunomycin); 氨基蝶呤(aminopterin); 希羅達(dá)(xeloda); 伊本膦酸鹽 (ibandronate);伊立替康(irinotecan) (Camptosar, CPT-11)(包括伊立替康及 5-FU和亞葉酸的治療方案)；拓樸異構(gòu)酶抑制劑RFS 2000; 二氟曱基鳥氨酸 (DMFO);類視黃酸類(retinoids),諸如視黃酸(retinoic acid);卡培他濱 (capecitabine);考布他汀(combretastatin);亞葉酸(leucovorin) (LV);奧沙利 柏(oxaliplatin)，包括奧沙利鈿治療方案(FOLFOX); PKC-a、 Raf、 H-Ras、 EGFR (例如erlotinib (TarcevaTM》和VEGF-A的、降低細(xì)胞增殖的抑制劑；及 任何上述物質(zhì)的藥劑學(xué)可接受的鹽、酸或衍生物。
該定義還包括作用于調(diào)節(jié)或抑制激素對(duì)腫瘤作用的抗激素劑諸如抗雌 激素類和選擇性雌激素受體調(diào)控物類(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen) (包括NOLVADEX 他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬 (droloxifene)、 4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、 LY117018 、奧那司酮(onapristone)和FARESTON⑧托瑞米芬(toremifene);抑 制在腎上腺中調(diào)節(jié)雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制劑，諸如例如4(5)-咪 唑、氨魯米特(aminoglutethimide) 、 MEGASE 醋酸曱地孕酮(megestrol acetate) 、 AROMASIN⑧依西美坦(exemestane)、福美坦(formestane)、法倔唑 (fadrozole) 、 RIVISOR 伏羅唑(vorozole) 、 FEMARA 來曲唑(letrozole)和 ARIMIDEX⑧阿那曲唑(anastrozole);抗雄激素類，諸如氟他米特(flutamide)、 尼魯米特(nilutamide)、比卡米特(bicalutamide)、亮丙瑞4木(leuprolide)、和戈 舍瑞林(goserelin);以及曲沙他濱(troxacitabine) ( 1,3-二氧戊環(huán)核苷胞嘧啶類 似物)；反義寡核苷酸，特別是抑制涉及異常(abherant)細(xì)胞增殖的信號(hào)途經(jīng) 中的基因表達(dá)的反義寡核苷酸，諸如例如PKC-a、 Raf和H-Ras;核酶，諸如 VEGF表達(dá)抑制劑(例如ANGIOZYME⑥核酸)和HER2表達(dá)抑制劑；疫苗，諸如基因療法疫苗，例如ALLOVECTIN 疫苗、LEUVECTIN 疫苗和 VAXID⑧疫苗；PROLEUKIN rlL-2; LURTOTECAN⑧拓樸異構(gòu)酶l抑制劑； ABARELIX rmRH;長(zhǎng)春瑞濱(Vinorelbine)和埃斯波霉素(Esperamicins)(見 美國(guó)專利No. 4,675,187);及任何上述物質(zhì)的藥劑學(xué)可接受的鹽、酸或衍生物。
"蛋白激酶"指催化Y-磷酸根自ATE轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì)或肽中Ser/Thr或Tyr側(cè) 鏈上的羥基且密切涉及對(duì)多種重要細(xì)胞功能(最值得注意的是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、分 化、和增殖)的控制的一大類酶。雖然這些蛋白激酶中的每一種磷酸化特定 的蛋白質(zhì)/肽底物，但是它們都在高度保守的口袋中結(jié)合相同的第二底物 ATP。許多疾病(值得注意的是包括癌癥)與蛋白激酶介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo) 途徑的擾動(dòng)有聯(lián)系。
"蛋白激酶抑制劑，，指能夠阻斷一種或多種蛋白激酶活性的大或小分子 量化合物。在某些實(shí)施方案中，蛋白激酶抑制劑是靶向一種或多種涉及腫瘤 生長(zhǎng)、病理性血管發(fā)生和癌的轉(zhuǎn)移性進(jìn)展的受體酪氨酸激酶的小分子酪氨酸 激酶抑制劑(TKI)。 TKI靶向受體的胞內(nèi)激酶結(jié)構(gòu)域，由此降低或關(guān)閉信號(hào)轉(zhuǎn) 導(dǎo)。在抑制VEGFR之外，許多當(dāng)前開發(fā)的小分子TKI靶向其它受體，尤其是 受體酪氨酸激酶的分裂激酶結(jié)構(gòu)域(split kinase domain)家族中的那些。受體 酪氨酸激酶的例子包括表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體 (VEGFR)、血小板衍生生長(zhǎng)因子受體(PDGFR)和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體 (FGFR)。血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)是腫瘤相關(guān)血管發(fā)生的另 一種關(guān)鍵介 導(dǎo)物。它由許多腫瘤以旁分泌方式分泌，而且認(rèn)為它促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和基 質(zhì)形成。與VEGF類似，PDGF的生成在低氧條件下上調(diào)，諸如那些在血管化 不良的肺瘤組織中所看到的。PDGF經(jīng)多種過程促進(jìn)胂瘤生長(zhǎng)，包括癌細(xì)胞 的自分泌刺激和基質(zhì)細(xì)胞的旁分泌刺激(Heldin et al., Physiol Rev 79-1283-1316 (1999); Sundberg et al., Am J Pathol 151:479-492 (1997))。本領(lǐng)域 知道許多治療性小分子TKI,包括但不限于vatalanib (PTK787)、 erlotinib (TARCEVA )、 OSI-7卯4、 ZD6474 (ZACTIMA )、 ZD6126 (ANG453)、 ZD1839、 sunitinib (SUTENT )、 semaxanib (SU5416)、 AMG706、 AG013736、 Imatinib (GLEEVEC ) 、 MLN-518 、 CEP-701 、 PKC-412 、 Lapatinib (GSK572016)、 VELCADE 、 AZD2171、 sorafenib (NEXAVAR⑧)、XL880、 和CHIR-265。
術(shù)語"藥學(xué)可接受鹽形式"指那些保留活性化合物諸如sunitinib的生物學(xué)效力和特性的鹽形式。此類鹽包括(l)酸加成鹽，其是通過親本化合物的游離堿與無機(jī)酸(諸如氫氯酸、氫溴酸、硝酸、5磷酸、硫酸、和高氯酸等等)或與有機(jī)酸(諸如乙酸、草酸、(D)或(L)蘋果酸、馬來酸、曱磺酸、乙磺酸、對(duì)曱苯磺酸、水楊酸、酒石酸、檸檬酸、琥珀酸或丙二酸等等)的反應(yīng)而獲得的，優(yōu)選用氫氯酸或(L)-蘋果酸，諸如sunitinib的蘋果酸鹽；或(2)當(dāng)親本化合物中存在的酸性質(zhì)子被金屬離子(例如堿金屬離子、堿土離子)替換或用有機(jī)堿配位時(shí)所形成的鹽。例示性的離子包括處于其通?；蟽r(jià)的鋁、鉤、鋰、鎂、鉀、鈉和鋅。優(yōu)選的有機(jī)堿包括質(zhì)子化的叔15胺和季銨陽離子，部分包括三曱胺、二乙胺、N，N'-二千基乙二胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、曱葡胺(N-曱基葡糖胺)和普魯卡因。
術(shù)語"前體藥物"在用于本申請(qǐng)時(shí)指與母藥(parent drug)相比對(duì)肺瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性較小并能夠酶促活化或轉(zhuǎn)變?yōu)楦呋钚阅杆幮问降乃幱没钚晕镔|(zhì)的前體或書亍生物形式。參見例長(zhǎng)口 \Vilman, "Prodrugs in CancerChemotherapy", Biochemical Society Transactions, 14， pp. 375-382， 615thMeeting Belfast (1986)和Stella等，"Prodrugs: A Chemical Approach to TargetedDrug Delivery", Directed Drug Delivery, Borchardt等，編，pp. 247-267， HumanaPress (1985)。本發(fā)明的前體藥物包括^旦不限于含磷酸鹽/酯前體藥物、含碌^代磷酸鹽/酯前體藥物、含硫酸鹽/酯前體藥物、含肽前體藥物、D-氨基酸》務(wù)飾前體藥物、糖基化前體藥物、含(3-內(nèi)酰胺前體藥物、含任選取代苯氧基乙酰胺的前體藥物或含任選取代苯乙酰胺的前體藥物、可轉(zhuǎn)化為更具活性而無細(xì)胞毒性的藥物的5-氟胞嘧啶和其它5-氟尿苦前體藥物?？裳苌鸀楸景l(fā)明使用的前體藥物形式的細(xì)胞毒性藥物的例子包括但不限于上文描述的那些化療劑。
