用于治療癌癥和感染性疾病的方法和組合物的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及包含CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑的組合物；以及使用所述組合物來(lái)治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其進(jìn)展的方法。本發(fā)明還涉及CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和至少一種其它藥劑的組合用于治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其進(jìn)展的用途。所述其它藥劑可以是免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼免疫治療劑、免疫佐劑或免疫調(diào)節(jié)劑或其組合。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
用于治療癌癥和感染性疾病的方法和組合物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及分子免疫學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)。本文具體描述了使用單獨(dú)CD4淋巴細(xì)胞耗 竭劑或與免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼免疫治療劑、免疫佐劑或免疫調(diào)節(jié)劑中的任何一種或多 種組合來(lái)治療癌癥或感染性疾病的組合物和方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 本文中所引用的所有出版物均通過(guò)引用整體并入，其程度就如同每個(gè)單獨(dú)的出版 物或?qū)＠暾?qǐng)被明確地和單獨(dú)地指定為通過(guò)引用并入一樣。以下描述包括可以用于理解本 發(fā)明的信息。這并不是承認(rèn)本文所提供的任何信息是現(xiàn)有技術(shù)或與目前要求保護(hù)的發(fā)明相 關(guān)，或明確或隱含地引用的任何出版物是現(xiàn)有技術(shù)。
[0003] 免疫系統(tǒng)可以提供針對(duì)癌癥的保護(hù)。有效的免疫刺激產(chǎn)生持久的記憶淋巴細(xì)胞， 其能夠?qū)χ貜?fù)抗原激發(fā)快速地作出應(yīng)答。表達(dá)CD4的淋巴細(xì)胞包括輔助性T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞。輔助性T細(xì)胞對(duì)于增加過(guò)繼免疫反應(yīng)是關(guān)鍵的。然而，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)抑制細(xì)胞毒 性T細(xì)胞的功能并且通常用于限制免疫反應(yīng)。因此，CD4耗竭被評(píng)價(jià)為用于消除Treg活性的 策略。雖然⑶4淋巴細(xì)胞中只有一小部分是Treg細(xì)胞，但⑶4耗竭仍然是用于消耗Treg活性 的有效方法，并且重要的是，它具有快速轉(zhuǎn)變到臨床使用的潛力。人源化CD4耗竭抗體已經(jīng) 在自身免疫病癥的臨床試驗(yàn)中被評(píng)價(jià)為抑制免疫系統(tǒng)的策略。然而，本文所描述的是使用 CD4淋巴細(xì)胞耗竭抗體來(lái)刺激免疫系統(tǒng)。本文提供了針對(duì)受試者中的癌癥和感染性疾病的 療法，所述療法是通過(guò)將CD4+淋巴細(xì)胞的耗竭與免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼免疫治療劑、免疫 佐劑和免疫調(diào)節(jié)劑或其組合中的任何一種或多種組合。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案提供用于治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/ 或減緩其進(jìn)展的方法。所述方法包括提供包含CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑的組合物和向受試者施 用治療有效量的該組合物，從而治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其 進(jìn)展。
[0005] 本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案提供用于治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/ 或減緩其進(jìn)展的方法。所述方法包括提供CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和選自由免疫檢查點(diǎn)抑制劑、 過(guò)繼免疫治療劑、免疫佐劑和免疫調(diào)節(jié)劑組成的組的至少一種其它藥劑；以及向受試者施 用治療有效量的CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和治療有效量的免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼免疫治療劑、 免疫佐劑和免疫調(diào)節(jié)劑中的至少一種，從而治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕嚴(yán)重程度和/ 或減緩其進(jìn)展。在一些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括施用治療有效量的mTOR抑制劑。
[0006] 本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案提供用于治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/ 或減緩其進(jìn)展的方法。所述方法包括提供CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和過(guò)繼免疫治療劑(例如，樹(shù) 突細(xì)胞(DC)疫苗）以及施用治療有效量的CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和治療有效量的過(guò)繼免疫治 療劑，從而治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其進(jìn)展。
[0007] 本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案提供用于治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/ 或減緩其進(jìn)展的方法。所述方法包括提供CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和檢查點(diǎn)抑制劑(例如，抗ro-1抗體)和施用治療有效量的CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和治療有效量的檢查點(diǎn)抑制劑，從而治療、 預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其進(jìn)展。
[0008] 本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案提供用于治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/ 或減緩其進(jìn)展的方法。所述方法包括提供CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑、樹(shù)突細(xì)胞(DC)疫苗和mTOR抑 制劑以及施用有效量的CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑、樹(shù)突細(xì)胞疫苗和mTOR抑制劑中的每一種，從而 治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其進(jìn)展。
[0009] 本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案提供包含CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑的藥物組合物。另外的實(shí)施 方案提供包含免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼免疫治療劑、免疫佐劑和免疫調(diào)節(jié)劑中的任一種的 藥物組合物。
[0010] 本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案提供用于治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/ 或減緩其進(jìn)展的試劑盒。所述試劑盒包括CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和關(guān)于使用組合物來(lái)治療、預(yù) 防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其進(jìn)展的說(shuō)明書(shū)。
[0011] 本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案提供用于治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/ 或減緩其進(jìn)展的試劑盒。所述試劑盒包括CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑以及免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼 免疫治療劑、免疫佐劑和免疫調(diào)節(jié)劑中的至少一種。所述試劑盒進(jìn)一步包括關(guān)于使用CD4淋 巴細(xì)胞耗竭劑以及免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼免疫治療劑、免疫佐劑和免疫調(diào)節(jié)劑中的至少 一種來(lái)治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其進(jìn)展的說(shuō)明書(shū)。
[0012] 在各個(gè)實(shí)施方案中，所述病狀是癌癥。在示例性的實(shí)施方案中，癌癥可以是腎癌、 黑色素瘤、前列腺癌、乳腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、肺癌、結(jié)腸癌或膀胱癌中的任一種。在一些實(shí) 施方案中，所述病狀是感染性疾病。
[0013] 本發(fā)明的各種方法、組合物和試劑盒可用于治療癌癥或感染性疾病。在示例性實(shí) 施方案中，本發(fā)明的方法、組合物和試劑盒可用于治療惡性贅生細(xì)胞增生性病癥或疾病的 某些子集，包括但不限于癌和黑色素瘤。在示例性實(shí)施方案中，癌包括腎細(xì)胞癌。
【附圖說(shuō)明】
[0014] 在參照?qǐng)D中說(shuō)明了示例性實(shí)施方案。希望本文所公開(kāi)的實(shí)施方案和附圖將被認(rèn)為 是說(shuō)明性的而非限制性的。
[0015] 圖1根據(jù)本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案描繪了存在mTOR抑制的免疫刺激和抑制作用二 者;然而凈效應(yīng)是增強(qiáng)的抗腫瘤免疫。（a)黑色素瘤腫瘤預(yù)防模型的實(shí)驗(yàn)方案:小鼠 （n = 5/ 組)在第-30天和第-23天接受腫瘤裂解物脈沖的DC疫苗，并在第-23天至第-13天每日腹膜 內(nèi)注射替西羅莫司（temsirolimus)。在第0天，將B16腫瘤細(xì)胞皮下注射到側(cè)腹中。示出了 B16腫瘤生長(zhǎng)(左側(cè))和生存(右側(cè)）曲線。結(jié)果代表重復(fù)實(shí)驗(yàn)。（b)表征在用DC疫苗和替西羅 莫司治療后的淋巴細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方案：將Thy I. IPme 1 -1淋巴細(xì)胞過(guò)繼轉(zhuǎn)移至Thy 1.2B6小鼠 中，該小鼠在第-6天接受腫瘤裂解物脈沖的DC疫苗并且每日接受替西羅莫司達(dá)5天。在第0 天收獲脾細(xì)胞，并針對(duì)〇)8、11^1.1、11^丨』〇11168和0)4/^(??3染色并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分 析。提供了代表性結(jié)果(左)和匯總數(shù)據(jù)(右）。結(jié)果代表重復(fù)實(shí)驗(yàn)。（c)使用經(jīng)替西羅莫司處 理48小時(shí)的pmel-Ι淋巴細(xì)胞和腫瘤裂解物脈沖的CpG活化DC，在體外混合培養(yǎng)物中表征淋 巴細(xì)胞。針對(duì)〇)8、11^1.1、11^丨』〇11168和0)4/^(??3使淋巴細(xì)胞染色并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行 分析。提供了代表性結(jié)果（左）和匯總數(shù)據(jù)（右）。結(jié)果代表重復(fù)實(shí)驗(yàn)。*P<〇.〇5，**p< 0.01，***ρ<0·005〇
[0016] 圖2根據(jù)本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案描繪了CD4耗竭增強(qiáng)mTor抑制的抗腫瘤作用。（a) 在第〇天，將RENCA-CA9腫瘤細(xì)胞植入到Balb/C小鼠中（n = 5/組）。在第6天和第10天用aCD4 抗體使⑶4淋巴細(xì)胞耗竭。在第14至第34天，每天用替西羅莫司處理小鼠。監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)。結(jié) 果代表三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。（b)在相同的實(shí)驗(yàn)中，在第45天收獲淋巴細(xì)胞，用CA9肽再刺激，并且 針對(duì)CD8和IFN γ染色。（c)在⑶4耗竭后，在第0、1、10天收集脾、淋巴結(jié)和血液。針對(duì)⑶4、⑶8 和FoxP3使淋巴細(xì)胞染色并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分析。（c-e)報(bào)告了在CD4耗竭后的第0、1、 I〇天的脾、淋巴結(jié)和血液中的CD4細(xì)胞的百分比。（d)在CD4耗竭后，報(bào)告了 CD4或CD8陽(yáng)性的 脾細(xì)胞的百分比，并且報(bào)告了FoxP3陽(yáng)性的CD4細(xì)胞的百分比。（e)在相同的實(shí)驗(yàn)中，報(bào)告了 CD4、CD8和CD4/FoxP3 陽(yáng)性的脾細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量。*p <0 · 05，**p <0 · 01，***p <0 · 005。
[0017] 圖3根據(jù)本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案描繪了 CD4耗竭和替西羅莫司的組合產(chǎn)生依賴(lài)于 記憶CD8細(xì)胞的抗腫瘤免疫。（a)每日用替西羅莫司處理荷瘤小鼠 （n = 8)，然后在原發(fā)性腫 瘤植入后第35天用RENCA-CA9再激發(fā)。在第36天通過(guò)注射aCD8抗體使⑶8細(xì)胞耗竭。（b)用替 西羅莫司和CD4耗竭處理荷瘤小鼠 （n = 8)，然后在原發(fā)性腫瘤植入后第35天用RENCA-CA9再 激發(fā)。在第36天通過(guò)注射aCD8抗體使CD8細(xì)胞耗竭。（c-e)從經(jīng)過(guò)替西羅莫司和CD4耗竭處理 的小鼠中收獲淋巴細(xì)胞。用CA9肽和IL2(10u/ml)體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞3天，然后過(guò)繼轉(zhuǎn)移到初 次用于實(shí)驗(yàn)的B6小鼠中，在24小時(shí)后通過(guò)靜脈內(nèi)注射的2xl0 5個(gè)RENCA腫瘤細(xì)胞激發(fā)該小 鼠。在靜脈內(nèi)腫瘤激發(fā)后第30天收集肺。測(cè)定了肺重量(d)和肺腫瘤沉積物的數(shù)量(ehlL〗 (白細(xì)胞介素 _2)，*p<0.05,**p<0.01，***p<0.005。
[0018] 圖4根據(jù)本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案描繪了 CD4耗竭和替西羅莫司治療的組合增強(qiáng)CD8 記憶細(xì)胞的功能。（a)實(shí)驗(yàn)方案:將來(lái)自Thyl. IPmel-I小鼠的淋巴細(xì)胞過(guò)繼轉(zhuǎn)移到Thyl .2B6 小鼠中，用腫瘤裂解物脈沖的DC疫苗進(jìn)行刺激并在第7天和第10天用aCD4抗體處理，并且在 第10天至第24天每日用替西羅莫司處理。結(jié)果代表三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。（b)在用腫瘤裂解物脈沖 的DC疫苗進(jìn)行再激發(fā)前一天收獲脾細(xì)胞(n = 3/組），用抗體染色，并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分 析。示出了對(duì)于指示標(biāo)記陽(yáng)性的CD8細(xì)胞的百分比。（c)在用腫瘤裂解物脈沖的DC疫苗進(jìn)行 再激發(fā)后的4天收獲脾細(xì)胞(n = 3/組），用抗體染色，并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分析。示出了對(duì) 于指示標(biāo)記陽(yáng)性的⑶8細(xì)胞的百分比。*p <0.05, <0.01<0.005。
[0019] 圖5根據(jù)本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案描繪了 F〇XP3+Treg耗竭和替西羅莫司的組合增強(qiáng) 體內(nèi)CTL功能。(a)實(shí)驗(yàn)方案:DEREG小鼠接受腫瘤裂解物脈沖的DC疫苗，并在第6天和第10天 通過(guò)腹膜內(nèi)用白喉毒素處理，并且在第10天至第20天每日用替西羅莫司處理。在第35天進(jìn) 行體內(nèi)CTL測(cè)定。（b)使用在用白喉毒素處理小鼠之前和之后獲得的外周血淋巴細(xì)胞，通過(guò) 流式細(xì)胞術(shù)評(píng)估CD4+FoxP3+細(xì)胞。（c)使用在注射靶細(xì)胞后14小時(shí)收獲的脾細(xì)胞通過(guò)流式 細(xì)胞術(shù)分析體內(nèi)CTL結(jié)果。CTL(細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞），*p<0.05，#p<0.01，*#p<0.005。
