專利名稱：一種紅地龍精制蛋白多肽制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蛋白多肽制劑，具體是涉及一種紅地龍精制蛋白多肽制劑，及其制備方 法和其在防治血栓疾病中應(yīng)用
背景技術(shù)：
地龍，性寒味咸，具清熱熄風(fēng)、平喘、通絡(luò)、利尿之功，用于高熱神昏，關(guān)節(jié)痹通、肢 體麻木，肺熱喘咳，高血壓等癥，藥理研究發(fā)現(xiàn)，它不但抗凝、抑制血小板聚集、抗心律失 常、而且還有抗癌和鎮(zhèn)痛的作用，這些功效表明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)組成復(fù)雜，如抗凝成分，多 為水溶性物質(zhì)，分子量在12000至80000D范圍內(nèi)，除了上述大分子外，紅地龍還含有一些 小分子，如紅地龍素、紅地龍解熱堿，核酸衍生物及維生素和無機鹽等。目前紅地龍的臨床 用藥主要是紅地龍勻漿得到的粗提物，用于治療血栓，其粗提物中包括了分子量從幾千到幾 萬的各種組分，成分復(fù)雜，由于不同的組分的溶栓活性不同，而且紅地龍中兼有抑制和促進 血小板聚集的成分，因此一定程度上影響了其溶栓療效。
現(xiàn)有技術(shù)中分離紅地龍中蛋白類成分成分，通常采用勻漿液進行鹽析、離子交換層析、 凝膠過濾層析等生化分離手段，雖然具有一定的可行性，但步驟繁雜，實驗條件要求高，不 適合大規(guī)模生產(chǎn)，且與中醫(yī)辨證用藥大相徑庭。
蛋白多肽類成分是紅地龍的主要有效成分，由于蛋白多肽類成分性質(zhì)不穩(wěn)定，對環(huán)境要 求較高，酸、堿、離子強度、溫度或光照對其活性均會產(chǎn)生影響，因而傳統(tǒng)的以水煎入藥， 影響了其藥效的發(fā)揮。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種抗血栓效果好的紅地龍 精制蛋白多肽制劑，本發(fā)明另一個目的是提供該紅地龍精制蛋白多肽制劑的制備方法和其在 防治血栓疾病中應(yīng)用。
技術(shù)方案為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明提供的紅地龍精制蛋白多肽制劑，它由以下方法 制備得到
① 取紅地龍，加入3至5倍量的蒸餾水，勻漿10至30分鐘，在4°C下以11000至15000r/min 離心20至30分鐘，取離心后的紅地龍上清液，備用；
② 取步驟①得到的紅地龍上清液100ml，在勻漿上清液溫度為30至5(TC、操作壓力為 0.25至0.5MPa、表面轉(zhuǎn)速為200至300r/min、勻漿液上清液的pH值為6至7的條件下，依 次用孔徑為十萬、五萬、 一萬的超濾膜進行分級過濾，當(dāng)濾過液為80ml時，往截留液中加入10ml蒸餾水，繼續(xù)超濾，至濾過液體積為100ml，分別得到十萬、五萬、 一萬孔徑超濾 膜的截留液；
③取步驟②得到的五萬孔徑超濾膜截留液和藥學(xué)上可接受的載體制備得到紅地龍精制蛋 白多肽制劑。
本發(fā)明提供的紅地龍精制蛋白多肽制劑，其中步驟①加入的蒸餾水為二次蒸餾，加入量 為藥材量的3倍，勻漿時間為10分鐘，4'C下以11000 r/min離心20分鐘。
本發(fā)明提供的紅地龍精制蛋白多肽制劑，其中步驟②超濾膜過濾的操作條件為勻漿上 清液溫度為50°C、操作壓力為0.25 MPa、表面轉(zhuǎn)速為200 r/min、勻漿液上清液的pH值為6.7。
本發(fā)明提供的紅地龍精制蛋白多肽制劑的制備方法包括以下步驟
① 取紅地龍藥材，加入3至5倍量的蒸餾水，勻漿10至30分鐘，在4。C下，以11000 至15000r/min離心20至30分鐘，取離心后的紅地龍上清液，備用；
