專利名稱：一種靶向于mir-122的抗肝癌小分子化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及藥物設(shè)計方面。
背景技術(shù)：
MicroRNA (微小RNA)是一種長度為19 25核苷酸單鏈的內(nèi)源性非編碼性小RNA。 它主要通過與靶標(biāo)基因3'非翻譯區(qū)的完全或不完全配對，抑制其翻譯，從而參與調(diào)控個體發(fā)育、細(xì)胞凋亡、增殖及分化等生命活動。在病理條件下，microRNA可通過調(diào)控其靶標(biāo)基因及其參與的信號通路，影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，發(fā)揮著類似于癌基因或抑癌基因的功能。實驗表明在很多腫瘤中，一些類型的microRNA是高表達(dá)的，這些高表達(dá)的microRNA與腫瘤的侵入性、轉(zhuǎn)移性等有一定的相關(guān)性。這些microRNA為腫瘤診斷和治療提供了新的策略。目前抑制microRNA功能的普遍方法是采用反義抑制的原理。實驗證明，與成熟體microRNA完全互補或與前體microRNA—些區(qū)域互補的經(jīng)過修飾的RNA可以有效的抑制 microRNA功能。一些體內(nèi)實驗證明，這種抑制RNA通過體內(nèi)注射也有效果。因此具有一定的臨床應(yīng)用價值。然而，反義抑制方法存在體內(nèi)給藥困難的問題。目前的各種向體內(nèi)運送RNA方法， 包括化學(xué)轉(zhuǎn)染試劑以及病毒載體等，都存在效率和安全性問題，因此一直無法達(dá)到臨床應(yīng)用的要求。而傳統(tǒng)的小分子化合物藥物則在給藥方面存在明顯的優(yōu)勢，或注射或口服，簡單有效。因此我們認(rèn)為小分子化合物抑制劑將比傳統(tǒng)的反義抑制RNA更有潛力成為靶向 microRNA的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有抑制肝癌細(xì)胞生長或誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡活性的化合物。本發(fā)明的第一方面，提供了一種4-氨基-2，6_ 二羥基嘧啶(4-氨基脲嘧啶)的用途，用于制備治療肝癌、抑制肝癌細(xì)胞生長、和/或誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的化合物。在另一優(yōu)選例中，所述的致凋亡化療藥物包括肝癌壞死因子，更佳地為人TNFa。在另一優(yōu)選例中，所述的腫瘤或腫瘤細(xì)胞是表達(dá)名為mir-122的microRNA的腫瘤或腫瘤細(xì)胞。較佳地，所述的腫瘤選自下組乳腺癌、肺癌、胃癌、細(xì)腸癌、前列腺癌、肝癌； 更佳的腫瘤選自下組肝癌。在另一優(yōu)選例中，提供了一種4-氨基-2，6_二羥基嘧啶(4-氨基脲嘧啶)的用途， 用于制備人mir-122的抑制劑。


圖1是小分子化合物4-氨基-2，6-二羥基嘧啶(4-氨基脲嘧啶)的結(jié)構(gòu)式。
具體實施方式
本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，發(fā)現(xiàn)部分腫瘤細(xì)胞內(nèi)mir-122的表達(dá)往往升高，抑制mir-122的表達(dá)和功能可以抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和體內(nèi)外的致瘤活性。本發(fā)明人運用軟件從數(shù)萬個侯選化合物中篩出了若干個可能會和mir-122結(jié)合的小分子化合物，首次得到了一個可以強烈增強TNF-a細(xì)胞系MCF-7增殖抑制作用的化合物4-氨基_2，6_ 二羥基嘧啶(4-氨基脲嘧啶)。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。具體而言，本發(fā)明人的研究表明，mir-122在肺癌腫瘤組織中的選擇性高表達(dá)，而在正常肺組織中未見表達(dá)，提示mir-122可能與腫瘤發(fā)生及生長密切相關(guān)。因此本發(fā)明的研究表明，抗凋亡作用的分子mir-122在細(xì)胞生長調(diào)控、細(xì)胞凋亡、 腫瘤發(fā)生等過程中發(fā)揮重要作用。因此，mir-122很可能在臨床腫瘤的診斷和治療中作為潛在的候選靶標(biāo)。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明人篩選了大量的化合物，從而獲得了一種可能有效抑制腫瘤的小分子化合物，所述的小分子化合物特異性地在蛋白水平靶向抗凋亡分子-mir-122?；钚猿煞?-氨基-2，6-二羥基嘧啶(4-氨基脲嘧啶)小分子化合物及其藥學(xué)上可以接受的鹽和活性衍生物。4-氨基-2，6-二羥基嘧啶(4-氨基脲嘧啶)是一種指向mir-122的先導(dǎo)化合物。 一類特別優(yōu)選的鹽是鈉鹽或鉀鹽。實施例1小分子化合物4-氨基-2，6-二羥基嘧啶(4-氨基脲嘧啶)的篩選采用計算機輔助的虛擬方法進(jìn)行。首先用生物信息學(xué)的方法利用計算機軟件建立mir-122的三維結(jié)構(gòu)模型，然后用 D0CK4. 0 (美國Kimtz實驗室)對化合物庫(約20萬種)進(jìn)行篩選，根據(jù)打分取最好的100 個。繼續(xù)使用Flex軟件進(jìn)行對接，根據(jù)打分取前50個。接著利用Autodock軟件以Flex對接的構(gòu)象為起始構(gòu)象進(jìn)行對接。最后選定一個化合物，即4-氨基-2，6-二羥基嘧啶(4-氨基脲嘧啶)。實施例2小分子化合物4-氨基-2，6- 二羥基嘧啶(4-氨基脲嘧啶)對腫瘤細(xì)胞的生長抑制本實施例采用了常規(guī)的MTT法，方法如下先將MCF-7細(xì)胞30000個細(xì)胞/孔的密度鋪96孔板過夜，然后把小分子化合物以不同濃度單獨與人TNF-a聯(lián)合加入。40小時后每孔加入MTT(5mg/ml) IOul，37度孵育4小時后用150ul 二甲亞楓溶液紫色結(jié)晶后放置于酶標(biāo)儀以570吸光度檢測。結(jié)果顯示，2,4- 二氨基-6- (3-甲氧基苯)_5_嘧啶腈可以在5_10ul終濃度顯著增強TNF-a對細(xì)胞增殖的抑制，而其本身未對細(xì)胞造成顯著的毒性作用的化合物。以上是對本發(fā)明的描述而非限定，基于本發(fā)明思想的其它實施方式，均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之中。
權(quán)利要求
1.一種4-氨基-2，6-二羥基嘧啶(4-氨基脲嘧啶)的用途，其特征在于，用于制備治療肝癌、抑制肝癌細(xì)胞生長、和/或誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的化合物。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的肝癌或肝癌細(xì)胞是表達(dá)mir-22的肝癌或肝癌細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種基于生物信息學(xué)和計算機技術(shù)相結(jié)合的藥物虛擬篩選平臺而合成的靶向抑制mir-122合成的新型抗肝癌小分子先導(dǎo)化合物。該小分子化合物具有滲透性好，毒副作用小，結(jié)構(gòu)簡單，易于合成等優(yōu)點。而且可以和腫瘤壞死因子(TNF-α)聯(lián)用，增強后者的肝癌殺傷效應(yīng)，從而起到治療肝癌的作用，所以有望發(fā)展成為一種抗肝癌新藥。
文檔編號A61P35/00GK102319248SQ20101059909
公開日2012年1月18日 申請日期2010年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月17日
發(fā)明者曾華宗 申請人:上海聚類生物科技有限公司