專利名稱：：含大麻素的植物提取物的新用途的制作方法含大麻素的植物提取物的新用途發(fā)明的領(lǐng)域本發(fā)明涉及含大麻素的植物提取物在預(yù)防或治療通過(guò)阻斷一種或多種TRP通道得到緩解的疾病或狀況中的應(yīng)用。優(yōu)選被阻斷的TRP通道亞族是TRPA通道。更優(yōu)選該TRPA通道是TRPA1通道。優(yōu)選要預(yù)防或治療的疾病或狀況包括神經(jīng)病性疼痛、炎癥或血管收縮?；蛘呤牵蛔钄嗟腡RP通道是TRPM通道。更優(yōu)選該TRPM通道是TRPM8通道。優(yōu)選要預(yù)防或治療的疾病或狀況是癌癥。更優(yōu)選要治療的癌癥包4舌前列腺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌或皮力夫癌?；蛘呤?，被阻斷的TRP通道是TRPV通道。更優(yōu)選該TRPV通道是TRPV1通道。優(yōu)選要預(yù)防或治療的疾病或狀況包括神經(jīng)病性痛、炎癥或血管收縮。
背景技術(shù)：
：瞬時(shí)受體電位(TRP)通道已知處在哺乳動(dòng)物感覺系統(tǒng)的前沿地位，已發(fā)現(xiàn)其與對(duì)溫度、觸摸、疼痛、滲量、信息素、味道和其它刺激的響應(yīng)有關(guān)。據(jù)認(rèn)為，TRP通道的作用遠(yuǎn)比簡(jiǎn)單的感覺轉(zhuǎn)換要廣泛，因?yàn)樗鼈兡軌蝽憫?yīng)來(lái)自細(xì)胞內(nèi)外的多種刺激。哺乳動(dòng)物能夠用它們外周神經(jīng)系統(tǒng)中的特定的神經(jīng)元斥企測(cè)溫度。這些神經(jīng)元是一個(gè)TRP通道亞族香草素型通道(TRPV)。已經(jīng)確定了四種不同的TRPV通道(TRPV1-4),它們與熱感覺有關(guān)。這些通道是溫敏性離子通道，并對(duì)通常的疼痛和溫度感覺起關(guān)鍵作用。因此它們是減輕疼痛的適用目標(biāo)。另一個(gè)亞族，TRPM通道(melastatm型)，特別是TRPM8通道，與感受低于25。C的冷溫度有關(guān)。這些通道的組合能夠探測(cè)的溫度范圍覆蓋了大多數(shù)哺乳動(dòng)物感覺到的相關(guān)"正常范圍"的大部分。外部施加的試劑，例如薄荷醇、桉樹醇和icilm能激活TRPM8通道。在某些腫瘤細(xì)胞，包括前列腺癌細(xì)胞以及其它非前列腺原發(fā)性人類腫瘤如乳腺、結(jié)腸、肺和皮膚癌細(xì)力包存在下，TRPM8通道的活性發(fā)生上調(diào)。被稱作錨蛋白樣(TRPA)通道的一個(gè)TRP通道亞族，特別是TRPAl通道，是冷活化通道。TRPA1通道的活化溫度比TRPM8通道低。TRPA1(也稱作ANKTM1)通道與TRPM8通道共有的氨基酸同源性4艮少，因此-皮i人為是TRP通道的一個(gè)遠(yuǎn)力矣成員。已發(fā)現(xiàn)TRPA1通道被有害的寒冷和剌激味的天然化合物，例如在桂皮油、冬青油、丁香油、芥子油、生蒜、樟腦和姜中發(fā)現(xiàn)的化合物激活。緩激肽是一種通過(guò)G蛋白偶聯(lián)受體起作用的炎性肽，它也顯示出會(huì)激活TRPA1。諸如芥子油(異碌u氰酸烯丙酯)等化合物的局部施用會(huì)激活感覺神經(jīng)末端，這本身又產(chǎn)生疼痛、炎癥和對(duì)熱及機(jī)械刺激的超敏感性。這些效應(yīng)是由于TRPA1通道的激活造成的。桂皮油(肉桂醛)已顯示出是最特異性的TRPA1活化劑。它激發(fā)TRPA1通道并能在小鼠中引發(fā)傷害感受行為。TRPA1的激活產(chǎn)生疼痛感覺，因此，哺乳動(dòng)物中傷害感受行為的誘發(fā)提供了有害的寒冷為何能被感覺成灼痛的模型(Bandell等，Neuron2004)。大麻素四氫大麻酚(THC)也顯示出以與芥子油和肉桂醛相似的方式作用，激活TRPA1通道(Jordt等，Nature2004)。TRPA1還是環(huán)境刺激物，例如丙烯醛(它是催淚氣的毒性和發(fā)炎作用的原因)、汽車廢氣和化療劑的代謝副產(chǎn)物的作用目標(biāo)。使用TRPA1缺陷小鼠已經(jīng)表明，這一通道是芥子油和大蒜經(jīng)由其激活初級(jí)傳入傷害感受器以產(chǎn)生炎性疼痛的唯一耙物。TRPA1缺陷小鼠顯示正常的冷敏感性和未受損的聽覺功能，表明這一通道不是初始探測(cè)有害的寒冷或聲音所必需的。然而，這些小鼠在緩激肽引起的傷害感受器興奮和疼痛超壽丈感性方面表現(xiàn)出顯著的擊夾陷。因此可以斷定，TRPA1是環(huán)境刺激物和內(nèi)源性促麻醉劑經(jīng)由其將傷害感受器去極化以引起炎性疼痛的轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的重要組分(Bautista等，Cell2006)。