② 取步驟①得到的紅地龍上清液100ml，在勻漿上清液溫度為30至50°C、操作壓力為 0.25至0.5MPa、表面轉(zhuǎn)速為200至300r/min、勻漿液上清液的pH值為6至7的條件下，依 次用孔徑為十萬、五萬、 一萬的超濾膜進行分級過濾，當(dāng)濾過液為80ml時，往截留液中加 入10ml蒸餾水，繼續(xù)超濾，至濾過液體積為100ml，分別得到十萬、五萬、 一萬孔徑超濾 膜的截留液；
③ 取步驟②得到的五萬孔徑超濾膜截留液和藥學(xué)上可接受的載體制備得到紅地龍精制蛋 白多肽制劑。
其中歩驟①加入的蒸餾水為二次蒸餾，加入量為藥材量的3倍，勻漿時間為10分鐘，4°C 下以11000 r/min離心20分鐘。
作為優(yōu)選方案，其中步驟②超濾膜過濾的操作條件為勻漿上清液溫度為5(TC、操作壓 力為0.25MPa、表面轉(zhuǎn)速為200r/min、勻漿液上清液的pH值為6.7。
本發(fā)明提供的紅地龍精制蛋白多肽制劑可以用于血栓疾病治療中的應(yīng)用。
有益效果本發(fā)明提供的紅地龍精制蛋白多肽制劑，成分清楚，主要活性成分為分子量
在十萬以下五萬以上的蛋白類成分，藥理實驗表明本發(fā)明提供的紅地龍精制蛋白多肽制劑是 一種具有很好溶解纖維蛋白，能有效的預(yù)防和治療血栓、且無副作用的制劑。
本發(fā)明提供的紅地龍精制蛋白多肽制劑的制備方法，采用膜分離技術(shù)對紅地龍蛋白多肽 類活性成分進行分離，采用本發(fā)明提供的膜分離技術(shù)，通過不同孔徑的膜截留得到不同分子 量值的蛋白多肽成分，從而將活性蛋白多肽物質(zhì)進行分離提純，在膜分離過程中活性物質(zhì)不 發(fā)生相變，分離系數(shù)較大，可在常溫下進行，無需添加其它酸、堿、鹽試劑，可操作性強、 較傳統(tǒng)的分離純化方法分離效率更高、更方便，適合于紅地龍中不同分子量的蛋白多肽類成分及小分子成分的分離純化。通過本發(fā)明提供的膜分離技術(shù)將紅地龍成分按分子量大小進行 切割分離，從而得到纖溶活性高無副作用的活性組分。


圖1是操作壓力對紅地龍勻漿液膜通量的影響規(guī)律圖。 圖2是表面轉(zhuǎn)速對紅地龍勻漿液膜通量的影響規(guī)律圖。 圖3是操作溫度對紅地龍勻漿液膜通量的影響規(guī)律圖。 圖4是pH值對紅地龍勻漿液膜通量的影響規(guī)律圖。 圖5是勻漿液濃度對紅地龍勻漿液膜通量的影響規(guī)律圖。 圖6是離子濃度對紅地龍勻漿液膜通量的影響規(guī)律圖。
具體實施例方式
根據(jù)下述實施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實施例 所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結(jié)果僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會限制權(quán)利 要求書中所詳細描述的本發(fā)明。 實施例l紅地龍精制蛋白多肽的制備
① 取紅地龍100g，加入500ml的二次蒸餾水，勻漿30分鐘，在4'C下，以15000r/min
離心30分鐘，取離心后的紅地龍上清液，備用；
② 取步驟①得到的紅地龍上清液100ml，在勻漿上清液溫度為4(TC、操作壓力為0.5MPa、 表面轉(zhuǎn)速為300r/min、勻漿液上清液的pH值為6的條件下，依次用孔徑為十萬、五萬、一 萬的超濾膜進行分級過濾，當(dāng)濾過液為80ml時，往截留液中加入10ml蒸餾水，繼續(xù)超濾， 至濾過液體積為100ml，分別得到十萬、五萬、 一萬孔徑超濾膜的截留液；
③ 取步驟②得到的五萬孔徑超濾膜截留液和藥學(xué)上可接受的載體制備得到紅地龍精制蛋 白多肽制劑。
其中本發(fā)明提供的五萬孔徑超濾膜截留液能和藥學(xué)上可接受的載體制成片劑、膠囊劑、顆 粒劑、微囊、軟膏劑劑型的藥物，做成片劑或膠囊劑時加入乳糖和淀粉，必要時加入潤滑劑 硬脂酸鎂，整粒、干燥、制成顆粒劑或壓片制成片劑或裝膠囊制成膠囊劑；或裝微囊做成微 囊劑；做成軟膏劑時加入吐溫、蜂蠟或聚乙二醇,混勻，制成軟膏劑。 實施例2紅地龍精制蛋白多肽的制備
