專利名稱：用于治療癌癥的組合物和方法
用于治療癌癥的組合物和方法
背景技術：
磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)信號傳遞途徑對于許多不同類型的人惡性腫瘤中的癌細胞的生長和存活而言是重要的。參見，Granville CA等人，“Handicapping the Race to Develop Inhibitors of the Phosphoinositide 4-Kinase/Akt/Mammalian Target of Rapamycin Pathway, "Clin Cancer Res, 2006; 12(3) 679-89。該途徑接受來自配體-受體相互作用(諸如表皮生長因子受體和胰島素-樣生長因子受體)的上游輸入，并通過諸如雷帕霉素的哺乳動物靶標(mTOR)等下游效應物發(fā)信號。mTOR是一種關鍵的下游效應分子， 其調節(jié)對于細胞周期進程和許多其它重要的細胞生長過程而言關鍵的蛋白的生產。參見， Abraham RT禾口Gibbons, JJ, "The mammalian target of rapamycin signaling pathway: twists and turns in the road to cancer therapy". Clin Cancer Res, 2007； 13(11) 3109-14。PI3激酶軸(axis)的失調在人癌癥中是常見的，這是由于過度活躍的生長因子受體信號傳遞、激活PI3K的突變、PTEN腫瘤抑制基因喪失功能和幾種其它的導致mTOR激酶活性活化的機理。在臨床上，PII軸的成功的藥理學抑制已經集中于PI3激酶的上游生長因子受體和下游效應物，諸如mTOR。現在有大量臨床證據表明，mTOR抑制劑可以為具有晚期惡性腫瘤的患者提供臨床益處。胰島素-樣生長因子受體1 (IGF-1R，胰島素受體家族的一種酪氨酸激酶受體) 參與細胞增生、分化，并在許多類型的癌癥的惡性細胞的轉化和維持中起重要作用。參見， Baserga, R 等人，"Mini Review: The IGF-IR receptor in cancer biology, " Int. J. Cancer 2003; 107: 873-77。IGR-IR和它的配體IGF-2在許多類型的晚期癌中過表達， 且配體-刺激的受體信號傳遞會在體外促進癌細胞的增生。重要的是，IGF-IR信號傳遞與 PII軸緊密相關。IGF-IR抑制已經在臨床前研究中表現出有效的抗癌作用，且許多IGF-IR 抑制劑目前處于臨床開發(fā)中。通過抑制PII軸中的上游和下游分子靶標，mTOR和IGF-IR抑制劑的組合可以提供協同效應。mTOR的抑制可以導致反饋環(huán)的活化，所述反饋環(huán)激活Akt癌基因，后者在體外和在取自用mTOR抑制劑治療的患者的腫瘤活組織檢查中，表現為腫瘤細胞中增強水平的磷酸-Akt。參見，Sun, S-Y 等人，“Priority Report: Activation of Akt and eIF4E survival pathways by rapamycin-mediated mammalian target of rapamycin inhibition, ” Cancer Res 2005; 65(16) : 7052-58，和 Gardner, H 等人，“Biomarker analysis of a phase II double-blind randomized trial of daily oral RADOOl (everolimus) plus letrozole or placebo plus letrozole as neoadjuvant therapy for patients with estrogen receptor positive breast cancer, ” San Antonio Breast Cancer Symposium. San Antonio, TX, 2007 年 12 月 13-16 日.2006 年摘要。該反饋環(huán)可以通過IGF-IR和胰島素受體底物參與信號傳遞，且被IGF-IR抑制劑抑制。結果，臨床前研究已經證實，IGF-IR抑制劑和mTOR抑制劑的組合會在體外產生累加的或協同的抗腫瘤活性。最近，2個研究組已經獨立地報道了在人肉瘤的異種移植物模型中組合雷帕霉素和抗-IGF-IR抗體的結果。參見，Kurmasheva RT等人，Poster: "Combination of CP-751871, a human monoclonal antibody against the IGF-I receptor with rapamycin results in highly effective therapy for xenografts derived from childhood sarcomas, ，，EORTC 2007，禾口 Darko, IA 等人，Abstract: "Evaluation of combined insulin-like growth factor receptor type I (IGF-IR) and mTOR pathway blockade in sarcoma xenograft models”· AACR年會 2007，4760。在這些研究之一中， 觀察到建立的尤因肉瘤和骨肉瘤異種移植物的完全消退，同時觀察到其它有效的抗腫瘤活性(具有來自組合的至少累加益處)。

發(fā)明內容
本發(fā)明提供了用mTOR抑制劑和抗-IGF-IR抗體治療選自下述的癌癥的方法非小細胞肺癌、乳腺癌、結直腸癌、軟組織或骨肉瘤和子宮內膜癌，其中所述mTOR抑制劑是 ridaforolimus、依維莫司、坦羅莫司、雷帕霉素-類似物或其組合，且所述抗-IGF-IR抗體是 dalotuzumab、figitumumab、cixutumumab、SHC 717454、Roche R1507、EM164 或 Amgen AMG479。


圖1: 使用Ridaforolimus + MK-0646組合提高致癌的PII信號傳遞的靶向。 使用MK-0646和Ridaforolimus的聯合治療會增加PII途徑抑制，并阻斷癌細胞增生。 (A)圖解負反饋環(huán)的PI3激酶信號傳遞途徑；(B)證實mTOR抑制會導致患者腫瘤中升高的AKT-P的公開數據；(C)在體外H2122細胞中響應于Ridaforolimus (IOnM)、MK-0646 (10ug/ml)或組合的途徑信號傳遞；(D)指示在細胞中的細胞周期分布和細胞死亡的FACS 分析數據，所述細胞用在C中使用的濃度處理M小時。圖2: Ridaforolimus和MK-0646組合在體外會增加效力。在有MK-0646或 ridaforolimus或組合存在下，在軟瓊脂中培養(yǎng)肺癌細胞系。使用熒光染料(LavaCell) 定量軟瓊脂菌落形成，并使用圖象采集和分析平臺(Isocyte)計算菌落面積和數目。A) 繪制96孔板的孔中的相對菌落面積。組合顯著增強A549和H2122細胞系的生長抑制 (P<0. 02)。在下面指示了通過P-RTK陣列測得的RTK的活化狀態(tài)和KRAS中的活化突變。