冷痛覺過(guò)敏是一種增強(qiáng)的疼痛敏感性，并且是一種廣泛報(bào)道的炎性和神經(jīng)病性疼痛癥狀；然而，這一狀況的內(nèi)在機(jī)制仍不清楚。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，一級(jí)感覺神經(jīng)元中TRPA]的藥理阻斷能夠使炎癥和神經(jīng)傷害引起的冷痛覺過(guò)敏逆轉(zhuǎn)。因此，阻斷感覺神經(jīng)元中的TRPA1可以為治療由炎癥和神經(jīng)損傷引起的冷痛覺過(guò)敏提供一種有效的對(duì)策(Obata等，J.ClmInvest2005)。胞內(nèi)Ca"通過(guò)EF手型域激活人TRPAl,而在異源系統(tǒng)中在受冷期間通過(guò)增高的[Ca2+]間接地(和非生理學(xué)地)產(chǎn)生冷敏感性(Zurborg等，NatureNeurosd2007)。已經(jīng)檢驗(yàn)了L5脊神經(jīng)結(jié)扎(SNL)后冷痛覺過(guò)敏的發(fā)生，因?yàn)楹芸赡軆蓚€(gè)不同的群體表達(dá)TRPAl和TRPM8的小神經(jīng)元是冷的感覺的基礎(chǔ)。在附近的未受損的L4背側(cè)神經(jīng)節(jié)(DRG)中，從L5脊神經(jīng)結(jié)扎后的第1天至第14天，表達(dá)trkA的小到中等直徑神經(jīng)元中的TRPAlmRNA表達(dá)增加。這一上調(diào)與神經(jīng)傷害誘發(fā)的后爪冷痛覺過(guò)敏的發(fā)展和維持很好地對(duì)應(yīng)。相反，在整個(gè)2周實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，L4DRG中TRPM8mRNA/蛋白的表達(dá)沒有變化。另一方面，在受損的L5DRG中，結(jié)扎后2周內(nèi)TRPAl和TRPM8表達(dá)均減小。另外，鞘內(nèi)施用TRPAl(但不是TRPM8)反義寡脫氧核苷酸抑制了L5SNL誘發(fā)的冷痛覺過(guò)壽丈。在未受損的初級(jí)傳入神經(jīng)元中TRPAl的增加可能是在神經(jīng)病性疼痛模型中觀察到的對(duì)冷的過(guò)分響應(yīng)的原因之一(Katsura等，ExpNeurol2006)。神經(jīng)病性疼痛是通常伴隨組織損傷或由其引起的一種慢性疼痛。在神經(jīng)病性疼痛時(shí)，神經(jīng)纖維常常受損、功能不良或,皮傷害。這些受損的神經(jīng)纖維向其它疼痛中心傳送不正確的信號(hào)，引起慢性疼痛。神經(jīng)纖維損害的影響包括在損害部位及其周圍的神經(jīng)功能改變。神經(jīng)病性疼痛的一個(gè)實(shí)例;故稱作幻月支綜合癥。當(dāng)一條臂或腿因生病或受傷而被截掉，但大腦仍由原來(lái)攜帶來(lái)自截掉肢體的神經(jīng)沖動(dòng)的神經(jīng)得到疼痛信息時(shí)，發(fā)生這種情況。這些神經(jīng)現(xiàn)在發(fā)動(dòng)不良并引起疼痛。神經(jīng)病性疼痛常?？雌饋?lái)沒有明顯的原因，但是，神經(jīng)病性疼痛的一些常見的原因包括多發(fā)性硬化癥，糖尿病，背傷，截肢術(shù)，脊推手術(shù)，HIV感染，帶狀皰滲，酒精中毒和面部神經(jīng)問(wèn)題。神經(jīng)病性疼痛的癥狀包括閃電樣痛和灼痛，麻刺感和麻木，以及對(duì)觸摸和冷的敏感性增高。目前的治療方法包括使用非甾類消炎藥和較強(qiáng)的麻醇藥，例如基于嗎啡的藥物?？贵@厥藥和抗抑郁藥也常用于治療神經(jīng)病性疼痛。神經(jīng)病性疼痛常常難以治療，在這種情形疼痛專家可能4吏用侵入性或植入性裝置療法以便有效地控制疼痛。對(duì)參與神經(jīng)病疼痛發(fā)生的神經(jīng)進(jìn)行電刺激可以明顯地控制疼痛癥狀。遺憾的是，神經(jīng)病性疼痛對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)的疼痛療法常常響應(yīng)4艮差，并且人，可能會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重致殘。發(fā)炎是免疫系統(tǒng)對(duì)感染或刺激的最初響應(yīng)。發(fā)炎常常引起發(fā)紅、腫脹、疼痛和受感染部位的機(jī)能障礙。發(fā)炎也可能伴隨其它癥狀，包括發(fā)熱、寒戰(zhàn)、疲勞、精力不濟(jì)、頭痛、胃口不好和月幾肉僵硬。