專利名稱：從無患子中提取小腸α-葡萄糖苷酶抑制劑的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從無患子中提取小腸α-葡萄糖苷酶抑制劑的方法，屬于中草藥制備及化工技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
餐后高血糖一直是II型糖尿病和代謝綜合癥的危險因素，控制餐后血糖無疑對糖尿病患者具有重要的意義。葡萄糖的主要吸收部位在小腸，在生理狀態(tài)下，小腸上、中、下三段的粘膜刷狀緣內(nèi)均存在α-葡萄糖苷酶(EC 3.2. 1.20)，該酶是一種哺乳動物消化酶。 食物中的多糖經(jīng)口腔唾液、胰淀粉酶消化成含少量葡萄糖分子的寡糖、雙糖和三糖，進入小腸經(jīng)α-葡萄糖苷酶水解為單個葡萄糖，被小腸吸收入血，是餐后血糖升高的主要原因。因此，以α -葡萄糖苷酶為靶點的抑制劑通過調(diào)節(jié)該酶的活性，能夠在小腸絨毛刷邊緣阻止碳水化合物的消化和吸收，從而削弱餐后血糖的峰值，防止餐后高血糖。與其它口服降糖藥及胰島素治療相比，α-葡萄糖苷酶抑制劑最顯著的特征是能有效阻止糖尿病患者的餐后血糖升高，使患者血糖平穩(wěn)且緩慢地維持在一定水平，改善血糖穩(wěn)定指數(shù)。典型的α-糖苷酶的抑制劑阿卡波糖目前已被國內(nèi)臨床醫(yī)生推薦為治療II型糖尿病的一線藥物，但脹氣等消化道副作用明顯，故從天然植物中提取高效低毒的α -葡萄糖苷酶抑制劑一直是國內(nèi)外的研究熱點。目前已有一些關(guān)于α-葡萄糖苷酶抑制劑提取的相關(guān)報道和專利，但是未見有從無患子中提取α-葡萄糖苷酶抑制劑的相關(guān)報道和專利。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供從無患子中提取小腸α-葡萄糖苷酶抑制劑的方法，其特點是原料來源廣、操作簡單、抑制效率高。本發(fā)明的目的有以下技術(shù)措施實現(xiàn)，其中所述原料份數(shù)除特殊說明外，均為重量份數(shù)。從無患子中提取小腸α -葡萄糖苷酶抑制劑的方法包括以下步驟(1)將干燥無患子果實的外殼粉碎，平均粒度為200 350μπι，按料液比 Ig 40 50ml加入濃度為50 70%甲醇，在室溫下震蕩提取18 M小時，分離上清液， 濃縮干燥得甲醇浸膏，得率為25 30% ；( 將上述甲醇浸膏分散于蒸餾水中，料液比為Ig 30 40ml，然后按體積比 1 2加入乙酸乙脂，震蕩萃取2 3次，收集水相萃余物；(3)將上述水相萃余物—濃縮到15 20ml，上聚苯乙烯型弱極性大孔吸附樹脂 DiaionHP-20層析柱，用水-甲醇梯度洗脫，濃度為0、50%、100%，洗脫流速為lml/min，收集具有活性的洗脫峰；(4)將上述具有活性水洗脫峰的組分濃縮到4 5ml，上kphadex LH-20柱，填料高50cm，柱直徑3. 2cm,用水洗脫，洗脫流速為0. 5ml/min,收集具有活性的水洗脫峰，濃縮干燥后得小腸α -葡萄糖苷酶抑制劑有效成分，得率為10 15%。
性能測試活性洗脫峰的檢測方法將洗脫部分用0. 2mm的薄層硅膠板進行展開，展開劑為氯仿甲醇水=6 4 1。用5%的硫酸噴霧后加熱顯色，具有最高活性洗脫峰的Rf 值為0. 2 0. 3。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(1)工藝簡單、操作方便；(2)抑制活性強。實驗證明，在0. 2mg/ml濃度時，本實驗的提取物對小腸α -葡萄糖苷酶蔗糖和麥芽糖水解活性的抑制率分別到達92. 5%和90. 2%，IC5(I值分別為31. 3μ g/ ml 禾口 33. 1 μ g/ml。