B) 繪制了 9個NSCLC細胞系中響應于Ridaforolimus (10 nM)或MK-0646 (10ug/ml)或組合的相對軟瓊脂菌落形成。基于KRAS中的活化突變，區(qū)分細胞系。圖3: Ridaforolimus和MK-0646組合在突變型-KRAS異種移植物腫瘤中的抗腫瘤活性。使用MK-0646和Ridaforolimus的聯合治療可以有效地阻斷A549異種移植物生長。通過2路ANOVA分析測得，在多個濃度的MK-0646和Ridaforolimus組合的聯合治療組中，觀察到顯著的腫瘤生長抑制。圖4:與Ridaforolimus組合的高濃度的MK-0646會在統(tǒng)計學上減小腫瘤重量。 給小鼠施用單獨的或與Ridaforolimus (0.1 mpk)組合的MK-0646 (20 mpk) 3周。在與 Ridaforolimus組合的更高劑量的MK-0646時，腫瘤重量(參見上面)在統(tǒng)計學上更小，這突出了腫瘤的消退。圖5: A549異種移植物模型對厄洛替尼治療是抗性的。與載體相比，在厄洛替尼治療組中沒有觀察到顯著的生長抑制。圖6: IGFl受體信號轉導。靶向磷脂酰-肌醇3-激酶(PIK3CA)途徑和Ras途徑的篩選命中(hits)分別具有紅色或藍色框。圖7:通過菌落試驗進行的命中驗證證實，靶向PII途徑調節(jié)物的shRNA會強烈地影響MK-0646效能。通過在Alpha圖像儀上掃描平板，測定菌落數(A)和菌落面積(B)。 MK-0646的頂部的3個最強的增強劑是沉默PII途徑的效應物的shRNA(用紅色突出顯示)，而靶向PTEN的shRNA賦予抗藥性。圖8: HT29結腸癌細胞中PTEN的穩(wěn)定沉默會賦予對MK-0646的抗性。制備了表達靶向PTEN或CSK或MAPI的不同shRNA的穩(wěn)定的Η ^9細胞，并在菌落形成試驗中測試了對ΜΚ-0646的敏感度。PTEN的沉默證實ΜΚ-0646的減少的生長抑制。圖9: PII的沉默，而不是PDPKl或MELK的沉默，會重新使PTEN-缺陷型肌四細胞對ΜΚ-0646的作用敏感。RNAi介導的PTEN的敲低(knock-down)會賦予對MK-0646介導的生長抑制的抗性(參見圖7和8)。通過MK-0646和PI3K RNAi對IGFlR和PIK3CA的聯合抑制，可以阻斷PTEN-敲低的細胞的生長。圖10: PII和Ras途徑激酶在MK-0646增強劑篩選的前列共同命中(top consensus hits)中是突出的。PII和Ras途徑的標準的和假定的激酶調節(jié)物分別用紅色和藍色突出顯示。進行定量PCR分析，以評估靶標沉默效率。使用在圖7和8中所述的菌落形成試驗或短期生長試驗，進行命中驗證。圖11:證實的MK-0646敏化命中。在下面顯示了在暴露于藥物的一個滴度(啊 titration of drug)以后，在菌落生長試驗中(> 2-倍)或在72-小時阿爾瑪(Alamar)試驗中(p<0.05)增強腫瘤細胞對MK-0646的敏感度的篩選命中。應當指出，由于在沒有藥物存在時的毒性，在任一個試驗中不能驗證某些載體。彩色編碼與在圖10中的定義相同。圖12: 患者對ridaforolimus-dalotuzumab組合做出應答的CT圖像。圖像來自具有向肝臟(如圖所示)和其它部位轉移的雌激素受體陽性的乳腺癌的56歲女性?；颊咭呀浗洑v過多次先前的化療和激素治療。上圖顯示了在肝臟左葉的大腫瘤，下圖顯示了在與 dalotuzumab相組合的ridaforolimus的1期臨床試驗中治療2個周期以后的相同腫瘤，其大小顯著減小?；颊哌_到在超過8個月的研究治療以后進行的部分應答。
具體實施例方式作為刻苦研究的結果，發(fā)明人已經發(fā)現，通過使用與抗-IGF-IR抗體組合的mTOR 抑制劑或其藥學上可接受的鹽，可以實現協同地優(yōu)良的抗癌活性，其中所述mTOR抑制劑是 ridaforolimus、依維莫司、坦羅莫司、雷帕霉素-類似物或其組合，且所述抗-IGF-IR抗體是 dalotuzumab、figitumumab、cixutumumab、SHC 717454、Roche R1507、EM164 或 Amgen AMG479。本發(fā)明特別適用于治療選自下述的癌癥非小細胞肺癌、乳腺癌、結直腸癌、軟組織或骨肉瘤和子宮內膜癌。但是，本發(fā)明可以用于治療不同的其它癌癥，諸如腦癌、顱頸癌、食管癌、甲狀腺癌、小細胞肺癌、肺癌、胃癌、膽囊/膽管癌、肝癌、胰腺癌、卵巢癌、絨毛膜癌、 子宮體癌、宮頸癌、腎盂/輸尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、陰莖癌、睪丸癌、胎兒癌、Wilms癌、 皮膚癌、惡性黑素瘤、神經母細胞瘤、骨肉瘤、尤因瘤、軟部肉瘤(soft part sarcoma)、急性白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓細胞性白血病和霍奇金淋巴瘤。
因此，本發(fā)明涉及用mTOR抑制劑和抗-IGF-IR抗體治療選自下述的癌癥的方法 非小細胞肺癌、乳腺癌、結直腸癌、軟組織或骨肉瘤和子宮內膜癌，其中所述mTOR抑制劑是 ridaforolimus、依維莫司、坦羅莫司、雷帕霉素-類似物或其組合，且所述抗-IGF-IR抗體是 dalotuzumab、figitumumab、cixutumumab、SHC 717454、Roche R1507、EM164 或 Amgen AMG479。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述mTOR抑制劑是ridaforol imus。在本發(fā)明的另一個實施方案中，所述抗-IGF-IR抗體包含至少一個非人起源的重鏈互補決定區(qū)(CDR)和至少一個源自非人來源的輕鏈互補決定區(qū)(CDR)，其中結合IGF-IR 的抗體具有至少一種選自下述的性質a)結合IGF-1R，但是不結合結合包含胰島素受體和胰島素生長因子受體的雜合受體(IR/IGF-1R雜合-R)，但是不結合單獨的抑制人IGF-IR和IGF-I和/或IGF-2之間的結合；(d)以小于100 nM的抑制常數和/或 IC50,結合雜合-R和它的天然配體，優(yōu)選地在本文中命名為IGFl和/或IGF2和/或胰島素；(e)特異性地抑制所述IGF-IR的酪氨酸激酶活性；(f)特異性地抑制所述雜合-R的酪氨酸激酶活性；(g)對所述雜合-R具有10 nM或更小的結合親和力；(h)下調IGF-IR表達；(i)下調雜合-R表達；(j)抑制體內腫瘤生長。在本發(fā)明的一個類別中，重鏈⑶R包含選自SEQ ID NO. 4、5或6的氨基酸序列， 且輕鏈⑶R包含選自SEQ ID NO. 1、2或3的氨基酸序列。在本發(fā)明的另一個類別中，人源化的抗體或它的功能片段之一包含含有選自SEQ ID No. 7或8的氨基酸序列的輕鏈，或含有選自SEQ ID NO. 9、10或11的氨基酸序列的重鏈。在本發(fā)明的另一個類別中，所述抗-IGF-IR抗體是dalotuzumab。在本發(fā)明的另一個實施方案中，所述mTOR抑制劑是ridaforo 1 imus，且所述抗-IGF-IR 抗體是 dalotuzumab。在本發(fā)明的另一個實施方案中，以10 mg至40 mg的劑量施用mTOR抑制劑。