專利名稱：含有源于人參，包括野山參及高麗參的形成層的植物干細(xì)胞系作為活性成分的抗衰老或 ...的制作方法
含有源于人參，包括野山參及高麗參的形成層的植物干細(xì)胞系作為活性成分的抗衰老或抗氧化組合物
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗衰老或抗氧化組合物，含有任何一種或多種源于人參，包括野山參及高麗參形成層的植物細(xì)胞系、其提取物、溶解產(chǎn)物和培養(yǎng)物作為活性成分。
背景技術(shù)：
目前世界上大約存在300，000多種植物，人們已知含有有用成分的植物會(huì)表現(xiàn)出各種生理活性。這些有用成分是在正常代謝過程中其次產(chǎn)生的并且積聚在細(xì)胞內(nèi)特定位置的次級(jí)代謝產(chǎn)物。這些有用成分引來越來越多的關(guān)注，因?yàn)閺纳蜕鷳B(tài)學(xué)的觀點(diǎn)來說它們有助于植物抵御微生物或外來動(dòng)物并在生理活性方面有利。由植物產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，包括生物堿類，黃酮類，類胡蘿卜素，苷類，萜類化合物等。許多這樣的次級(jí)代謝產(chǎn)物表現(xiàn)出保濕、舒緩肌膚及調(diào)整膚色、屏蔽紫外線、美白、 去除角質(zhì)、抗衰老、抗氧化、抗皺、抗菌、消炎和抗癌等功效。因此，各種含有植物來源有用成分的化妝產(chǎn)品被開發(fā)出來。舉例來說，含有植物來源有用成分的化妝產(chǎn)品包括一種 含有從桑葉分離出來的桑皮黃素的美白化妝品組合物(韓國(guó)專利登記號(hào)25582)，一種含有草豆蔻提取物的化妝品組合物(韓國(guó)專利登記號(hào)295875)，一種含人參提取物的防止皮膚老化成分的化妝品組合物(韓國(guó)專利登記號(hào)361433)，以及含有大型藻類的減少皺紋的化妝品組合物(韓國(guó)專利登記號(hào)2001-25580)。此外，含有各種植物提取物的化妝產(chǎn)品已經(jīng)被開發(fā)出來，包括栗樹皮、蒼耳子、葫蘆、蘇木(Caesapinia sappan L.)、虎杖、錦葵、薄荷、赤楊 (Alnus juponica)、香草、樺木、茯苓(Pora cocos)、石榴、柳皮、綠豆、玫瑰等。這些植物來源的有用成分是從植物中直接提取的次級(jí)代謝產(chǎn)物，因?yàn)樗鼈兊纳锖铣赏緩绞菑?fù)雜的。同時(shí)，皮膚是人體的主要防御屏障，它的作用是保護(hù)人體內(nèi)的各個(gè)器官不受溫度和濕度變化的影響，以及外部環(huán)境的刺激，例如紫外線和污染物，并且在維持體內(nèi)平衡起到了重要作用。不過，紫外線、過度的來自外部環(huán)境的物理和化學(xué)刺激、壓力、營(yíng)養(yǎng)缺乏等使皮膚的正常功能退化，增加皮膚老化現(xiàn)象，例如堅(jiān)密度損失，角質(zhì)化和形成皺紋等。為了防止這些現(xiàn)象，保持肌膚更加健康和具彈性，人們一直在努力使用各種含有動(dòng)物、植物和微生物來源的生理活性物質(zhì)的化妝品來保持皮膚的內(nèi)在功能，激活皮膚細(xì)胞，從而有效抑制皮膚老化。然而，現(xiàn)有技術(shù)中的化妝品原材料存在各種問題，它們通常沒有足夠的效果或會(huì)引起皮膚的副作用。因此，本發(fā)明人做出了很多努力來開發(fā)來源于天然材料的組合物，它與現(xiàn)有的抗老化劑和抗氧化劑相比具有最小的副作用以及優(yōu)秀的抗老化和抗氧化效果。因而，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，來自人參形成層的同源細(xì)胞系、其溶解產(chǎn)物、提取物或培養(yǎng)物具有優(yōu)秀的抑制老化和氧化的作用，從而完成了本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種來自天然材料的組合物，與現(xiàn)有的抗老化劑和抗氧化劑相比它具有最小的副作用并表現(xiàn)出的抗老化和抗氧化效果。