專利名稱：環(huán)烯醚萜類化合物在制備抗骨質(zhì)疏松藥物中的應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及環(huán)烯醚萜類化合物在制備抗骨質(zhì)疏松藥物中的應用。
背景技術(shù)：
骨質(zhì)疏松癥是以骨組織顯微結(jié)構(gòu)受損，骨礦成分和骨基質(zhì)等比例不斷減少，骨質(zhì)變薄，骨小梁數(shù)量減少，骨脆性增加和骨折危險度升高為特征的一種全身骨代謝障礙的疾病。骨質(zhì)疏松已成為影響我國人民身體健康和社會醫(yī)療保障的重要問題，成為造成老年人死亡的第二大病因，僅次于心腦血管疾病。按調(diào)查估算全國2006年在50歲以上人群中， 約有6944萬人(男1534萬，女MlO萬)患有骨質(zhì)疏松癥，約有21390萬人存在低骨量(男 10043 萬，女 11347 萬)。骨重建周期中，由破骨細胞引起的“骨吸收”與成骨細胞引起的“骨形成”間的動態(tài)平衡是維持骨結(jié)構(gòu)完整性及合適骨強度的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生與成骨細胞和破骨細胞的功能偶聯(lián)失衡有關(guān)，目前臨床的藥物大多數(shù)是針對抑制破骨細胞活性，如雙膦酸鹽類和降鈣素等，而針對促進成骨細胞活性，促進骨重建的藥物較少，多為stain類藥物。因此，發(fā)現(xiàn)新的促進成骨細胞活性的藥物對治療骨質(zhì)疏松具有重要的意義。進一步研究發(fā)現(xiàn)， 衰老自由基學說認為活性氧(Reactive Oxygen Species，R0S)是引起衰老的重要原因，ROS 刺激破骨細胞的活化和分化，抑制成骨細胞的分化，并直接參與骨基質(zhì)的降解，在原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病機制中發(fā)揮了重要作用。關(guān)于環(huán)烯醚萜類化合物在“《環(huán)烯醚萜類化合物的研究進展》(萬進、方建國)，，中有記載，環(huán)烯醚萜類化合物的主要生物活性包括抗腫瘤作用、對糖尿病及其并發(fā)癥的影響、增強免疫作用、保肝作用、抗炎作用、抗氧化作用、對神經(jīng)細胞的作用等?，F(xiàn)有文獻中并沒有關(guān)于環(huán)烯醚萜類化合物具有抗骨質(zhì)疏松作用的記載。女貞子為木犀科植物女貞Uigustrum lucidum Ait.)的干燥成熟果實，是中醫(yī)常用的扶正固本藥物，具有滋補肝腎、明目烏發(fā)的功效，用于眩暈耳鳴、腰膝酸軟、須發(fā)早白、 目暗不明等。研究表明女貞子可以促進成骨細胞分化和抗雌激素缺乏導致的骨質(zhì)疏松，調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣離子的平衡，具有抗骨質(zhì)疏松的作用。女貞子中的化學成分主要含有三萜類、醚萜類、苯乙醇類、苯丙素類、黃酮類等，其中水溶性活性成分環(huán)烯醚萜類化合物具有保肝利膽、 抗腫瘤、降血糖、抗氧化等廣泛的藥理作用。目前關(guān)于女貞子抗骨質(zhì)疏松活性的研究多集中于女貞子粗提物，如 CN200710073273. 9公開的女貞子的醫(yī)藥新用途及其藥物制劑中，記載了女貞子在制備預防或治療骨質(zhì)疏松癥藥物中的應用，但是并沒有深入研究女貞子中具體的活性成分，也不知道是女貞子中的哪一種活性物質(zhì)能夠起到預防或治療骨質(zhì)疏松的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種環(huán)烯醚萜類有效成分在抗骨質(zhì)疏松方面的作用，進一步提供一種具有通式為I的環(huán)烯醚萜類化合物在制備治療和/或預防骨質(zhì)疏松癥藥物中的應用。 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案如下通式為I的環(huán)烯醚萜類化合物在制備治療和/或預防骨質(zhì)疏松癥藥物中的應用
權(quán)利要求
1.通式為I的環(huán)烯醚萜類化合物在制備治療和/或預防骨質(zhì)疏松癥藥物中的應用I O
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述環(huán)烯醚萜類化合物的應用，其特征在于，所述R1為-H或
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述女貞子中環(huán)烯醚萜類化合物的應用，其特征在于，所述&為