"放射療法"或"放療"指使用定向伽馬射線或貝塔射線來誘發(fā)對(duì)細(xì)胞的足夠損傷，以限制細(xì)胞正常發(fā)揮功能的能力或全然破壞細(xì)胞。應(yīng)當(dāng)領(lǐng)會(huì)，本領(lǐng)域知道許多方式來確定治療的劑量和持續(xù)時(shí)間。典型的治療作為 一次施用來給予，而典型的劑量范圍為每天10-200個(gè)單位(戈瑞(Gray))。
"降低或抑制"指引起20%、 30%、 40%、 50%、 60%、 70%、 75%、 80%、85%、 90%、 95%、或更多的總體降低的能力。降低或抑制可以指所治療的病癥的癥狀、轉(zhuǎn)移的存在或大小、原發(fā)性腫瘤的大小、或血管發(fā)生性病癥中血管的大小或數(shù)目。治療劑
本發(fā)明的特色在于在聯(lián)合療法中使用VEGF拮抗劑和蛋白激酶抑制劑來治療受試者中的腫瘤。VEGF拮抗劑指能夠結(jié)合VEGF,降低VEGF表達(dá)水平，或中和、阻斷、抑制、消除、降低、或干擾VEGF生物學(xué)活性(包括VEGF結(jié)合一種或多種VEGF受體和VEGF介導(dǎo)的血管發(fā)生和內(nèi)皮細(xì)胞存活或增殖)的分子。作為在本發(fā)明的方法中有用的VEGF拮抗劑包括特異性結(jié)合VEGF的抗體、抗VEGF抗體及其抗原結(jié)合片段、特異性結(jié)合VEGF由此使其隔絕與一種或多種受體結(jié)合的受體分子及衍生物、融合蛋白(例如VEGF-Trap(Regeneron))、和VEGF!2廣白樹毒素(Peregrine)。 VEGF拮抗劑還包括VEGF多肽的拮抗性變體、針對(duì)VEGF的RNA適體和肽體。下文描述了這些每一種的例子。
VEGF抗體通常不會(huì)結(jié)合其它VEGF同系物，諸如VEGF-B或VEGF-C，也不會(huì)結(jié)合其它生長(zhǎng)因子，諸如P1GF、 PDGF、或bFGF。此類抗VEGF抗體的例子包括但不限于本文中"定義"下所提供的那些。
兩種表征最全面的VEGF受體是VEGFR1 (也稱作Flt-l )和VEGFR2 (鼠同系物也稱作KDR和FLK-1 )。每一種受體對(duì)每一種VEGF家族成員的特異性有所不同，但是VEGF-A結(jié)合Flt-l和KDR二者。全長(zhǎng)Flt-l受體包括具有七個(gè)Ig結(jié)構(gòu)域的胞外結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域、和具有酪氨酸激酶活性的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。胞外結(jié)構(gòu)域涉及VEGF結(jié)合，而胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域涉及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。
特異性結(jié)合VEGF的VEGF受體分子或其片段可以在本發(fā)明的方法中用于結(jié)合和隔絕VEGF蛋白，由此阻止它發(fā)信號(hào)。在某些實(shí)施方案中，VEGF受體分子或其VEGF結(jié)合片段是可溶性形式，諸如sFlt-l。受體的可溶性形式發(fā)揮對(duì)VEGF蛋白生物學(xué)活性的抑制效應(yīng)，其通過結(jié)合VEGF,由此阻止它結(jié)合其在把細(xì)胞表面上存在的天然受體來實(shí)現(xiàn)。還包括VEGF受體融合蛋白，下文描述了它們的例子。
嵌合VEGF受體蛋白指具有自至少兩種不同蛋白質(zhì)(其中至少一種是VEGF受體蛋白，例如flt-l或KDR受體)衍生的氨基酸序列且能夠結(jié)合并抑制VEGF生物學(xué)活性的受體分子。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的嵌合VEGF受體蛋白由自只有兩種不同VEGF受體分子衍生的氨基酸序列組成；然而，可以將包含一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)、或所有七個(gè)來自flt-l和/或KDR受體胞外配體結(jié)合區(qū)的Ig樣結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列連接至來自其它無關(guān)蛋白質(zhì)的氨基酸序列，例如免疫球蛋白序列。與Ig樣結(jié)構(gòu)域組合的其它氨基酸序列對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員會(huì)是顯而易見的。嵌合VEGF受體蛋白的例子包括可溶性Flt-l/Fc、 KDR/Fc、或FLt 1/KDR/Fc (也稱作VEGF Trap )(參見例如PCT申請(qǐng)公開文本No. W097/44453)。
本發(fā)明的可溶性VEGF受體蛋白或嵌合VEGF受體蛋白包括沒有經(jīng)跨膜結(jié)構(gòu)域而固定至細(xì)胞表面的VEGF受體蛋白。因此，VEGF受體(包括嵌合受體蛋白)的可溶性形式，雖然能夠結(jié)合并滅活VEGF， -f旦是不包含跨膜結(jié)構(gòu)域，并如此一般不會(huì)變成與該分子在其中表達(dá)的細(xì)胞的細(xì)胞膜相結(jié)合。
適體指形成特異性結(jié)合靶分子(諸如VEGF多肽)的三級(jí)結(jié)構(gòu)的核酸分子。本領(lǐng)域完善建立了適體的生成和治療性用途。參見例如美國(guó)專利No.5,475,096。 VEGF適體是PEG化的經(jīng)修飾寡核苷酸，其采取使之能夠結(jié)合胞外VEGF的三維構(gòu)象。耙向VEGF、用于治療與年齡有關(guān)的黃斑變性的在治療上有效的適體的一個(gè)例子是pegaptanib (Macugen , OSI)。關(guān)于適體的別的信息可見于美國(guó)專利申請(qǐng)/^開文本No. 20060148748。
肽體(peptibody)指連接至編碼免疫球蛋白分子的片段或部分的氨基酸序列的肽序列。多肽可以衍生自通過任何用于特異性結(jié)合的方法(包括但不限于噬菌體展示技術(shù))選擇出的隨機(jī)化序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以將所選擇的多肽連接至編碼免疫球蛋白的Fc部分的氨基酸序列。特異性結(jié)合并拮抗VEGF的肽體在本發(fā)明的方法中也是有用的。
在本發(fā)明中有用的蛋白激酶抑制劑是那些至少有能力通過靶向PDGFR酪氨酸激酶而阻斷PDGF信號(hào)傳導(dǎo)途徑的那些蛋白激酶抑制劑。在某些實(shí)施方案中，抑制劑是小分子、非肽化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的蛋白激酶抑制劑靶向PDGFR和VEGFR-2酪氨酸激酶二者。PDGFR/VEGFR-2雙重抑制劑的例子是sunitinib 。
sunitinib (SUTENT , SU11248, Pfizer Inc)是輩巴向數(shù)種相關(guān)蛋白質(zhì)酪氨酸激酶受體(包括PDGFR-P、 KIT、和FLT-3)以及三種VEGF受體的口服抑制劑。SUTENT⑧是sunitinib的蘋果酸鹽。蘋果酸sunitinib在化學(xué)上描述為(2S)-羥基-丁二酸，與N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(Z)-(5-氟-l，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-內(nèi)絲鹽(ylidine))甲基]-2，4- 二曱基-1H-吡咯-3-羧酰胺(N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(Z)-(5-fluoro畫l，2-dihydro-2-oxo畫3H-indol-3-ylidine)methyl]-2，4國(guó)dimethyl陽lH-pyrrole-3國(guó)carboxamide)(l:l) 4匕合。分子式為C22H27FN402-C4H605 (Sun et al.， J Med Chem 41:2588-2603 (1998》。臨床前研究顯示了 sunitinib具有經(jīng)由VEGFR和PDGFR-(3介導(dǎo)的抗血管發(fā)生效應(yīng)和多種肺瘤細(xì)胞系中經(jīng)由KIT的直接抗胂瘤活性(Abrams et al.， Mol Cancer Ther2:1011-21 (2003); O，F(xiàn)arrell et al.， Blood 101:3597-605 (2003))。 一項(xiàng)最近在Lewis肺癌瘤腫瘤中進(jìn)行的研究證明了 sunitinib減緩腫瘤生長(zhǎng)的進(jìn)展并削弱轉(zhuǎn)移的發(fā)展，盡管它沒有引起原發(fā)性腫瘤的消退(Osusky et al.， Angiogenesis7:225-33 (2004》?；谂R床前/臨床證據(jù)，認(rèn)為sunitinib在RCC中的活性機(jī)制是經(jīng)由對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞中的VEGF途徑和在支持性周細(xì)胞上表達(dá)的PDGFR-I3的雙重抑制(Motzer et al.， JAMA 295:2516-24 (2006))。 sunitinib最近在美國(guó)獲得了批準(zhǔn)用于晚期腎細(xì)胞癌瘤和胃腸基質(zhì)胂瘤(GIST)。