為了實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)，本發(fā)明提供了一種含有來源于人參的形成層任意一種或多種細(xì)胞系、其溶解產(chǎn)物、提取物或培養(yǎng)物的抗衰老或抗氧化組合物，并具有以下特征(a)處于固有未分化的狀態(tài)；(b)是同源細(xì)胞系；并且(c)形態(tài)學(xué)上的特點(diǎn)是有很多液泡。本發(fā)明還提供了一種含有任意一種或多種所述的細(xì)胞系、其提取物、溶解產(chǎn)物和培養(yǎng)物的抗衰老化妝品組合物。本發(fā)明還提供了一種含有任意一種或多種所述的細(xì)胞系、其提取物、溶解產(chǎn)物和培養(yǎng)物的抗衰老或抗氧化功能食品。本發(fā)明的其他特征和實(shí)施例將在下面的詳細(xì)說明書和所附權(quán)利要求中更全面地
展示。附圖簡(jiǎn)要說明

圖1是顯示本發(fā)明的細(xì)胞系獲取過程的一組照片，從野山參的形成層得到的細(xì)胞系。圖2是顯示用各種濃度的本發(fā)明的來自野山參形成層的同源細(xì)胞系的提取物或細(xì)胞系的培養(yǎng)物，處理正常人體皮膚成纖維細(xì)胞(NHF)的結(jié)果圖表，并研究細(xì)胞系的提取物或培養(yǎng)物是否對(duì)成纖維細(xì)胞具有細(xì)胞毒性。圖2中，濕濕的人參細(xì)胞，干干的人參細(xì)胞，培養(yǎng)基人參細(xì)胞的培養(yǎng)基，El 誘導(dǎo)-1階段，E2 誘導(dǎo)-2階段，G 生長(zhǎng)階段。圖3是顯示用各種濃度的來自野山參形成層的同源細(xì)胞系的提取物或細(xì)胞系的培養(yǎng)物，處理正常人體皮膚成纖維細(xì)胞(NHF)的結(jié)果圖表，在0.5%的胎牛血清最小培養(yǎng)基中培養(yǎng)成纖維細(xì)胞，并研究來源于野生人參形成層的同質(zhì)細(xì)胞系提取物或培養(yǎng)物對(duì)成纖維細(xì)胞增殖的影響。圖3中，濕濕的人參細(xì)胞，干干的人參細(xì)胞，培養(yǎng)基人參細(xì)胞的培養(yǎng)基，El 誘導(dǎo)-1階段，E2 誘導(dǎo)-2階段，G 生長(zhǎng)階段。圖4是顯示用各種濃度的來自野山參形成層的同源細(xì)胞系的提取物或細(xì)胞系的培養(yǎng)物，處理正常人體皮膚成纖維細(xì)胞(NHF)的結(jié)果圖表，用UVB輻射處理成纖維細(xì)胞，并研究來源于野生人參形成層的同質(zhì)細(xì)胞系提取物或培養(yǎng)物是否抑制了由UVB輻射引起的 MMP-I表現(xiàn)增加。圖4中，濕濕的人參細(xì)胞，干干的人參細(xì)胞，培養(yǎng)基人參細(xì)胞的培養(yǎng)基，El 誘導(dǎo)-1階段，E2 誘導(dǎo)-2階段，G 生長(zhǎng)階段，RA 維生素A酸。圖5是顯示用各種濃度的來自野山參形成層的同源細(xì)胞系的提取物或細(xì)胞系的培養(yǎng)物，處理正常人體皮膚成纖維細(xì)胞(NHF)的結(jié)果圖表，用UVB輻射處理成纖維細(xì)胞，并研究來源于野生人參形成層的同質(zhì)細(xì)胞系提取物或培養(yǎng)物是否抑制了由UVB輻射引起的活性氧增加。圖5中，濕濕的人參細(xì)胞，干干的人參細(xì)胞，培養(yǎng)基人參細(xì)胞的培養(yǎng)基，El 誘導(dǎo)-1階段，E2 誘導(dǎo)-2階段，G 生長(zhǎng)階段，RA 維生素A酸。圖6是顯示來源于野生人參形成層的同質(zhì)細(xì)胞系的提取物或培養(yǎng)物對(duì)由UV輻射引起的MMP-I生成的抑制效果的圖表。圖7是顯示本發(fā)明的來源于野生人參形成層的同質(zhì)細(xì)胞系的提取物或培養(yǎng)物對(duì)由UV輻射引起的活性氧的去除效果的圖表。本發(fā)明的最佳實(shí)施方式