發(fā)炎是由來(lái)自白細(xì)胞的化學(xué)物質(zhì)引起的，這些化學(xué)物質(zhì)^f皮釋放到血液或受感染的組織中試圖消除體內(nèi)的外來(lái)物質(zhì)?；瘜W(xué)物質(zhì)的這種釋放增加了流向該部位的血流，并可能造成發(fā)紅和溫?zé)?。一些化學(xué)物質(zhì)引起流體泄漏到組織內(nèi)，造成肺脹。發(fā)炎過(guò)程可能刺激神經(jīng)和引起疼痛。關(guān)節(jié)也會(huì)發(fā)生炎癥，這是由關(guān)節(jié)內(nèi)細(xì)胞和炎性物質(zhì)數(shù)目增加造成的，它引起刺激作用、摩損軟骨(骨末端的墊)和關(guān)節(jié)滑膜腫脹。發(fā)炎作為自身免疫障礙的一部分還會(huì)影響器官例如心臟發(fā)炎(心肌炎)，這會(huì)造成呼吸急促或下肢腫脹；向肺傳送空氣的小管發(fā)炎，這會(huì)引起哮喘發(fā)作；腎發(fā)炎(腎炎)，這會(huì)造成高血壓或腎衰竭；以及大腸發(fā)炎(結(jié)腸炎)，這會(huì)造成痛性痙攣和腹瀉。疼痛可能不是炎性疾病的主要癥狀，因?yàn)楹芏嗥鞴贈(zèng)]有^f艮多痛覺神經(jīng)。器官炎癥的治療只要可能就會(huì)瞄準(zhǔn)發(fā)炎的原因。有許多用于炎性疾病的治療方法選項(xiàng)，包括用藥、休息和每i煉，以及手術(shù)4交正關(guān)節(jié)損傷。采用的治療類型將取決于幾個(gè)因素，包括疾病類型、患者年齡、所服用的藥物類型、總體健康情況以及醫(yī)療史和癥狀的嚴(yán)重程度。有很多種藥物可供使用以減小關(guān)節(jié)疼痛、腫脹和發(fā)炎，以及預(yù)防或減小炎性疾病的發(fā)展。這些藥物包括非甾類消炎藥物、皮質(zhì)甾炎藥物和抗癥藥物。TRPA1通道的阻斷已顯示會(huì)減輕冷痛覺過(guò)敏。這是一種增強(qiáng)的疼痛敏感性，并且是廣泛報(bào)道的炎性和神經(jīng)病性疼痛的一種癥狀，因此認(rèn)為能夠阻斷TRPA1通道的藥劑能用于治療神經(jīng)病性疼痛和炎癥。TRPA1通道的阻斷還引起血管擴(kuò)張，因此能產(chǎn)生這樣一種效應(yīng)的藥劑也可作為血管擴(kuò)張劑使用。血管擴(kuò)張劑常用于治療諸如低血壓或血塊形成等狀況，此時(shí)需要擴(kuò)張血管。大麻素是一組已知會(huì)激活細(xì)胞內(nèi)的大麻素受體的化學(xué)物質(zhì)。這些化學(xué)物質(zhì)是在大麻才直物中發(fā)現(xiàn)的，也在人和其它動(dòng)物內(nèi)部?jī)?nèi)源地產(chǎn)生，這稱為內(nèi)源性大麻素。合成的大麻素是和才直物大麻素或內(nèi)源性大麻素具有類似結(jié)構(gòu)的化學(xué)物質(zhì)。植物大麻素也可以被分離成"基本上純的"化合物。這些分離出的大麻素基本上不含其它天然存在的化合物，例如，其它次要的大麻素化合物和分子，比如辟烯。基本上純的化合物的純度最高達(dá)總重量的至少95%。大麻素四氳大麻酚(THC)已顯示出以與芥子油和肉桂醛相似的方式作用，激活TRPA1通道(Jordt等，Nature2004)。這一研究中使用的THC的類型是合成的THC。合成的THC,例如屈大麻酚，會(huì)在使用者中產(chǎn)生4艮多副作用。這些副作用包括心悸，心動(dòng)過(guò)速，面部潮紅，腹痛，惡心，嘔吐，遺忘，焦慮/神經(jīng)質(zhì)，共濟(jì)失調(diào)，意識(shí)錯(cuò)亂，人格解體，頭暈，欣快，幻覺，偏執(zhí)狂，嗜睡，低血壓，腹瀉，抑郁，夢(mèng)魘和碎見覺困難。申請(qǐng)人出人意料地發(fā)現(xiàn)，ill用含大麻素的植物提取物對(duì)于阻斷TRPV1、TRPM8和TRPA1通道有效。特別是，含有四氫大麻酚(THC)、四氫大麻酚酸(THCA)、大麻二酚(CBD)、大麻二酚酸(CBDA)、大麻碎酚(CBG)或大麻環(huán)辟酚(CBC)作為主要大麻素的含大麻素植物提取物特別有效。術(shù)語(yǔ)"含大麻素的植物提取物，，在這里指得自大麻屬植物的一種或多種植物提取物。含大麻素的植物提取物除了一種或多種大麻素化合物之外，還含有與大麻素一起從植物材料中提取出來(lái)的一種或多種非大麻素類組分。在含大;fr素的植物提取物中達(dá)到的純度和其它大麻素類化合物的各自范圍將隨起始的植物材料和所用的提取方法而變。含大麻素的植物提取物可以用各種提取大麻屬植物材料的方法得到。這些方法包括但不限于用C02進(jìn)行超臨界或亞臨界萃取，用熱氣體萃取和用溶劑萃取。