專利名稱：一種治療人尖銳濕疣的多肽藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，特別是一種關(guān)于治療人尖銳濕疣的多肽藥物。
背景技術(shù)：
目前治療尖銳濕疣的只能采用綜合治療的方法，歸納起來(lái)有以下幾種①手術(shù)療法尖銳濕疣一般不主張手術(shù)切除，因?yàn)槭中g(shù)治療后，尖銳濕疣很容易復(fù) 發(fā)，使治療失敗。②冷凍療法利用-196°C低溫的液體氮，采用壓凍法治療尖銳濕疣，促進(jìn)疣組織 壞死脫落，本法適用于數(shù)量少、面積小的濕疣，可行1 2次治療，間隔時(shí)間為一周。③激光治療通常用C02激光，采用燒灼法治療尖銳濕疣。④電灼治療采用高頻電針或電刀切除濕疣。⑤射線治療應(yīng)用射線治療尖銳濕疣取得了較為滿意的效果，該治療效 高，無(wú)痛苦、無(wú)損傷、副作用少，復(fù)發(fā)率低。目前治療尖銳濕疣的藥物有①足葉草脂適用濕潤(rùn)區(qū)域的濕疣，但有很多缺點(diǎn)，如對(duì)組織破壞性大，使用不當(dāng) 可引起局部潰瘍。毒性大，主要表現(xiàn)為惡心、腸梗阻、白細(xì)胞及血小板減少，心動(dòng)過(guò)速、尿閉 或少尿，故使用時(shí)必須謹(jǐn)慎，發(fā)現(xiàn)上述反應(yīng)時(shí)，應(yīng)立即停藥。本藥有副作用，要注意保護(hù)周?chē)?皮膚粘膜，涂藥2 4小時(shí)后洗去。有致畸作用，孕婦禁用。②抗病毒藥可用5%酞丁胺霜?jiǎng)?，或?. 25%皰疹凈軟膏，每日2次，外涂。無(wú)環(huán) 鳥(niǎo)苷口服，每日5次，每次200mg，或用其軟膏外用。α -干擾素每日注射300萬(wàn)單位，每周 用藥五天。或干擾素300萬(wàn)單位注入疣體基部，每周2次，連用2 3周。主要副作用為流 感綜合癥，局部用藥副作用較少且輕微。③腐蝕劑或消毒劑常用有30% -50%三氯醋酸或飽和二氯醋酸，或18%過(guò)氧乙 酸。用10%水楊酸冰醋酸或40%甲醛、2%液化酚、75%乙醇蒸餾水IOOml混合溶液，點(diǎn) 涂局部，用于龜頭、肛周濕疣，每日或隔日一次，效果甚好。消毒劑可用20 %碘酊外涂，或 2. 5-5%碘酊注射于疣體基部，每日0. 1 1. 5ml，或用新潔爾滅外涂或0. 1 0. 2%外敷， 后者需配合全身療法，這些腐蝕性極強(qiáng)的化合物，以消除疣體為目的。雖然見(jiàn)效快，價(jià)格低 廉，但與物理治療方法一樣，均為治標(biāo)不治本，極易復(fù)發(fā)。④抗瘤藥5-氟脲嘧啶(5-Fu)；—般外用5%軟膏或霜?jiǎng)咳?次，3周為一療 程。2. 5%-5%氟脲嘧啶濕敷治療陰莖、肛周尖銳濕疣，每次敷20分鐘，每日一次，6次為一 療程。也可用聚乙二醇作基質(zhì)，加入占其干質(zhì)5 %的5-Fu粉劑制成栓劑，治療男女尿道內(nèi)尖 銳濕疣。也可用5-Fu基底注射，多者可分批注射。噻替派主要用于5-Fu治療失敗的尿道 內(nèi)尖銳濕疣，每日用栓劑(每個(gè)含15mg)，連用8天。也可將本品60mg加入10 15ml消 毒水中，每周向尿道內(nèi)滴注，保持半小時(shí)，副作用有尿道炎。亦可用本品IOmg加入10ml，浸 泡患處，每日3次，每次半小時(shí)，治療陰莖、龜頭冠狀溝濕疣。主要用于經(jīng)其它方法治療后， 尚有殘存疣體或復(fù)發(fā)者。也可將此溶液再稀釋兩倍浸泡局部，也預(yù)防復(fù)發(fā)。秋水仙鹼可用2-8%的生理鹽水溶液外涂，涂?jī)纱?，間隔72小時(shí)，治療陰莖濕疣。涂后可出現(xiàn)表淺糜爛。爭(zhēng) 光霉素或平陽(yáng)霉素用0. 的生理鹽水溶液作皮損內(nèi)注射，每次總量限制在1毫升(Img)， 大多一次可愈。到目前為止，國(guó)內(nèi)外治療尖銳濕疣的生物制劑一般以免疫療法為主①自體疫苗法用病人自己的疣體組織勻漿(融冷滅活病毒)，并進(jìn)行加熱處理 (560C 1小時(shí))收集上清液注射，可用于頑固性肛周濕疣。②干擾素誘導(dǎo)劑可用聚肌胞及梯洛龍。聚肌胞每日注射anl，連用10天，停藥 1 2月后，再繼續(xù)用藥。梯洛龍每日3次，每次300mg，停藥4天，或隔日口服600mg。③干擾素、白介素-2、靈桿菌素、利百多聯(lián)合應(yīng)用。以上這些治療方法和/或藥物都不能徹底清除病毒在體內(nèi)的復(fù)制，所以復(fù)發(fā)率
尚ο

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種便于運(yùn)輸保存和自動(dòng)化批量生產(chǎn)的治療人尖銳濕疣 的多肽藥物，它具有激活特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)的能力，該特異性CTL細(xì)胞具有 殺傷、溶破帶有人乳頭瘤病毒11型相關(guān)標(biāo)志的靶細(xì)胞，效果明顯，而且無(wú)毒副作用。本發(fā)明 的目的是通過(guò)這樣的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，它基本的氨基酸序列為YLQDNDSWV，利用賴氨酸具 有兩個(gè)氨基、一個(gè)羧基的特點(diǎn)，以賴氨酸為接頭，所形成的特殊連接方式。