[0020] 圖6根據(jù)本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案描繪了 F〇xP3+Treg的過(guò)繼轉(zhuǎn)移在用CD4耗竭和替 西羅莫司的組合處理過(guò)的小鼠中降低體內(nèi)CTL功能。（a)實(shí)驗(yàn)方案:B6接受腫瘤裂解物脈沖 的DC疫苗，并在第6天和第10天通過(guò)腹膜內(nèi)用α⑶4抗體處理，并且在第14天至第24天每日用 替西羅莫司處理在第20天過(guò)繼轉(zhuǎn)移從來(lái)自接受腫瘤裂解物脈沖的DC疫苗的GFP-FoxP3小鼠 的淋巴細(xì)胞分選的Treg，并在第35天進(jìn)行體內(nèi)CTL測(cè)定。（b)使用在注射靶細(xì)胞后14小時(shí)收 獲的脾細(xì)胞通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析體內(nèi)CTL結(jié)果（n = 3/組）。葉<0.05，**p<0 . Ol 0.005〇
[0021] 圖7根據(jù)本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案描繪了在經(jīng)過(guò)CD4耗竭處理后，恢復(fù)的Treg群體的 免疫抑制性降低。（a)使用在圖4a中所概述的實(shí)驗(yàn)方案處理小鼠。在第45天，通過(guò)流式細(xì)胞 術(shù)檢查脾細(xì)胞中的CD4+FoxP3+細(xì)胞。（b)在CD4耗竭后回收的脾細(xì)胞被用來(lái)富集CD4+細(xì)胞， 其然后通過(guò)⑶25狀態(tài)進(jìn)行分選。對(duì)于所得組，示出了針對(duì)⑶4+⑶25+狀態(tài)和⑶4+⑶25-狀態(tài) 的代表性流式細(xì)胞術(shù)。（c)CD4+CD25-細(xì)胞與用B16腫瘤裂解物脈沖的DC共培養(yǎng)。通過(guò)流式細(xì) 胞術(shù)分析CD4+CD25-細(xì)胞的IFN γ或IL4表達(dá)。（d) CD4+CD25+細(xì)胞與用Bl6腫瘤裂解物脈沖的 DC和來(lái)自使用B16腫瘤裂解物脈沖的DC進(jìn)行免疫的小鼠的CD8細(xì)胞共培養(yǎng)。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù) 使用CFSE稀釋測(cè)定監(jiān)測(cè)CD8細(xì)胞增殖。*p<0 · 05，#p<0 · 01，*#p<0 · 005。
[0022] 圖8根據(jù)本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案描繪了腫瘤增加 Treg。檢查來(lái)自荷瘤小鼠（直徑為 約I cm)和無(wú)腫瘤對(duì)照小鼠的淋巴結(jié)、脾、骨髓和外周血淋巴細(xì)胞(PBL)中表達(dá)FoxP3的⑶4細(xì) 胞的百分比。示出了流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果。
[0023]圖9根據(jù)本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案描繪了 aCD4抗體使效應(yīng)CD4亞型耗竭。(a)在施用α CD4抗體之前(第0天)和之后的1天或10天收集脾細(xì)胞，并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分析。示出了 針對(duì)CD4和IL-2、IL-4或IL-17染色的總脾細(xì)胞的數(shù)目。（b)示出了針對(duì)IL-2、IL-4或IL-17染 色的⑶4細(xì)胞的百分比。
[0024] 圖10根據(jù)本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案描繪了免疫刺激前的CD4耗竭阻止CD8記憶細(xì)胞 的形成。實(shí)驗(yàn)方案類(lèi)似于圖4。包括其中在第-1天和第+1天施用aCD4抗體的另一個(gè)組(組A)。 (a)示出了在再激發(fā)記憶細(xì)胞后5天收獲的脾細(xì)胞中表達(dá)Thyl. 1的CD8細(xì)胞的百分比。（b)示 出 了表達(dá) Eomes 的 CD8 細(xì)胞的百分比。*ρ<0·05，**ρ<0·01，***ρ<0·005。
[0025] 圖11根據(jù)本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案描繪了 Treg或CD4細(xì)胞的耗竭增強(qiáng)抗腫瘤作用。
[0026] 圖12根據(jù)本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案描繪了 CD4耗竭增強(qiáng)Η)-1阻斷抗腫瘤作用。
[0027] 圖13根據(jù)本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案描繪了 CD4耗竭增強(qiáng)腫瘤特異性細(xì)胞免疫。A.實(shí) 驗(yàn)示意圖。B.CD4耗竭刺激腫瘤特異性干擾素 -γ從CD8細(xì)胞的分泌。因此，CD4耗竭導(dǎo)致能夠 響應(yīng)于腫瘤而被活化的CD8細(xì)胞的訓(xùn)導(dǎo)。C.這些相同的CD8細(xì)胞能夠殺傷RENCA腫瘤細(xì)胞。 D.B16腫瘤生長(zhǎng)曲線。
[0028] 圖14根據(jù)本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案描繪了抗CD4抗體、替西羅莫司和樹(shù)突細(xì)胞疫苗 的組合展現(xiàn)增強(qiáng)的抗腫瘤活性。Α.實(shí)驗(yàn)示意圖。Β.示出了具有平均值標(biāo)準(zhǔn)誤差（SEMW^B16 腫瘤生長(zhǎng)曲線。**Ρ<〇.〇〇1。
【具體實(shí)施方式】
[0029] 本文引用的所有參考文獻(xiàn)通過(guò)引用整體并入，就如同完全闡述一般。除非另有規(guī) 定，否則本文所使用的技術(shù)和科技術(shù)語(yǔ)具有如本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的一般技術(shù)人員通常所 理解的相同含義。Al Ien等人，Remington: TheSc ienceandPracticeof Pharmacy第22版， PharmaceuticalPress(2012 年 9 月 15 曰）；Homyak等人， IntroductiontoNanoscienceandNanotechnology，CRCPress(2008);Singleton和 Sainsbury，Di ctionaryofMicrobio IogyandMo IecularBio Iogy第3版，修訂版，，J .Wil ey& Sons(NewYork，NY2006);Smith,March' sAdvancedOrganicChemistryReactions， MechanismsandStructure第7版，J.Wiley&Sons(NewYork，NY2013);Singleton， DictionaryofDNAandGenomeTechnology第3版，Wiley-BlackwelI (November28,2012);以及 Green和Sambrook，MolecularCloning:ALaboratoryManual第4版， ColdSpringHarborLaboratoryPress (ColdSpringHarbor，NY2012)提供給本領(lǐng)域技術(shù)人員 關(guān)于本申請(qǐng)中所用的許多術(shù)語(yǔ)的一般指導(dǎo)。關(guān)于如何制備抗體的參考文獻(xiàn)，參見(jiàn) Greenfield,AntibodiesALaboratoryManual第2版，ColdSpringHarborPress (ColdSpringHarborNY，2013); K6hler和MiIstein，Derivationofspecificantibody-producingtissuecultureandtumorlinesbycelIfusion,Eur.J.Tmmunol·1976年7月6 日 (7) :511-9;9116611和361;[01<:，!1111]1&11126(1;[1111]11111〇81〇13111;[118，美國(guó)專(zhuān)利第5,585,089號(hào)（1996年 12月）；以及Riechmann等人，Reshapinghumanantibodiesfortherapy，Naturel988Mar24， 332(6162):323-7。
[0030] 關(guān)于兒科學(xué)的參考文獻(xiàn)，參見(jiàn)Schwartz等人，The5_MinutePediatricConsult第4 版，，LippincottWilliams & Wilkins，（Junel6, 2005) ;Robertson 等人， TheHarrietLaneHandbook:AManualforPediatricHouseOfficers第I7版，Mosby(2005年6月 24 曰）；和Hay 等人，CurrentDiagnosisandTreatmentinPediatrics (CurrentPediatricsDiagnosis&Treatment)第18版，McGraw-HiIlMedical(September25， 2006) 〇
[0031] 本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到類(lèi)似于或等同于本文所描述的那些的許多方法和材料， 它們可以用于本發(fā)明的實(shí)踐中。結(jié)合以舉例方式說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方案的各種特征的附 圖，本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將從以下詳細(xì)描述變得顯而易見(jiàn)。實(shí)際上，本發(fā)明不以任何方 式限于所描述的方法和材料。為方便起見(jiàn)，本文、本說(shuō)明書(shū)、實(shí)施例和所附權(quán)利要求中所采 用的某些術(shù)語(yǔ)集合于此。
[0032] 除非另有說(shuō)明，或由上下文暗示，否則下列術(shù)語(yǔ)和短語(yǔ)包括下文提供的含義。除非 另外明確說(shuō)明，或從上下文中顯而易見(jiàn)，否則以下術(shù)語(yǔ)和短語(yǔ)不排除所述術(shù)語(yǔ)或短語(yǔ)在其 所屬領(lǐng)域中已獲得的含義。所述定義被提供來(lái)幫助描述具體實(shí)施方案，并且不旨在限制要 求保護(hù)的發(fā)明，因?yàn)楸景l(fā)明的范圍僅受權(quán)利要求限制。除非另有規(guī)定，否則本文所使用的所 有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有如本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的一般技術(shù)人員通常所理解的相同含義。 [00 33]如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)"包含（comprising)"或"包含（comprises)"被用來(lái)指在一 個(gè)實(shí)施方案中有用的組合物、方法和其相應(yīng)的組分，還開(kāi)發(fā)式地包含未指定的要素，它們無(wú) 論是否有用。本領(lǐng)域內(nèi)的人員應(yīng)該了解的是，一般情況下，本文所使用的術(shù)語(yǔ)通常旨在作為 "開(kāi)放式"術(shù)語(yǔ)(例如，術(shù)語(yǔ)"包括"應(yīng)該被解釋為"包括但不限于"，術(shù)語(yǔ)"具有"應(yīng)該被解釋為 "具有至少"，術(shù)語(yǔ)"包括"應(yīng)該被解釋為"包括但不限于"等）。
[0034]除非另有說(shuō)明，否則在描述本申請(qǐng)的一個(gè)具體實(shí)施方案的上下文中（特別是在權(quán) 利要求書(shū)的上下文中）使用的術(shù)語(yǔ)"一種"和"一個(gè)"和"該"以及類(lèi)似提及可以被解釋為涵蓋 單數(shù)和復(fù)數(shù)。本文中列舉的值的范圍僅旨在用作單獨(dú)地提及落在該范圍內(nèi)的每個(gè)不同值的 速寫(xiě)方法。除非本文另有指示，否則每個(gè)單獨(dú)的值被并入本說(shuō)明書(shū)中，就如同它在本文中被 單獨(dú)地列舉一樣。可以按照任何適當(dāng)?shù)捻樞蜻M(jìn)行本文中描述的所有方法，除非本文中另外 指示或顯然與上下文矛盾。針對(duì)本文的某些實(shí)施方案所提供的任何和所有實(shí)例或示例性用 語(yǔ)(例如，"諸如"）的使用僅旨在更好地闡明本申請(qǐng)，并且不對(duì)另外要求保護(hù)的本申請(qǐng)的范 圍構(gòu)成限制。縮寫(xiě)"e.g.(例如)"衍生自拉丁語(yǔ)exempligratia，并且在本文中用于指示非限 制性實(shí)例。因此，縮寫(xiě)"e.g."與術(shù)語(yǔ)"例如"同義。本說(shuō)明書(shū)中沒(méi)有任何語(yǔ)言應(yīng)該被解釋為指 示任何未要求保護(hù)的元素對(duì)本申請(qǐng)的實(shí)踐是必要的。
[0035] 如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)"治療"或"改善"在關(guān)于疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病狀使用時(shí)是指 治療性治療和預(yù)防性或防范性措施，其中目的是防止、逆轉(zhuǎn)、緩解、改善、抑制、減輕、減緩或 阻止癥狀或病狀的進(jìn)展或嚴(yán)重程度。術(shù)語(yǔ)"治療"包括減少或減輕病癥的至少一種不良作用 或癥狀。如果一種或多種癥狀或臨床標(biāo)記減少，則治療一般是"有效的"?；蛘?，如果疾病狀 態(tài)的進(jìn)展減少或停止，則治療是"有效的"。也就是說(shuō)，"治療"不僅包括癥狀或標(biāo)記的改善， 而且還包括癥狀的進(jìn)展或惡化(將在缺少治療的情況下預(yù)期到）的停止或至少減緩。此外， "治療"可以意指追求或獲得有益的結(jié)果，或降低個(gè)體發(fā)展病狀的機(jī)會(huì)，即使該治療最終是 不成功的。需要治療的受試者包括已患有所述病狀的受試者以及易于患有所述病狀的受試 者或?qū)⒁A(yù)防所述病狀的受試者。
[0036] "有益的結(jié)果"或"期望的結(jié)果"可以包括但決不限于:減輕或緩解疾病狀況的嚴(yán)重 程度、防止疾病狀況惡化、治愈疾病狀況、防止疾病狀況發(fā)展、降低患者發(fā)展疾病狀況的機(jī) 會(huì)、降低發(fā)病率和死亡率以及延長(zhǎng)患者的生命或預(yù)期壽命。作為非限制性實(shí)例，"有益的結(jié) 果"或"期望的結(jié)果"可以是一種或多種癥狀的緩解、不足程度的降低、癌癥進(jìn)展的穩(wěn)定（即， 未惡化)狀態(tài)、轉(zhuǎn)移或侵襲的延遲或減緩以及癌癥相關(guān)癥狀的改善或減輕。
[0037] 如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)"施用"是指通過(guò)使如本文所公開(kāi)的藥劑至少部分定位在所 需位點(diǎn)的方法或途徑將該藥劑置于受試者中。
[0038] 如本文中所使用，"癌癥"或"腫瘤"是指干擾身體器官和系統(tǒng)的正常功能的不受控 制的細(xì)胞生長(zhǎng)，和/或所有贅生細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖(無(wú)論是惡性還是良性的），以及所有的癌前 和癌性細(xì)胞和組織。在此定義中包括良性和惡性癌癥，以及休眠腫瘤或微轉(zhuǎn)移。如本文中所 使用，術(shù)語(yǔ)"癌"是指由上皮細(xì)胞所引起的癌癥。如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)"侵入性"是指浸潤(rùn)和 破壞周?chē)M織的能力。黑色素瘤是皮膚腫瘤的侵入性形式。癌癥的實(shí)例包括但不限于:B細(xì) 胞淋巴瘤(霍奇金氏淋巴瘤和/或非霍奇金氏淋巴瘤）、腦腫瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、肝細(xì) 胞癌、胃癌、胰腺癌、宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、泌尿道癌、甲狀腺癌、腎癌、癌、黑色素 瘤、頭頸癌、腦癌和前列腺癌(包括但不限于雄激素依賴(lài)性前列腺癌和雄激素非依賴(lài)性前列 腺癌）。
[0039] 如本文中所使用，"病狀"和"疾病狀態(tài)"可以包括癌癥、腫瘤或感染性疾病。在示例 性實(shí)施方案中，所述病狀包括但決不限于惡性贅生細(xì)胞增生性病癥或疾病的任何形式。在 示例性實(shí)施方案中，病狀包括腎癌、黑色素瘤、前列腺癌、乳腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、肺癌、結(jié)腸 癌或膀胱癌中的任何一種或多種。
[0040] 本文所使用的"免疫細(xì)胞"是指哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)的細(xì)胞，包括但不限于:抗原呈 遞細(xì)胞、B細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、細(xì)胞毒性T細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、粒細(xì)胞、輔助性T 細(xì)胞、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、記憶細(xì)胞、單核細(xì)胞、天然殺傷細(xì)胞、中性粒 細(xì)胞、吞噬細(xì)胞、漿細(xì)胞和T細(xì)胞。
[0041] 本文所使用的"免疫反應(yīng)"是指包括但不限于下列的免疫:先天性免疫、體液免疫、 細(xì)胞免疫、免疫、炎癥反應(yīng)、獲得性(適應(yīng)性)免疫、自身免疫和/或過(guò)度活躍免疫。
[0042] 如本文所使用，術(shù)語(yǔ)"樣本"或"生物樣本"表示從生物有機(jī)體提取或分離的樣本， 例如來(lái)自受試者的腫瘤樣本。示例性生物樣本包括但不限于：生物流體樣本;血清;血漿； 尿;唾液;腫瘤樣本;腫瘤感染性疾病和/或組織樣本等。該術(shù)語(yǔ)還包括上述樣本的混合物。 術(shù)語(yǔ)"樣本"還包括未經(jīng)處理或預(yù)處理(或預(yù)加工）的生物樣本。在一些實(shí)施方案中，樣本可 以包括來(lái)自受試者的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，樣本可以是腫瘤細(xì)胞樣本，例如 該樣本可以包括癌細(xì)胞、來(lái)自腫瘤的細(xì)胞和/或腫瘤感染性疾病。
[0043] 術(shù)語(yǔ)"功能性"在連同"衍生物"或"變體"或"片段" 一起使用時(shí)是指這樣的多肽，其 具有的生物活性大體上類(lèi)似于其衍生物或變體或片段為所述多肽的實(shí)體或分子的生物活 性。