發(fā)明概要根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供了一種或多種含大麻素的植物提取物在制造藥物制劑中的應(yīng)用，該藥物制劑用于預(yù)防或治療通過(guò)阻斷一類或多類TRP通道得到緩解的疾病或狀況。優(yōu)選一皮阻斷的TRP通道亞力矣是TRPA通道。更優(yōu)選該TRPA通道是TRPA1通道。優(yōu)選要預(yù)防或治療的疾病或狀況包括神經(jīng)病性疼痛，炎癥或血管收縮。或者是，被阻斷的TRP通道亞族是TRPM通道。優(yōu)選該TRPM通道是TRPM8通道。優(yōu)選要預(yù)防或治療的疾病或狀況是癌癥。更優(yōu)選該癌癥是選自前列腺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，肺癌或皮膚癌?；蛘呤?，被阻斷的TRP通道亞族是TRPV通道。更優(yōu)選該TRPV通道是TRPV1通道。優(yōu)選要預(yù)防或治療的疾病或狀況包括神經(jīng)病性疼痛，炎癥或血管收縮。含大麻素的植物提取物優(yōu)選含有以下一種或多種化合物四氫大麻酚(THC);大麻二酚(CBD);大麻碎酚(CBG);大麻環(huán)辟酚(CBC);四氳次大麻二酚(THCV);四氫大麻酚酸(THCA);次大麻二酚(CBDV);和大麻二酚酸(CBDA)。含大麻素的植物提取物可以利用如授予申請(qǐng)人的英國(guó)專利GB2391865中所述的亞臨界C02萃取技術(shù)從大麻屬植物中提取。另一種大麻屬植物提取技術(shù)是如授予申請(qǐng)人的英國(guó)專利GB2376464中所述的熱氣體萃取技術(shù)。優(yōu)選該一種或多種含大麻素植物4是取物含有四氫大麻酚(THC)作為主要的大麻素。優(yōu)選該一種或多種含大麻素才直物才是取物含有大麻二酚(CBD)作為主要的大麻素。優(yōu)選該一種或多種含大麻素才直物提取物含有大麻環(huán)萜酚(CBC)作為主要的大麻素。優(yōu)選該一種或多種含大麻素植物提取物含有四氫大麻酚酸(THCA)作為主要的大麻素。優(yōu)選該一種或多種含大麻素植物提取物含有大麻二酚酸(CBDA)作為主要的大麻素?；蛘呤?，該一種或多種含大麻素植物提取物可以包括含CBD的植物提取物與含THC的植物提取物的組合。優(yōu)選該大麻素以基于大麻的藥物才是取物(CBME)的形式存在。CBME是得自大麻屬植物的植物提取物，因此，取決于所用的提取ii技術(shù)，會(huì)含有所有的"自然提取的"大麻屬植物組分?；蛘呤?，含大麻素的植物提取物是經(jīng)分離的或是基本上純的。分離的或基本上純的大麻素應(yīng)基本上不含其它非目標(biāo)大麻素和其它非大麻素組分，例如碎烯。分離的或基本上純的大麻素可以是天然來(lái)源，即，植物來(lái)源，也可以是合成制造的化合物。'在授予申請(qǐng)人的英國(guó)專利GB2393721中公開的方法中描述了制備基本上純的大麻素的一種方法。"基本上純"在本文中定義為，通過(guò)將HPLC圖的面積歸一化測(cè)得的大麻素化合物或其衍生物的制劑的色譜純度高于95%,優(yōu)選高于96%,更優(yōu)選高于97%,更優(yōu)選高于98%,更優(yōu)選高于99%,最好是高于99.5%。在一項(xiàng)實(shí)施方案中，含大麻素的植物提取物被包裝，以便以可滴定的劑型釋藥。術(shù)語(yǔ)"滴定"意味著向患者提供的藥物形式使得能夠服用比單位劑量更小的劑量。"單位劑量"在本文中定義為在任何一個(gè)時(shí)刻，或在指定的用藥時(shí)段例如3小時(shí)內(nèi)，能夠服用的藥物最大劑量。劑量的滴定對(duì)患者是有利的，因?yàn)樗麄兡軡u增地加大劑量直至藥物有效?？梢岳斫?，不是所有的患者需要準(zhǔn)確相同的藥物劑量，例如，體形較大或者代謝較快的患者與體形較小的患者相比，會(huì)需要較高的劑量。不同的患者表現(xiàn)出的癥狀程度也會(huì)不同，因此可能需要更大或更小的劑量以1更有效地治療該癥狀。因此，與必須劈分成部分劑量的標(biāo)準(zhǔn)劑型相比，可滴定的劑型的好處是顯然的。對(duì)于含大麻素的植物提取物，單位劑量范圍可以參照大麻素含量確定，該含量?jī)?yōu)選為5-100mg總大麻素化合物。優(yōu)選該藥物制劑被包裝以便釋藥，使得釋藥以以下一個(gè)或多個(gè)部位為目標(biāo)舌下，頰含，口腔，直腸，鼻，非腸道或經(jīng)由肺系統(tǒng)。更優(yōu)選藥物制劑是選自以下的一種或多種形式凝膠劑、凝膠噴霧劑，片劑，液體，月交嚢；通過(guò)注射或用于汽化。另外，藥物制劑還包含一種或多種載體溶劑。該載體溶劑優(yōu)選是乙醇和/或丙二醇。