專利名稱：一種藥物組合物及其應用的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明屬于藥物組合物領域，特別涉及一種藥物組合物及其應用。
背景技術(shù)：
良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia, BPH)是老年男性常見的生理 病變，當病變引起排尿梗阻等一系列癥狀時稱為前列腺增生癥。國外1075例尸檢報告表 明在25 30歲時，10%的男性可在顯微鏡下見到早期的前列腺增生病變；隨著年齡的增 長，經(jīng)組織學診斷的前列腺增生的發(fā)生率也相應增加；至51 60歲，其發(fā)病率增加為75 % ； 至85歲時，約有90%的男性有組織學上的前列腺增生病變。由上可見，隨著我國人口老齡 化的加速，由老齡引起的前列腺增生的發(fā)病率不斷上升，良性前列腺增生癥也越來越成為 我國亟待解決的重要問題。良性前列腺增生的發(fā)病率很高，但其發(fā)病機理迄今尚未完全闡 明。前列腺增生可能是一組多病因的疾病，其發(fā)病機制也是錯綜復雜的。對BPH的治療可分為手術(shù)治療、藥物治療和非手術(shù)非藥物治療三大類，以往以手 術(shù)治療為主，藥物治療為輔。然而由于此類患者大多年事已高，相當部分患者可能有嚴重 的合并癥(如心、腦血管疾病等)，故有關(guān)治療措施必須是患者可耐受的、同時又是有效的。 而且手術(shù)治療和微創(chuàng)等非手術(shù)非藥物治療易受到血尿、尿路感染、疾病容易復發(fā)等諸多不 良后果困擾。近年來的研究表明，前列腺除分泌前列腺液參與精液的組成外，還能產(chǎn)生多 種免疫球蛋白，合成具有抗菌作用的含鋅多肽，而且前列腺還具有保護生殖系統(tǒng)免遭細菌 和其他病原微生物侵襲的局部免疫功能。因此，有人主張在可能的情況下前列腺應盡量予 以保留。因此，前列腺增生的治療目標不僅要緩解下尿道梗阻，還應將可能帶來的風險降 到最低，確實改善病人的生活質(zhì)量。因此，藥物治療作為較緩和的治療措施目前已成為人 們研究和關(guān)注的焦點。雖然迄今為止，藥物治愈前列腺增生尚很困難，但是藥物治療對于 緩解癥狀，延遲手術(shù)時間及減少急性尿縮留發(fā)生均有效果。而且，臨床上確有相當一部分 患者前列腺增生至一定程度后便保持穩(wěn)定，不再發(fā)展了。前列腺增生的藥物治療在治療前 列腺增生中正發(fā)揮越來越重要的作用，且非手術(shù)的藥物療法治療前列腺疾病正變得更有吸 引力。目前，臨床上用于治療前列腺增生的藥物主要有(1)只針對某一特定靶點的合成藥 物，如5 α -還原酶抑制劑、α 1受體抑制劑等。然而由于前列腺增生發(fā)病機理復雜，治療療 程較長，使單一靶點藥物在治療過程中的療效大受影響，停藥后易反彈，且服用中出現(xiàn)的陽 痿、頭痛等副作用令人關(guān)注；從而限制這些藥物在前列腺增生治療中的應用；(2)天然產(chǎn)物 制劑，特別是花粉制劑對前列腺增生和前列腺增生引起的下尿路癥狀均有較好的療效，且 作用溫和、毒副作用小、適合長期服用，越來越受到患者的歡迎。前列腺是雄激素依賴性器官，它的生長、結(jié)構(gòu)的維持及功能的完整都需要一定量 的雄性激素來維持。然而，當雄激素代謝異常時可導致前列腺基質(zhì)和上皮細胞過度生長，繼 而引發(fā)排尿困難。由睪丸間質(zhì)分泌的睪酮(testosterone，!1)是一類重要的雄激素，它進入 前列腺細胞后有兩種代謝途徑，首先在5 α-還原酶(5 α-reductase)的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)槎?睪酮(dihydrotestosteron^DHT)；其次是通過芳香化作用轉(zhuǎn)變?yōu)榇贫?。DHT活性較T強2-3倍，與雄激素受體的結(jié)合量是T結(jié)合量的4 5倍，被認為是人體內(nèi)作用最強的雄激素。前列腺組織和血清中的DHT水平過高即可引起前列腺增生等疾病。DHT能與特殊 的雄激素受體結(jié)合成復合物，引發(fā)一系列級聯(lián)反應形成信號因子從而調(diào)節(jié)細胞生長。在前 列腺組織內(nèi)，DHT/雄激素受體復合物能夠結(jié)合特異性抗原反應元件，從而產(chǎn)生前列腺特異 性抗原和調(diào)節(jié)蛋白，調(diào)節(jié)細胞的生長和功能；還可通過增加細胞數(shù)量和減少凋亡導致前列 腺的病理改變。DHT不僅可以對前列腺基質(zhì)有直接的局部刺激，同時還能刺激產(chǎn)生生長因 子，產(chǎn)生的生長因子作用上皮細胞，刺激上皮細胞增殖。因此，催化T轉(zhuǎn)變?yōu)镈HT的5α-還 原酶成為治療BPH藥物的關(guān)鍵靶標。尋找新型、高效的5 α-還原酶抑制劑(5ARIs)也成為 目前研究的熱點。5 α-還原酶是膜結(jié)合型、NADPH(還原型輔酶II)依賴酶，位于細胞微粒體內(nèi)。它 存在兩種亞型，即I型5 α -還原酶(SRD5A1)和II型5 α -還原酶(SRD5A2)，每一型都有單 獨的基因編碼。通過原位雜交及連鎖分析，發(fā)現(xiàn)SRD5A1定位于染色體5pl5，SRD5A2定位在 2ρ23，二者都含有5個外顯子和4個內(nèi)含子。I型酶主要分布在肝臟、皮膚等很多組織中， 前列腺組織中也有少許分布，II型酶主要分布在前列腺和其他生殖組織中。二者對NADP H 的表觀Km值相似，但II型酶對睪酮的親和力(Km = 4. 50nmol/L)大于I型酶的親和力(Km = 1.5ym0l/L)。其活性及基因表達受組織ρΗ、激素等多種因素影響。在增生的前列腺組 織中，兩種同功酶的活性和基因表達都高于正常組織。5ARIs的作用是減少前列腺內(nèi)DHT的生成，縮小前列腺體積，改善BPH的靜力學癥 狀。目前市場已有數(shù)種5ARIs用于治療ΒΡΗ，臨床效果得到了肯定。具有代表性的是II型 5ARI非那雄胺(finasteride)和I，II混合型5ARI度他雄胺(dutasteride)。它們不僅 可以降低血清內(nèi)二氫睪酮(DHT)和前列腺特異性抗原(PSA)，縮小前列腺體積，還可有效抑 制前列腺增生過程中的血管形成，使微血管減少，改善血尿癥狀。遺憾的是這兩個藥物仍有 許多嚴重的不良反應。Serono公司的AS-601811，Xenna公司的XNA-3，Pharmacia公司的 PNU2157706、和禮萊公司的伊唑甾胺(izonsteride)都是開發(fā)中的用于治療BPH的5 α -還 原酶抑制劑。此外，目前已從天然產(chǎn)物和化學合成的樣品中發(fā)現(xiàn)多個具有5 α-還原酶抑制 活性化合物，有望將其開發(fā)成新一代的高效、低毒的5 α-還原酶抑制劑。