專利名稱：用于軟骨再生、疼痛抑制和水腫抑制的生藥組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于軟骨再生、疼痛抑制和水腫抑制的藥物組合物，其包含木瓜 (S.4 )、牛膝(早會)、刺五加(立剩)、桂皮(剩)、秦艽(逝J51 )、威靈仙(剜奄乜)、當(dāng)
歸(守fl )、川彎(恕云.)、天麻()、紅花( 綷)、糙蘇( 進(jìn))和防風(fēng)(噔罟)的草藥提
取物作為活性成分。
背景技術(shù)：
關(guān)節(jié)炎主要分為骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。骨關(guān)節(jié)炎也稱為退行性關(guān)節(jié)炎，是折磨中老年人的最常見關(guān)節(jié)炎形式。其引起關(guān) 節(jié)(例如膝關(guān)節(jié)和髖關(guān)節(jié))的疼痛、僵硬和進(jìn)行性運(yùn)動功能障礙。骨關(guān)節(jié)炎涉及基質(zhì)金屬 蛋白酶(MMP)對關(guān)節(jié)軟骨的破壞，其特征在于關(guān)節(jié)軟骨退行性改變和炎癥，導(dǎo)致關(guān)節(jié)水腫 和疼痛。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是影響多種關(guān)節(jié)的炎性自身免疫病。在關(guān)節(jié)炎患者中觀察到誘發(fā) 炎癥的病理變化，如滑膜組織增生，巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、活化T和B淋巴細(xì)胞的內(nèi)膜下浸 潤，以及多形核細(xì)胞在滑液內(nèi)和軟骨表面上的累積。此外，滑膜組織增生形成非血管型翳(parmus)(結(jié)締組織層出現(xiàn)在關(guān)節(jié)軟骨中)， 導(dǎo)致由于軟骨和骨之不可逆地破壞而造成的疼痛，其中與軟骨破壞因子(如MMP)有關(guān)。治療骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的理想目標(biāo)是保護(hù)以及維持軟骨和骨組織，并緩 解與其相關(guān)的疼痛。引起疼痛的有害刺激可分為機(jī)械刺激、熱刺激和化學(xué)刺激。這些刺激被傷害感受 器(傳導(dǎo)疼痛之Αδ和C類神經(jīng)纖維的游離神經(jīng)末梢)所感知，并且強(qiáng)的和持續(xù)的刺激導(dǎo)致 組織損傷和炎癥。病理性疼痛來自于有害刺激、炎癥、病毒感染等導(dǎo)致的組織或神經(jīng)損傷。一旦發(fā)生炎癥反應(yīng)，免疫細(xì)胞或受損細(xì)胞產(chǎn)生并分泌促炎細(xì)胞因子(如白介 素-1 (例如，IL-I α、IL-I β )、IL_6、腫瘤壞死因子-α (TNF- α )等)以及致痛介質(zhì)(如緩 激肽、一氧化氮(NO)、前列腺素，其提高疼痛敏感性)。與之相對，發(fā)炎組織還分泌抑制疼痛的阿片樣肽(例如內(nèi)啡肽、腦啡肽、強(qiáng)啡肽 等)或抗炎細(xì)胞因子(例如IL-4、IL-10、IL-3等)，以實(shí)現(xiàn)鎮(zhèn)痛效果。同時(shí)，膝軟骨覆蓋股骨和脛骨的表面，其防止摩擦力磨損膝關(guān)節(jié)。但是，在骨關(guān)節(jié) 炎中，軟骨表面上發(fā)生纖維化和裂隙，導(dǎo)致軟骨損傷。MMP(如MMP-1、MMP-3和MMP-13)在此類軟骨基質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用，炎性細(xì) 胞因子(如白介素(IL-li3)、IL-6、TNF-a)及其它炎性介質(zhì)(如前列腺素、一氧化氮 (NO))與其相關(guān)。受機(jī)械刺激活化的軟骨細(xì)胞分泌MMP，其降解軟骨的主要組分——膠原蛋白和蛋 白聚糖，炎性細(xì)胞因子及其它炎性介質(zhì)不僅促進(jìn)MMP的分泌從而提高M(jìn)MP的活性，還刺激炎 性細(xì)胞從而加重炎癥。
