專利名稱：豬膽汁結(jié)合型總膽酸的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及豬膽汁結(jié)合型總膽酸在藥劑中的應(yīng)用，具體涉及到結(jié)合型總膽酸的制備及其在治療結(jié)腸炎癥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis)又稱慢性非特異性結(jié)腸炎，是一種主要累及結(jié)腸和直腸的慢性特發(fā)性炎癥反應(yīng)，屬于炎癥性腸病的一種。諸多研究證實(shí)結(jié)腸炎以自身免疫系統(tǒng)和內(nèi)環(huán)境因素相互作用的嚴(yán)重失調(diào)為主要表現(xiàn)，是一種原因不明的大腸粘膜慢性炎癥和潰瘍性病變，病理改變具有淺表性、彌散性、連續(xù)性等特點(diǎn)。結(jié)腸炎病變主要限于大腸黏膜和黏膜下層，臨床以腹瀉、黏液膿血便、腹痛為特征，一般發(fā)病緩慢，病程漫長，病情輕重不一，多反復(fù)發(fā)作。一部分患者一次發(fā)作后即停止；一部分患者病程呈慢性持續(xù)過程， 其病因可能與遺傳易感人群在多因素作用下所引起的腸道黏膜免疫系統(tǒng)異常反應(yīng)相關(guān)。結(jié)腸炎在歐美國家較多見，據(jù)統(tǒng)計(jì)，每10萬人中發(fā)病率分別為英國，79. 9，德國，109，法國， 110，瑞士，17. 6，新西蘭，41. 3，美國，42。據(jù)世界醫(yī)學(xué)雜志最新報(bào)道，在美國約250000人患結(jié)腸炎，其年門診為25萬人次，住院人數(shù)為2萬人次，每年損失一百多萬工作日。我國雖無精確統(tǒng)計(jì)，但近年來在我國發(fā)病率也呈上升趨勢。臨床上用于治療結(jié)腸炎的藥物主要有氨基水楊酸類、激素、免疫抑制劑、抗生素、 肝素等，但目前仍以氨基水楊酸類、皮質(zhì)類固醇類為首選。氨基水楊酸類是治療輕、中度廣泛性結(jié)腸炎患者的一線藥物。這類制劑主要有柳氮磺胺吡啶、美沙拉嗪、奧沙拉嗪等，其主要作用機(jī)制是改變腸道微生物體系，改變黏膜內(nèi)前列腺素合成及電解質(zhì)交換，阻止炎性介質(zhì)的合成和釋放，阻止自然殺傷細(xì)胞、肥大細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、黏膜淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的作用，限制活性氧的產(chǎn)生等。柳氮磺胺吡啶(Sulfasalazine，SASP)是目前治療結(jié)腸炎，尤其是輕、中型結(jié)腸炎的常用藥物，由于藥價(jià)便宜、療效確切，在國內(nèi)仍為首選藥物。柳氮磺胺吡啶是由5-氨基水楊酸和磺胺吡啶結(jié)合而成，口服后在結(jié)腸細(xì)菌偶氮還原酶作用下裂解， 磺胺吡啶為載體部分，使藥物到達(dá)結(jié)腸后釋放5-氨基水楊酸發(fā)揮治療作用?？诜前愤拎ず罂墒?5%的患者臨床癥狀和乙狀結(jié)腸鏡檢好轉(zhuǎn)和改善，但柳氮磺胺吡啶的不良反應(yīng)大，至少20%的患者不能服用此藥。常見的不良反應(yīng)有頭痛、胃腸道癥狀、蕁麻疹、呼吸困難、關(guān)節(jié)痛、肝炎等。免疫抑制劑如硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、環(huán)孢素等多用于重癥難治性結(jié)腸炎，治療上取得了較大的成效，但不良反應(yīng)也比較明顯。豬膽汁是我國的傳統(tǒng)中藥，用于熱病燥渴、目赤、喉痹、黃疸、百日咳、哮喘、泄瀉、痢疾、便秘、癰瘡腫毒等癥。豬膽汁結(jié)合型總膽酸中包括?；秦i膽酸 (Taurohyocholic acid)、牛磺豬去氧膽酸(Taurohyodeoxycholic acid)、?；蛆Z去氧膽酸 (Taurochenodeoxycholic acid)、甘氨豬膽酸(Glycohyocholic acid)、甘氨豬去氧膽酸 (Glycohyodeoxycholic acid)和甘氨鵝去氧膽酸(Glycochenodeoxycholic acid)。