在本發(fā)明的一個類別中，每周施用ridaforolimus 5次。在本發(fā)明的另一個實施方案中，以10 mg/kg的劑量，靜脈內地施用抗-IGF-IR抗體。在本發(fā)明的一個類別中，每周施用抗-IGF-IR抗體1次。在本發(fā)明的另一個類別中，每隔一周施用抗-IGF-IR抗體1次。可以制備mTOR抑制劑和抗-IGF-1R抗體，用于同時、分別或連續(xù)施用。對上述的優(yōu)選實施方案的提及意在包括特定和優(yōu)選組的所有組合，除非另有說明。下面描述了在本說明書中使用的術語的含義，且在下文中更詳細地描述了本發(fā)明。在本說明書中使用的術語“同時”是指，本發(fā)明的藥物制劑在時間上同時施用。在本說明書中使用的術語“分別”是指，本發(fā)明的藥物制劑在共同的治療時間表中的不同時間施用。在本說明書中使用的術語“連續(xù)”是指，在施用一種藥物制劑以后，施用其它藥物制劑；在施用一種藥物制劑以后，可以基本上在第一種藥物制劑之后立即施用第二種藥物制劑，或可以在第一種藥物制劑以后的有效時間段之后施用第二種藥物制劑；且所述有效時間段是為了實現施用第一種藥物制劑的最大益處而給出的時間量。在本說明書中使用的術語“癌癥”包括不同的肉瘤和癌，且包括實體癌和造血癌。本文提及的實體癌包括，例如，腦癌、顱頸癌、食管癌、甲狀腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、乳腺癌、子宮內膜癌、肺癌、胃癌、膽囊/膽管癌、肝癌、胰腺癌、結腸癌、直腸癌、卵巢癌、 絨毛膜癌、子宮體癌、子宮宮頸癌、腎盂/輸尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、陰莖癌、睪丸癌、胎兒癌、威爾曼瘤、皮膚癌、惡性黑素瘤、神經母細胞瘤、骨肉瘤、尤因瘤、軟部肉瘤。另一方面， 造血癌包括，例如，急性白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓細胞性白血病、真性紅細胞增多癥、惡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤。在本說明書中使用的術語“治療癌癥”是指，將抗癌劑施用于癌癥患者，從而抑制患者中癌細胞的生長。優(yōu)選地，治療導致癌癥生長消退，或換而言之，它減小可檢測的癌的大小。更優(yōu)選地，治療導致癌癥的完全消失。mTOR 抑制劑
在當前的臨床開發(fā)中的mTOR抑制劑是雷帕霉素的結構類似物。本發(fā)明的mTOR抑制劑包括ridaforolimus、坦羅莫司、依維莫司、雷帕霉素-類似物和它們的組合。Ridaforolimus (也稱作 AP 23573、MK-8669 和 deforolimus)是雷帕霉素的獨特的、非前藥類似物，其在體外在廣范圍的人腫瘤細胞系中和在使用人腫瘤細胞系的鼠腫瘤異種移植物模型中具有抗增生活性。已經將Ridaforolimus施用給具有晚期癌癥的患者，且目前處于不同晚期惡性腫瘤的臨床開發(fā)中，包括在具有晚期軟組織或骨肉瘤的患者中的研究。迄今，這些試驗已經證實，ridaforolimus通常被較好地耐受，具有可預測的和可控制的不利事件特性，且在廣范圍的癌癥中具有抗腫瘤活性。在授權給Ariad Gene Therapeutics, Inc.的美國專利號7，091，213 (它通過引用整體并入)中，描述了 ridaforolimus的介紹和制備。坦羅莫司(也稱作Torisel )目前被銷售用于治療腎細胞癌。在授權給American Home Products Corporation的美國專利號5，362，718 (它通過引用整體并入)中，描述了坦羅莫司的介紹和制備。與雷帕霉素(西羅莫司)相比，依維莫司(也稱作Certican 或RAD001，由 Novartis銷售)在有機溶劑中具有更大的穩(wěn)定性和提高的溶解度，以及更有利的藥物動力學和更少的副作用。依維莫司已經與微乳劑環(huán)孢素(Neoral ，Novartis)聯合使用，用于增加免疫抑制方案的效能。本發(fā)明的mTOR抑制劑也可以作為不同的晶體、無定形物質、藥學上可接受的鹽、 水合物和溶劑化物而存在。此外，本發(fā)明的mTOR抑制劑可以作為前藥來提供。一般而言，這樣的前藥是本發(fā)明的mTOR抑制劑的功能衍生物，其可以被活體容易地轉化成需要的化合物。因此，在本發(fā)明的不同癌癥的治療方法中，術語“施用”不僅包括特定化合物的施用，而且包括這樣的化合物的施用，所述化合物在施用給患者以后可以在活體中轉化成特定化合物。用于選擇和生產合適的前藥衍生物的常規(guī)方法描述在，例如，“Design of Prodrugs", H. Bundgaard編，Elsevier，1985，它在本文中提及，并且整體并入本文，作為本說明書的一部分。化合物的代謝物可以包括將化合物放入生物環(huán)境中生成的活性化合物，且在本發(fā)明化合物的范圍內。抗-IGF-IR抗體
本發(fā)明的抗-IGF-IR抗體是分離的抗體或其功能片段，其中所述抗體或它的所述片段之一能夠特異性地結合人胰島素-樣生長因子I受體，且如果必要，優(yōu)選地此外能夠抑制配體IGFl和/或IGF2與IGF-IR的結合，和/或能夠特異性地抑制使至少一種配體結合所述IGF-IR受體的信號傳遞級聯。本發(fā)明的IGF-IR抗體包括能夠特異性地結合IGF-IR 的單克隆和/或多克隆抗體。本發(fā)明的抗-IGF-IR抗體包括dalotuzumab、figitumumab、 cixutumumab、SHC 717454、Roche R1507、EM164 和 Amgen AMG479。Dalotuzumab的特征在于，它包含這樣的輕鏈，所述輕鏈包含至少一個選自氨基酸序列SEQ ID No. 1、2或3的⑶R的互補性決定區(qū)⑶R，或至少一個其序列在最佳比對后與序列SEQ ID No. 1、2或3具有至少80%、優(yōu)選85%、90%、95%和98%同一性的CDR，或特征在于，它包含這樣的重鏈，所述重鏈包含至少一個選自氨基酸序列SEQ ID No. 4、5和6的 ⑶R的⑶R，或至少一個其序列在最佳比對后與序列SEQ ID No. 4、5和6具有至少80%、優(yōu)選85%、90%、95%和98%同一性的CDR。制備和使用所述抗-IGF-IR抗體的方法描述在美國專利號7，214，444中，它通過引用整體并入本文。在本說明書中，術語“結合”和“連接”具有相同的含義，且是可互換的。在本說明書中，與抗體化合物或它們的序列相結合的術語多肽、多肽序列、肽和蛋白是可互換的。在本文必須理解，本發(fā)明不涉及天然形式的抗體，也就是說，它們不是在它們的天然環(huán)境中，但是已經能夠通過從天然來源的純化而分離或得到，或者通過基因重組或通過化學合成而得到，它們還可以含有在將來要描述的非天然的氨基酸。⑶R區(qū)或⑶R意在指示免疫球蛋白的重鏈和輕鏈的高變區(qū)，如由Kabat等人 (Kabat 等人，Sequences of proteins of immunological interest,第 5 版，美國健康和人類服務部，NIH，1991，和更晚的版本)所定義的。存在3個重鏈⑶R和3個輕鏈 ⑶R。