具體實施例方式下面通過實施例對本發(fā)明進行具體的描述，有必要在此指出的是本實施例只用于對本發(fā)明進行進一步說明，不能理解為對本發(fā)明保護范圍的限制。該領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員可以根據(jù)上述本發(fā)明的內(nèi)容，對本發(fā)明作出一些非本質(zhì)的改進和調(diào)整。實施例1 (1)取干燥無患子果實的粉末10g，平均粒度為200 μ m，按料液比Ig 40ml加入濃度為50%甲醇400ml，在室溫下震蕩提取18小時，分離上清液，濃縮干燥得甲醇浸膏 2. 6g ；(2)按料液比Ig 30ml，將上述甲醇浸膏分散于78ml蒸餾水中，再按體積比1 2 加入156ml乙酸乙脂震蕩萃取2次，將萃取液和水相萃取物分離；(3)上述水相部分濃縮到16ml，上大孔吸附樹脂層析柱，填料高50cm，柱直徑km， 用水-甲醇梯度洗脫，流速為lml/min，濃度為0、50%、100%。收集洗脫液，進行檢測，得活性最強部位為100%水洗脫峰；(4)將上述具有活性水洗脫峰的組分濃縮到5ml，上kphadex LH-20柱，填料高 50cm，柱直徑3. 2cm，用水洗脫，洗脫流速為0. 5ml/min。分部收集洗脫液，收集具有活性的水洗脫峰，濃縮干燥后得白色固體1. 2g。實施例2:(1)取干燥無患子果實的粉末10g，平均粒度為300 μ m，按料液比Ig 50ml加入濃度為60%甲醇500ml，在室溫下震蕩20小時，分離上清液，并將上清液濃縮干燥后獲得甲醇浸膏2. 9g ；(2)按料液比Ig 40ml，將上述甲醇浸膏分散于116ml蒸餾水中，再按體積比 1 2加入232ml乙酸乙脂震蕩萃取3次，將萃取液和水相萃取物分離；(3)上述水相部分濃縮到18ml，上聚苯乙烯型弱極性大孔吸附樹脂Diaion HP-20 層析柱，填料高50cm，柱直徑km，用水-甲醇梯度洗脫，洗脫流速為lml/min，濃度為0、 50%、100%。收集洗脫液，進行檢測，得活性最強部位為100%水洗脫峰；(4)將上述具有活性水洗脫峰的組分濃縮到6ml，上kphadex LH-20柱，填料高 50cm，柱直徑3. 2cm，用水洗脫，洗脫流速為0. 5ml/min。分部收集洗脫液，收集具有活性的水洗脫峰，濃縮干燥后得白色固體1. 3g。實施例3
(1)取干燥無患子果實的粉末10g，平均粒度為350 μ m，按料液比Ig 50ml加入濃度為70%甲醇500ml，在室溫下震蕩M小時，分離上清液，并將上清液濃縮干燥后獲得甲醇浸膏3. Og ；(2)按料液比Ig 30ml，將上述甲醇浸膏分散于90ml蒸餾水中，再按體積比1 2 加入180ml乙酸乙脂震蕩萃取3次，將萃取液和水相萃取物分離；(3)上述水相部分濃縮到20ml，上聚苯乙烯型弱極性大孔吸附樹脂Diaion HP-20 層析柱，填料高50cm，柱直徑km，用水-甲醇梯度洗脫，洗脫流速為lml/min，濃度為0、 50%、100%。收集洗脫液，進行檢測，得活性最強部位為100%水洗脫峰；(4)將上述具有活性水洗脫峰的組分濃縮到5ml后，上kphadex LH-20柱，填料高 50cm，柱直徑3. 2cm，用水洗脫，洗脫流速為0. 5ml/min。分部收集洗脫液，收集具有活性的水洗脫峰，濃縮干燥后得白色固體1. 5g。應(yīng)用實例1由上述實施例中獲得的無患子提取物對小腸α -葡萄糖苷酶抑制活性試驗方法及結(jié)果如下從SIGMA公司訂購大鼠小腸丙酮提取粉末，用磷酸緩沖液(PBS，0. 1M，pH7. 0)勻漿處理，離心后除去上清液；再用PBS+10% Triton的混合液勻漿處理，離心后獲得上清液。 用透析膜M小時透析后，以獲得大鼠小腸粗α-葡萄糖苷酶溶液。