除非另有定義，這里所用的所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員理解的具有相同的含義。一般來說，此處使用的術(shù)語是眾所周知的并且是本領(lǐng)域傳統(tǒng)使用的。在本發(fā)明的詳細(xì)說明中使用的主要術(shù)語定義如下。

本文中所使用的術(shù)語“形成層”是指能增厚莖和根部來使植物體積增長(zhǎng)的組織。 據(jù)報(bào)道，當(dāng)形成層，其中一個(gè)發(fā)生最活躍的細(xì)胞分裂的分生組織，作為植物組織培養(yǎng)的外植體，能夠快速和大規(guī)模地生產(chǎn)細(xì)胞(韓國(guó)專利登記號(hào)10-0533120)。本文中所使用的術(shù)語“溶解產(chǎn)物”指的是通過化學(xué)方法，例如洗滌劑，或者物理方法破壞細(xì)胞得到的細(xì)胞溶解產(chǎn)物。術(shù)語細(xì)胞系的“提取物”是指通過將細(xì)胞溶解在一種溶劑中并對(duì)其進(jìn)行分離所得到的物質(zhì)，提取物可以通過蒸餾或蒸發(fā)進(jìn)行濃縮。并且，術(shù)語細(xì)胞系的“培養(yǎng)基”是指培養(yǎng)細(xì)胞之后將細(xì)胞移除所得到的細(xì)胞培養(yǎng)基。此外，本文所使用的術(shù)語細(xì)胞系的“培養(yǎng)物”是指含有培養(yǎng)基和/或培養(yǎng)的細(xì)胞系的材料，培養(yǎng)的細(xì)胞系是包括在培養(yǎng)環(huán)境下分化的細(xì)胞系或具有改進(jìn)的生產(chǎn)和/或分泌有用物質(zhì)能力的細(xì)胞系。本文中所使用的術(shù)語“固有未分化”是指細(xì)胞在特殊細(xì)胞形態(tài)的消失過程中，細(xì)胞不處于未分化狀態(tài)，而是維持在最初的預(yù)分化狀態(tài)。一方面，本發(fā)明提供了一種含有任意一種或多種來自人參的形成層的細(xì)胞系、其溶解產(chǎn)物、提取物或培養(yǎng)物作為活性成分的抗衰老或抗氧化組合物。在本發(fā)明中，人參包括野生人參或人參(Lian M. L.等，·，J. Plant Biology, 45 201,2002 ；Han J. Y. et al.， J.Plant Biology, 49 26,2006 ；Teng W. L. et al., Tissue and Organ Culture, 68 233, 2002)。在本發(fā)明中，野生人參或人參包括野外種植人參或組織培養(yǎng)的人參(不定根和來源于不定根的細(xì)胞系)。本發(fā)明的源自人參形成層的細(xì)胞系具有以下特點(diǎn)(a)處于固有的未分化狀態(tài)； (b)是同源細(xì)胞系；并且(c)形態(tài)學(xué)上的特點(diǎn)是有很多液泡。本發(fā)明的源自人參形成層的細(xì)胞系還具有以下附加的特征(a)在懸浮培養(yǎng)基中是單細(xì)胞形態(tài)；(b)與其他來自非人參形成層組織的細(xì)胞系相比，在生物反應(yīng)器中對(duì)切應(yīng)力具有低敏感性，以及(c)與其他來自非人參形成層組織的細(xì)胞系相比，具有較高的生長(zhǎng)速度，并且培養(yǎng)穩(wěn)定。本發(fā)明的細(xì)胞系是使用包括以下步驟的分離方法獲得
(a)取得含有人參形成層的貯藏根組織；(b)向取得的含有形成層的貯藏根組織施加滲透壓，然后在含有IAA(吲哚-3乙酸)或IBA(吲哚-3 丁酸)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)含形成層的貯藏根組織，從而誘導(dǎo)形成層衍生的細(xì)胞系；及(c)收集誘導(dǎo)的來源于形成層的細(xì)胞系。在本發(fā)明方法的步驟(b)中，滲透壓的應(yīng)用特別是為了誘導(dǎo)在形成層中細(xì)胞系。 