① 取紅地龍200g，加入800ml的二次蒸餾水，勻漿20分鐘，在4'C下，以12000r/min 離心25分鐘，取離心后的紅地龍上清液，備用；
② 取步驟①得到的紅地龍上清液100ml，在勻漿上清液溫度為45。C、操作壓力為0.3MPa、 表面轉(zhuǎn)速為250r/min、勻漿液上清液的pH值為7的條件下，依次用孔徑為十萬、五萬、一萬的超濾膜進行分級過濾，當(dāng)濾過液為80ml時，往截留液中加入10ml蒸餾水，繼續(xù)超濾， 至濾過液體積為100ml，分別得到十萬、五萬、 一萬孔徑超濾膜的截留液；
③取步驟②得到的五萬孔徑超濾膜截留液和藥學(xué)上可接受的載體制備得到紅地龍精制蛋 白多肽制劑。
其中本發(fā)明提供的五萬孔徑超濾膜截留液能和藥學(xué)上可接受的載體制成片劑、膠囊劑、顆 粒劑、微囊、軟膏劑劑型的藥物，做成片劑或膠囊劑時加入乳糖和淀粉，必要時加入潤滑劑 硬脂酸鎂，整粒、干燥、制成顆粒劑或壓片制成片劑或裝膠囊制成膠囊劑；或裝微囊做成微 囊劑；做成軟膏劑時加入吐溫、蜂蠟或聚乙二醇,混勻，制成軟膏劑。 實施例3紅地龍活性成分超濾膜過濾的條件篩選
1、 紅地龍勻漿液的制備
取100g的紅地龍，加入300ml的二次蒸餾水，分次勻漿50min，得勻漿液，經(jīng)管式離心 機(20000r/min)離心，取勻漿上清液，放置冰箱冷藏備用。
2、 活性組分的制備
取離心后的紅地龍勻漿液，采用孔徑為100000，膜材料為聚偏氟乙烯(PVDF)的超濾 膜進行過濾，得到活性組分。
3、 操作條件對紅地龍勻漿液的膜通量的影響
以膜通量為指標考察操作壓力、操作溫度、膜表面流體轉(zhuǎn)速、勻漿液的酸度(pH值)、 濃度和鹽度在超濾膜分離蛋白混合物的過程中對膜通量的影響。 3.1操作壓力對膜通量的影響
在勻漿液溫度為20°C，表面流體轉(zhuǎn)速控制在200r/min的條件下，在0.05 MPa至0.3 MPa 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)操作壓力，來考察操作壓力對紅地龍勻漿液膜通量的影響，實驗結(jié)果見圖l。
由圖1所示，紅地龍勻漿液的膜通量隨壓力的增大先增加后減小。在0.25MPa和0.28MPa 時，膜通量相同，且基本達到了峰值，原因可能在于操作壓力的方向垂直于膜表面，操作 壓力的增大一方面加快勻漿液中蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的傳質(zhì)速度，另一方面加快被截留大分 子在膜表面聚集的速度，從而加重濃差極化，降低透膜的速度，在0.25MPa之前，第一方面 占優(yōu)勢，膜通量呈上升趨勢，在(U5MPa時，兩方面呈均衡，膜通量達到峰值，在0.25MPa 之后，第二方面占優(yōu)勢，膜通量呈下降趨勢，考慮到動力消耗問題，最佳膜操作壓力為 0.25MPa。
3.2表面轉(zhuǎn)速對膜通量的影響
在勻槳液溫度為20°C，操作壓力為0.25MPa的條件下，在100r/min至400r/min范圍內(nèi)
調(diào)節(jié)表面轉(zhuǎn)速，研究表面轉(zhuǎn)速對紅地龍勻漿液膜通量的影響，實驗結(jié)果見圖2。
由圖2看出紅地龍勻漿液的膜通量隨膜表面轉(zhuǎn)速的增大呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢，峰值 出現(xiàn)在200r/min左右，其為最佳轉(zhuǎn)速。流動速率的影響可分兩方面,一是橫向流動速率，二是切向流動速率，其中橫向流動速率的變化對溶質(zhì)的傳質(zhì)系數(shù)影響不大，因而膜的通量也沒改 善；而切向流動速率加大會有效地增加傳質(zhì)系數(shù)，減慢濃差極化層的形成，減小膜阻，從而 使通量增加。對于該SCM超濾杯系統(tǒng)，通過轉(zhuǎn)子旋轉(zhuǎn)的帶動，紅地龍勻漿液在膜表面形成 一切向流動，從而提高了膜通量；但另一方面轉(zhuǎn)子旋轉(zhuǎn)速度達到一定程度，導(dǎo)致液體有一部 分不能與膜表面接觸，使膜的有效面積減小，所以存在這一最佳表面流速。 3.3操作溫度對膜通量的影響