術語⑶R在本文中用于表示(根據情況)這些區(qū)域之一或這些區(qū)域中的幾個或甚至全部，所述區(qū)域含有負責抗體對它識別的抗原或表位的結合親和力的大部分氨基酸殘基。在本發(fā)明的意義上，2個核酸或氨基酸序列之間的“同一性百分比”意在表示，在最好比對(最佳比對)后得到的在要對比的2個序列之間相同的核苷酸或氨基酸殘基的百分比，該百分比純粹是統(tǒng)計學的，2個序列之間的差異在它們的整個長度上隨機分布。傳統(tǒng)地，如下進行2個核酸或氨基酸序列之間的序列對比在已經以最佳方式比對它們以后， 對比這些序列，所述對比能夠按照區(qū)段或按照“對比窗”來進行。除了手工地進行序列的最佳比對以外，還可以借助于Smith和Waterman (1981) [Ad. App. Math. 2:482]的局部同源性算法,借助于Neddleman和Wunsch (1970) [J. Mol. Biol. 48: 443]的局部同源性算法，借助于 Pearson 和 Lipman (1988) [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444)的相似性搜索方法，借助于使用這些算法的計算機軟件(在威斯康星遺傳學軟件包中的GAP、 BESTFIT、FASTA 和 TFASTA，Genetics Computer Group, 575 Science Dr. , Madison, WI, 或通過BLAST N或BLAST P對比軟件)。如下確定2個核酸或氨基酸序列之間的同一性百分比通過對比以最佳方式比對的這2個序列，且其中要對比的核酸或氨基酸序列可以包含相對于參照序列的添加或刪除，所述參照序列用于這2個序列之間的最佳比對。如下計算同一性百分比確定2個序列之間具有相同核苷酸或氨基酸殘基的相同位置的數目，將該相同位置的數目除以對比窗中的位置總數，并將得到的結果乘以100，以便得到這2個序列之間的同一性百分比。例如，可能使用BLAST 程序、“BLAST 2 序列”(Tatusova 等人，“Blast 2sequences - a new tool for comparing protein and nucleotide sequences，，， FEMS Microbiol Lett. 174:247-250), ^01 ^ http://www. ncbi. nlm. nih. gov/ gorf/ bl2. html上得到，使用的參數是默認給出的那些(具體地，對于參數“開放間隙罰分” 5， “延伸間隙罰分2 ；選擇的矩陣是，例如，該程序建議的矩陣“BL0SUM 62”)，通過程序直接地計算要對比的2個序列之間的同一性百分比。與參照氨基酸序列具有至少80%、優(yōu)選85%、90%、95%和98%同一性的氨基酸序列是指，相對于參照序列具有某些修飾的氨基酸序列，具體地，至少一個氨基酸的刪除、添加或置換、截短或延長是優(yōu)選的。在置換一個或多個連續(xù)或不連續(xù)氨基酸的情況下，其中用“等效”氨基酸替換被置換的氨基酸的置換是優(yōu)選的。表述“等效氨基酸”在本文中目的在于表示，能夠被基礎結構的氨基酸之一置換的任意氨基酸，但是基本上沒有改變對應的抗體的生物活性，諸如在以后特別是在實施例中所定義的。依賴于它們與它們替換的氨基酸的結構同源性，或能夠實現的不同抗體之間的生物活性的對比試驗的結果，可以確定這些等效氨基酸。通過實施例，可以闡述能夠進行的置換的可能性，而不導致對應的修飾的抗體的生物活性的深遠改變。因而可能用纈氨酸或異亮氨酸替換亮氨酸、用谷氨酸替換門冬氨酸、 用天冬酰胺替換谷氨酰胺、用賴氨酸替換精氨酸等，在相同的條件下，可以自然地預見到反向置換。根據本發(fā)明的抗體優(yōu)選地是特異性的單克隆抗體，特別是鼠、嵌合的或人源化的起源的單克隆抗體，它們可以根據本領域技術人員眾所周知的標準方法得到。一般而言，為了制備單克隆抗體或它們的功能片段(特別是鼠起源的)，可能參考在手冊"Antibodies，，(Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor NY,第 726 頁,1988)中具體描述的技術，或Kohler和Milstein (Nature, 256:495-497，197 描述的從雜交瘤制備的技術。例如，從針對IGF-IR受體(或它的片段之一，其含有根據本發(fā)明的所述單克隆抗體所特異性地識別的表位)免疫的動物細胞，可以得到根據本發(fā)明的單克隆抗體。根據常見的工作方法，通過基因重組(從編碼IGF4R受體的cDNA序列的所含有的核酸序列開始)， 或通過肽合成(從IGF4R受體的肽序列中所包含的氨基酸序列開始)，可以具體地生產所述 IGF-IR受體或它的所述片段之一?？梢栽诶缬H和柱上，純化根據本發(fā)明的單克隆抗體，在所述親和柱上，已經預先固定化了被根據本發(fā)明的所述單克隆抗體特異性地識別的IGF-IR受體或它的含有表位的片段之一。更具體地，可以如下純化所述單克隆抗體通過在蛋白A和/或G上的色譜法， 其后有或沒有離子交換色譜法(目的在于消除殘余蛋白污染物以及DNA和LPS)，其本身后面有或沒有在瓊脂糖凝膠上的排阻色譜法(以便消除由于二聚體或其它多聚體的存在造成的潛在聚集體)。以甚至更優(yōu)選的方式，這些技術整體可以同時地或連續(xù)地使用。根據本發(fā)明的抗體同樣包括嵌合的或人源化的抗體。嵌合抗體意在表示這樣的抗體，其含有源自給定物種的抗體的天然可變(輕鏈和重鏈)區(qū)，所述可變區(qū)與所述給定物種的異種物種的抗體的輕鏈和重鏈恒定區(qū)相組合。使用基因重組技術，可以制備根據本發(fā)明的抗體或它們的嵌合類型的片段。例如， 通過克隆重組DNA，可以制備嵌合抗體，所述重組DNA含有啟動子、編碼根據本發(fā)明的非人類的(特別是鼠的)單克隆抗體的可變區(qū)的序列、和編碼人抗體的恒定區(qū)的序列。由這樣的重組基因編碼的本發(fā)明的嵌合抗體是，例如，小鼠-人嵌合體，該抗體的特異性由源自鼠 DNA的可變區(qū)決定，它的同種型由源自人DNA的恒定區(qū)決定。關于嵌合抗體的制備方法，可能參考例如文件 Verhoeyn 等人(BioEssays, 8:74，1988)。人源化的抗體意在表示這樣的抗體，其含有源自非人起源的抗體的CDR區(qū)，所述抗體分子的其它部分源自一種(或幾種)人抗體。此外，可以修飾骨架(稱作FR)的區(qū)段的一些殘基，以便保持結合親和力(Jones等人，Nature, 321:522-525, 1986; Verhoeyen 等人，Science, 239:1534-1536，1988; Riechmann 等人，Nature, 332:323-327， 1988)。通過本領域技術人員已知的技術(例如，在下述文獻中描述的那些=Singer等人，J. Immun. 150:2844—2857，1992; Mountain 等人，Biotechnol. Genet. Eng. Rev. , 10: 1-142，1992；或 Bebbington 等人，Bio/technology, 10:169-175，1992)， 可以制備根據本發(fā)明的人源化的抗體或它們的片段。對于它們在體外診斷方法中的應用， 或在或體內預防和/或治療性處理中，根據本發(fā)明的這樣的人源化的抗體是優(yōu)選的。