聯(lián)合療法
本發(fā)明的特色在于VEGF拮抗劑和蛋白激酶抑制劑的組合使用，作為旨在自這些治療劑的組合活性提供有益效應(yīng)的特定治療方案的一部分。組合的有益效應(yīng)包括但不限于源自治療劑組合的藥動(dòng)學(xué)或藥效學(xué)共同作用(co-action)。本發(fā)明在治療各種階段的、各種類型的癌癥中特別有用。
術(shù)語癌癥涵蓋增殖性病癥的集合，包括但不限于癌前生長(zhǎng)、良性腫瘤、和惡性腫瘤。良性腫瘤仍然局限于起源部位且沒有能力滲透、侵入、或轉(zhuǎn)移至遠(yuǎn)端部位。惡性腫瘤會(huì)侵入并損害它們周圍的其它組織。它們還能獲得脫離起源部位并傳播至身體其它部分(轉(zhuǎn)移)(通常經(jīng)由血流或在淋巴結(jié)所處位置經(jīng)由淋巴系統(tǒng))的能力。原發(fā)性腫瘤以發(fā)生它們的組織類型來分類；轉(zhuǎn)移性肺瘤以衍生癌細(xì)胞的組織類型來分類。隨著時(shí)間消逝，惡性腫瘤的細(xì)胞變得越來越異常，而且表現(xiàn)出更不像正常細(xì)胞。癌細(xì)胞外觀的這種變化稱作腫瘤等級(jí)(tumor grade),而且將癌細(xì)胞描述為完全分化的(well-differentiated)(低級(jí))、中度分化的(moderately-differentiated)、 不良分化的(poorly-differentiated)、或未分化的(undifferentiated)(高級(jí))。完全分化的細(xì)胞相當(dāng)正常，表現(xiàn)為和類似它們起源的正常細(xì)胞。未分化的細(xì)胞指已經(jīng)變得如此異常以致于不再可能確定其起源的細(xì)胞。癌癥分期系統(tǒng)描述癌癥在解剖學(xué)上已經(jīng)傳播了多遠(yuǎn)，而且試圖將具有相似預(yù)后和處理的患者置于相同分期組中。可實(shí)施數(shù)項(xiàng)測(cè)試來幫助癌癥分期，
包括活檢和某些影像檢測(cè)諸如胸部x-射線、乳房x射線照片、骨掃描、CT掃描、和MRI掃描。驗(yàn)血和臨床評(píng)估也用于評(píng)估患者的整體健康和檢測(cè)癌癥是否已經(jīng)傳播至某些器官。
為了對(duì)癌癥分期，美國(guó)癌癥耳關(guān)合委員會(huì)(American Joint Committee onCancer)首先使用TNM分類系統(tǒng)將癌癥(特別是實(shí)體瘤)置于字母分類中。給癌癥指派字母T (奸瘤大小)、N(可觸知的結(jié)節(jié))、和/或M(轉(zhuǎn)移)。Tl、T2、 T3、和T4描述漸增的原發(fā)性病灶尺寸；N0、 Nl、 N2、 N3指示漸進(jìn)發(fā)展中的結(jié)節(jié)涉及；而M0和M1反映遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的存在與否。
在第二種分期方法中，也稱作整體階段分組(Overall Stage Grouping)或羅馬數(shù)字分期(RomanNumeral Staging),將癌癥分成O期至IV期，摻入了原發(fā)性病癥的尺寸以及結(jié)節(jié)傳播和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的存在。在這種系統(tǒng)中，將癌癥分組成四期，以羅馬數(shù)字I至IV表示，或者歸類為"復(fù)發(fā)"。對(duì)于有些癌癥，0期稱作"原位"或"Tis"，諸如乳腺癌的原位導(dǎo)管癌或原位小葉癌。高級(jí)腺瘤也可歸類為0期。 一般而言，I期癌癥是小的局限性癌癥，其通常是可治愈的，而IV期通常代表不能手術(shù)治療的或轉(zhuǎn)移性的癌癥。II期和III期癌癥通常是局部高級(jí)的和/或展現(xiàn)出涉及局部淋巴結(jié)。 一般而言，較高期數(shù)指示更嚴(yán)重的(extensive)疾病，包括更大的腫瘤尺寸和/或癌癥傳播至鄰近原發(fā)性胂瘤的附近淋巴結(jié)和/或器官。這些階段有精確定義，但是定義對(duì)每一種癌癥是不同的，而且是熟練技術(shù)人員已知的。
許多癌癥登記諸如NCI的"監(jiān)視流行病學(xué)和最終結(jié)果程序"(Surveillance,Epidemiology, and End Results Program) (SEER)使用概括分期(summarystaging)。這種系統(tǒng)用于所有類型的癌癥。它將癌癥病歷分成五大類"原位"指只存在于它開始的細(xì)胞層中的早期癌癥。"局限性的"指癌癥限于它開始的器官，沒有傳^"的證據(jù)。"區(qū)域性的"指癌癥已經(jīng)傳播超出起源(原發(fā)性)部位至附近的淋巴結(jié)或器官和組織。
"遠(yuǎn)端的，，指癌癥自原發(fā)性部位傳播至遠(yuǎn)端器官或遠(yuǎn)端淋巴結(jié)。"未知的"用于描述沒有足夠信息來指明階段的情況。另外，癌癥在原發(fā)性腫瘤被清除后幾個(gè)月或幾年復(fù)現(xiàn)是常見的。在所有可見的肺瘤都被^f艮除后復(fù)現(xiàn)的癌癥稱作復(fù)發(fā)性疾病。在原發(fā)性腫瘤的區(qū)域中 復(fù)現(xiàn)的疾病是局部復(fù)發(fā)的，而作為轉(zhuǎn)移復(fù)現(xiàn)的疾病稱作遠(yuǎn)端復(fù)發(fā)。
肺瘤可以是實(shí)體瘤或者是非實(shí)體瘤或軟組織腫瘤。軟組織腫瘤的例子包
4舌白血病(例如十曼性髓細(xì)月包性白血病(chronic myelogenous leukemia)、急性髓 細(xì)月包性白血病(acute myelogenous leukemia)、成人急性成'淋巴細(xì)月包性白血病 (adult acute lymphoblastic leukemia)、急'l"生ft細(xì)月包性白血病(acute myelogenous leukemia)、成熟B細(xì)胞急性成淋巴細(xì)胞性白血病(mature B-cell acute lymphoblastic leukemia) 、 'l"曼寸生、淋巴纟田月包'〖生白血病(chronic lymphocytic leukemia)、多形核細(xì)月包性白血病(polymphocytic leukemia)、或毛纟田月包性白血 病(hairy cell leukemia))或淋巴瘤(例如非何杰金氏淋巴瘤、皮膚T細(xì)胞淋巴 瘤、或何杰金氏病(Hodgkin，s disease))。實(shí)體瘤包括血液、骨髓、或淋巴系 統(tǒng)以外的身體組織的任何癌癥。實(shí)體瘤可進(jìn)一步分成上皮細(xì)胞起源的那些和 非上皮細(xì)胞起源的那些。上皮細(xì)胞實(shí)體瘤的例子包括胃腸道、結(jié)腸、乳腺、 前列腺、肺、腎、肝、胰腺、卵巢、頭和頸、口腔、胃、十二指腸、小腸、 大腸、肛門、膽嚢、唇(labium)、鼻咽、皮膚、子宮、男性生殖器官、泌尿 器官、膀胱、和皮膚的肺瘤。非上皮起源的實(shí)體瘤包括肉瘤、腦瘤、和骨瘤。
化療劑
本發(fā)明的聯(lián)合療法可進(jìn)一步包含一種或多種化療劑。組合施用包括使用 分開的配制劑或單一藥物配制劑的共施用或同時(shí)施用，和任一次序的序貫施 用，其中有一段時(shí)間所有活性劑同時(shí)發(fā)揮它們的生物學(xué)活性。
如果施用的話，由于藥物的組合作用或可歸于抗代謝物化療劑施用的消 極副作用，通常以關(guān)于它們已知的或任選降低的劑量施用化療劑?？梢勒罩?造商的說明書或根據(jù)從業(yè)人員憑經(jīng)驗(yàn)確定的那樣使用此類化療劑的制備和 劑量給藥日程。在一個(gè)其中化療劑是帕利他塞的實(shí)施方案中，每周(例如以 大約60-90mg/m2 )或每3周(例如以大約135-200mg/m2 )施用它。合適的多 西他塞劑量包括60mg/m2、 70mg/m2、 75mg/m2、 100mg/m2(每3周)、或35mg/m2 或40mg/m2 (每周)。
上文公開了可組合的多種化療劑。在某些實(shí)施方案中，要組合的化療劑 選自下組類紫杉醇(taxoid)(包括多西他塞(docetaxel)和帕利他塞 (paclitaxel))、 長(zhǎng)春藥(vinca)(諸如長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine)或長(zhǎng)春石威(vinblastine))、柏化合物(諸如卡柏(carboplatin)或順鉑(cisplatin))、芳香酶承P 制劑(諸如來曲峻(letrozole)、 阿那曲唑(anastrazole)、或依西美坦 (exemestane))、抗雌激素(例如氟維司群(fulvestmnt)或他莫昔芬(tamoxifen))、 依托泊香(etoposide)、塞替旅(thiotepa)、環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)、曱氨 蝶呤(methotrexate)、月旨質(zhì)體多柔比星(liposomal doxorubicin)、 PEG化脂質(zhì)體 多柔比星(pegylated liposomal doxorubicin)、卡i咅他濱(capecitabine)、 吉西4也 濱(gemcitabine)、 COX-2抑制劑(例如塞來考昔(celecoxib))、或蛋白體抑制 劑(例如PS342)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的聯(lián)合療法與帕利他塞組合。 在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的聯(lián)合療法與卡鉑和帕利他塞組合。