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MMP的活性受金屬蛋白酶的特異性組織抑制劑(tissue inhibitor of metalloproteinase，TIMP)調(diào)節(jié)，因此，上調(diào)TIMP可以抑制MMP的活性從而實(shí)現(xiàn)有益作用。 另外，增加的抗炎細(xì)胞因子(包括IL-4、IL-10和IL-13)也可以通過抑制炎性細(xì)胞因子的 產(chǎn)生和促進(jìn)TIMP的產(chǎn)生來保護(hù)軟骨基質(zhì)。已開發(fā)了多種治療劑用于抑制炎癥和疼痛，但是目前尚無藥物可用于軟骨再生。 此外，因?yàn)樗星笆鏊幬锞Ч邢?，所以患者的?yán)重疼痛以及與此相關(guān)的花費(fèi)仍然是亟 待解決的問題。目前，非甾體抗炎藥(non-steroidal anti-inflammatory drug，NSAID)、 基于金的藥物(gold-based drug)、青霉胺和修飾病因的抗風(fēng)濕藥物(disease-modifying anti-rheumatic drug，DMARD)例如抗瘧藥用于治療骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。但是，這 些藥物具有嚴(yán)重的副作用。已經(jīng)積極地測試了很多使用天然產(chǎn)品的關(guān)節(jié)炎治療法，但是這些方法均基于抑制 炎癥反應(yīng)，并且治療效果較差。因此，有必要開發(fā)副作用降低并且對于疼痛抑制、水腫抑制 和軟骨再生具有優(yōu)異效果的新的關(guān)節(jié)炎治療法。本發(fā)明組合物中使用的草藥包括木瓜、牛膝、刺五加、桂皮、秦艽、威靈仙、當(dāng)歸、川 芎、天麻、紅花、糙蘇和防風(fēng)，這些均為眾所周知的傳統(tǒng)草藥并且不會引發(fā)明顯的不良副作 用(例如毒性)。這些草藥的特征和效果論述如下。木瓜是薔薇科木瓜(Chaenomeles sinensis Κ0ΕΗΝΕ)或皺皮 木瓜(Chaenomeles speciosa NAKAI)果實(shí)的干燥形式，其已用于治療 急性腸胃炎、腳氣病、肌痛、關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)痛、咳嗽、咳痰、肺炎和支氣管炎 (啩吾詞吾，兮咅砷咅勻晉￡哲，2000;詈噼芒莖辭，1998 )。牛膝是莧科日本牛膝(Achyranthesjaponica (Miq. ) NAKAI)的根， 牛膝(Achyranthes bidentata BLUME)禾口 川牛膝(Cyathula officinalis KUAN)在市面上有售。其已用于強(qiáng)健肌肉和骨骼以及保護(hù)肝臟和腎臟 (砷吾詞吾，呦咅砷咅勻晉￡苷，2000；詈砷芒莖嘢，1998:)。刺五加是五加科細(xì)柱五加(Acanthopanax gracilistylus W. W. SMITH)的根皮，其已用于增長肌肉和骨骼以及治療水腫
(u4吾到吾，兮魯砷吾勻禮2000;詈砷芒主砷，1998 )。桂皮是樟科肉桂(Cinnamomum cassia BLUME)的莖皮，其已用于治療感冒和安神 止痛(尅邙喵砷針，1993 )。秦艽是龍膽科秦艽(Gentianamacrophylla PALLAS)的 根，其已用于治療麻痹( 兮咅紳務(wù)q晉1 ",啩罟到· 矸 詈禮乜省甘4, PP391-393, 2000；詈砷芒莖《K吾蚪，pp311-3l3, 1998:)。威靈仙是毛茛科辣蓼鐵線蓮(Clematis mandshurica MAX)的根，其已用于治療痛 風(fēng)
