專利名稱：Cd37結(jié)合分子及其免疫綴合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明總體上涉及結(jié)合CD37的抗體、及其抗原結(jié)合片段、多肽以及免疫綴合物，而且涉及使用這些CD37結(jié)合分子來治療諸如B細(xì)胞惡性腫瘤的方法。
背景技術(shù)：
白細(xì)胞抗原CD37 (“CD37”)，也稱為GP52-40、四跨膜蛋白-26或TSPAN26，是四跨膜蛋白超家族的跨膜蛋白(Maecker等人，1997FASEB J. 11:428-442)。它是具有四個跨膜結(jié)構(gòu)域的重糖基化蛋白，在前B細(xì)胞至外周成熟B細(xì)胞階段過程中在B細(xì)胞上表達(dá)，但在至漿細(xì)胞的終末分化中缺乏。(Link等人，1987，J Pathol. 152:12-21)。CD37抗原僅微弱表達(dá)于T 細(xì)胞、髓樣細(xì)胞以及粒細(xì)胞(Schwartz-Albiez 等人，1988，J. Immunol. , 140 (3) 905-914)?！と欢?7還表達(dá)于惡性B細(xì)胞，例如那些建立的非何杰金氏淋巴瘤(NHL)和慢性淋巴系白血病(CLL) (Moore 等人，1986，JImmunol. 137(9) :3013-8)。該表達(dá)情況表明，CD37 表現(xiàn)為B細(xì)胞惡性腫瘤的有前景的治療革巴。盡管CD37的確切生理學(xué)作用不清楚，但研究表明其在T細(xì)胞增殖中的潛在作用(van Spriel 等人，2004，J Immunol.，172 (5) : 2953-61)。CD37 作為細(xì)胞表面糖蛋白的四跨膜家族的部分，還可與其他表面蛋白絡(luò)合(Angelisovdil994，Immunogenetics. , 39(4) :249-56)。⑶37表達(dá)缺陷的小鼠被開發(fā)，顯示在淋巴樣器官的發(fā)育和細(xì)胞組成上沒有變化。僅觀察到IgGl水平下降和對于T細(xì)胞依賴性抗原的應(yīng)答改變(Knobeloch等人，2000，MolCellBiol.，20(15) :5363-9)?？贵w顯現(xiàn)為治療所述癌癥的有前景的方法。特別地，能夠誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡的抗體是合乎需要的。另外，具有補體依賴性細(xì)胞毒性活性(CDC)和抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)的抗體也是合乎需要的。目前，被稱為利妥昔單抗(rituximab)的抗⑶20抗體用于治療B細(xì)胞惡性腫瘤(Leget等人，1998, Curr. Opin. Oncol. , 10:548-551)。然而，僅亞組患者響應(yīng)利妥昔單抗治療，甚至服用妥昔單抗的響應(yīng)患者最終復(fù)發(fā)，且常發(fā)生對利妥昔單抗治療的抗藥性。另外，還將CD37結(jié)合劑作為B細(xì)胞惡性腫瘤的潛在治療劑進(jìn)行試驗。楚邦制藥公司(Trubion Pharmaceuticals)開發(fā)了 CD37 結(jié)合劑 SMIP-016 和 TRU-016 (Zhao 等人，2007, Blood, 110:2569-2577)。SMIP-016是一種單鏈多肽，包括來自雜交瘤的可變區(qū)和工程化人恒定區(qū)。TRU-016是抗⑶37SMIP抗原的人源化形式。見，例如，美國公開的第2007/0009519號申請。對于TRU-016進(jìn)行臨床試驗，用于治療慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)。勃林格殷格翰(Boehringer Ingelheim)也已經(jīng)揭示了國際公布的第WO 2009/019312號申請中的CD37結(jié)合劑。然而，尚無對于這些結(jié)合劑中的任何結(jié)合劑的CDC活性進(jìn)行描述，且沒有描述中缺乏接頭的情況下的體外促細(xì)胞凋亡活性。已經(jīng)使用放射標(biāo)記的抗⑶37抗體MB-I在兩個分開的試驗中對于放射免疫治療(RIT)進(jìn)行嘗試。將131I-MB-I的治療劑量施用于6個復(fù)發(fā)的NHL患者(Press等人，1989JClin Oncol. 7(8) : 1027-38, Press at el. 1993，N Engl J Med. 329 (17) : 1219-24)。所有 6個患者在持續(xù)4至31個月的時間獲得完全緩解(CR)。在另一個試驗中，將131I-MB-I施用于 10 個復(fù)發(fā)的 NHL 患 者(Kaminski 等人，1992J Clin Oncol. 10 (11) : 1696-711)?？偣?4個患者在持續(xù)2至6個月的時間范圍具有響應(yīng)，但僅報道個過CR。然而，由于放射標(biāo)記物不利的生物分布所提出的對于重要的非靶器官的放射暴露的考慮，并非所有患者都能夠得以治療。確實，在這些試驗中觀察到RIT相關(guān)的毒性，包括嚴(yán)重的骨髓抑制和心肺毒性。盡管這些臨床數(shù)據(jù)表明抗⑶37放射免疫綴合物有效，但這些治療劑施用麻煩，并且由于與高劑量放射相關(guān)的危險，復(fù)發(fā)的RIT后患者不能使用RIT來再治療。為了克服RIT的局限性，已經(jīng)開發(fā)了抗體-細(xì)胞毒性劑綴合物(ACC)，也稱為抗體-藥物綴合物(ADC)。這些是免疫綴合物，包括通過化學(xué)接頭與抗體共價連接的細(xì)胞毒性劑，所述化學(xué)接頭可允許細(xì)胞毒性藥物特異性遞送至表達(dá)被抗體識別的蛋白的細(xì)胞。然而，不良內(nèi)化的蛋白被認(rèn)為不是這些治療劑的有利的靶。CD37在結(jié)構(gòu)上與CD20相似，因為這兩種抗原都含有四個跨膜結(jié)構(gòu)域，但CD20不是四跨膜蛋白家族的部分(Tedder等人，1989，J. Immun. 142:2560-2568)。已經(jīng)對針對幾種B細(xì)胞抗原(包括CD37和CD20)的抗體研究了它們進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)吞和降解的能力(Press等人，1989，Cancer Res. 49(17) :4906-12,和Press等人，1994，Blood. 83 (5) : 1390-7)。在體外，抗CD37抗體MB-I滯留于細(xì)胞表面并在Daudi淋巴瘤細(xì)胞中被緩慢內(nèi)化。MB-I抗體還在體外在NHL患者細(xì)胞中具有低的細(xì)胞內(nèi)吞和細(xì)胞內(nèi)代謝速率。對于抗⑶20抗體1F5獲得了相似的結(jié)果，抗⑶20抗體1F5也主要滯留于淋巴瘤細(xì)胞表面且內(nèi)化不良。先前還對于CD20抗體的ADC進(jìn)行了研究，但沒有顯示顯著強效，特別是當(dāng)使用非二硫化物或酸穩(wěn)定接頭時(見,例如Polson等人,2009，CancerRes. ,69(6) :2358-2364)。鑒于這些觀察結(jié)果，認(rèn)為CD37并非抗體-藥物綴合物的有利的靶。因此，存在對于作為治療B細(xì)胞惡性腫瘤的工具的⑶37結(jié)合劑的需要，所述⑶37結(jié)合劑包括抗體、其抗原結(jié)合片段以及抗體-藥物綴合物(免疫綴合物)。本發(fā)明提供了該需要。發(fā)明概述本發(fā)明描述了結(jié)合人CD37的新型抗體、包含這些抗體的免疫綴合物及其使用方法。本發(fā)明還提供了新型多肽，例如結(jié)合人⑶37的抗體、這些抗體的片段，和其他與這些抗體相關(guān)的多肽。本發(fā)明還提供了包含編碼所述多肽的核酸序列的多核苷酸，如包含所述多核苷酸對載體。本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明多肽和/或多核苷酸對細(xì)胞。本發(fā)明還提供了保護(hù)所述新型CD37抗體或免疫綴合物的組合物(例如，藥物組合物)。另外，本發(fā)明還提供了制備和使用所述新型CD37抗體或免疫綴合物的方法，例如使用所述新型CD37抗體或免疫綴合物來抑制腫瘤生長和/或治療癌癥的方法。本發(fā)明提供了特異性結(jié)合CD37且能夠誘導(dǎo)補體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)的抗體或其抗原結(jié)合片段。在一些實施方案中，所述抗體還能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和/或抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)。所述抗體或其抗原結(jié)合片段可以是作為選自下列的抗體特異性結(jié)合相同CD37表位的(a)包含SEQ ID N0:55的多肽和SEQ ID NO: 72的多肽的抗體；(b)包含SEQ ID NO: 59的多肽和SEQ ID NO: 75的多肽的抗體；(c)包含SEQ ID NO:61的多肽和SEQ ID NO: 77的多肽的抗體；⑷包含SEQ IDNO: 64的多肽和SEQ ID NO: 80的多肽的抗體；(e)包含SEQ IDN0:66的多肽和SEQ ID NO:82的多肽的抗體；(f)包含SEQ ID N0:68的多肽和SEQ IDNO:84的多肽的抗體；以及(g)包含SEQ ID NO: 70的多肽和SEQ ID NO: 86的多肽的抗體。在一些實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合CD37且特異性結(jié)合SEQ ID N0:180的多肽。在一些實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段不結(jié)合SEQ IDNO: 184的多肽。在一些實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合CD37，且所述抗體或其抗原結(jié)合片段競爭性抑制選自下列的抗體(a)包含SEQ IDNO: 55的多肽和SEQ IDNO: 72的多肽的抗體；(b)包含SEQ ID NO: 59的多肽和SEQ ID NO: 75的多肽的抗體；(c)包含SEQ ID N0:61的多肽和SEQ IDNO:77的多肽的抗體；(d)包含SEQ ID NO:64的多肽和SEQ ID N0:80的多肽的抗體；(e)包含SEQ ID N0:66的多肽和SEQ ID N0:82的多肽的抗體；(f)包含SEQ ID NO: 68的多肽和SEQ ID NO: 84的多肽的抗體；以及(g)包含SEQ IDNO:70的多肽和SEQ ID NO:86的多肽的抗體。在一些實施方案中，通過選自下列的雜交瘤來制備所述抗體或其抗原結(jié)合片段·于2010年2月18日保藏于ATCC(美國模式培養(yǎng)物保藏中心)的ATCC保藏名稱PTA-10664，于2010年2月18日保藏于ATCC的ATCC保藏名稱PTA-10665，于2010年2月18日保藏于ATCC的ATCC保藏名稱PTA-10666，于2010年2月18日保藏于ATCC的ATCC保藏名稱PTA-10667，于2010年2月18日保藏于ATCC的ATCC保藏名稱PTA-10668，于2010年2月18日保藏于ATCC的ATCC保藏名稱PTA-10669，于2010年2月18日保藏于ATCC的ATCC保藏名稱PTA-10670。在一些實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合CD37，且所述抗體包含選自下列的多肽序列(a) SEQ ID N0:4、5以及6和SEQID N0:28、29以及30;(b)SEQ IDNO: 7、8 以及 9 和 SEQ ID NO: 31、32 以及 33 ; (c) SEQ ID NO: 10、11 以及 12 和 SEQ ID NO: 34、35 以及 36 ; (d) SEQ ID NO: 13、14 以及 15 和 SEQ ID NO: 37、38 以及 39 ; (e) SEQ IDN0:13、14以及 15 和 SEQ ID N0:37、40 以及 39 ； (f) SEQ ID NO: 16、17 以及 18 和 SEQ ID N0:41、42 以及 43 ； (g) SEQ ID NO: 19,20 以及 21 和 SEQ ID N0:44、45 以及 46 ； (h) SEQ ID NO: 19,20 以及 21 和 SEQID N0:44、47 以及 46; (i) SEQ ID N0:22、23 以及 24 和 SEQ ID N0:48、49 以及50 ； (j) SEQ ID N0:22、23 以及 24 和 SEQ ID N0:48、51 以及 50; (k) SEQ ID N0:25、26 以及27和SEQ ID NO: 52、53以及54;以及⑴包含I、2、3或4個保守氨基酸取代的(a)至(k)的變體。在又一些實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含與選自下列的多肽序列具有至少90%同一性、至少95%同一性、至少99%同一性或完全同一性的多肽序列(a) SEQ IDNO:55和 SEQ ID N0:72 ； (b)SEQ ID NO:56 和 SEQ ID N0:73 ； (c)SEQ ID NO:57 和 SEQ IDN0:74 ； (d) SEQ ID NO: 58 和 SEQ ID N0:74 ； (e) SEQ ID NO: 59 和 SEQ ID NO: 75 ; (f) SEQ IDNO:60 和 SEQ ID N0:76 ； (g)SEQ ID NO:61 和 SEQ ID N0:77 ； (h)SEQ ID NO:62 和 SEQ IDNO: 78;⑴ SEQ ID NO: 63 和 SEQ ID N0:79 ； (j)SEQ ID NO:64 和 SEQ ID N0:80 ； (k) SEQ IDNO:65和 SEQ ID NO:81 ； (I)SEQ ID NO:66 和 SEQ ID N0:82 ； (m)SEQ ID NO:67 和 SEQ IDN0:83 ； (n)SEQ ID NO :68 和 SEQ ID N0:84 ； (o) SEQ ID NO :69 和 SEQ ID N0:85 ； (p) SEQ IDNO: 70 和 SEQ ID NO: 86;以及(q) SEQ ID NO: 71 和 SEQ ID NO: 87。