專利名稱：多不飽和脂肪酸軟膠囊及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種保健品，特別是涉及一種對(duì)人體具有改善睡眠作用，抗氧化功能的多不飽和脂肪酸軟膠囊及其制備方法。
二.
背景技術(shù)：
近年來，隨著人們對(duì)生活質(zhì)量要求的不斷提高，保健品作為防治疾病，保持健康，尤其是改善生活質(zhì)量越來越受到重視。目前市場上的保健品種類多，但是也存在著各式各樣的不足。改善睡眠，抗氧化，延緩衰老方面的保健品，成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。很多藥品，雖然能改善睡眠，抗氧化，延緩衰老，但對(duì)人體副作用大，而且無法協(xié)同作用，保持人體生理系統(tǒng)穩(wěn)定。
為了解決上述抗氧化，延緩衰老問題，目前市場上有很多維生素E膠囊，如申請(qǐng)日為2007年4月23號(hào)的中國專利ZL200710068178.X公開了一種“維生素E的復(fù)合膠囊”。該維生素E的復(fù)合膠囊由維生素E、橄欖油和玫瑰花油為原料組分，各組分的重量百分比范圍為維生素E20％-60％，橄欖油39.9％-79.9％，玫瑰花油0.01％-0.1％；該發(fā)明所提供的提供維生素E的復(fù)合膠囊既可內(nèi)服又可外用，口服劑量為每日1粒，一個(gè)月為一個(gè)療程，可常年服用；外用時(shí)它可與護(hù)膚品混合使用，直接涂抹于肌膚；具有抗氧化、抗炎、延緩衰老、祛黃褐斑、預(yù)防心腦血管疾病等保健作用。
三.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種可以改善睡眠作用，抗氧化功能的保健品及其制備方法。
一種多不飽和脂肪酸軟膠囊，包括軟膠囊皮和內(nèi)容物，所述的內(nèi)容物中含有下述重量百分含量的有效成分 亞麻酸 7.6-8.8％； 亞油酸 49.0-60.0％； 油酸 7.0-12.9％； 靈芝三萜 0.25-0.5％； 維生素E 1.6-3.0％； 余量為人體可接受的試劑。
本發(fā)明的內(nèi)容物中允許含有任何人體可接受的試劑，如溶劑或輔料，具體如各種飽和/不飽和脂肪酸，有機(jī)溶劑等。
優(yōu)選地，所述內(nèi)容物中含有下述重量百分含量的有效成分亞麻酸為8.0％，亞油酸為50.0％，油酸為8.0％，靈芝三萜為0.27％，維生素E為2.0％。
一種所述多不飽和脂肪酸軟膠囊的制備方法，包括以下步驟 1)將火麻仁油、靈芝孢子油、天然維生素E配料，制成軟膠囊內(nèi)容物混懸液； 2)將明膠、甘油、純化水按照1∶0.4～0.6∶1的重量比投入溶膠器中，加熱、溶膠，制成軟膠囊皮； 3)將軟膠囊內(nèi)容物混懸液和軟膠囊皮通過軟膠囊自動(dòng)裝囊機(jī)進(jìn)行充填壓丸，控制每粒軟膠囊內(nèi)容物重量為0.8～1.2g；軟膠囊定型后，再進(jìn)行洗丸、干燥、燈檢、包裝即得成品。
優(yōu)選地，步驟(2)中明膠、甘油、純化水重量比為1∶0.4∶1。
優(yōu)選地，步驟(3)中控制每粒軟膠囊內(nèi)容物重量為1.0g。
本發(fā)明所述的火麻仁油、靈芝孢子油、天然維生素E均可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的制備方法制得，也可通過商業(yè)途徑獲得。
火麻仁油，是以火麻仁為原料，經(jīng)加工提煉精制而成，富含多種不飽和脂肪酸，包括亞麻酸、亞油酸、油酸，具有多種藥理作用?；鹇槿蕿樯？浦参锎舐榈母稍锍墒旃麑?shí)，性平，味甘，具有潤腸通便的作用，在我國已有3000年的食用歷史。經(jīng)藥理研究證實(shí)，火麻仁油不僅對(duì)消化系統(tǒng)有作用，而且對(duì)人體其他系統(tǒng)也有較好的療效，如抗衰老、抗氧化、鎮(zhèn)痛、抗驚厥以及增強(qiáng)和延長環(huán)己巴比妥鈉的催眠作用和入睡時(shí)間等。
靈芝孢子油，是以靈芝破壁孢子粉為原料，采用超臨界二氧化碳流體萃取的方法，經(jīng)加工制成的。靈芝為多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子實(shí)體，性平，味甘，具有補(bǔ)氣安神，止咳平喘的功效。靈芝孢子粉是靈芝在生長過程中釋放出來的黑棕色粉末，經(jīng)科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，孢子粉是靈芝的精華部分，它集中了靈芝的最有效成分。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，靈芝孢子油中包含了靈芝孢子中的三萜類、多糖類及核苷類等全部有效成分，是靈芝孢子有效成分的集合體。