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述環(huán)烯醚萜類化合物的應用，其特征在于，所述民為-0H。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述環(huán)烯醚萜類化合物的應用，其特征在于，所述通式為I的環(huán)烯醚萜類化合物分離自女貞子中的環(huán)烯醚萜類化合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述環(huán)烯醚萜類化合物的應用，其特征在于，所述通式為I的環(huán)烯醚萜類化合物為特女貞苷或女貞苷G13。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述環(huán)烯醚萜類化合物的應用，其特征在于，所述女貞子中用于制備治療和/或預防骨質(zhì)疏松癥藥物的化合物的測定方法包括下述步驟(1)將干燥的女貞子藥材經(jīng)粉碎后用水加熱提取，減壓濃縮除去水后得到浸膏，即女貞子水提物，將女貞子水提物懸浮于4(T55°C熱水中，然后依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別濃縮萃取液得浸膏氯仿部分(A)，乙酸乙酯部分(B)，正丁醇部分(C)，水層(D)；以 ALP活性作為評價其是否具有促成骨細胞分化能力的指標，用DMSO作為空白對照，雌二醇 E2作為陽性對照，測定女貞子水提物及萃取后A、B、C、D各部分對UMR-106細胞分化的影響，選擇促成骨細胞分化能力最強的D部分進行下一步分析；(2)女貞子水提物萃取后水層(D)上大孔樹脂柱，經(jīng)水、20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、 95%乙醇梯度洗脫，分成對應的5個部分D1-D5，以ALP活性作為評價其是否具有促成骨細胞分化能力的指標，用DMSO作為空白對照，E2作為陽性對照，測定D1-D5部分對UMR-106細胞ALP活性的影響，選擇促成骨細胞分化能力最強的D2部分進行下一步分析；(3)活性最強的20%乙醇洗脫部分(D2)用少量水溶解分散后加入甲醇至含甲醇濃度為95%，靜置過夜；濾液蒸干得浸膏D21，D21上硅膠層析柱，分別用10:1,5:1,3:1,1:1,1:4, 0:1的氯仿-甲醇各IOOOmL進行梯度洗脫，根據(jù)薄層層析情況將其分成標識為Fr. 1-6的6 段，F(xiàn)r. 1部分上硅膠層析柱，分別用10:1,5:1,3:1,1:1,0:1的氯仿-丙酮各IOOmL進行梯度洗脫，根據(jù)薄層情況合并將其分成標識為Fr. 1. 1-1. 3的3段，F(xiàn)r. 1. 1經(jīng)純化得化合物2， Fr. 1. 2經(jīng)純化得化合物l，F(xiàn)r. 1. 3經(jīng)純化得化合物3 ；Fr. 2經(jīng)純化得化合物5和6，F(xiàn)r. 3上硅膠層析柱分別用20:1，10:1，5:1，3:1，1:1，0:1氯仿-甲醇各500mL進行梯度洗脫，根據(jù)薄層層析情況將其分成標識為Fr. 3. 1-3. 3的3段，F(xiàn)r. 3. 3經(jīng)純化得化合物4 ；Fr. 4用C18 柱層析，10 90的甲醇-水洗脫得化合物7 ；Fr. 5上硅膠層析柱，分別用5 1，3 1，1 1，0 1氯仿-甲醇各IOOOmL進行梯度洗脫，根據(jù)薄層層析情況將其分成標識為Fr. 5. 1-5. 3的3段， Fr. 5. 2經(jīng)純化得化合物8 ；(4)鑒定步驟(3)中1-8化合物的波譜數(shù)據(jù)，通過波譜數(shù)據(jù)確定1-8化合物的化學結(jié)構(gòu)，并通過ALP活性檢測對比試驗確定女貞子中用于制備治療和/或預防骨質(zhì)疏松癥藥物的化合物。
全文摘要
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種環(huán)烯醚萜類化合物在制備抗骨質(zhì)疏松藥物中的應用。本發(fā)明的通式為Ⅰ的環(huán)烯醚萜類化合物在制備治療和/或預防骨質(zhì)疏松癥藥物中的應用。實驗發(fā)現(xiàn)，以UMR106細胞中ALP活性為指導對具有通式為Ⅰ的環(huán)烯醚萜類化合物的提取物進行跟蹤分離，并對提取物和分離所得各成分在成骨細胞增殖、抗氧化活性方面進行了研究，表明具有通式為Ⅰ的環(huán)烯醚萜類化合物具有顯著促進堿性磷酸酶活性的作用，促成骨細胞分化的作用，因此該類化合物具有抗骨質(zhì)疏松作用，可以用于制備治療或預防骨質(zhì)疏松癥的藥物。其中特女貞苷和化合物G13成分具有顯著促進堿性磷酸酶活性的作用，促成骨細胞分化的作用，特女貞苷還具有明顯促進UMR-106細胞增殖作用，其用于抗骨質(zhì)疏松作用時其效果更佳。
文檔編號A61P19/10GK102389440SQ20111040856
公開日2012年3月28日 申請日期2011年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月9日
發(fā)明者張國林, 楊莉娟, 王飛, 陳前鋒, 魏園 申請人:四川浩源生物科技有限公司