豬膽汁結(jié)合型總膽酸在藥劑中的應(yīng)用，目前還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于克服上述治療結(jié)腸炎藥物的缺點(diǎn)，提供一種豬膽汁結(jié)合型總膽酸的制備方法。本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問題在于為豬膽汁結(jié)合型總膽酸提供一種新用途。解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是豬膽汁結(jié)合型總膽酸的制備方法是由下述步驟組成1、乙醇浸提取新鮮豬膽汁，加入其體積5倍量質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，靜置12 14小時(shí)，過濾，回收溶劑，得棕黑色浸膏。2、分離純化將步驟1中得到的浸膏加入100-160目的柱層析硅膠中，浸膏與柱層析硅膠的質(zhì)量比為1 2，拌樣，揮干溶劑，研成80目細(xì)粉，細(xì)粉與中性氧化鋁按質(zhì)量比1 10 20干法裝于層析柱中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的乙醇洗脫，收集洗脫液，用毛細(xì)管點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，用展開劑展開后用顯色劑顯色，薄層板上出現(xiàn)結(jié)合型豬去氧膽酸斑點(diǎn)時(shí)合并洗脫液， 至斑點(diǎn)消失時(shí)結(jié)束。上述的展開劑為乙酸乙酯與甲醇、水、冰醋酸的體積比為10 :2:1: 0.1的混
合溶液，顯色劑為香草醛硫酸試液或乙醇制硫酸試液。3、制備豬膽汁結(jié)合型總膽酸將收集到的洗脫液減壓回收溶劑，在烘箱內(nèi)80 100°C烘干，得豬膽汁結(jié)合型總膽酸，含量以?；秦i去氧膽酸計(jì)在50%以上。在本發(fā)明的分離純化步驟2中，將步驟1中得到的浸膏加入100-160目的柱層析硅膠中，浸膏與柱層析硅膠的質(zhì)量比為1 2，拌樣，揮干溶劑，研成80目細(xì)粉，細(xì)粉與中性氧化鋁按最佳質(zhì)量比1 15干法裝于層析柱中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的乙醇洗脫，收集洗脫液，用毛細(xì)管點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，用展開劑展開后用顯色劑顯色，薄層板上出現(xiàn)結(jié)合型豬去氧膽酸斑點(diǎn)時(shí)合并洗脫液，至斑點(diǎn)消失時(shí)結(jié)束。上述方法制備的豬膽汁結(jié)合型膽酸在制備治療結(jié)腸炎藥物中的用途。有效成分用豬膽汁結(jié)合型總膽酸制備治療結(jié)腸炎的藥物用常規(guī)藥用制劑的形式來使用。所述的常規(guī)藥用制劑含作為活性成分的豬膽汁結(jié)合型總膽酸，該活性成分在制劑中與藥學(xué)上可接受的載體如適宜于胃腸內(nèi)給藥的有機(jī)或無機(jī)的固體或液體賦形劑混合。該藥用制劑可以是固體形式如片劑、顆粒劑、膠囊劑；也可以是液體形式如懸浮劑、糖漿劑、灌腸劑等。上述制劑中可含有輔助物質(zhì)、穩(wěn)定劑、潤濕劑和其它常用的添加劑，如乳糖、檸檬酸、酒石酸、硬脂酸、硬脂酸鎂、石膏粉、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明膠、瓊脂、果膠、花生油、 橄欖油、可可脂、乙二醇、抗壞血酸、甘露醇等。上述的制劑可按照各種制劑常規(guī)的制備工藝制成。