(甘吾碎咅糾1"^ ".釙吾到·。1^幵罟禮祖省分4, ΡΡ303-305, 2000;
晉紳甚圣噼，PP309-310, 1998 )
當(dāng)歸是傘形科朝鮮當(dāng)歸(Angelica gigas NAKAI)根的干燥形 式° 當(dāng) 歸(Angelica sinensis DIELS)禾口 東當(dāng)歸(Angelica acutiIoba KITAGAWA)的干燥根已分別在中國和日本用于產(chǎn)褥期疾病、貧血、頭痛以及活血 (辭旁蜎罟，兮咅砷咅勻晉王社，2000;詈砷芒莖笱’ 1998)。川芎是傘形科日本川芎(Cnidiumofficinale ΜΑΚΙΝ0)、法國川芎(Ligusticum wallichii FRANCH) officinale YOOK 變種、日本大葉川芎(Angelica genuflexa MUTT)和 中國川芎(Ligusticum chuaxiong H0RT)的根莖，其已經(jīng)用于治療貧血、頭痛、產(chǎn)科和婦科 疾病(砷吾調(diào)吾，分咅砷告句晉2000;詈砷甚莖辭，1998)。天麻是蘭科天麻(Gastrodia elata BLUiffi)根莖皮的干燥形式，其已用于治療頭 痛和頭昏( 噼吾萄 吾,分咅砷咅勻■’ 2000；詈紳芒主辭’ 1998:)。紅花是菊科紅花(Carthamus tinctorius L.)的花的干燥形式，其已用于治療婦 科疾病、白帶和更年期疾病(兮咅砷咅勻晉￡旮，
啩吾到.叫笮亓詈禮^^PP343-345, 2000；詈紳甚主哿’罟 PP501-502, 1998:)。糙蘇是唇形科糙蘇(Phlomis umbrosa TURCZ)的根，其已用于治療青腫、骨折以及 促進(jìn)組織再生(釙旁蜎吾，汾咅辭咅勻晉王社,2000;詈砕芒主嘢，1998)。防風(fēng)是傘形科防風(fēng)(Ledebouriella seseloides W0LF)的根，其已用于治療感冒、 頭痛、關(guān)節(jié)炎和破傷風(fēng)
(甘咅砷咅勾晉S·社，辟吾詞· 0丨項(xiàng)訐詈碎，- ^^Κ ΡΡ160-161, 2000；吾紳芒主辭，Mii^i卯169-171, 1998； ) 上述草藥已用于急性和慢性炎癥，例如多種損傷、膿腫、肺炎、支氣管炎、貧血、頭 痛、感冒和神經(jīng)痛，每種具有獨(dú)特的藥理學(xué)作用和效力。發(fā)現(xiàn)來自上述草藥的復(fù)合草藥提取物(名為“PG201”)在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠 模型和骨關(guān)節(jié)炎兔模型中有效地保護(hù)軟骨和預(yù)防炎癥(S. S. Shin等，J Rheumatol,42, 665-672 頁，2003 ；KC Park 等，Biochem Bioph Res Co，331，1469-1477 頁，2005)。但是，在 臨床骨關(guān)節(jié)炎模型中尚未有軟骨再生或疼痛抑制的報(bào)道。通過動物實(shí)驗(yàn)，本發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)PG201有效用于軟骨再生以及疼痛和水 腫抑制。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供無明顯副作用、抑制疼痛和水腫并且有效用于軟 骨再生的藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了用于軟骨再生、疼痛抑制和水腫抑制的藥物組合 物，其包含木瓜、牛膝、刺五加、桂皮、秦艽、威靈仙、當(dāng)歸、川芎、天麻、紅花、糙蘇和防風(fēng)的提 取物作為活性成分。