天然維生素E，是一種脂溶性維生素，也是迄今為止發(fā)現(xiàn)的唯一無毒的油脂類食品的天然抗氧化劑，它廣泛存在于植物的綠色部分以及禾本科種子的胚芽里。適量補(bǔ)充天然維生素E，能夠有助于延緩在細(xì)胞轉(zhuǎn)移和新陳代謝過程中發(fā)揮作用的某些蛋白質(zhì)的衰敗，從而保護(hù)腦組織和免疫系統(tǒng)免遭與年老有關(guān)的氧化破壞。天然維生素E與合成維生素E相比，不僅保持了維生素E原有的生理活性和天然屬性，其吸收度和安全性方面也具有合成品所不具備的明顯優(yōu)勢。有實(shí)驗(yàn)證明，天然維生素E的抗氧化和抗衰老性能指標(biāo)都數(shù)十倍于合成的維生素E。
本發(fā)明的多不飽和脂肪酸軟膠囊具有改善睡眠的保健功能，經(jīng)動(dòng)物功能和人體試食試驗(yàn)證明，還具有抗氧化的保健功能。
四.
具體實(shí)施例方式 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于此。
實(shí)施例1 一種多不飽和脂肪酸軟膠囊，包括軟膠囊皮和內(nèi)容物，所述的內(nèi)容物中含有下述重量百分含量的有效成分亞麻酸為8.0％，亞油酸為50.0％，油酸為8.0％，靈芝三萜為0.27％，維生素E為2.0％，余量為人體可接受的試劑。
一種所述多不飽和脂肪酸軟膠囊的制備方法，包括以下步驟 1)將火麻仁油、靈芝孢子油、天然維生素E配料，制成軟膠囊內(nèi)容物混懸液； 2)將明膠、甘油、純化水按照1∶0.4∶1的重量比投入溶膠器中，加熱、溶膠，制成軟膠囊皮； 3)將軟膠囊內(nèi)容物混懸液和軟膠囊皮通過軟膠囊自動(dòng)裝囊機(jī)進(jìn)行充填壓丸，控制每粒軟膠囊內(nèi)容物重量為1.0g；軟膠囊定型后，再進(jìn)行洗丸、干燥、燈檢、包裝即得成品。
實(shí)施例2 一種多不飽和脂肪酸軟膠囊，包括軟膠囊皮和內(nèi)容物，所述的內(nèi)容物中含有下述重量百分含量的有效成分亞麻酸為8.3％，亞油酸為55.0％，油酸為12.1％，靈芝三萜為0.37％，維生素E為2.5％，余量為人體可接受的試劑。
一種所述多不飽和脂肪酸軟膠囊的制備方法，包括以下步驟 1)將火麻仁油、靈芝孢子油、天然維生素E配料，制成軟膠囊內(nèi)容物混懸液； 2)將明膠、甘油、純化水按照1∶0.5∶1的重量比投入溶膠器中，加熱、溶膠，制成軟膠囊皮； 3)將軟膠囊內(nèi)容物混懸液和軟膠囊皮通過軟膠囊自動(dòng)裝囊機(jī)進(jìn)行充填壓丸，控制每粒軟膠囊內(nèi)容物重量為1.1g；軟膠囊定型后，再進(jìn)行洗丸、干燥、燈檢、包裝即得成品。
試驗(yàn)例 一、改善睡眠動(dòng)物試驗(yàn) 1材料與方法 1.1樣品本發(fā)明的多不飽和脂肪酸軟膠囊內(nèi)容物，內(nèi)容物為黃色油狀物。人口服推薦劑量為1g/粒，每日2次，每次2粒，成人體重按60kg計(jì)算，折合劑量0.067g/kg·bw。
1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)昆明種雄性小白鼠120只，由長沙市某實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部提供，體重為18～22kg，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(湘)2006-0001。
1.3實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件實(shí)驗(yàn)條件為屏障環(huán)境，實(shí)驗(yàn)期間溫度22℃～24℃，濕度52％～58％，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為SYXK(湘)2005-0001號(hào)。
1.4劑量選擇將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分成三個(gè)實(shí)驗(yàn)組，分別記為實(shí)驗(yàn)I組(延長戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn))、II組(戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實(shí)驗(yàn))、III組(巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn))，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組根據(jù)動(dòng)物體重隨機(jī)分為四組，每組10只。設(shè)多不飽和脂肪酸軟膠囊低、中、高劑量分別為0.34g/kg·bw、0.67g/kg·bw、2.00g/kg·bw(分別相當(dāng)于人體推薦劑量的5、10、30倍)。試驗(yàn)時(shí)，分別取3.40g、6.70g、20.00g多不飽和脂肪酸軟膠囊內(nèi)容物加食用植物油至100ml，配成相應(yīng)劑量受試液，供各劑量組灌胃。對(duì)照組給予等體積食用植物油。每日灌胃一次，灌胃量為0.1ml/10g·bw，連續(xù)30天。實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物自由攝食飲水。每天觀察動(dòng)物的活動(dòng)及生長情況。