配制、劑量和施用
會(huì)以與優(yōu)良醫(yī)學(xué)實(shí)踐一致的方式配制、劑量給藥和施用本發(fā)明中所使用 的治療劑。在此內(nèi)容中考慮的因素包括所治療的具體病癥、所治療的具體受 試者、患者個(gè)體的臨床狀況、病癥的起因、才殳遞藥劑的部位、施藥的方法、 施藥的日程安排、要組合的藥劑的藥物-藥物相互作用、和醫(yī)學(xué)從業(yè)人員知 道的其它因素。
使用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法通過將具有期望純度的活性成分與任選的 生理學(xué)可接受載體、賦形劑或穩(wěn)定劑混合來制備治療用配制劑(Remington，s Pharmaceutical Sciences (第20版)，A. Ge皿aro編，2000， Lippincott， Williams & Wilkins, Philadelphia, PA)?？山邮艿妮d體包括鹽水，或緩沖劑，諸如磷酸鹽、 檸檬酸鹽和其它有機(jī)酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸；低分子量(少于約10個(gè) 殘基)多肽；蛋白質(zhì)，諸如血清清蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物， 諸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，諸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸 或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯 合劑，諸如EDTA;糖醇，諸如甘露醇或山梨醇；成鹽相反離子，諸如鈉； 和/或非離子表面活性劑，諸如TWEENTM、 PLURONICStm或PEG。
任選的是，在一個(gè)實(shí)施方案中，配制劑含有藥學(xué)可4妻受鹽，諸如氯化鈉， 其大約為生理濃度。任選的是，在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的配制劑可含 有藥學(xué)可接受防腐劑。在某些實(shí)施方案中，防腐劑的濃度范圍為0.1-2.0%, 典型的是v/v。合適的防腐劑包括藥學(xué)領(lǐng)域已知的那些。苯曱醇、酚、間曱酚、 對(duì)羥基苯曱酸甲酯、和對(duì)羥基苯曱酸丙酯是優(yōu)選的防腐劑。任選的是，在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的配制劑可包括藥學(xué)可接受表面活性劑，其濃度為
0.005-0.02 o/o。
本文中的配制劑還可含有超過一種所治療具體適應(yīng)癥所必需的活性化 合物，優(yōu)選活性互補(bǔ)且彼此沒有不利影響的那些。合適的是，此類分子以對(duì) 于預(yù)定目的有效的量組合。
活性成分還可包載于例如通過凝聚技術(shù)或通過界面聚合制備的微膠嚢 中(例如分別是羥曱基纖維素或明膠微膠嚢和聚(甲基丙烯酸曱酯)微膠嚢)、 在膠狀藥物傳遞系統(tǒng)中(例如脂質(zhì)體、清蛋白微球體、微乳劑、納米顆粒和 納米膠嚢)、或在粗滴乳狀液中。此類技術(shù)7仝開于Remington，s Pharmaceutical Sciences,見上文。
可制備持續(xù)釋放制劑。持續(xù)釋放制劑的合適例子包括含有本發(fā)明抗體的 固體疏水性聚合物半透性基質(zhì)，該基質(zhì)以定型產(chǎn)品的形式存在，例如薄膜或 微膠嚢。持續(xù)釋放基質(zhì)的例子包括聚酯、水凝膠(例如聚(2-羥乙基-甲基丙 烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美國(guó)專利No. 3,773,919)、 L-谷氨酸和L-谷 氨酸Y-乙酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯、可降解的乳酸-乙醇酸共 聚物諸如LUPRONDEPOT (由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林構(gòu)成的 可注射微球體)及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。雖然諸如乙烯-乙酸乙烯和乳酸-乙醇 酸等聚合物能夠持續(xù)釋放分子100天以上，但是某些水凝膠釋放蛋白質(zhì)的時(shí) 間較短。當(dāng)膠嚢化抗體在體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間保持時(shí)，它們可能由于暴露于37。C的潮 濕環(huán)境而變性或聚集，導(dǎo)致生物學(xué)活性損失和免疫原性可能改變?？梢霍迵?jù)相 關(guān)機(jī)制來設(shè)計(jì)穩(wěn)定化理性策略。例如，如果發(fā)現(xiàn)聚集機(jī)制是經(jīng)由硫醇-二硫 化物互換而形成分子間S-S鍵，那么可通過修飾巰基殘基、自酸性溶液凍干、 控制濕度、采用適宜添加劑、和開發(fā)特定的聚合物基質(zhì)組合物來實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定。
依照已知方法給人類患者施用本發(fā)明的治療劑，諸如靜脈內(nèi)施用(像推 注或通過一段時(shí)間里的連續(xù)輸注)，通過肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦脊髓內(nèi)、皮下、 關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、鞘內(nèi)、口服、表面、或吸入路徑。在VEGF拮抗劑的情況 中，如果VEGF拮抗作用與廣泛的副作用或毒性有關(guān)，那么局部施用是特別 想要的。回體(ex vivo)策略也可用于治療性應(yīng)用?；伢w策略涉及用編碼VEGF 拮抗劑的多核苷酸轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)自受試者獲得的細(xì)胞。然后將經(jīng)過轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo) 的細(xì)胞返回受試者。細(xì)胞可以是極其多種類型之任一，包括但不限于造血細(xì) 胞(例如，骨髓細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹突細(xì)胞、T纟田胞、或B細(xì)胞)、
34成纖維細(xì)月包、上皮細(xì)月包、內(nèi)皮細(xì)月包、角質(zhì)形成細(xì)胞、或月幾肉細(xì)月包。
例如，如果VEGF拮抗劑是抗體，那么通過任何合適手段施用抗體，包 括胃腸外、皮下、腹膜內(nèi)、肺內(nèi)、和鼻內(nèi)，及(如果想要局部免疫抑制治療 的話)病灶內(nèi)施用。胃腸外輸注包括肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、或 皮下施用。另外，合適的是，通過脈沖輸注來施用抗體，特別是使用遞減劑 量的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過注射給予劑量給藥。在另一個(gè)實(shí)施方案 中，通過靜脈內(nèi)或皮下注射給予劑量給藥，這部分取決于施藥是短期的還是 長(zhǎng)期的。
在另一個(gè)例子中，在病癥或腫瘤位置允許時(shí)，局部施用VEGF拮抗性化 合物，例如通過直接注射，而且可以周期性重復(fù)注射。也可以在手術(shù)切除腫 瘤后系統(tǒng)地/全身地將VEGF拮抗劑投遞至受試者或直接投遞至腫瘤細(xì)胞，例 如腫瘤或腫瘤床，用以預(yù)防或降低局部復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。
組合中的治療劑的施用通常在規(guī)定的時(shí)間段里進(jìn)行(通常是數(shù)分鐘、數(shù) 小時(shí)、數(shù)天或數(shù)周，這取決于所選擇的組合)。聯(lián)合療法旨在涵蓋這些治療 劑以序貫方式的施用(也就是說，其中在不同時(shí)間施用每一種治療劑)，以
可以通過相同路徑或不同路徑來施用治療劑。例如，可以通過靜脈內(nèi)注 射來施用組合中的VEGF拮抗劑，同時(shí)可以口服施用所述組合中的蛋白激酶 抑制劑?；蛘?，例如，可以口服施用這兩種治療劑，或者可以通過靜脈內(nèi)注 射來施用這兩種治療劑，這取決于具體的治療劑。治療劑的施用次序也隨著 具體藥劑而變化。