此外，本發(fā)明提供了用于改善關(guān)節(jié)功能和緩解疼痛的健康食品，其含有木瓜、牛 膝、刺五加、桂皮、秦艽、威靈仙、當(dāng)歸、川芎、天麻、紅花、糙蘇和防風(fēng)的提取物作為活性成 分。另外，本發(fā)明提供了用于改善關(guān)節(jié)功能和緩解疼痛的食品或飼料添加劑，其含有 木瓜、牛膝、刺五力卩、桂皮、秦艽、威靈仙、當(dāng)歸、川彎、天麻、紅花、糙蘇和防風(fēng)的提取物作為 活性成分。本發(fā)明的生藥組合物含有木瓜、牛膝、刺五加、桂皮、秦艽、威靈仙、當(dāng)歸、川芎、天 麻、紅花、糙蘇和防風(fēng)的提取物作為活性成分，沒有顯著的副作用(如毒性)，能夠抑制疼痛 和水腫，以及再生軟骨，可以有效用于藥品、健康食品、食品或飼料添加劑。


通過以下對本發(fā)明的描述并結(jié)合附圖，本發(fā)明的上述和另外的目的和特征將變得 很明顯。圖1 顯示利用膠原蛋白誘導(dǎo)的兔關(guān)節(jié)炎的軟骨再生實(shí)驗(yàn)的示意圖。圖2 每個(gè)實(shí)驗(yàn)組對膠原蛋白誘導(dǎo)的兔關(guān)節(jié)炎中軟骨再生的效果。圖3 :HPLC色譜圖，顯示PG201中的無梗五加苷D。發(fā)明詳述本發(fā)明的藥物組合物包含如下量的草藥提取物作為活性成分，所述量為組合物總 量的0.01 95%，優(yōu)選1 80% (以重量計(jì))。另外，本發(fā)明的藥物組合物可包含如下量的木瓜、牛膝、刺五加、桂皮、秦艽、威靈 仙、當(dāng)歸、川芎、天麻、紅花、糙蘇和防風(fēng)的提取物，所述量分別為組合物總量的1. 5 2. 5、 1. 5 2. 5、1. 5 2. 5、1. 5 2. 5,0. 75 1. 75,0. 75 1. 75,0. 75 1. 75,0. 75 1. 75、 0. 75 1. 75,0. 75 1. 75和0. 5 1. 5 1% (以重量計(jì))，或者可包含從如上比例之混 合草藥得到的提取物。此外，所述作為本發(fā)明藥物組合物之活性成分的草藥提取物包含無梗五加苷D。無 梗五加苷D的量可以為草藥提取物總量的0. 01 0. 05% (以重量計(jì))。并且，本發(fā)明藥物組合物還可包含顯示相同或類似效果的其它草藥提取物。所述草藥提取物可通過以下方法來制備。清洗草藥，任選地進(jìn)行干燥，切成小塊或 者粉碎。然后，將清洗、干燥、切塊或粉碎后的草藥根據(jù)常規(guī)提取方法進(jìn)行提取，例如通過使 用熱水或有機(jī)溶劑來實(shí)現(xiàn)。此外，本發(fā)明組合物還可包含來自所述提取物的干燥粉末形式 或來自市售提取物的粉末混合物。在草藥提取物的制備中，可使用干燥或非干燥形式的草 藥，或其混合物。本發(fā)明組合物的草藥提取物可例如通過以下方式來制備將干燥的草藥切成小 塊，混合，在10°C 100°C下(根據(jù)熱水提取法、冷水提取法、超聲法、回流法或常規(guī)提取 法)，在1 20倍重量的水、有機(jī)溶劑或其混合溶劑(優(yōu)選地，10 100% (體積/體積) 乙醇)中提取混合物1至5次，約1小時(shí)至10天，然后進(jìn)行過濾，濃縮，或者冷凍干燥該提 取物。示例性的有機(jī)溶劑包括Cy低級醇、乙酸乙酯、氯仿、己烷、二氯甲烷等。如本發(fā)明實(shí)驗(yàn)部分實(shí)施例所示，本發(fā)明的藥物組合物在兔關(guān)節(jié)炎模型中顯示出良 好的體內(nèi)軟骨再生以及在PBQ誘發(fā)的扭體法試驗(yàn)中顯示顯著的疼痛抑制作用(見表1)。另外，所述組合物在角叉菜膠誘發(fā)的爪水腫試驗(yàn)中顯示出良好的抑制水腫的效果(見表2)。用于治療關(guān)節(jié)炎和抑制疼痛的本發(fā)明藥物組合物還可包含可藥用的載體、輔劑或 稀釋劑。這些載體、輔劑或稀釋劑的實(shí)例包括乳糖、右旋葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木 糖醇、赤蘚醇、麥芽糖醇、淀粉、阿拉伯膠、藻酸、明膠、磷酸鈣、硅酸鈣、纖維素、甲基纖維素、 微晶纖維素、聚乙烯醇吡咯烷酮、水、羥苯甲酯、羥苯丙酯、滑石、硬脂酸鎂和礦物油。本發(fā)明組合物可以制備成任何形式，例如口服劑型(如粉末劑、顆粒劑、片劑、丸