1.5儀器與試劑AEU210電子天平、ES-C300S電子天平、秒表、戊巴比妥鈉、巴比妥鈉、生理鹽水。
1.6實(shí)驗(yàn)方法 1.6.1直接睡眠實(shí)驗(yàn) 觀察動(dòng)物給予3個(gè)劑量的受試樣品，對(duì)照組給予同體積食用植物油后，是否出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象，睡眠以翻正反射消失為指標(biāo)。當(dāng)小鼠置于背臥位時(shí)，能立即翻正身位，如超過30～60秒不能翻正者，即認(rèn)為翻正反射消失，進(jìn)入睡眠。翻正反射恢復(fù)即為動(dòng)物覺醒，翻正反射消失至恢復(fù)這段時(shí)間為動(dòng)物睡眠時(shí)間，記錄對(duì)照組與受試樣品組入睡動(dòng)物數(shù)及睡眠時(shí)間。
1.6.2延長戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物末次給予受試物后15min，給各組動(dòng)物按41mg/kg·bw劑量腹腔注射戊巴比妥鈉，注射量為0.1ml/10g·bw，以小鼠翻正反射消失為睡眠指標(biāo)，觀察受試物對(duì)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間的延長作用。
1.6.3戊巴比妥鈉閉下劑量催眠實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物末次給予受試物后15min，給各組動(dòng)物按32mg/kg·bw劑量腹腔注射戊巴比妥鈉，注射量為0.1ml/10g·bw，以小鼠翻正反射消失達(dá)1min以上作為入睡判斷標(biāo)準(zhǔn)，觀察給戊巴比妥鈉30min內(nèi)各組動(dòng)物發(fā)生睡眠的動(dòng)物數(shù)。
1.6.4巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物末次給予受試物后15min，給各組動(dòng)物按295mg/kg·bw劑量腹腔注射巴比妥鈉，注射量為0.1ml/10g，以翻正反射消失為指標(biāo)，觀察受試樣品對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響。
1.7統(tǒng)計(jì)分析處理用Spss 11.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化和統(tǒng)計(jì)分析。用Spss軟件統(tǒng)計(jì)比較時(shí)，先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若方差齊，采用單因素方差分析進(jìn)行總體比較，發(fā)現(xiàn)差異再用Dunnett法進(jìn)行多個(gè)劑量組與一個(gè)對(duì)照組均數(shù)間的兩兩比較。若方差不齊，則對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，滿足方差齊性檢驗(yàn)后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)總體比較有差異，則采用不要求方差齊性的Tamhane’sT2檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。
2結(jié)果 2.1多不飽和脂肪酸軟膠班對(duì)動(dòng)物體重的影響 由表1～3可以看出，多不飽和脂肪酸軟膠囊各劑量組與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)期間體重均無顯著性差異伊(P＞0.05)；動(dòng)物生長良好，未見明顯異常反應(yīng)。
表1多不飽和脂肪酸軟膠囊改善睡眠(I)組小鼠體重
表2多不飽和脂肪酸軟膠囊改善睡眠(II)組小鼠體重
表3多不飽和脂肪酸軟膠囊改善睡眠(III)組小鼠體重