采用本發(fā)明得到的豬膽汁結(jié)合型總膽酸經(jīng)過治療結(jié)腸炎的藥理學(xué)試驗(yàn)，表明豬膽汁結(jié)合型總膽酸對(duì)模型小鼠髓過氧化物酶活性和腫瘤壞死因子α含量升高有抑制作用， 顯示豬膽汁結(jié)合型膽酸能抑制促炎細(xì)胞因子的分泌，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，有效阻斷免疫反應(yīng)性對(duì)機(jī)體造成的損傷，達(dá)到治療目的。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明，但本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。實(shí)施例1以新鮮豬膽法IOOmL為例，豬膽汁結(jié)合型膽酸的制備方法如下1、乙醇浸提取新鮮豬膽汁，加入500mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，靜置12 14小時(shí)，過濾，回收溶劑，得棕黑色浸膏；2、分離純化取上述浸膏2g，加入100-160目的柱層析硅膠4g拌樣，揮干溶劑，研成80目細(xì)粉； 將所得細(xì)粉與中性氧化鋁按照質(zhì)量比1 15的比例干法裝于層析柱中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95% 的乙醇洗脫，收集洗脫液，用毛細(xì)管點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，用乙酸乙酯與甲醇、水、冰醋酸的體積比為10 :2:1: 0.1混合的展開劑展開，用香草醛硫酸試液顯色劑顯色，從薄層板上出現(xiàn)結(jié)合型豬去氧膽酸斑點(diǎn)時(shí)合并洗脫液，至斑點(diǎn)消失時(shí)結(jié)束。3、制備豬膽汁結(jié)合型總膽酸將收集到的洗脫液減壓回收溶劑，在烘箱內(nèi)80 100°C烘干，得豬膽汁結(jié)合型總膽酸，含量以?；秦i去氧膽酸(C26H45O6NQ計(jì)在50%以上。實(shí)施例2以新鮮豬膽汁IOOmL為例，豬膽汁結(jié)合型膽酸的制備方法如下在分離純化步驟2中，取上述浸膏2g，加入100-160目的柱層析硅膠4g拌樣，揮干溶劑，研成80目細(xì)粉；將所得細(xì)粉與中性氧化鋁按照質(zhì)量比1 10的比例干法裝于層析柱中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95 %的乙醇洗脫，收集洗脫液，用毛細(xì)管點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，用乙酸乙酯與甲醇、水、冰醋酸的體積比為10 :2:1: 0.1混合的展開劑展開，用香草醛硫酸試液顯色劑顯色，從薄層板上出現(xiàn)結(jié)合型豬去氧膽酸斑點(diǎn)時(shí)開始合并洗脫液，至斑點(diǎn)消失時(shí)結(jié)束。其他步驟與實(shí)施例1相同。制備成豬膽汁結(jié)合型總膽酸，含量以?；秦i去氧膽酸 (C26H45O6NS)計(jì)在 50% 以上。實(shí)施例3以新鮮豬膽汁IOOmL為例，豬膽汁結(jié)合型膽酸的制備方法如下在分離純化步驟2中，取上述浸膏2g，加入100-160目的柱層析硅膠4g拌樣，揮干溶劑，研成80目細(xì)粉；將所得細(xì)粉與中性氧化鋁按照質(zhì)量比1 20的比例干法裝于層析柱中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95 %的乙醇洗脫，收集洗脫液，用毛細(xì)管點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，用乙酸乙酯與甲醇、水、冰醋酸的體積比為10 :2:1: 0.1混合的展開劑展開，用香草醛硫酸試液顯色劑顯色，從薄層板上出現(xiàn)結(jié)合型豬去氧膽酸斑點(diǎn)時(shí)開始合并洗脫液，至斑點(diǎn)消失時(shí)結(jié)束。其他步驟與實(shí)施例1相同。制備成豬膽汁結(jié)合型總膽酸，含量以牛磺豬去氧膽酸 (C26H45O6NS)計(jì)在 50% 以上。實(shí)施例4以新鮮豬膽汁IOOmL為例，豬膽汁結(jié)合型膽酸的制備方法如下
