專利名稱：從植物蒙自蕈樹中提取的活性成分及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種從植物蒙自蕈樹中提取的活性成分及其應用，屬生物醫(yī)藥技術領 域。
背景技術：
蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)屬于芽孢桿菌科，芽孢桿菌屬。該菌在自然界 分布極廣，研究表明，該菌能產(chǎn)生多種毒性物質，如腸毒素、溶血毒素等，由其引起的食物中 毒涉及的食品種類很多，發(fā)生食物中毒潛在危險性大，這種由廣泛存在的細菌引起的人的 疾病受到關注。迄今已發(fā)現(xiàn)的抗生素主要來源于植物和微生物，其中許多已廣泛用于治療 各種微生物感染性疾病。近年來由于病原菌的耐藥性，原有的醫(yī)用抗菌素在減退，因此不斷 開發(fā)新的抗生素受到重視。蒙自蕈樹(Altingia yunnanensis)屬于被子植物門、雙子葉植物綱、金縷梅亞綱、 金縷梅目的金縷梅科(Hamamelidaceae)。別名青皮、青皮樹(屏邊)、白皮樹、苦木梨(河 口)，主要分布于云南等地。目前蒙自蕈樹(A. yunnanensis)主要用途為當?shù)夭挠脴浞N，未 見有關該植物具有抗蠟樣芽孢桿菌活性的公開報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是從蒙自蕈樹植物產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物中，篩選出對人體病原細菌蠟樣 芽孢桿菌(Bacillus cereus)具有強烈抑制作用的活性成分，作為制備抑制人體病原細菌 蠟樣芽孢桿菌制劑的應用。本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的1活性成分的制備本發(fā)明的活性成分經(jīng)如下步驟得到a.將蒙自蕈樹的枝或葉用水洗干凈后放入烘箱，在60°C溫度下烘烤12小時；b.將烘干后的蒙自蕈樹的枝或葉切碎，放入三角瓶內(nèi)，用100%甲醇浸泡，在40°C 的水浴鍋上提取，第一次浸泡提取的時間為2小時，第二次和第三次的時間分別為4和8小 時；C.將三次浸提的提取液合并后，在60°C溫度下濃縮后得浸膏；d.將浸膏用甲醇溶解，定容至10mg/ml，置于冰箱中4°C保存?zhèn)溆谩?、制備試驗用的病原細菌蠟樣芽孢桿菌(B. cereus)將蠟樣芽孢桿菌接種于LB液體培養(yǎng)基(牛肉膏3克， 蛋白胨10克，氯化鈉5克，自來水1000ml，PH 7.0-7.2)中，于37°C下培養(yǎng)24小時，凍于 4°C冰箱中備用。做活性時將LB固體培養(yǎng)基(牛肉膏3克，蛋白胨10克，氯化鈉5克，瓊 脂18克，自來水1000ml，pH 7.0-7.2)倒入9cm的平板中，待培養(yǎng)基凝固后，取200 μ L蠟 樣芽孢桿菌菌液用涂布棒涂布均勻備用。3、試驗方法
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濾紙片擴散法在無菌操作臺上用微量注射器將樣品注入紙片(做三個劑量， lmg/disc,0. 5mg/disc,0. lmg/disc)，用電吹風將紙片吹干待溶劑揮發(fā)后，置于涂布好病原 菌的LB平板上，37°C下培養(yǎng)24小時后，觀察抑菌結果，測量抑菌圈的大小(含紙片的直徑 0. 6cm)。同時在紙片上加入提取過程中使用過的溶劑甲醇作為對照，同時還做空白紙片對 照。整個實驗重復3次，取3次實驗結果的平均值。將試驗獲得的活性浸膏在100°C沸水中加熱30分鐘后，用甲醇溶解制備成濃度為 10mg/ml的活性成分，用同樣的方法做抑菌試驗。本發(fā)明的活性提取物對人體病原菌蠟樣芽孢桿菌具有較強的抑制作用，能作為制 備抑制人體病原細菌蠟樣芽孢桿菌制劑的應用，能開發(fā)為新的醫(yī)用抗生素。
具體實施例方式本實施例所用的植物蒙自蕈樹，采自中國科學院昆明植物研究所植物園內(nèi)。實施例一蒙自蕈樹的枝用水洗干凈后放入烘箱，在60°C溫度下烘烤12小時。將10克烘干 后的枝切碎，放入三角瓶內(nèi)，用IOOml 100%甲醇浸泡，在40°C的水浴鍋上提取。第一次浸 泡提取的時間為2小時，第二次和第二次的浸泡提取時間分別為4小時和8小時。將三次 浸提的提取液合并后，在60°C溫度下濃縮得浸膏。該浸膏用甲醇溶解，制備成濃度為IOmg/ ml，用于做活性測定。同時做對照，結果見表1。表1蒙自蕈樹枝的提取物對蠟樣芽孢桿菌的抑菌作用
權利要求
1.一種從植物蒙自蕈樹中提取的活性成分，其特征在于從植物蒙自蕈樹中提取的活性 成分經(jīng)如下步驟得到a.將蒙自蕈樹的枝或葉用水洗干凈后放入烘箱，在60°C溫度下烘烤12小時；b.將烘干后的蒙自蕈樹的枝或葉切碎，放入三角瓶內(nèi)，用100%甲醇浸泡，在40°C的水 浴鍋上提取，第一次浸泡提取的時間為2小時，第二次和第三次的時間分別為4和8小時；c.將三次浸提的提取液合并后，在60°C溫度下濃縮后得浸膏；d.將浸膏用甲醇溶解，定容至10mg/ml，置于冰箱中4°C保存?zhèn)溆谩?br> 2.權利要求1所述的從植物蒙自蕈樹中提取的活性成分，其特征在于該活性成分對人 體病原菌蠟樣芽孢桿菌具有較強的抑制作用，能作為制備抑制人體病原細菌蠟樣芽孢桿菌 制劑的應用，能開發(fā)為新的醫(yī)用抗生素。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從植物蒙自蕈樹中提取的活性成分及其應用，屬生物醫(yī)藥技術領域。從植物蒙自蕈樹中提取的活性成分經(jīng)如下步驟得到a.將蒙自蕈樹的枝或葉用水洗干凈后放入烘箱，在60℃溫度下烘烤12小時；b.將烘干后的蒙自蕈樹的枝或葉切碎，放入三角瓶內(nèi)，用100％甲醇浸泡，在40℃的水浴鍋上提取，第一次浸泡提取的時間為2小時，第二次和第三次的時間分別為4和8小時；c.將三次浸提的提取液合并后，在60℃溫度下濃縮后得浸膏；d.將浸膏用甲醇溶解，定容至10mg/ml，置于冰箱中4℃保存?zhèn)溆?。本發(fā)明提取的活性成分對人體病原菌蠟樣芽孢桿菌具有較強的抑制作用，能作為制備抑制人體病原細菌蠟樣芽孢桿菌制劑的應用，能開發(fā)為新的醫(yī)用抗生素。
文檔編號A61P31/04GK102000128SQ20101055645
公開日2011年4月6日 申請日期2010年11月24日 優(yōu)先權日2010年11月24日
發(fā)明者周薇, 張克勤, 李國紅 申請人:云南大學