2.2直接睡眠實(shí)驗(yàn) 表4多不飽和脂肪酸軟膠囊對(duì)小鼠直接睡眠實(shí)驗(yàn)的影響 由表4可見，多不飽和脂肪酸軟膠囊各劑量組與對(duì)照組，經(jīng)口灌胃后小鼠不出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象。
2.3延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠時(shí)間試驗(yàn) 表5
由表5可見，多不飽和脂肪酸軟膠囊各劑量組與對(duì)照組比較，對(duì)戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠時(shí)間有延長趨勢，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，高劑量組與對(duì)照組比較差異有顯著性(P＜0.05)。
2.4戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗(yàn) 表6多不飽和脂肪酸軟膠囊對(duì)閉下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠發(fā)生率的影響 由表6可見.，多不飽和脂肪酸軟膠囊高劑量組小鼠睡眠發(fā)生率與對(duì)照組比較，差異無顯著性(P＞0.05)。
2.5巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)臉 表7多不飽和脂肪酸軟膠囊對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響
3.小結(jié) 以0.34g/kg·bw、0.67g/kg·bw、2.00g/kg·bw劑量的多不飽和脂肪酸軟膠囊內(nèi)容物給小鼠灌胃30天，劑量組小鼠體重與對(duì)照組比較，差異無顯著性(P＞0.05)。對(duì)受試動(dòng)物無直接睡眠作用。2.00g/kg·bw劑量能明顯縮短巴比妥鈉睡眠潛伏期、延長閩劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠時(shí)間，與對(duì)照組比較差異有顯著性(P＜0.05)。對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠發(fā)生率無明顯影響。提示多不飽和脂肪酸軟膠囊具有改善睡眠作用。
二、抗氧化功能動(dòng)物試驗(yàn) 1材料和方法 1.1樣品本發(fā)明的多不飽和脂肪酸軟膠囊內(nèi)容物，內(nèi)容物為黃色油狀物。人口服推薦劑量為1g/粒，每日2次，每次2粒，成人體重按6okg計(jì)算，折合劑量0.067g/kg·bw。
1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)昆明種雄性12月齡小鼠40只，體重為50.62±2.38g。由長沙市某實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)服務(wù)部提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(湘)2006-0001，飼料由同一單位提供。
1.3實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件實(shí)驗(yàn)條件為屏障環(huán)境，實(shí)驗(yàn)期間實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度22℃～24℃，濕度52％～58％。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為SYXK(湘)2005-0001。1.4劑量選擇及樣品處理據(jù)人體口服推薦量，設(shè)樣品低、中、高劑量分別為0.34g/kg·bw、0.67g/kg·bw、2.00g/kg·bw(分別相當(dāng)于人體推薦劑量的5、10、30倍)。低、中、高劑量受試液配制時(shí)分別取樣品0.34g/kg·bw、0.67g/kg·bw、2.00g/kg·bw加食用植物油定容至100ml混勻，備用。
1.5主要儀器與試劑動(dòng)物臺(tái)秤、恒溫水浴箱、722型分光光度計(jì)、離心機(jī)丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)測試盒由南京建成生物工程研究所提供。