動物實驗和臨床研究均表明，雌激素在前列腺增生的發(fā)生、發(fā)展過程中均扮演著 非常重要的角色。隨著年齡的增加，男性體內(nèi)的雌激素較穩(wěn)定或稍有增加，與青年男性相 比，老年男性血漿及前列腺組織內(nèi)的雌/雄激素比例升高。而這種性激素平衡的改變可能 誘導前列腺基質(zhì)活性從而引ΒΡΗ。有研究顯示，前列腺基質(zhì)增生中結(jié)合狀態(tài)的雌性激素能夠 激活細胞合成和分泌細胞外基質(zhì)蛋白，在細胞周圍形成一層致密的纖維結(jié)締組織，進而參 與前列腺增生的發(fā)生發(fā)展。在最初的間質(zhì)增生中，雌性激素的作用是主要的；在前列腺增生 的過程中，雌雄性激素具有協(xié)同作用，因而有人稱雌性激素是前列腺基質(zhì)生長的刺激劑。鑒 于雌激素在BPH中的重要作用，可使用抑制雌激素合成的方法，如使用芳香化酶抑制劑治 療前列腺增生。男性體內(nèi)的雌激素主要是由雄激素前體轉(zhuǎn)化而來，芳香化酶Ρ450是這一轉(zhuǎn) 變過程的關(guān)鍵酶和限速酶。它是以NADPH為輔酶、細胞色素Ρ450為介質(zhì)的混合功能氧化酶。 理論上，芳香化酶抑制劑具有治療良性前列腺增生等一切激素依賴性疾病的潛在效果。并 且目前已有一些使用芳香化酶抑制劑治療BPH的實驗報道一種較弱的芳香化酶抑制劑睪 內(nèi)酯的治療結(jié)果顯示，50%的BPH患者癥狀改善，可自行排尿、前列腺體積減小30%，殘余
10尿量明顯減少。Michaud報道用一種獨特的新型芳香化酶抑制劑TZA-2237進行動物(犬) 實驗，發(fā)現(xiàn)TZA-2237能夠有效抑制雄激素和雌激素，可導致犬前列腺的基質(zhì)細胞萎縮。但 關(guān)于用芳香化酶治療BPH的臨床報道還不多，其療效也需進一步驗證。隨著臨床對雌激素 在BPH中作用的逐漸認識，開發(fā)新的芳香酶抑制劑治療BPH可能是下階段藥物治療的方向之一。前列腺增生引起的病理改變基本原因是造成膀胱出口部梗阻，以致引起膀胱功能 損害甚至腎功能損害。因此，前列腺增生的治療原則首先是盡快減輕，甚至解除梗阻，保護 膀胱逼尿肌的功能，保護腎功能。α「AR在前列腺組織上的分布和功能效應與前列腺增生 的動力性梗阻密切相關(guān)，Q1腎上腺素受體拮抗劑(adrenergic antagonists, α rARA) 能夠減輕括約肌緊張程度和前列腺增生程度從而緩解癥狀，是目前公認的治療BPH及由其 引起的下尿路癥狀(LUTS)的首選藥物。炎癥與良性前列腺增生的密切關(guān)系已經(jīng)有較多報道。Kohnen等人在162例前列腺 增生患者的手術(shù)中發(fā)現(xiàn)98%的病人存在炎癥損傷。Blumenfeld等人在1992年發(fā)現(xiàn)95% 的前列腺增生經(jīng)尿道前列腺電切術(shù)(TURP)標本和100%的全切標本里有淋巴細胞的浸潤。 Nickel等最近的研究也發(fā)現(xiàn)前列腺切除術(shù)的標本中，95%的外周帶標本切片和87. 5%的 移行帶標本切片均有多灶性慢性炎癥區(qū)域。而此類患者多數(shù)情況下在臨床上并無前列腺炎 的癥狀，其內(nèi)的炎癥細胞浸潤僅是在病理檢查中的附帶發(fā)現(xiàn)。由于炎癥與前列腺增生的密切關(guān)系，炎癥又被稱為前列腺增生治療中的除DHT和 α受體外的“第三組份”。為了進一步說明炎癥與前列腺增生的關(guān)系，加拿大的Mckel教 授進行了一項為期4年，隨機雙盲照臨床實驗，以前列腺增生的LUTS癥狀的IPSS評分為評 價指標，研究炎癥和前列腺增生的的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)中度的和重度的慢性炎癥與前列腺的 LUTS癥狀有密切相關(guān)(相關(guān)系數(shù)分別為0. 057和0. 036，P < 0. 001)。同時也應該看到，在前列腺增生疾病中，雄性激素、雌性激素和炎癥三方面的致病 因素不是相互獨立的，而是相互聯(lián)系的。睪酮在5 α-還原酶的作用下，可以轉(zhuǎn)化為雄激素 DHT,也可以在芳香化酶的作用下轉(zhuǎn)化為雌激素，單獨抑制雌激素可能會導致雄激素DHT升 高，單獨抑制DHT，也可能會導致雌激素升高；最近的研究又表明雌激素和炎癥也具有相互 關(guān)系，前列腺基質(zhì)細胞群在前列腺上皮細胞BPH-I分泌的PGE-2的刺激下，可以表達芳香化 酶，芳香化酶可以將體內(nèi)的睪酮轉(zhuǎn)變?yōu)榇萍に兀沂玖搜装Y因子PGE-2與雌激素的關(guān)系。從上可以推測前列腺增生是一種至少涉及雄激素、雌激素和炎癥三方面的疾病， 且可能是一種多病因組成的一組癥候群，對于前列腺增生的治療也應該從這些方面著手。 前列腺增生是一組多病因疾病而且需要長期服藥，若只針對某一特定靶點的α 1-受體阻 斷劑、5 α-還原酶抑制劑等合成藥物在長期服用中出現(xiàn)了一定的副作用，如低血壓，陽痿、 性功能障礙、頭痛等，且治療效果不夠理想，從而限制這些藥物在前列腺增生治療中的應 用。西藥的化學實體多為單一化合物，有特定的作用靶點，對抗是其主要作用機制，將導致 副作用，產(chǎn)生藥源性的疾病。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供了一種具有較顯著的抑制芳香化酶、5 α還原 酶、環(huán)氧合酶_2和α「腎上腺素受體活性，抑制前列腺特異性抗原PSA分泌，可消除炎癥，防治前列腺增生、前列腺炎或前列腺癌，且毒副作用小的藥物組合物及其應用。本發(fā)明的藥物組合物，其包含a、b和c中的兩類或三類；所述的a為如式I所示的長鏈脂肪酸類化合物或含其的植物提取物，其中，A為甲 基或1，2- 二羥基丁基，B為羥基、2，3- 二羥基丙氧基、甲氧基、乙氧基或-NH(CH2) 20H, H1和 H2各自獨立的為0 20的整數(shù)。 式I所述的b為如式II所示的黃酮類化合物或含其的植物提取物，其中，禮、&、1 3、1 4、 R5、R6和R7各自獨立的為氫、羥基、Ci C5的烷氧基、氧葡萄糖基、氧鼠李糖基、氧果糖基、或 者由葡萄糖、鼠李糖或果糖通過苷鍵結(jié)合而成的氧二糖基或氧三糖基。 所述的c為生物堿類化合物或含其的植物提取物；所述的生物堿類化合物為如式 III所示的N1，N5，Niq-三-(E)-香豆酰精脒、如式III所示的N1，N5，Niq-三-(Z)-香豆酰精 脒、如式IV所示的l-0-(i3-D-葡萄糖)-(2S，3S，4R)-2N-[(2' R)-2'-羥基二十四碳烯 酸]-十八烯_3，4- 二醇、如式V所示的腐胺和如式VI所示的吲哚-3-醋酸中的一種或多 種。式VI術(shù)語“烷氧基”表示通過氧橋連接的具有所述碳原子數(shù)目的環(huán)狀或者非環(huán)狀烷基。