[0044]如本文所使用，"受試者"意指人或動(dòng)物。通常，動(dòng)物是脊椎動(dòng)物，諸如靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物、 嚙齒動(dòng)物、家畜或狩獵動(dòng)物。靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物包括黑猩猩、食蟹猴、蜘蛛猴和獼猴（例如，恒河 猴）。嚙齒動(dòng)物包括小鼠、大鼠、土拔鼠、雪貂、兔和倉(cāng)鼠。家畜和狩獵動(dòng)物包括牛、馬、豬、鹿、 野牛、水牛、貓科動(dòng)物(例如家貓)和犬科動(dòng)物（例如，狗、狐貍、狼）。術(shù)語(yǔ)"患者"、"個(gè)體"和 "受試者"在本文中可互換使用。在一個(gè)實(shí)施方案中，受試者是哺乳動(dòng)物。哺乳動(dòng)物可以是 人、非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物、小鼠、大鼠、狗、貓、馬或牛，但是并不限于這些實(shí)例。另外，本文所描述 的方法可以用于治療家養(yǎng)動(dòng)物和/或?qū)櫸铩?br>[0045]受試者可以是先前已被診斷為或鑒定為患有或具有需要監(jiān)測(cè)的疾病狀態(tài)(例如， 癌癥或感染性疾病)或與該疾病狀態(tài)有關(guān)的一種或多種并發(fā)癥并且任選地已經(jīng)接受針對(duì)該 疾病狀態(tài)或與該疾病/病狀有關(guān)的一種或多種并發(fā)癥的治療的個(gè)體?；蛘?，受試者還可以是 先前尚未被診斷為具有疾病狀態(tài)或與該疾病/病狀有關(guān)的一種或多種并發(fā)癥的個(gè)體。例如， 受試者可以是表現(xiàn)出關(guān)于疾病狀態(tài)或與疾病狀態(tài)有關(guān)的一種或多種并發(fā)癥的一種或多種 風(fēng)險(xiǎn)因素的個(gè)體或者未表現(xiàn)出風(fēng)險(xiǎn)因素的受試者。對(duì)針對(duì)特定疾病狀態(tài)的治療"有需要的 受試者"可以是具有該疾病/病狀、被診斷為患有該病狀或有發(fā)展該疾病的風(fēng)險(xiǎn)的受試者。 [0046]術(shù)語(yǔ)"統(tǒng)計(jì)上顯著"或"顯著"是指存在差異的統(tǒng)計(jì)證據(jù)。它被定義為當(dāng)零假設(shè)實(shí)際 上是真的時(shí)作出拒絕零假設(shè)的決定的概率。該決定經(jīng)常使用P值作出。
[0047] 如本文中所使用，"CD4淋巴細(xì)胞"是指表達(dá)CD4的淋巴細(xì)胞，即，為⑶4+的淋巴細(xì) 胞。⑶4淋巴細(xì)胞可以是表達(dá)⑶4的T細(xì)胞。
[0048]術(shù)語(yǔ)"T細(xì)胞"和"T淋巴細(xì)胞"是可互換的并且在本文中同義地使用。實(shí)例包括但不 限于:初次用于實(shí)驗(yàn)的T細(xì)胞、中央記憶T細(xì)胞、效應(yīng)記憶T細(xì)胞或其組合。
[0049] 本文所使用的"治療劑"是指用于例如治療、抑制、預(yù)防疾病、緩和其影響、減輕其 嚴(yán)重程度、降低其發(fā)展的可能性、減緩其進(jìn)展和/或治愈該疾病的藥劑。由治療劑靶向的疾 病包括但不限于感染性疾病、癌、肉瘤、淋巴瘤、白血病、生殖細(xì)胞腫瘤、母細(xì)胞瘤、在各種免 疫細(xì)胞上表達(dá)的抗原以及在與各種血液疾病和/或炎性疾病相關(guān)的細(xì)胞上表達(dá)的抗原。
[0050] 除非本文另有定義，否則所使用的與本申請(qǐng)相關(guān)的科學(xué)和技術(shù)術(shù)語(yǔ)應(yīng)該具有如本 公開(kāi)所屬技術(shù)領(lǐng)域的一般技術(shù)人員通常所理解的含義。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明并不限于本文所 描述的具體方法、方案和試劑等，并且因此可以變化。本文所使用的術(shù)語(yǔ)僅出于描述具體實(shí) 施方案的目的，而不意圖限制僅由權(quán)利要求所限定的本發(fā)明的范圍。
[0051] 本文提供了方法、組合物和試劑盒，其中CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑單獨(dú)或與各種其它療 法和藥劑組合用來(lái)靶向免疫系統(tǒng)，以治療癌癥和/或感染性疾病?？梢耘cCD4淋巴細(xì)胞耗竭 劑組合使用的療法和藥劑的非限制性實(shí)例包括但不限于免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼免疫療 法、免疫佐劑和免疫調(diào)節(jié)劑。 治療方法
[0052] 在各個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程 度和/或減緩其進(jìn)展的方法。所述方法包括提供包含CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑的組合物和向受試 者施用治療有效量的該組合物，從而治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減 緩其進(jìn)展。在一些實(shí)施方案中，所述病狀是癌癥或感染性疾病。在一些實(shí)施方案中，所述受 試者已被診斷為患有癌癥。在一些實(shí)施方案中，所述受試者已被診斷為患有感染性疾病。在 各個(gè)實(shí)施方案中，所述受試者已經(jīng)患病的時(shí)間量足夠在施用包含CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑的組 合物之前使免疫系統(tǒng)致敏。在各個(gè)實(shí)施方案中，受試者已經(jīng)患有所述病狀的時(shí)間量為1天或 更多、2天或更多、3天或更多、4天或更多、5天或更多、6天或更多、7天或更多、8天或更多、9 天或更多、10天或更多、15天或更多、20天或更多、1個(gè)月或更多、2個(gè)月或更多、3個(gè)月或更 多、4個(gè)月或更多、5個(gè)月或更多、6個(gè)月或更多、1年或更多或其組合。
[0053] 在各個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程 度和/或減緩其進(jìn)展的方法。所述方法包括提供CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和選自由免疫檢查點(diǎn)抑 制劑、過(guò)繼免疫治療劑、免疫佐劑和免疫調(diào)節(jié)劑組成的組的至少一種其它試劑；以及向受試 者施用治療有效量的CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和治療有效量的免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼免疫治 療劑、免疫佐劑和免疫調(diào)節(jié)劑中的至少一種，從而治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重 程度和/或減緩其進(jìn)展。在一些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括向受試者施用mTOR抑制 劑。在各個(gè)實(shí)施方案中，CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和其它藥劑可以依序或同時(shí)施用。在一些實(shí)施 方案中，所述病狀是癌癥。在一些實(shí)施方案中，所述病狀是感染性疾病。
[0054]在各個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程 度和/或減緩其進(jìn)展的方法。所述方法包括提供CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和過(guò)繼免疫治療劑以及 向受試者施用治療有效量的CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和治療有效量的過(guò)繼免疫治療劑，從而治 療、抑制、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其進(jìn)展。在一個(gè)實(shí)施方案中，CD4 淋巴細(xì)胞耗竭劑是抗CD4抗體或其片段或其變體，且過(guò)繼免疫治療劑是樹(shù)突細(xì)胞疫苗。在各 個(gè)實(shí)施方案中，所述病狀是癌癥或感染性疾病。在一些實(shí)施方案中，同時(shí)施用抗CD4抗體和 樹(shù)突細(xì)胞疫苗。在一些實(shí)施方案中，依序施用抗CD4抗體和樹(shù)突細(xì)胞疫苗。在一些實(shí)施方案 中，所述方法可以進(jìn)一步包括與CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和過(guò)繼免疫治療劑依序或同時(shí)施用有 效量的mTOR抑制劑。
[0055]在各個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程 度和/或減緩其進(jìn)展的方法。所述方法包括提供CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和免疫檢查點(diǎn)抑制劑以 及向受試者施用治療有效量的CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和治療有效量的免疫檢查點(diǎn)抑制劑，從 而治療、抑制、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其進(jìn)展。在一個(gè)實(shí)施方案 中，CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑是抗CD4抗體或其片段或其變體，且檢查點(diǎn)抑制劑是抗PD-I抗體或 其片段或其變體。在各個(gè)實(shí)施方案中，所述病狀是癌癥或感染性疾病。在一些實(shí)施方案中， 同時(shí)施用抗CD4抗體和抗ro-i抗體。在一些實(shí)施方案中，依序施用抗CD4抗體和抗ro-i抗體。 所述方法可以進(jìn)一步包括施用mTOR抑制劑。在一些實(shí)施方案中，所述方法可以進(jìn)一步包括 與CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和檢查點(diǎn)抑制劑依序或同時(shí)施用有效量的mTOR抑制劑。
[0056] 在各個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程 度和/或減緩其進(jìn)展的方法。所述方法包括提供CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑、過(guò)繼免疫治療劑和 mTOR抑制劑以及向受試者施用治療有效量的CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑、治療有效量的過(guò)繼免疫 治療劑和治療有效量的mTOR抑制劑，從而治療、抑制、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程 度和/或減緩其進(jìn)展。在一個(gè)實(shí)施方案中，CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑是抗CD4抗體或其片段或其變 體。在一個(gè)實(shí)施方案中，過(guò)繼免疫治療劑是樹(shù)突細(xì)胞疫苗。在一個(gè)實(shí)施方案中，mTOR抑制劑 是替西羅莫司。在各個(gè)實(shí)施方案中，所述病狀是癌癥或感染性疾病。一些實(shí)施方案中，同時(shí) 施用抗CD4抗體、樹(shù)突細(xì)胞疫苗和mTOR抑制劑(例如替西羅莫司）。一些實(shí)施方案中，依序施 用抗CD4抗體、樹(shù)突細(xì)胞疫苗和mTOR抑制劑(例如替西羅莫司）。
[0057] 在各個(gè)實(shí)施方案中，本文所述的方法可以用于在有需要的受試者中預(yù)防癌癥轉(zhuǎn)移 或預(yù)防癌癥復(fù)發(fā)。
[0058]在本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案中，CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑可以是小分子、肽、抗體或其片 段以及核酸分子中的任何一種或多種。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體特異性結(jié)合CD4表達(dá)T 細(xì)胞如調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tr eg細(xì)胞)上的⑶4。
[0059 ]抗體(例如，抗CD4抗體或抗PD-1抗體)可以是單克隆抗體或其片段、多克隆抗體或 其片段、嵌合抗體、人源化抗體、人抗體或其片段或單鏈抗體中的任何一種或多種。這些抗 體可以來(lái)自任何來(lái)源，例如，大鼠、小鼠、豚鼠、狗、貓、兔、豬、牛、馬、山羊、驢或人?？贵w的片 段可以是Fab)2、Fv片段或它們的融合蛋白中的任何一種或多種。
[0060] 在各個(gè)實(shí)施方案中，CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑是人源化抗CD4抗體或其片段。在各個(gè)實(shí) 施方案中，CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑是扎木單抗（zano Iimumab )、凱利昔單抗（ke Iiximab)和 0KT4。
[0061] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，同時(shí)施用CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和其它藥劑。在其它實(shí) 施方案中，依序施用CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和其它藥劑。例如，在施用其它藥劑之前、期間或之 后施用CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，伴隨食物或不伴隨食物施用CD4淋巴 細(xì)胞耗竭劑和其它藥劑。根據(jù)本發(fā)明，CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和/或額外的藥劑可以與其它藥 劑(包括但不限于癌癥疫苗和化療劑)組合使用。如本文所描述，額外的試劑是免疫檢查點(diǎn) 抑制劑、過(guò)繼免疫治療劑、免疫佐劑和免疫調(diào)節(jié)劑中的任何一種或多種。
[0062] 在各個(gè)實(shí)施方案中，額外的藥劑是免疫檢查點(diǎn)抑制劑。免疫檢查點(diǎn)抑制劑的實(shí)例 包括但不限于:抗150-1抗體，諸如拉姆布羅力珠單抗(]^11]1131'〇112111]^13，]\11(-3475)、尼維單抗 (Nivolumab，BMS-936558)和皮地利珠單抗（Pidil izumab，CT-011);抗PD-Ll 抗體，諸如 MPDL3280A(RG7446)、MEDI4736和BMS-936559;抗PD-L2抗體，B7-DC-Fc融合蛋白如AMP-224; 抗CTLA-4抗體，諸如曲美木單抗(treme I imumab，CP-675，206)和易普利單抗（ipi I imumab) (MDX-010);抗B7/CD28受體超家族抗體;抗吲哚胺（2,3)_二氧合酶（IDO)抗體、抗IDOl抗體、 抗ID02抗體、色氨酸、色氨酸模擬物、1-甲基色氨酸（I-MT) )、Indoximod(D-1-甲基色氨酸 (D-I-MT) )、L-1-甲基色氨酸(L-I-MT)、TX-2274;羥基脒抑制劑如INCB024360;抗TIM-3抗 體;抗LAG-3抗體如BMS-986016;激動(dòng)由MHCII類(lèi)驅(qū)動(dòng)的樹(shù)突細(xì)胞活化的重組可溶性LAG-31 g 融合蛋白如頂P321;抗KIR2DL1/2/3或抗KIR抗體如立魯單抗（IiriIumab，IPH2102)、烏瑞魯 單抗(urelumab，BMS-663513);抗磷脂酰絲氨酸(抗PS)抗體如巴維昔單抗(Bavituximab)、 針對(duì)N-乙醇酰-GM3神經(jīng)節(jié)苷脂的抗人單克隆抗體的抗獨(dú)特型鼠單克隆抗體，諸如雷庫(kù)圖單 抗(Racotumomab，曾用名為IEIO);抗0X40R抗體如IgGCD134mAb;抗B7-H3抗體如MGA271;以 及旨在通過(guò)使免疫檢查點(diǎn)基因沉默來(lái)治療癌癥的基于小干擾(si)RNA的癌癥疫苗。附加信 息可以見(jiàn)于Cree lanBC( Updateonimmunecheckpoint inhibitors in Iungcancer， CancerControl · 2014年1 月；21 ( I ) : 80 - 9)和JanedeLartigue (Another ImmuneCheckpo intEmergesasAnt icancerTarget，線上公開(kāi)于 onclive · com，2013 年9月24日，星期二），這些文獻(xiàn)通過(guò)引用整體并入本文，就如同完全闡述一般。在一些實(shí)施 方案中，免疫檢查點(diǎn)抑制劑選自由以下組成的組:抗ro-1抗體、抗ro-L 1抗體、抗ro-L2抗體、 抗CTLA-4抗體、抗KIR抗體、抗IDOl抗體、抗ID02抗體、抗??Μ-3抗體、抗LAG-3抗體、抗0X40R 抗體和抗PS抗體或其組合。
[0063] 在各個(gè)實(shí)施方案中，額外的藥劑是過(guò)繼免疫治療劑。在一些實(shí)施方案中，過(guò)繼免疫 治療劑選自由以下組成的組:樹(shù)突細(xì)胞疫苗、肽疫苗、基于嵌合T細(xì)胞抗原的療法、基于T細(xì) 胞的療法、免疫細(xì)胞因子、基于熱激蛋白的疫苗、基于腫瘤溶解物的疫苗、攜帶腫瘤抗原的 病毒載體、病毒疫苗、細(xì)菌疫苗和真菌疫苗或其組合。附加信息可以見(jiàn)于Radvanyi等人， ClinCancerRes · 2012Decl5; 18(24): 6758-70 ;Epub20120ct2，其通過(guò)引用整體并入本文，就 如同完全闡述一般。