1.6實(shí)驗(yàn)方法 試驗(yàn)前，小鼠稱重后，尾尖采血20μl加入0.48mL蒸餾水制成4％溶血液，按試劑盒說明書測定溶血液中的MDA水平。按MDA水平將老齡小鼠分為對(duì)照組和三個(gè)劑量組。各劑量組小鼠按1.4中的劑量設(shè)計(jì)灌胃給予不同濃度的受試液，對(duì)照組予以等體積的食用植物油，每天灌胃一次，灌胃體積為0.1ml/10g·bw，連續(xù)30天。第31天，小鼠如上采尾尖血制備4％溶血液，測定MDA，并摘眼球采血，離心，取血清，按試劑盒說明書測定血清超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活力。
1.7實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)用Excel、Spssl1.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。用Spss軟件分析時(shí)，先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若方差齊，采用單因素方差分析進(jìn)行總體比較，發(fā)現(xiàn)差異再用Dunnett法進(jìn)行多個(gè)劑量組與一個(gè)對(duì)照組均數(shù)間的兩兩比較。若方差不齊則對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，滿足方差齊性檢驗(yàn)后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)總體比較有差異，則采用不要求方差齊性的Tamhane’sT2檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。
2結(jié)果 2.1多不飽和脂肪酸軟膠囊對(duì)老齡小鼠體重的影響 表1多不飽和脂肪酸軟膠囊對(duì)老齡小鼠體重的影響
由表1可見，各劑量組實(shí)驗(yàn)初始、實(shí)驗(yàn)中期、實(shí)驗(yàn)結(jié)束小鼠體重與對(duì)照組相比，無顯著性差異(P＞0.05)。
2.2多不飽和脂肪酸軟膠囊對(duì)老齡小鼠過氧化脂質(zhì)的影響 影響結(jié)果見表2。經(jīng)口給予不同劑量的樣品30天后，各劑量組試驗(yàn)?zāi)┤苎篗DA水平與對(duì)照組比較有降低趨勢，高劑量組與對(duì)照組比較差異有顯著性(P＜0.05)。
表2多不飽和脂肪酸軟膠囊對(duì)老齡小鼠MDA含量的影響

2.3多不飽和脂肪酸軟膠囊對(duì)老齡小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活力的影響見表3。經(jīng)口給予不同劑量的樣品30天后，各劑量組血清SOD活力與對(duì)照組比較有升高趨勢，高劑量組與對(duì)照組比較差異有顯著性(P＜0.05)。
表3多不飽和脂肪酸軟膠囊對(duì)老齡小鼠血清SOD活力的影響
2.4多不飽和脂肪酸軟膠囊對(duì)老齡小鼠血清谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活力的影響見表4。經(jīng)口給予不同劑量的樣品30天后，各劑量組血清GSH-Pox活力與對(duì)照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
表4多不飽和脂肪酸軟膠囊對(duì)老齡小鼠血清GSH-Px活力的影響
3結(jié)論 經(jīng)口灌胃給予老齡小鼠0.34g/kg·bw、0.67g/kg·bw、2.00g/kg·bw劑量的多不飽和脂肪酸軟膠囊內(nèi)容物30天，2.00g/kg·bw劑量能顯著降低血中脂質(zhì)過氧化物(MDA)含量、提高血清超氧化物歧化酶(SOD)活力(P＜0.05)，各劑量對(duì)血清谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活力無明顯影響。提示受試樣品具有抗氧化功能。
三、抗氧化功能人體試食實(shí)驗(yàn) 1材料和方法 1.1樣品 采用多不飽和脂肪酸軟膠囊1號(hào)、2號(hào)，二者在包裝、外觀、色澤及口感上基本一致，其中1號(hào)為本發(fā)明的多不飽和脂肪酸軟膠囊，2號(hào)為安慰劑，人口服每日2次，每次2粒。
1.2受試者選擇 1.2.1納入標(biāo)準(zhǔn)受試者性別不限。年齡45-65歲，身體健康狀況良好，無明顯腦、心、肝、肺、腎、血液疾患，無長期服藥史的自愿受試者并保證配合。
1.2.2受試者排除標(biāo)準(zhǔn)妊娠或哺乳期婦女；對(duì)保健食品過敏者；合并有心、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病患者；短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)的物品，影響到對(duì)結(jié)果判斷者；不符合納入標(biāo)準(zhǔn)，未按規(guī)定食用受試樣品，無法判定功效或資料不全影響功效或安全性判定者。