優(yōu)選地，是在含IAA-或IBA-的培養(yǎng)基中進(jìn)行組織培養(yǎng)之前進(jìn)行，使除了形成層的一般組織 (即外皮、韌皮部、木質(zhì)部和木髓)失去分裂能力，使它們?cè)谑褂眯纬蓪臃至烟囟ê蔂柮扇?IAA或IBA處理時(shí)壞死。在此，優(yōu)選地，滲透劑使用量為0. 5-2M，滲透壓在冷態(tài)或在室溫下施加16-24小時(shí)，然后除去。然而，本發(fā)明的范圍不限于此，因?yàn)闈舛?、滲透劑的處理時(shí)間和溫度會(huì)隨植物種類和組織狀態(tài)改變。在步驟(b)中，IAA或IBA優(yōu)選含有量為0. l-5mg/l。優(yōu)選地，步驟(c)是在含有一種或更多的2，4-D(2，4_ 二氯苯氧基乙酸)、毒莠定和 IBA的培養(yǎng)基中進(jìn)行來源于形成層的細(xì)胞系的增殖，然后收集來源于形成層的細(xì)胞系。在此，2，4-D，毒莠定和IBA中的任何一種的優(yōu)選含量為l_5mg/L，更優(yōu)選2mg/升。 在本發(fā)明中，細(xì)胞系的培養(yǎng)基優(yōu)選在額外地含有3_5襯％粗糖或糖、和/或一種或多種茉莉酮酸甲酯、殼聚糖、苯丙氨酸、苯甲酸、ABA、水楊酸和醋酸鈉作為誘導(dǎo)子的培養(yǎng)基中獲得。在此，培養(yǎng)基優(yōu)選包含3-5wt%的粗糖或糖；和至少一個(gè)物質(zhì)選自茉莉酮酸甲酯、 真菌提取物、細(xì)菌提取物、酵母提取物、殼聚糖、葡甘露聚糖、葡聚糖、苯丙氨酸、苯甲酸、水楊酸、花生四烯酸、STS、mevalonalonate N-benzolyglycine、ABA、SNP, IPP, BHT, CCC、乙烯禾U、馬尿酸、硝酸鈰銨、硝酸銀、硫酸氧釩、對(duì)氨基苯甲酸、油菜素內(nèi)酯、海藻酸鈉和乙酸鈉。此外，在本發(fā)明，可以利用用誘導(dǎo)子處理細(xì)胞系而獲得的培養(yǎng)物對(duì)細(xì)胞系施加物理和化學(xué)應(yīng)力，該誘導(dǎo)子包括紫外線輻射、熱、乙烯、抗真菌劑、抗生素、重金屬鹽和高濃度
Τττ . ο本發(fā)明所使用的培養(yǎng)基是用于植物組織培養(yǎng)的傳統(tǒng)培養(yǎng)基，其中的例子包括但不限于N6培養(yǎng)基、SH培養(yǎng)基、MS培養(yǎng)基、AA培養(yǎng)基、LS培養(yǎng)基、B5培養(yǎng)基、WPM培養(yǎng)基、LP培養(yǎng)基、懷特培養(yǎng)基(white medium)、⑶培養(yǎng)基、DKW培養(yǎng)基、DCR培養(yǎng)基等。在本發(fā)明中，提取物優(yōu)選由使用一種溶劑得到，溶劑選自由以下物質(zhì)構(gòu)成的組，蒸餾水、乙醇、丙酮、DMSO (二甲亞砜)及其混合溶劑。在此，醇的例子包括具有1至5個(gè)碳原子的醇，例如甲醇和乙醇。在本發(fā)明中，提取物可以通過用蒸餾水、甲醇、丙酮順序分餾細(xì)胞系得到。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，合成膠原蛋白(皮膚真皮的主要成分)的成纖維細(xì)胞用所述細(xì)胞系提取物或培養(yǎng)物進(jìn)行處理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞系提取物和培養(yǎng)基對(duì)成纖維細(xì)胞的增殖具有極好的效果，表明本發(fā)明的細(xì)胞系提取物或培養(yǎng)物具有增加皮膚彈性的效果。 在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的細(xì)胞系提取物或培養(yǎng)物具有抑制降解皮膚膠原蛋白而形成皮膚皺紋的MMP-I的表現(xiàn)，這表明它們具有阻止和減少皺紋的效果。在本發(fā)明的還另一個(gè)實(shí)施例中，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的細(xì)胞系提取物或培養(yǎng)物具有抑制紫外輻射誘導(dǎo)的活性氧的效果，表明它們具有抗氧化作用。