劑、膠囊劑、浸膏、混懸液、乳劑、糖漿、水性藥、氣霧劑等)、局部制劑(例如和貼 劑)、非水性藥、凍干制劑和無菌注射制劑。在所述配方中，必要時(shí)可包括可藥用的填充劑、增容劑、粘合劑、潤濕劑、甜味齊U、 調(diào)味劑、輔劑、崩解劑、乳化劑、潤滑劑等。本發(fā)明藥物組合物的期望劑量可根據(jù)患者的年齡、性別或體重來確定，然而一般 可以以0.01 IOg(優(yōu)選1 5g)的單次劑量每天施用3次。此外，所述劑量可根據(jù)施用 途徑、疾病嚴(yán)重程度、患者性別、體重、年齡等進(jìn)行調(diào)整。因此，所述劑量不以任何方式限制 本發(fā)明的范圍。本發(fā)明還提供了用于改善關(guān)節(jié)功能和緩解疼痛的健康食品，其包含木瓜、牛膝、刺 五加、桂皮、秦艽、威靈仙、當(dāng)歸、川芎、天麻、紅花、糙蘇和防風(fēng)的提取物作為活性成分。本發(fā)明的健康食品包含如下量的草藥提取物，所述量為總量的0.01 95% (優(yōu)選 1 80% )(以重量計(jì))。此外，本發(fā)明健康食品中所用的草藥提取物的重量比例及其制備方法如上所述。本發(fā)明的健康食品可采用粉末劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑或飲料等任意形式，并且 還可包含用于促進(jìn)健康的天然或合成物質(zhì)以及制備用添加劑。本發(fā)明的健康飲料可包含如下量的草藥提取物，所述量為IOOmL飲料中含有1 30g，優(yōu)選3 10g。假設(shè)本發(fā)明的健康飲料含有所示比例的上述提取物作為主要成分，則 對于其它液體組分沒有特別的限制，并且所述飲料還可包含飲料中常規(guī)使用的各種調(diào)味劑 或天然碳水化合物。上述天然碳水化合物的實(shí)例包括單糖，如葡萄糖、果糖等；二糖，如麥 芽糖、蔗糖等；常規(guī)糖類，如糊精、環(huán)糊精等；以及糖醇，如木糖醇、山梨醇、赤蘚醇等。除了 碳水化合物以外，還可以使用天然調(diào)味劑(如珅早外培、甜葉菊提取物(如eflti}卒勻仝Al三 A、甘草甜素等))和合成調(diào)味劑(如糖精、阿斯巴甜等)。一般可以如下量使用天然碳水化 合物每IOOmL組合物中含有約1 20g，優(yōu)選5 12g。除了所述組分以外，本發(fā)明的組合物還可包含多種營養(yǎng)補(bǔ)充劑、維生素、礦物質(zhì) (電解質(zhì))、合成或天然調(diào)味劑、著色劑和填充劑(奶酪、巧克力等)、果膠酸及其鹽、海藻酸 及其鹽、有機(jī)酸、保護(hù)性膠體增稠劑、PH調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、甘油、醇類、碳酸飲料中使 用的碳酸充氣劑等。此外，本發(fā)明組合物還可包含用于天然果汁和果汁飲料和蔬菜飲料中 的果肉。這些組分可單獨(dú)使用或組合使用。一般地，這些添加物可采用100份組合物中含 0至約20份(以重量計(jì))的比例。所述健康食品的實(shí)例包括各種食品、飲料、口香糖、維生素復(fù)合劑、健康食品補(bǔ)充劑等。