更優(yōu)選乙醇與丙二醇之比在4:1和1:4之間，更優(yōu)選該比例基本上為l丄12含大麻素的植物提取物被用來(lái)制造藥物制劑，用以預(yù)防或治療通過(guò)阻斷TRP通道得到纟爰解的疾病或狀況。優(yōu)選通過(guò)阻斷TRP通道得到緩解的疾病或狀況是選自神經(jīng)病性疼痛，炎癥和血管收縮。通過(guò)阻斷TRP通道得到緩解的神經(jīng)病性疼痛優(yōu)選選自多發(fā)性硬化病，糖尿病，背傷，截肢，脊推手術(shù)，HIV感染，帶狀皰滲，酒精中毒和面部神經(jīng)問(wèn)題。通過(guò)阻斷TRP通道得到緩解的炎癥優(yōu)選選自炎性疾病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，自身免疫障礙如心肌炎，向肺傳送空氣的小管發(fā)炎，腎炎和結(jié)腸炎。通過(guò)阻斷TRP通道得到緩解的血管收縮優(yōu)選選自高血壓和血塊形成。在本發(fā)明的另一方面，提供了一種預(yù)防或治療通過(guò)阻斷一種或多種TRP通道能夠緩解的疾病或狀況的方法，包括向需要治療的對(duì)象施用藥學(xué)有效量的含大麻素的植物提取物。本發(fā)明第一方面的討論經(jīng)必要的修改后適用于本發(fā)明的這一方面。正如在本文中進(jìn)一步詳細(xì)討i侖的，"治療"意p未著所處理的狀況至少,皮改善，最好是治愈。本發(fā)明的一些方面將只作為實(shí)例作進(jìn)一步的描述。具體說(shuō)明申請(qǐng)人4吏用含大麻素的才直物才是取物對(duì)大鼠重組TRPV1、TRPM8通道及TRPA1(也稱為ANKTM1)通道(二者都穩(wěn)定地表達(dá)在HEK293細(xì)胞內(nèi))進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。TRPA1通道是齊子油(異硫氰酸酯)和其它植物天然產(chǎn)物(例如肉桂醛)的受體。TRPM8通道是薄荷醇和icilm的受體。胞內(nèi)Ca^濃度在加入各種濃度的試驗(yàn)化合物之前和之后測(cè)定。出乎意料地發(fā)現(xiàn)含大麻素的植物提取物能阻斷所試」瞼的通道，且其估算的EC5o值在100nM的范圍或更^^。實(shí)Sfe例1:含大麻素的植物提取物對(duì)胞內(nèi)Ca"+濃度的影響才才泮牛和方法化合物對(duì)于用TRPA1通道的實(shí)驗(yàn)，使用異硫氰酸烯丙酯(芥子油)和肉桂醛作為正對(duì)照，由含大麻素的植物提取物得到的值皆與其比較。對(duì)于用TRPM8的實(shí)驗(yàn)，使用薄荷醇和icilm激活通道。對(duì)于用TRPV1通道的實(shí)驗(yàn)，使用離子霉素激活通道。含大麻素的植物提取物是如授予申請(qǐng)人的英國(guó)專利GB2391865中所述的亞臨界C02萃取技術(shù)從大麻屬植物中制得的。然后用授予申請(qǐng)人的英國(guó)專利GB2393721中所公開的方法將大麻素進(jìn)一步純化，得到基本上純的大麻素。未純化的植物提取物THC和CBD也在使用TRPA1通道的實(shí)-驗(yàn)中試-驗(yàn)。HEK-293細(xì)胞用大鼠TRPA1、TRPV1或TRPM8cDNA永久轉(zhuǎn)染將HEK293(人胚胎腎)細(xì)胞植入直徑100mm的培養(yǎng)亞中，使用含大鼠TRPA1、TRPV1或TRPM8cDNA的質(zhì)粒，按照制造商的操作規(guī)程，利用Lipofectamine2000(Invitrogen)轉(zhuǎn)染至約80%融合。用遺傳霉素G-418(Invitrogen)600|ug/mL選擇穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染用定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢驗(yàn)。對(duì)于得自TRPA1/TRPV1/TRPM8-HEK293細(xì)胞的DNA的PCR分析證實(shí)基因完全整合到HEK293細(xì)胞基因組中(未說(shuō)明)。在超量表達(dá)大鼠TRPA1、TRPV1或TRPM8通道的HEK-293細(xì)胞內(nèi)的實(shí)驗(yàn)將TRPA/TRPV1/TRPM8-HEK-293細(xì)胞植入100mm直徑的培養(yǎng)皿中，3天后于室溫下加入胞質(zhì)4丐指示劑Fluo4-AM(4^iM,MolecularProbes)l小時(shí),該指示劑溶在含有Pluromc(0.02%,MolecularProbes)的Tyrode緩沖液(Nad145mM,KC12.5mM,CaCl21.5mM，MgCl21.2mM，D-葡萄糖10mM,HEPES10mMpH7.4)中。