本發(fā)明中，所述的植物提取物為植物花粉提取物，所述的花粉較佳的為油菜花粉、 玉米花粉或向日葵花粉等。本發(fā)明中，所述的藥物組合物包含兩類化合物時當兩類化合物包含a和c時，a的含量較佳的為1 99%，更佳的為20 80%;c的含量較佳的為1 99%，更佳的為20 80%。當兩類化合物包含b和c時，b的含量較佳的為1 99%，更佳的為20 80%，c 的含量較佳的為1 99%，更佳的為20 80%。當兩類化合物包含a和b時，a的含量較佳的為1 99%，更佳的為20 80%，b 的含量較佳的為1 99%，更佳的為20 80%。本發(fā)明中，所述的藥物組合物包含三類化合物時所述的a的含量較佳的為1 60%，更佳的為10 60%，最佳的為40% ；所述的b的含量較佳的為1 60%，更佳的為 10 60%，最佳的為40% ；所述的c的含量較佳的為1 40%，更佳的為1 30%，最佳 的為20% ；百分比為質(zhì)量百分比。本發(fā)明中，當所述的藥物組合物包含為a和b時，具有較佳的藥理效果。本發(fā)明中，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，如式I所示的長鏈脂肪酸類化合物中，當為下述化合物 時，具有更佳的藥理效果。(1)式I中，所述的A為甲基，Ii1為3，Ii2為7，B為羥基時，即所述的式I的化合物 為如式1所示的亞麻酸。 式1(2)式I中，所述的A為甲基，Ii1為3，Ii2為7，B為-NH(CH2)2OH時，即所述的式I 的化合物為如式2所示的N-(2-羥乙基)，9，12，15-十八碳三烯酰胺。 式2(3)式I中，所述的A為甲基，Ii1為3，n2為7，B為2，3_ 二羥基丙氧基時，即所述 的式I的化合物為如式3所示的亞麻酸甘油酯。 式3(4)式I中，所述的A為甲基，Ii1為0，n2為14，B為羥基時，即所述的式I的化合 物為如式4所示的棕櫚酸。 式 4(5)式I中，所述的A為1，2- 二羥基丁基，H1為2，n2為7，B為羥基時，即所述的 式I的化合物為如式5所示的15，16- 二羥基亞油酸。其中，15和16號碳原子為R或S構(gòu) 型。 式 5(6)式I中，所述的A為甲基，Ii1為3，Ii2為7，B為乙氧基時，即所述的式I的化合
物為如式6所示的亞麻酸乙酯。 式6(7)式I中，所述的A為甲基，Ii1為0，Ii2為14，B為2，3_ 二羥基丙氧基時，即所述
的式I的化合物為如式7所示的棕櫚酸甘油酯。 式 7(8)式I中，所述的A為甲基，Ii1為0，Ii2為14，B為24-亞甲基膽甾醇基，即所述 的式I的化合物為如式8所示的24-亞甲基膽留醇棕櫚酸酯。 式8(9)式I中，所述的A為甲基，Ii1為3，Ii2為7，B為1，3-二棕櫚酸-2丙氧基，即所 述的式I的化合物為如式9所示的1，3- 二棕櫚酸-2-亞麻酸甘油三酯。
式 9(10)式I中，所述的A為甲基，Ii1為0，n2為14，B為1，3_ 二亞麻酸_2_丙氧基， 即所述的式I的化合物為如式10所示的1，3_ 二亞麻酸-2-棕櫚酸甘油三酯。 式 10(11)式I中，所述的A為甲基，Ii1為3，n2為7，B為24-亞甲基膽甾醇基，即所述 的式I的化合物為如式11所示的24-亞甲基膽留醇亞麻酸酯。 式11(12)式I中，所述的A為甲基，Ii1為3，n2為7，B為環(huán)烯桉醇基，即所述的式I的 化合物為如式12所示的環(huán)烯桉醇亞麻酸酯。 式12(13)式I中，所述的A為丁基，Ii1為2，n2為7，B為花粉烷甾醇基，即所述的式I 的化合物為如式13所示的花粉烷留醇亞油酸酯。 式13(14)式I中，所述的A為甲基，Ii1為0，Ii2為14，B為2_羥基3_棕櫚酸基丙氧基， 即所述的式I的化合物為如式14所示的1，3_ 二棕櫚酸甘油二酯。 式14(15)式I中，所述的A為甲基，Ii1為0，n2為14，B為2_十七烷酸基3_羥基丙氧
基，即所述的式I的化合物為如式15所示的1-棕櫚酸-2-十七烷酸甘油二酯。
式 15
本發(fā)明中，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，如式II所示的黃酮類化合物為下述化合物時，具有更佳 的藥理效果。(1)式II中，所述的RrRJPR3均為羥基，R4、R5、R6和R7均為氫時，即所述的式II 的化合物為如式16所示的山奈酚。 式 16(2)式II中，所述的R1,R2,R3和R6均為羥基，R4、R5和R7均為氫時，即所述的式II 的化合物為如式17所示的槲皮素。 式17(3)式II中，所述的禮、R2和R3均為羥基，R4> R5和R7均為氫，R6為甲氧基時，即 所述的式II的化合物為如式18所示的異鼠李素。 式 18(4)式II中，所述的R1,R2,R3和R4均為羥基，R5、R6和R7均為氫時，即所述的式II 的化合物為如式19所示的草棉黃素。 式 19(5)式II中，所述的R1和R2為羥基,R3為0_β -D葡萄糖(6 — 1)-α -L-鼠李糖， R4、R5、R6和R7均為氧，即所述的式II的化合物為如式20所示的山奈酚7-0-(6’ -鼠李糖
基)葡萄糖苷。 式 20本發(fā)明中述及的各原料或試劑均市售可得。其中，如式I所示的長鏈脂肪酸類化 合物，如式II所示的黃酮類化合物，以及生物堿類化合物還可以從植物花粉中提取。提取 方法可參照專利文獻一種油菜破壁花粉提取物及其提純方法和應用，楊義芳，李坤，李永 輝，[P]中國專利200710043856. 7,2007-07-17 ；—種破壁花粉的提取物及其提取方法和 應用，楊義芳，李永輝，李坤，[P]中國專禾U =200710043270. 0,2007-06-29 ；或者，一種破壁 花粉的提取物及其提取方法和應用，[P]中國專利=200710043271. 5,2007-06-29中的提取 方法提取。本發(fā)明藥物組合物的制備方法可以是將現(xiàn)有的市售可得的上述部分化合物和從 植物中，如花粉中提取的含上述化合物的提取物，按配比，采用本領域的常規(guī)方法混合，即可。本發(fā)明的藥物組合物具有較顯著的抑制芳香化酶、α「腎上腺素受體、環(huán)氧合 酶-2和5α還原酶的活性，并且可抑制前列腺特異性抗原PSA分泌；因此，本發(fā)明進一步涉 及本發(fā)明的藥物組合物在制備芳香化酶抑制劑、5 α還原酶抑制劑、α r腎上腺素受體拮抗 劑、環(huán)氧合酶_2抑制劑、或者前列腺特異性抗原PSA分泌抑制劑中的應用。本發(fā)明的藥物組合物還可消除炎癥，尤其是特異性抑制環(huán)氧合酶_2，以及治療炎 性腫脹；因此，本發(fā)明還涉及本發(fā)明的藥物組合物在制備消炎藥物中的應用。本發(fā)明的藥物組合物還可用于治療前列腺疾病，能夠防治前列腺增生、前列腺炎 或前列腺癌，且毒副作用小。因此，本發(fā)明進一步涉及本發(fā)明的藥物組合物在制備抗前列腺 增生、前列腺炎或前列腺癌的藥物中的應用。