本發(fā)明還提供了用于改善關(guān)節(jié)功能和緩解疼痛的食品或飼料添加劑，其包含木 瓜、牛膝、刺五加、桂皮、秦艽、威靈仙、當(dāng)歸、川芎、天麻、紅花、糙蘇和防風(fēng)的提取物作為活 性成分。本發(fā)明的食品或飼料添加劑包含如下量的所述草藥提取物，所述量為組合物總量 的0.01 95%，優(yōu)選1 80% (以重量計(jì))。此外，本發(fā)明食品或飼料添加所用的草藥提取物的重量比例及其制備方法如上所 述。所述添加劑可以作為原材料在食品或飼料制備時(shí)加入，或者加入到最終制備好的 食品或飼料中。下列實(shí)施例用于進(jìn)一步闡釋本發(fā)明，但不限制其范圍。實(shí)施例1 使用極性溶劑制備植物提取物(PG201) (1)從專營草藥的市場( 吾叫苷邛叫草藥市場，韓國首爾)購得12種草藥木瓜、牛
膝、刺五加、桂皮、秦艽、威靈仙、當(dāng)歸、川芎、天麻、紅花、糙蘇和防風(fēng)，將每種草藥進(jìn)行清洗 和干燥。然后，將62. 3g木瓜、62. 3g牛膝、62. 3g刺五加、62. 3g桂皮、38. 9g秦艽、38. 9g威 靈仙、38. 9g當(dāng)歸、38. 9g川芎、38. 9g天麻、38. 9g紅花、31. Ig糙蘇和31. Ig防風(fēng)，將M4. 8g 的該混合物與1. 6L 25%乙醇混合，在攪拌下于室溫提取混合物3天。在55 65°C將提取 物減壓濃縮，并凍干獲得提取物粉末(PG201)。實(shí)施例2 使用極性溶劑制備草藥提取物(PG201) (2)將12種草藥(木瓜、牛膝、刺五加、桂皮、秦艽、威靈仙、當(dāng)歸、川芎、天麻、紅花、糙 蘇和防風(fēng))進(jìn)行清洗和干燥。然后，將1.0 1.5L 25%乙醇分別加入62. 3g木瓜、62. 3g 牛膝、62. 3g刺五加、62. 3g桂皮、38. 9g秦艽、38. 9g威靈仙、38. 9g當(dāng)歸、38. 9g川芎、38. 9g 天麻、38. 9g紅花、31. Ig糙蘇和31. Ig防風(fēng)，將每種混合物在室溫下攪拌提取3天。將每種 提取物在55 65°C減壓濃縮，凍干，并混合從而獲得提取物粉末(PG201)。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1 :PG201在膠原酶誘導(dǎo)之兔關(guān)節(jié)炎模型中的軟骨再生作用為了確定實(shí)施例1中制備的PG201的軟骨再生作用，使用膠原酶誘導(dǎo)的兔關(guān)節(jié)炎 模型(T. Kikuchi 等，Osteoarthritis and Cartilage 6，177-186 頁，1998)。步驟1 膠原酶誘導(dǎo)之兔關(guān)節(jié)炎模型的制備如下制備與人關(guān)節(jié)炎表現(xiàn)出很多共同特征的兔膠原酶誘導(dǎo)之關(guān)節(jié)炎 (collagenase-induced arthritis, CNIΑ)模型。通過肌內(nèi)注射45mg/kg氯胺酮(KETAMIN，脊進(jìn)，韓國)和^ig/kg甲苯 噻嗪(xylazine，咕吾嗜萄爸，補(bǔ)。1省,韓國)對新西蘭白兔(雄性，H周齡，
^^韓國)進(jìn)行麻醉。用4mL磷酸鹽緩沖液(PBQ將2.91mg膠原酶(溶組 織梭菌(Clostridium histolytica)，II 型，酶活性:626 單位 /mg, Sigma，美國)乳化，然 后將250 μ L乳化的膠原酶溶液注射到每只兔經(jīng)剃毛的右爪關(guān)節(jié)中。對于正常兔，注射同樣 量的PBS來代替。初次注射后4天，再次向每只兔注射膠原酶溶液以誘發(fā)骨關(guān)節(jié)炎。對于 正常兔，注射同樣量的PBS來代替(見圖1)。步驟2 誘發(fā)骨關(guān)節(jié)炎后的軟骨再生作用(2-1)方法