在一些實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段是鼠的、非人的、人源化的、嵌合的、再表面化的或人的。在一些實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段能夠在缺乏接頭的情況下在體外誘導(dǎo)表達(dá)CD37的細(xì)胞的細(xì)胞凋亡。在一些實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段能夠誘導(dǎo)補體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)。在還一些實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段能夠誘導(dǎo)抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)。在其他實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段是人的或人源化的，特異性結(jié)合⑶37，且能夠在缺乏接頭的情況下在體外誘導(dǎo)表達(dá)⑶37的細(xì)胞的細(xì)胞凋亡。在其他實施方案中，所述人的或人源化的抗體或其抗原結(jié)合片段還能夠誘導(dǎo)補體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)和/或能夠誘導(dǎo)抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)。在還一些其他實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合人的CD37和獼猴 CD37。在一些其他實施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段是全長的抗體或其抗原結(jié)合片段。所述抗體或其抗原結(jié)合片段可包含F(xiàn)ab、Fab’、F(ab’) 2、Fd、單鏈Fv或scFv、二硫鍵連接的Fv、V-NAR結(jié)構(gòu)域、IgNar、細(xì)胞內(nèi)抗體、IgG Λ CH2、小抗體、F (ab’)3、四鏈抗體、三鏈抗體、雙鏈抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、DVD-Ig、Fcab、mAb2、(scFv) 2或scFv-Fc。在其他實施方案中，所述CD37結(jié)合劑為特異性結(jié)合CD37的多肽，所述多肽包含選自下列的序列(a)SEQ ID N0:4、5 以及 6 和 SEQ ID N0:28、29 以及 30;(b)SEQ ID N0:7、8以及 9 和 SEQ ID N0:31、32 以及 33 ； (c) SEQ ID NO: 10、11 以及 12 和 SEQ ID N0:34、35 以及 36; (d) SEQID NO: 13、14 以及 15 和 SEQ ID NO: 37、38 以及 39 ; (e) SEQ ID NO: 13、14 以及 15 和 SEQ ID N0:37、40 以及 39 ； (f) SEQ ID NO: 16、17 以及 18 和 SEQ ID N0:41、42 以及43 ； (g) SEQ ID N0:19、20 以及 21 和 SEQ IDNO:44,45 以及 46; (h) SEQ ID N0:19、20 以及 21和 SEQ ID N0:44、47 以及 46; (i) SEQ ID N0:22、23 以及 24 和 SEQ ID N0:48、49 以及 50 ;(j) SEQ ID NO: 22、23 以及 24 和 SEQ ID NO: 48、51 以及 50 ; (k) SEQ IDNO: 25、26 以及 27 和SEQ ID NO: 52、53以及54;以及⑴包含I、2、3或4個保守氨基酸取代的(a)至(k)的變體。在其他實施方案中，所述CD37結(jié)合劑為特異性結(jié)合CD37的多肽，所述多肽包含與選自下列的多肽序列具有至少90%同一性、至少95%同一性、至少99%同一性或完全同一性的多肽序列(a) SEQ ID NO: 55 和 SEQ IDNO: 72 ； (b) SEQ ID NO: 56 和 SEQ ID N0:73 ； (c)SEQ ID NO: 57 和 SEQ IDNO: 74 ； (d) SEQ ID NO: 58 和 SEQ ID NO: 74 ； (e) SEQ ID NO: 59 和SEQ IDNO:75 ； (f)SEQ ID NO:60 和 SEQ ID N0:76 ； (g)SEQ ID NO:61和 SEQ IDNO:77 ； (h)SEQ ID NO:62 和 SEQ ID N0:78 ； (i)SEQ ID NO:63和 SEQ IDNO:79 ; (j)SEQ ID NO:64和SEQ ID N0:80 ； (k) SEQ ID NO :65 和 SEQ IDNO: 81 ; (I) SEQ ID NO :66 和 SEQ ID N0:82 ； (m)SEQ ID NO :67 和 SEQ IDNO:83 ； (n)SEQ ID NO :68 和 SEQ ID NO :84 ； (o)SEQ ID NO :69 和SEQ IDNO: 85 ; (p)SEQ ID NO:70 和 SEQ ID NO: 86;以及(q) SEQ ID NO: 71 和 SEQID NO: 87。還可根據(jù)本發(fā)明所述的方法制備和使用產(chǎn)生所述抗體或其抗原結(jié)合片段或所述多肽的細(xì)胞。所述方法提供了包括下述步驟的制備所述抗體或其抗原結(jié)合片段或所述多肽的方法(a)培養(yǎng)產(chǎn)生這樣的CD37結(jié)合劑的細(xì)胞以及(b)從所述培養(yǎng)的細(xì)胞分離所述抗體、其抗原結(jié)合片段或多肽。在一些實施方案中，所述CD37結(jié)合劑是具有式(A)-(L)-(C)的免疫綴合物，其中(A)是CD37結(jié)合劑；(L)是接頭；以及(C)是細(xì)胞毒性劑；其中接頭(L)連接(A)與(C)。在一些實施方案中，所述CD37結(jié)合劑是具有式(A)-(L)-(C)的免疫綴合物，其中(A)是特異性結(jié)合CD37的抗體或其抗原結(jié)合片段；(L)是非可裂解接頭；以及(C)是細(xì)胞毒性劑；其中接頭(L)連接㈧與(C)。在一些實施方案中，所述CD37結(jié)合劑是具有式(A)-(L)-(C)的免疫綴合物，其中(A)是特異性結(jié)合CD37的抗體或其抗原結(jié)合片段；(L)是接頭；以及(C)是美登醇(美登醇)；其中接頭(L)連接㈧與(C)。免疫綴合物接頭可為非可裂解接頭。所述接頭可選自可裂解接頭、非可裂解接頭、親水接頭以及基于二羧酸的接頭。所述接頭可選自N-琥珀酰亞胺基4-(2-吡啶基二硫代)戊酸酯(SPP) ; N-琥珀酰亞胺基4-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯(STOB)或N-琥珀酰亞 胺基4- (2-吡啶基二硫代)-2-磺基丁酸酯(磺基-STOB) ; N-琥珀酰亞胺基4-(馬來酰亞胺基甲基)環(huán)己烷羧酸酯(SMCC) ; N-琥珀酰亞胺基4-(馬來酰亞胺基甲基)環(huán)己烷羧酸酯(磺基SMCC) ; N-琥珀酰亞胺基-4-(碘代乙酰基)-氨基苯甲酸酯(SIAB);以及N-琥珀酰亞胺基-[(N-馬來酰亞胺基丙酰胺基)-四乙二醇]酯(NHS-PEG4-馬來酰亞胺)。所述接頭可為N-琥珀酰亞胺基-[(N-馬來酰亞胺基丙酰胺基)-四乙二醇]酯(NHS-PEG4-馬來酰亞胺)。細(xì)胞毒性劑可選自美登醇、美登醇類似物、多柔比星、改性的多柔比星、苯二氮卓類、紫杉烷、CC-1065、CC-1065類似物、倍癌霉素(duocarmycin)、倍癌霉素類似物、刺孢霉素、多拉司他汀、多拉司他汀類似物、aristatin、托馬霉素衍生物，以及來普霉素衍生物或所述制劑的前藥。細(xì)胞毒性劑可為美登醇。細(xì)胞毒性劑可為N(2’)_脫乙?；?N(2’)-(3-巰基-I-氧丙基)_美登素(DMl)或叭2’)-脫乙酰基-吧-(4-巰基-4_甲基-I-氧戊基)_美登素(DM4)。本文中還提供包含⑶37結(jié)合劑及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。所述藥物組合物可保護(hù)第二抗癌劑。本文中還提供標(biāo)記了的包含⑶37結(jié)合劑的診斷試劑。標(biāo)記物可選自放射標(biāo)記物、熒光團(tuán)、生色團(tuán)以及顯像劑以及金屬離子。本文中還提供一種包含⑶37結(jié)合劑的試劑盒。本文中描述的方法包括用于抑制表達(dá)CD37的細(xì)胞的生長的方法，所述方法包括使所述細(xì)胞與CD37結(jié)合劑或包含CD37結(jié)合劑的藥物組合物接觸。所述方法還提供了用于治療患有癌癥的患者的方法，所述方法包括對所述患者進(jìn)行治療有效量的CD37結(jié)合劑的施用或?qū)κ苤委熣哌M(jìn)行包含CD37結(jié)合劑的藥物組合物的施用。所述方法可包括對所述受治療者進(jìn)行第二抗癌劑的施用。所述第二抗癌劑可謂化學(xué)治療劑。所述癌癥可為選自下列的癌癥，B細(xì)胞淋巴瘤，非何杰金氏淋巴瘤(NHL)，前B細(xì)胞成淋巴細(xì)胞白血病/淋巴瘤和成熟B細(xì)胞新生物，B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)/小淋巴細(xì)胞白血病(SLL)，B細(xì)胞前淋巴細(xì)胞白血病，淋巴漿細(xì)胞淋巴瘤，外套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)，濾泡性淋巴瘤(FL)，低度、中度以及高度(FL)，皮膚濾泡性淋巴瘤，緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤，MALT型緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤，結(jié)節(jié)緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤，脾型緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤，毛細(xì)胞性白血病，彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤，伯基特淋巴瘤，漿細(xì)胞瘤，漿細(xì)胞性骨髓瘤，移植后淋巴增生性障礙，沃爾登斯特倫氏氏巨球蛋白血癥，以及間變大細(xì)胞淋巴瘤(ALCL)。本文中還提供包含下列序列的分離的多核苷酸，S卩，編碼與選自SEQID NO:55-87的序列具有至少90%同一性、至少95%同一性、至少99%同一性或完全同一性的多肽的序列。所述多核苷酸可包含與SEQ ID NO: 121-151具有至少90%同一性、至少95%同一性、至少99%同一性或完全同一性的序列。 本文中還提供載體和包含這些多核苷酸和載體的宿主細(xì)胞。附圖簡述圖I描述了結(jié)合非轉(zhuǎn)染300-19對照細(xì)胞(左小圖)和表達(dá)⑶37的300-19細(xì)胞(右小圖)的抗體的柱狀圖。顯示了使用IOnM muCD37-3、muCD37-12、muCD37-38染色以及缺乏初級抗體的柱狀圖。圖2描述了結(jié)合非轉(zhuǎn)染300-19對照細(xì)胞(左小圖)和表達(dá)⑶37的300-19細(xì)胞(右小圖)的抗體的柱狀圖。顯示了使用IOnM muCD37-50、muCD37-51、muCD37-56以及muCD37_57染色的柱狀圖。圖3描述了通過流式細(xì)胞術(shù)測定的(A)muCD37-3和muCD37-12以及(B)muCD37_8、mu⑶37-10以及mu⑶37-14與WSU-DLCL-2細(xì)胞的結(jié)合。對于各抗體濃度描繪了平均熒光強度(MFI)。結(jié)合曲線用于確定抗體結(jié)合的EC50，這與各抗體的表觀Kd對應(yīng)。圖4描述了來自膜聯(lián)蛋白-V測定的結(jié)果，對于使用IOnM濃度的(A)利妥昔單抗、muCD37-3、muCD37_8、muCD37_10、muCD37_12 或 muCD37_14 和(B)利妥昔單抗、huCD37_3、muCD37-38、muCD37-50、muCD37-51、muCD37-56 或 muCD37-57 孵育的 Ramos 淋巴瘤細(xì)胞測量細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)。缺乏抗體(無Ab)的情況下未處理的細(xì)胞的對照樣品用于對照。圖5描述了來自WST-8增殖測定的結(jié)果，該測定是對于使用不同濃度的mu⑶37-3、muCD37-38、muCD37_50、muCD37_51 以及 muCD37_16 抗體孵育的 SU-DHL-4 淋巴瘤細(xì)胞進(jìn)行的。圖6描述了(A)CD37-3VL和(B)CD37_3VH的一系列CD37-3表面殘基和再表面化形式的取代。圖7描述了(A)CD37-50VL和(B)CD37_50VH的一系列CD37-3表面殘基和再表面化形式的取代。圖8描述了⑶37-3和⑶37-50可變區(qū)的再表面化序列與其鼠相對物的比對A)⑶37-3輕鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域；B)⑶37-3重鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域。0^37-50輕鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域；D)⑶37-50重鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域。破折號表不與鼠序列的同一'I"生。圖9描述了(A)通過細(xì)胞流式計量術(shù)測定的muCD37-3、chCD37_3、muCD37_12以及ch⑶37-12與Ramos細(xì)胞的直接結(jié)合測定，和(B)在2nM濃度的mu⑶37-3-PE綴合物存在的情況下使用 muCD37-3、chCD37-3、huCD37-3vl. O 以及 huCD37_3vl. 01 與 BJAB 細(xì)胞的競爭性結(jié)合測定。