將細(xì)胞在Tyrode緩沖液中洗2次，重新懸浮并轉(zhuǎn)移到熒光分光計(jì)(Perkm-ElmerLS50B)的石英池中(激發(fā)波長(zhǎng)^488nm，發(fā)射波長(zhǎng)二516nm)。在加入各種濃度的試驗(yàn)化合物之前和之后，測(cè)定胞內(nèi)Ca^濃度。ECso值作為使胞內(nèi)Ca2+濃度產(chǎn)生半峰值增大所需的試驗(yàn)化合物的濃度來(lái)確定。曲線擬合和參數(shù)估算用GraphPadPrism⑧完成。相同的化合物還對(duì)未轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞作了試驗(yàn)。14結(jié)果觀察從實(shí)驗(yàn)中得到的表1和2中的數(shù)值可以看出，所試^^的大麻素化合物的l0gEC5。。/。值證實(shí)，所試驗(yàn)的大麻素化合物能造成TRP通道的阻斷。<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>對(duì)于大麻素，得到的數(shù)值與芥子油和肉桂醛很相近，它們的效力可以排列如下THC提取物>CBC>CBD〉THOTHCA>CBD提取物〉CBDA〉芥子油〉肉桂酪。特別是，THC提取物、CBC和CBD的ECso值在60-100nM的濃度范圍內(nèi)。這些數(shù)據(jù)表明，TRPA1可能是構(gòu)成才直物大麻素的某些藥理作用的基礎(chǔ)的分子靶物之一。這些數(shù)據(jù)是有意義的，因?yàn)楫?dāng)前對(duì)于患有神經(jīng)病性疼痛、炎癥或血管收縮的患者只有很少適用的治療選項(xiàng)，大麻素在制造能用于治療此類狀況的藥物制劑中的應(yīng)用會(huì)證明是有用的。表2:TRPM8通道阻斷<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>上表詳細(xì)說(shuō)明了大麻素化合物在阻斷TRPM8方面的效力。得到的數(shù)值表明，大麻素化合物在阻斷方面全都有效，因此TRPM8拮抗劑可以為其中TRPM8活性對(duì)癌細(xì)胞生存必不可少的癌癥的治療提供新的治療手段。前面已經(jīng)說(shuō)明，含大麻素的植物提取物可以單獨(dú)或者聯(lián)合使用，以有效地治療各種疾病和狀況。這里展示的這些數(shù)據(jù)為含大麻素的植物提取物對(duì)于治療通過(guò)阻斷TRP通道得到緩解的疾病和狀況的應(yīng)用提供了證明。本文已經(jīng)表明，試-驗(yàn)的所有大麻素化合物都對(duì)TRPA1通道產(chǎn)生活化作用，因此能用于預(yù)防或治療通過(guò)活化TRPA1通道得到改善的疾病或狀況。還表明，試-驗(yàn)的大麻素化合物能夠拮抗TRPM8通道，因此有可能用于預(yù)防或治療由于拮抗TRPM8通道而改善的疾病或狀況。表3:TRPV1通道阻斷<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>上表詳細(xì)說(shuō)明了大麻素化合物在阻斷TRPV1通道方面的效力。得到的數(shù)值表明，大麻素化合物在阻斷方面全都有效，因此TRPV1拮抗劑可以為患有神經(jīng)病性疼痛、炎癥或血管收縮的患者的治療提供新的治療手段。權(quán)利要求1.一種或多種含大麻素的植物提取物在制造藥物制劑中的應(yīng)用，該藥物制劑用于預(yù)防或治療通過(guò)阻斷一種或多種TRP通道得到緩解的疾病或狀況。2.權(quán)利要求1中的應(yīng)用，其中被阻斷的TRP通道亞族是TRPA通道。3.權(quán)利要求2中的應(yīng)用，其中該TRPA通道是TRPA1通道。4.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)中的應(yīng)用，其中要預(yù)防或治療的疾病或狀況是選自神經(jīng)病性疼痛，炎癥和血管收縮。5.權(quán)利要求l中的應(yīng)用，其中被阻斷的TRP通道亞族是TRPM通道。6.權(quán)利要求5中的應(yīng)用，其中該TRPM通道是TRPM8通道。7.權(quán)利要求5或6中的應(yīng)用，其中要預(yù)防或治療的疾病或狀況是癌癥。8.權(quán)利要求7中的應(yīng)用，其中該癌癥是選自前列腺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌或皮J3夫癌。9.權(quán)利要求1中的應(yīng)用，其中被阻斷的TRP通道亞族是TRPV通道。10.權(quán)利要求9中的應(yīng)用，其中該TRPV通道是TRPV1通道。