隨紅地龍勻漿液溫度的升高，料液的粘度降低，加大了蛋白質(zhì)等大分子在溶液中的運動, 使其不易在膜表面吸附，在表面轉(zhuǎn)速控制在200r/min，操作壓力為0.25MPa的條件下，勻漿 液溫度在2(TC至5(TC范圍內(nèi)調(diào)節(jié)，來研究操作溫度對紅地龍勻漿液膜通量的影響，實驗結(jié)果 見圖3。由圖3看出紅地龍勻漿液的膜通量隨溫度的提高而顯著改善， 一直呈上升趨勢，但 溫度過高紅地龍蛋白活性成分會變性，影響藥效，因此，確定膜過濾的溫度為50。C。
3.4pH值對膜通量的的影響
勻漿液的酸度影響紅地龍中蛋白質(zhì)等大分子所帶的荷電值和電性，進而影響其在膜上的 吸附量，在一定的pH值條件下，吸附量是蛋白質(zhì)所帶的電荷與膜表面的電荷相互作用的結(jié) 果。在勻漿液溫度為5(TC，操作壓力為0.25MPa，表面轉(zhuǎn)速控制在200r/min的條件下，溶液 的pH在1至10范圍內(nèi)調(diào)節(jié)，研究勻漿液的pH對紅地龍勻漿液膜通量的影響，實驗結(jié)果如 圖4所示。由圖4可看到，在勻漿液的酸度調(diào)節(jié)的過程中，勻漿液的膜通量出現(xiàn)兩個峰值 pI^3和pH:6.7 (原勻漿液的酸度)；低谷出現(xiàn)在pH:5，在pH:5時，勻漿液的顏色開始 變淺，出現(xiàn)白色物質(zhì)，可能是有些蛋白質(zhì)已達到等電點，從而析出，勻槳液的混濁度增加。 在Pf^3時，勻槳液的顏色最淺，出現(xiàn)白色物質(zhì)最多，同時勻漿液的混濁度最大，隨著pH值 的進一步減小，出現(xiàn)白色物質(zhì)減少，勻漿液的混濁度降低。由于酸度過高或過低都會對蛋白 多肽類成分活性產(chǎn)生影響，綜合各方面，選擇PI^6.7做為過膜的勻槳液酸度。
3.5勻漿液濃度對膜通量的影響
用二次蒸餾水對勻漿液進行稀釋1倍、2倍、3倍和4倍，并以原勻漿液在稀釋后的液體 中所占的百分數(shù)為其濃度，則對應(yīng)稀釋后的勻漿液的濃度分別為50%、 33%、 25%和20%， 而未被稀釋的則為100%。在操作溫度為50'C，操作壓力為0.25MPa，表面轉(zhuǎn)速200r/min的 條件下，研究勻漿液的濃度對紅地龍勻漿液膜通量的影響，實驗結(jié)果如圖5所示。從圖5可 看出，膜通量隨紅地龍勻漿液的稀釋倍數(shù)的增加而逐漸提高，但增加的快慢不一樣，未稀釋 到稀釋一倍期間通量增加比較緩慢，稀釋1倍到稀釋3倍的過程膜通量穩(wěn)步增加，稀釋3倍 到稀釋4倍期間膜通量增加速度較快，考慮工作效率，確定紅地龍勻漿液的稀釋倍數(shù)為2倍， 即勻漿液的濃度為33%。
3.6離子濃度(鹽濃度)對膜通量的影響
離子強度(鹽濃度)的大小影響超濾過程中蛋白質(zhì)在膜上的通量及截留。 一般認為，鹽的加入主要有兩方面的作用(l)屏蔽膜表面的電荷，(2)屏蔽蛋白質(zhì)分子表面的電荷。然而，鹽的 加入并非是越多越好，當(dāng)鹽的濃度超過某一特定值以后，有可能屏蔽掉有利于蛋白質(zhì)分離的 有效電荷，反而引起膜通量的下降。原紅地龍勻漿液的鹽度在2(TC時為1.87ppt，向其中加 入一定量的NaCl，配制成NaCl濃度分別為0.001mol/L， 0.025mol/L和0.05mol/L的三種勻漿 液，在轉(zhuǎn)速為200r/min，操作壓力為0.25MPa，分別在操作溫度為20'C和50°C的條件下考察 鹽的含量對勻漿液膜通量的影響規(guī)律，實驗結(jié)果見圖6。從圖6可看出在同一溫度下，勻 漿液的膜通量隨NaCl含量的提高而略微降低，這表明NaCl的加入不能達到改善膜通量的目 的。同一鹽濃度下，20'C條件下的膜通量要高于50°C。因此，不需加入NaCl來調(diào)節(jié)勻漿液 中的鹽濃度。