根據本發(fā)明的抗體的功能片段意在特別地表示這樣的抗體片段，諸如Fv、scFv (sc表示單鏈)、Fab、F(ab，)2、Fab\ scFv-Fc片段或雙特異抗體或已經通過化學修飾(諸如添加聚(亞烷基)乙二醇諸如聚(亞乙基)乙二醇(“聚乙二醇化”))或通過摻入脂質體中增加了其半衰期的任意片段(聚乙二醇化的片段稱作Fv-PEG、scFv-PEG、Fab-PEG、 F(ab' )2-PEG或Fab，-PEG) ( “PEG”表示聚(亞乙基)乙二醇)，所述片段具有根據本發(fā)明的序列SEQ ID No. 1、2、3、4、5或6的特征⑶R中的至少一個，且具體地，它能夠以一般方式發(fā)揮它的來源抗體的甚至部分活性，諸如具體地，識別和結合IGF-IR受體的能力，和如果必要，抑制IGF-IR受體的活性的能力。優(yōu)選地，所述功能片段構成或包含它們的來源抗體的重或輕可變鏈的部分序列， 所述部分序列足以保持與它的來源抗體相同的對IGF-IR受體的結合特異性和足夠的親和力，優(yōu)選至少等于它的來源抗體的1/100、更優(yōu)選至少1/10。這樣的功能片段含有它的來源抗體的序列的最少5個氨基酸，優(yōu)選10、15、25、50
和100個連續(xù)氨基酸。優(yōu)選地，這些功能片段是Fv、scFv、Fab、F(ab，)2、F(ab，)、scFv-Fc型的片段或雙特異抗體，其通常具有與它們的來源抗體相同的結合特異性。根據本發(fā)明，通過諸如酶消化(諸如胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化)和/或經由化學還原來切割二硫鍵等方法，從諸如上述的抗體開始，可以得到本發(fā)明的抗體片段。以另一個方式，通過本領域技術人員同樣眾所周知的基因重組技術，或通過肽合成(借助于例如自動的肽合成儀，諸如由Applied Biosystems公司等提供的那些)，可以得到在本發(fā)明中包含的抗體片段。以一個更優(yōu)選的方式，本發(fā)明包含根據本發(fā)明的抗體或它們的功能片段，尤其是通過基因重組或通過化學合成得到的嵌合的或人源化的抗體。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的主題是根據本發(fā)明的抗體或它的功能片段之一，其特征在于，它包含含有至少一個序列SEQ ID No. 6的⑶R的重鏈，或在最佳比對后與序列SEQ ID No. 6具有至少80%同一性的序列。在6個短的⑶R序列中，重鏈的第三個⑶R (⑶RH3)具有更大的尺寸變異性(更大的多樣性，主要是由于產生它的基因的排列的機理)。它可以短至2個氨基酸，盡管已知的最長尺寸是沈。在功能上，⑶RH3在抗體特異性的確定中起部分作用(Segal等人，PNAS， 71:4298-4302, 1974; Amit 等人，Science, 233:747-753，1986; Chothia 等人，J. Mol. Biol. , 196:901-917, 1987; Chothia 等人，Nature, 342:877-883，1989; Caton 等人，J. Immunol. , 144:1965-1968，1990; Sharon 等人，PNAS, 87:4814-4817， 1990; Sharon 等人，J. Immunol. , 144:4863-4869，1990; Kabat 等人，J. Immunol., 147:1709-1719, 1991)。已知，僅低百分比的⑶R氨基酸促成抗體結合部位的構建，但是這些殘基必須維持非常特異性的三維構象。以一個更優(yōu)選的方式，本發(fā)明涉及根據本發(fā)明的抗體或它的功能片段之一，其特征在于，它包含這樣的重鏈，所述重鏈含有序列SEQ ID No. 4、5和6的3個⑶R中的至少 2個或3個⑶R，或在最佳比對后與序列SEQ ID No. 4、5和6分別具有至少80%同一性的 3個⑶R序列中的至少2個或3個⑶R。在一個同樣優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的主題是根據本發(fā)明的抗體或它的功能片段之一，其特征在于，它包含這樣的輕鏈，所述輕鏈含有選自序列SEQ ID No. 1、2或3的 ⑶R中的至少一個⑶R，或在最佳比對后其序列與序列SEQ ID No. 1、2或3具有至少80% 同一性的CDR。在一個更優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的主題是根據本發(fā)明的抗體或它的功能片段之一，其特征在于，它包含這樣的輕鏈，所述輕鏈含有序列SEQ ID No. 1、2和3的3個⑶R 中的至少2個或3個⑶R，或在最佳比對后與序列SEQ ID No. 1、2和3分別具有至少80% 同一性的3個CDR序列中的至少2個或3個⑶R。以一個更優(yōu)選的方式，根據本發(fā)明的抗體或它的功能片段之一的特征在于，它包含這樣的重鏈，所述重鏈含有序列SEQ ID No. 4、5和6的3個⑶R，或在最佳比對后與序列 SEQ ID No. 4、5和6分別具有至少80%同一性的3個⑶R序列，且特征在于，它另外包含這樣的輕鏈，所述輕鏈含有序列SEQ ID No. 1、2和3的3個⑶R，或在最佳比對后與序列SEQ ID No. 1、2和3分別具有至少80%同一性的3個CDR序列。根據另一個方面，本發(fā)明的主題是根據本發(fā)明的抗體或它的功能片段之一，其特征在于，它不結合或它不以顯著的方式結合人胰島素受體頂。以一個優(yōu)選的方式，根據本發(fā)明的所述功能片段選自片段FV、SCFV、Fab、(Fab’)2、 Fab\ scFv-Fc或雙特異抗體或已經通過化學修飾(特別是通過聚乙二醇化)或通過摻入脂質體中增加了其半衰期的任意功能片段。根據另一個方面，本發(fā)明涉及能夠分泌根據本發(fā)明的單克隆抗體的鼠雜交瘤，尤其是鼠起源的雜交瘤，諸如于2001年9月19日在編號1-2717下保藏在Centre National de Culture De Microorganisme (CNCM,) (Institut Pasteur, Paris, France)的雜交瘤。所述單克隆抗體(在本文中稱作7C10)或它的功能片段之一的特征在于，所述抗體是由在2001年9月19日在編號1-2717下保藏在CNCM的雜交瘤分泌，且當然是本發(fā)明的一部分。“Dalotuzumab”、“h7C10”、“MK-0646” 或“F50035” 可互換地用于描述人源化的抗體，所述抗體被表征為結合IGF-IR以及結合IR/IGF-1雜合受體。這樣的抗體可以包括在例如美國系列號 10/7；35，916 (US20050084906,它是 PCT/FR03/00178 和 / 或 US20050M9730 的部分繼續(xù)申請)中描述的抗體，其中所述抗體是人源化的抗體或其片段，且包含這樣的輕鏈和/或重鏈，其中所述輕鏈和/或重鏈的骨架區(qū)段FRl至FR4分別源自人抗體輕鏈和 /或重鏈的骨架區(qū)段FRl至FR4。