圖10描述了通過流式細(xì)胞術(shù)測定的抗⑶37抗體與表達(dá)獼猴⑶37抗原的結(jié)合
(A)muCDW-3、muCDW-l 2、muCDW-38、muCDW-50、muCDW-51、muCDW-陽、muCDW—W、WRl 7以及 TRU-016 的結(jié)合和(B)huCD37-3、huCD37_38、huCD37_50、huCD37_51、huCD37_56 以及hu⑶37-57的結(jié)合。結(jié)合曲線用于確定抗體結(jié)合的EC50，這與各抗體的表觀Kd對應(yīng)。
圖11描述了來自膜聯(lián)蛋白-V測定的結(jié)果，對使用不同濃度的㈧huCD37_3、huCD37-38、huCD37_50 和(B)huCD37_51、huCD37_56、huCD36_57 以及利妥昔單抗孵育的Ramos淋巴瘤細(xì)胞測量細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)。使用人的IgGl同種型對照抗體(huIgG對照)處理的細(xì)胞對照樣品用于對照。圖12描述了來自WST-8增殖測定的結(jié)果，該測定是對于使用不同濃度的muCD37-3、chCD37_3、huCD37-3vl. O 以及 huCD37_3vl. 01 抗體經(jīng) 5 天孵育(A) SU-DHL-4 和
(B)D0HH-2淋巴瘤細(xì)胞進(jìn)行的。圖13描述了來自WST-8增殖測定的結(jié)果，該測定是對于使用不同濃度的huCD37-3、TRU-016或利妥昔單抗抗體經(jīng)5天孵育(A)Granta-519和(B) SU-DHL-4淋巴瘤細(xì)胞進(jìn)行的。圖14描述了來自對于Ramos淋巴瘤細(xì)胞進(jìn)行的CDC測定的結(jié)果，所述Ramos 淋巴瘤細(xì)胞使用(A)huCD37-3、huCD37-38、chCD37-12或huIgGl同種型對照抗體和(B)huCD37-38、huCD37-50、huCD37-51、huCD37-56、huCD37-57、chCD37_12 或 huIgGl 同種型對
照抗體孵育。圖15描述來自對于Daudi淋巴瘤細(xì)胞進(jìn)行的ADCC測定的結(jié)果，所述Daudi淋巴瘤細(xì)胞在作為效應(yīng)細(xì)胞的純化的人NK細(xì)胞的存在的情況下使用(A)hu⑶37-3、hu⑶37-38、huCD37-50、TRU-016 以及(B)huCD37-51、huCD37-56、huCD37-57、TRU_016 或人 IgGl 同種型對照抗體孵育。圖16描述了全長達(dá)鼠、人以及獼猴⑶37氨基酸序列的比對。破折號表示與鼠序列的同一性。使用下劃線標(biāo)記小和大的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。圖17描述了人、重組以及野生型鼠、獼猴以及嵌合⑶37序列的大的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的比對。破折號表示與人序列的同一性。給出了工程化限制性酶切位點的位置并在受影響的殘基作下劃線。圖18描述了一組⑶37抗體與使用(A)人⑶37野生型和(B)h⑶37-M3變體轉(zhuǎn)染的細(xì)胞的結(jié)合，這通過使用I. 5 μ g/mL的各抗體的流式細(xì)胞術(shù)來測定。圖19描述了一組CD37抗體與使用(A)hCD37_Ml變體和(B)hCD37_M45變體轉(zhuǎn)染的細(xì)胞的結(jié)合，這通過使用I. 5 μ g/mL的各抗體的流式細(xì)胞術(shù)來測定。圖20 描述了通過流式細(xì)胞術(shù)測定的(A) huCD37-3 與 huCD37-3-SMCC-DMlhuCD37-3-SPP-DMl 和 huCD37-3-磺基-mal_DM4 比較以及(B)huCD37_38 與 huCD37-38-SMCC_DMl 比較的與BJAB細(xì)胞的結(jié)合。結(jié)合曲線用于確定抗體或綴合物結(jié)合的EC50，這與各抗體的表觀Kd對應(yīng)。圖21描述了㈧測定細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)的膜聯(lián)蛋白-V測定的結(jié)果和⑶來自CDC測定的結(jié)果。測定是對于使用不同濃度的hu⑶37-3、hu⑶37-3-SMCC-DM1、huIgGl對照抗體、huIgGl-SMCC-DMl對照綴合物或利妥昔單抗孵育的Ramos淋巴瘤細(xì)胞進(jìn)行的。在作為補體來源的5%人血清存在的情況下進(jìn)行CDC測定。圖22描述了來自ADCC測定的結(jié)果，該測定是在作為效應(yīng)細(xì)胞的純化的NK細(xì)胞存在的情況下對于(A)使用 huCD37-3、huCD37-3-SMCC_DMl、huCD37-3-PEG4-mal_DMl、TRU-016或huIgGl同種型對照抗體孵育的Daudi淋巴瘤細(xì)胞和⑶使用huCD37_3、huCD37-3-SMCC-DMl、huCD37-3-PEG4-mal_DMl 或 huIgGl 同種型對照抗體孵育的 Ramos 淋巴瘤細(xì)胞進(jìn)行的。圖23描述了細(xì)胞周期分析的結(jié)果，該分析使用對于使用IOnM濃度的hu⑶37_3、huCD37-3-SMCC-DMl或非結(jié)合的huIgGI-SMCC-DMI對照綴合物孵育20小時的(A)BJAB細(xì)胞和(B)RL細(xì)胞來碘吡啶染色進(jìn)行的。圖24描述了來自WST-8細(xì)胞毒性測定的結(jié)果，該測定是對于使用3X10_8M至I X 10_nM 濃度范圍的 huCD37-3-SMCC-DMl、huCD37-38-SMCC_DMl、huCD37-50-SMCC_DMl、huCD37-51-SMCC-DMl、huCD37-56-SMCC_DMl、huCD37-57-SMCC_DMl 經(jīng) 5 天孵育的 Daudi 細(xì)胞和(B)使用 3\1011至1\10-11] 濃度范圍的11110)37-3-5]\10-0厘1、11110)37-38-5]\10-0皿1、huCD37-50-SMCC-DMl、huCD37_51-SMCC-DMl 或非結(jié)合的 huIgGI-SMCC-DMI 對照綴合物經(jīng) 5天孵育的Granta-519細(xì)胞進(jìn)行的。圖25描述了使用BJAB淋巴瘤細(xì)胞皮下移植至SCID小鼠建立的異種移植物模型的結(jié)果。在細(xì)胞接種后第12天使用10mg/kg(A)huCD37-3Ab、huCD37-3-SMCC-DMl、huCD37-50Ab、 huCD37-50-SMCC_DMl 或(B)huCD37_38Ab、 huCD37_38-SMCC_DMl、 hu⑶37-56Ab、hu⑶37-56-SMCC-DM1處理動物一次。針對腫瘤細(xì)胞接種后的時間來對不同處理組的平均腫瘤體積進(jìn)行繪制。圖26描述了來自使用BJAB淋巴瘤細(xì)胞皮下移植至SCID小鼠建立的異種移植物研究的結(jié)果。在細(xì)胞接種后第9天使用10mg/kg huCD37-3Ab、huCD37-3-SMCC-DMl、huCD37-3-磺基-mal-DM4或5mg/kg huCD37-3-SPP_DMl處理動物一次。針對腫瘤細(xì)胞接種后的時間來對不同處理組的平均腫瘤體積進(jìn)行繪制。圖27描述了來自使用SU-DHL-4彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤皮下移植至SCID小鼠建立的異種移植物模型的結(jié)果。在細(xì)胞接種后第17天使用10mg/kg hu⑶37-3Ab、huCD37-3-SMCC-DMl、huCD37_3_ 磺基-mal_DM4 或 5mg/kg huCD37-3-SPP_DMl 處理動物一次。針對腫瘤細(xì)胞接種后的時間來對不同處理組的平均腫瘤體積進(jìn)行繪制。圖28描述了使用BJAB淋巴瘤細(xì)胞皮下移植至SCID小鼠建立的異種移植物模型的結(jié)果。在細(xì)胞接種后第9天使用10mg/kg of huCD37-3 Ab、huCD37-3-SMCC_DMl或hu⑶37-3-PEG4-mal-DMl處理動物一次。針對腫瘤細(xì)胞接種后的時間來對不同處理組的平均腫瘤體積進(jìn)行繪制。圖29描述了來自使用SU-DHL-4彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤皮下移植至SCID小鼠建立的異種移植物模型的結(jié)果。在細(xì)胞接種后第15天使用10mg/kg hu⑶37-3Ab、huCD37-3-SMCC-DMl或huCD37-3-PEG4-mal-DMl處理動物一次。針對腫瘤細(xì)胞接種后的時間來對不同處理組的平均腫瘤體積進(jìn)行繪制。圖30描述了使用DoHH2濾泡B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞皮下移植至SCID小鼠建立的異種移植物模型的測定結(jié)果。在接種后第12天開始處理動物，(i)單劑量的10mg/kg huCD37-3抗體，(ii)單劑量的10mg/kghuCD37-3-SMCC-DMl綴合物，(iii)六個劑量的2mg/kg利妥昔單抗，每周兩次，持續(xù)3周，(iv)單劑量的40mg/kg環(huán)磷酰胺和0. 5mg/kg長春新堿的方案，連同每天一次五個劑量的0.2mg/kg潑尼松(CVP)，或(V)載體對照。針對腫瘤細(xì)胞接種后的時間來對不同處理組的平均腫瘤體積進(jìn)行繪制。圖31描述了使用JVM3CLL細(xì)胞皮下移植至SCID小鼠建立的異種移植物模型的測定結(jié)果。在接種后第7開始處理動物，(i)單劑量的10mg/kghu⑶37-3抗體，(ii)5mg/kg劑量的 huCD37-3-SMCC-DMl 綴合物，(iii) 10mg/kg 劑量的 huCD37-3-SMCC_DMl 綴合物，(iv)六個劑量的5mg/kg的ofatumumab, —周兩次,持續(xù)三周，(v)單劑量50mg/kg的苯達(dá)莫司汀或(vi)載體對照。針對腫瘤細(xì)胞接種后的時間來對不同處理組的平均腫瘤體積進(jìn)行繪制。圖32描述了在不同NHL和CLL腫瘤細(xì)胞系中測量的⑶37和⑶20表達(dá)水平(A)和在這些細(xì)胞系中測量的hu⑶37-3-SMCC-DM1的體外細(xì)胞毒性(B)。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了一種在下列三種針對表達(dá)CD37 (例如，陽性)細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性中具有高效的⑶37結(jié)合分子誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、ADCC以及⑶C。另外，抗⑶37抗體的免疫綴合物意外地殺傷表達(dá)CD37的細(xì)胞，如使用體內(nèi)腫瘤模型所證實的。I.定義