通過以上膜分離操作條件的篩選實驗得出膜分離紅地龍的最佳操作條件為操作壓力為 0.25MPa，勻漿溫度為50°C，表面轉(zhuǎn)速為200r/min，勻漿液的酸度PH=6.7，勻漿液濃度為33.3 % (w:w)，不加NaCl。
實施例4聚偏氟乙烯膜孔徑的篩選和膜分離組分的纖溶酶活性的測定
1、 膜分離實驗
取100g紅地龍，加入300ml的二次蒸餾水，勻漿10min，在4。C下，以11000r/min離心 20min，取100ml離心后的紅地龍上清液，在勻漿上清液溫度為50'C、操作壓力為0.25 MPa、 表面轉(zhuǎn)速為200 r/min、勻漿液上清液的pH值為6.7的操作條件下，依次用孔徑為十萬、五萬、 一萬的超濾膜進行分級過濾，當(dāng)濾過液為80ml時，往截留液中加入10ml蒸餾水，繼續(xù)超濾， 至濾過液體積為100ml，分別得到十萬、五萬、 一萬孔徑超濾膜的截留液和濾過液，留待測 定其溶栓活性。
2、 纖溶酶活性的測定
將培養(yǎng)皿放在水平儀上調(diào)至水平，用1倍pH7.2的PBS緩沖液配置1%的瓊脂糖，取5mL 于65'C恒溫，另取等體積緩沖液5mL，在25'C恒溫箱中保溫，加入1/4支纖維蛋白原和10U 凝血酶，兩種溶液迅速混勻，趁熱倒入平板中，將氣泡趕至邊緣，室溫下凝固。用直徑6mm 的打孔器打孔，將待測樣品點在孔內(nèi)，37'C保溫5h。測量乳白色瓊脂糖上形成的透明圈互相 垂直的兩個直徑，以其乘積作為纖溶活性的大小指標。
3、 實驗結(jié)果
3.1尿激酶纖溶標準曲線的測定
分別用20U、 40U、 60U、 80U、 100U的尿激酶點樣，測定溶圈的兩個互相垂直的直徑， 相乘后作為溶圈面積。結(jié)果如表1所示表1尿激酶纖溶活性測定結(jié)果
尿激酶濃度(u)20406080100
溶圈面積(mm2)073.1102.01138.04142.78
以上述數(shù)據(jù)作圖，溶圈直徑的乘積和尿激酶的濃度成正相關(guān)，說明本方法靈敏可靠，能
通過比較溶圈直徑的乘積來判定纖溶作用的強弱。
3.2不同孔徑超濾膜分離紅地龍所得樣品的纖溶活性測定-
分別將不同孔徑的超濾膜分離的樣品點樣在纖維蛋白平板孔中，測定溶圈的兩個互相垂
直的直徑，相乘后作為溶圈面積，具體實驗結(jié)果如表2所示
表2紅地龍分離樣品的纖溶活性測定結(jié)果
原始10萬截10萬濾5萬截留5力濾過1萬截留1萬濾過
液留液過液液液液液
溶圈面積 (mm2)195.4146.4150.0256.0364936
從表2中可以看出，孔徑為IO萬的超濾膜對有效成分的截留效果差，孔徑為5萬的超濾 膜的截留液溶圈直徑最大，基本將具纖溶活性的成分全部截留，其濾過液再通過孔徑為1萬 的超濾膜后的截留液基本已無纖溶活性。
從以上實驗結(jié)果可知，采用孔徑為5萬的超濾膜分離紅地龍勻漿中的活性蛋白成分，具 有最佳的溶栓活性，溶栓效果較普通的紅地龍粗提取物高。
本發(fā)明提供的超濾膜分離紅地龍勻漿中的活性蛋白多肽類成分，可在常溫下進行，無需 添加其它酸、堿、鹽試劑，可操作性強、較傳統(tǒng)的分離純化方法分離效率更高、更方便。制 備得到的紅地龍蛋白濃度高，成分較清楚，并且具有很好的溶栓活性，有望開發(fā)成為新一代 的抗血栓制劑。
權(quán)利要求