人源化的抗體可以包含至少一個輕鏈和至少一個重鏈，所述輕鏈包含至少一個或多個源自非人來源且具有選自SEQ ID NO: 1、2或3的氨基酸序列的互補決定區(qū)，所述重鏈包含至少一個或多個具有選自SEQ ID NO 4、5或6的氨基酸序列的互補決定區(qū)。所述輕鏈可以包含一個或多個如在SEQ ID No. 7或8之一中所述的氨基酸序列，或在最佳比對后與序列SEQ ID No. 7或8具有至少80%同一性的序列。同樣地， 所述重鏈包含一個或多個如在SEQ ID No. 9、10或11之一中所述的氨基酸序列，或在最佳比對后與序列SEQ ID No. 9、10或11具有至少80%同一性的序列。在一個具體實施方案中，本發(fā)明涉及根據本發(fā)明的鼠抗體或它的功能片段之一， 其特征在于，所述抗體包含這樣的輕鏈序列，其含有氨基酸序列SEQ ID No. 12，或在最佳比對后與序列SEQ ID No. 12具有至少80%同一性的序列，或/和特征在于，它包含這樣的重鏈序列，其含有氨基酸序列SEQ ID No. 13，或在最佳比對后與序列SEQ ID No. 13具有至少80%同一性的序列。Figitumumab (也稱作CP 751，871)是由Pfizer研究的一種全人抗體。在授權給 Abgenix, Inc和Pfizer, he.的美國專利號7，037，498 (它通過引用整體并入本文)中， 描述了 figitumumab的介紹和制備。Cixutumumab (也稱作IMC A-12)是由ImClone研究的一種全人抗體。在美國專利公開號US2008/0025990 (它通過引用整體并入本文)中，描述了 cixutumumab的介紹和制備。SHC717454 (也稱作 CP 751，871)是由 Schering Plough (現在為 Merck & Co·, Inc.)研究的一種全人抗體。在授權給Schering Corporation的美國專利號7，217，796 (它通過引用整體并入本文)中，描述了 SHC7174M的介紹和制備。Roche R1507 由 Hoffmann-LaRoche 研制。在授權給 HofTmann-Laroche，Inc.的美國專利號7，378，503 (它通過引用整體并入本文)中，描述了 Roche R1507的介紹和制備。EM164 由 Immuogen 研制。在 Imunogen, Inc.的國際專利公開 W003/106621 (它通過引用整體并入本文)中，描述了 EM164的介紹和制備。Amgen AMG479 由 Amgen, he 研制。在 Amgen, he 的國際專利公開 W006/069202 (它通過引用整體并入本文)中，描述了 Amgen AMG479的介紹和制備。根據一個類似的具體方面，本發(fā)明涉及根據本發(fā)明的嵌合抗體或它的功能片段之一，其特征在于，所述抗體另外包含源自小鼠異源物種(特別是人)的抗體的輕鏈和重鏈恒定區(qū)，且以優(yōu)選的方式，特征在于，源自人抗體的輕鏈和重鏈恒定區(qū)分別是κ和Υ-1、Υ-2 或Y -4區(qū)。根據一個類似的具體方面，本發(fā)明涉及根據本發(fā)明的人源化的抗體或它的功能片段之一，其特征在于，所述抗體包含輕鏈和/或重鏈，其中所述輕鏈和/或重鏈的骨架區(qū)段 FRl至FR4 (諸如下面在實施例12和13中、在表5和6中所定義的)分別源自人抗體輕鏈和/或重鏈的骨架區(qū)段FRl至FR4。
優(yōu)選地，根據本發(fā)明的人源化的抗體或它的功能片段之一的特征在于，所述人源化的抗體包含含有氨基酸序列SEQ ID No. 8的輕鏈，且特征在于，它包含含有氨基酸序列 SEQ ID No. 10 或 11 (優(yōu)選 SEQ ID No. 11)的重鏈序列。在本發(fā)明中無區(qū)別地使用的術語核酸或核酸序列、多核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸序列、核苷酸序列意在表示修飾的或未修飾的精確核苷酸連接，其允許確定核酸的片段或區(qū)域，其含有或不含有非天然的核苷酸，且能夠對應雙鏈DNA、單鏈DNA，恰如對應所述DNA 的轉錄產物一樣好。在本文中還必須理解，本發(fā)明不涉及在它們的天然染色體環(huán)境中(也就是說在它們的天然狀態(tài))的核苷酸序列。它涉及已經分離和/或純化的序列，也就是說，已經直接地或間接地選擇它們(例如通過拷貝)，它們的環(huán)境已經被至少部分地改變。因而在本文中同樣意在表示通過基因重組(借助于例如宿主細胞)得到的或通過化學合成得到的分離的核酸。在最佳比對后與優(yōu)選序列具有至少80%、優(yōu)選85%、90%、95%和98%的同一性百分比的核酸序列意在表示，與參照核酸序列相比，具有某些修飾(例如，具體地，刪除、截短、延長、嵌合的融合物和/或置換，特別是點置換)的核酸序列。它優(yōu)選地涉及這樣的序列，其中所述序列編碼與參照序列相同的氨基酸序列，這與遺傳密碼的簡并性有關，或涉及能夠與參照序列特異性地雜交的互補序列，優(yōu)選地在高嚴謹性條件下，特別是諸如下面定義的條件。在高嚴謹性條件下的雜交表示，以使它們允許維持互補DNA的2個片段之間的雜交的方式，選擇溫度條件和離子強度條件。作為例證，用于定義上述多核苷酸片段的目的， 雜交步驟的高嚴謹性條件有利地如下所述。在2個步驟中進行DNA-DNA或DNA-RNA雜交(1)在含有5 χ SSC (1 χ SSC對應于0.15 M NaCl + 0.015 M檸檬酸鈉溶液)、50%的甲酰胺、7%的十二烷基硫酸鈉(SDS)、 10 X Denhardt，s、5%的硫酸葡聚糖和1%的鮭魚精DNA的磷酸鹽緩沖液(20 mM, pH 7.5) 中在42°C預雜交3小時；(2)在依賴于探針大小的溫度(即對于〉100個核苷酸的探針大小，42°C )實際雜交20小時，隨后是在2 χ SSC + 2%的SDS中在20°C洗滌20分鐘2次， 在0. 1 χ SSC + 0. 1%的SDS中在20°C洗滌20分鐘1次。最后一次洗滌是在0. 1 χ SSC + 0. 1%的SDS中在60°C進行30分鐘(對于> 100個核苷酸的探針大小)。對于更大或更小尺寸的寡核苷酸，根據 Sambrook 等人(1989，Molecular cloning: a laboratory manual. 第2版.Cold Spring Harbor)的教導，本領域技術人員可以調節(jié)對于確定大小的多核苷酸的如上所述的高嚴謹性雜交條件。給藥劑量和途徑