根據(jù)需要，本發(fā)明的藥物組合物還可包括藥學上可接受的載體。所述的藥學上可 接受的載體是指藥學領域常規(guī)的藥物載體，其中，稀釋劑如淀粉、糖粉、糊精、微晶纖維素、 甘露醇、乳糖和大豆油等；粘合劑如聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基纖維素等；崩解劑如羧甲基 纖維素鈉或低取代羥丙纖維素等；潤滑劑如硬脂酸鎂或滑石粉等；穩(wěn)定劑如羧甲基纖維素 鈉或環(huán)糊精等；防腐劑如對羥基苯甲酸乙酯或苯甲酸鈉等。另外，還可以在該藥物組合物中 加入其他輔助劑如香味劑和/或甜味劑如蔗糖、果糖和天冬甜素等。該藥物組合物的活性 成分是治療有效量的任一種上述的本發(fā)明的含有如式I所示的長鏈脂肪酸類化合物，如式 II所示的黃酮類化合物，以及生物堿類化合物中的兩種或三種的藥物組合物。該藥物組合 物可采用醫(yī)學領域常規(guī)的方法，將所述的活性成分與藥學上可接受的載體制成各種劑型。 當用于口服時，可將其制備成常規(guī)的固體制劑如片劑、膠囊、軟膠囊、液體制劑、顆粒劑、煎 膏劑、丸劑、滴丸劑、懸浮劑、分散劑、糖漿劑或栓劑等；用于注射時，可將其制備成注射液。 在各種制劑中，活性成分的重量含量為ι 100%，優(yōu)選的重量含量為50 100%。本發(fā)明的各藥物組合物可以按劑型通過靜脈注射、皮下注射或口服的形式施加于 需要這種治療的患者。施加給需要治療的患者的一般的劑量為0. 0001 0. 05g/公斤體重 /天，具體可根據(jù)患者的年齡、病情等進行變化。本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。本發(fā)明的積極進步效果在于本發(fā)明的藥物組合物包含如式I所示的長鏈脂肪酸 類化合物或其植物提取物，如式II所示的黃酮類化合物或其植物提取物，以及生物堿類化 合物或其植物提取物中的兩類或三類，利用它們之間的協(xié)同作用，具有較顯著的抑制芳香 化酶、α r腎上腺素受體、環(huán)氧合酶-2和5 α還原酶的活性，抑制前列腺特異性抗原PSA分 泌；可消除炎癥，尤其是特異性抑制環(huán)氧合酶-2，還可防治前列腺增生、前列腺炎或前列腺 癌，且在耐受量以下無藥物毒性，其藥理活性明顯優(yōu)于現(xiàn)有的任一種僅包含其中一類化合 物的藥物組合物的活性。本發(fā)明的藥物組合物在治療前列腺增生疾病中，不同的組分、化學 物質(zhì)及其組合對不同的組織細胞和靶點作用產(chǎn)生不同的生物學效應，揭示了復雜體系多成 分、多組分、多環(huán)節(jié)、多靶點的物質(zhì)基礎及其作用機理。由于這些不同組分的化合物發(fā)揮協(xié) 同作用和互補作用，將這些不通化學類別的化合物進行組合，制成組合物藥物，治療前列腺 疾病的藥效顯著增強。
具體實施例方式下面通過實施例的方式進一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實 施例范圍之中。下述涉及溶液濃度的百分比除特殊說明外均為質(zhì)量百分比。實施例1 31將分別購自于sigma公司或從油菜花粉中分離得到的亞麻酸、棕櫚酸、Ν-(2_羥 乙基)，9，12，15-十八碳三烯酰胺、亞麻酸甘油酯、15，16- 二羥基亞油酸、亞麻酸乙酯、棕 櫚酸甘油酯、24-亞甲基膽留醇棕櫚酸酯、1，3- 二棕櫚酸-2-亞麻酸甘油三酯、1，3- 二亞麻 酸-2-棕櫚酸甘油三酯、24-亞甲基膽留醇亞麻酸酯、環(huán)烯桉醇亞麻酸酯、花粉烷留醇亞油 酸酯、1，3_ 二棕櫚酸甘油二酯、1-棕櫚酸-2-十七烷酸甘油二酯、山奈酚、槲皮素、異鼠李 素、草棉黃素、山奈酚7-0-(6’ -鼠李糖基)葡萄糖苷、NSN5^iq-三-(E)-香豆酰精脒、Ν1，
20N5，Nltl-三-(Z)-香豆酰精脒、1-0-(0-0-葡萄糖)-(25，35，41 )-2^[(2' R)_2'-羥基 二十四碳烯酸]“十八烯_3，4- 二醇、腐胺和吲哚-3-醋酸按表1中所述的組分及含量混合 即得本發(fā)明的藥物組合物。其中，植物提取物的制備將市售的酶發(fā)酵油菜破壁蜂花粉(安徽省宣城市百康蜂業(yè)生產(chǎn))60°C減壓干燥 24小時，然后將干燥后的破壁花粉在40°C，萃取釜壓力40MPa，分離釜I溫度35°C、壓力 12MPa，分離釜II溫度25°C、壓力5MPa，以花粉重量8%重的濃度為95V/V%乙醇為夾帶劑 進行超臨界二氧化碳(45L/小時的循環(huán)用量)萃取2.0小時，得到超臨界萃取部分，收集超 臨界萃取物。將獲得的超臨界萃取物蒸至無醇味，取裝柱量40% V/V(20 60% V/V的裝柱量 均可)的大孔樹脂與萃取物一起攪拌均勻，使其充分吸附，將拌樣后的大孔樹脂裝入大孔 樹脂柱頂端，其中大孔樹脂選用極性大孔樹脂DA201(生產(chǎn)廠商天津市海光化工有限公 司)，用50% (V/V)的乙醇洗脫，收集洗脫液，干燥，即得到脂肪酸類化合物的植物提取物。將超臨界二氧化碳提取后的殘渣部分，用V/V為85% (濃度為V/V的75 100% 均可)的乙醇提取，得到黃酮類化合物的植物提取物。將超臨界二氧化碳提取后的殘渣部分，再用V/V為15% (濃度為V/V的1 30% 均可)的乙醇提取，得到生物堿類化合物的植物提取物。表1.實施例1 31的藥物組合物的組分及含量
21 效果實施例1芳香化酶抑制試驗芳香化酶的提取胎盤得到后立刻放在冰上，除去絨毛膜和大血管，用0. OlM的 PBS溶液(內(nèi)含1 %的KCl)清洗后用剪刀剪碎，再用0. 0IM的PBS (含0. 24M的蔗糖和0. 5 μ M 的雄烯二酮)進行勻漿。勻漿液先900g離心60min，再將上清液離心10，OOOg離心60min 以沉淀線粒體成分。得到的上清液繼續(xù)離心125，OOOg 60min即可得到胎盤微粒體部分。沉 淀用含0. ImM的EDTA和0. 5 μ M的雄烯二酮的PBS重懸浮，懸浮的蛋白用以0. OlM的PBS 為溶劑的0. 1 %的ΝΡ-40溶解至蛋白終濃度為2 3g/L。(注所有步驟均在0 4°C即冰 浴上進行。雄烯二酮的存在利于芳香化酶的穩(wěn)定)。芳香化酶反應體系的建立反應緩沖液為磷酸鹽緩沖液(67mM，pH 7. 4，內(nèi)含20% 甘油，0. 5mM的DTT，0. 25M的蔗糖)。事先保存在無水乙醇內(nèi)的[1 β _3Η]雄烯二酮(25. 3Ci/ mM)，反應時用緩沖液稀釋。芳香化酶胎盤微粒體用上述緩沖液稀釋定容至0. lg/L。225 μ L 反應體系包括胎盤微粒體2. 5 μ g ； [1 β -3Η]雄烯二酮50nmol/L ；黃體酮10 μ mol/L ；溶 解在磷酸鹽緩沖液(67mM，pH 7.4)中的0. 的牛血清蛋白；一定量的溶解在DMSO或水