根據(jù)疾病的類型和嚴(yán)重程度，施用于患者的初始候選劑量是約l |ig/kg 至100 mg/kg (例如0.1-20 mg/kg)每種治療劑，例如或是通過一次或多次分 開施藥或是通過連續(xù)輸注。根據(jù)上文所述因素，典型日劑量的范圍可以是約 lpg/kg至100mg/kg或更多。對(duì)于持續(xù)數(shù)天或更長(zhǎng)的重復(fù)施藥，根據(jù)狀況，持 續(xù)治療直至根據(jù)上文所述方法的測(cè)量，癌癥得到治療。然而，其它劑量方案 也可能是有用的。在一個(gè)例子中，如果VEGF拮抗劑是抗體，那么以范圍為 大約5 mg/kg至大約15 mg/kg的劑量每?jī)芍寥苁┯帽景l(fā)明的抗體。如果蛋白 激酶抑制劑是口服小分子化合物，那么以范圍為大約25 mg/天至大約50 mg/ 天的劑量每天施用藥物。此外，本發(fā)明的口服化合物可以在傳統(tǒng)的高劑量間 歇方案下施用，或者使用沒有安排中斷的更低且更頻繁的劑量(稱作"節(jié)拍療法，，(metronomic therapy))來施用。在使用間歇方案時(shí)，例如，可以每天 給予藥物，持續(xù)2-3周，接著中斷l(xiāng)周；或者，可以每天給予藥物，持續(xù)4周， 接著中斷2周，這取決于日劑量和具體適應(yīng)癥。本發(fā)明療法的進(jìn)展易于通過 常規(guī)技術(shù)和測(cè)定法來監(jiān)測(cè)。
以下實(shí)施例僅僅意圖例示本發(fā)明的實(shí)施，而非作為限制提供的。本文中 所引用的所有專利和科學(xué)文獻(xiàn)的公開內(nèi)容完整收錄作為參考。
實(shí)施例
實(shí)施例l:抗VEGF和Sunitinib的組合用于在體內(nèi)抑制人腫瘤生長(zhǎng)
此實(shí)驗(yàn)對(duì)作為單一療法和與小分子酪氨酸激酶抑制劑sunitinib組合的抗 VEGF單克隆抗體B20-4.1評(píng)估針對(duì)棵鼠中各種人癌瘤異種移植物的活性。 方法和材料
在異種移植物研究中使用了以下人腫瘤細(xì)胞
LS174T人結(jié)腸癌瘤
Hl 299人非小細(xì)胞肺癌瘤
786-0人腎細(xì)胞癌瘤
Caki-2人腎細(xì)胞癌瘤
Bx-PC3人胰腺癌瘤
使用了雌性無胸腺棵鼠(在研究的第1天為10-11周齡)或CB-17 SCID 小鼠(在研究的第1天為15-16周齡)。自培養(yǎng)的人癌瘤細(xì)胞(在H1299細(xì)胞的 情況中)或自在異種移植小鼠中維持的現(xiàn)有人腫瘤啟動(dòng)異種移植物。每只測(cè) 試小鼠接受在右側(cè)腹中皮下植入的腫瘤細(xì)胞或腫瘤碎片，并監(jiān)測(cè)腫瘤的生 長(zhǎng)。腫瘤生長(zhǎng)一段時(shí)間后，時(shí)間長(zhǎng)度取決于所測(cè)試的具體人腫瘤，將小鼠分 入不同的組，每組由10只小鼠組成。使用如下公式計(jì)算體積
肺瘤體積(mm3) = (w2 x 1)/2
其中 =人腫瘤的寬度，而1=人腫瘤的長(zhǎng)度，以mm計(jì)。假設(shè)lmg相當(dāng) 于lmm^中瘤體積，由此可估算腫瘤重量。
在研究中使用對(duì)照IgG抗體和測(cè)試MAb B20-4.1以及sunitinib。對(duì)照和 B20-4.1抗體均以一種劑量水平施用(5mg/kg, i.p.，兩周一次(biweekly),至 結(jié)束)。sunitinib以兩種劑量水平施用(25或50 mg/kg, p.o.，每天一次，至 結(jié)束)。對(duì)于在同 一天給予一組的聯(lián)合治療，在sunitinib劑之前30分鐘施用抗體 劑。每劑PBS、對(duì)照IgG、或B20-4.1以0.2mL每20g體重(10mL/kg)體積施 用，而每劑sunitinib或媒介以O(shè).l mL每20 g體重(5 mL/kg)體積施用。所有 劑量依動(dòng)物的體重縮;改。每周兩次使用測(cè)徑器測(cè)量腫瘤。當(dāng)動(dòng)物的腫瘤達(dá)到終點(diǎn)尺寸2,000 mm3 時(shí)或者在研究結(jié)束時(shí)，以先發(fā)生者為準(zhǔn)，將每只動(dòng)物安樂死。處理結(jié)局基于 腫瘤生長(zhǎng)抑制(TGI)。 TGI評(píng)估來自一組中所有動(dòng)物的數(shù)據(jù)，排除由于處理相 關(guān)的(TR)或非處理相關(guān)的(NTR)原因而死亡的動(dòng)物，而且定義為處理組與對(duì) 照組之間最終腫瘤體積中值的差異，表述為對(duì)照組的腫瘤體積中值的百分 比。在此測(cè)定法中產(chǎn)生至少60% TGI的藥劑歸為有治療活性的。處理可引起動(dòng)物中腫瘤的部分消退(PR)或完全消退(CR)。在PR響應(yīng)中， 對(duì)于研究過程期間的三次連續(xù)測(cè)量，腫瘤體積為其第1天體積的50%或更小， 而且這三次測(cè)量中的一次或多次等于或大于13.5mm3。在CR響應(yīng)中，對(duì)于研 究過程期間的三次連續(xù)測(cè)量，肺瘤體積小于13.5mm3。對(duì)動(dòng)物監(jiān)測(cè)消退響應(yīng)。當(dāng)動(dòng)物的腫瘤達(dá)到2000 mm3體積時(shí)或者在研咒結(jié)束時(shí)，將動(dòng)物安樂死。 收集血清、腫瘤、和腎樣品供進(jìn)一步檢測(cè)使用，所述檢測(cè)包括腫瘤和腫瘤血 管系統(tǒng)的的組織學(xué)評(píng)估。在研究的頭5天每天對(duì)動(dòng)物稱體重，然后每周兩次。頻繁地對(duì)小鼠觀察 任何不良的處理相關(guān)副作用的明顯征候，并在觀察到時(shí)記錄毒性的臨床征 候?？山邮艿亩拘远x為研究期間組均值體重?fù)p失小于20%且10只接受處理 的動(dòng)物中不超過1例發(fā)生處理相關(guān)(TR)死亡。任何導(dǎo)致更大毒性的劑量給藥 方案被認(rèn)為是超過最大耐受劑量(MID)。如果根據(jù)臨床征候和/或尸檢的證 據(jù)，死亡可歸于治療副作用，或者，如果死亡是由于劑量給藥期期間或最后 一劑10天內(nèi)的未知原因，那么將該死亡歸為TR。如果沒有證據(jù)證明死亡與治 療副作用有關(guān)，那么將該死亡歸為NTR。使用Mann-Whitney U檢驗(yàn)分析對(duì)照組和處理組之間腫瘤載荷中值的差 異的統(tǒng)計(jì)分析。以顯著性水平P = 0.05進(jìn)行雙尾統(tǒng)計(jì)分析。在O.Ol《P < 0.05，認(rèn)為結(jié)果是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的，而在P〈0.01，是高度顯著的。結(jié)果對(duì)LS 174T結(jié)腸癌瘤生長(zhǎng)的抑制圖1A顯示了LS174T結(jié)腸癌瘤研究的每組小鼠的胂瘤生長(zhǎng)(以體積隨時(shí) 間變化來顯示)。第2組(標(biāo)有菱形的曲線)給予對(duì)照抗體，第4組(標(biāo)有正 方形的曲線)僅給予4劑B20-4.1;第7組(平坦曲線)給予sunitinib, 50 mg/kg, po，每天一次，14天；而第11組(標(biāo)有三角形的曲線)給予B20-4.1和sunitinib 二者，劑量給藥方案與單一療法組相同。圖1B是相同研究結(jié)果的Kaplan-Meier 圖。正如這兩張圖中所顯示的，B20-4.1和sunitinib的組合產(chǎn)生了比任一單一 藥劑處理顯著增加的對(duì)結(jié)腸腫瘤生長(zhǎng)的抑制。在一項(xiàng)分開的25天研究中，在單一療法組和聯(lián)合療法組中都使用高劑量 sunitinib (每天50 mg/kg )低劑量sunitinib (每天25 mg/kg )。在第18天觀'J量不 同處理組的MTV和TGI。 B20-4.1單一療法產(chǎn)生了微弱的48。/。 TGI。 sunitinib 單一療法產(chǎn)生了劑量依賴性響應(yīng)，在低劑量沒有TGI，而在高劑量有不顯著 的43% TGI。 B20-4.1與低劑量sunitinib的組合產(chǎn)生了50。/。 TGI，與B20-4.1單 一療法相當(dāng)。B20-4.1與更高劑量sunitinib的組合導(dǎo)致75。/。 TGI。基于體重測(cè) 量或臨床癥狀發(fā)現(xiàn)，所有治療表現(xiàn)出可被很好地耐受，沒有證據(jù)證明毒性。對(duì)H1299 NSCLC生長(zhǎng)的抑制對(duì)H1299非小細(xì)胞肺癌瘤(NSCLC)異種移植物進(jìn)行了兩項(xiàng)研究。圖2A和 2B呈現(xiàn)了來自與如上所述LS174T研究類似的短期處理研究的結(jié)果。第2組 (標(biāo)有菱形的曲線)給予對(duì)照抗體；第4組(標(biāo)有正方形的曲線)僅給予4劑 B20-4.1;第7組(平坦曲線)給予sunitinib，每天50mg/kg， po， 14天；而第 ll組(標(biāo)有三角形的曲線)給予B20-4.1和sunitinib二者，劑量給藥方案與相 同療法組相同。圖2B是同一研究結(jié)果的Kaplan-Meier圖。正如這兩張圖中所 顯示的，B20-4.1和sunitinib的組合產(chǎn)生了比任一單一藥劑處理顯著增加的對(duì) NSCLC肺瘤生長(zhǎng)的抑制。圖3呈現(xiàn)了來自H1299 NSCLC腫瘤的更長(zhǎng)期處理研究的結(jié)果。