[0064] 在各個(gè)實(shí)施方案中，額外的藥劑是免疫佐劑。佐劑的實(shí)例包括但不限于：陽(yáng)離子脂 質(zhì)體-DNA復(fù)合物JVRS-100、氫氧化鋁疫苗佐劑、磷酸鋁疫苗佐劑、硫酸鋁鉀佐劑、鋁膠、 ISC0M(s)?、弗氏完全佐劑（Freunc^ sCompleteAd juvant)、弗氏不完全佐劑（Freunc^ sIncompleteAd juvant)、Cp⑶NA疫苗佐劑、霍亂毒素、霍亂毒素 B亞基、脂質(zhì)體、阜素疫苗佐 劑、DDA佐劑、角鯊烯型佐劑、EtxB亞基佐劑、IL-12疫苗佐劑、LTK6 3疫苗突變佐劑、 TiterMaxGold佐劑、Ribi疫苗佐劑、Montanide ISA720佐劑、棒狀桿菌源性P40疫苗佐劑、 MPL?佐劑AS04、AS02、脂多糖疫苗佐劑、胞壁酰二肽佐劑、CRL1005、殺滅的短小棒狀桿菌 (Corynebacter iumparvunm)疫苗佐劑、Montanide ISA51佐劑、百日咳博代氏桿菌 (Bordetel Iapertussis)成分疫苗佐劑、陽(yáng)離子脂質(zhì)體疫苗佐劑、金剛燒酰胺二肽疫苗佐 劑、Ar lace IA佐劑、VSA-3佐劑、錯(cuò)疫苗佐劑、Po Iygen疫苗佐劑、Ad jumer?、藻類(lèi)葡聚糖、 BayR1005、Theramide?,硬脂酰酪氨酸、Specol佐劑、Algammulin佐劑、Avridine? ,磷酸 鈣凝膠、CTAl-DD基因融合蛋白、DOC/Alum復(fù)合物、γ菊粉、Gerbu佐劑、GM-CSF、GMDP、重組 hIFN-γ/干擾素-g、白細(xì)胞介素-1β、白細(xì)胞介素-2、白細(xì)胞介素-7、Sclavo肽、 RehydrageILV佐劑、RehydrageIHPA佐劑、洛索立賓（Loxoribine)、MF59、ΜΤΡ-ΡΕ脂質(zhì)體、 Murame tide佐劑、Murapalmi tine佐劑、D-Murapalmi tine佐劑、NAGO、非離子表面活性劑囊 泡、PMMA、蛋白質(zhì)蝸殼、QS-21、SPT(抗原制劑）、納米乳劑疫苗佐劑、AS03、Quil-A疫苗佐劑、 RC529疫苗佐劑、LTR192G疫苗佐劑、大腸桿菌熱不穩(wěn)定毒素、LT、無(wú)定形羥基磷酸鋁硫酸鹽 佐劑、磷酸媽疫苗佐劑、Montanide不完全Seppic佐劑、咪喹莫特（Imiquimod)、雷西莫特 (Resiquimod)、AF03、鞭毛蛋白、Poly(I: C)、ISCOMATRIX_?,AbiSC〇-100 疫苗佐劑、白蛋 白-肝素微粒疫苗佐劑、AS-2疫苗佐劑、B7-2疫苗佐劑、DHEA疫苗佐劑、含共刺激分子抗體的 免疫脂質(zhì)體、SAF-I、仙臺(tái)病毒脂蛋白體、含仙臺(tái)病毒的脂質(zhì)基質(zhì)、蘇氨酰胞壁酰二肽 (TMDP)、Ty顆粒疫苗佐劑、布比卡因疫苗佐劑、DL-PGL(聚酯聚(DL-丙交酯-共-乙交酯））疫 苗佐劑、IL-15疫苗佐劑、LTK72疫苗佐劑、MPL-SE疫苗佐劑、霍亂毒素的無(wú)毒性突變體E112K (111(：1'41121〇、]\^1：1^1-3和水溶性三砲稀葡糖苷化合物。附加信息可以見(jiàn)于3376^等人 (VAXJO：AWEB-BASEDVACCINEADJUVANTDATABASEANDITSAPPLICATIONFORANALYSISOFVACCINE ADJUVANTSANDTHEIRUSESINVACCINEDEVELOPMENT，2012;2012:831486;Epub2012年3 月13 日），其通過(guò)引用整體并入本文，如同完全闡述一般。在一些實(shí)施方案中，免疫佐劑選自由以 下組成的組:鋁鹽、病毒顆粒和油基佐劑或其組合。
[0065] 在各個(gè)實(shí)施方案中，額外的藥劑是免疫調(diào)節(jié)劑。在一些實(shí)施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑選 自由以下組成的組:mTOR抑制劑、STAT抑制劑、TGFP受體抑制劑和酪氨酸激酶抑制劑或其組 合。
[0066] 在各個(gè)實(shí)施方案中，所述方法可以進(jìn)一步包括向受試者施用mTOR抑制劑。根據(jù)本 發(fā)明，mTOR抑制劑可以是小分子、肽、抗體或其片段、核酸分子和/或大環(huán)內(nèi)酯化合物中的任 何一種或多種。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體特異性結(jié)合mTOR，從而抑制mTOR。所述抗體可 以是單克隆抗體或其片段、多克隆抗體或其片段、嵌合抗體、人源化抗體、人抗體或其片段 或單鏈抗體中的任何一種或多種。這些抗體可以來(lái)自任何來(lái)源，例如，大鼠、小鼠、豚鼠、狗、 貓、兔、豬、牛、馬、山羊、驢或人?？贵w的片段可以是FakFUl/UAv片段或它們的融合蛋白 中的任何一種或多種。
[0067] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，mTOR抑制劑是大環(huán)內(nèi)酯化合物?？捎糜谝蟊Ｗo(hù)的 本發(fā)明的大環(huán)內(nèi)酯化合物的實(shí)例包括但不限于:替西羅莫司(CCI-779)或其藥物等效物、類(lèi) 似物、衍生物或鹽;依維莫司(RAD-001)或其藥物等效物、類(lèi)似物、衍生物或鹽;和/或西羅莫 司（雷帕霉素)或其藥物等效物、類(lèi)似物、衍生物或鹽。
[0068] 在各個(gè)實(shí)施方案中，額外的藥劑是STAT抑制劑。STAT抑制劑的實(shí)例包括但不限于： S0CS(細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)遏制因子）；PIAS(活化stat的蛋白質(zhì)抑制劑），包括PIAS1、PIAS2、 ?1八53、？1454、？14513、？145義13和？1457;硝呋齊特(附€1^(?32丨(16)(5-硝基-2-糠醛-對(duì)羥基 苯甲酰基腙）、N-[2-(1，3，4-噁二唑基）]-4-喹啉甲酰胺、非肽小分子抑制劑、Stattic抑制 齊 lJ、STA-21、LLL-3、LLL12、XZH-5、S31-201、SF-1066、SF-1087、17o、Cryptotanshinor^l]]$iJ 劑、FLL32、C188-9、LY5、BP-1108、BP-1075、GalielIalactone抑制劑、JQl、STX-Ol 19、 FLLL11、FLLL12、FLLL32、FLLL62、激素源性煙酰肼、IS3295、靶向STAT路徑的寡核苷酸、靶向 STAT 路徑的反義寡核苷酸(AS0)、AZD9150(ISIS-STAT3Rx 或 ISIS481464)、抗 STAT3 的合成 ASO、STAT3 誘捕寡核苷酸（ODN)、STAT3-S i RNA、STAT3-G-Quar te t、STAT5-0DN、STAT5-S i RNA、 0PB-31121、肽和擬肽抑制劑、XpYL、AC-pYLPQTV-NH3、ISS610、S31-M2001 和CJ-1383。附加信 息可以見(jiàn)于Furqan等人（STATinhibitorsforcancertherapy，JHematolOncol · 2013Dec5 ;6: 90 )，其通過(guò)引用整體并入本文，就如同完全闡述一般。
[0069] 在各個(gè)實(shí)施方案中，額外的藥劑是JAK抑制劑。JAK抑制劑的實(shí)例包括但不限于:酪 氨酸磷酸化抑制劑（Tyrphostin) AG 490、CP-690550、羅可索替尼（ruxolitinib， INCB018424)、TG101348(SAR30253)、來(lái)他替尼（lestaurtinib，CEP701)、CYT387、帕曲替尼 (pacritinib，SB1518)、AZD1480、XL019和LY2784544。附加信息可以見(jiàn)于Mascarenhas等人 (Biologyandclinicalmanagementofmyeloproliferativeneoplasmsanddevelopmentofthe JAKinhibitorruxolitinib，CurrMedChem. 2012; 19(26): 4399-413)，其通過(guò)引用整體并入 本文，就如同完全闡述一般。
[0070] 在各個(gè)實(shí)施方案中，額外的藥劑是TGFP受體抑制劑。TGFP受體抑制劑的實(shí)例包括 但不限于：顯性負(fù)型TGF-WI型受體(Τ?ΦΙΙ)、配體陷阱、可溶性TffiII胞外域、可溶性β聚糖 胞外域、含有TeRII(TeRII-Fc)或III型受體/β聚糖的可溶性胞外域的重組Fe融合蛋白、可 溶性人C12-巨球蛋白血漿蛋白；完全人源化的泛TGF-β單克隆中和抗體，包括勒地木單抗 (Lerde limumab，CAT-152 )、美特木單抗(Me te Iimumab，CAT-192)和GC-1008 (氣瑞索木單抗 (Fresolimumab))和IDll;旨在與其互補(bǔ)RNA序列雜交并加快mRNA降解的反義寡核苷酸 (ASO) APl2009 (Trabedersen)和AP-11014;受體激酶抑制劑SB505124、SB-431542、 1^550410、1^580276、1^215729、1^364937、1^2109761、1^26894、50-093和50-208 ;肽適體， ^x-SARA適體;通過(guò)RNA干擾使II型TGF-β受體基因表達(dá)沉默的編碼小發(fā)夾RNA的載體，以及 具有慢病毒載體或腺相關(guān)載體的shRNA。附加信息可以見(jiàn)于Conno Ily等人 (ComplexitiesofTGF-Ptargetedcancertherapy，IntJBiolSci·2012;8(7):964-78; Epub2012 年 7 月 12 日）和 Kaminska 等人 (TGFbetasignallinganditsroleintumourpathogenesis；ActaBiochimPol.2005；52(2)： 329-37.Epub2005Jun25)，所述文獻(xiàn)通過(guò)引用整體并入本文，就如同完全闡述一般。
[0071] 在各個(gè)實(shí)施方案中，額外的藥劑是酪氨酸激酶抑制劑。酪氨酸激酶抑制劑的實(shí)例 包括但不限于舒尼替尼（sunitinib)、埃羅替尼(erIotinib)、凡德他尼(vandetanib)、西地 拉尼（〇6(1；!_以11；!_13)、布立尼布(131'；!_￥311；!_13)、氟瑞替尼(：[ >0代七；!_11；!_13)和多韋替尼（(10￥；^；!_11；!_13)。 附加信息可以見(jiàn)于HuynhH. (MoIecuIarlytargetedtherapyinhepatocellularcarcinoma， 81001^1^1^^^(301.2010年9月1日 ；80(5):550-60上口汕2010年4月4日），其通過(guò)引用整體并 入本文，就如同完全闡述一般。
[0072] 在一些實(shí)施方案中，本文所述的方法進(jìn)一步包括向受試者施用化療劑，所述受試 者正被施用包含CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑的組合物或包含CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和選自由免疫檢 查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼免疫治療劑、免疫佐劑和免疫調(diào)節(jié)劑組成的組的其它試劑的組合物?；?劑的非限制性實(shí)例可以包括:烷化劑，諸如噻替哌（thiotepa)和CYTOXAN?環(huán)磷酰胺； 烷基磺酸酯類(lèi)，諸如白消安（busu I f an )、英丙舒凡（improsu I f an )和哌泊舒凡 (piposulfan);氮丙啶類(lèi)(aziridines)，諸如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌（carboquone)、 美胺替哌(meturedopa)和烏瑞替哌（uredopa);亞乙基亞胺類(lèi)（ethylenimine)和甲基蜜胺 類(lèi)(1116也713111613111；!_116)，包括六甲蜜胺（31以6七3111；!_116)、三亞乙基蜜胺、三亞乙基磷酰胺 (rietylenephosphoramide)、三亞乙基硫代磷酉先胺（triethiyIenethiophosphoramide)和 三輕甲基蜜胺（trimethyIoIomeIamine);番蒸枝內(nèi)酯類(lèi)(acetogenin)(尤其是布拉他辛 (bu llatac in)和布拉他辛酮(bu llatac inone));喜樹(shù)喊(campto thee in)(包括合成類(lèi)似物 拓?fù)涮婵?^(^(^6〇311));苔蘚抑素（13巧〇8七3七；!_11);卡司他?。ī?1178七3七；!_11);(^-1065(包括 其阿多來(lái)新(8(1〇26168；!_11)、卡澤來(lái)新(〇3^6168；!_11)和比澤來(lái)新(1^26168；!_11)合成類(lèi)似物） ； 隱藻素類(lèi)(cryptophycin)(特別是隱藻素1和隱藻素8);多拉司他汀(dolastatin);多卡霉 素((111〇〇3!'1117(3；!_11)(包括合成類(lèi)似物1(1-2189和081-1]\11);艾植素(6161^1161'〇13；!_11);水鬼蕉堿 (pancratistatin);匍枝珊瑚醇（sarcodictyin);海綿素（spongistatin);氮芥 (nitrogenmustard)，諸如苯丁酸氮芥、萘氮芥（chlornaphazine)、膽磷酰胺 ((311〇1〇^1108口1^1111(16)、雌莫司汀(68奸3111118七；!_116)、異環(huán)磷酰胺、氮芥(1116(3111〇代也3111；!_116)、鹽 酉愛(ài)氧氮芥（me chi ore thamineoxi dehydro ch Ioride )、美法侖（melphal an)、新氮芥 (novembichin)、苯芥膽留醇（phenesterine)、潑尼莫司?。╬rednimustine)、曲磷胺 (trofosfamide)、尿喃啶氮芥(uraciImustard);亞硝基脲類(lèi)(nitrosourea)，諸如卡莫司汀 (carmus t ine )、氯脈菌素（chlorozotocin)、福莫司?。╢otemustine)、洛莫司汀 (Iomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimustine);抗生素類(lèi)，諸如稀二炔 (enediyne)抗生素類(lèi)(例如卡里奇霉素，尤其是卡里奇霉素 γ II和卡里奇霉素 ω-Il (參見(jiàn) 例如Agnew，Chem. Intl.編Engl. ,33:183-186(1994));達(dá)內(nèi)霉素，包括達(dá)內(nèi)霉素 Α;二膦酸鹽 類(lèi)，諸如氯膦酸鹽（clodronate);埃斯波霉素（esperamicin);以及新制癌素 (neocarzinostatin)發(fā)色團(tuán)和相關(guān)色蛋白稀二炔類(lèi)抗生素發(fā)色團(tuán)、阿克拉霉素 (aclacinomycin) >^j[^^^(actinomycin) >(authramycin) >Μ? (&2&861'；[116)、博來(lái)霉素(131601117(3；!_11)、放線菌素(03(^；!_1101117(3；!_11)、卡拉比星(03以13；!_(3；!_11)、洋 紅霉素（carminomycin)、嗜癌霉素（carzinophilin)、色霉素（chromomycinis)、更生霉素、 柔紅霉素、地托比星(d et0rubicin)、6-二氮-5-氧代-L-正亮氨酸、ADRiAMYCFN?多柔 比星(包括嗎啉代多柔比星、氰基嗎啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星和脫氧多柔比星）、表 柔比星（epirubicin)、依索比星（esorubicin)、伊達(dá)比星（idarubicin)、麻西羅霉素 (marcelIomycin)、絲裂霉素類(lèi)如絲裂霉素 C、霉酷酸（mycophenolicacid)、諾加霉素 (noga Iamy c in )、橄欖霉素（olivomycin)、培洛霉素（peplomycin)、泊非霉素 (potfiromycin)、卩票呤霉素（puromycin)、三鐵阿霉素（quelamycin)、羅多比星 (rodorubicin)、鏈黑菌素（streptonigrin)、鏈佐星（streptozocin)、殺結(jié)核菌素 (七油61'(^(1；!_11)、烏苯美司(油611；!_11161)、凈司他丁(2；!_1108七&七；!_11)、佐柔比星(201'1113；!_(3；!_11);抗代 謝物類(lèi)，諸如甲氨蝶呤和5-氟尿喃啶（5-FU);葉酸類(lèi)似物，諸如二甲葉酸(denopterin)、甲 氨蝶呤、蝶羅呤（pteropterin)、三甲曲沙（trimetrexate);卩票呤類(lèi)似物，諸如氟達(dá)拉濱 (f Iudarabine)、6_疏基卩票呤（6-mercaptopurine)、硫咪卩票呤（thiamiprine)、硫鳥(niǎo)卩票呤 (thioguanine);喃啶類(lèi)似物，諸如安西他濱(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6_氮 尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷、二脫氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧 氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)和氟尿苷(floxuridine);雄激素類(lèi)，諸 如卡魯睪酮（calusterone)、丙酸屈他雄酮（dromostanoIonepropionate)、環(huán)硫雄醇 (epitiostanol)、美雄焼(mepitiostane)、睪內(nèi)酯（testolactone);抗腎上腺類(lèi)，諸如氨魯 米特(3111；!_110811^6也；!_1111(16)、米托坦(111；^(^3116)、曲洛司坦(奸；!_108七3116);葉酸補(bǔ)充劑，諸如 亞葉酸;醋葡醛內(nèi)酯(306813如脫） ；醛磷酰胺糖苷(31(1(^1108口1^1111(16817(3081(16);氨基乙酰 丙酸（aminolevul inicacid);恩尿喃啶（eni Iuraci 1);安B丫定；bestrabuci 1;比生群 (bisantrene);依達(dá)曲沙（edatraxate);地磷酰胺（defofamine);地美可辛（demecolcine); 地口丫醌(diaziquone);依氟鳥(niǎo)氨酸(elformithine);依利醋鞍（elliptiniumacetate);埃博 霉素（6口0丨11；[10116) ;依托格魯(6丨(^111(^(1);硝酸鎵;羥基脲;香燕多糖（161^；[1^11) ;氯尼達(dá) 寧（Ionidainine);類(lèi)美登素，諸如美登素和安絲菌素;米托胍腙(mitoguazone);米托蒽醌； 莫哌達(dá)醇(mopidamol);硝嗪；噴司他??；苯來(lái)美特(phenamet);吡柔比星(pirarubicin);洛 索蒽醌（losoxantrone);足葉草酸；2-乙基酰肼；甲基芐肼；PSK?多糖復(fù)合物 (JHSNaturalProducts，Eugene，Oreg.);雷佐生（razoxane);利索新（rhiζοχin);西佐喃 (s i zof uran);鍺螺胺（sp irogermanium);替奴佐酸（tenuazonicacid);三亞胺醌 (triaziquone) ;2,27，2〃_三氯三乙胺；單端孢霉烯類(lèi)（尤其是T-2毒素、維拉可瑞A (verracurinA)、桿抱菌素 A(roridinA)和蛇形菌素(anguidine));烏拉坦(urethan);長(zhǎng)春 地辛；達(dá)卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴衛(wèi)矛醇（mi tolact01);哌泊溴烷 (pipobroman);加托因（gacytosine);阿拉伯糖苷(arabinoside)( "Ara-C"）；環(huán)磷酰胺；噻 替哌；紫衫燒類(lèi)，例如 TAXOL?:紫杉醇（BristoI-MyersSquibbOncology，Princeton， N. J. )、ABRAXANE? (不含氫化蓖麻油的白蛋白改造納米顆粒制劑型紫杉醇） (AmericanPharmaceuticalPartners，Schaumberg，111 ·)，以及TAXOTERE? 多西他賽 (Rhone-PoulencRorer，Antony ,France);苯丁酸氮芥（chioranbucil); GEMZA.R? 吉西 他濱(gemcitabine) ;6_硫鳥(niǎo)噪呤;疏基噪呤；甲氨蝶呤；鉬類(lèi)似物，諸如順鉬、奧沙利鉬和卡 鉑;長(zhǎng)春堿;鉑;依托泊苷(VP-16);異環(huán)磷酰胺;米托蒽醌;長(zhǎng)春新堿;NAVELBINE;長(zhǎng)春瑞濱； 諾安托（novantrone);替尼泊苷；依達(dá)曲沙（edatrexate);柔紅霉素；氨噪呤；希羅達(dá) (xeloda);伊班膦酸鹽（ibandronate);伊立替康(Camptosar，CPT-11)(包括伊立替康結(jié)合 5-FU和亞葉酸的治療方案)拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑RFS2000;二氟甲基鳥(niǎo)氨酸(DMF0);類(lèi)視色素， 諸如視黃酸；卡培他濱(03卩6(3；^313；[116) ;康普立停（001111^6丨38丨31：；[11);亞葉酸(1^0;奧沙利 鉬(oxaliplatin)，包括奧沙利鉬治療方案(FOLFOX);拉帕替尼（lapatinib) (Tykerb);減少 細(xì)胞增殖的PKC-α、Raf、H-Ras、EGFR(例如，埃羅替尼(Tarceva?))和VEGF-A的抑制劑；以及 任何以上物質(zhì)的藥學(xué)上可接受的鹽、酸或衍生物。此外，治療方法可以進(jìn)一步包括使用放射 療法。