第一次注射膠原酶后，每天使用胃腸管向兔子口服施用測試樣品。實(shí)驗(yàn)組施用 200mg/kg的測試樣品溶液，所述溶液通過將實(shí)施例1的PG201溶于無菌水中以使?jié)舛葹?400mg/mL來制備。同時(shí)，陰性對照組僅口服施用無菌水，正常組也施用無菌水。5周口服施用后，進(jìn)行軟骨合成測定。將右爪軟骨切成薄片，將30mg軟骨切片溶于 ImL無血清培養(yǎng)基(Dulbecco' s Modified Eagle，s Medium)中。然后，將20mL放射性標(biāo) 記的[35S]NaSO4(lmCi/mL,Perkin Elmer，美國)加入其中，混合物在37°C孵育M小時(shí)。將 培養(yǎng)基以12，OOOrpm離心5分鐘，棄去上清，向其中加入ImL 0. 5M NaOH。在4°C緩慢攪拌 懸液48小時(shí)，使用PD-10過濾柱進(jìn)行過濾，并使用閃爍計(jì)數(shù)器測量放射性水平。(2-2)結(jié)果與陰性對照組相比，PG201治療組中兔右爪關(guān)節(jié)的軟骨再生水平明顯更高。具體 來說，在陰性對照組中36%的軟骨喪失，而在PG201治療組中降至19%。這些結(jié)果顯示， PG201通過顯著減少由關(guān)節(jié)炎導(dǎo)致的軟骨喪失而具有軟骨保護(hù)作用(見圖2)。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例2 在PBQ誘導(dǎo)的扭體法試驗(yàn)中PG201的疼痛抑制作用為了測量PG201的疼痛抑制作用，進(jìn)行了 PBQ(對苯醌)誘導(dǎo)的扭體法試驗(yàn)。向 6周齡的雄性SD大鼠分別口服施用無菌水(陰性對照組)、400mg/kg PG201 (PG201組)、 30mg/kg雙氯酚酸鈉(Sigma，美國)(一種非甾體抗炎藥，作為陽性對照組，雙氯酚酸組)以 及400mg/kg JOINS TAB(SK珅口丨眷對，韓國)(來自天然物質(zhì)的市售抗炎藥)(JOINS TAB
組)。施用測試樣品兩小時(shí)后，通過腹膜內(nèi)注射lmg/kg PBQ在大鼠中誘導(dǎo)疼痛刺激。從注 射PBQ后10分鐘，計(jì)數(shù)30分鐘內(nèi)每只大鼠的扭動次數(shù)。根據(jù)扭動的總次數(shù)，使用下列公式 l(Thuy,T. C.等，J.Pharmacol Exp Ther 248(3) :907-915頁，1989)計(jì)算疼痛抑制率(％)。< 公式 1>疼痛抑制率(％)=[(陰性對照組的扭動次數(shù)-藥物治療組的扭動次數(shù))/陰性 對照組的扭動次數(shù)]X100如表1所示，雙氯酚酸組(陽性對照組)顯示92%的疼痛抑制，J0INSTAB組顯示 無疼痛抑制。相比而言，PG201組顯示23%的疼痛抑制，表明本發(fā)明的提取物比先前的關(guān)節(jié) 炎天然治療劑更有效地抑制疼痛?！幢?>
權(quán)利要求
1.用于軟骨再生、疼痛抑制和水腫抑制的藥物組合物，其包含木瓜、牛膝、刺五加、桂 皮、秦艽、威靈仙、當(dāng)歸、川芎、天麻、紅花、糙蘇和防風(fēng)的草藥提取物作為活性成分。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述提取物的總量為所述組合物總量按重量計(jì)的0.01 95%。
3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述木瓜、牛膝、刺五力口、桂皮、秦艽、威靈仙、當(dāng)歸、川彎、 天麻、紅花、糙蘇和防風(fēng)之提取物的量分別是所述組合物總量按重量計(jì)的1. 5 2. 5、1. 5 2. 5、1. 5 2. 5、1. 5 2. 5,0. 75 1. 75,0. 75 1. 75,0. 75 1. 75,0. 75 1. 75,0. 75 1.75、0. 75 1. 75 和 0. 5 1. 5 1%。
4.權(quán)利要求1的組合物，其中所述提取物含有無梗五加苷D。