該研究還 比較了兩種sunitinib劑量(低劑量，每天25mg/kg和高劑量，每天50mg/kg) 之間的效果。使用來自第19天(此時(shí)所有小鼠仍然在研究中)的測(cè)量數(shù)據(jù)計(jì) 算TGI。 B20-4.1單一療法產(chǎn)生了64。/。 TGI,對(duì)應(yīng)于有治療活性，沒有消退響 應(yīng)(regression response)。 4吏用25或50 mg/kg sunitinib的處理產(chǎn)生了劑量依賴性 的TGI,分別為32和62%。 50 mg/kg sunitinib處理組具有l(wèi)例部分消退。使用 B20-4.1和25或50 mg/kg sunitinib的組合的處理分別產(chǎn)生了74和82Q/。的TGI，每個(gè)組中有2例部分消退。如此，低劑量sunitinib或高劑量sunitinib提供了比 相應(yīng)的B20-4.1單一藥劑處理和sunitinib單一藥劑處理顯著改善的抑制活性。 尤其重要的是，在低劑量，作為單一藥劑的sunitinib在此研究中未能發(fā)揮出 治療活性，而sunitinib劑量相同時(shí)，與B20-4.1組合，提供了對(duì)NSCLC腫瘤生 長(zhǎng)的顯著抑制。基于體重測(cè)量或臨床癥狀發(fā)現(xiàn)，所有處理表現(xiàn)出可被4艮好地 耐受，沒有證據(jù)證明毒性。
在TGI測(cè)量之外，在組織學(xué)分析中使用肺瘤樣品來比較肺瘤在單一療法 和聯(lián)合療法下的形態(tài)學(xué)變化。在研究結(jié)束時(shí)測(cè)量腫瘤壞死和血管密度。正如 圖8A-8C中所顯示的，B20-4.1/sunitinib組合導(dǎo)致顯著增加的腫瘤壞死和降低 的微血管密度。
對(duì)腎癌瘤生長(zhǎng)的抑制
在人腎細(xì)胞癌瘤的腫瘤生長(zhǎng)研究中使用了兩種異種移植物系。圖4顯示 了來自使用786-0腎細(xì)胞癌瘤異種移植物的研究的結(jié)果。雖然在該研究中使 用了 sunitinib的高和低兩種劑量，但是在單一藥劑組和與B20-4.1的組合的圖 中只顯示了高劑量sunitinib (每天50mg/kg)。在此項(xiàng)研究中，B20-4.1單一療 法導(dǎo)致67% TGI, sunitinib單一療法導(dǎo)致80。/。 TGI，而聯(lián)合療法顯示出92% TGI。聯(lián)合療法的活性顯著好于單一藥劑sunitinib或B20-4.1 (分別為p-0.0002 和pO.OOOl)。即使在將更低劑量sunitinib (25mg/kg， qd)與抗VEGF療法組 合時(shí)，該組合還顯示出卓越的功效(TGI = 77% ) (p=0.0029 )。
圖6顯示了來自使用SCID小鼠中Caki-2人腎細(xì)胞癌瘤異種移植物的研究 的結(jié)果。顯示了sunitinib的高和低兩種劑量。在第29天(研究的最后一天) 計(jì)算TGI。注意，B20-4.1單一療法和低劑量(25 mg/kg ) sunitinib單一療法都 導(dǎo)致第29天均值腫瘤體積(MTV)為446和352 mm3，這在研究的定義下不能解 釋為治療性TGI。比較而言，B20-4.1/sunitinib組合處理產(chǎn)生了65。/。的治療性 TGI,這是超過單獨(dú)給予任一藥劑的顯著的且有意義的改善(P< 0.001)。高 劑量(50 mg/kg) sunitinib單一療法確實(shí)產(chǎn)生了 62% TGI,而B20-4.1/sunitinib 組合處理在相同的劑量產(chǎn)生了升高的TGI,即73%。在任何組中都沒有記錄 到消退響應(yīng)。B20-4.1與50 mg/kg 0-025694的組合顯著好于B20-4.1單一療法， 但是50 mg/kg sunitinib單一療法不然。然而，均值和中值腫瘤生長(zhǎng)曲線提示 朝向組合活性的趨勢(shì)?；隗w重測(cè)量或臨床癥狀，所有處理表現(xiàn)出可被很好
39地耐受，沒有證據(jù)證明毒性。
對(duì)胰腺癌瘤生長(zhǎng)的抑制
使用與如上所述其它研究類似的藥劑和方法進(jìn)行了 Bx-PC3人胰腺癌瘤
異種移植物中的胂瘤生長(zhǎng)研究。圖5A和5B顯示了結(jié)果。與Caki-2腎細(xì)胞癌瘤 異種移植物中的研究類似，在使用低劑量sunitinib時(shí)，B20-4.1和sunitinib的組 合表現(xiàn)出產(chǎn)生比單一藥劑更顯著的改善。將第5組與第3組或第2組進(jìn)行比較。 雖然不希望受限于理論，來自此項(xiàng)研究和Caki-2研究的結(jié)果可提示，雖然 sunitinib在兩種劑量都展現(xiàn)出對(duì)PDGFR的強(qiáng)阻斷活性，但是它只在高劑量展 現(xiàn)出對(duì)VEGFR活性的有效阻斷；使得在低劑量與B20-4.1的組合提供了比單 一藥劑更顯著的抑制作用。此類發(fā)現(xiàn)為在治療對(duì)臨床劑量的任一單一療法響 應(yīng)不良的肺瘤中或在更加期望更低劑量的sunitinib時(shí)組合抗VEGF藥劑和 sunitinib提供了強(qiáng)有力的基本原理。
圖7A和7B進(jìn)一步圖示了在Caki-2 RCC (圖7A)和H1299 NSCLC (圖7B ) 模型中使用低劑量sunitinib (每天25mg/kg )時(shí)的組合效果。
綜上所述，這些異種移植物小鼠研究為聯(lián)合療法提供了強(qiáng)有力的證據(jù)， 其中VEGF和PDGF兩種途徑都得到有效靶向，導(dǎo)致疊加的或甚至協(xié)同的抗腫 瘤活性，及因此顯著改善的臨床結(jié)局。
實(shí)施例2:抗VEGF和sunitinib的組合用于治療乳腺癌
乳腺癌占美國(guó)女性中所有新癌癥診斷的幾乎三分之一，在2006年診斷了 超過214,000例。估計(jì)每年有超過41，000名女性會(huì)死于她們的疾病(Jemal et al., CACancer J. Clin 56:106-30 (2006))。盡管在早期疾病的輔助治療中獲得了許 多進(jìn)展，高達(dá)30-40%的女性會(huì)形成系統(tǒng)性復(fù)發(fā)。小比例的患有轉(zhuǎn)移性乳腺癌 (MTC)的女性會(huì)活5年，同時(shí)只有2-3。/。成為長(zhǎng)期存活者(Greenburg et al., J. Clin. Oncol. 14:2197-205 (1996))。
此實(shí)施例提供了用抗VEGF、化療和sunitinib的組合來治療乳腺癌的方 法，通過給受試者施用有效劑量的貝伐單抗(bevacizumab)、 sunitinib、和帕 利他塞，這能導(dǎo)致延長(zhǎng)的存活和改善的生命質(zhì)量。例如，在某些實(shí)施方案中， 給受試者施用(1)貝伐單抗，10mg/kg (例如基于受試者在第l天的體重)， IV輸注，在28天周期的第1天和第15天；(2)帕利他塞，劑量為65 mg/m2 - 90
40mg/m2 (典型的是90 mg/m2),每周IV輸注，持續(xù)3周，接著停藥l周；和(3) sunitinib，典型的是口服施用，劑量為20-50 mg/天，例如25 mg/天或37.5 mg/ 天，每天服用，持續(xù)3周，接著是l周停藥期。在某些實(shí)施方案中，治療周期 定義為4周。或者，可以以50 mg/天的劑量給受試者施用sunitinib，依照4周 服藥、2周停藥的日程來給予(Farve et al., J. Clin. Oncol.24(l):25-35 (2006》。 典型的是，貝伐單抗裝在400-mg玻璃管形瓶中，其中裝有16ml貝伐單抗(25 mg/ml)及由磷酸鈉、海藻糖、聚山梨酯20和無菌注射用水組成的媒介。帕 利他塞可作為5、 16.7、和50 mL管形瓶中聚氧乙烯化蓖麻油(Cremophor EL) 50%和無水乙醇50%中的6 mg/mL濃縮液來獲得。蘋果酸sunitinib在化學(xué)上 描述為(2S)-羥基-丁二酸，與N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(Z)-(5-氟-l，2-二氫-2-氧 代-3H-巧l哚-3-內(nèi)鎮(zhèn)鹽(ylidine))曱基]-2，4-二曱基-1 H-吡咯-3-羧酰胺(1:1 )化合。 分子式為C22H27FN402.C4H605 。 sunitinib膠嚢含有相當(dāng)于12.5mg或25mg sunitinib的蘋果酸sunitinib及作為無活性成分的甘露醇、交聯(lián)羧曱基纖維素 鈉、聚維酮(K-25)、和硬脂酸鎂。
結(jié)局判定為基于腫瘤響應(yīng)分析(例如通過獨(dú)立考查機(jī)構(gòu)(Independent Review Facility, IRF)^H古進(jìn)4亍的)的無進(jìn)展存活(progression free survival, PFS),這可以通過實(shí)體瘤響應(yīng)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors, RECIST)和/或IRF (放射照片)來評(píng)估(Therasse et al.， J. Natl Cancer Inst. 92:205-16 (2000))。整體存活(Overall survival), 12個(gè)月存活、客》見響應(yīng) (objective response)、客 見響應(yīng)持續(xù)時(shí)間(duration of objective response)禾口 12個(gè) 月PFS也可用作結(jié)局判定。還可評(píng)估可溶性蛋白質(zhì)的血漿水平，例如 sVEGFR2 、 sVEGFR3和VEGF-C及PDGF途徑。