[0073] 癌癥的實(shí)例包括但不限于癌、母細(xì)胞瘤和肉瘤。此類(lèi)癌癥的更具體的實(shí)例包括但 不限于:基底細(xì)胞癌、膽道癌;膀胱癌;骨癌;腦癌和CNS癌;乳腺癌;腹膜癌；宮頸癌;絨毛膜 癌;結(jié)腸和直腸癌;結(jié)締組織癌;消化系統(tǒng)癌癥;子宮內(nèi)膜癌;食道癌;眼癌;頭頸癌；胃癌(包 括胃腸癌）；膠質(zhì)母細(xì)胞瘤;肝癌;肝細(xì)胞瘤;上皮內(nèi)腫瘤；腎臟癌或腎癌；喉癌；肝癌;肺癌 (例如，小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺腺癌和肺鱗狀細(xì)胞癌）；淋巴瘤，包括霍奇金氏淋巴瘤 和非霍奇金氏淋巴瘤；黑色素瘤;骨髓瘤;神經(jīng)母細(xì)胞瘤；口腔癌(例如，唇癌、舌癌、口癌和 咽癌）；卵巢癌;胰腺癌;前列腺癌;視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤;橫紋肌肉瘤;直腸癌;呼吸系統(tǒng)癌癥;唾 液腺癌；肉瘤;皮膚癌;鱗狀細(xì)胞癌；胃癌；睪丸癌；甲狀腺癌;子宮或子宮內(nèi)膜癌;泌尿系統(tǒng) 癌癥;外陰癌；以及其它癌和肉瘤。
[0074] 根據(jù)本發(fā)明，病狀可以是惡性贅生細(xì)胞增生性病癥或疾病。仍根據(jù)本發(fā)明，病狀可 以是腎細(xì)胞癌或黑色素瘤。由治療劑靶向的疾病包括癌、肉瘤、生殖細(xì)胞腫瘤和/或母細(xì)胞 瘤。
[0075] 在各個(gè)實(shí)施方案中，感染性疾病是由感染性細(xì)菌所引起。感染性細(xì)菌的實(shí)例包括： 幽門(mén)螺桿菌(Helicobacterpyloris)、布氏疏螺旋體(Boreliaburgdorferi )、嗜肺軍團(tuán)菌 (Legionellapneumophilia)、分枝桿菌物種(如結(jié)核分枝桿菌(M. tuberculosis)、鳥(niǎo)分枝桿 菌(M.avium)、胞內(nèi)分枝桿菌(M. intracellulare)、堪薩斯分枝桿菌(M.kansaii)、戈登分枝 桿菌（M. gordonae))、金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus)、淋球菌 (Neisseriagonorrhoeae)、腦膜炎奈瑟菌(Neisseriameningitidis)、單核細(xì)胞增多性李斯 特氏菌(!^8丨61^31110110〇71：0〖61168)、化膿性鏈球菌(4群鏈球菌）、無(wú)乳鏈球菌(13群鏈球菌）、 鏈球菌（綠色組（V iridansgroup ))、奠鏈球菌（Streptococcusfae cal is)、牛鏈球菌 (Streptococcusbovis)、鏈球菌屬（厭氧種（anaerobicsps ·))、肺炎鏈球菌 (Streptococcuspneumoniae))、致病彎曲桿菌屬種(pathogenicCampylobactersp ·)、腸球 菌屬種（Enterococcussp.)、流感嗜血桿菌（HaemophilusinfIuenzae)、炭疽芽抱桿菌 (BaciIIusanthracis)、白喉棒狀桿菌（corynebacteriumdiphtheriae)、棒狀桿菌屬種 (corynebacteriumsp ·)、紅斑丹毒絲菌（Erysipelothrixrhusiopathiae)、產(chǎn)氣莢膜梭菌 (Clostridi ump erf r ingens)、破傷風(fēng)梭菌（Clostridiumtetani )、產(chǎn)氣腸桿菌 (Ehterobacteraerogenes )、肺炎克雷伯菌（Klebsiel Iapneumoniae )、多殺巴斯德氏菌 (Pasturellamultocida)、擬桿菌屬種（Bacteroidessp .)、具核梭桿菌 (Fusobacteriumnucleatum)、念珠狀鏈桿菌（Streptobaci llusmoni Iiformis )、梅毒螺旋體 (Treponemapallidium)、雅司螺旋體（Treponemapertenue)、鉤端螺旋體（Leptospira)和以 色列放線菌(Actinomycesisraelli)。預(yù)期本文所述的組合物和方法用于治療由這些細(xì)菌 病原體引起的感染。其它感染性生物體（如原生生物）包括：惡性瘧原蟲(chóng) (Plasmodiumfalciparum)和弓形蟲(chóng)（Toxoplasmagondii)。預(yù)期本文所述的組合物和方法用 于治療由這些病原體引起的感染。
[0076] 在各個(gè)實(shí)施方案中，病毒抗原可以是存在于感染性病毒中并誘導(dǎo)受試者中的免疫 反應(yīng)的任何抗原。感染性病毒的實(shí)例包括:逆轉(zhuǎn)錄病毒科(例如，HIV);小核糖核酸病毒科 (例如，脊髓灰質(zhì)炎病毒、A型肝炎病毒;腸道病毒、人柯薩奇病毒、鼻病毒、艾柯病毒）；杯狀 病毒科(Calciviridae)(諸如導(dǎo)致胃腸炎的菌株）；披膜病毒科(例如，馬腦炎病毒、風(fēng)疹病 毒）；黃熱病毒科(Flavir idae)(例如，登革熱病毒、腦炎病毒、黃熱病病毒）；冠狀病毒科(例 如，冠狀病毒）；彈狀病毒科(例如，水泡性口炎病毒、狂犬病毒）；絲狀病毒科(例如，埃博拉 病毒）；副粘病毒科(例如，副流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒）；正粘病毒 科(例如，流感病毒）；布尼亞病毒科(Bungaviridae)(例如，漢坦病毒、布尼亞病毒(bunga viruse)、白嶺病毒和Nairo病毒）；沙粒病毒科（出血熱病毒）；呼腸孤病毒科（如呼腸孤病 毒、環(huán)狀病毒和輪狀病毒）；雙核糖核酸病毒科;肝病毒科（乙型肝炎病毒）；細(xì)小病毒科(細(xì) 小病毒）；乳多空病毒科(乳頭狀瘤病毒、多瘤病毒）；腺病毒科(大多數(shù)腺病毒）；皰疹病毒科 (單純皰疹病毒(HSV)I和HSV-2、水痘帶狀皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒(CMV)、皰疹病毒）；痘病毒 科(天花病毒、痘苗病毒、痘病毒）；和虹彩病毒科(如非洲豬瘟病毒）；和未分類(lèi)的病毒（例 如，海綿狀腦病的病原體、三角洲肝炎的病原體(被認(rèn)為是乙型肝炎病毒的缺陷衛(wèi)星體）、非 甲型肝炎、非乙型肝炎的病原體（1類(lèi)=內(nèi)部傳播;2類(lèi)=腸胃外傳播（即丙型肝炎）；諾瓦克 (Norwalk)病毒和相關(guān)病毒，以及星狀病毒）。預(yù)期本文所述的組合物和方法用于治療由這 些病毒病原體引起的感染。
[0077] 可以利用本文所述的組合物和方法治療的真菌感染的實(shí)例包括但不限于：曲霉 病;鵝口瘡（由白色念珠菌(Candidaalbicans)引起）；隱球菌?。ㄓ呻[球菌引起）；和組織胞 衆(zhòng)菌病。因此，感染性真菌的實(shí)例包括但不限于:新型隱球菌(Cryptococcusneoformans)、 莢膜組織胞楽菌(Histoplasmacapsulatum)、粗球抱子菌（Coccidioidesimmitis)、皮炎芽 生菌(Blastomycesdermatitidis)、沙眼衣原體(Chlamydiatrachomatis)、白色念珠菌。預(yù) 期本文所述的組合物和方法用于治療由這些真菌病原體引起的感染。
[0078] 在各個(gè)實(shí)施方案中，所述受試者是人。在各個(gè)實(shí)施方案中，所述受試者是哺乳動(dòng) 物，包括但不限于人、猴、猿、狗、貓、牛、馬、山羊、豬、兔、小鼠和大鼠。
[0079] 在各個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、經(jīng)口或經(jīng)由吸入施用組合 物。根據(jù)本發(fā)明，可以利用各種途徑來(lái)施用要求保護(hù)的方法的組合物，包括但不限于氣霧 劑、經(jīng)鼻、口服、經(jīng)粘膜、經(jīng)皮、腸胃外、可植入栗、連續(xù)輸注、局部施用、膠囊劑和/或注射。
[0080] 在各個(gè)實(shí)施方案中，CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑是以100-200mg/天、200-300mg/天、300- 400mg/天、400-500mg/天、500-600mg/天、600-700mg/天、700-800mg/天、800-900mg/天、 900-1000mg/天、1000-1 IOOmg/天、1100-1200mg/天、1200-1300mg/天、1300-1400mg/天、 1400-1500mg/天、1500-1600mg/天、1600-1700mg/天、1700-1800mg/天、1800-1900mg/天或 1900-2000mg/天來(lái)施用。在各個(gè)實(shí)施方案中，其它藥劑是以0· l-〇.5mg/天、0· 5-1 .Omg/天、 1.〇-1.511^/天、1.5-2.〇11^/天、2.〇-2.511^/天、2.5-511^/天、5-1〇11^/天、1〇-1511^/天、15-20mg/天、20_25mg/天、25_30mg/天、30_35mg/天、35_40mg/天、40_45mg/天、45_50mg/天、50-55mg/天、55_60mg/天、60_65mg/天、65_70mg/天、70_75mg/天、75_80mg/天、80_85mg/天、85-90mg/天、90_95mg/天或 95-100mg/天來(lái)施用。 藥物組合物
[0081] 在各個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑的組合物。在各個(gè)實(shí)施方 案中，本發(fā)明提供包含免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼免疫治療劑、免疫佐劑和免疫調(diào)節(jié)劑中的至 少一種的藥物組合物。免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼免疫治療劑、免疫佐劑和免疫調(diào)節(jié)劑的實(shí)例 如本文所述。在各個(gè)實(shí)施方案中，包含CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑的組合物和包含其它藥劑的組合 物是兩種不同的組合物。
[0082] 根據(jù)本發(fā)明，可用于治療哺乳動(dòng)物中的疾病的CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和/或其它藥劑 將經(jīng)常被制備成大體上不含天然存在的免疫球蛋白或其它生物分子。當(dāng)向哺乳動(dòng)物施用 時(shí)，優(yōu)選的CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和/或其它藥劑還將表現(xiàn)出最小的毒性。
[0083] 根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以含有任何藥學(xué)上可接受的賦形劑。"藥學(xué)上可接受 的賦形劑"意指可用于制備通常是安全、無(wú)毒和期望的藥物組合物的賦形劑，并且包括對(duì)于 獸用和人藥物使用而言可接受的賦形劑。此類(lèi)賦形劑可以是固體、液體、半固體或在氣霧劑 組合物的情況下是氣體。賦形劑的實(shí)例包括但不限于:淀粉、糖、微晶纖維素、稀釋劑、成粒 劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑、著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、調(diào)味劑、芳香 劑、防腐劑、抗氧化劑、增塑劑、膠凝劑、增稠劑、硬化劑、定型劑、懸浮劑、表面活性劑、保濕 劑、載體、穩(wěn)定劑及其組合。
[0084] 在各個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以被配制成經(jīng)由任何施用途徑來(lái) 遞送。"施用途徑"可以指本領(lǐng)域中已知的任何施用途徑，包括但不限于氣霧劑、經(jīng)鼻、口服、 經(jīng)粘膜、經(jīng)皮、腸胃外、腸內(nèi)、外用或局部。"腸胃外"是指通常與注射相關(guān)的施用途徑，包括 眼眶內(nèi)、輸注、動(dòng)脈內(nèi)、囊內(nèi)、心內(nèi)、皮內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、肺內(nèi)、脊柱內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)、子宮 內(nèi)、靜脈內(nèi)、蛛網(wǎng)膜下、囊下、皮下、經(jīng)粘膜或經(jīng)氣管。經(jīng)由腸胃外途徑，組合物可以是用于輸 注或注射的溶液劑或混懸劑形式，或者作為凍干粉末。經(jīng)由腸胃外途徑，組合物可以是用于 輸注或注射的溶液劑或混懸劑形式。經(jīng)由腸內(nèi)途徑，藥物組合物可以是片劑、凝膠膠囊、糖 衣片劑、糖漿劑、混懸劑、溶液劑、粉劑、顆粒劑、乳劑、允許控制釋放的微球或納米球或脂質(zhì) 囊泡或聚合物囊泡形式。通常，通過(guò)注射施用組合物。用于這些施用的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人 員已知的。
[0085] 根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以含有任何藥學(xué)上可接受的載體。如本文中所使用， "藥學(xué)上可接受的載體"是指參與將目標(biāo)化合物從身體的一個(gè)組織、器官或部分?jǐn)y載或運(yùn)送 到身體的另一個(gè)組織、器官或部分的藥學(xué)上可接受的材料、組合物或媒介物。例如，載體可 以是液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或封裝材料或其組合。載體的每個(gè)組分必須 是"藥學(xué)上可接受的"，因?yàn)樗仨毰c制劑的其它成分相容。它還必須適用于與它可能接觸 的任何組織或器官接觸，這意味著它不能攜帶毒性、刺激性、過(guò)敏反應(yīng)、免疫原性或過(guò)度超 過(guò)其治療益處的任何其它并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)。
[0086] 根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物還可以被封裝、壓片或制備成用于口服的乳劑或糖漿 劑。藥學(xué)上可接受的固體或液體載體可以被添加來(lái)增強(qiáng)或穩(wěn)定該組合物，或便于該組合物 的制備。液體載體包括糖漿、花生油、橄欖油、甘油、鹽水、醇和水。固體載體包括淀粉、乳糖、 硫酸鈣二水合物、石膏粉、硬脂酸鎂或硬脂酸、滑石、果膠、阿拉伯膠、瓊脂或明膠。所述載體 還可以包括持續(xù)釋放材料，諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯（單獨(dú)或與蠟一起使 用)。
[0087] 按照常規(guī)制藥技術(shù)制備藥物制劑，所述技術(shù)包括研磨、混合、制粒和在必要時(shí)壓縮 (對(duì)于片劑形式）；或研磨、混合和填充(對(duì)于硬明膠膠囊形式）。當(dāng)使用液體載體時(shí)，制劑將 是糖漿劑、酏劑、乳劑或水性或非水性混懸劑形式。這樣的液體制劑可以直接口服或填充到 軟明膠膠囊中。
[0088] 根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以以治療有效量遞送。精確的治療有效量是組合物將 在給定的受試者中產(chǎn)生就治療功效而言最有效的結(jié)果的量。這個(gè)量將根據(jù)多種因素而變 化，所述因素包括但不限于:治療化合物的特性(包括活性、藥代動(dòng)力學(xué)、藥效學(xué)和生物利用 度）、受試者的生理狀況(包括年齡、性別、疾病類(lèi)型和階段、一般身體狀況、對(duì)給定劑量的反 應(yīng)性和用藥類(lèi)型）、制劑中的一種或多種藥學(xué)上可接受的載體的性質(zhì)以及施用途徑。臨床和 藥理領(lǐng)域的技術(shù)人員將能夠通過(guò)常規(guī)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定治療有效量，例如，通過(guò)監(jiān)測(cè)受試者對(duì)施 用化合物的反應(yīng)并相應(yīng)地調(diào)整劑量。有關(guān)其它指導(dǎo)，參見(jiàn)Remington: TheSc ienceandPracti ceofPharmacy (Gennaro 編輯，第20版，Wil liams&Wi IkinsPA，USA) (2000)。
[0089] 在向患者施用前，可以將助劑加入到組合物中。液體制劑可以是優(yōu)選的。例如，這 些助劑可以包括油、聚合物、維生素、碳水化合物、氨基酸、鹽、緩沖液、白蛋白、表面活性劑、 增量劑或其組合。
[0090] 碳水化合物助劑包括糖或糖醇，諸如單糖、二糖、或多糖或水溶性葡聚糖。糖類(lèi)或 葡聚糖可以包括果糖、右旋糖、乳糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖、木糖、麥芽糖、蔗糖、葡聚糖、 普魯蘭(pullulan)、糊精、α和環(huán)糊精、可溶性淀粉、羥乙基淀粉和羧甲基纖維素或其混合 物。"糖醇"被定義為具有-OH基團(tuán)的C4至C8烴，并且包括半乳糖醇、肌醇、甘露醇、木糖醇、山 梨糖醇、丙三醇和阿拉伯糖醇。以上提及的這些糖或糖醇可以單獨(dú)或組合使用。對(duì)于使用量 沒(méi)有固定限制，只要糖或糖醇可溶于水性制劑中即可。在一個(gè)實(shí)施方案中，糖或糖醇的濃度 介于1 · Ow/v %與7 · Ow/v %之間，更優(yōu)選介于2 · Ow/v %與6 · Ow/v %之間。
[0091] 氨基酸助劑包括肉毒堿、精氨酸和甜菜堿的左旋(L)形式;然而，可以添加其它氨 基酸。