1.3實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組 采用自身和組間兩種對(duì)照設(shè)計(jì)。按受試者血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)水平隨機(jī)分為試食組和安慰劑對(duì)照組。并盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素如年齡、性別等，進(jìn)行均衡性檢驗(yàn)，以保證組間的可比性，按雙盲法進(jìn)行試食試驗(yàn)。
1.4試驗(yàn)方法 將符合納入標(biāo)準(zhǔn)并保證配合試驗(yàn)的自愿受試者，按照1.3隨機(jī)分為試食組和對(duì)照組。于2008年01月26日開始，試食組與對(duì)照組按推薦劑量服用樣品或安慰劑，連續(xù)175天。試驗(yàn)期間不改變?cè)瓉淼娘嬍沉?xí)慣，正常飲食。
2觀察指標(biāo) 各項(xiàng)觀察指標(biāo)于試食試驗(yàn)開始及結(jié)束時(shí)各測定一次。
2.1安全性指標(biāo) 2.1.1一般體格檢查試驗(yàn)前詳細(xì)詢問受試者健康狀況，了解受試者的精神、睡眠、飲食、大小便等情況，并測定體重、血壓、心率。對(duì)所有受試者進(jìn)行常規(guī)體格檢查及必要的實(shí)驗(yàn)室檢查。
2.1.2血常規(guī)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量測定等。
2.1.3尿常規(guī)PH值、白細(xì)胞、尿糖等。
2.1.4糞便常規(guī)蟲卵檢查等。
2.1.5生化檢測血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、膽固醇(CHOL)、甘油三酷(TG)、尿素氮(BUN)、肌配(Cr)、尿酸(UA)、血搪(GLU)測定。
2.1.6心電圖、腹部B超、胸透等檢查。
2.1.7不良反應(yīng)觀察。
2.2功效指標(biāo) 2.2.1過氧化脂質(zhì)含量觀察試驗(yàn)前后MDA的變化及MDA下降率。
MDA下降率＝(試驗(yàn)前MDA-試驗(yàn)后MDA)/試驗(yàn)前MDA×100％ 2.2.2超氧化物歧化酶觀察試驗(yàn)前后SOD的變化及SOD的升高率。
SOD升高率＝(試驗(yàn)后SOD-試驗(yàn)前SOD)/試驗(yàn)前SOD×100％ 2.2.3谷胱甘肽過氧化物酶觀察試驗(yàn)前后GSH-Px的變化及GSH-Px的升高率。GSH-Px升高率＝(試驗(yàn)后GSH-Px-試驗(yàn)前GSH-Px)/試驗(yàn)前GSH-Px×100％ 3.結(jié)果判定 3.1各功效觀察指標(biāo)試驗(yàn)前后自身比較和試食后組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，方可判定該指標(biāo)陽性； 3.2過氧化脂質(zhì)含量、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中任一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性，可判定受試樣品具有抗氧化功能作用。
4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 資料結(jié)果用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，自身配對(duì)資料采用配對(duì)t檢驗(yàn)，試驗(yàn)組和對(duì)照組之間在方差齊性的前提下，均數(shù)比較采用成組t檢驗(yàn)，否則進(jìn)行變量轉(zhuǎn)化后滿足方差齊性后采用t檢驗(yàn)，如果方差仍然不齊，采用秩和檢驗(yàn)。
5.結(jié)果 雙盲法觀察結(jié)束揭曉服食1號(hào)者為多不飽和脂肪酸軟膠囊，服食2號(hào)者為安慰劑。
5.1一般情況初始試驗(yàn)人群試驗(yàn)組51例，對(duì)照組51例，經(jīng)過175天試驗(yàn)后，試驗(yàn)組有0例受試者因資料不全或無法判斷效果被篩除，對(duì)照組有0例受試者因資料不全或無法判斷效果被篩除。最后有效試驗(yàn)人群試驗(yàn)組51例，對(duì)照組51例。試食前后，受試者精神、睡眠、飲食、大小便狀況未見異常。對(duì)照組男/女為24/27，年齡為51.90±5.86歲；試食組男/女為26/25，年齡為51.98±6.33歲。