11.權(quán)利要求9或IO的任一項(xiàng)中的應(yīng)用，其中要預(yù)防或治療的疾病或狀況是選自神經(jīng)病性疼痛，炎癥和血管收縮。12.權(quán)利要求1中的應(yīng)用，其中含大麻素的植物提取物含有以下一種或多種化合物四氫大麻酚(THC),大麻二酚(CBD),大麻碎酚(CBG),大麻環(huán)辟酚(CBC),四氫次大麻二酚(THCV),四氫大麻酚酸(THCA),次大麻二酚(CBDV)和大麻二酚酸(CBDA)。13.權(quán)利要求1中的應(yīng)用，其中含大麻素的植物提取物是用亞臨界co2萃取技術(shù)從大麻屬植物中制得的提取物。14.權(quán)利要求1中的應(yīng)用，其中一種或多種含大麻素的植物^是取物含有四氳大麻酚(THC)作為主要的大麻素化合物。15.權(quán)利要求1中的應(yīng)用，其中一種或多種含大麻素的植物提取物含有大麻酚(CBD)作為主要的大麻素化合物。16.權(quán)利要求1中的應(yīng)用，其中一種或多種含大麻素的植物提取物含有大麻環(huán)辟酚(CBC)作為主要的大麻素化合物。17.權(quán)利要求1中的應(yīng)用，其中一種或多種含大麻素的植物提取物含有四氫大麻酚酸(THCA)作為主要的大麻素化合物。18.權(quán)利要求1中的應(yīng)用，其中一種或多種含大麻素的植物提取物含有大麻二酚酸(CBDA)作為主要的大麻素化合物。19.權(quán)利要求1中的應(yīng)用，其中一種或多種含大麻素的植物提取物可以包括含CBD的植物提取物與含THC的植物提取物的組合。20.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)中的應(yīng)用，其中大麻素以基于大麻的藥物提取物(CBME)的形式存在。21.權(quán)利要求20中的應(yīng)用，其中一種或多種基于大麻的藥物提取物(CBME)包括所有自然提取的大麻屬植物組分。22.權(quán)利要求1中的應(yīng)用，其中含大麻素的植物提取物是經(jīng)分離的或是基本上純的。23.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中的應(yīng)用，其中含大麻素的植物提取物被包裝成以可滴定的劑型用于釋藥。24.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中的應(yīng)用，其中含大麻素的植物提取物被包裝用于釋藥，該釋藥以選自以下的一個(gè)或多個(gè)部位為目標(biāo)舌下，頰含，口腔，直腸，鼻，非腸道，和經(jīng)由肺系統(tǒng)。25.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中的應(yīng)用，其中含大麻素的植物提取物是選自以下的一種或多種形式凝膠，凝膠噴霧劑，片劑，液體，膠嚢，注射和用于汽化。26.權(quán)利要求4或權(quán)利要求11中的應(yīng)用，其中通過(guò)阻斷TRP通道緩解的神經(jīng)病性疼痛是選自多發(fā)性硬化癥，糖尿病，背傷，截肢術(shù)，脊推手術(shù)，HIV感染，帶狀皰滲，酒精中毒和面部神經(jīng)問(wèn)題。27.權(quán)利要求4或權(quán)利要求11中的應(yīng)用，其中通過(guò)阻斷TRP通道緩解的炎癥是選自炎性疾病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，自身免疫障礙，心肌炎，向肺傳送空氣的小管發(fā)炎，腎炎和結(jié)腸炎。28.權(quán)利要求4或權(quán)利要求11中的應(yīng)用，其中通過(guò)阻斷TRP通道得到緩解的血管收縮是選自高血壓和血塊形成。29.—種預(yù)防或治療通過(guò)阻斷一種或多種TRP通道得到緩解的疾病或狀況的方法，包括向需要治療的對(duì)象施用藥學(xué)有效量的一種或多種含大麻素的植物提取物。30.^又利要求29中的方法，其中孝皮阻斷的TRP通道亞》矣是TRPA通道。31.權(quán)利要求30中的方法，其中該TRPA通道是TRPA1通道。32.權(quán)利要求29至31中任一項(xiàng)中的方法，其中要預(yù)防或治療的疾病是選自神經(jīng)病性疼痛，炎癥和血管收縮。33.^又利要求29中的方法，其中^皮阻斷的TRP通道亞力矣是TRPM通道。34.4又利要求33中的方法，其中該TRPM通道是TRPM8。35.權(quán)利要求33或34中的方法，其中要預(yù)防或治療的疾病或狀況是癌癥o36.權(quán)利要求35的方法，其中的癌癥是選自前列腺癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，肺癌或皮膚癌。