專利名稱：一種雙功能vegf受體融合蛋白制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明公開了一種雙功能VEGF受體融合蛋白制劑。
背景技術(shù)：
腫瘤尤其是惡性腫瘤是當(dāng)今世界嚴(yán)重危害人類健康的疾病，在各種疾病所致死亡中高居第二位。而且近年來，其發(fā)病率呈明顯上升趨勢。惡性腫瘤治療效果差，晚期轉(zhuǎn)移率高，預(yù)后大多不佳。研究顯示，腫瘤的生長有兩個明顯不同的階段，分別是無血管的緩慢生長期和有血管的快速增殖期，血管的生成使腫瘤能獲得足夠的營養(yǎng)而完成血管切換期，如果沒有血管的生成，原發(fā)腫瘤的生長不超過1 2mm，轉(zhuǎn)移則無法實現(xiàn)，因而抑制腫瘤血管生成被認(rèn)為是當(dāng)前最具有前途的腫瘤治療方法之一。在腫瘤組織中，腫瘤細(xì)胞、腫瘤侵入的巨噬細(xì)胞和肥大細(xì)胞能分泌高水平的VEGF， 以旁分泌的形式刺激腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移，誘導(dǎo)血管形成，促進(jìn)腫瘤持續(xù)生長，并提高血管通透性，引起周圍組織纖維蛋白沉著，促進(jìn)單核細(xì)胞、成纖維細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞侵潤，有利于腫瘤基質(zhì)形成和腫瘤細(xì)胞進(jìn)入新生血管，促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。針對該點(diǎn)， Genentech公司提供了抗癌新藥Avastin (抗VEGF人源化抗體)，用于一線治療轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌，并有望用于其它腫瘤，包括非小細(xì)胞肺癌和腎癌的治療；Regeneron制藥公司提供了 VEGFR-Fc融合蛋白，以與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的VEGFR競爭性結(jié)合VEGF和VEGF-B，從而抑制VEGF和VEGF-B的生物活性，阻斷新生血管的形成。但上述2種藥物均不能與VEGF-C或 VEGF-D相結(jié)合(VEGF-C和VEGF-D可誘導(dǎo)腫瘤內(nèi)淋巴管生成，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)， 因此不能抑制腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。為克服該缺陷，上海中信國健藥業(yè)股份有限公司在專利申請?zhí)枮?200710193861. 6、發(fā)明名稱為“可溶性VEGFR雙功能融合受體、其制備方法及用途”的中國專利申請中公開了一種可溶性VEGFR雙功能融合受體，該融合受體既能與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的VEGFR競爭性結(jié)合VEGF和VEGF-B，還能與VEGF-C或VEGF-D相結(jié)合，從而不僅抑制 VEGF和VEGF-B的生物活性，阻斷新生血管的形成，還能阻斷VEGF-C和VEGF-D對腫瘤內(nèi)淋巴管生成的誘導(dǎo)，防止腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。但在該專利中，發(fā)明人未提供合適的可溶性VEGFR 雙功能融合受體藥物制劑。由于該VEGFR雙功能融合受體為一種蛋白，因此，需要配制成合適的制劑，才能有利于保存、使用，否則蛋白容易失活或需要嚴(yán)苛的保存條件，從而提高了該蛋白藥物的生產(chǎn) /使用成本，既不利于企業(yè)生產(chǎn)、保持該蛋白藥物，也不利于患者使用該蛋白藥物，因此，有必要對此進(jìn)行研究，以克服其缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