因?yàn)楸绢I(lǐng)域技術(shù)人員公知具有抗氧化活性的組合物具有抗老化效果，本發(fā)明的組合物具有抗氧化效果是顯而易見的。在本發(fā)明的還另一個(gè)實(shí)施例中，為了保證客觀性，由外部檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行本發(fā)明的細(xì)胞系提取物和培養(yǎng)物的抗衰老及抗氧化試驗(yàn)。結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)與公知具有優(yōu)秀抗老化效果的RA和野山參提取物相比，本發(fā)明的細(xì)胞系提取物和培養(yǎng)物具有極其優(yōu)秀的抗衰老及抗氧化效果。此外，還可以看出，與野外栽培的野生人參相比，本發(fā)明的細(xì)胞系提取物和培養(yǎng)物具有更多的抗氧化效果。因此，如上所述我們發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞系提取物具有抗衰老作用及抗氧化活性。至此，雖然本發(fā)明沒有特定的實(shí)施例顯示含有細(xì)胞系的組合物顯示出抗衰老的作用及抗氧化活性， 但對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說含有本發(fā)明的細(xì)胞系或其溶解產(chǎn)物的組合物也具有抗衰老和抗氧化活性是顯而易見的。含有任何一種或多種本發(fā)明的細(xì)胞系、其提取物、溶解產(chǎn)物和培養(yǎng)物的抗衰老或抗氧化組合物可以以含有任意一種或多種所述細(xì)胞系、其提取物、溶解產(chǎn)物和培養(yǎng)物的一種或混合物與至少一種可藥用的載體、賦形劑或稀釋劑的藥用組合物的形式提供。該細(xì)胞系、其提取物、溶解產(chǎn)物或培養(yǎng)物可以根據(jù)疾病及其嚴(yán)重程度、病人的年齡、體重、健康狀況、性別、給藥途徑和治療周期選用藥學(xué)有效量用于藥學(xué)組合物中。
本文中所使用的術(shù)語“可藥用的組合物”是指生理上可以接受的組合物，當(dāng)應(yīng)用于人體不會(huì)引起過敏反應(yīng)或如胃腸道紊亂或眩暈的類似反應(yīng)。所述載體、賦形劑或稀釋劑的例子可包括乳糖，葡萄糖，蔗糖，山梨醇，甘露醇，木糖醇，赤蘚糖醇，麥芽糖醇，淀粉，阿拉伯橡膠，海藻酸鈉，明膠，磷酸鈣，硅酸鈣，纖維素，甲基纖維素，聚乙烯吡咯烷酮，水，羥苯基甲酯，羥苯基丙酯，硬脂酸鎂和礦物油。藥學(xué)組合物還可含有附加的填料，抗凝聚劑，潤(rùn)滑劑，潤(rùn)濕劑，香料，乳化劑和防腐齊U。此外，本發(fā)明的藥學(xué)組合物可以使用本領(lǐng)域公知的配方制作，例如，在對(duì)哺乳動(dòng)物給藥后提供活性成分的速釋、緩釋或延遲釋的組合物配方。該組合物可以是粉末，顆粒，片劑，乳齊 ，糖漿劑，氣霧劑，軟或硬膠囊，無菌注射液，無菌粉末等形式。 在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種抗衰老化妝品組合物，含有任意一種或多種所述的來自人參形成層的細(xì)胞系、其提取物、溶解產(chǎn)物和培養(yǎng)物作為活性成分。本文中所使用的術(shù)語“功能性化妝產(chǎn)品”是指通過加入任意一種或多種本發(fā)明的細(xì)胞系、其提取物、溶解產(chǎn)物和培養(yǎng)物，使功能得到改進(jìn)的化妝產(chǎn)品。例如，含有本發(fā)明的細(xì)胞系、其提取物、溶解產(chǎn)物或培養(yǎng)物的抗衰老化妝組合物可用于制備功能性化妝產(chǎn)品。本發(fā)明的化妝品組合物除了含有細(xì)胞系或其溶解產(chǎn)物、提取物或培養(yǎng)基作為活性成分，還可包含化妝品的傳統(tǒng)性成分。例如，化妝品組合物可含有如抗氧化劑，穩(wěn)定劑，溶解齊U，維生素，色素和香料以及載體的傳統(tǒng)助料。