關于本發(fā)明的mTOR抑制劑和抗-IGF-IR抗體，可以選擇不同的制劑形式，其實例包括口服制劑諸如片劑、膠囊、散劑、顆?；蛞后w，或滅菌的液體腸胃外制劑諸如溶液或懸浮液、 栓劑、軟膏等。mTOR抑制劑可作為藥學上可接受的鹽得到。使用藥學上可接受的載體或稀釋劑，制備本發(fā)明的mTOR抑制劑和抗-IGF-IR抗體。在本說明書中使用的術語“藥學上可接受的鹽”是指常見的藥學上可接受的鹽。例如，當化合物具有羥基或酸性基團諸如羧基和四唑基時，則它可以在羥基或酸性基團處形成堿加成鹽；或當化合物具有氨基或堿性雜環(huán)基團時，則它可以在氨基或堿性雜環(huán)基團處形成酸加成鹽。堿加成鹽包括，例如，堿金屬鹽，如鈉鹽、鉀鹽；堿土金屬鹽，如鈣鹽、鎂鹽；銨鹽； 和有機胺鹽，如三甲胺鹽、三乙胺鹽、二環(huán)己胺鹽、乙醇胺鹽、二乙醇胺鹽、三乙醇胺鹽、普魯卡因鹽、N，N’ - 二芐基乙二胺鹽。酸加成鹽包括，例如，無機酸鹽，如鹽酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、高氯酸鹽；有機酸鹽，如馬來酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、抗壞血酸鹽、三氟乙酸鹽；和磺酸鹽， 如甲磺酸鹽、羥乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽。術語“藥學上可接受的載體或稀釋劑”表示賦形劑[例如，脂肪、蜂蠟、半固體和液體多元醇、天然的或氫化的油等]；水(例如，蒸餾水、特別是注射用蒸餾水等)、生理鹽水、 醇(例如，乙醇)、甘油、多元醇、葡萄糖水溶液、甘露醇、植物油等)；添加劑[例如，擴張劑、 崩解劑、粘合劑、潤滑劑、潤濕劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、分散劑、防腐劑、甜味劑、著色劑、調味劑或芳香劑、濃縮劑、稀釋劑、緩沖物質、溶劑或增溶劑、用于實現儲存效果的化學品、用于調節(jié)滲透壓的鹽、包衣劑或抗氧化劑]等。固體制劑可以制成不含有任何添加劑的片劑、膠囊劑、顆粒劑和散劑的形式，或使用適當的載體(添加劑)來制備。這樣的載體(添加劑)的實例可以包括糖類諸如乳糖或葡萄糖；玉米、小麥或大米的淀粉；脂肪酸諸如硬脂酸；無機鹽諸如硅鋁酸鎂(magnesium metasilicate aluminate)或無水磷酸鈣；合成的聚合物諸如聚乙烯吡咯烷酮或聚亞烷基乙二醇；醇諸如十八烷醇或苯甲醇；合成的纖維素衍生物諸如甲基纖維素、羧甲基纖維素、 乙基纖維素或羥丙基甲基纖維素；和其它常規(guī)使用的添加劑諸如明膠、滑石粉、植物油和阿拉伯樹膠。這些固體制劑(諸如片劑、膠囊劑、顆粒劑和散劑)通?？梢院欣?. 1-100% (按重量計算)、優(yōu)選5-98% (按重量計算)的mTOR抑制劑(基于每種制劑的總重量)。液體制劑可以制成混懸液、糖漿劑、注射劑和點滴輸注劑(靜脈內流體)的形式， 其中使用在液體制劑中常規(guī)使用的適當添加劑，諸如水、醇或植物-衍生的油，諸如大豆油、花生油和芝麻油。具體地，當以肌肉內注射劑、靜脈內注射劑或皮下注射劑的形式腸胃外地施用制劑時，適當的溶劑或稀釋劑可以用下述物質例證注射用蒸餾水，鹽酸利多卡因的水溶液 (用于肌肉內注射)，生理鹽水，葡萄糖水溶液，乙醇，聚乙二醇，丙二醇，用于靜脈內注射的液體(例如，檸檬酸、檸檬酸鈉等的水溶液)或電解質溶液(用于靜脈內點滴輸注和靜脈內注射)，或它們的混合溶液。這樣的注射劑可以是初步溶解的溶液的形式，或粉末本身或與合適的載體(添加齊U)結合的粉末的形式(其可以在使用時溶解)。基于每種制劑的總重量，注射液可以含有例如0. 1-10% (按重量計算)的活性成分?；诿糠N制劑的總重量，液體制劑(諸如用于口服給藥的懸浮液或糖漿劑)可以含有例如0. 1-10% (按重量計算)的活性成分。根據常規(guī)方法或普通技術，本領域的普通技術人員可以制備本發(fā)明中的每個制齊U。例如，如果制劑是口服制劑，可以如下制備例如，通過混合適當量的本發(fā)明化合物和適當量的乳糖，將該混合物裝入適合口服給藥的硬明膠膠囊中。另一方面，如果含有本發(fā)明化合物的制劑是注射劑，可以如下制備例如，通過混合適當量的本發(fā)明化合物和適當量的
140.9%生理鹽水，將該混合物裝入注射用管形瓶中。根據標準藥學實踐，本發(fā)明的組分可以單獨地或者與藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑組合地在藥物組合物中施用給哺乳動物，包括人。所述組分可以口服給藥或腸胃外給藥，包括靜脈內、肌肉內、腹膜內、皮下、直腸和局部給藥途徑。合適的劑量是醫(yī)學從業(yè)人員已知的，且當然取決于特定疾病狀態(tài)、施用的組合物的比活、和接受治療的特定患者。在有些情況下，為了達到希望的治療量，可能必須提供重復施用，即，重復地單次施用特定監(jiān)測的或計量的劑量，其中重復單次施用，直到達到希望的日劑量或效果。下面提供了關于合適的劑量的其它信息。關于本發(fā)明組分的術語“施用”及其變體(例如，“施用”化合物)是指，將組分或組分的前藥導入需要治療的動物的系統(tǒng)中。當與一種或多種活性劑(例如，mTOR抑制劑) 組合地提供本發(fā)明的組分或其前藥時，“施用”及其變體各自意在包括同時和先后導入組分或其前藥和其它藥劑。本文使用的術語“組合物”意在包括包含指定量的指定成分的產品，以及直接或間接由指定量的指定成分的組合所產生的任何產品。本文使用的術語“治療有效量”是指可以在組織、系統(tǒng)、動物或人體內引起生物學或醫(yī)學響應的活性化合物或藥劑的量，所述響應是研究者、獸醫(yī)、醫(yī)生或其它臨床醫(yī)師所尋求的。將合適量的mTOR抑制劑施用給接受癌癥治療的患者。在一個實施方案中，以約10 mg - 40 mg/天的劑量，施用mTOR抑制劑。在本發(fā)明的一個實施方案中，以10 mg/天的劑量，施用mTOR抑制劑。在本發(fā)明的另一個實施方案中，以20 mg/天的劑量，施用mTOR抑制齊U。在本發(fā)明的另一個實施方案中，以30 mg/天的劑量，施用mTOR抑制劑。在本發(fā)明的另一個實施方案中，以40 mg/天的劑量，施用mTOR抑制劑。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述mTOR抑制劑可以每周施用5次。例如， ridaforolimus在第1天開始，并在指定的劑量水平繼續(xù)連續(xù)5天，然后2天不進行 ridaforolimus治療。然后繼續(xù)Ridaforolimus的這種每周5天的計劃。根據已知的方法，將包含本發(fā)明的抗-IGF-IR抗體和mTOR抑制劑的組合治療劑施用給人患者，諸如作為推注靜脈內施用，或通過在一段時間內連續(xù)輸注，通過肌肉內的、腹膜內的、腦脊髓內的、皮下的、關節(jié)內的、滑膜內的、鞘內的、口服的、局部的或吸入的途徑。 抗體的靜脈內或皮下施用是優(yōu)選的。預見到3種不同的遞送方案可用于遞送根據本發(fā)明的抗體。據推測，常規(guī)的靜脈內遞送是大多數腫瘤的標準遞送技術。但是，關于某些腫瘤，諸如在腹腔中的那些(由卵巢、膽管、其它管等的腫瘤來例證)，腹膜內給藥可能有利地用于在腫瘤處得到高劑量的抗體，并使抗體清除最小化。以類似的方式，某些實體腫瘤具有適合局部灌注的脈管系統(tǒng)。局部灌注允許在腫瘤部位保留(Obtention)高劑量的抗體，并使抗體的短期清除最小化。象任何基于蛋白或抗體輸注的治療劑一樣，安全性問題主要涉及(i)細胞因子釋放綜合征，即，低血壓、發(fā)熱、搖動、惡寒，(ii)對所述物質的免疫原性應答的發(fā)展(即， 患者形成針對抗體治療劑的人抗體，或HAHA或HACA應答)，和(iii)對表達EGF受體的正常細胞的毒性，例如，表達EGFR和/或IGF-IR的肝細胞?？梢允褂脴藴试囼灪碗S訪來監(jiān)測這些安全性問題中的每一種。具體地，在臨床試驗過程中，經常監(jiān)測肝功能，以便評估對肝臟的損害(如果有的話)。