為尋找到合適的制劑，本發(fā)明的發(fā)明人進(jìn)行了長期研究，經(jīng)大量試驗，終于發(fā)現(xiàn)了一種穩(wěn)定的可溶性雙功能VEGF受體融合蛋白液體制劑。本發(fā)明提供的穩(wěn)定的可溶性雙功能VEGF受體融合蛋白液體制劑含有雙功能VEGF 受體融合蛋白5 50mg/ml，表面活性劑0. 1 2mg/ml，溶液穩(wěn)定劑0 10mg/ml，等滲調(diào)節(jié)劑0 10mg/ml，緩沖液5 25mmol/l，該液體制劑中含有等滲調(diào)節(jié)劑和/或溶液穩(wěn)定劑。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例，使用的溶液穩(wěn)定劑為蔗糖、海藻糖、麥芽糖之一或其組合，更優(yōu)選的溶液穩(wěn)定劑為蔗糖。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例，使用的表面活性劑為吐溫-80。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例，使用的等滲調(diào)節(jié)劑為氯化鈉。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例，使用的緩沖液為磷酸鹽緩沖液、Tris、組氨酸緩沖液之一或其組合，優(yōu)選的緩沖液為由磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉組成的磷酸鹽緩沖液。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例，液體制劑中含有雙功能VEGF受體融合蛋白20mg/ ml，溶液穩(wěn)定劑10mg/ml，等滲調(diào)節(jié)劑8mg/ml，緩沖液15mmol/l，表面活性劑0. 7mg/ml ；或含有雙功能VEGF受體融合蛋白5mg/ml，溶液穩(wěn)定劑lmg/ml，等滲調(diào)節(jié)劑5mg/ml，緩沖液 5mmol/l，表面活性劑0. lmg/ml ；或含有雙功能VEGF受體融合蛋白15mg/ml，溶液穩(wěn)定劑 ;3mg/ml，等滲調(diào)節(jié)劑lmg/ml，緩沖液10mmol/l，表面活性劑0. 5mg/ml 或含有雙功能VEGF 受體融合蛋白40mg/ml，溶液穩(wěn)定劑5mg/ml，等滲調(diào)節(jié)劑10mg/ml，緩沖液20mmol/l，表面活性劑1. 5mg/ml ；或含有雙功能VEGF受體融合蛋白50mg/ml，溶液穩(wěn)定劑8mg/ml，等滲調(diào)節(jié)劑;3mg/ml，緩沖液25mmol/l，表面活性劑2. Omg/ml ；或含有雙功能VEGF受體融合蛋白5mg/ ml，等滲調(diào)節(jié)劑5mg/ml，緩沖液25mmol/l，表面活性劑1. Omg/ml ；或含有雙功能VEGF受體融合蛋白10mg/ml，溶液穩(wěn)定劑3mg/ml，緩沖液25mmol/l，表面活性劑1. 5mg/ml。。本發(fā)明公開的液體制劑可以明顯的減少藥品長期放置后產(chǎn)生的顆粒，穩(wěn)定性很好，省去了藥品使用前過濾的煩瑣步驟，同時也可以使用藥更安全。
具體實施例方式以下結(jié)合實施例、實驗例進(jìn)一步說明本發(fā)明，下述實施例、實驗例不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。在本發(fā)明的下述實施例、實驗例中，使用的雙功能VEGF受體融合蛋白的制備參考專利申請?zhí)枮?00710193861. 6、發(fā)明名稱為“可溶性VEGFR雙功能融合受體、其制備方法及用途”的中國專利申請中的方法。雙功能VEGF受體融合蛋白制劑的體內(nèi)抑制腫瘤生長和體內(nèi)抑制腫瘤轉(zhuǎn)移活性的檢測方法參考專利申請?zhí)枮?00710193861. 6、發(fā)明名稱為“可溶性VEGFR雙功能融合受體、其制備方法及用途”的中國專利申請中的方法。其它輔料均為市售藥用級別。在本發(fā)明的下述實施例、實驗例中，雖然僅使用了磷酸鹽緩沖液，但使用其他的pH 合適的常規(guī)緩沖液，如Tris、組氨酸緩沖液等，也能達(dá)到本發(fā)明的目的，這對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的，因此，也屬于本發(fā)明的保護(hù)內(nèi)容。在本發(fā)明的下述實施例、實驗例中，雖然僅使用了蔗糖作為穩(wěn)定劑，但使用其他的常規(guī)穩(wěn)定劑，如海藻糖、麥芽糖之一或海藻糖、麥芽糖、蔗糖中的2種或3種的組合，也能達(dá)到本發(fā)明的目的，這對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的，因此，也屬于本發(fā)明的保護(hù)內(nèi)容。在本發(fā)明的下述實施例、實驗例中，雖然僅使用了吐溫-80作為表面活性劑，但使用其他的常規(guī)穩(wěn)定劑，也能達(dá)到本發(fā)明的目的，這對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的，因此，也屬于本發(fā)明的保護(hù)內(nèi)容。在本發(fā)明的下述實施例、實驗例中，雖然僅使用了 NaCl作為等滲調(diào)節(jié)劑，但使用其他的常規(guī)等滲調(diào)節(jié)劑，也能達(dá)到本發(fā)明的目的，這對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的，因此，也屬于本發(fā)明的保護(hù)內(nèi)容。實施例1-10、可溶件VEGFR雙功能融合受體的液體制劑的制備按表1的配方分別配制可溶性VEGFR雙功能融合受體的液體制劑，獲得半成品產(chǎn)