治療方法的受試者是具有乳腺腺癌的受試者(例如通過組織學(xué)或細(xì)胞學(xué) 研究確定的)。典型的是，受試者具有可測(cè)量的或不可測(cè)量的局部復(fù)發(fā)性或 轉(zhuǎn)移性疾病。在某些實(shí)施方案中，局部復(fù)發(fā)性疾病應(yīng)當(dāng)不是治愈目的的切除 術(shù)可治療的。在某些實(shí)施方案中，受試者先前可以接受過激素療法，例如在 輔助或轉(zhuǎn)移情況下(例如，如果在第1天之前中斷^2周)。在某些實(shí)施方案中， 受試者可以接受過輔助性非紫杉烷化療(例如，如果在啟動(dòng)所述方案之前中 斷^6個(gè)月)。在某些實(shí)施方案中，受試者可以接受過輔助性紫杉烷化療(例 如，如果在第1天之前中斷了^12個(gè)月)。任選的是，受試者還可以接受同時(shí) 的二膦酸鹽療法(例如，如果在加入研究之前或在加入研究的頭30天內(nèi)啟
41動(dòng))。任選的是，受試者也可以在啟動(dòng)治療時(shí)先前接受過放療，前提是受試 者在第l天之前已經(jīng)自任何重大(S級(jí))急性毒性恢復(fù)。
在某些實(shí)施方案中，被排除的受試者是具有未知的HER2或已知的HER2 陽性狀態(tài)的受試者。 一般而言，HER2陽性狀態(tài)可通過焚光原位雜交(FISH) 測(cè)定法或通過本領(lǐng)域已知方法得出的3+免疫組織化學(xué)結(jié)果來鑒定。其它被排 除的受試者包括先前為局部復(fù)發(fā)的或轉(zhuǎn)移性的疾病接受過化療的受試者，在 第1天之前2周內(nèi)先前接受過激素療法的受試者，在第1天之前12個(gè)月內(nèi)先前 接受過輔助性或新近接受過輔助性紫杉烷化療的受試者，在第1天之前6個(gè)月 內(nèi)先前接受過輔助性或新近接受過輔助性非紫杉烷化療的受試者、或接受過 最近的放療、正在發(fā)生^3級(jí)急性毒性的受試者。被排除的受試者還包括器官 功能不足(例如證據(jù)為嗜中性細(xì)胞計(jì)數(shù)降低、血小板計(jì)數(shù)降低、或總膽紅素 大于1.5 mg/dl)，具有不受控制的嚴(yán)重醫(yī)學(xué)精神病學(xué)疾患，具有沒有得到充 分控制的的高血壓(例如定義為在接受抗高血壓藥療法時(shí)收縮壓大于150 mmHg和/或舒張壓大于100 mmHg )，先前具有高血壓危象或高血壓腦病的歷 史，在第1天之前的12個(gè)月內(nèi)具有心肌梗死或不穩(wěn)定心絞痛的歷史，在第l天 之前的12個(gè)月內(nèi)具有中風(fēng)或短暫性腦缺血發(fā)作的歷史，具有出血素質(zhì)或嚴(yán)重 凝血病的證據(jù)，或具有嚴(yán)重的非愈合的傷口、活動(dòng)性潰瘍或未處理的骨折的 受試者。還可參見貝伐單抗和sunitinib的標(biāo)簽上的別的排除。
實(shí)施例3:抗VEGF和sunitinib的組合用于治療晚期非小細(xì)胞肺癌
肺癌是美國(guó)癌癥死亡的主因，2006年估計(jì)發(fā)生174，470例新發(fā)病病例和 162，460例死亡。大約55%-75%的非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者呈現(xiàn)晚期 (advanced)疾病(不能切除的或轉(zhuǎn)移性疾病)。美國(guó)肺癌患者的整體5年存活 率為14%,在過去的20年里只有略微改善(DeVita et al., Cancer: principles and practice of oncology,第6版Philadelphia (PA): Lippincott Williams和Wilkins; 2001)。呈現(xiàn)IIIb期和IV期疾病的患者分別具有6。/。和8。/。的5年存活率(Mountain Chest 111:1710-7 (1997))。在成熟的(defmitive)初始治療(由手術(shù)切除、放療、 化療、或這些方式的組合組成)后，大約50%的早期患者和80%的局部晚期 疾病患者會(huì)復(fù)發(fā)并接受第 一線(first-line)或后續(xù)線(later-line)治療方法。
此實(shí)施例提供了用抗VEGF、化療和sunitinib的組合來治療非小細(xì)胞肺癌 的方法，通過給受試者施用有效劑量的貝伐單抗、sunitinib、帕利他塞和卡鉑，這能導(dǎo)致延長(zhǎng)的存活和改善的生命質(zhì)量。例如，在某些實(shí)施方案中，給
受試者施用(1)貝伐單抗，15 mg/kg (例如基于受試者在第l天的體重)， IV輸注，在21天周期的第1天；(2)卡鉑，通過基于Calvert方程(下文詳細(xì)討 論)的曲線下面積(AUC = 6)來確定劑量給藥；(3)帕利他塞，劑量為200 mg/m2 (例如基于受試者在第l天的體重)，IV輸注，在每個(gè)21天周期的第1 天，總共四個(gè)周期；和(4) sunitinib,典型的是口服施用，劑量為20-50 mg/ 天，例如25mg/天或37.5mg/天，每天服用，持續(xù)2周，接著是l周停藥期。在 某些實(shí)施方案中，治療周期定義為3周。或者，可以以50 mg/天的劑量給受 試者施用sunitinib，依照4周服藥、2周停藥的日程來給予。
如上文所討論的，卡鉑是通過基于如下Calvert方程的曲線下面積(AUC =6)來確定劑量給藥的
總劑量(mg)=(靶AUC) x (GFR+25)，
其中GFR是以毫升每分(mL/min)計(jì)的腎d、球?yàn)V過率，而靶曲線下面積 (AUC)為6 mg/mL x min。作為肌酸酐清除率的GFR可以經(jīng)由24小時(shí)尿液收集 來測(cè)量(優(yōu)選地)，或者可以使用Cockcroft-Gault公式(Cockcroft和Gault, 1976) 基于血清肌酸酐來計(jì)算。對(duì)于男性，如下估算
GFR = (140-年齡)x體重/[72x(血清肌酸酐)]。
對(duì)于女性，GFR虧0.85乘以此公式。年齡以歲計(jì)，體重以千克計(jì)，而血 清肌酸酐以毫克每分升計(jì)。
典型的是，貝伐單抗裝在400-mg玻璃管形瓶中，其中裝有16ml貝伐單 抗(25mg/ml)及由磷酸鈉、海藻糖、聚山梨酯20和無菌注射用水組成的媒介。
卡鉑可作為現(xiàn)成用于稀釋和胃腸外施用的10 mg/mL預(yù)混合的無菌水溶 液來獲得?？色@得50、 150、 450、和600mg大小的管形弁瓦。
帕利他塞可作為5、 16.7、和50 mL管形并瓦中聚氧乙烯化蓖麻油 (Cremophor EL) 50%和無水乙醇50%中的6 mg/mL濃縮液來獲得。
蘋果酸sunitinib在化學(xué)上描述為(2S)-羥基-丁二酸，與N-[2-(二乙氨基)乙 基]-5-[(2)-(5-氟-1 ，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-內(nèi)錯(cuò)鹽(ylidine))曱基]-2，4-二曱基 -1H-p比咯-3-羧酰胺(l:l)化合。分子式為C22H27FH(02.C4H605。 sunitinib膠嚢含 有相當(dāng)于12.5mg或25mg sunitinib的蘋果酸sunitinib及作為無活性成分的甘露 醇、交聯(lián)羧曱基纖維素鈉、聚維酮(K-25)、和硬脂酸鎂。結(jié)局判定為基于腫瘤響應(yīng)分析(例如通過獨(dú)立考查機(jī)構(gòu)(IRF)評(píng)估進(jìn)行 的)的無進(jìn)展存活(PFS)，這可以通過實(shí)體瘤響應(yīng)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)(RECIST)和/或IRF
(放射照片)來評(píng)估。整體存活、客觀響應(yīng)、客觀響應(yīng)持續(xù)時(shí)間也可用作結(jié) 局判定。在治療過程期間，可以自患者采集血漿樣品用于測(cè)量預(yù)后性和預(yù)測(cè) 性生物標(biāo)志物(諸如參與血管發(fā)生途徑的分子，包括但不限于VEGF、可溶 性VEGFR、 PDGF和可溶性PDGFR)的血漿水平。
治療方法的受試者是患有局部晚期的、復(fù)發(fā)的、或轉(zhuǎn)移性鱗狀NSCLC
(例如通過組織學(xué)或細(xì)胞學(xué)研究而確定的)的受試者。在一個(gè)實(shí)施方案中， 被排除的受試者是先前為轉(zhuǎn)移性疾病接受過系統(tǒng)性化療的受試者。其它被排 除的受試者包括患有肺癌以外的活動(dòng)性惡性腫瘤的受試者，患有當(dāng)前的、最 近的(在進(jìn)行研究第1天前的4周內(nèi))、或計(jì)劃參與另一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)性藥物研究的 受試者，和先前用抗VEGF或與sunitinib耙向類似途徑的藥劑治療過的受試 者。也可使用其它排除標(biāo)準(zhǔn)，包括一般醫(yī)學(xué)排除或那些對(duì)于貝伐單抗和 sunitinib療法是典型的受試者。