為了預防或治療疾病，抗體的適當劑量取決于要治療的疾病的類型(如上面所定義)、疾病的嚴重性和病程、抗體是為了預防還是治療目的而施用、以前的治療、患者的病歷和對抗體的應答、以及主治醫(yī)師的判斷。合適地，一次性地或在一系列治療中，將抗體施用給患者。在聯合治療方案中，以治療上有效的或協同的量，施用本發(fā)明的組合物。本文使用的治療有效量是，抗-IGF-IR抗體和mTOR抑制劑的共同施用或本發(fā)明的組合物的施用會導致靶向的疾病或病癥的減輕或抑制的量。治療協同量是，協同地或顯著地減輕或消除與特定疾病有關的病癥或癥狀所必需的抗-IGF-IR抗體和mTOR抑制劑的量。在一個寬的實施方案中，本發(fā)明的治療包含抗-IGF-IR抗體和mTOR抑制劑的聯合施用。聯合施用包括使用分開的制劑或單個藥物制劑的共同施用和任意次序的連續(xù)施用，其中優(yōu)選地，存在兩種(或所有)活性劑同時地發(fā)揮它們的生物活性的時間段。根據生產商的說明書，可以使用這樣的化學治療劑的準備和給藥計劃，或由熟練的從業(yè)人員以經驗為主地確定。在 Chemotherapy Service Ed. , Μ. C. Perry, Williams & Wilkins, Baltimore, Md. (1992)中，也描述了化療的準備和給藥計劃?？梢栽谑┯每贵w之前或之后，施用mTOR抑制劑，或可以與其同時施用。本發(fā)明的治療組合的臨床給藥劑量可能受到不良反應程度的限制。根據疾病的類型和嚴重性，約1 yg/kg-50 mg/kg (例如0· 1-20 mg/kg)的抗體是施用給患者的初始候選劑量，例如，通過一次或多次單獨的施用，或通過連續(xù)輸注。典型的日劑量范圍可以是約1 yg/kg至約100 mg/kg或更多，取決于上述的因素。對于在幾天或更長的時間內重復施用，根據病癥，持續(xù)進行治療，直到發(fā)生疾病癥狀的理想抑制。但是， 其它劑量方案可能是有用的。在一個方面，以范圍為約5 mg/kg至約15 mg/kg的劑量，每周施用本發(fā)明的抗體， 或可以每2-3周施用。在有些方面，化療方案包括傳統(tǒng)的高劑量間歇施用。在某些其它的方面，使用更小的劑量和更高的頻率，施用化學治療劑，且不存在有計劃的中斷(“節(jié)拍化療”)。通過常規(guī)技術和試驗，可以容易地監(jiān)測本發(fā)明的治療進程。在一個實施方案中，所述給藥次序包括，與IGF-IR抗體同時施用mTOR抑制劑—— 例如，每天施用ridaforolimus，同時每周施用IGF-1R抗體(dalotuzumab)。具體地，在10 mg/kg的劑量每周靜脈內施用dalotuzumab，同時每天施用10 mg ridaforolimus。在另一個實施方案中，所述給藥次序包括，與IGF-IR抗體同時施用mTOR抑制劑——例如，每天施用ridaforolimus，同時每周施用IGF-1R抗體(dalotuzumab)。具體地， 在10 mg/kg的劑量每周靜脈內施用dalotuzumab，同時每天施用20 mg ridaforolimus。在一個實施方案中，所述給藥次序包括，與IGF-IR抗體同時施用mTOR抑制劑—— 例如，每天施用ridaforolimus，同時每周施用IGF-1R抗體(dalotuzumab)。具體地，在10 mg/kg的劑量每周靜脈內施用dalotuzumab，同時每天施用30 mg ridaforolimus 在一個實施方案中，所述給藥次序包括，與IGF-IR抗體同時施用mTOR抑制劑—— 例如，每天施用ridaforolimus，同時每周施用IGF-1R抗體(dalotuzumab)。具體地，在10 mg/kg的劑量每周靜脈內施用dalotuzumab,同時每天施用40 mg ridaforolimus。IGF-IR抗體的替代給藥方案如下(a) 15 mg/kg負載，隨后每周7. 5 mg/kg ； (b) 每周 7. 5 mg/kg ； (c)每周 10. 0 mg/kg ； (d)隔周 7. 5 mg/kg ； (e)隔周 10. 0 mg/kg ； (f)隔周 20 mg/kg ； (g)每 3 周 30 mg/kg。所述組合的實例給藥方案如下
權利要求
1.一種使用mTOR抑制劑和抗-IGF-IR抗體治療選自下述癌癥的方法非小細胞肺癌、乳腺癌、結直腸癌、軟組織或骨肉瘤和子宮內膜癌，其中所述mTOR抑制劑選自ridaforolimus、依維莫司、坦羅莫司和它們的組合，且所述抗-IGF-IR抗體選自 dalotuzumab、figitumumab、cixutumumab、SHC 717454、Roche Rl507 禾口 Amgen AMG479。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述mTOR抑制劑是ridaforolimus。
3.如權利要求2所述的方法，其中所述抗-IGF-IR抗體包含至少一個非人起源的重鏈互補決定區(qū)(CDR)和至少一個源自非人來源的輕鏈互補決定區(qū)(CDR)，其中結合IGF-IR的抗體具有至少一種選自下述的性質(a)結合IGF-1R，但是不結合頂；(b)結合包含胰島素受體和胰島素生長因子受體的雜合受體aR/IGF-lR雜合-R)，但是不結合單獨的頂；(c) 抑制人IGF-IR和IGF-I和/或IGF-2之間的結合；(d)以小于100 nM的抑制常數和/或 IC50，結合雜合-R和它的天然配體，優(yōu)選地在本文中命名為IGFl和/或IGF2和/或胰島素；(e)特異性地抑制所述IGF-IR的酪氨酸激酶活性；(f)特異性地抑制所述雜合-R的酪氨酸激酶活性；(g)對所述雜合-R具有10 nM或更小的結合親和力；(h)下調IGF-IR表達；(i)下調雜合-R表達；(j)抑制體內腫瘤生長。
4.根據權利要求3所述的方法，其中所述重鏈CDR包含選自SEQID NO. 4、5或6的氨基酸序列，且所述輕鏈⑶R包含選自SEQ ID NO. 1、2或3的氨基酸序列。
5.根據權利要求3所述的方法，其中所述人源化的抗體或它的功能片段之一包含含有選自SEQ ID No. 7或8的氨基酸序列的輕鏈，或含有選自SEQ ID NO. 9、10或11的氨基酸序列的重鏈。
6.如權利要求3所述的方法，其中所述抗-IGF-IR抗體是dalotuzumab。
7.如權利要求1所述的方法，其中所述mTOR抑制劑是ridaforolimus，且所述抗-IGF-IR 抗體是 dalotuzumab。
8.如權利要求7所述的方法，其中以10mg至40 mg的劑量施用ridaforolimus。
9.如權利要求8所述的方法，其中每周施用ridaforolimus5次。
10.如權利要求7所述的方法，其中以10mg/kg的劑量，靜脈內地施用dalotuzumab。
11.如權利要求7所述的方法，其中每周施用dalotuzumab1次。
12.如權利要求7所述的方法，其中每隔一周施用dalotuzumab1次。
全文摘要
公開了使用mTOR抑制劑和抗-IGF-1R抗體治療癌癥的方法。
文檔編號A61K39/395GK102481361SQ201080016929
公開日2012年5月30日 申請日期2010年4月6日 優(yōu)先權日2009年4月16日
發(fā)明者溫特 C., 克林霍菲 R., 薩思亞納拉亞南 S. 申請人:默沙東公司