為了促進(jìn)對于本發(fā)明的理解，下文定義了一些術(shù)語和用語。除非另有指明，本文使用的術(shù)語⑶37是指任何天然⑶37。⑶37也被稱為GP52-40、白細(xì)胞抗原⑶37以及四跨膜蛋白-26。術(shù)語“⑶37”包括“全長”、未加工的⑶37以及產(chǎn)生于細(xì)胞中的加工的任何形式的CD37.該術(shù)語還包括CD37的天然存在的變體，例如剪接變體，等位基因變體，以及亞型。本發(fā)明描述的CD37多肽可分離自多種來源，例如來自人組織型或來自其他來源，或者通過重組或合成方法制備。術(shù)語“抗體”表示通過免疫球蛋白的可變區(qū)內(nèi)的至少一個抗原識別位點識別并特異性結(jié)合靶的免疫球蛋白分子，所述靶例如蛋白、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂質(zhì)或前述的組合。本文使用的術(shù)語“抗體”包括完整的多克隆抗體、完整的單克隆抗體、抗體片段(例如，F(xiàn)ab、Fab’、F(ab’)2以及Fv片段)、單鏈Fv(ScFv)突變體、多特異性抗體(例如產(chǎn)生自至少兩個完整抗體的雙特異性抗體)、嵌合抗體、人源化抗體、人抗體、包含抗體的抗原確定部分的融合蛋白、以及包含抗原識別位點的任何其他修飾的免疫球蛋白分子，只要該抗體表現(xiàn)所需的生物活性?？贵w可為五種主要免疫球蛋白的任何種類基于其重鏈恒定區(qū)的鑒定(被稱為α、δ、ε、Y以及μ )，分別為IgA、IgD、IgE、IgG以及IgM，或者其亞類(同種型)(例如，IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgAl以及IgA2)。不同種類的免疫球蛋白具有不同的和公知的亞單位結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)象?？贵w可為裸露的或與其他分子綴合，例如毒素、放射性同位素等?！白钄唷笨贵w或“拮抗劑”抗體是一種抑制或降低其結(jié)合抗原(例如⑶37的生物活性的抗體。在一些實施方案中，阻斷抗體或拮抗劑抗體基本上或完全抑制抗原的生物活性。生物活性可被降低 10%、20%、30%、50%、70%、80%、90%、95% 或甚至 100%。術(shù)語“抗⑶37抗體I ”或“結(jié)合⑶37的抗體”是指能夠以足夠親和力結(jié)合⑶37的抗體，使得抗體可用作靶向CD37的診斷劑和/或治療劑。抗CD37抗體與無關(guān)的、非CD37蛋白結(jié)合的程度可小于抗體與CD37結(jié)合的約10%，這通過例如放射免疫測定(RIA)來檢測。在某些實施方案中，結(jié)合CD37的抗體具有彡ΙμΜ、彡ΙΟΟηΜ、彡ΙΟηΜ、彡InM或彡0. InM的解離常數(shù)(Kd)。術(shù)語“抗體片段”是指完整抗體的一部分，是指完整抗體的抗原決定可變區(qū)?？贵w片段的實例包括但不限于Fab、Fab’、F (ab’)2以及Fv片段，直鏈抗體、單鏈抗體以及形成于抗體片段的多特異性抗體。“單克隆抗體”是指涉及對于單抗原決定簇或表位的高特異性識別和結(jié)合的同質(zhì)性抗體群。這與通常包括針對不同抗原決定簇的不同抗體的多克隆抗體形成對照。術(shù)語“單克隆抗體”包括完整的和全長的單克隆抗體以及抗體片段(例如，F(xiàn)ab、Fab’、F(ab’)2、Fv)，單鏈(scFv)突變體、包含抗體部分的融合蛋白，以及包含抗原識別位點的任何其他修飾的免疫球蛋白分子。另外“單克隆抗體”是指以任何形式制備的這些抗體，包括但不限于通過雜交瘤、噬菌體選擇、重組表達(dá)以及轉(zhuǎn)基因動物。術(shù)語“人源化抗體”是指作為含有最少非人(例如，鼠)序列的特異性免疫球蛋白鏈、嵌合免疫球蛋白或其片段的非人(例如，鼠)抗體形式。通常，人源化抗體為其中來自互補決定區(qū)(CDR)的殘基被來自具有所需特異性、親和力和能力的非人物種(例如，小鼠、大鼠、家兔、倉鼠)的CDR的殘基取代的人免疫球蛋白(Jones等人，1986,Nature, 321:522-525;Riechmann 等人，1988，Nature, 332:323-327;Verhoeyen 等人，1988，Science, 239:1534-1536)。在一些情況中，人免疫球蛋白的Fv框架區(qū)(FR)被來自非人物種的具有所需特異性、親和力以及能力的抗體中的相應(yīng)殘基取代。人源化抗體可進(jìn)一步通過Fv框架區(qū)和/或取代的非人殘基中的另外的殘基取代來修飾，以對于抗體特異性、親和力和/或能力進(jìn)行精和優(yōu)化。通常，人源化抗體包括基本上所有可變結(jié)構(gòu)域，其中至少 一種、通常兩種或三種可變結(jié)構(gòu)域含有與非人免疫球蛋白相對應(yīng)的所有或基本上所有CDR區(qū)，而所有或基本上所有FR區(qū)為人免疫球蛋白共有序列的那些。人源化抗體還可包括免疫球蛋白恒定區(qū)或結(jié)構(gòu)域(Fe)的至少一部分(通常是人免疫球蛋白)。用于生成人源化抗體的方法的實例中美國專利5，225，539中描述。抗體的“可變區(qū)”是指單獨的或組合的抗體輕鏈的可變區(qū)或抗體重鏈的可變區(qū)。重鏈和輕鏈可變區(qū)各自由通過三個互補決定區(qū)(CDR，也稱為高可變區(qū))連接的四個框架區(qū)(FR)組成。各鏈中的CDR通過FR緊密結(jié)合，并且與來自其他鏈的CDR —起促進(jìn)抗體的抗原結(jié)合位點形成。具有至少兩種確定CDR的技術(shù)(I) 一種基于交叉物種序列變異性的方法卿，Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,(第 5 版，1991, National Institutes of Health, Bethesda Md.));和(2) 一種基于抗原-抗體復(fù)合物的結(jié)晶學(xué)研究的方法(ΑΙ-lazikani 等人(1997) J. Molec. Biol. 273:927-948))。另外，本領(lǐng)域中有時將這兩種方法的組合用于確定⑶R。當(dāng)提及可變結(jié)構(gòu)域中的殘基時，通常使用Kabat編號系統(tǒng)(大約是輕鏈的殘基1-107 和重鏈的殘基 1-113)(例如,Kabat 等人,Sequences of Immunological Interest.第5 版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))。Kabat中的氨基酸位置編號是指用于抗體的編輯的重鏈可變結(jié)構(gòu)域或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的編號系統(tǒng)(Kabat 等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5版,Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)X 使用該編號系統(tǒng)，實際的直鏈氨基酸序列可含有與可變結(jié)構(gòu)域的FR或CDR的縮短或插入相對應(yīng)的較少的或另外的氨基酸。例如，重鏈可變結(jié)構(gòu)域可包括在H2的殘基52之后的單個氨基酸插入(根據(jù)Kabat的殘基52a)和在重鏈FR殘基82之后插入的殘基(例如，根據(jù)Kabat的殘基82a、82b以及82c)?？赏ㄟ^對于抗體序列的同源區(qū)與“標(biāo)準(zhǔn)的"Kabat編號序列進(jìn)行比對來對給定的抗體確定殘基的Kabat編號。Chothia則提及了結(jié)構(gòu)環(huán)的位置(Chothia和Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))。當(dāng)使用 Kabat 編號規(guī)定來編號時，Chothia CDR-Hl環(huán)的末端根據(jù)環(huán)的長度在H32和H34之間不同(這是因為Kabat編號方案中H35A和H35B安置了插入；如果35A或35B均不存在，環(huán)狀32處結(jié)束；如果僅存在35A，環(huán)在33處結(jié)束；如果35A和35B均存在，環(huán)在34處結(jié)束)。AbM高可變區(qū)表現(xiàn)了在Kabat⑶R和Chothia結(jié)構(gòu)環(huán)之間的一致，被Oxford Molecular的AbM抗體造模軟件使用。
Ip KabatAbMChotliia
Li1j24_L34 L.24-L._>4
UL5U-L56L50-L56 L-50-L56
—L.3im-L97 Lm^L97 LS9-L97 HlH31-H35B H26-II35B& J-126-H32.J4(Rabat 編號)
Hl H3L-H35H26-H35 ^ H26-H32
(Chothia 編號 )
112 R5Q-H65113(1-115 H52-H56
ID ΙΙ95-Π102 1195-11 H)2 1195-11102術(shù)語“人抗體”是指人產(chǎn)生的抗體，或者使用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)制備的具有與人產(chǎn)生的抗體對應(yīng)的氨基酸序列的抗體。人抗體的該定義包括完整或全長抗體、其片段，和/或包含至少一個人重鏈和/或輕鏈多肽的抗體，例如包含鼠輕鏈和人重鏈多肽的抗體。術(shù)語“嵌合抗體”是指其中免疫球蛋白分子的氨基酸序列衍生自兩個或多個物種的抗體。通常，輕鏈和重鏈的可變區(qū)與衍射自一個哺乳動物物種(例如，小鼠、大鼠、家兔等)的具有所需特異性、親和力以及能力的抗體可變區(qū)對應(yīng)，而恒定區(qū)與衍生自另一個物種(通常是人)的抗體中的序列具有同源性，以避免引發(fā)該物種中的免疫反應(yīng)。術(shù)語“表位”或“抗原決定簇”在本發(fā)明中可互換使用，是指能夠被特定抗體識別和特異性結(jié)合的抗原的部分。當(dāng)抗原是多肽時，可由連續(xù)氨基酸和通過蛋白質(zhì)的三級折疊而并置的非連續(xù)氨基酸形成表位。由連續(xù)氨基酸形成的表位通常在蛋白質(zhì)變性時保留，而由三級折疊形成的表位通常在蛋白質(zhì)變性時喪失。在獨特的空間構(gòu)象中，表位通常包括至少3給且通常更多，至少5給或8-10給氨基酸。“結(jié)合親和力”通常是指一個分子(例如，抗體)的單結(jié)合位點及其結(jié)合配偶體(例如，抗原)之間的非共價相互作用的總數(shù)的強度。除非另有指明，本文使用的“結(jié)合親和力”是指反映了結(jié)合對(例如抗體和抗原)的成員之間的1:1相互作用的固有結(jié)合親和力。分子X與其配偶體Y的親和力通常通過解離常數(shù)(Kd)來表示。可通過本領(lǐng)域公知方法來測量親和力，包括本發(fā)明描述的那些方法。低親和力抗體通常緩慢結(jié)合抗原且傾向于容易解離，而高親和力抗體通常較快結(jié)合抗原且傾向于仍較長時間結(jié)合。本領(lǐng)域已知多種測量結(jié)合親和力的方法，其中任何方法可用于本發(fā)明的目的。下文描述了具體的說明性實施方案。本發(fā)明提及結(jié)合親和力時使用的“或更好”是指分子及其結(jié)合配偶體之間的較強的結(jié)合。本文使用的“或更好”是指較強的結(jié)合，通過較小的Kd數(shù)字?jǐn)?shù)值來表示。例如，對于抗原具有“O. 6nM或更好”的親和力的抗體，該抗體對于抗原的親和力為〈O. 6nM，即，O. 59ηΜ、0· 58ηΜ、0· 57ηΜ等，或小于O. 6ηΜ的任何數(shù)值。對于“特異性結(jié)合”，通常是指抗體通過其抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域與表位結(jié)合且該結(jié)合賦予抗原結(jié)構(gòu)域和表位之間一些互補性。根據(jù)該定義，當(dāng)抗體與表位結(jié)合時，抗體被說成“特異性結(jié)合”該表位，通過其抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合表位比其結(jié)合隨機(jī)、無關(guān)的表位更容易。本文使用的術(shù)語“特異性”對某些抗體結(jié)合某些表位的相對親和力進(jìn)行定性。例如，抗體“A”可被認(rèn)為比抗體“B”對于給定的表位具有較高的親和力?；蛘呖贵w“A”被說成是以比其對相關(guān)表位“D”更高的親和力結(jié)合表位“C”。
對于“優(yōu)先結(jié)合”，是指抗體比其結(jié)合相關(guān)的、相似的、同源性或類似表位更容易地特異性結(jié)合表位。因此，“優(yōu)先結(jié)合”給定表位的抗體比相關(guān)的表位更可能結(jié)合該表位，即使這樣的抗體可與相關(guān)表位交叉反應(yīng)。如果抗體與給定表位的結(jié)合達(dá)到了在某種程度上其阻斷參考抗體與該表位的結(jié)合的程度，則該抗體被說成“競爭性抑制”參考抗體與該表位的結(jié)合。競爭性抑制可通過本領(lǐng)域已知的任何方法來確定，例如，競爭性ELISA測定。抗體可被說成競爭性抑制參考抗體與給定表位的結(jié)合達(dá)至少90%、至少80%、至少70%、至少60%或至少50%。本文使用的用語“基本上相似”或“基本上相同”是指兩個數(shù)值之間(通常一個數(shù)值與本發(fā)明的抗體相關(guān)，另一個數(shù)值與參考/對照抗體相關(guān))足夠高度的相似性，使得本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為在所述數(shù)值(例如，Kd值)測量的生物特性情況下兩個數(shù)值之間的差異很小或者無生物學(xué)和/或統(tǒng)計學(xué)意義。所述兩個數(shù)值之間的差異作為參考/對照抗體的數(shù)值的函數(shù)可小于約50%、小于約40%、小于約30%、小于約20%或小于約10%。被“分離的”多肽、抗體、多核苷酸、載體、細(xì)胞或組合物為作為天然情況未發(fā)現(xiàn)的形式的多肽、抗體、多核苷酸、載體、細(xì)胞或組合物。分離的多肽、抗體、多核苷酸、載體、細(xì)胞或組合物包括已經(jīng)被純化至不再是天然情況下發(fā)現(xiàn)的形式的程度的那些。在一些實施方案中，分離的多肽、抗體、多核苷酸、載體、細(xì)胞或組合物是基本上純的。本文使用的“基本上純的”是指至少50%純(S卩，無污染物)、至少90%純、至少95%純、至少98%純或至少99%純。本文使用的術(shù)語“免疫綴合物”或“綴合物”是指與細(xì)胞結(jié)合劑(即，抗CD37抗體或其片段)連接并由通式C-L-A (其中，C=細(xì)胞毒素，L=接頭，A=細(xì)胞結(jié)合劑或抗⑶37抗體或抗體片段)定義的化合物或其衍生物。免疫綴合物還可由反序的通式定義A-L-C。接頭是能夠?qū)⒒衔?、通常藥?例如美登素)與細(xì)胞結(jié)合劑(例如抗CD37抗體或其片段)以穩(wěn)定、共價方式連接的任何化學(xué)部分(moiety)。在化合物或抗體仍具有活性的條件下，接頭可易感于或基本上抵抗酸誘導(dǎo)的裂解、光誘導(dǎo)的裂解、肽酶誘導(dǎo)的裂解、酯酶誘導(dǎo)的裂解以及二硫鍵裂解。合適的接頭為本領(lǐng)域公知，包括，例如二硫基、硫醚基、酸敏感性基團(tuán)、光敏感性基、肽酶敏感性基團(tuán)以及酯酶敏感性基團(tuán)。接頭還可包括本發(fā)明描述和本領(lǐng)域已知的帶電荷的接頭及其親水形式。術(shù)語“癌”和“癌的”是指或描述其中細(xì)胞群具有未調(diào)節(jié)的細(xì)胞生長的特性的哺乳動物中的生理狀況。癌的實例包括但不限于癌瘤、淋巴瘤、胚細(xì)胞瘤、肉瘤以及白血病?！