本發(fā)明的化妝品組合物可制備成本領(lǐng)域的任意配方產(chǎn)品。優(yōu)選地，化妝品組合物可配制成如下劑型，該劑型選自由護(hù)膚乳液，營(yíng)養(yǎng)乳液，營(yíng)養(yǎng)霜，按摩霜，滋養(yǎng)精華，面膜，打底霜，粉底，身體油，發(fā)油，香波和柔順劑組成的組。本發(fā)明的化妝品組合物，其包含一種或多種本發(fā)明的細(xì)胞系、其提取物、溶解產(chǎn)物和培養(yǎng)物，具有抗氧化作用，因而具有清除皮膚自由基和保護(hù)細(xì)胞內(nèi)抗氧化系統(tǒng)的作用。因此，本發(fā)明的化妝品組合物能夠顯示出阻止和延緩，由如自由基氧化導(dǎo)致的皮膚老化的作用。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及包含一種或多種來自人參形成層的細(xì)胞系、其溶解產(chǎn)物、提取物和培養(yǎng)物作為活性成分的抗衰老或抗氧化功能性食品。本文中所使用的術(shù)語“功能性食品”指的是通過加入本發(fā)明的細(xì)胞系、其溶解產(chǎn)物、提取物或培養(yǎng)物，使功能得到改進(jìn)的食品。
實(shí)施例下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明?？梢岳斫獾氖牵@些實(shí)施例僅用于對(duì)本發(fā)明的說明，不能理解為限制本發(fā)明的范圍。特別地，雖然下列實(shí)施例證實(shí)了來自人參形成層的細(xì)胞系的提取物和培養(yǎng)基具有皮膚抗衰老的效果，但對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說顯然細(xì)胞系或其溶解產(chǎn)物的使用可以提供與其相同的結(jié)果。實(shí)施例1來自野生人參形成層的細(xì)胞系的制備1-1植物材料的制備圖1(a)的“Α”展示的是本發(fā)明中使用的野山參的典型特征。為了使用購(gòu)買的野生人參主根，購(gòu)買主根后，用自來水除去表面的泥土或其他污染物，用液體洗滌劑清洗主根表面。然后，可將主根處于自來水中。水洗的根組織放置在一個(gè)凈化臺(tái)的無菌燒瓶里，用70% 乙醇消毒30秒到1分鐘。然后，用無菌水沖洗，并用含有1-1. 5%的次氯酸鈉(Jimsei，日本)的消毒液處理約5-15分鐘。在這個(gè)時(shí)候，為了讓消毒液有效地滲透到組織，往組織上加入幾滴TWEEN 20(聚氧乙烯山梨糖醇酐單月桂酸酯，Jimsei，日本)。在此之后，用無菌水沖洗該組織3-5次。為了防止消毒組織發(fā)生褐變，將消毒的主根放置在含有BIM(褐變抑制培養(yǎng)基)的抗氧化劑中，并搖晃培養(yǎng)基約30分鐘至1小時(shí)。將培養(yǎng)的組織放在無菌濾紙上以除去水分。所用的BIM的組成成分和成分濃度如表1中所示。<表1>BIM的組成成分和成分濃度
權(quán)利要求
1.一種抗老化或抗氧化組合物，其含有來源于人參的形成層并具有以下特征的任意一種或多種細(xì)胞系；其提取物；其溶解產(chǎn)物以及其培養(yǎng)物(a)處于固有未分化的狀態(tài)；(b)是同源細(xì)胞系；并且(c)形態(tài)學(xué)上的特點(diǎn)是有很多液泡。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗老化或抗氧化組合物，其特征在于，該細(xì)胞系進(jìn)一步具有(a)在懸浮培養(yǎng)基中是單細(xì)胞形態(tài)；(b)與其他來自非人參形成層組織的細(xì)胞系相比，在生物反應(yīng)器中對(duì)切應(yīng)力具有低敏感性，以及(c)與其他來自非人參形成層組織的細(xì)胞系相比，具有較高的生長(zhǎng)速度，并且培養(yǎng)穩(wěn)定。