24中的樣品。將上述物質(zhì)用緩沖液補齊至200 μ L后放入37°C水浴中預熱lOmin，再加入 25μ L3mmoI/L的NADPH，反應開始進行，37°C下15min后用50 μ L 20%三氯乙酸終止反應。芳香化酶活性檢測反應終止后加入400 μ L 5% dextran coated charcoal (含 5%葡聚糖T70和5%活性碳末)，溶液充分混合后在IOOOg下離心5min除去未反應得物質(zhì)。 上清液中的[3H2O]作為反應產(chǎn)物用多功能液閃儀計數(shù)。樣品對芳香化酶的抑制活性根據(jù)加 樣品與不加樣品放射活度的比來衡量。抑制率按下式計算Ia= (Ao-As)/Ao X 100%Ia代表芳香化酶的抑制率，Ao代表不加樣品測得的放射活度(dpm)，As代表加樣 品測得的放射活度(dpm)。表2樣品的芳香化酶抑制活性測試結(jié)果 注樣品濃度均為100 μ g/mL ；*樣品濃度75 μ g/mL ；**樣品濃度為1 μ g/mL ；藥物 組合物*為將油菜花粉所得的三類成分按得率比例的組合物。效果實施例25 α還原酶的抑制作用試驗5α還原酶的提取取體重250g以上的雄性SD大鼠，脫臼處死后取肝臟，剝離膽 管后置培養(yǎng)皿中，加冷的約3倍體積的緩沖液(medium A)，將組織剪碎后移至勻漿器中勻 漿。勻漿液先在10，000g，4°C下離心lOmin，離心2次。上清液繼續(xù)在105，000g，4°C下超速 離心lh。得到的微粒體加medium A中懸后用注射器過濾分裝到離心管內(nèi)。得到的粗酶液 放-80°C冰箱保存，備用。注以上操作除離心外均在冰上進行。樣品5 α還原酶的抑制活性的測定3mL的5 α -還原酶反應體系包括5 α-還原 酶液(含Img蛋白質(zhì))、終濃度為150 μ M的睪酮、167 μ M的NADPH、一定量的溶解在DMSO中 的樣品PN、MediumA。當向預熱的體系中加入酶液時反應開始進行，37°C水浴中孵育IOmin 后加IOOyL 3M的NaOH終止反應。再加入IOOmM溶解在正己烷中的膽固醇醋酸酯作為 GC-MS檢測的內(nèi)標。用40mL乙醚萃取，分出有機相并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，蒸干物用IOOyL乙酸乙酯 定容于內(nèi)插管中。用GC-MS檢測生成的二氫睪酮的量。氣相色譜質(zhì)譜(GC-MS)檢測的條件 為HP-5MS色譜柱(30m X 0. 25mm,固定液厚0. 25 μ m)。質(zhì)譜電子轟擊能量為70eV。初始 柱溫為150°C，保持3min，分流比為30 1，每分鐘升溫30°C，最終溫度300°C。載氣氦氣的 流速為1. OmL/min。進樣器溫度為310°C。花粉提取物PN的抑制率根據(jù)下式計算1a = (Ao-As)/Ao X 100 %Ia代表抑制劑的抑制率，Ao代表酶反應體系中不加樣品PN時二氫睪酮與內(nèi)標的 總離子流色譜峰面積之比，As代表有樣品PN時二氫睪酮與內(nèi)標的總離子流色譜峰面積之 比。表3樣品的5 α還原酶抑制活性測試結(jié)果
28 注樣品濃度均為100 μ g/mL ；*樣品濃度75 μ g/mL ；藥物組合物*為將油菜花粉所得的三類成分按得率比例的組合物。效果實施例3 α r受體拮抗實驗實驗方法取SD大鼠，體重220 280g，頸動脈放血致死，沿下腹正中打開腹腔， 暴露恥骨聯(lián)合，從正中剪開恥骨聯(lián)合并用力使之分開，在直腸末端處找到肛尾肌，分離除去 肛尾肌周圍的結(jié)締組織，分別于兩端穿線結(jié)扎(標本長約6 8mm)，然后剪下標本，置入通 以 95% O2,5% CO2 的 Krebs 營養(yǎng)液中[Krebs 營養(yǎng)液成分(mmol/L) =NaCl 118. 4,KCl 4. 7， CaCl22. 52，MgSO4L 2，KH2P041. 2，NaHC0325，Glucose 11. 1]。將標本固定于離體器官灌流系 統(tǒng)中，浴槽容積為20ml，通以95% O2,5% CO2的混合氧，浴槽溫度37°C，營養(yǎng)液pH約為7. 4。 靜息前負荷0. 5g，試驗前標本平衡1小時，期間更換槽內(nèi)液4 6次?；€穩(wěn)定后，開始試 驗。開始按照新福林20ml浴槽累積量效反應曲線法加藥作對照曲線，每加一個新福林劑 量，待至最大反應出現(xiàn)，再加下一個劑量。加完所有劑量后，在收縮達到最大反應后，沖洗標 本，每隔5 IOmin—次，使標本舒張至基線。然后，再以同樣方法作第二條對照曲線。第 二條對照曲線沖洗至基線后，可在加入上述受試化合物之相應濃度(由預試驗確定)，從低 濃度做起，并且一個標本只用一個化合物，20min后，重復做新福林的量效反應曲線，觀察與 對照曲線的變化情況。α ！受體拮抗劑的效價強度用PA2表示。表4樣品的α工腎上腺素受體拮抗活性
羥基二十四碳烯酸]-十八烯 -3,4-二醇(1:2:2)亞麻酸槲皮素I-CKp-D- 葡萄 糖 K2S，3S,4R)-2N-[(2'R)-2'-羥基二十四碳烯酸]-十八烯 -3,4-二醇(1:2:2)8.382士 0.076亞麻酸異鼠李素1-0-(β- - 葡萄 IS)-(2S,3S,4R)-2N-[(2'R)-2'-羥基二十四碳烯酸]-十八烯 -3,4-二醇(1:2:2)8.532±0.165亞麻酸草棉黃素I-CKP-D- 葡萄 糖)-(2S,3S,4R)-2N-[(2'R)-2'-羥基二十四碳烯酸]-十八烯 -3,4-二醇(1:1:1)8.082士0.252隊(2-輕乙基),9,12,15-十八碳 三烯酰胺山奈酚l-0-(p-D- 葡萄 H)-(2S,3S,4R)-2N-[(2'R)-2'- 羥基二十四碳烯酸]-十八烯 -3，4-二醇(1:1:2)7.805±0.253亞麻酸甘油酯山奈酚 I-O-OD-葡萄 糖)-(2S,3S，4R)-2N-[(2'R)-2'-羥基二十四碳烯酸]-十八烯 -3，4-二醇(1:2:1)8.674士 0.421棕櫚酸山奈酚I-CMP-D- 葡萄 糖 H2S，3S,4R)-2N-[(2'R)-2'-羥基二十四碳烯酸]-十八烯 -3,4-二醇(1:1:2)8.012 士 0.21615，16-二羥基亞油酸山奈 酚I-CHP-D-葡萄 糖)-(2S,3S,4R)-2N-[(2'R)-2'-羥基二十四碳烯酸]-十八烯 -3,4-二醇 (2:1:1)8.802士 0.09415，16-二羥基亞油酸山奈 酚吲哚-3-醋酸(1:1:2)8.281 士 0.07215,16-二羥基亞油酸槲皮 素η引噪-3-醋酸(1:2:1)8.167土 0.21615,16-二羥基亞油酸異鼠李 素吲哚-3-醋酸(1:1:2)8.143 土 注樣品濃度均為100 μ g/mL ；*樣品濃度75 μ g/mL ；藥物組合物*為將油菜花粉所得的三類成分按得率比例的組合物。效果實施例4抗炎活性測試