1、一種紅地龍精制蛋白多肽制劑，其特征在于，它由以下方法制備得到①取紅地龍，加入3至5倍量的蒸餾水，勻漿10至30分鐘，在4℃下以11000至15000r/min離心20至30分鐘，取離心后的紅地龍上清液，備用；②取步驟①得到的紅地龍上清液100ml，在勻漿上清液溫度為30至50℃、操作壓力為0.25至0.5MPa、表面轉(zhuǎn)速為200至300r/min、勻漿液上清液的pH值為6至7的條件下，依次用孔徑為十萬、五萬、一萬的超濾膜進行分級過濾，當(dāng)濾過液為80ml時，往截留液中加入10ml蒸餾水，繼續(xù)超濾，至濾過液體積為100ml，分別得到十萬、五萬、一萬孔徑超濾膜的截留液；③取步驟②得到的五萬孔徑超濾膜截留液和藥學(xué)上可接受的載體制備得到紅地龍精制蛋白多肽制劑。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的紅地龍精制蛋白多肽制劑，其特征在于，步驟①加入3倍量的二次蒸餾水，勻漿10分鐘，在4'C下以11000 r/min離心20分鐘。
3、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的紅地龍精制蛋白多肽制劑，其特征在于，步驟②超濾膜過濾的操作條件為勻漿上清液溫度為50'C、操作壓力為0.25MPa、表面轉(zhuǎn)速為200 r/min、勻漿液上清液的pH值為6.7。
4、 一種制備權(quán)利要求l所述的紅地龍精制蛋白多肽制劑的方法，其特征在于包括以下步驟① 取紅地龍藥材，加入3至5倍量的蒸餾水，勻漿10至30分鐘，在4。C下，以11000至15000r/min離心20至30分鐘，取離心后的紅地龍上清液，備用；② 取步驟①得到的紅地龍上清液100ml,在勻漿上清液溫度為30至50°C、操作壓力為0.25至0.5MPa、表面轉(zhuǎn)速為200至300r/min、勻漿液上清液的pH值為6至7的條件下，依次用孔徑為十萬、五萬、 一萬的超濾膜進行分級過濾，當(dāng)濾過液為80ml時，往截留液中加入10ml蒸餾水，繼續(xù)超濾，至濾過液體積為100ml，分別得到十萬、五萬、 一萬孔徑超濾膜的截留液；③ 取步驟②得到的五萬孔徑超濾膜截留液和藥學(xué)上可接受的載體制備得到紅地龍精制蛋白多肽制劑。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的紅地龍精制蛋白多肽制劑的制備方法，其特征在于，步驟①中加入3倍量的二次蒸餾水，勻漿時間10分鐘，在4"C下以11000 r/min離心20分鐘。
6、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的紅地龍精制蛋白多肽制劑的制備方法，其特征在于，步驟②超濾膜過濾的操作條件為勻漿上清液溫度為50°C、操作壓力為0.25 MPa、表面轉(zhuǎn)速為200r/min、勻漿液上清液的pH值為6.7。
7、權(quán)利要求1所述的紅地龍精制蛋白多肽制劑在防治血栓疾病中應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種紅地龍精制蛋白多肽制劑及其制備方法和應(yīng)用，該制劑通過采用不同孔徑的超濾膜分離技術(shù)對紅地龍蛋白多肽類活性成分進行分離，其主要活性成分為分子量在十萬以下五萬以上的蛋白類成分，藥理實驗表明本發(fā)明提供的紅地龍精制蛋白多肽制劑是一種具有很好溶解纖維蛋白，能有效的預(yù)防和治療血栓、且無副作用的制劑。本發(fā)明提供的紅地龍精制蛋白多肽制劑超濾膜分離的制備方法，在膜分離過程中活性物質(zhì)不發(fā)生相變，分離系數(shù)較大，可在常溫下進行，無需添加其它酸、堿、鹽試劑，可操作性強、較傳統(tǒng)的分離純化方法分離效率更高。
文檔編號A61K35/64GK101590219SQ200910033500
公開日2009年12月2日 申請日期2009年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月15日
發(fā)明者瑛 林, 樊文玲, 詹秀琴, 郭立瑋 申請人:南京中醫(yī)藥大學(xué)