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗老化或抗氧化組合物，其特征在于，該細(xì)胞系是使用包含以下步驟的分離方法獲得(a)獲得含有人參形成層的貯藏根組織；(b)向獲得的含有形成層的貯藏根組織施加滲透壓，然后在含有IAA(吲哚-3乙酸)或 IBA(吲哚-3丁酸)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)含形成層的貯藏根組織，從而誘導(dǎo)來源于形成層的細(xì)胞系；及(c)收集誘導(dǎo)的來源于形成層的細(xì)胞系。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗老化或抗氧化組合物，其特征在于，通過額外地在培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞系獲得該培養(yǎng)物，上述培養(yǎng)基含有3-5wt%粗糖或糖；或至少一個(gè)選自由甲基茉莉酮酸酯、真菌提取物、細(xì)菌提取物、酵母提取物、殼聚糖、葡甘露聚糖、葡聚糖、苯丙氨酸、苯甲酸、水楊酸、花生四烯酸、STS、mevalonalonate N-benzolyglycine、ABA、SNP, IPP, BHT、CCC、乙烯利、馬尿酸、硝酸鈰銨、硝酸銀、硫酸氧釩、對(duì)氨基苯酸、油菜素內(nèi)酯、海藻酸鈉和乙酸鈉組成的組中的物質(zhì)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的抗老化或抗氧化組合物，其特征在于，人參是野山參或人參。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗老化或抗氧化組合物，其特征在于，該提取物是使用選自由蒸餾水、乙醇、丙酮、DMSO(二甲基亞砜)及其混合溶劑組成的組的溶劑獲得。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗老化或抗氧化組合物，其特征在于，提取物是用蒸餾水，甲醇，丙酮按順序分餾細(xì)胞系而獲得。
8.一種抗老化化妝品組合物，其含有來源于人參的形成層并具有以下特征的任意一種或多種細(xì)胞系；其提取物；其溶解產(chǎn)物以及其培養(yǎng)物(a)處于固有未分化的狀態(tài)；(b)是同源細(xì)胞系；并且(c)形態(tài)學(xué)上的特點(diǎn)是有很多液泡。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的抗老化化妝品組合物，其特征在于，該細(xì)胞系進(jìn)一步具有(a)在懸浮培養(yǎng)基中是單細(xì)胞形態(tài)；(b)與其他來自非人參形成層組織的細(xì)胞系相比，在生物反應(yīng)器中對(duì)切應(yīng)力具有低敏感性，以及(C)與其他來自非人參形成層組織的細(xì)胞系相比，具有較高的生長(zhǎng)速度，并且培養(yǎng)穩(wěn)定。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的抗老化化妝品組合物，其特征在于，該細(xì)胞系是使用包含以下步驟的分離方法獲得(a)取得含有人參形成層的貯藏根組織；(b)向取得的含有形成層的貯藏根組織施加滲透壓，然后在含有IAA(吲哚-3乙酸)或 IBA (吲哚-3 丁酸)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)含形成層的貯藏根組織，從而誘導(dǎo)來源于形成層的細(xì)胞系；及(c)收集誘導(dǎo)來源于形成層的細(xì)胞系。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的抗老化化妝品組合物，其特征在于，通過額外地在培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞系獲得該培養(yǎng)物，上述培養(yǎng)基含有3-5wt %粗糖或糖，或至少一個(gè)選自由甲基茉莉酮酸酯、真菌提取物、細(xì)菌提取物、酵母提取物、殼聚糖、葡甘露聚糖、葡聚糖、苯丙氨酸、苯甲酸、水楊酸、花生四烯酸、STS、mevalonalonate N-benzolyglycine、ABA、SNP、IPP、BHT、 CCC、乙烯利、馬尿酸、硝酸鈰銨、硝酸銀、硫酸氧釩、對(duì)氨基苯甲酸、油菜素內(nèi)酯、海藻酸鈉和乙酸鈉組成的組中的物質(zhì)。