澳[瘤”和“新生物”是指產(chǎn)生于過度細(xì)胞生長或增殖的一種或多種細(xì)胞，例如良性(非癌的)或惡性(癌的)，包括癌前病變。可治療和/或預(yù)防的“癌”或“致瘤”疾病的實例包括B細(xì)胞淋巴瘤，包括NHL、前B細(xì)胞成淋巴細(xì)胞白血病/淋巴瘤以及成熟B細(xì)胞新生物，例如B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)/小淋巴細(xì)胞性白血病(SLL)，B細(xì)胞前淋巴細(xì)胞性白血病，淋巴漿細(xì)胞淋巴瘤、外套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)、濾泡性淋巴瘤(FL)，包括低度、中度以及高度FL，皮膚濾泡中心淋巴瘤，緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤(MALT型，結(jié)節(jié)型以及脾型)，毛細(xì)胞性白血病、彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤，伯基特氏淋巴瘤、漿細(xì)胞瘤、漿細(xì)胞性骨髓瘤、移植后淋巴增生性障礙、沃爾登斯特倫氏氏巨球蛋白血癥，以及間變大細(xì)胞淋巴瘤(ALCL)。術(shù)語“癌細(xì)胞”、“腫瘤細(xì)胞”以及語法等同術(shù)語是指衍生自腫瘤或癌前病變的細(xì)胞總?cè)?，包括非致瘤性?xì)胞(包括腫瘤細(xì)胞群塊)和致瘤性干細(xì)胞(癌干細(xì)胞)。本文使用的術(shù)語“腫瘤細(xì)胞”當(dāng)單獨指缺乏更新和分化能力的那些腫瘤細(xì)胞時將被術(shù)語“非致瘤性”修飾，以區(qū)別那些腫瘤細(xì)胞和癌干細(xì)胞。術(shù)語“受治療者”是指待為特定治療的接受者的任何動物(例如，哺乳動物)，包括但不限于人、非人靈長類、嚙齒類等。通常，提及人受治療者時術(shù)語“受治療者”和“患者”在本文中可互換使用。“聯(lián)合”一種或多種其他治療劑施用包括同時(同時發(fā)生的)和以任何順序的連續(xù)施用。術(shù)語“藥物制劑”是指允許活性成分的生物活性有效的形式和不含有對于進(jìn)行該制劑施用的受治療者有不能接受的毒性的其他組分的制劑。本文揭示的抗體的“有效量”是足以實現(xiàn)特別說明的目的的量。根據(jù)所說明的目的，“有效量”可經(jīng)驗性且以常規(guī)方式來確定。術(shù)語“治療有效量”是指有效“治療”受治療者或哺乳動物的疾病或病癥的抗體或其他藥物的量。在癌的情況中，藥物的治療有效量可減少癌細(xì)胞的數(shù)量，減小腫瘤體積，抑制(即，在某種程度上減緩或阻止)癌細(xì)胞浸潤至周圍器官，抑制(即，在某種程度上減緩或阻止)腫瘤轉(zhuǎn)移，在某種程度上抑制腫瘤生長，和/或者某種程度上緩解癌相關(guān)的癥狀。見，本文“治療”的定義。在藥物可防止生長和/或殺傷存在的癌細(xì)胞的程度上，可為細(xì)胞生長抑制的和/或細(xì)胞毒性的。“預(yù)防有效量”是指在劑量和持續(xù)時間上有效實現(xiàn)所需預(yù)防效果需要的量。通常但非必須的，由于預(yù)防劑量組疾病前或在基本早期用于受治療者，預(yù)防有效量將小于治療有效量。本文使用的詞語“標(biāo)記物”是指直接或間接與抗體綴合以產(chǎn)生“標(biāo)記的”抗體的可檢測化合物或組合物。標(biāo)記物本身是可檢測的(例如,放射性同位素標(biāo)記物或熒光標(biāo)記物)，或在酶標(biāo)記物的情況中，可催化可檢測的底物化合物或組合物的化學(xué)變化?！盎瘜W(xué)治療劑”是一種可用于治療癌的化學(xué)化合物，不管其作用機(jī)制是什么。化學(xué) 治療劑包括，例如，CD20D的拮抗劑(例如利妥昔單抗和環(huán)磷酰胺)，多柔比星，長春新堿，潑尼松，氟達(dá)拉濱，鬼白乙叉甙，甲氨喋呤，來那度胺，苯丁酸氮芥，苯達(dá)莫司汀和/或這些化學(xué)治療劑的修飾形式。諸如“治療(treating或 treatment 或 to treat)，，、或“緩解(alleviating 或 toalleviate)”是指I)治愈、減緩、減輕所診斷的病理狀況或病癥的癥狀和/或阻止其進(jìn)展的治療措施，和2)預(yù)防和/或減慢所靶向的病理狀況或病癥的發(fā)展。因此，需要治療的那些患者包括已經(jīng)患有病癥的那些，易于患有病癥的那些，以及其中有待預(yù)防病癥的那些。在某些實施方案中，如果患者顯示了下列的一種或多種則受治療者被根據(jù)本發(fā)明的方法成功“治療”癌癌細(xì)胞數(shù)量減少或完全缺乏，腫瘤大小減?。话┘?xì)胞浸潤至周圍器官受到抑制或缺乏，包括，例如癌播散至軟組織和骨骼；腫瘤轉(zhuǎn)移受到抑制或缺乏；腫瘤生長受到抑制或缺乏；與特定癌相關(guān)的一種或多種癥狀減輕；發(fā)病率和死亡率減??；生命質(zhì)量改善；腫瘤的致瘤性、致瘤頻率或致瘤能力減?。荒[瘤中的癌干細(xì)胞的數(shù)量或頻率減??；致瘤細(xì)胞分化為非致瘤狀態(tài)；或一些效果的組合。
本文中可互換使用的“多核苷酸”或“核酸”是指任何長度的核苷酸的聚合物，包括DNA和RNA。核苷酸可為脫氧核糖核苷酸，核糖核苷酸，修飾的核苷酸或堿基，和/或它們的類似物，或可通過DNA或RNA聚合酶摻入聚合物的任何底物。多核苷酸可包括修飾的核苷酸，例如甲基化的核苷酸及其類似物。如果存在的話，對于核苷酸結(jié)構(gòu)的修飾可以在聚合物組裝之前或之后賦予。核苷酸序列可通過非核苷酸組分間斷。多核苷酸可在聚合之后進(jìn)一步修飾，例如通過使用標(biāo)記組分綴合。其他類型的修飾包括，例如“帽”，使用類似物取代一種或多種天然存在的核苷酸，中間核苷酸修飾，例如具有不帶電荷的鍵(例如，甲基膦酸酯、磷酸三酯、磷酰胺酯、胺基甲酸酯等)的那些和具有帶電荷的鍵(例如，磷硫酰，二硫代磷酸酯等)的那些，含有懸垂部分(pendant moiety)的那些,例如,蛋白質(zhì)(例如,核酸酶，毒素，抗體，信號肽，聚-L-賴氨酸等)，具有插入劑(例如，吖唆，補骨脂素等)的那些，含有螯合劑(例如，金屬，放射性金屬，硼，氧化金屬等)的那些，含有烷化劑的那些，具有修飾的鍵(例如，α異頭物核酸等)的那些，以及多核苷酸的未修飾形式。另外，通常存在于糖中的任何羥基可被例如膦酸酯基、磷酸基取代，被標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)基團(tuán)保護(hù)，或被活化以使另外的鍵制備成另外的核苷酸，或可被綴合成固體支持物。5’和3’末端OH可被磷酰基化或使用胺或具有I至20個碳原子的有機(jī)帽基團(tuán)部分取代。其他羥基可也可被衍生為標(biāo)準(zhǔn)的保護(hù)基團(tuán)。多核苷酸還可含有本領(lǐng)域公知的核糖或脫氧核糖類似物，包括，例如2’-O-甲基，2’-O-烯丙基， 2’ -氟-核糖或2’ -疊氮基-核糖，碳環(huán)碳類似物，α -異頭物糖，差向異構(gòu)糖(例如，阿拉伯糖，木糖或來蘇糖，吡喃糖，呋喃糖，景天庚糖)，非環(huán)類似物以及堿性核苷類似物(例如甲基肌苷)。一種或多種磷酸二酯鍵可被可選的連接基團(tuán)取代。這些可選的連接基團(tuán)包括但不限于其中磷酸被 P (O) S ( “硫酯”)、P (S) S ( “二硫酯” )、(O) NR2 ( “酰胺酯” )、P (O) R、P (O) 0R’、CO或CH2( “formacetal”)取代的實施方案，其中R或R’單獨為H或任選含有醚(一0—)鍵的取代或非取代的烷基(1-20C)，芳基，鏈烯基，環(huán)烷基，環(huán)鏈烯基或芳烷基。多核苷酸中并非所有鍵都需要一致。前文描述用于本發(fā)明提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。術(shù)語“載體”是指能夠在宿主細(xì)胞中遞送并任選表達(dá)一種或多種基因或序列的構(gòu)建體。載體的實例包括但不限于病毒載體、裸DNA或RNA表達(dá)載體、質(zhì)粒、粘?；蚴删w載體、與陽離子冷凝劑相關(guān)的DNA或RNA表達(dá)載體，包裹著脂質(zhì)體中的DNA或RNA表達(dá)載體，以及某些真核細(xì)胞，例如生產(chǎn)細(xì)胞。本文可互換使用的術(shù)語“多肽”、“肽”、以及“蛋白質(zhì)”是指任何長度的氨基酸的聚合物。所述聚合物可為直鏈或支鏈，可包含修飾的氨基酸，可被非氨基酸間斷。該術(shù)語還包括被天然修飾或被干涉修飾的氨基酸聚合物，例如，二硫鍵形成，糖基化，脂質(zhì)化，?；姿峄?，或任何其他操作或修飾，例如使用標(biāo)記組分綴合。在該定義中還包括，例如含有氨基酸的一種或多種類似物(包括，例如非天然氨基酸等)的多肽，以及本領(lǐng)域已知的其他修飾。應(yīng)理解，因為本發(fā)明的多肽基于抗體，在某些實施方案中，所述多肽可作為單鏈或聯(lián)合鏈存在。在兩個或多個核酸或多肽的上下文中的術(shù)語“同一性”或“同一性百分?jǐn)?shù)”是指，當(dāng)對于最大對應(yīng)性來比較和比對(如果需要，引入間隙)時(不考慮作為序列同一性部分的任何保守性氨基酸取代)，兩個或多個序列或亞序列是相同的或者具有相同的核苷酸或氨基酸殘基的特定百分?jǐn)?shù)?？墒褂眯蛄斜容^軟件或算法或通過目測觀察來測量同一性百分?jǐn)?shù)。可用于獲得氨基酸或核苷酸序列比對的多種算法和軟件為本領(lǐng)域已知。序列比對算法的一個這樣的非限制性實例描述于Karlin等人，1990, Proc.Natl. Acad. Sci.，87: 2264-2268，修改于 Karlin 等人，1993，Proc. Natl. Acad.Sci.，90:5873-5877,并合并至 NBLAST 和 XBLAST 程序中(Altschul 等人，1991，NucleicAcids Res.，25:3389-3402)。在某些實施方案中，可如 Altschul 等人，1997，NucleicAcidss Res. 25:3389-3402 中描述的使用 Gapped BLAST。BLAST-2、WU-BLAST-2 (Altschul等人，1996，Methods in Enzymology, 266:460-480)、ALIGN、ALIGN_2 (Genentech, South SanFrancisco, California)或Megalign(DNASTAR)是可用于進(jìn)行序列比對的其他可公共獲得的軟件程序。在某些實施方案中，使用GCG軟件中的GAP程序來確定兩個核苷酸序列之間的同一性百分?jǐn)?shù)(例如，使用NWSgapdna. CMP矩陣和40、50、60、70或90的間隙加權(quán)和1、2、3、4、5或6的長度加權(quán))。在某些可選的實施方案中，并入了 Needleman和Wunsch算法(J.Mol. Biol. (48) :444-453(1970))的GCG軟件包中的GAP程序可用于確定兩個氨基酸序列之間的同一性百分?jǐn)?shù)(例如，使用Blossum 62矩陣或PAM250矩陣，和16、14、12、10、8、6或4的間隙加權(quán)和1、2、3、4、5的長度加權(quán))?？蛇x地，在某些實施方案中，使用Myers和Miller算法(CABI0S，4:11-17(1989))確定核苷酸或氨基酸序列之間的同一性百分?jǐn)?shù)。例如，可使用ALIGN程序(2. O版)和使用具有殘基表的PAM120、間隙長度罰分12和間隙罰分4來確 定同一性百分?jǐn)?shù)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可通過特定比對軟件確定用于最大比對的合適參數(shù)。在某些實施方案中，使用比對軟件的缺省參數(shù)。在某些實施方案中，第一氨基酸序列與第二氨基酸序列的同一性百分?jǐn)?shù)“X”被計算為IOOX (Y/Z)，其中，Y是指第一和第二序列的比對中計為完全匹配的氨基酸殘基的數(shù)目，Z是第二序列中殘基的總數(shù)。如果第一序列的長度比第二序列長，則第一序列與第二序列的同一性百分?jǐn)?shù)會比第二序列與第一序列的同一性百分?jǐn)?shù)要長。作為非限制性實例，可在某些實施方案中使用Bestfit程序來確定任何特定的多核苷酸是否與參考序列具有某些序列同一性百分?jǐn)?shù)(例如，至少80%同一性，至少85%同一性，至少90%同一性，以及在某些實施方案中，至少95%、96%、97%、98%或99%同一性)(Wisconsin 序列分析包，Unix 8 版，Genetics Computer Group, University ResearchPark, 575 Science Drive, Madison, WI 53711)。Bestfit 使用 Smith和 Waterman, Advancesin Applied Mathematics 2:482489 (1981)的局部同源性算法,來發(fā)現(xiàn)兩個序列之間具有同源性的最佳片段。當(dāng)根據(jù)本發(fā)明使用Bestfit或任何其他序列比對程序來確定特定序列是否與參考序列具有例如95%的同一性時，設(shè)定參數(shù)，使得經(jīng)參考核苷酸序列的全長來計算同一性百分?jǐn)?shù)和允許同源性中的間隙達(dá)參考序列中核苷酸總數(shù)的5%。在一些實施方案中，本發(fā)明的兩個核酸或多肽基本上完全同一，意思是，當(dāng)如使用序列比較算法或通過目測觀察測量的那樣比較和比對最大對應(yīng)性時，它們具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%且在一些實施方案中具有至少95%、96%、97%、98%、99%的核苷酸或氨基酸殘基同一'I"生。同一'I"生可存在于長度為至少約10個、約20個、約40-60個殘基或任何整數(shù)值的序列區(qū)域，并可存在于長于60-80個殘基的區(qū)域，例如，至少約90-100個殘基，在一些實施方案中，序列中所比較的序列的全長是基本上完全同一的，例如核苷酸序列的編碼區(qū)?！氨Ｊ匦园被崛〈笔侵钙渲幸粋€氨基酸殘基被具有相似側(cè)鏈的另一個氨基酸殘基取代。具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基的家族在本領(lǐng)域中有定義，包括堿性側(cè)鏈(例如，賴氨酸，精氨酸，組氨酸)，酸性氨基酸(例如，天門冬氨酸，谷氨酸)，不帶電荷的極性側(cè)鏈氨基酸(例如，甘氨酸，天門冬酰胺，谷酰胺，絲氨酸，蘇氨酸，酪氨酸，半胱氨酸)，非極性側(cè)鏈(例如，丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，脯氨酸，苯丙氨酸，甲硫氨酸，色氨酸)，β分支側(cè)鏈(例如，蘇氨酸，纈氨酸，異亮氨酸)和芳香族側(cè)鏈(例如，酪氨酸，苯丙氨酸，色氨酸，組氨酸)。例如，苯丙氨酸取代酪氨酸是保守性取代。在一些實施方案中，本發(fā)明的多肽和抗體序列中的保守性取代并不消除含有氨基酸序列的多肽或抗體與抗原結(jié)合，所述抗原即所述多肽或抗體結(jié)合的CD37。鑒定不消除抗原結(jié)合的核苷酸和氨基酸保守性取代的方法為本領(lǐng)域公知(見，例如，Brummell 等人，Biochem. 32:1180-1187 (1993) ; Kobayashi 等人，Protein Eng. 12 (10) : 879-884 (1999);以及 Burks 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA94:·412-417(1997))。除非上下文另有明確指明，本文說明書和權(quán)利要求書所使用的單數(shù)形式(“a”、“an”以及“the”)包括復(fù)數(shù)形式。應(yīng)理解無論本文何處使用用語“包括”描述實施方案，都還提供以“由......組