本發(fā)明的基本的氨基酸序列來(lái)源于GENBANK報(bào)道的氨基酸序列，采用蛋白質(zhì)表位 分子設(shè)計(jì)的原理和方法，蛋白質(zhì)序列進(jìn)行二級(jí)結(jié)構(gòu)、抗原性、B細(xì)胞表位、親水性質(zhì)、疏水性 質(zhì)的分析研究，找到了具有功能的本發(fā)明所指的基本的氨基酸序列。使用現(xiàn)有的成熟技術(shù)，制備表達(dá)HPVll型E2蛋白的靶細(xì)胞，叫Caski細(xì)胞；按照本領(lǐng)域公知的方法獲得HLA_A*0201陽(yáng)性人體的外周血單核細(xì)胞(簡(jiǎn)稱 PBMC)；培養(yǎng)上述PBMC細(xì)胞M小時(shí)后，取懸液O XlO6Ail) 4瓶。加入本發(fā)明所述的氨基 酸序列多肽(20yg/ml)，加入等量完全培養(yǎng)基作為對(duì)照組，37°C，5%C02環(huán)境下孵育。7天 后重復(fù)該刺激過(guò)程，共反復(fù)刺激3次。最末一次刺激后第3天收集懸浮細(xì)胞，這些細(xì)胞具有 針對(duì)HPVll型E2蛋白的靶細(xì)胞的細(xì)胞毒性(CTL細(xì)胞)，計(jì)數(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)使用本發(fā)明涉及的 合成多肽藥物或疫苗可以使CTL細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組增加50% -80%。將轉(zhuǎn)染了 HPVll之E2基因的Caski細(xì)胞與上述CTL細(xì)胞共同孵育，發(fā)現(xiàn)該CTL細(xì) 胞可以溶破轉(zhuǎn)染了 HPVll之E2基因的Caski細(xì)胞，溶破率得到60% -90%。由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明具有便于運(yùn)輸保存和自動(dòng)化批量生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)， 它具有激活特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)的能力，該特異性CTL細(xì)胞具有殺傷、溶破帶 有人乳頭瘤病毒11型相關(guān)標(biāo)志的靶細(xì)胞，效果明顯，而且無(wú)毒副作用。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的氨基酸序列為KLPQLCTEL ；利用賴氨酸具有兩個(gè)氨基、一個(gè)羧基的特 點(diǎn)，以賴氨酸為接頭，將多個(gè)該氨基酸序列組成多拷貝的串聯(lián)結(jié)構(gòu)。
該多肽可以體外刺激HLA_A*0201陽(yáng)性人體的外周血單核細(xì)胞，可以增加這些外 周血單核細(xì)胞轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(簡(jiǎn)稱CTL)的數(shù)量提高50%-80%，還可以激活 CTL溶破帶HPVll型E2標(biāo)志的細(xì)胞，溶破率為60% -90%。實(shí)施例1 它的氨基酸序列可以為
權(quán)利要求
1.一種能治療人尖銳濕疣的多肽藥物，其特征在于它基本的氨基酸序列為氨 基-YLQDNDSWV-羧基。
2.如權(quán)利要求1所述的一種能有效治療人尖銳濕疣的多肽藥物，利用賴氨酸具有兩個(gè) 氨基、一個(gè)羧基的特點(diǎn)，以賴氨酸為接頭，所形成的特殊連接方式，其特征在于它基本的氨 基酸序列為
3.如權(quán)利要求1所述的一種能有效治療人尖銳濕疣的多肽藥物，利用賴氨酸具有兩個(gè) 氨基、一個(gè)羧基的特點(diǎn)，以賴氨酸為接頭，所形成的特殊連接方式，其特征在于它的氨基酸 序列的連接形式為
4.如權(quán)利要求1所述的一種能有效治療人尖銳濕疣的多肽藥物，利用賴氨酸具有兩個(gè) 氨基、一個(gè)羧基的特點(diǎn)，以賴氨酸為接頭，所形成的特殊連接方式，其特征在于它的氨基酸 序列的連接形式為
全文摘要
一種治療人尖銳濕疣的多肽藥物，其特征在于它基本的氨基酸序列為氨基-YLQDNDSWV-羧基，利用賴氨酸具有兩個(gè)氨基、一個(gè)羧基的特點(diǎn)，以賴氨酸為接頭，所形成的特殊連接方式。本發(fā)明具有便于運(yùn)輸保存和自動(dòng)化批量生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)，它具有激活特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)的能力，該特異性CTL細(xì)胞具有殺傷、溶破帶有人乳頭瘤病毒11型相關(guān)標(biāo)志的靶細(xì)胞，效果明顯，而且無(wú)毒副作用。
文檔編號(hào)C07K14/00GK102058875SQ20101061670
公開(kāi)日2011年5月18日 申請(qǐng)日期2010年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月30日
發(fā)明者呂鳳林, 楊力, 田菲菲 申請(qǐng)人:重慶大學(xué)