5.權(quán)利要求4的組合物，其中所述無梗五加苷D的量為所述提取物總量按重量計(jì)的0.01 0. 05%。
6.權(quán)利要求1的組合物，其中所述提取物為溶劑提取物或來自于其的粉末形式。
7.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物被配制成選自以下的任一形式粉末劑、顆粒 劑、片齊 、丸齊 、膠囊齊 、浸膏、混懸劑、乳劑、糖漿、水性藥、氣霧劑、s^^^i、貼齊 、非水 性藥、凍干制劑和無菌注射制劑。
8.用于改善關(guān)節(jié)功能和緩解疼痛的健康食品，其包含木瓜、牛膝、刺五加、桂皮、秦艽、 威靈仙、當(dāng)歸、川芎、天麻、紅花、糙蘇和防風(fēng)的草藥提取物作為活性成分。
9.權(quán)利要求8的食品，其中所述提取物的總量為所述食品總量按重量計(jì)的0.01 95%。
10.權(quán)利要求8的食品，其中所述木瓜、牛膝、刺五加、桂皮、秦艽、威靈仙、當(dāng)歸、川芎、 天麻、紅花、糙蘇和防風(fēng)之提取物的量分別為所述組合物總量按重量計(jì)的1. 5 2. 5、1. 5 2.5、1. 5 2. 5、1. 5 2. 5,0. 75 1. 75,0. 75 1. 75,0. 75 1. 75,0. 75 1. 75,0. 75 1.75、0. 75 1. 75 和 0. 5 1. 5 1%。
11.權(quán)利要求8的食品，其中所述提取物含有無梗五加苷D。
12.權(quán)利要求11的食品，其中所述無梗五加苷D的量為所述提取物總量按重量計(jì)的 0. 01 0. 05%。
13.權(quán)利要求8的食品，其中所述食品為粉末、顆粒、片劑、膠囊或飲料的形式。
14.用于改善增強(qiáng)關(guān)節(jié)功能和緩解疼痛的食品或飼料添加劑，其包含木瓜、牛膝、刺五 加、桂皮、秦艽、威靈仙、當(dāng)歸、川芎、天麻、紅花、糙蘇和防風(fēng)的草藥提取物作為活性成分。
15.權(quán)利要求14的添加劑，其中所述提取物的總量為所述添加劑總量按重量計(jì)的0.01 95%。
16.權(quán)利要求14的添加劑，其中所述木瓜、牛膝、刺五加、桂皮、秦艽、威靈仙、當(dāng)歸、川 芎、天麻、紅花、糙蘇和防風(fēng)之提取物與所述組合物總量的重量比按重量計(jì)分別為1. 5 2.5,1. 5 2. 5,1. 5 2. 5,1. 5 2. 5,0. 75 1. 75,0. 75 1. 75,0. 75 1. 75,0. 75 1.75、0. 75 1. 75、0. 75 1. 75 和 0. 5 1. 5 1%。
17.權(quán)利要求14的食品，其中所述提取物含有無梗五加苷D。
18.權(quán)利要求17的食品，其中所述無梗五加苷D的量按重量計(jì)為0.01 0. 05%。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于軟骨再生、疼痛抑制和水腫抑制的生藥組合物，其包含混合的草藥提取物。更具體地，本發(fā)明的生藥組合物含有木瓜、牛膝、刺五加、桂皮、秦艽、威靈仙、當(dāng)歸、川芎、天麻、紅花、糙蘇和防風(fēng)的提取物作為活性成分，無毒性等副作用，使關(guān)節(jié)、軟骨細(xì)胞再生，抑制疼痛和水腫。因此，本發(fā)明的生藥組合物可用作有價(jià)值的藥品、促進(jìn)健康之食品、食品添加劑或動物飼料添加劑。
文檔編號A61K36/732GK102076348SQ200980124270
公開日2011年5月25日 申請日期2009年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月24日
發(fā)明者崔珍熔, 樸秀振, 趙炳旭, 金善嬉, 金善榮, 魚海寬 申請人:百療醫(yī)株式會社