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ΡΠ O表1、可溶性VEGFR雙功能融合受體的液體制劑配方
權(quán)利要求
1.一種穩(wěn)定的可溶性雙功能VEGF受體融合蛋白液體制劑，其特征在于，所述液體制劑中含有所述雙功能VEGF受體融合蛋白5 50mg/ml，表面活性劑0. 1 2mg/ml，溶液穩(wěn)定劑0 10mg/ml，等滲調(diào)節(jié)劑0 10mg/ml，緩沖液5 25mmol/l，所述液體制劑中含有等滲調(diào)節(jié)劑和/或溶液穩(wěn)定劑。
2.如權(quán)利要求1所述的液體制劑，其特征在于，所述溶液穩(wěn)定劑為蔗糖、海藻糖、麥芽糖之一或其組合。
3.如權(quán)利要求2所述的液體制劑，其特征在于，所述溶液穩(wěn)定劑為蔗糖。
4.如權(quán)利要求1所述的液體制劑，其特征在于，所述表面活性劑為吐溫-80。
5.如權(quán)利要求1所述的液體制劑，其特征在于，所述等滲調(diào)節(jié)劑為氯化鈉。
6.如權(quán)利要求1所述的液體制劑，其特征在于，所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液、Trisji 氨酸緩沖液之一或其組合.
7.如權(quán)利要求6所述的液體制劑，其特征在于，所述緩沖液為由磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉組成的磷酸鹽緩沖液。
8.如權(quán)利要求1所述的液體制劑，其特征在于，所述液體制劑中含有雙功能VEGF受體融合蛋白20mg/ml，溶液穩(wěn)定劑10mg/ml，等滲調(diào)節(jié)劑8mg/ml，緩沖液15mmol/l，表面活性劑 0. 7mg/ml ；或含有雙功能VEGF受體融合蛋白5mg/ml，溶液穩(wěn)定劑lmg/ml，等滲調(diào)節(jié)劑5mg/ ml，緩沖液5mmol/l，表面活性劑0. lmg/ml ；或含有雙功能VEGF受體融合蛋白15mg/ml，溶液穩(wěn)定劑3mg/ml，等滲調(diào)節(jié)劑lmg/ml，緩沖液lOmmol/1，表面活性劑0. 5mg/ml ；或含有雙功能VEGF受體融合蛋白40mg/ml，溶液穩(wěn)定劑5mg/ml，等滲調(diào)節(jié)劑10mg/ml，緩沖液20mmol/ 1，表面活性劑1. 5mg/ml ；或含有雙功能VEGF受體融合蛋白50mg/ml，溶液穩(wěn)定劑8mg/ml， 等滲調(diào)節(jié)劑3mg/ml，緩沖液25mmol/l，表面活性劑2. Omg/ml ；或含有雙功能VEGF受體融合蛋白5mg/ml，等滲調(diào)節(jié)劑5mg/ml，緩沖液25mmol/l，表面活性劑1. Omg/ml ；或含有雙功能 VEGF受體融合蛋白10mg/ml，溶液穩(wěn)定劑3mg/ml，緩沖液25mmol/l，表面活性劑1. 5mg/ml。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定的可溶性雙功能VEGF受體融合蛋白液體制劑，該液體制劑中含有雙功能VEGF受體融合蛋白5～50mg/ml，表面活性劑0.1～2mg/ml，溶液穩(wěn)定劑0～10mg/ml，等滲調(diào)節(jié)劑0～10mg/ml，緩沖液5～25mmol/l，該液體制劑中含有等滲調(diào)節(jié)劑和/或溶液穩(wěn)定劑。使用本發(fā)明公開的液體制劑可以明顯的減少藥品長期放置后產(chǎn)生的顆粒，穩(wěn)定性很好，省去了藥品使用前過濾的煩瑣步驟，同時也可以使用藥更安全。
文檔編號A61K9/08GK102552875SQ20101058153
公開日2012年7月11日 申請日期2010年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月9日
發(fā)明者張大鵬, 張彥, 李軍, 林碧蓉 申請人:上海國健生物技術(shù)研究院