實驗方法10% DMEM培養(yǎng)液的配置取Gibco高糖DMEM培養(yǎng)基一份，加1. 5g碳酸氫鈉，溶解， 于超凈工作臺上用0. 45 μ m的纖維素膜過濾，加入10%體積分數(shù)的FBSJaA 體積分數(shù) 的雙抗，搖勻。取少量營養(yǎng)液樣品，于37°C，5% C02，飽和濕度培養(yǎng)2天，無細菌生長者，即 可使用。RAW264. 7細胞的培養(yǎng)①將細胞從液氮中取出，在37°C水浴中迅速解凍，細胞在 無菌操作臺中移入IOml無菌離心管中加6ml DMEM細胞培養(yǎng)基，1000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。 棄去上清液，沉淀中加入5-6ml DMEM細胞培養(yǎng)基，滴管吹打使其懸浮后移入細胞培養(yǎng)瓶中， 置37°C細胞培養(yǎng)箱內(nèi)。②次日，自培養(yǎng)箱中取出細胞，棄去細胞瓶中DMEM細胞培養(yǎng)基，加入 5-6mlDMEM細胞培養(yǎng)基，置37°C細胞培養(yǎng)箱內(nèi)。③隔日，自培養(yǎng)箱中取出細胞，棄去細胞瓶 中DMEM細胞培養(yǎng)基，加入PBS (PH7. 4) 2_3ml晃動清洗，倒掉PBS溶液后再重復一次清洗。， 用25cm的細胞刮刀輕輕刮下細胞，晃動均勻，分別移入2個干凈培養(yǎng)瓶中，加入DMEM細胞 培養(yǎng)基5-6ml吹打均勻，置于37°C細胞培養(yǎng)箱內(nèi)。④隔日，重復③步驟。在整個培養(yǎng)過程 中，貼壁細胞不允許生長過密，懸浮細胞始終保持對數(shù)生長期。樣品制備用DMSO溶解后，加入PBS配成1000 μ g/ml的溶液或均勻的混懸液，然 后用PBS稀釋。對照品制備用DMSO溶解后，加入PBS配成1000 μ g/ml的溶液或均勻的混懸液， 然后用PBS稀釋。將稀釋好的樣品加入平底96孔板中，每孔10 μ 1，每點作兩個平行測試。將DMSO 相應作梯度稀釋后加入板中，作為對照。C0X-2活性測試取生長狀態(tài)良好，處于對數(shù)生長期的RAW264. 7細胞，用細胞刮刀輕輕刮下細胞， 加適量DMEM培養(yǎng)液，輕輕吹打，使細胞混勻，計數(shù)，用DMEM培養(yǎng)液調(diào)整細胞濃度為5X105/ ml。96孔細胞培養(yǎng)板中，分別加入細胞培養(yǎng)液，LPS和待測化合物。37°C溫孵24h后，用 ELISA的方法，測定上清液中PGE-2的含量。 PGE-2 的測定PGE-2采用ELISA的方法進行測定，按照試劑盒說明的方法進行操作。表5樣品C0X-2活性測試 注樣品濃度均為100 μ g/mL ；*樣品濃度75 μ g/mL ；藥物組合物*為將油菜花粉所得的三類成分按得率比例的組合物。效果實施例5抑制前列腺細胞PSA分泌實驗實驗方法=LNCap細胞的培養(yǎng)①將細胞從液氮中取出，在37°C水浴中迅速解凍， 細胞在無菌操作臺中移入IOml無菌離心管中加6ml 1640細胞培養(yǎng)基，1000轉(zhuǎn)/分離心5 分鐘。棄去上清液，沉淀中加入5-6ml 1640細胞培養(yǎng)基，滴管吹打使其懸浮后移入細胞培 養(yǎng)瓶中，置37°C細胞培養(yǎng)箱內(nèi)。②48小時后，自培養(yǎng)箱中取出細胞，棄去細胞瓶中1640細 胞培養(yǎng)基，加入新鮮5-6mll640細胞培養(yǎng)基，置37°C細胞培養(yǎng)箱內(nèi)。③5天以后，自培養(yǎng)箱 中取出細胞，棄去細胞瓶中1640細胞培養(yǎng)基，加入PBS (PH7. 4) 2_3ml晃動清洗，倒掉PBS溶 液后再重復一次清洗。，用0. 25%的胰酶Iml消化10分鐘，用滴管吹打均勻，分別移入2個 干凈培養(yǎng)瓶中，加入DMEM細胞培養(yǎng)基5-6ml吹打均勻，置于37°C細胞培養(yǎng)箱內(nèi)。樣品制備及測算(1)在平底96孔板中，每孔加入200微升細胞，于37°C、5% C02細胞培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)過夜。
(2)將加入細胞的平底96孔板在37°C、5%C02細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時。取樣 品2mg加適量DMSO溶解，配成10mg/ml的母液，臨用前以PBS稀釋成1000 μ g/ml, 100 μ g/ ml, 10 μ g/ml，1 μ g/ml，O. 1 μ g/ml，O. Ol μ g/ml 的溶液。對照品制備按照樣品制備相同的方法進行。將稀釋好的樣品加入平底96孔板中，每孔20 μ 1，每點作兩個平行測試。將DMSO 相應作梯度稀釋后加入板中，作為對照。(3)繼續(xù)在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時。合并兩個平行孔的細胞培養(yǎng)液，共400μ1，放 置至5ml離心管中，測定PSA的含量(4)根據(jù)測定值計算樣品的抑制率。計算公式如下 表6樣品抑制前列腺細胞PSA分泌實驗結(jié)果 注樣品濃度均為100 μ g/mL ；*樣品濃度75 μ g/mL ；藥物組合物*為將油菜花粉所得的三類成分按得率比例的組合物。效果實施例6整體動物實驗供試品實施例29 按質(zhì)量百分比脂肪酸類化合物的植物提取物45%，黃酮類化 合物的植物提取物35%和生物堿類化合物的植物提取物20%的配比，合并脂肪酸類、黃酮 類和生物堿類這三類化合物，即得本發(fā)明的抗前列腺增生的藥物組合物(其中有效成分約 為質(zhì)量百分比脂肪酸類化合物40%，黃酮類化合物30%和生物堿類化合物10% )。陽性對照品前列康(普樂安片)，60公斤成人最大臨床用量12片/d。大鼠劑量確定按人與動物有效劑量的換算關(guān)系，大鼠劑量為60公斤成人臨床劑 量的6倍計算，即1. 2片/kg。配置方法取36片前列康片，用蒸溜水作溶劑，加吐溫-80作 為助溶劑，配置成混懸液300ml。舍尼通(普適泰片)，60公斤成人最大臨床用量2片/d。大鼠劑量確定按人與動物有效劑量的換算關(guān)系，大鼠劑量為60公斤成人臨床劑 量的6倍計算，即0. 2片/kg。配置方法取6片舍尼通，用蒸溜水作溶劑，加吐溫-80作為 助溶劑，配置成混懸液300ml。阿司匹林，60kg成人最大臨床用量為1.2g/日。小鼠用藥劑量按人和動物有效劑量的換算關(guān)系，小鼠劑量為60kg成人臨床劑量 的10倍計算，即0. 2g/kg。配制方法取3片阿司匹林，用0. 4%的吐溫-80作為溶劑，配置 成10mg/ml的混懸液。大鼠用藥劑量按人和動物有效用量的換算關(guān)系，大鼠劑量為60kg成人臨床劑 量的6倍量計算，即0. 12g/kg。配置方法取5片阿司匹林，用0. 4%的吐溫-80配置成 8. 57mg/ml的混懸液。A、藥物組合物對小鼠耳腫脹度的影響隨機將試驗小鼠分組，分別為空白組、阿司匹林組、供試品，每組10只，空白組給 予的0. 4%的吐溫-80，供試品組給予相應供試品0. 833g/kg，陽性組給予阿司匹林為0. 2g/ kg,灌胃容積均為20ml/kg體重，連續(xù)給予7天，末次給藥后lh，小鼠右耳均勻涂上25 μ 1 二 甲苯致炎，15min后處死動物。剪下左右兩耳，用直徑8mm打孔器在同一部位沖下耳片，稱 重，以左右耳片重量差值表示炎性腫脹程度，將其耳腫脹度進行組間比較，t檢驗。腫脹度(g)=右耳片重量-左耳片重量表7小鼠耳腫脹度實驗結(jié)果