實(shí)施例4:抗VEGF和sunitinib的組合用于治療腎細(xì)胞癌
腎細(xì)胞癌(RCC)占所有惡性腫瘤的大約2%,估計(jì)在美國(guó)每年發(fā)病39，000 例且每年死亡大約13,000例。直到最近，轉(zhuǎn)移性疾病的治療效力都是堪憂的。 此類治療包括細(xì)胞因子(干擾素a [IFNa]和白介素-2 [IL-2]),其提供很少的 好處和極大程度的毒性。后一種是直到2005年后期唯一批準(zhǔn)用于此疾病的藥 劑。對(duì)于患有轉(zhuǎn)移性RCC的患者，已經(jīng)出現(xiàn)了新的治療方法，其使用兩種最 近4比準(zhǔn)的藥劑，即sunitinib (Sutent⑧)和sorafenib (Nexavar )。
此實(shí)施例提供了用抗VEGF和sunitinib的組合來治療腎細(xì)胞癌的方法，通 過給受試者施用有效劑量的貝伐單抗和sunitinib,這能導(dǎo)致延長(zhǎng)的存活和改 善的生命質(zhì)量。
例如，在某些實(shí)施方案中，給受試者施用(1)貝伐單抗，10mg/kg(例 如基于受試者在第l天的體重)，每2周IV輸注，即在每個(gè)42天(6周)周期的 第l、 15和29天進(jìn)行；和(2) sunitinib，典型的是口服施用，劑量為50mg/天， 持續(xù)4周，接著是2周停藥期。在某些實(shí)施方案中，治療周期定義為4周sunitinib 和2周停藥(6周)。
典型的是，貝伐單抗裝在400-mg玻璃管形瓶中，其中裝有16ml貝伐單抗(25mg/ml)及由磷酸鈉、海藻糖、聚山梨酯20和無菌注射用水組成的媒介。
蘋果酸sunitinib在化學(xué)上描述為pS)-輕基-丁二酸，與N-p-(二乙氨基)乙 基]-5-[(2)-(5-氟-1 ，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-內(nèi)錯(cuò)鹽(ylidine》曱基]-2,4-二曱基 -1H-吡咯-3-羧酰胺(l:l)化合。分子式為(:22112^^02《411605。 sunitinib膠嚢含 有相當(dāng)于12.5mg或25mg sunitinib的蘋果酸sunitinib及作為無活性成分的甘露 醇、交聯(lián)羧曱基纖維素鈉(croscarmellose sodium)、聚維酮(povidone)(K-25)、 和硬脂酸鎂。
結(jié)局判定(outcome measue)為基于腫瘤響應(yīng)分析(例如通過獨(dú)立考查機(jī) 構(gòu)(IRF)評(píng)估進(jìn)行的)的無進(jìn)展存活(PFS)，這可以通過實(shí)體瘤響應(yīng)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn) (RECIST) (Therasse et al., New guidelines to evaluate the response to treatment in solid tumors, J. Natl Cancer Inst. 2000:92:205-16)和/或IRF (放射照片)來評(píng) 估。整體存活、客觀響應(yīng)和客觀響應(yīng)持續(xù)時(shí)間也可用作結(jié)局判定。在治療過 程期間，可以自患者采集血漿樣品用于測(cè)量預(yù)后性和預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物(諸 如參與血管發(fā)生途徑的分子，包括但不限于VEGF、可溶性VEGFR、 PDGF 和可溶性PDGFR)的血漿水平。
在一個(gè)實(shí)施方案中，治療方法的受試者是患有組織學(xué)上證實(shí)的以透明細(xì) 胞(clear cell)為主(〉50。/。)的轉(zhuǎn)移性RCC的受試者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，受 試者包括根據(jù)RECIST的定義具有可測(cè)量(在至少一個(gè)維度(要記錄的最長(zhǎng) 直徑)上能精確測(cè)量的病灶，使用常規(guī)技術(shù)時(shí)為20mm或使用螺旋CT掃描時(shí) 為10mm)的疾病的受試者。在又一個(gè)實(shí)施方案中，所述受試者包括先前接 受過腎切除術(shù)的受試者。
在一個(gè)實(shí)施方案中，被排除的受試者是患有肉瘤樣(sarcomatoid)特征為 主的RCC的受試者。其它要排除的受試者包括先前為RCC接受過系統(tǒng)性或輔 助性療法的受試者。在又一個(gè)實(shí)施方案中，被排除的受試者是在第l天之前 的2天內(nèi)為RCC進(jìn)行了放療的受試者，為了疼痛控制的適應(yīng)癥而給予的單級(jí) 分放療(single-fraction radiotherapy)除外。在又一個(gè)實(shí)施方案中，凈皮排除的受 試者可以包括那些當(dāng)前需要透析的和那些已經(jīng)經(jīng)歷過使用貝伐單抗、 sunitinib、 sorafenib、 axitinib、沙利度胺(thalidomide)、或其它藥劑的治療的 受試者，所述其它藥劑或是處在研究階段的或是已上市銷售的，其通過VEGF 抑制或抗血管發(fā)生機(jī)制來起作用。也可使用其它排除標(biāo)準(zhǔn)，包括一般醫(yī)學(xué)排
45除或那些對(duì)于貝伐單抗和sunitinib療法是典型的受試者。
權(quán)利要求
1.一種治療受試者中的腫瘤的方法，包括給所述受試者施用VEGF拮抗劑和蛋白激酶抑制劑，其中所述VEGF拮抗劑干擾VEGF對(duì)細(xì)胞受體的結(jié)合，其中所述蛋白激酶抑制劑至少能夠抑制PDGF受體酪氨酸激酶，且其中所述施用的時(shí)間和量足以治療或預(yù)防所述受試者中的所述腫瘤。
2. 權(quán)利要求1的方法，其中所述VEGF拮抗劑是能夠特異性結(jié)合VEGF的適體。
3. 權(quán)利要求l的方法，其中所述VEGF拮抗劑是可溶性VEGF受體蛋白、或 其VEGF結(jié)合片段、或嵌合VEGF受體蛋白。
4. 權(quán)利要求3的方法，其中所述嵌合VEGF受體蛋白至少包含來自Flt-l或 KDR的胞外結(jié)構(gòu)域2。
5. 權(quán)利要求l的方法，其中所述VEGF拮抗劑是抗VEGF抗體。
6. 權(quán)利要求5的方法，其中所述抗VEGF抗體是單克隆抗體。
7. 權(quán)利要求6的方法，其中所述單克隆抗體是嵌合的、完全人的、或人源 化的抗體。
8. 權(quán)利要求7的方法，其中所述抗VEGF抗體是貝伐單抗、G6系列抗體、 B20系列抗體、或其VEGF結(jié)合片段。
9. 權(quán)利要求8的方法，其中所述抗VEGF抗體是貝伐單抗。
10. 權(quán)利要求l的方法，其中所述蛋白激酶抑制劑能夠抑制PDGF受體酪氨酸 激酶和VEGF受體酪氨酸激酶二者。
11. 權(quán)利要求10的方法，其中所述蛋白激酶抑制劑是sunitinib或其藥學(xué)可接 受鹽形式。
12. 權(quán)利要求l的方法，其中所述腫瘤選自下組乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、直 腸癌、非小細(xì)胞肺癌、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、腎細(xì)胞癌、前列腺癌、 肝癌、胰腺癌、軟組織肉瘤、卡波西氏肉瘤、類癌癌瘤、頭頸癌、黑素 瘤、印巢癌、間皮瘤、和多發(fā)性骨髓瘤。
13. 權(quán)利要求12的方法，其中所述腫瘤是非小細(xì)胞肺癌。
14. 權(quán)利要求12的方法，其中所述癌癥是轉(zhuǎn)移的。
15. 權(quán)利要求12的方法，其中所述患者先前未接受過治療。
16. 權(quán)利要求l的方法，其中所述VEGF拮抗劑是貝伐單抗且所述蛋白激酶抑 制劑是sunitinib。
17. 權(quán)利要求16的方法，其中給所述受試者隔周以IO mg/kg或每三周以15 mg/kg靜脈內(nèi)施用貝伐單抗，且其中給所述受試者以日劑量25 mg口服施 用sunitinib兩周、三周或四周接著停用 一周或兩周。
18. 權(quán)利要求17的方法，其中給所述受試者每三周以15mg/kg靜脈內(nèi)施用貝 伐單抗，且其中給所述受試者以25 mg日劑量口服施用sunitinib兩周接著 停用 一周。
19. 權(quán)利要求1或16的方法，進(jìn)一步包括給所述受試者施用一種或多種化療劑。
20. 權(quán)利要求19的方法，其中所施用的化療劑是帕利他塞。
21. 權(quán)利要求19的方法，其中所施用的化療劑是卡鉑和帕利他塞。
全文摘要
本文中公開了使用聯(lián)合療法治療腫瘤的方法，其中以足以治療或預(yù)防受試者中的腫瘤的時(shí)間和量施用VEGF拮抗劑和至少能夠抑制PDGF受體酪氨酸激酶的蛋白激酶抑制劑。
文檔編號(hào)A61K39/395GK101646458SQ200880010364
公開日2010年2月10日 申請(qǐng)日期2008年1月30日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月1日
發(fā)明者格雷戈里·D·普洛曼, 羅伯特·D·馬斯 申請(qǐng)人:健泰科生物技術(shù)公司