[0092] 在一些實(shí)施方案中，作為助劑的聚合物包括平均分子量在2,000和3,000之間的聚 乙烯吡咯烷酮(PVP)或平均分子量在3,000和5,000之間的聚乙二醇(PEG)。
[0093 ]還優(yōu)選在組合物中使用緩沖劑來(lái)使凍干前或復(fù)水后的溶液中的pH變化最小化?？?以使用大多數(shù)任何生理緩沖劑，包括但不限于檸檬酸鹽、磷酸鹽、琥珀酸鹽和谷氨酸鹽緩沖 劑或其混合物。在一些實(shí)施方案中，濃度為〇.〇1至0.3摩爾濃度。可以添加到制劑中的表面 活性劑示于歐洲專(zhuān)利第270，799和268，110號(hào)中。
[0094] 用于增加循環(huán)半衰期的另一種藥物遞送系統(tǒng)是脂質(zhì)體。制備脂質(zhì)體遞送系統(tǒng)的方 法論述于 Gabizon等人，CancerResearch( 1982)42:4734; Cafiso，BiochemBiophysActa (1981 )649:129和Szoka，AnnRevBiophysEng( 1980)9:467中。其它藥物遞送系統(tǒng)是本領(lǐng)域中 已知的并且描述于例如 Poznansky 等人，DRUGDELIVERYSYSTEMS (R · L · Jul iano 編輯，Oxf ord， N.Y.1980)，第253-315頁(yè)；M.L.Poznansky，PharmRevs(1984)36:277〇
[0095] 在制備得到液體藥物組合物后，可以將其凍干以防止降解并保持無(wú)菌。用于凍干 液體組合物的方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的。在即將使用前，組合物可以用無(wú)菌稀釋 劑(例如，林格氏溶液(Ringei y ssolution)、蒸餾水或無(wú)菌鹽水)復(fù)水，該無(wú)菌稀釋劑可以包 括其它成分。復(fù)水后，使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的那些方法將組合物施用給受試者。
[0096] 本發(fā)明的組合物可以通過(guò)眾所周知的常規(guī)滅菌技術(shù)進(jìn)行滅菌。所得溶液可以包裝 待用或在無(wú)菌條件下過(guò)濾并凍干，凍干制劑在施用前與無(wú)菌溶液組合。組合物可以視需要 含有藥學(xué)上可接受的輔助物質(zhì)以接近生理?xiàng)l件，諸如PH調(diào)節(jié)劑和緩沖劑、滲透調(diào)節(jié)劑等(例 如，乙酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣)和穩(wěn)定劑(例如，1 -20 %麥芽糖等）。 本發(fā)明的試劑盒
[0097] 在各個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程 度和/或減緩其進(jìn)展的試劑盒。所述試劑盒包括含有CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑的組合物和關(guān)于使 用該組合物來(lái)治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其進(jìn)展的說(shuō)明書(shū)。
[0098] 在各個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程 度和/或減緩其進(jìn)展的試劑盒。所述試劑盒包括包含CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑的組合物以及包含 選自由免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼免疫治療劑、免疫佐劑和免疫調(diào)節(jié)劑組成的組的至少一種 其它藥劑的組合物；以及關(guān)于使用該組合物來(lái)治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度 和/或減緩其進(jìn)展的說(shuō)明書(shū)。
[0099]試劑盒是材料或組分的集合件，其包括本發(fā)明組合物中的至少一種。因此，在一些 實(shí)施方案中，試劑盒含有包括與上述治療劑復(fù)合的藥物遞送分子的組合物。
[0100]在本發(fā)明試劑盒中配置的組分的確切性質(zhì)取決于其預(yù)期目的。在一個(gè)實(shí)施方案 中，試劑盒被配置成特別用于治療哺乳動(dòng)物受試者的目的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒被 配置成特別用于治療人受試者的目的。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，試劑盒被配置成用于獸醫(yī) 應(yīng)用，治療諸如但不限于農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物、家畜和實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物的受試者。
[0101]試劑盒中可以包括使用說(shuō)明書(shū)。"使用說(shuō)明書(shū)"通常包括描述在使用試劑盒的組分 來(lái)影響所需結(jié)果時(shí)所采用的技術(shù)的有形表達(dá)。任選地，試劑盒還含有其它有用的組分，諸如 稀釋劑、緩沖液、藥學(xué)上可接受的載體、注射器、導(dǎo)管、涂藥器、移液或測(cè)量工具、包扎材料或 本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易認(rèn)識(shí)到的其它有用的用具。
[0102]集合在試劑盒中的材料或組分可以以保持其可操作性和實(shí)用性的任何方便和合 適的方式儲(chǔ)存起來(lái)提供給從業(yè)人員。例如，組分可以是溶解、脫水或凍干的形式;它們可以 在室溫、冷藏或冷凍溫度下提供。組分通常包含在適當(dāng)?shù)陌b材料中。如本文中所使用，短 語(yǔ)"包裝材料"是指用于容納試劑盒的內(nèi)容物如本發(fā)明的組合物等的一個(gè)或多個(gè)物理結(jié)構(gòu)。 包裝材料通過(guò)熟知的方法來(lái)構(gòu)建，優(yōu)選用于提供無(wú)菌無(wú)污染的環(huán)境。如本文中所使用，術(shù)語(yǔ) "包裝"是指能夠容納個(gè)別試劑盒組分的合適的固體基質(zhì)或材料，諸如玻璃、塑料、紙、箱等。 因此，例如，包裝可以是用于容納合適量的含有CD淋巴細(xì)胞耗竭劑的組合物或含有CD淋巴 細(xì)胞耗竭劑和選自由免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼免疫治療劑、免疫佐劑和免疫調(diào)節(jié)劑組成的 組的至少一種其它藥劑的組合物的玻璃小瓶。包裝材料通常具有指示試劑盒和/或其組分 的內(nèi)容物和/或目的的外部標(biāo)簽。 本發(fā)明的劑量
[0103] 在一些實(shí)施方案中，CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑在要求保護(hù)的方法、組合物和/或試劑盒 中的有效量可以在約 100_200mg/天、200-300mg/天、300-400mg/天、400-500mg/天、500-600mg/天、600-700mg/天、700-800mg/天、800-900mg/天、900-1000mg/天、1000-1 IOOmg/天、 1100-1200mg/天、1200-1300mg/天、1300-1400mg/天、1400-1500mg/天、1500-1600mg/天、 1600-1700mg/天、1700-1800mg/天、1800-1900mg/天或 1900-2000mg/天的范圍內(nèi)。在本發(fā)明 的一個(gè)實(shí)施方案中，CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑是人源化抗CD4抗體(例如扎木單抗）。
[0104] 在其它實(shí)施方案中，CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑在要求保護(hù)的方法、組合物和/或試劑盒 中的有效量可以在約 100_200mg/周、200-300mg/周、300-400mg/周、400-500mg/周、500-600mg/周、600-700mg/周、700-800mg/周、800-900mg/周、900-1000mg/周、1000-1 IOOmg/周、 1100-1200mg/周、1200-1300mg/周、1300-1400mg/周、1400-1500mg/周、1500-1600mg/周、 1600-1700mg/周、1700-1800mg/周、1800-1900mg/周或 1900-2000mg/周的范圍內(nèi)。在本發(fā)明 的一個(gè)實(shí)施方案中，CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑是人源化抗CD4抗體(例如扎木單抗）。扎木單抗可 以以980mg/周的劑量施用。
[0105] 在一些實(shí)施方案中，其它藥劑在要求保護(hù)的方法、組合物和/或試劑盒中的有效量 可以在約0 · 1_〇 · 5mg/天、0 · 5-1 · Omg/天、1 ·0-1 · 5mg/天、1 · 5_2mg/天、2 ·0-2 · 5mg/天、2 · 5_ 511^/天、5-1〇11^/天、1〇-1511^/天、15-2〇11^/天、2〇-2511^/天、25-3〇11^/天、3〇-3511^/天、35-40mg/天、40_45mg/天、45_50mg/天、50_55mg/天、55_60mg/天、60_65mg/天、65_70mg/天、70-75mg/天、75_80mg/天、80_85mg/天、85_90mg/天、90_95mg/天、95-1 OOmg/天、0 · 75-1 Omg/天 或2-10mg/天的范圍內(nèi)。在各個(gè)實(shí)施方案中，其它藥劑是免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼免疫治療 劑、免疫佐劑或免疫調(diào)節(jié)劑中的任一種。
[0106] 在一些實(shí)施方案中，其它藥劑在要求保護(hù)的方法、組合物和/或試劑盒中的有效量 可以在約 l-5mg/周、5-lOmg/周、10_15mg/周、15_20mg/周、20_25mg/周、25_30mg/周、30-35mg/周、35_40mg/周、40_45mg/周、45_50mg/周、50_55mg/周、55_60mg/周、60_65mg/周、65-70mg/周、70_75mg/天、75_80mg/mg、80_85mg/mg、85_90mg/周、90_95mg/周或 95-1 OOmg/周的 范圍內(nèi)。在各個(gè)實(shí)施方案中，其它藥劑是免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼免疫治療劑、免疫佐劑或 免疫調(diào)節(jié)劑中的任一種。
[0107] 在一些實(shí)施方案中，所述至少一種其它藥劑包括以每周25mg的劑量施用30-60分 鐘的替西羅莫司、以每天〇.75-10mg的劑量施用的依維莫司和/或以每天2-10mg的劑量施用 的雷帕霉素。
[0108] 在本發(fā)明所要求保護(hù)的方法的一個(gè)實(shí)施方案中，CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和其它藥劑 可以使用適當(dāng)?shù)氖┯梅绞?例如，由制造商針對(duì)CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和其它試劑中的每種所 推薦的施用方式）以上述劑量同時(shí)施用。
[0109] 或者，CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和其它藥劑可以以上述劑量依序施用。例如，其它藥劑 可以例如每天以上述劑量施用，且CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑（例如，人源化抗CD4抗體)可以例如 每天、每周、每?jī)芍堋⒚績(jī)尚瞧诤?或每月以上述劑量施用。或者，其它藥劑可以例如每天、每 周、每?jī)芍?、每?jī)尚瞧诤?或每月以上述劑量施用，且CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑（例如，人源化抗 CD4抗體)可以例如每天以上述劑量施用。此外，其它藥劑和CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑(例如，人源 化抗CD4抗體）中的每種可以每天、每周、每?jī)芍堋⒚績(jī)尚瞧诤?或每月施用，其中以上述劑量 施用其它藥劑的日期與以上述劑量施用CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑的日期不同。
[0110] 癌癥疫苗劑量將取決于所使用的疫苗。癌癥疫苗的有效劑量可以由本領(lǐng)域技術(shù)人 員（如醫(yī)生)確定，或者其可以根據(jù)制造商的建議進(jìn)行施用。在一個(gè)實(shí)施方案中，癌癥疫苗的 第一劑量是在第〇天施用，且第二劑量是在第7天施用。其它藥劑可以在第2-32天以上述劑 量施用。另外，可以在第10天開(kāi)始以上述劑量施用2-3個(gè)周劑量的抗CD4耗竭劑。例如，如果 使用基于熱激蛋白的疫苗，則熱激蛋白（例如，hspllO或grpl70)可以與腫瘤抗原（如gplOO) 復(fù)合并且隨后施用。在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)于黑色素瘤疫苗來(lái)說(shuō)，可以皮內(nèi)施用2.5mg/kg的 118口110和8口100的復(fù)合物。
[0111] 有效量的CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑或其它藥劑的典型劑量可以在制造商所推薦的范圍 內(nèi)（其中使用已知的治療化合物），并且另外如通過(guò)在細(xì)胞中的體外反應(yīng)或在動(dòng)物模型中的 體內(nèi)反應(yīng)向本領(lǐng)域技術(shù)人員所指示。
[0112] 例如，替西羅莫司的FDA批準(zhǔn)劑量為每周歷時(shí)30-60min靜脈內(nèi)施用25mg，對(duì)于依維 莫司是每天口服0.75mg-10mg，對(duì)于雷帕霉素是每天口服約2-10mg，并且對(duì)于扎木單抗是每 周靜脈內(nèi)施用約980mg?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案使用相同或相似的劑量，或者可以 結(jié)合本發(fā)明的替代實(shí)施方案使用替代劑量。實(shí)際劑量可以取決于醫(yī)生的判斷、患者的狀況 和治療方法的有效性，該有效性基于例如相關(guān)的培養(yǎng)細(xì)胞或組織培養(yǎng)的組織樣本的體外反 應(yīng)性或在適當(dāng)?shù)膭?dòng)物模型中所觀察到的反應(yīng)。 實(shí)施例
[0113] 以下實(shí)施例只是為了說(shuō)明目的而提供并且無(wú)意以任何方式限制本發(fā)明的范圍。 實(shí)施例1:實(shí)驗(yàn)方法 小鼠和腫瘤細(xì)胞
[0114] 雌性C57BL/6J、BALB/c小鼠和Pmel-1 小鼠（6-8周齡）購(gòu)自 Jacksonlaboratory (BarHarbor，ME)并圈養(yǎng)在無(wú)病原條件下。FoxP3-GFP轉(zhuǎn)基因小鼠在小鼠 Foxp3 (叉頭框P3)啟 動(dòng)子的控制下表達(dá)綠色熒光蛋白。DEREG(調(diào)節(jié)性T細(xì)胞耗竭)轉(zhuǎn)基因小鼠根據(jù)T. S. LahlK、 LoddenkemperC、DrouinC、Freyer J、AmasonJ、Eber IG 等人，JExpMed. 2007; 204:57-63 描述來(lái) 產(chǎn)生。所有涉及動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)均符合聯(lián)邦和州標(biāo)準(zhǔn)，所述標(biāo)準(zhǔn)包括聯(lián)邦動(dòng)物福利法案 (federalAnimalWelfareAct)和NIH實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物照護(hù)和使用指南。
[0115]用人gplOO(人黑色素瘤抗原）轉(zhuǎn)導(dǎo)B16細(xì)胞（小鼠黑色素瘤細(xì)胞系）（B16-gp100 )。 RENCA是鼠腎細(xì)胞癌(RCC)細(xì)胞系。將所述細(xì)胞維持在補(bǔ)充有10%熱滅活型胎牛血清(FBS; LifeTechnologies，GrandIsland，NY)、2mmol/LL_谷氨酰胺、100個(gè)單位/mL青霉素和IOOyg/ mL鏈霉素的DMEM或RPMI1640培養(yǎng)基中。
[0116] 通過(guò)皮下注射2xl05個(gè)細(xì)胞至側(cè)腹中產(chǎn)生小鼠腫瘤:B16腫瘤注射至C57BL/6小鼠 中以及RENCA腫瘤注射至Balb/C小鼠中。用卡尺每周測(cè)量腫瘤直徑兩次，并且計(jì)算腫瘤體積 (最短直徑2X最長(zhǎng)直徑/2)。在肺轉(zhuǎn)移模型中，通過(guò)尾靜脈靜脈內(nèi)注射腫瘤細(xì)胞。使用解剖 顯微鏡對(duì)肺轉(zhuǎn)移計(jì)數(shù)。 抗體和試劑
[0117]以下單克隆抗體(mAb)(含或不含焚光綴合物)從Biolegen d(SanDiego)獲得:抗 〇04(61(1.5和1^4-5)、抗0)8(53-6.7)、抗〇016/〇032(9.3)、抗〇090.1(0父-7)、抗0)11〇 (N418)、抗Bcl2(BCL/10C4)、抗T-bet(4B10)、抗CD62L(MEL-14)、抗CD279(PD-1，29F.1A12)、 抗FoxP3(FJK-16s)、抗IFN-γ(XMG1.2)、抗IL-2(JES6.5H4)、抗IL-4(11B11)、IL-17A (eBi〇1787).CellTraCe5-(和6_)羧基熒光素二乙酸鹽琥珀酰亞胺酯(CFSE)細(xì)胞增殖試劑 盒購(gòu)自MolecularProbes(Eugene，OR)。替西羅莫司購(gòu)自 LCLaboratory(Woburn，MA) 〇 T細(xì)胞富集和Treg分選
[0118]收集小鼠脾和淋巴結(jié)并處理成單細(xì)胞懸浮液。使用小鼠 CD8或CD4回收柱試劑盒 (CedarlaneLabs，Burlington，NC)負(fù)性富集CD8和CD4T細(xì)胞。陰性選擇后的CD8和CD4細(xì)胞的 純度大于85%。通過(guò)MoFlo細(xì)胞分選儀(FortCollins，C0)分選FoxP3-GFP細(xì)胞或抗體染色的 CD4+CD25+細(xì)胞。 DC的制備和T細(xì)胞刺激