12.根據(jù)權(quán)利要求8至11中任一項(xiàng)所述的抗老化化妝品組合物，其特征在于，該組合物抑制MMP-I生成。
13.—種抗老化或抗氧化功能食品組合物，其含有來源于人參的形成層并具有以下特征的任意一種或多種細(xì)胞系；其提取物；其溶解產(chǎn)物以及其培養(yǎng)物(a)處于固有未分化的狀態(tài)；(b)是同源細(xì)胞系；并且(c)形態(tài)學(xué)上的特點(diǎn)是有很多液泡。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的抗老化或抗氧化功能食品組合物，其特征在于，該細(xì)胞系進(jìn)一步具有(a)在懸浮培養(yǎng)基中是單細(xì)胞形態(tài)；(b)與其他來自非人參形成層組織的細(xì)胞系相比，在生物反應(yīng)器中對(duì)切應(yīng)力具有低敏感性，以及(c)與其他來自非人參形成層組織的細(xì)胞系相比，具有較高的生長(zhǎng)速度，并且培養(yǎng)穩(wěn)定。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的抗老化或抗氧化功能食品組合物，其特征在于，該細(xì)胞系是使用包含以下步驟的分離方法獲得(a)取得含有人參形成層的貯藏根組織；(b)向取得的含有形成層的貯藏根組織施加滲透壓，然后在含有IAA(吲哚-3乙酸)或 IBA (吲哚-3 丁酸)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)含形成層的貯藏根組織，從而誘導(dǎo)來源于形成層的細(xì)胞系；及(c)收集誘導(dǎo)的來源于形成層的細(xì)胞系。
16.根據(jù)權(quán)利要求13所述的抗老化或抗氧化功能性食品組合物，其特征在于，通過額外地在培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞系獲得該培養(yǎng)物，上述培養(yǎng)基含有3-5wt%粗糖或糖；或至少一個(gè)選自由甲基茉莉酮酸酯、真菌提取物、細(xì)菌提取物、酵母提取物、殼聚糖、葡甘露聚糖、葡聚糖、苯丙氨酸、苯甲酸、水楊酸、花生四烯酸、STS、mevalonalonateN-benzolyglycine、 ABA、SNP, IPP, BHT, CCC、乙烯利、馬尿酸、硝酸鈰銨、硝酸銀、硫酸氧釩、對(duì)氨基苯甲酸、油菜素內(nèi)酯、海藻酸鈉和乙酸鈉組成的組中的物質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗老化或抗氧化組合物，其含有一種來源于包括野山參及高麗參的人參形成層的植物干細(xì)胞系，或其提取物、溶解產(chǎn)物和培養(yǎng)物作為活性成分。該組合物與現(xiàn)存的抗老化劑和抗氧化劑相比，具有最小的副作用，對(duì)此對(duì)皮膚是安全的。并且，本發(fā)明的組合物顯示抗氧化效果，抑制皮膚老化的主要原因的由暴露于UV輻射引起的活性氧。并且，本發(fā)明的組合物可以有效地減少或抑制與衰老有關(guān)的因素。因此，本發(fā)明的組合物對(duì)預(yù)防和抑制老化是有用的。
文檔編號(hào)A61K8/97GK102159182SQ200980130417
公開日2011年8月17日 申請(qǐng)日期2009年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月13日
發(fā)明者吳日錫, 張美玉, 李大熙, 李恩景, 林敏政, 陳榮雨 申請(qǐng)人:云火公司