大鼠小腸α-葡萄糖苷酶粗酶溶液的蔗糖和麥芽糖水解活性分別是0. 38U/ml和1. 85U/ml。其中酶活力單位定義為37°C、pH6. 8條件下，在酶的作用下1分鐘分解1 μ mol蔗糖或麥芽糖，規(guī)定為一個酶活力單位⑶。測定小腸α-葡萄糖苷酶的蔗糖水解活性的酶反應(yīng)混合溶液包括大鼠小腸 α -葡萄糖苷酶粗溶液(0. 2ml)、無患子提取物(0. 1ml，溶于水)、蔗糖溶液(0. aiil，56mM蔗糖溶于0. IM ρΗ6· 3的磷酸緩沖液)。測定小腸α -葡萄糖苷酶的麥芽糖水解活性的酶反應(yīng)混合溶液包括大鼠小腸 α-葡萄糖苷酶粗溶液(0.05mL)、無患子提取物(0. lml，溶于水)、麥芽糖溶液(0. 35ml, 3. 5mM麥芽糖溶于0. IM pH6. 3的磷酸緩沖液)。將以上反應(yīng)混合溶液在37°C培養(yǎng)箱中反應(yīng)15分鐘，用0. 75ml的Tris-Hcl溶液停止酶的水解反應(yīng)。用葡萄糖氧化法(GOD法)，測定在490nm波長下的OD值，以葡萄糖的含量計算α-葡萄糖苷酶抑制活性。抑制百分率=[1-(提取物吸光值-提取物空白吸光值)/酶活吸光值]X 100%。測試結(jié)果如表1所示表1無患子提取物對小腸α-葡萄糖苷酶抑制活性
權(quán)利要求
1.從無患子中提取一種小腸α-葡萄糖苷酶抑制劑的方法，其特征在于該方法包括以下步驟、(1)將干燥無患子果實的外殼粉碎，平均粒度為200 350μ m，按料液比Ig 40 50ml加入濃度為50 70%甲醇，在室溫下震蕩提取18 M小時，分離上清液，濃縮干燥得甲醇浸膏，得率為25 30% ；(2)將上述甲醇浸膏分散于蒸餾水中，料液比為1g 30 40ml，然后按體積比1 2 加入乙酸乙脂，震蕩萃取2 3次，收集水相萃余物；(3)將上述水相萃余物、濃縮到15 20ml，上聚苯乙烯型弱極性大孔吸附樹脂 DiaionHP-20層析柱，用水-甲醇梯度洗脫，濃度為0、50%、100%，洗脫流速為lml/min，收集具有活性的洗脫峰；(4)將上述具有活性水洗脫峰的組分濃縮到4 5ml，上kphadexLH-20柱，填料高 50cm，柱直徑3. 2cm，用水洗脫，洗脫流速為0. 5ml/min，收集具有活性的水洗脫峰，濃縮干燥后得小腸α -葡萄糖苷酶抑制劑有效成分，得率為10 15%。
全文摘要
本發(fā)明公開了從無患子中提取一種小腸α-葡萄糖苷酶抑制劑的方法，其特點是將干燥無患子果實的外殼粉碎，平均粒度為200～350μm，按料液比1g∶40～50ml加入濃度50～70％甲醇，在室溫下震蕩提取18～24小時，分離上清液，濃縮干燥得甲醇浸膏，得率為25～30％；將甲醇浸膏分散于蒸餾水中，料液比為1g∶30～40ml，按體積比1∶2加入乙酸乙脂，震蕩萃取2～3次，收集水相萃余物；將水相萃余物`濃縮到15～20ml，上聚苯乙烯型弱極性大孔吸附樹脂Diaion HP-20層析柱，用水-甲醇梯度洗脫，濃度為0、50％、100％，洗脫流速為1ml/min，收集具有活性的洗脫峰；將上述具有活性水洗脫峰的組分濃縮到4～5ml，上Sephadex LH-20柱，填料高50cm，柱直徑3.2cm，用水洗脫，洗脫流速為0.5ml/min，收集具有活性的水洗脫峰，濃縮干燥后得小腸α-葡萄糖苷酶抑制劑有效成分，得率為0～15％。
文檔編號A61P3/10GK102166274SQ201110045450
公開日2011年8月31日 申請日期2011年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月25日
發(fā)明者岑小波, 徐培渝, 景贊, 祝瑞雪, 高鴻, 黃毅娜 申請人:四川大學(xué)