在以上實(shí)施例1 3的分離純化步驟2中，取上述浸膏2g，加入100-160目的柱層析硅膠4g拌樣，揮干溶劑，研成80目細(xì)粉；將所得細(xì)粉與中性氧化鋁按照質(zhì)量比1 15的比例干法裝于層析柱中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的乙醇洗脫，收集洗脫液，用毛細(xì)管點(diǎn)樣于硅膠 G薄層板上，用乙酸乙酯與甲醇、水、冰醋酸的體積比為10 :2:1: 0.1混合的展開劑展開，用乙醇制硫酸試液顯色劑顯色，從薄層板上出現(xiàn)結(jié)合型豬去氧膽酸斑點(diǎn)時(shí)開始合并洗脫液，至斑點(diǎn)消失時(shí)結(jié)束。其他步驟與實(shí)施例1相同。制備成豬膽汁結(jié)合型總膽酸，含量以?；秦i去氧膽酸 (C26H45O6NS)計(jì)在 50% 以上。實(shí)施例5藥用制劑豬膽汁結(jié)合型總膽酸制備成片劑，以生產(chǎn)片劑1000片為例所用原料和輔料及其質(zhì)量配比如下
豬膽汁結(jié)合型總膽酸IOOg
羥丙基纖維素3g
硬脂酸鎂Ig
淀粉加至300g其制備方法按制劑學(xué)片劑的常規(guī)方法進(jìn)行，每片重0.3g，每片含豬膽汁結(jié)合型總膽酸lOOmg。實(shí)施例6藥用制劑豬膽汁結(jié)合型總膽酸制備成膠囊劑，以生產(chǎn)膠囊劑1000粒為例所用原料和輔料及其質(zhì)量配比如下
豬膽汁結(jié)合型總膽酸IOOg
微晶纖維素20g
硬脂酸鎂Ig
淀粉加至300g其制備方法按制劑學(xué)膠囊劑的常規(guī)方法進(jìn)行，每粒重0.3g，每粒含豬膽汁結(jié)合型總膽酸lOOmg。實(shí)施例7藥用制劑豬膽汁結(jié)合型總膽酸制備成灌腸劑，以生產(chǎn)灌腸劑產(chǎn)品IOOOmL為例所用原料和輔料及其質(zhì)量配比如下豬膽汁結(jié)合型總膽酸 3g蒸餾水加至IOOOmL其制備方法按制劑學(xué)灌腸劑的常規(guī)方法進(jìn)行，每瓶lOOmL，每Iml藥液含豬膽汁結(jié)合型總膽酸3mg。實(shí)施例8藥用制劑豬膽汁結(jié)合型總膽酸制備成顆粒劑，以生產(chǎn)顆粒劑產(chǎn)品IOOOg為例所用原料和輔料及其質(zhì)量配比如下豬膽汁結(jié)合型總膽酸IOg蔗糖400g糊精加至IOOOg制備方法按制劑學(xué)顆粒劑的常規(guī)方法進(jìn)行，每袋重10g，Ig含豬膽汁結(jié)合型總膽酸 10mg。實(shí)施例9藥用制劑豬膽汁結(jié)合型總膽酸制備成糖漿劑，以生產(chǎn)糖漿劑IOOOmL為例所用原料和輔料及其質(zhì)量配比如下豬膽汁結(jié)合型總膽酸IOg蔗糖600g蒸餾水加至IOOOmL其制備方法按制劑學(xué)糖漿劑的常規(guī)方法進(jìn)行，每瓶10mL，ImL含豬膽汁結(jié)合型總膽酸10mg。為了確定本發(fā)明的最佳原料配比以及最佳的工藝條件，發(fā)明人進(jìn)行了試驗(yàn)，試驗(yàn)情況如下1、豬膽汁浸膏與中性氧化鋁配比確定取新鮮豬膽汁IOOmL,加入500mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，靜置過夜，過濾，回收溶劑，得棕黑色浸膏，取浸膏2g，加入100-160目的柱層析硅膠4g拌樣，揮干溶劑，研成80目細(xì)粉；細(xì)粉與中性氧化鋁按照質(zhì)量比1 10、1 15、1 20,1 25分別用干法裝于層析柱中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95 %的乙醇洗脫，收集洗脫液，用毛細(xì)管點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，用乙酸乙酯與甲醇、水、冰醋酸的體積比為10 :2:1: 0.1混合的展開劑展開，用乙醇制硫酸試液顯色劑顯色，從薄層板上出現(xiàn)結(jié)合型豬去氧膽酸斑點(diǎn)時(shí)合并洗脫液，至斑點(diǎn)消失時(shí)結(jié)束；用紫外光譜法測定各洗脫液的吸光度；將洗脫液減壓回收溶劑，在烘箱內(nèi)80 100°C烘干，稱重，計(jì)算豬膽汁結(jié)合型總膽酸的收率。試驗(yàn)和計(jì)算結(jié)果見表1。表1豬膽汁浸膏與中性氧化鋁配比對(duì)豬膽汁結(jié)合型總膽酸脫色度及收率的影響