成”和/或“基本由......組成”描述的類似實施方案。本文在諸如“A和/或B”的短語中使用的術(shù)語“和/或”意指包括“A和B”、“A或B”、“A”以及“B”。同樣的，在諸如“A、B和/或C”的短語中使用的術(shù)語“和/或”意指包括下列各實施方案A、B以及C ;A、B或C ;A或C;A或B;B或C;A和C;A和B;B和C;A(單獨)；B(單獨)；以及C(單獨)。II.CD37 結(jié)合劑本發(fā)明提供了特異性結(jié)合⑶37D的制劑。這些制劑在本文中被稱為“⑶37結(jié)合齊U”。人、獼猴以及鼠CD37的全長氨基酸序列為本領(lǐng)域已知，在本文中分別由SEQ ID NO: 1-3
來表示。人CD37:MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGIFTMGIALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRAQLERSLRDVVEKTIQKYGTNPEETAAEESWDYVQFQLRCCGWHYPQDWFQVLILRGNGSEAHRVPCSCYNLSATNDSTILDKVILPQLSRLGHLARSRHSADICAVPAESHIYREGCAQGLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLAYR(SEQ ID NO:I)獼猴CD37:MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVILGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGVFTMGLALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRAQLERSLQDIVEKTIQRYHTNPEETAAEESffDYVQFQLRCCGWHSPQDWFQVLTLRGNGSEAHRVPCSCYNLSATNDSTILDKVILPQLSRLGQLARSRHSTDICAVPANSHIYREGCARSLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLRYR(SEQ ID NO:2)鼠CD37(NP_031671)MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGGLIFCFGTWILIDKTSFVSFVGLSFVPLQTWSKVLAVSGVLTMALALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRVRLERRVQELVLRTIQSYRTNPDETAAEESWDYAQFQLRCCGWQSPRDWNKAQMLKANESEEPFVPCSCYNSTATNDSTVFDKLFFSQLSRLGPRAKLRQYADICALPAKAHIYREGCAQSLQKWLHNNIISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYDRLARYR(SEQ ID NO:3)在某些實施方案中，CD37結(jié)合劑是抗體、免疫綴合物或多肽。在一些實施方案中，⑶37結(jié)合劑是人源化抗體。
在某些實施方案中，CD37結(jié)合劑具有一種或多種下列效果抑制腫瘤細(xì)胞增殖，通過降低腫瘤中癌干細(xì)胞的頻率而減小腫瘤的致瘤性,抑制腫瘤生長,增加存活率,引發(fā)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞死亡，使致瘤性細(xì)胞分化成非致瘤狀態(tài)，或預(yù)防腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。在某些實施方案中，CD37結(jié)合劑能夠誘導(dǎo)補體依賴性細(xì)胞毒性。例如，使用CD37結(jié)合劑治療細(xì)胞可導(dǎo)致下述CDC活性，即，所述CDC活性降低細(xì)胞活力至小于未處理的細(xì)胞的約80%、約70%，約60%，約50%，約40%或約35%。使用CD37結(jié)合劑處理細(xì)胞還可導(dǎo)致下述⑶C活性，即，所述⑶C活性降低細(xì)胞活力至未處理的細(xì)胞的細(xì)胞活力的約70-80%、60-70%、50-60%,40-50%或30-40%。在一些特定實施方案中，CD37結(jié)合劑能夠誘導(dǎo)Ramos細(xì)胞中補體依賴的細(xì)胞毒性。在某些實施方案中，CD37結(jié)合劑能夠誘導(dǎo)抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)。例如，使用⑶37結(jié)合劑處理細(xì)胞可導(dǎo)致下述ADCC活性，即所述ADCC活性產(chǎn)生至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、或至少約60%的細(xì)胞裂解。使用⑶37結(jié)合劑處理細(xì)胞可導(dǎo)致下述ADCC活性，即所述ADCC活性產(chǎn)生約10-50%、約20-50%、約30-50%或約40-50%的細(xì)胞裂解。在某些特定實施方案中，CD37結(jié)合劑能夠誘導(dǎo)Daudi、Ramos和/或Granata_519細(xì)胞中的ADCC。在某些實施方案中，⑶37結(jié)合劑能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。例如，使用⑶37結(jié)合劑處理細(xì)胞可誘導(dǎo)至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%或至少約55%的細(xì)胞凋亡。在一些特定實施方案中，⑶3結(jié)合劑能夠誘導(dǎo)Ramos細(xì)胞和/Raji細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡。在一些實施方案中，CD37結(jié)合劑能夠減小腫瘤體積。CD37結(jié)合劑減小腫瘤體積的能力可通過測量％T/c值來評估，%T/C值是由對照受治療者的中位數(shù)腫瘤體積除被治療的受治療者的中位數(shù)腫瘤體積。在在一些實施方案中，使用CD37結(jié)合劑治療導(dǎo)致下列％T/C值小于約55%、小于約50%、小于約45%、小于約40%、小于約35%、小于約30%、小于約25%、小于約20%、小于約15%、小于約10%或小于約5%。在一些特定的實施方案中，⑶37結(jié)合劑可減小BJAB異種移植物模型和/或SU-DHL-4異種移植物模型中的腫瘤大小。在某些實施方案中，特異性結(jié)合人CD37的免疫綴合物或其他制劑經(jīng)細(xì)胞毒性劑來引發(fā)細(xì)胞死亡。例如，在某些實施方案中，將人CD37抗體的抗體與美登素綴合，美登素在 表達(dá)CD37的細(xì)胞中通過蛋白質(zhì)內(nèi)化而活化。在某些可選的實施方案中，所述制劑或抗體不被綴合。在某些實施方案中，⑶37結(jié)合劑能夠抑制腫瘤生長。在某些實施方案中，⑶37結(jié)合劑能夠在體外抑制腫瘤生長(例如，在異種移植物模型和/或者患有癌的人中)。CD37 結(jié)合劑包括 CD37 抗體 CD37-3、CD37-12、CD37-38、CD37-50、CD37-51、CD37-56和⑶37-57及其片段、變體以及衍生物。⑶37結(jié)合劑還包括與選自下述抗體相同的⑶37表位特異性結(jié)合的 CD37 結(jié)合劑CD37-3、CD37-12、CD37-38、CD37-50、CD37-51、CD37-56 以及⑶37-57。⑶37結(jié)合劑還包括競爭性抑制選自下述的抗體的⑶37結(jié)合劑⑶37_3、⑶37-12、CD37-38、CD37-50、CD37—51、CD37—56 以及 CD37—57。在某些特定實施方案中，CD37結(jié)合劑與CD37的結(jié)合不需要人CD37氨基酸109-138。因此，一些⑶37結(jié)合劑結(jié)合包含SEQ ID NO: 180的氨基酸序列的多肽。在其他實施方案中，⑶37結(jié)合劑與⑶37的結(jié)合被人⑶37氨基酸202-243的突變中斷。因此，一些⑶37結(jié)合劑不結(jié)合包含SEQ ID NO: 184的氨基酸序列的多肽。在一些實施方案中，CD37結(jié)合劑結(jié)合SEQ ID NO: 180的多肽和結(jié)合SEQ ID NO: 183的多肽，但不結(jié)合SEQ ID NO: 184的多肽。在一些實施方案中，⑶37結(jié)合劑結(jié)合SEQ ID NO: 190的多肽。在一些實施方案中，CD37結(jié)合劑結(jié)合SEQ ID NO: 190的多肽和SEQ ID NO: 189的多肽。在一些實施方案中，CD37結(jié)合劑結(jié)合SEQ ID NO: 190的多肽和SEQ ID NO: 188的多肽。在一些實施方案中，⑶37結(jié)合劑結(jié)合SEQ ID NO: 192的多肽，但不結(jié)合SEQ IDN0:194的多肽。在一些實施方案中，CD37結(jié)合劑結(jié)合SEQ IDN0:193的多肽，但不結(jié)合SEQID NO: 194的多肽。某些CD37結(jié)合劑結(jié)合的CD37肽片段包括但不限于包含、基本組成為或組成為SEQ ID NO: I 的氨基酸 200-243、SEQ ID NO: I 的氨基酸 202-220 或 SEQ ID NO: I 的氨基酸221-243的⑶37片段。在一些實施方案中，⑶37結(jié)合劑特異性結(jié)合包含SEQ ID NO: I的 202-243的人CD37表位。在一些實施方案中，CD37結(jié)合劑與CD37的結(jié)合需要SEQ ID NO: I的氨基酸202-243。在一些實施方案中，⑶37結(jié)合劑與⑶37的結(jié)合需要SEQ ID N0:1的氨基酸200-220。在一些實施方案中，⑶37結(jié)合劑與⑶37的結(jié)合需要SEQ ID N0:1的氨基酸221-243。CD37 結(jié)合劑還包括包含 CD37-3、CD37-12、CD37-38、CD37-50、CD37-51、CD37-56或 CD37-57 的重鏈和輕鏈 CDR 序列的 CD37 結(jié)合劑。CD37-38、CD37-50、CD37-51、CD37-56以及⑶37-57的重鏈和輕鏈⑶R含有相關(guān)的序列。因此，⑶37結(jié)合劑還可包括保護(hù)通過CD37-38、CD37-50、CD37-51、CD37-56以及CD37-57比對獲得的共有序列的重鏈和輕鏈CDR序列。CD37-3、CD37-12、CD37-38、CD37-50、CD37-51、CD37-56 以及 CD37-57 的 CDR 序列和CD37-38、CD37-50、CD37-51、CD37-56以及CD37-57的共有序列中在下文表I和2中描述。表I :重鏈可變區(qū)⑶R氨基酸序列
權(quán)利要求
1.一種特異性結(jié)合CD37的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，所述抗體或其片段能夠誘導(dǎo)補體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)。
2.如權(quán)利要求I所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，所述抗體還能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
3.如權(quán)利要求I或2所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，所述抗體還能夠誘導(dǎo)抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)。