[0119]已經(jīng)描述了 DC 制備（WangY、WangXY、SubjeckJR、ShrikantPA、 KimHL. Br JCancer. 2011; 104: 643-52)。簡(jiǎn)單地說(shuō)，從股骨和脛骨收獲小鼠骨髓，然后以 IxlO6個(gè)細(xì)胞/孔的密度連同10%FBS和10ng/ml小鼠 GM-CSF-起放置在12孔板中。每2天供 養(yǎng)細(xì)胞一次并在7-9天后收獲。75-90%的細(xì)胞是CDl Ic陽(yáng)性的。為了制備用于治療小鼠的DC 疫苗，DC用腫瘤細(xì)胞裂解物脈沖，并用10ug/mlCpG激活。將DC皮下注射到小鼠中。對(duì)于Pmel-1細(xì)胞的體外激活，用l〇ng/ml小鼠 gplOO肽（氨基酸25-33,其由H2-Dbl類(lèi)分子呈現(xiàn)， AlphaDiagnosticInternational，SanAntonio，TX)使DC脈沖，并用 10ug/mlCpG活化2小時(shí)。 用PBS洗滌DC，并與CFSE標(biāo)記的Pmel-I細(xì)胞共培養(yǎng)。通過(guò)FACscan分析Pmel-I細(xì)胞增殖。 過(guò)繼轉(zhuǎn)移、CD4細(xì)胞耗竭和mTOR抑制
[0120]從初次用于實(shí)驗(yàn)的Pmel-I小鼠的淋巴結(jié)和脾分離出Pmel-I淋巴細(xì)胞。使用 Cedarlane純化柱通過(guò)陰性選擇使⑶8淋巴細(xì)胞富集。所得細(xì)胞的至少85%是⑶8+。將5xl05 個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至B57BL/6小鼠中。在過(guò)繼轉(zhuǎn)移后的第二天，小鼠接受經(jīng)腫瘤裂解物脈沖的DC疫 苗。為了使CD4細(xì)胞耗竭，在約7和9天后施用aCD4;對(duì)小鼠腹膜內(nèi)注射250ugCD4mAb(克隆 GKl. 5)。為了使CD8細(xì)胞耗竭，小鼠接受250ugCD8mAb(克隆2.43)。為了使DEREG小鼠中的 FoxP3細(xì)胞耗竭，注射5ygDT。使用流式細(xì)胞術(shù)來(lái)確認(rèn)靶細(xì)胞的耗竭。對(duì)于mTor抑制劑治療而 言，每天腹膜內(nèi)注射15yg替西羅莫司，持續(xù)2周。使用流式細(xì)胞術(shù)來(lái)分析記憶細(xì)胞和Treg細(xì) 胞。 體內(nèi)CTL分析
[0121]已經(jīng)描述了體內(nèi) CTL 測(cè)定（WangY、WangXY、SubjeckJR、ShrikantPA、 KimHL.BrJCancer. 2011; 104:643-52)。簡(jiǎn)言之，從初次用于實(shí)驗(yàn)的小鼠獲得脾細(xì)胞的單細(xì) 胞懸浮液（IxlO7個(gè)細(xì)胞/ml)并在含有10%FBS的DMEM中于37°C下用或不用ΙΟμΜ肽脈沖 30min。然后用不同濃度的CFSE(0.5或12.5uM)以2χ10 7個(gè)細(xì)胞/mlPBS/0.1 %BSA標(biāo)記每個(gè)細(xì) 胞群體。通過(guò)添加等體積的FBS歷時(shí)Imin來(lái)停止CFSE標(biāo)記，并用RPMI完全培養(yǎng)基洗滌3次。將 來(lái)自每個(gè)肽脈沖或未脈沖的群體的5xl0 6個(gè)細(xì)胞混合并靜脈注射到免疫的和未免疫的小鼠 中。在轉(zhuǎn)移后16小時(shí)，處死小鼠，并收集脾細(xì)胞。制備脾細(xì)胞的單細(xì)胞懸浮液，并通過(guò)流式細(xì) 胞術(shù)進(jìn)行分析。熒光供體脾細(xì)胞的特異性裂解百分比計(jì)算如下：[(未脈沖目標(biāo)數(shù)xA-脈沖目 標(biāo)數(shù))/未脈沖目標(biāo)數(shù)xA] X 100，其中A =未免疫受體小鼠中的[脈沖目標(biāo)數(shù)/未脈沖目標(biāo) 數(shù)]。 統(tǒng)計(jì)學(xué)
[0122] 使用重復(fù)測(cè)量ANOVA評(píng)估腫瘤生長(zhǎng)的差異。通過(guò)雙尾學(xué)生T檢驗(yàn)評(píng)價(jià)肺轉(zhuǎn)移數(shù)量、 體內(nèi)CTL殺傷率和來(lái)自流式細(xì)胞術(shù)的平均百分比之間的統(tǒng)計(jì)差異。使用StataS. 0 (StataCorp，Col IegeStat ion，Texas)進(jìn)行所有統(tǒng)計(jì)分析。P值<0.05被認(rèn)為是顯著的。 實(shí)施例2 :mT0R抑制增強(qiáng)抗腫瘤克疫
[0123] 在動(dòng)物模型中，藥理學(xué)mTOR抑制可以增強(qiáng)免疫記憶的形成，這可有助于清除感染 和減少腫瘤生長(zhǎng)。這是一個(gè)出乎意料的發(fā)現(xiàn)，因?yàn)閙TOR抑制劑被用來(lái)抑制已經(jīng)接受實(shí)體器 官移植的患者的免疫系統(tǒng)。替西羅莫司是雷帕霉素類(lèi)似物以及被美國(guó)食品藥品管理局 (FDA)批準(zhǔn)作為癌癥治療的最初mTOR抑制劑之一。在臨床前模型中，使用替西羅莫司進(jìn)行 mTOR抑制增強(qiáng)腫瘤裂解物脈沖的DC(在此被稱(chēng)為DC疫苗）的抗腫瘤免疫（圖la)。替西羅莫司 可以直接抑制一些腫瘤的生長(zhǎng)，因此，進(jìn)行腫瘤預(yù)防研究來(lái)評(píng)估替西羅莫司的免疫作用。通 過(guò)在腫瘤激發(fā)前13天施用DC疫苗和替西羅莫司，不存在直接抗腫瘤作用的可能性，并且腫 瘤生長(zhǎng)的任何減少可以歸因于免疫刺激。單獨(dú)施用DC疫苗減少小鼠中的B16腫瘤細(xì)胞的生 長(zhǎng)，然而大多數(shù)小鼠最終由于腫瘤生長(zhǎng)而死亡。相反地，DC疫苗和替西羅莫司的組合獲得 100%的存活率，并且完全防止B16腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。
[0124] 為了評(píng)估替西羅莫司對(duì)特定⑶8淋巴細(xì)胞的免疫作用，將Thyl. IPmel-I淋巴細(xì)胞 過(guò)繼轉(zhuǎn)移到Thyl. 2B6小鼠中（圖lb) Jmel-I轉(zhuǎn)基因小鼠攜帶識(shí)別由H2-DbMHCI類(lèi)分子呈現(xiàn) 的gplOO表位(氨基酸25-33)的重排T細(xì)胞受體。在B6小鼠用DC疫苗和替西羅莫司處理，從中 收獲淋巴細(xì)胞。當(dāng)與DC疫苗一起施用時(shí)，替西羅莫司既有免疫刺激作用，又有免疫抑制作 用。替西羅莫司略微降低是Pmel-I淋巴細(xì)胞的CD8細(xì)胞的百分比(p值0.08)，然而，Pmel-I淋 巴細(xì)胞具有增加的Eomes表達(dá)，Eomes是記憶細(xì)胞形成的早期標(biāo)記物。潛在的免疫遏制作用 包括Pmel-I淋巴細(xì)胞中Tbet表達(dá)的減少以及Treg的增加。這些觀察結(jié)果主要由體外混合淋 巴細(xì)胞培養(yǎng)研究反映（圖lc)。在體外研究中，替西羅莫司顯著降低由DC疫苗誘導(dǎo)的Pmel-I 淋巴細(xì)胞的增殖。 實(shí)施例3: CD4耗竭增強(qiáng)mTor抑制的抗腫瘤作用
[0125] 替西羅莫司產(chǎn)生凈抗腫瘤免疫反應(yīng)，然而Treg增加。此外，腫瘤本身的存在也增加 Treg(圖8)。因此，我們假設(shè)由mTOR抑制誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫力可以通過(guò)靶向Treg進(jìn)一步增 強(qiáng)。目前還沒(méi)有選擇性地消除Treg的臨床策略;然而，使所有CD4淋巴細(xì)胞耗竭是可行的。然 而，免疫激活需要CD4效應(yīng)細(xì)胞。因此，在小鼠模型中，在由腫瘤植入物進(jìn)行免疫刺激之后的 第6天開(kāi)始用aCD4抗體(aCD4)耗竭CD4淋巴細(xì)胞（圖2)。圖1示出了小鼠黑素瘤模型的結(jié)果。 在腎細(xì)胞癌(另一種經(jīng)典的免疫敏感性腫瘤)的第二模型中測(cè)試這種方法。在腫瘤治療模型 中，在Balb/c小鼠中建立可觸及的RENCA腫瘤。替西羅莫司已經(jīng)顯示直接抑制體外RENCA腫 瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)（WangY、WangXY、SubjeckJR、ShrikantPA、KimHL.BrJCancer · 2011; 104:643-52)并且在小鼠模型中能有效地減少腫瘤生長(zhǎng)（圖2a)。向替西羅莫司治療中添加 aCD4進(jìn)一 步減少腫瘤生長(zhǎng)，而單獨(dú)aCD4是沒(méi)有效果。令人感興趣地注意到，即使當(dāng)不使用癌癥疫苗并 且植入腫瘤是特異性免疫刺激的唯一來(lái)源時(shí)，α⑶4和替西羅莫司的組合仍然減少腫瘤生 長(zhǎng)。
[0126] 在相同的實(shí)驗(yàn)中，在第45天收獲淋巴細(xì)胞并且評(píng)估其腫瘤特異性IFN-Y反應(yīng)（圖 2b)。在沒(méi)有接受處理的荷瘤小鼠中，沒(méi)有IFN- γ反應(yīng)。使用aCD4或替西羅莫司進(jìn)行處理產(chǎn) 生了一些IFN-γ反應(yīng);然而，組合處理產(chǎn)生最大的IFN-γ反應(yīng)。為表征響應(yīng)于aCD4的⑶4淋 巴細(xì)胞耗竭，用單劑量的aCD4處理初次用于實(shí)驗(yàn)的小鼠。幾乎所有CD4細(xì)胞第二天都從外周 血、脾和淋巴結(jié)中耗竭（圖2c )，而⑶8細(xì)胞被保存（圖2d)。重要的是，F(xiàn)oxP3+⑶4+細(xì)胞被耗竭 并且甚至在施用aCD4后的10天仍然很低（圖2e)。單劑量aCD4減少所有CD4子集的群體（圖 9) 〇 實(shí)施例4: CD4耗竭和替西羅莫司的組合產(chǎn)生依賴(lài)于記憶CD8細(xì)胞的抗腫瘤免疫
[0127] 由于替西羅莫司可以具有直接抗腫瘤作用，重要的是確定aCD4和替西羅莫司的組 合產(chǎn)生依賴(lài)于CD8淋巴細(xì)胞的有效抗腫瘤免疫。用替西羅莫司單獨(dú)處理具有RENCA腫瘤的 Balb/c小鼠10天，然后用第二RENCA腫瘤激發(fā)（圖3a)。被注射aCD8抗體(aCD8)以耗竭CD8效 應(yīng)細(xì)胞的小鼠具有增加的第二RENCA腫瘤的生長(zhǎng)，這表明即使單獨(dú)的替西羅莫司也至少部 分通過(guò)刺激免疫反應(yīng)起作用。替西羅莫司和aCD4的組合完全阻止第二RENCA腫瘤的生長(zhǎng);然 而，aCD8消除了對(duì)第二腫瘤的抗腫瘤作用，這表明細(xì)胞免疫對(duì)腫瘤控制的重要性(圖3b)。
[0128] 為了在更具侵襲性的腫瘤模型中進(jìn)一步確立免疫系統(tǒng)的作用并測(cè)試我們提出的 治療，我們?cè)u(píng)估了抗腫瘤免疫力是否可以轉(zhuǎn)移來(lái)防止轉(zhuǎn)移性肺沉積物的生長(zhǎng)。aCD4和替西 羅莫司的組合被用來(lái)處理確立的皮下RENCA腫瘤（圖3c)。將來(lái)自這些小鼠的淋巴細(xì)胞過(guò)繼 轉(zhuǎn)移到用RENCA細(xì)胞靜脈內(nèi)激發(fā)的初次用于實(shí)驗(yàn)的小鼠中。如通過(guò)比較肺重量（圖3d)和肺 沉積物計(jì)數(shù)（圖3e)所量化，組合處理顯著降低肺沉積物的建立和生長(zhǎng)（圖3c)。因此，記憶細(xì) 胞被成功轉(zhuǎn)移到初次用于實(shí)驗(yàn)的小鼠中，在其中它們有助于控制腫瘤生長(zhǎng)。通過(guò)使CD8細(xì)胞 耗竭，證明抗腫瘤活性依賴(lài)于CD8細(xì)胞。通過(guò)將CD8淋巴細(xì)胞從經(jīng)過(guò)治療的小鼠轉(zhuǎn)移到初次 用于實(shí)驗(yàn)的小鼠中進(jìn)一步確認(rèn)了免疫刺激。在非常具有侵襲性的腫瘤模型中，轉(zhuǎn)移的淋巴 細(xì)胞能有效地控制轉(zhuǎn)移沉積物的生長(zhǎng)。 實(shí)施例5:CD4耗竭和替西羅莫司處理的組合增強(qiáng)CD8記憶細(xì)胞的功能
[0129] 替西羅莫司抑制腫瘤生長(zhǎng)的重要機(jī)制是提高特異性⑶8記憶的質(zhì)量。因此，我們表 征CD8記憶細(xì)胞的質(zhì)量，目的是評(píng)估aCD4是否進(jìn)一步增強(qiáng)在mTOR抑制的存在下形成的特異 性CD8記憶。我們使用了其中DC疫苗刺激免疫反應(yīng)而不是腫瘤本身的模型，因?yàn)槭褂煤闪鲂?鼠的實(shí)驗(yàn)的持續(xù)時(shí)間受對(duì)照組中的迅速腫瘤生長(zhǎng)的限制。通過(guò)使用DC疫苗，可以評(píng)估長(zhǎng)期 記憶，包括回憶應(yīng)答。將Thyl. IPmel-I淋巴細(xì)胞過(guò)繼轉(zhuǎn)移到B6小鼠中，然后用B16-DC疫苗激 發(fā)B6小鼠并用aCD4和替西羅莫司進(jìn)行處理（圖4a)。
[0130] 為了評(píng)估記憶細(xì)胞，在于第46天用DC疫苗再激發(fā)小鼠之前（圖4b)或之后（圖4c)收 獲脾細(xì)胞。在即將再激發(fā)之前，實(shí)驗(yàn)組中的Pmel-I淋巴細(xì)胞的百分比沒(méi)有顯著差異（圖4b)。 然而，來(lái)自經(jīng)過(guò)aCD4和替西羅莫司二者處理的小鼠的⑶8淋巴細(xì)胞具有顯著更高的記憶標(biāo) 記物Eomes和BCL2的表達(dá)。這個(gè)組中的⑶8淋巴細(xì)胞具有顯著更高的⑶62L表達(dá)，CD62L是高 度有效的中央記憶細(xì)胞的標(biāo)記物。與高質(zhì)量記憶細(xì)胞相一致，在用DC疫苗再激發(fā)后，組合處 理組中的Pmel-I細(xì)胞具有最大的擴(kuò)增并且⑶8細(xì)胞具有最高的Tbet和IL2表達(dá)（圖4c)。有趣 的是，即使在再激發(fā)后，組合處理組中的擴(kuò)增的⑶8細(xì)胞仍具有最高的Eome S(早期記憶標(biāo)記 物)表達(dá)。組合治療產(chǎn)生的⑶8淋巴細(xì)胞具有能夠響應(yīng)于重復(fù)抗原激發(fā)迅速擴(kuò)增的最強(qiáng)記憶 表型。在我們的模型中，Treg存在于免疫致敏期間，因?yàn)樵诿庖叽碳ず蟮闹辽?天開(kāi)始CD4耗 竭。
[0131] 其他人已經(jīng)報(bào)道，Treg在免疫致敏期間對(duì)⑶8記憶形成是必要的。因此，在我們的 治療模型中，在初次免疫刺激的至少6天后使Treg耗竭。然而，我們已經(jīng)核實(shí)了在免疫致敏 期間具有CD4細(xì)胞的重要性。當(dāng)在免疫致敏之前進(jìn)行CD4耗竭時(shí)，CD8記憶形成是不良的，如 在刺激記憶細(xì)胞后的弱腫瘤特異性CD8擴(kuò)展和低Eomes表達(dá)所指示(圖10)。 實(shí)施例6:耗竭或置換F〇Xp3Treg細(xì)胞改變體內(nèi)CTL功能
[0132] 我們最初的假設(shè)是通常由替西羅莫司誘導(dǎo)的Treg耗竭將增強(qiáng)抗腫瘤免疫力。我們 選擇CD4耗竭作為使Treg耗竭的策略，因?yàn)镃D4耗竭在患者中是可行的。然而，我們想要測(cè)試 ⑶4耗竭的影響是否可以直接歸于Treg耗竭。因此，我們使用DEREG(調(diào)節(jié)性T細(xì)胞耗竭)轉(zhuǎn)基 因小鼠，它攜帶在Foxp3啟動(dòng)子控制下的DTR-eGFP轉(zhuǎn)基因，從而允許通過(guò)施用白喉毒素 (DT) 特異性耗竭 Treg(LahlK、LoddenkemperC、DrouinC、Freye;rJ、A;rnasonJ、Ebe;rlG 等人， JExpMed. 2007; 204:57-63.)。在與圖2中所示的實(shí)驗(yàn)類(lèi)似的實(shí)驗(yàn)中，在第6天和第10天施用 DT來(lái)代替aCD4(圖5a)。用DC疫苗刺激免疫系統(tǒng)并且在第35天通過(guò)體內(nèi)CTL評(píng)估特異性免疫 記憶（圖5c) JT施用消除了幾乎所有的⑶4+FoxP3+淋巴細(xì)胞（圖5b)。當(dāng)與對(duì)照組相比時(shí)，在 經(jīng)過(guò)DT和替西羅莫司處理的小鼠中特異性殺傷顯著提高（圖5c，最右邊的一組）。因此，去除 Treg具有類(lèi)似于CD4耗竭的免疫作用。
[0133] 為了充分確定Treg耗竭作為CD4耗竭后的免疫刺激的潛在機(jī)制，在CD4耗竭后置換 Treg(圖6a)。如通過(guò)體內(nèi)CTL所評(píng)估，經(jīng)過(guò)aCD4和替西羅莫司處理的小鼠發(fā)展出最佳的特異 性免疫記憶（圖6b)。然而，當(dāng)來(lái)自經(jīng)過(guò)DC疫苗處理的小鼠的Treg被過(guò)繼轉(zhuǎn)移時(shí)，特異性殺傷 下降到僅接受DC疫苗的對(duì)照小鼠的水平（圖6b，最右邊的圖）。這些實(shí)驗(yàn)證實(shí):在利用aCD4的 情況下，是Treg耗竭增強(qiáng)了特異性免疫記憶形成。 實(shí)施例7:在CD4耗竭后，最終恢復(fù)的Treg群體的免疫抑制性較低
[0134] 在使用DC疫苗、a⑶4和替西羅莫司進(jìn)行處理后，Treg群體最終恢復(fù)（圖7a)。在不同 實(shí)驗(yàn)組之間，脾中的Treg絕對(duì)數(shù)量的差異并非是統(tǒng)計(jì)顯著的。然而，所述治療可以對(duì)Treg具 有長(zhǎng)期影響。因此，我們?cè)u(píng)估了恢復(fù)的Treg的免疫抑制功能?；贑D25狀態(tài)分選CD4淋巴細(xì) 胞（圖7b)。絕大多數(shù)⑶4+⑶25+細(xì)胞都是FoxP3陽(yáng)性的并且被認(rèn)為是Treg，且絕大多數(shù)⑶4+ CD25-細(xì)胞是FoxP3陰性的并且被認(rèn)為是⑶4效應(yīng)細(xì)胞。在功能研究中，對(duì)照⑶4+⑶25+細(xì)胞 遏制CD8淋巴細(xì)胞的增殖。然而，在CD4耗竭后恢復(fù)的CD4+CD25+的免疫抑制性較低，這可能 是因?yàn)樗鼈儾惶赡苁悄[瘤特異性Treg(圖7d)。有趣的是，在CD4耗竭后，恢復(fù)的CD4效應(yīng)細(xì) 胞也不太有效，如由較低的IFNy和IL4分泌所指示（圖7c)?？赡艿氖牵珻D4效應(yīng)細(xì)胞和Treg 都不太可能是腫瘤特異性的。
[0135] 免疫治療方法已證明可有效地治療實(shí)體瘤。FDA批準(zhǔn)了 sipuleucel-T，其成為用于 治療實(shí)體瘤的第一個(gè)市售的癌癥疫苗。易普利單抗(靶向CTLA4的單克隆抗體)最近被批準(zhǔn) 用于治療黑色素瘤。靶向CTLA4和PD-I的免疫檢查點(diǎn)抑制劑正在針對(duì)各種惡性疾病的大量 臨床試驗(yàn)中積極進(jìn)行研究。一直存在跡象表明基于免疫的療法甚至可以治愈患有轉(zhuǎn)移性疾 病的患者的亞群，但免疫療法的最新進(jìn)展重新確認(rèn)持久的完全反應(yīng)是可能的。因此，免疫療 法是癌癥治療的最有前途的方法之一。 實(shí)施例8: CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和過(guò)繼免疫治療劑的組合增強(qiáng)抗腫瘤作用
[0136] 將B16腫瘤細(xì)胞植入到DREG小鼠中，DREG小鼠是被工程改造來(lái)在FoxP3啟動(dòng)子之后 表達(dá)白喉毒素受體的B6小鼠。小鼠在第2天接受用腫瘤裂解物脈沖的DC疫苗。用白喉毒素使 Treg特異性耗竭并且在第6天和第10天利用aCD4抗體去除⑶4細(xì)胞。監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)。*p = 0.05，#p = 0.0009。如圖11中所示，當(dāng)與單獨(dú)的DC疫苗相比時(shí)，CD4淋巴細(xì)胞耗竭和DC疫苗 的組合增強(qiáng)抗腫瘤效果。 實(shí)施例9: CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和免疫檢查點(diǎn)抑制劑的組合增強(qiáng)抗腫瘤作用