權(quán)利要求
1.一種豬膽汁結(jié)合型總膽酸的制備方法，其特征在于它是由下述步驟組成(1)乙醇浸提取新鮮豬膽汁，加入其體積5倍量質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，靜置12 14小時(shí)，過濾，回收溶劑，得棕黑色浸膏；(2)分離純化將步驟1中得到的浸膏加入100-160目的柱層析硅膠中，浸膏與柱層析硅膠的質(zhì)量比為1 2，拌樣，揮干溶劑，研成80目細(xì)粉，細(xì)粉與中性氧化鋁按質(zhì)量比1 10 20干法裝于層析柱中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的乙醇洗脫，收集洗脫液，用毛細(xì)管點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，用展開劑展開后用顯色劑顯色，薄層板上出現(xiàn)結(jié)合型豬去氧膽酸斑點(diǎn)時(shí)合并洗脫液，至斑點(diǎn)消失時(shí)結(jié)束；上述的展開劑為乙酸乙酯與甲醇、水、冰醋酸的體積比為10 :2:1: 0.1的混合溶液，顯色劑為香草醛硫酸試液或乙醇制硫酸試液；(3)制備豬膽汁結(jié)合型總膽酸將收集到的洗脫液減壓回收溶劑，在烘箱內(nèi)80 100°C烘干，得豬膽汁結(jié)合型總膽酸， 含量以?；秦i去氧膽酸計(jì)在50 %以上。
2.按照權(quán)利要求1所述的豬膽汁結(jié)合型總膽酸的制備方法，其特征在于在分離純化步驟(2)中，將步驟(1)中得到的浸膏加入100-160目的柱層析硅膠中，浸膏與柱層析硅膠的質(zhì)量比為1 2，拌樣，揮干溶劑，研成80目細(xì)粉，細(xì)粉與中性氧化鋁按質(zhì)量比1 15干法裝于層析柱中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的乙醇洗脫，收集洗脫液，用毛細(xì)管點(diǎn)樣于硅膠G薄層板上，用展開劑展開后用顯色劑顯色，薄層板上出現(xiàn)結(jié)合型豬去氧膽酸斑點(diǎn)時(shí)合并洗脫液， 至斑點(diǎn)消失時(shí)結(jié)束。
3.權(quán)利要求1制備的豬膽汁結(jié)合型膽酸在制備治療結(jié)腸炎藥物中的用途。
全文摘要
一種豬膽汁結(jié)合型總膽酸的制備方法，由乙醇浸提、分離純化與干燥組成。采用本發(fā)明方法制備的豬膽汁結(jié)合型總膽酸經(jīng)過治療結(jié)腸炎藥效試驗(yàn)，表明豬膽汁結(jié)合型總膽酸對(duì)模型小鼠髓過氧化物酶活性和腫瘤壞死因子α含量升高有抑制作用，顯示豬膽汁結(jié)合型總膽酸能抑制促炎細(xì)胞因子的分泌，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，有效阻斷免疫反應(yīng)性對(duì)機(jī)體造成的損傷，達(dá)到治療結(jié)腸炎癥的目的。采用本發(fā)明制備的豬膽汁結(jié)合型總膽酸為原料制成各種常用制劑類型，如片劑、膠囊劑、散劑、丸劑、顆粒劑、灌腸劑等。
文檔編號(hào)A61K35/413GK102178695SQ201110046490
公開日2011年9月14日 申請(qǐng)日期2011年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月25日
發(fā)明者何姣, 孫文基, 謝人明 申請(qǐng)人:孫文基