4.一種抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合與選自下列的抗體相同的⑶37表位 (a)包含SEQID NO:55的多肽和SEQ ID NO:72的多肽的抗體； (b)包含SEQID NO:59的多肽和SEQ ID NO:75的多肽的抗體； (c)包含SEQID NO:61的多肽和SEQ ID NO:77的多肽的抗體； (d)包含SEQID NO:64的多肽和SEQ ID NO:80的多肽的抗體； (e)包含SEQID NO:66的多肽和SEQ ID NO:82的多肽的抗體； (f)包含SEQID NO:68的多肽和SEQ ID NO:84的多肽的抗體；以及 (g)包含SEQID NO:70的多肽和SEQ ID NO:86的多肽的抗體。
5.—種抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合CD37并特異性結(jié)合SEQ ID NO: 180的多肽。
6.如權(quán)利要求5所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，所述抗體或其片段不結(jié)合SEQID NO: 184的多肽。
7.一種抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合CD37并特異性結(jié)合SEQ ID NO: 184的多肽。
8.一種特異性結(jié)合CD37的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，所述抗體或其片段競爭性抑制選自下列的抗體 (a)包含SEQID NO:55的多肽和SEQ ID NO:72的多肽的抗體； (b)包含SEQID NO:59的多肽和SEQ ID NO:75的多肽的抗體； (c)包含SEQID NO:61的多肽和SEQ ID NO:77的多肽的抗體； (d)包含SEQID NO:64的多肽和SEQ ID NO:80的多肽的抗體； (e)包含SEQID NO:66的多肽和SEQ ID NO:82的多肽的抗體； (f)包含SEQID NO:68的多肽和SEQ ID NO:84的多肽的抗體；以及 (g)包含SEQID NO:70的多肽和SEQ ID NO:86的多肽的抗體。
9.一種抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段由選自下列的雜交瘤產(chǎn)生于2010年2月18日保藏于ATCC的ATCC保藏名稱PTA-10664，于2010年2月18日保藏于ATCC的ATCC保藏名稱PTA-10665，于2010年2月18日保藏于ATCC的ATCC保藏名稱PTA-10666，于2010年2月18日保藏于ATCC的ATCC保藏名稱PTA-10667，于2010年2月18日保藏于ATCC的ATCC保藏名稱PTA-10668，于2010年2月18日保藏于ATCC的ATCC保藏名稱PTA-10669，于2010年2月18日保藏于ATCC的ATCC保藏名稱PTA-10670。
10.一種特異性結(jié)合CD37的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，所述抗體包含選自下列的多肽序列(a)SEQ ID NO:4、5 以及 6 和 SEQ ID NO:28、29 以及 30 ；(b)SEQID NO:7、8 以及 9 和 SEQ ID NO:31、32 以及 33 ；(c)SEQID NO: 10、11 以及 12 和 SEQ ID NO:34、35 以及 36 ；(d)SEQID NO: 13、14 以及 15 和 SEQ ID NO:37、38 以及 39 ；(e)SEQID NO: 13、14 以及 15 和 SEQ ID N0:37、40 以及 39 ；(f)SEQ ID NO:16、17 以及 18 和 SEQ ID NO:41、42 以及 43 ；(g)SEQID NO: 19,20 以及 21 和 SEQ ID N0:44、45 以及 46 ；(h)SEQID NO: 19,20 以及 21 和 SEQ ID N0:44、47 以及 46 ；(i)SEQID NO:22、23 以及 24 和 SEQ ID N0:48、49 以及 50 ；(j) SEQ ID NO:22、23 以及 24 和 SEQ ID NO:48、51 以及 50 ;(k)SEQ ID NO:25、26 以及 27 和 SEQ ID NO:52、53 以及 54 ;以及(I)包含1、2、3或4個保守氨基酸取代的(a)至(k)的變體。
11.如權(quán)利要求10所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，所述抗體包含與選自下列的多肽序列具有至少90%同一性的多肽序列(a)SEQID NO:55 和 SEQ ID NO:72 ；(b)SEQID NO:56 和 SEQ ID NO:73 ；(c)SEQID NO:57 和 SEQ ID NO:74 ；(d)SEQID NO:58 和 SEQ ID NO:74 ；(e)SEQID NO:59 和 SEQ ID NO:75 ；(f)SEQID NO:60 和 SEQ ID NO:76 ；(g)SEQID NO:61 和 SEQ ID NO:77 ；(h)SEQID NO:62 和 SEQ ID NO:78 ；(i)SEQID NO:63 和 SEQ ID NO:79 ；(j)SEQ ID NO:64 和 SEQ ID NO:80 ；(k)SEQ ID NO:65 和 SEQ ID NO:81 ；(I)SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO:82 ；(m)SEQ ID NO:67 和 SEQ ID NO:83 ；(n)SEQ ID NO:68 和 SEQ ID NO:84 ；(o)SEQ ID NO:69 和 SEQ ID NO:85 ；(p)SEQ ID NO:70 和 SEQ ID NO:86;以及(q)SEQ ID N0:71 和 SEQ ID N0:87。
12.如權(quán)利要求11所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，所述抗體包含與選自下列的多肽序列具有至少95%同一性的多肽序列(a)SEQID NO:55 和 SEQ ID NO:72 ；(b)SEQID NO:56 和 SEQ ID NO:73 ；(c)SEQID NO:57 和 SEQ ID NO:74 ；(d)SEQID NO:58 和 SEQ ID NO:74 ；(e)SEQID NO:59 和 SEQ ID NO:75 ；(f)SEQID NO:60 和 SEQ ID NO:76 ；(g)SEQID NO:61 和 SEQ ID NO:77 ；(h)SEQID NO:62 和 SEQ ID NO:78 ；(i)SEQ ID NO:63 和 SEQ ID NO:79 ；(j)SEQ ID NO:64 和 SEQ ID NO:80 ；(k)SEQ ID NO:65 和 SEQ ID NO:81 ；(I)SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO:82 ；(m)SEQ ID NO:67 和 SEQ ID NO:83 ；(n)SEQ ID NO:68 和 SEQ ID NO:84 ；(0)SEQID NO:69 和 SEQ ID NO:85 ；(p)SEQ ID NO:70 和 SEQ ID NO:86;以及(q)SEQ ID N0:71 和 SEQ ID N0:87。
13.如權(quán)利要求12所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，所述抗體包含與選自下列的多肽序列具有至少99%同一性的多肽序列 (a)SEQID NO:55 和 SEQ ID NO:72 ；(b)SEQID NO:56 和 SEQ ID NO:73 ；(c)SEQID NO:57 和 SEQ ID NO:74 ；(d)SEQID NO:58 和 SEQ ID NO:74 ；(e)SEQID NO:59 和 SEQ ID NO:75 ；(f)SEQID NO:60 和 SEQ ID NO:76 ；(g)SEQID NO:61 和 SEQ ID NO:77 ；(h)SEQID NO:62 和 SEQ ID NO:78 ；(1)SEQID NO:63 和 SEQ ID NO:79 ；(j)SEQ ID NO:64 和 SEQ ID NO:80 ；(k)SEQ ID NO:65 和 SEQ ID NO:81 ；(I)SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO:82 ；(m)SEQ ID NO:67 和 SEQ ID NO:83 ；(n)SEQ ID NO:68 和 SEQ ID NO:84 ；(o)SEQ ID NO:69 和 SEQ ID NO:85 ；(p)SEQ ID NO:70 和 SEQ ID NO:86;以及(q)SEQ ID N0:71 和 SEQ ID N0:87。
14.如權(quán)利要求1-13任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段是鼠的、非人的、人源化的、嵌合的、再表面化的或人的。
15.如權(quán)利要求4-14任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，所述抗體或抗體片段能夠在缺乏接頭的情況下在體外誘導(dǎo)表達(dá)⑶37的細(xì)胞的細(xì)胞凋亡。
16.如權(quán)利要求4-14任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段能夠誘導(dǎo)補體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)。
17.如權(quán)利要求4-14任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，所述抗體能夠誘導(dǎo)抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)。
18.一種特異性結(jié)合CD37的人抗體或人源化抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，所述人抗體或人源化抗體或其抗原結(jié)合片段能夠在缺乏接頭的情況下在體外誘導(dǎo)表達(dá)CD37的細(xì)胞的細(xì)胞凋亡。
19.如權(quán)利要求18所述的人抗體或人源化抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，所述人抗體或人源化抗體或其抗原結(jié)合片段能夠誘導(dǎo)補體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)。
20.如權(quán)利要求18或19所述的人抗體或人源化抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，所述人抗體或人源化抗體或其抗原結(jié)合片段能夠誘導(dǎo)抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)。
21.如權(quán)利要求1-20任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中，所述抗體結(jié)合人CD37和獼猴CD37。
22.如權(quán)利要求1-21任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段抗體是全長抗體。
23.如權(quán)利要求1-21任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段抗體是抗原結(jié)合片段。
24.如權(quán)利要求1-21任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗其原結(jié)合片段抗體包含F(xiàn)ab、Fab’、F(ab’) 2、Fd、單鏈Fv或scFv、二硫鍵連接的Fv、V-NAR結(jié)構(gòu)域、IgNar、細(xì)胞內(nèi)抗體、IgG Λ CH2、小抗體、F (ab' ) 3、四鏈抗體、三鏈抗體、雙鏈抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、DVD-Ig> Fcab> mAb2、(scFv) 2 或 scFv-Fc。
25.一種特異性結(jié)合CD37的多肽，其中，所述多肽包含選自下列的序列(a)SEQ ID NO:4、5 以及 6 和 SEQ ID NO:28、29 以及 30 ；(b)SEQID NO:7、8 以及 9 和 SEQ ID NO:31、32 以及 33 ；(c)SEQID NO: 10、11 以及 12 和 SEQ ID NO:34、35 以及 36 ；(d)SEQID NO: 13、14 以及 15 和 SEQ ID NO:37、38 以及 39 ；(e)SEQID NO: 13、14 以及 15 和 SEQ ID N0:37、40 以及 39 ；(f)SEQ ID NO:16、17 以及 18 和 SEQ ID NO:41、42 以及 43 ；(g)SEQID NO: 19,20 以及 21 和 SEQ ID N0:44、45 以及 46 ；(h)SEQID NO: 19,20 以及 21 和 SEQ ID N0:44、47 以及 46 ；(i)SEQID NO:22、23 以及 24 和 SEQ ID N0:48、49 以及 50 ；(j) SEQ ID NO:22、23 以及 24 和 SEQ ID NO:48、51 以及 50 ; (k)SEQ ID NO:25、26 以及 27 和 SEQ ID NO:52、53 以及 54 ;以及 (I)包含1、2、3或4個保守氨基酸取代的(a)至(k)的變體。