42 注與空白組比較，*P< 0. 05，**P < 0. 01。B、藥物組合物對大鼠足跖腫脹度的影響取上述SD大鼠按體重隨機分組，分成11組，分別為空白組、阿司匹林組、供試品 組，每組10只，空白組給予的0. 4%的吐溫-80，供試品組給予相應供試品0. 5g/kg，陽性組 給予阿司匹林為0. 12g/kg，灌胃容積均為10ml/kg體重，連續(xù)給藥7天，末次給藥前Ih用外 徑千分尺測量大鼠左后足跖的厚度，給藥后Ih左后足跖注射雞蛋清0. 05ml/爪，然后于注 射雞蛋清后1、2、4、6小時用外徑千分尺各測量一次左后足跖的厚度，測量時均在相同的部 位，計算大鼠左后足跖在給藥后不同時間點的腫脹度，將其左后足跖腫脹度進行組間比較， t檢驗。腫脹度(mm))=左后足跖厚度(注射雞蛋清后)_左后足跖厚度(注射雞蛋清前)表8藥物組合物對雞蛋清致大鼠足跖腫脹度的影響(χ士 s) 注與空白組比較，*P< 0. 05，**P < 0. 01。C、藥物組合物對丙酸睪丸素誘導大鼠前列腺增生的影響造模取上述SD大鼠，隨機取9只做偽手術(shù)空白組，其他大鼠在無菌條件下，用 2%的戊巴比妥鈉麻醉，摘除雙側(cè)睪丸，縫合皮膚。試驗方法除空白組外，其余大鼠每日按0. lml/200g體重sc丙酸睪酮，劑量為3mg/kg，共30d，供試品組給予相應供試品0. 5g/kg劑量，陽性組分別給予前列康1. 2片/kg 劑量和舍尼通0. 2片/kg劑量，空白組和模型組給予等容積的蒸餾水，均灌胃給予，給藥容 積為1.0ml/100g體重，1次/d，連續(xù)給藥30d。于末次給藥后2h處死動物，剖取前列腺各葉 (腹、背+側(cè)葉)，用濾紙吸除表面液體，電子天平稱其濕重，計算前列腺各葉重量指數(shù)；取前 列腺腹葉固定于10%福爾馬林液中作常規(guī)石蠟切片，HE染色，做病理組織學檢查，觀察間 質(zhì)炎癥、水腫、充血和纖維組織增生等情況。前列腺組織學評判標準正常為“_”，病變范圍占全視野1/4以下為“ + ”;病變改變 明顯，范圍占1/3左右為“++” ；病變嚴重，范圍占全視野1/2左右為“+++”。檢測指標前列腺的濕重、前列腺指數(shù)、各組大鼠前列腺在光鏡下的組織學變化。 統(tǒng)計學方法組間t檢驗和Ridit檢驗。表9藥物組合物對丙酸睪酮誘導前列腺增生大鼠模型前列腺重量的影響(χ士 S) 注與模型組比較，*P< 0. 05，**P < 0. 01。表10藥物組合物對丙酸睪酮誘導前列腺增生大鼠模型前列腺指數(shù)的影響(χ士 S)
44 與模型組比較，*P< 0. 05，**P < 0. 01表11藥物組合物對丙酸睪酮誘導大鼠前列腺增生病理改變的影響 注與模型組比較，*P< 0. 05，**P < 0. 01.效果實施例7急性毒性實驗供試品藥物組合物(其由脂肪酸類、黃酮類和生物堿類三類化合物組成，各成分 制備及藥物組合物配比同效果實施例6的步驟制備)臨床用量3-5g/d(60kg體重成人臨床 日用最大劑量為0. 083g/kg)。實驗方法選用健康清潔級體重為18_22g昆明種小白鼠40只，雌雄各半，按體重隨機分為2 組，分別為49. Sg生藥/kg劑量組，相當于60kg體重成人臨床日用劑量的600倍；0. 4%吐 溫-80空白組。禁食不禁水6h后，灌胃給藥1次，給藥容積為0.4ml/10g?？瞻捉M給予同體 積0. 4%吐溫-80液。觀察給藥后小鼠毒性反應、死亡情況及外觀、行為、體重、分泌排泄物 等，連續(xù)14天，死亡動物行尸檢，記錄病變情況，觀察期結(jié)束后所有動物處死，進行解剖，觀 察主要臟器病變情況。實驗結(jié)果本試驗選用相當于60kg體重成人臨床日用劑量的600倍劑量(即 49. Sg生藥/kg)試驗，因以相當于60kg體重成人臨床日用劑量的600倍劑量進行試驗，足 以反映藥物組合物的安全信息。在此劑量下，各組小鼠在灌胃后14天內(nèi)均未死亡，觀察期 內(nèi)狀態(tài)良好，外觀、行為、體重、分泌排泄物等無異常發(fā)現(xiàn)。觀察期結(jié)束后所有動物處死，進 行解剖，心、肝、脾、肺、腎、胃等主要臟器肉眼觀察未見異常變化，通過急性毒性試驗表明， 藥物組合物的最大耐受量(MTD)為49. Sg生藥/kg體重；在此劑量下，灌胃給藥表明藥物組 合物是安全的。
權(quán)利要求
一種藥物組合物，其特征在于其包含a、b和c中的兩類或三類；所述的a為如式I所示的長鏈脂肪酸類化合物或含其的植物提取物，其中，A為甲基或1，2-二羥基丁基，B為羥基、2，3-二羥基丙氧基、甲氧基、乙氧基或-NH(CH2)2OH，n1和n2各自獨立的為0～20的整數(shù)；式I；所述的b為如式II所示的黃酮類化合物或含其的植物提取物，其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7各自獨立的為氫、羥基、C1～C5的烷氧基、氧葡萄糖基、氧鼠李糖基、氧果糖基、或者由葡萄糖、鼠李糖或果糖通過苷鍵結(jié)合而成的氧二糖基或氧三糖基；式II；所述的c為生物堿類化合物或含其的植物提取物；所述的生物堿類化合物為如式III所示的N1，N5，N10-三-(E)-香豆酰精脒、如式III所示的N1，N5，N10-三-(Z)-香豆酰精脒、如式IV所示的1-O-(β-D-葡萄糖)-(2S，3S，4R)-2N-[(2′R)-2′-羥基二十四碳烯酸]-十八烯-3，4-二醇、如式V所示的腐胺和如式VI所示的吲哚-3-醋酸中的一種或多種；式III；式IV；式V；式VI。F200910050766XC0000011.tif,F200910050766XC0000012.tif,F200910050766XC0000021.tif,F200910050766XC0000022.tif,F200910050766XC0000023.tif,F200910050766XC0000024.tif