[0137] 將B16腫瘤細(xì)胞植入到B6小鼠中。在第0天。在第6天和第10天用aCD4抗體使⑶4細(xì) 胞耗竭。在第10至第24天用aF>D-l抗體處理小鼠。監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)。*p = 0.02。如圖12中所示， 當(dāng)與單獨(dú)的抗ro-i抗體相比時(shí)，CD4淋巴細(xì)胞耗竭和抗ro-i抗體的組合增強(qiáng)抗腫瘤效果。 實(shí)施例10:抗CD4抗體展現(xiàn)抗腫瘤活性
[0138] 在第0天，將RENCA-CA9腫瘤細(xì)胞植入到Balb/C小鼠中（η = 5/組）。在第6天和第10 天用aCD4抗體使⑶4淋巴細(xì)胞耗竭（圖13Α)。在第45天收獲淋巴細(xì)胞，用CA9肽再刺激，并且 針對(duì)CD8和IFNy染色。結(jié)果代表重復(fù)實(shí)驗(yàn)（圖13B)。對(duì)于體外CTL測(cè)定，在第45天收獲脾細(xì)胞 并用IL2、RENCA裂解物和CA9肽進(jìn)行培養(yǎng)。通過(guò)用CFSE標(biāo)記RENCA細(xì)胞制備靶細(xì)胞。以50:1的 比率共培養(yǎng)效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞，并通過(guò)FACS分析為7-AAD陽(yáng)性和膜聯(lián)蛋白V陰性的CFSE+細(xì) 胞的百分比（圖13C)。直方圖提供平均值+SEMjpS0.0 5316腫瘤生長(zhǎng)曲線顯示:抗⑶4抗體 具有抗腫瘤作用（圖13D)。如圖13中所示，CD4耗竭產(chǎn)生能夠在腫瘤抗原的存在下激活和殺 傷腫瘤細(xì)胞的腫瘤特異性CD8細(xì)胞。 實(shí)施例11: CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑、過(guò)繼免疫治療劑和mTOR抑制劑的組合增強(qiáng)抗腫瘤作用
[0139] 在第0天，將B16腫瘤細(xì)胞皮下注射到B6小鼠的側(cè)腹中（n = 5/組）。小鼠在第3天接 受用腫瘤裂解物脈沖的DC疫苗，并且在第6天和第9天進(jìn)行CD4淋巴細(xì)胞耗竭(使用抗 體）。在第9天至第20天，每天腹膜內(nèi)注射替西羅莫司。示出了具有SEM的B16腫瘤生長(zhǎng)曲 線。**p<0.001。如圖14中所示，CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑、樹(shù)突細(xì)胞疫苗和mTOR抑制劑（替西羅 莫司）的組合有效地控制腫瘤的生長(zhǎng)。
[0140] 上述的各種方法和技術(shù)提供了用于實(shí)施本申請(qǐng)的多種方式。當(dāng)然，應(yīng)當(dāng)理解的是， 根據(jù)本文所描述的任何特定實(shí)施方案并不一定能夠?qū)崿F(xiàn)所描述的所有目標(biāo)或優(yōu)點(diǎn)。因此， 例如，本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，可以以實(shí)現(xiàn)或優(yōu)化如本文所教導(dǎo)的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)或一組優(yōu)點(diǎn) 而不一定實(shí)現(xiàn)如本文所教導(dǎo)或表明的其它目標(biāo)或優(yōu)點(diǎn)的方式來(lái)執(zhí)行所述方法。本文中提及 了多種替代方案。應(yīng)該理解的是，一些優(yōu)選的實(shí)施方案明確地包括一種、另一種或若干特 征，而其它實(shí)施方案明確地排除一種、另一種或若干特征，而還有其它實(shí)施方案通過(guò)包括一 種、另一種或若干有利特征而緩和一種具體特征。
[0141]此外，熟練的技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到來(lái)自不同實(shí)施方案的各種特征的適用性。類(lèi)似地， 以上所討論的不同的要素、特征和步驟以及對(duì)于每個(gè)此類(lèi)要素、特征或步驟的其它已知等 效物可以由本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員以各種組合使用，以根據(jù)本文所述的原則執(zhí)行方法。在 不同的實(shí)施方案中，在不同的要素、特征和步驟之中，一些將明確地被包括，而其它明確地 被排除。
[0142] 雖然已經(jīng)在某些實(shí)施方案和實(shí)施例的上下文中公開(kāi)了本申請(qǐng)，但本領(lǐng)域技術(shù)人員 應(yīng)該理解，本申請(qǐng)的實(shí)施方案超出明確公開(kāi)的實(shí)施方案而涵蓋其它替代性實(shí)施方案和/或 其用途和修改和等效物。
[0143] 本文描述了本申請(qǐng)的優(yōu)選實(shí)施方案，包括發(fā)明人已知的用于實(shí)施本申請(qǐng)的最佳模 式。在閱讀上述描述后，那些優(yōu)選實(shí)施方案的變型對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將變得顯而 易見(jiàn)。預(yù)期熟練的技術(shù)人員可以視情況采用這些變型，并且本申請(qǐng)可以以除本文明確描述 之外的方式來(lái)實(shí)踐。因此，如適用法律所允許的，本申請(qǐng)的多個(gè)實(shí)施方案包括所附權(quán)利要求 中列舉的主題的所有修改物和等效物。此外，除非本文中另外指示或顯然與上下文矛盾，否 則在其所有可能變型中的上述要素的任何組合均包括在本申請(qǐng)中。
[0144] 本文所參考的所有專(zhuān)利、專(zhuān)利申請(qǐng)、專(zhuān)利申請(qǐng)的公開(kāi)以及其它材料如文章、書(shū)籍、 說(shuō)明書(shū)、出版物、文件、事物和/或類(lèi)似物在此通過(guò)引用整體并入本文以用于所有目，除了與 此有關(guān)的任何起訴文件歷史、與本文件不一致或沖突的任何等同物、或?qū)εc本文件目前或 以后相關(guān)的最廣泛的權(quán)利要求范圍可能具有限制性影響的任何等同物。舉例來(lái)說(shuō)，如果在 與任何并入的材料相關(guān)和與本文件相關(guān)的術(shù)語(yǔ)的說(shuō)明、定義和/或用途之間存在任何不一 致或沖突，則應(yīng)當(dāng)以本文件中的說(shuō)明、定義和/或用途為準(zhǔn)。
[0145] 應(yīng)該理解，在本文中公開(kāi)的本申請(qǐng)的實(shí)施方案說(shuō)明了本申請(qǐng)的實(shí)施方案的原則。 可以采用的其它修改可以在本申請(qǐng)的范圍內(nèi)。因此，通過(guò)舉例，但不是限制，可以根據(jù)本文 中的教導(dǎo)來(lái)利用本申請(qǐng)的實(shí)施方案的替代配置。因此，本申請(qǐng)的實(shí)施方案不限于精確地如 所示出和描述的那些。
[0146] 在上文的【具體實(shí)施方式】中描述了本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案。雖然這些說(shuō)明直接描述 了上述實(shí)施方案，但應(yīng)該理解，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以設(shè)想針對(duì)本文所示出和描述的具體實(shí) 施方案的修改和/或變型。落在本說(shuō)明的范圍內(nèi)的任何此類(lèi)修改或變型也旨在被包括在其 中。除非明確說(shuō)明，否則發(fā)明人希望在本說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中的字詞和短語(yǔ)對(duì)適用領(lǐng)域 的普通技術(shù)人員指定普通和習(xí)慣的含義。
[0147]
【申請(qǐng)人】在提交本申請(qǐng)時(shí)已知的本發(fā)明的各個(gè)實(shí)施方案的前述描述已經(jīng)被呈現(xiàn)并 且旨在用于說(shuō)明和描述的目的。本描述無(wú)意為詳盡性的，也無(wú)意將本發(fā)明限制于所公開(kāi)的 精確形式，并且許多修改和變型根據(jù)上述教導(dǎo)的是可能的。所述的實(shí)施方案是用來(lái)解釋本 發(fā)明的原則和其實(shí)際應(yīng)用并允許本領(lǐng)域的其它技術(shù)人員在各個(gè)實(shí)施方案中以適于預(yù)期的 特定用途的各種修改利用本發(fā)明。因此，希望本發(fā)明不限于為了實(shí)施本發(fā)明所公開(kāi)的具體 實(shí)施方案。
[0148] 雖然已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的具體實(shí)施方案，但對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而 易見(jiàn)的是，基于本文中的教導(dǎo)，可以在不脫離本發(fā)明和其更寬廣方面的情況下作出改變和 修改，并且因此，所附的權(quán)利要求將在其范圍內(nèi)包括所有此類(lèi)改變和修改，它們也在本發(fā)明 的真實(shí)精神和范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種治療、預(yù)防有需要的受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其進(jìn)展的方 法，其包括： 提供CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑； 提供選自由免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼免疫治療劑、免疫佐劑和免疫調(diào)節(jié)劑組成的組的 至少一種其它試劑；以及 向所述受試者施用治療有效量的所述CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和所述其它藥劑，從而治療、 預(yù)防所述受試者中的所述病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其進(jìn)展。2. -種治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其進(jìn)展的方法，其包括： 提供包含⑶4淋巴細(xì)胞耗竭劑的組合物；以及 向所述受試者施用治療有效量的所述組合物，從而治療、預(yù)防所述受試者中的病狀、減 輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其進(jìn)展。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述病狀是感染性疾病或癌癥。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述癌癥是腎癌、黑色素瘤、前列腺癌、乳腺癌、膠 質(zhì)母細(xì)胞瘤、肺癌、結(jié)腸癌或膀胱癌。5. 根據(jù)權(quán)利要求2或1所述的方法，其中所述受試者是人。6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述受試者已被診斷為患有癌癥或感染性疾病。7. 根據(jù)權(quán)利要求2或1所述的方法，其中所述CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑選自由以下組成的組： 小分子、肽、抗體或其片段和核酸分子。8. 根據(jù)權(quán)利要求2或1所述的方法，其中所述CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑是單克隆抗體或其片 段、多克隆抗體或其片段、嵌合抗體、人源化抗體、人抗體或其片段或單鏈抗體。9. 根據(jù)權(quán)利要求2或1所述的方法，其中所述CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑是人源化抗CD4抗體。10. 根據(jù)權(quán)利要求2或1所述的方法，其中所述CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑是扎木單抗。11. 根據(jù)權(quán)利要求2或1所述的方法，其中所述CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑以100-200mg/天、 200_300mg/天、300-400mg/天、400-500mg/天、500-600mg/天、600-700mg/天、700-800mg/ 天、800-900mg/天、900-1000mg/天、1000-1100mg/天、1100-1200mg/天、1200-1300mg/天、 1300-1400mg/天、1400-1500mg/天、1500-1600mg/天、1600-1700mg/天、1700-1800mg/天、 1800-1900mg/天或 1900-2000mg/天施用。12. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述過(guò)繼免疫治療劑是樹(shù)突細(xì)胞疫苗。13. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述免疫檢查點(diǎn)抑制劑是抗PD-1抗體。14. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包含mTOR抑制劑。15. 根據(jù)權(quán)利要求2或1所述的方法，其中所述組合物經(jīng)靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、 經(jīng)口或經(jīng)由吸入施用。16. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑和所述其它藥劑同時(shí)施 用。17. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑在施用所述其它藥劑之 前、期間或之后施用。18. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述其它藥劑以0.1-0.5mg/天、0.5-1 .Omg/天、 1 · 0-1 · 5mg/天、1 · 5-2 · Omg/天、2 · 0-2 · 5mg/天、2 · 5_5mg/天、5-lOmg/天、10_15mg/天、15-20mg/天、20_25mg/天、25_30mg/天、30_35mg/天、35_40mg/天、40_45mg/天、45_50mg/天、50- 55mg/天、55_60mg/天、60_65mg/天、65_70mg/天、70_75mg/天、75_80mg/天、80_85mg/天、85-90mg/天、90_95mg/天或 95-100mg/天施用。19. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述其它藥劑是免疫檢查點(diǎn)抑制劑。20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述免疫檢查點(diǎn)抑制劑選自由以下組成的組:抗 ro-1抗體、抗ro-L 1抗體、抗ro-L2抗體、抗CTLA-4抗體、抗KIR抗體、抗IDO 1抗體、抗ID02抗 體、抗??Μ-3抗體、抗LAG-3抗體、抗0X40R抗體和抗PS抗體或其組合。21. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述其它藥劑是過(guò)繼免疫治療劑。22. 根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述過(guò)繼免疫治療劑選自由以下組成的組:樹(shù)突 細(xì)胞疫苗、肽疫苗、基于嵌合T細(xì)胞抗原的療法、免疫細(xì)胞因子、基于熱激蛋白的疫苗、基于 腫瘤溶解物的疫苗、攜帶腫瘤抗原的病毒載體、病毒疫苗、細(xì)菌疫苗和真菌疫苗或其組合。23. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述其它藥劑是免疫佐劑。24. 根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述免疫佐劑選自由以下組成的組:鋁鹽、病毒 顆粒和油基佐劑或其組合。25. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述其它藥劑是免疫調(diào)節(jié)劑。26. 根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)劑選自由以下組成的組:mTOR抑制 劑、STAT抑制劑、TGF0受體抑制劑和酪氨酸激酶抑制劑或其組合。27. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述mTOR抑制劑選自由以下組成的組:小分子、 肽、抗體或其片段、核酸分子和大環(huán)內(nèi)酯化合物。28. 根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中所述mTOR抑制劑選自由以下組成的組：（i)替西 羅莫司(CCI-779)或其藥物等效物、類(lèi)似物、衍生物或鹽；（ii)依維莫司(RAD-001)或其藥物 等效物、類(lèi)似物、衍生物或鹽;和（iii)西羅莫司（雷帕霉素)或其藥物等效物、類(lèi)似物、衍生 物或鹽。29. -種組合物，其包含⑶4淋巴細(xì)胞耗竭劑。30. -種組合物，其包含CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑以及選自由免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼免疫 治療劑、免疫佐劑和免疫調(diào)節(jié)劑組成的組的至少一種其它藥劑。31. 根據(jù)權(quán)利要求29或30所述的組合物，其進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的載體。32. -種用于治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其進(jìn)展的試劑盒， 其包括： 包含⑶4淋巴細(xì)胞耗竭劑的組合物；以及 關(guān)于使用所述組合物來(lái)治療、預(yù)防所述受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其 進(jìn)展的說(shuō)明書(shū)。33. -種用于治療、預(yù)防受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其進(jìn)展的試劑盒， 其包括： CD4淋巴細(xì)胞耗竭劑； 選自由免疫檢查點(diǎn)抑制劑、過(guò)繼免疫治療劑、免疫佐劑和免疫調(diào)節(jié)劑組成的組的至少 一種其它藥劑；以及 關(guān)于使用所述組合物來(lái)治療、預(yù)防所述受試者中的病狀、減輕其嚴(yán)重程度和/或減緩其 進(jìn)展的說(shuō)明書(shū)。
【文檔編號(hào)】A61K39/00GK105979961SQ201580007415
【公開(kāi)日】2016年9月28日
【申請(qǐng)日】2015年2月5日
【發(fā)明人】H·基姆, 王艷萍
【申請(qǐng)人】西達(dá)-賽奈醫(yī)療中心