37.權(quán)利要求29中的方法，其中一皮阻斷的TRP通道亞族是TRPV通道。38.權(quán)利要求37中的方法，其中該TRPV通道是TRPV1通道。39.4又利要求37或38中任一項(xiàng)中的方法，其中要預(yù)防或治療的疾病或狀況是選自神經(jīng)病性疼痛，炎癥和血管收縮。40.權(quán)利要求29中的方法，其中含大麻素的植物提取物含有以下一種或多種物質(zhì)四氫大麻酚(THC),大麻二酚(CBD)，大麻萜酚(CBG),大麻環(huán)碎酚(CBC),四氬次大麻二酚(THCV)，四氬大麻酚酸(THCA),次大麻二酚(CBDV)和大麻二酚酸(CBDA)。41.權(quán)利要求29中的方法，其中含大麻素的植物提取物是用亞臨界co2萃取技術(shù)從大麻屬植物得到的提取物。42.權(quán)利要求29中的方法，其中的一種或多種含大麻素植物提取物含有四氫大麻酚(THC)作為主要的大麻素化合物。43.權(quán)利要求29中的方法，其中的一種或多種含大麻素植物提取物含有大麻二酚(CBD)作為主要的大麻素化合物。44.權(quán)利要求29中的方法，其中的一種或多種含大麻素植物提取物舍有大麻環(huán)薛酚(CBC)作為主要的大麻素化合物。45.權(quán)利要求29中的方法，其中的一種或多種含大麻素植物提取物含有四氬大麻酚酸(THCA)作為主要的大麻素化合物。46.權(quán)利要求29中的方法，其中的一種或多種含大麻素植物提取物含有大麻二酚酸(CBDA)作為主要的大麻素化合物。47.權(quán)利要求29中的方法，其中的一種或多種含大麻素植物提取物可以包括含CBD的植物提取物和含THC的植物提取物的組合。48.權(quán)利要求29至47中任一項(xiàng)的方法，其中的大麻素以基于大麻的藥物提取物(CBME)的形式存在。49.權(quán)利要求48中的方法，其中的一種或多種基于大麻的藥物提取物(CBME)包括所有的自然提取的大麻屬植物組分。50.權(quán)利要求29至48中任一項(xiàng)的方法，其中含大麻素的植物提取物是經(jīng)分離的或是基本上純的。51.權(quán)利要求29至50中任一項(xiàng)的方法，其中含大麻素的植物提取物以可滴定的劑型給藥。52.權(quán)利要求29至51中任一項(xiàng)的方法，其中含大麻素的植物提取物被施用到以下的一個(gè)或多個(gè)部位舌下，頰含，口腔，直腸，鼻，非腸道和經(jīng)由肺系統(tǒng)。53.權(quán)利要求29至52中任一項(xiàng)的方法，其中含大麻素的植物提取物以選自以下的一種或多種形式給藥凝膠，凝膠噴霧劑，片劑，液體，膠嚢，注射和通過(guò)汽化。54.權(quán)利要求32或39中的方法，其中通過(guò)阻斷TRP通道I1解的神經(jīng)病性疼痛是選自多發(fā)性硬化，糖尿病，背傷，截肢術(shù)，脊推手術(shù)，HIV感染，帶狀皰滲，酒精中毒和面部神經(jīng)問(wèn)題。55.權(quán)利要求32或39中的方法，其中通過(guò)阻斷TRP通道緩解的炎癥選自炎性疾病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，自身免疫障礙，心肌炎，向肺傳送空氣的小管發(fā)炎，腎炎和結(jié)腸炎。56.權(quán)利要求32和39中的方法，其中通過(guò)阻斷TRP通道緩解的血管收縮是選自高血壓和血塊形成。全文摘要本發(fā)明涉及含大麻素的植物提取物在預(yù)防和治療通過(guò)阻斷一種或多種TRP通道得到緩解的疾病或狀況中的應(yīng)用。優(yōu)選被阻斷的TRP通道亞族是TRPA通道。更優(yōu)選該TRPA通道是TRPA1通道。優(yōu)選要預(yù)防或治療的疾病或狀況包括神經(jīng)病性疼痛，炎癥或血管收縮?；蛘呤潜蛔钄嗟腡RP通道是TRPM通道。更優(yōu)選該TRPM通道是TRPM8通道。優(yōu)選要預(yù)防或治療的疾病或狀況是癌癥。更優(yōu)選要治療的癌癥包括前列腺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌或皮膚癌。或者是，被阻斷的TRP通道是TRPV通道。更優(yōu)選該TRPV通道是TRPV1通道。優(yōu)選要預(yù)防或治療的疾病或狀況包括神經(jīng)病性疼痛、炎癥或血管收縮。文檔編號(hào)A61P35/00GK101678059SQ200880016574公開日2010年3月24日申請(qǐng)日期2008年4月17日優(yōu)先權(quán)日2007年4月19日發(fā)明者A·夏諾莫里洛,L·德佩特洛切利斯,V·迪馬佐申請(qǐng)人:Gw藥品有限公司