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于 所述的藥物組合物包含兩類化合物時當兩類化合物包含a和c時，a的含量為1 99%，c的含量為1 99% 當兩類化合物包含b和c時，b的含量為1 99%，c的含量為1 99% 當兩類化合物包含a和b時，a的含量為1 99%，b的含量為1 99% 所述的藥物組合物包含三類化合物時所述的a的含量為1 60% ；所述的b的含量 為1 60% ；所述的c的含量為1 40% ； 百分比為質(zhì)量百分比。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于 所述的藥物組合物包含兩類化合物時當兩類化合物包含a和c時，a的含量為20 80%，c的含量為20 80% 當兩類化合物包含b和c時，b的含量為20 80%，c的含量為20 80% 當兩類化合物包含a和b時，a的含量為20 80%，b的含量為20 80% 所述的藥物組合物包含三類化合物時所述的a的含量為10 60%;所述的b的含量 為10 60% ；所述的c的含量為1 30% ； 百分比為質(zhì)量百分比。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的A為甲基，Ii1為3，Ii2為7，B為羥基，即所述的式I的化合物為如式1所示的亞麻酸， 式1;或者，所述的A為甲基，II1為3，II2為7，B為-NH(CH2)2OH,即所述的式I的化合物為如 式2所示的N-(2-羥乙基)，9，12，15-十八碳三烯酰胺， 式2 ；或者，所述的A為甲基，Ii1為3，Ii2為7，B為2，3- 二羥基丙氧基，即所述的式I的化合 物為如式3所示的亞麻酸甘油酯， 式3 ；或者，所述的A為甲基，H1為0，Ii2為14，B為羥基，即所述的式I的化合物為如式4所 示的棕櫚酸， 式4;或者，所述的A為1，2_ 二羥基丁基，H1為2，Ii2為7，B為羥基，即所述的式I的化合物 為如式5所示的15，16- 二羥基亞油酸， 式5 ；或者，所述的A為甲基，Ii1為3，Ii2為7，B為乙氧基，即所述的式I的化合物為如式6所 示的亞麻酸乙酯， 式6 ；或者，所述的A為甲基，Ii1為0，n2為14，B為2，3- 二羥基丙氧基，即所述的式I的化合 物為如式7所示的棕櫚酸甘油酯， 式7;或者，所述的A為甲基，H1為0，Ii2為14，B為24-亞甲基膽甾醇基，即所述的式I的化 合物為如式8所示的24-亞甲基膽留醇棕櫚酸酯，式8 ；或者，所述的A為甲基，Ii1為3，Ii2為7，B為1，3- 二棕櫚酸_2丙氧基，即所述的式I的 化合物為如式9所示的1，3- 二棕櫚酸-2-亞麻酸甘油三酯， 式9 ；或者，所述的A為甲基，Ii1為0，Ii2為14，B為1，3- 二亞麻酸_2_丙氧基，即所述的式I 的化合物為如式10所示的1，3-二亞麻酸-2-棕櫚酸甘油三酯， 式10 ；或者，所述的A為甲基，Ii1為3，Ii2為7，B為24-亞甲基膽甾醇基，即所述的式I的化合物為如式11所示的24-亞甲基膽留醇亞麻酸酯， 式11 ；或者，所述的A為甲基，II1為3，II2為7，B為環(huán)烯桉醇基，即所述的式I的化合物為如式 12所示的環(huán)烯桉醇亞麻酸酯， 式12 ；或者，所述的A為丁基，Ii1為2，Ii2為7，B為花粉烷甾醇基，即所述的式I的化合物為如 式13所示的花粉烷留醇亞油酸酯， 式13 ；或者，所述的A為甲基，Ii1為0，Ii2為14，B為2-羥基3-棕櫚酸基丙氧基，即所述的式 I的化合物為如式14所示的1，3-二棕櫚酸甘油二酯， 式14;或者，所述的A為甲基，Ii1為0，Ii2為14，B為2-十七烷酸基3-羥基丙氧基，即所述的 式I的化合物為如式15所示的1-棕櫚酸-2-十七烷酸甘油二酯，式15ο
5.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的RpR2和R3均為羥基，R4、R5、R6和R7均為氫，即所述的式II的化合物為如式16 所示的山奈酚， 式16 ；或者，所述的禮、R2> R3和R6均為羥基，R4、R5和R7均為氧，即所述的式II的化合物為 如式17所示的槲皮素， 式17 ；或者，所述的禮、R2和R3均為羥基，R4、R5和R7均為氧，R6為甲氧基，即所述的式II的 化合物為如式18所示的異鼠李素， 或者，所述的禮、R2> R3和R4均為羥基，R5、R6和R7均為氧，即所述的式II的化合物為 如式19所示的草棉黃素， 或者，所述的R1和R2為羥基，R3為O-β-D葡萄糖(6 — 1)-α-L-鼠李糖，R4、R5、R6和 R7均為氫，即所述的式II的化合物為如式20所示的山奈酚7-0-(6’ -鼠李糖基)葡萄糖 苷，
6.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的藥物組合物包含a和b兩類 化合物。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于所述的a為如權(quán)利要求5所述的式 I的化合物或含其的植物提取物，所述的b為如權(quán)利要求6所述的式II的化合物或含其的 植物提取物。
8.如權(quán)利要求1或7所述的藥物組合物，其特征在于所述的植物提取物為植物花粉 提取物。
9.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的藥物組合物還包括藥學上可 接受的載體。
10.如權(quán)利要求1 9任一項所述的藥物組合物在制備芳香化酶抑制劑、5α還原酶抑 制劑、α r腎上腺素受體拮抗劑、環(huán)氧合酶_2抑制劑、前列腺特異性抗原PSA分泌抑制劑、 消炎藥物、或者在制備抗前列腺增生、前列腺炎或前列腺癌的藥物中的應用。
全文摘要
一種藥物組合物，包含a、b和c中的兩類或三類；a為式I的長鏈脂肪酸類化合物或含其植物提取物；b為式II的黃酮類化合物或含其植物提取物；c為下述生物堿類化合物或含其植物提取物N1，N5，N10-三-(E/Z)-香豆酰精脒、1-O-(β-D-葡萄糖)-(2S，3S，4R)-2N-[(2′R)-2′-羥基二十四碳烯酸]-十八烯-3，4-二醇、腐胺和吲哚-3-醋酸。本發(fā)明的藥物組合物可用于制備芳香化酶抑制劑、5α還原酶抑制劑、α1-腎上腺素受體拮抗劑、環(huán)氧合酶-2抑制劑、前列腺特異性抗原PSA分泌抑制劑、消炎藥物、或者制備抗前列腺增生、前列腺炎或前列腺癌的藥物。式II
文檔編號A61K31/132GK101879156SQ20091005076
公開日2010年11月10日 申請日期2009年5月7日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月7日
發(fā)明者李坤, 楊義芳, 楊必成, 金麗麗 申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院