5.2安全性觀察 5.2.1體重、血壓、心率、尿常規(guī)、大便常規(guī)、血常規(guī)及生化檢測見表1、2。食用受試物175天后，試食組和對(duì)照組體重、血壓、心率、血常規(guī)、尿常規(guī)、大便常規(guī)及生化指標(biāo)均未見明顯異常改變，提示多不飽和脂肪酸軟膠囊對(duì)機(jī)體健康無明顯損害。
表1試食前后體重、血壓、心率、血常規(guī)、尿常規(guī)、大便常規(guī)變化情況

表2試食前后生化指標(biāo)變化情況

5.2.2心電圖、腹部B超、胸透檢查，均未見明顯異常。
5.2.3試食期間未見與樣品相關(guān)的不良反應(yīng)。
5.3功效觀察 試食試驗(yàn)前后血清MDA、SOD、GSH-Px水平變化情況見表3、4。試驗(yàn)前，對(duì)照組和試食組血清MDA、SOD、GSH-Px水平比較，P值均大于0.05，提示兩組之間具有可比性。試驗(yàn)后試食組血清SOD活力與對(duì)照組試食后及自身試驗(yàn)前比較，差異具有顯著性(P＜0.05)。試食后試食組血清GSH-Px、MDA與對(duì)照組及自身試驗(yàn)前比較，差異無顯著性(P＞0.05)。試驗(yàn)組血清SOD較試驗(yàn)前升高21.17％，血清MDA較試驗(yàn)前降低6.11％，血清GSH-Px活力較試驗(yàn)前升高6.67％。
表3試食前后血清MDA、SOD、GSH-Px水平比較

注與試食前比較*P＜0.05，與對(duì)照組比較#P＜0.05 表4試食前后血清MDA、SOD、GSH-Px變化率 6.小結(jié) 受試者服用受試物175天后，結(jié)果表明試食后試食組血清SOD、GSH-Px活力分別較試驗(yàn)前提高21.17％、6.67％，血清MDA較試驗(yàn)前降低6.11％，其中SOD活力與對(duì)照組試食后及自身試驗(yàn)前比較，差異均有顯著性(P＜0.05)。試食前后體重、血壓、心率、血常規(guī)、尿常規(guī)、大便常規(guī)、生化檢測、心電圖、B超、胸透等安全性指標(biāo)均未見明顯異常改變。試食期間未見與樣品相關(guān)的不良反應(yīng)。上述結(jié)果提示送檢樣品具有抗氧化功能。
權(quán)利要求
1.一種多不飽和脂肪酸軟膠囊，包括軟膠囊皮和內(nèi)容物，其特征在于所述的內(nèi)容物中含有下述重量百分含量的有效成分
亞麻酸7.6-8.8％；
亞油酸49.0-60.0％；
油酸 7.0-12.9％；
靈芝三萜 0.25-0.5％；
維生素E 1.6-3.0％；
余量為人體可接受的試劑。
2.按照權(quán)利要求1所述的多不飽和脂肪酸軟膠囊，其特征在于所述內(nèi)容物中含有下述重量百分含量的有效成分亞麻酸為8.0％，亞油酸為50.0％，油酸為8.0％，靈芝三萜為0.27％，維生素E為2.0％。
3.一種權(quán)利要求1所述多不飽和脂肪酸軟膠囊的制備方法，其特征在于包括以下步驟
1)將火麻仁油、靈芝孢子油、天然維生素E配料，制成軟膠囊內(nèi)容物混懸液；
2)將明膠、甘油、純化水按照1∶0.4～0.6∶1的重量比投入溶膠器中，加熱、溶膠，制成軟膠囊皮；
3)將軟膠囊內(nèi)容物混懸液和軟膠囊皮通過軟膠囊自動(dòng)裝囊機(jī)進(jìn)行充填壓丸，控制每粒軟膠囊內(nèi)容物重量為0.8～1.2g；軟膠囊定型后，再進(jìn)行洗丸、干燥、燈檢、包裝即得成品。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述多不飽和脂肪酸軟膠囊的制備方法，其特征在于步驟(2)中明膠、甘油、純化水重量比為1∶0.4∶1。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述多不飽和脂肪酸軟膠囊的制備方法，其特征在于步驟(3)中控制每粒軟膠囊內(nèi)容物重量為1.0g。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種多不飽和脂肪酸軟膠囊，包括軟膠囊皮和內(nèi)容物，所述的內(nèi)容物中含有下述重量百分含量的有效成分亞麻酸7.6-8.8％；亞油酸49.0-60.0％；油酸7.0-12.9％；靈芝三萜0.25-0.5％；維生素E1.6-3.0％；余量為人體可接受的試劑。本發(fā)明的多不飽和脂肪酸軟膠囊具有改善睡眠的保健功能，經(jīng)動(dòng)物功能和人體試食試驗(yàn)證明，還具有抗氧化的保健功能。
文檔編號(hào)A61P25/20GK101810679SQ20101014673
公開日2010年8月25日 申請(qǐng)日期2010年4月14日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月14日
發(fā)明者胡樂升, 曹斌, 寧秋霞 申請(qǐng)人:浙江華立生命科技有限公司