26.如權(quán)利要求25的多肽，其中，所述多肽包含與選自下列的序列具有至少90%同一性的序列(a)SEQID NO:55 和 SEQ ID NO:72 ；(b)SEQID NO:56 和 SEQ ID NO:73 ；(c)SEQID NO:57 和 SEQ ID NO:74 ；(d)SEQID NO:58 和 SEQ ID NO:74 ；(e)SEQID NO:59 和 SEQ ID NO:75 ；(f)SEQID NO:60 和 SEQ ID NO:76 ；(g)SEQID NO:61 和 SEQ ID NO:77 ；(h)SEQID NO:62 和 SEQ ID NO:78 ；(i)SEQID NO:63 和 SEQ ID NO:79 ；(j)SEQ ID NO:64 和 SEQ ID NO:80 ；(k)SEQ ID NO:65 和 SEQ ID NO:81 ；(I)SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO:82 ；(m)SEQ ID NO:67 和 SEQ ID NO:83 ；(n)SEQ ID NO:68 和 SEQ ID NO:84 ；(0)SEQID NO:69 和 SEQ ID NO:85 ； (p)SEQ ID NO:70 和 SEQ ID NO:86;以及 (q)SEQ ID N0:71 和 SEQ ID N0:87。
27.如權(quán)利要求26的多肽，其中，所述多肽包含與選自下列的序列具有至少95%同一性的序列(a)SEQID NO:55 和 SEQ ID NO:72 ；(b)SEQID NO:56 和 SEQ ID NO:73 ；(c)SEQID NO:57 和 SEQ ID NO:74 ；(d)SEQID NO:58 和 SEQ ID NO:74 ；(e)SEQID NO:59 和 SEQ ID NO:75 ；(f)SEQID NO:60 和 SEQ ID NO:76 ；(g)SEQID NO:61 和 SEQ ID NO:77 ；(h)SEQID NO:62 和 SEQ ID NO:78 ；(1)SEQID NO:63 和 SEQ ID NO:79 ；(j)SEQ ID NO:64 和 SEQ ID NO:80 ；(k)SEQ ID NO:65 和 SEQ ID NO:81 ；(I)SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO:82 ；(m)SEQ ID NO:67 和 SEQ ID NO:83 ；(n)SEQ ID NO:68 和 SEQ ID NO:84 ；(0)SEQID NO:69 和 SEQ ID NO:85 ； (p)SEQ ID NO:70 和 SEQ ID NO:86;以及 (q)SEQ ID N0:71 和 SEQ ID N0:87。
28.如權(quán)利要求27的多肽，其中，所述多肽包含與選自下列的序列具有至少99%同一性的序列(a)SEQID NO:55 和 SEQ ID NO:72 ；(b)SEQID NO:56 和 SEQ ID NO:73 ；(c)SEQID NO:57 和 SEQ ID NO:74 ；(d)SEQID NO:58 和 SEQ ID NO:74 ；(e)SEQID NO:59 和 SEQ ID NO:75 ；(f)SEQID NO:60 和 SEQ ID NO:76 ；(g)SEQID NO:61 和 SEQ ID NO:77 ；(h)SEQID NO:62 和 SEQ ID NO:78 ；(1)SEQID NO:63 和 SEQ ID NO:79 ；(j)SEQ ID NO:64 和 SEQ ID NO:80 ；(k)SEQ ID NO:65 和 SEQ ID NO:81 ；(I)SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO:82 ；(m)SEQ ID NO:67 和 SEQ ID NO:83 ；(n)SEQ ID NO:68 和 SEQ ID NO:84 ；(o)SEQ ID NO:69 和 SEQ ID NO:85 ； (p)SEQ ID NO:70 和 SEQ ID NO:86;以及 (q)SEQ ID N0:71 和 SEQ ID N0:87。
29.一種分離的細(xì)胞，其產(chǎn)生權(quán)利要求1-24任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段或權(quán)利要求25-28任一項所述的多肽。
30.一種制備權(quán)利要求1-24任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段或權(quán)利要求25-28任一項所述的多肽的方法，所述方法包括(a)培養(yǎng)權(quán)利要求29所述的細(xì)胞；以及(b)從所述培養(yǎng)的細(xì)胞分離所述抗體、其抗原結(jié)合片段或多肽。
31.一種具有式(A)-(L)-(C)的免疫綴合物，其中 (A)是權(quán)利要求1-24任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段或權(quán)利要求25-28任一項所述的多肽； (L)是接頭； (C)是細(xì)胞毒性劑；以及 其中所述接頭(L)連接㈧與(C)。
32.—種具有式(A)-(L)-(C)的免疫綴合物，其中 (A)是特異性結(jié)合CD37的抗體或其抗原結(jié)合片段； (L)是非可裂解接頭； (C)是細(xì)胞毒性劑；以及 其中所述接頭(L)連接㈧與(C)。
33.一種具有式(A)-(L)-(C)的免疫綴合物，其中 (A)是特異性結(jié)合CD37的抗體或其抗原結(jié)合片段； (L)是接頭； (C)是美登醇；以及 其中所述接頭(L)連接㈧與(C)。
34.如權(quán)利要求33所述的免疫綴合物，其中，所述接頭是非可裂解接頭。
35.如權(quán)利要求31-34任一項所述的免疫綴合物，其還包含第二(C)。
36.如權(quán)利要求35所述的免疫綴合物，其還包含第三(C)。
37.如權(quán)利要求35所述的免疫綴合物，其還包含第四(C)。
38.如權(quán)利要求31-34任一項所述的免疫綴合物，其包含2-6(C)。
39.如權(quán)利要求31-34任一項所述的免疫綴合物，其包含3-4(C)。
40.如權(quán)利要求31-39任一項所述的免疫綴合物，其中，所述接頭選自可裂解接頭、非可裂解接頭、親水性接頭以及基于二羧酸的接頭。
41.如權(quán)利要求40所述的免疫綴合物，其中，所述接頭選自N-琥珀酰亞胺基4-(2-批啶基二硫代)戊酸酯(SPP) ; N-琥珀酰亞胺基4-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯(STOB)或N-琥珀酰亞胺基4- (2-吡啶基二硫代)-2-磺基丁酸酯(磺基-STOB) ; N-琥珀酰亞胺基4-(馬來酰亞胺基甲基)環(huán)己烷羧酸酯(SMCC) ;N-琥珀酰亞胺基4-(馬來酰亞胺基甲基)環(huán)己烷羧酸酯(磺基SMCC); N-琥珀酰亞胺基-4-(碘代乙酰基)-氨基苯甲酸酯(SIAB);以及N-琥珀酰亞胺基-[(N-馬來酰亞胺基丙酰胺基)-四乙二醇]酯(NHS-PEG4-馬來酰亞胺)。
42.如權(quán)利要求41所述的免疫綴合物，其中，所述接頭是N-琥珀酰亞胺基-[(N-馬來酰亞胺基丙酰胺基)-四乙二醇]酯(NHS-PEG4-馬來酰亞胺)。
43.如權(quán)利要求31-32和35-42任一項所述的免疫綴合物，其中，所述細(xì)胞毒性劑選自美登醇、美登醇類似物、多柔比星、改性的多柔比星、苯二氮卓類、紫杉烷、CC-1065、CC-1065類似物、倍癌霉素、倍癌霉素類似物、刺孢霉素、多拉司他汀、多拉司他汀類似物、aristatin、托馬霉素衍生物，以及來普霉素衍生物或所述制劑的前藥。
44.如權(quán)利要求43所述的免疫綴合物，其中，所述細(xì)胞毒性劑是美登醇。
45.如權(quán)利要求44所述的免疫綴合物，其中，所述細(xì)胞毒性劑是N(2’)_脫乙?；?N(2’)-(3-巰基-I-氧丙基)-美登素(DMl)或N(2’)_脫乙?；?N2-(4-巰基-4-甲基_1_氧戍基)-美登素(DM4)。
46.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1-24任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、權(quán)利要求25-28任一項所述的多肽，或權(quán)利要求31-45任一項所述的免疫綴合物以及藥學(xué)上可接受的載體。
47.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求31-45任一項所述的免疫綴合物，其中所述綴合物具有每個(A)約3至約4的平均值。
48.如權(quán)利要求41所述的藥物組合物，其中，所述免疫綴合物具有每個(A)約3.5(C)的平均值。
49.如權(quán)利要求41所述的藥物組合物，其中，所述免疫綴合物具有每個(K)約3.5 ± O. 5(C)的平均值。
50.如權(quán)利要求46-49任一項所述的藥物組合物，其還包含第二抗癌劑。
51.一種診斷試劑，其包含被標(biāo)記了的權(quán)利要求1-24任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、權(quán)利要求25-28任一項所述的多肽或權(quán)利要求31-45任一項所述的免疫綴合物。
52.如權(quán)利要求51所述的診斷試劑，其中，所述標(biāo)記物選自放射標(biāo)記物、熒光團(tuán)、生色團(tuán)、顯像劑以及金屬離子。
53.一種試劑盒，其包含權(quán)利要求1-24任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、權(quán)利要求25-28任一項所述的多肽、權(quán)利要求31-45任一項所述的免疫綴合物或權(quán)利要求46-50任一項所述的藥物組合物。
54.一種用于抑制表達(dá)CD37的細(xì)胞的生長的方法，所述方法包括使所述細(xì)胞與權(quán)利要求1-24任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、權(quán)利要求25-28任一項所述的多肽、權(quán)利要求31-45任一項所述的免疫綴合物或權(quán)利要求46-50任一項所述的藥物組合物接觸。
55.一種用于治療患有癌癥的患者的方法，所述方法包括對作為受治療者的所述患者進(jìn)行治療有效量的下述物質(zhì)的施用權(quán)利要求1-24任一項所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、權(quán)利要求25-28任一項所述的多肽、權(quán)利要求31-45任一項所述的免疫綴合物或權(quán)利要求46-50任一項所述的藥物組合物。
56.如權(quán)利要求55所述的方法，其還包括對所述受治療者進(jìn)行第二抗癌劑的施用。
57.如權(quán)利要求56所述的方法，其中，所述第二抗癌劑為化學(xué)治療劑。
58.如權(quán)利要求55-57任一項所述的方法,其中，所述癌癥選自下列B細(xì)胞淋巴瘤,非何杰金氏淋巴瘤(NHL)，前B細(xì)胞成淋巴細(xì)胞白血病/淋巴瘤和成熟B細(xì)胞新生物，B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)/小淋巴細(xì)胞白血病(SLL)，B細(xì)胞前淋巴細(xì)胞白血病，淋巴漿細(xì)胞淋巴瘤，外套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)，濾泡性淋巴瘤(FL)，低度、中度以及高度(FL)，皮膚濾泡性淋巴瘤，緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤，MALT型緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤，結(jié)節(jié)緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤，脾型緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤，毛細(xì)胞性白血病，彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤，伯基特淋巴瘤，漿細(xì)胞瘤，漿細(xì)胞性骨髓瘤，移植后淋巴增生性障礙，沃爾登斯特倫氏氏巨球蛋白血癥，以及間變大細(xì)胞淋巴瘤(ALCL)。
59.一種分離的多核苷酸，其包含編碼與選自SEQ ID NO: 55-87的序列具有至少90%同一性的多肽的序列。
60.如權(quán)利要求59所述的分離的多核苷酸，其中，所述序列與選自SEQID NO:55_87的序列具有至少95%的同一性。
61.如權(quán)利要求60所述的分離的多核苷酸，其中，所述序列與選自SEQID NO:55_87的序列具有至少99%的同一性。
62.如權(quán)利要求59-61任一項所述的分離的多核苷酸,其中，所述多核苷酸包括與SEQID NO: 121-151具有至少90%同一性的序列。
63.如權(quán)利要求62所述的分離的多核苷酸，其中，所述多核苷酸包括與SEQIDNO: 121-151具有至少95%同一性的序列。
64.如權(quán)利要求63所述的分離的多核苷酸，其中，所述多核苷酸包括與SEQIDNO: 121-151具有至少99%同一性的序列。
65.—種載體,其包含權(quán)利要求59-64任一項所述的多核苷酸。
66.—種宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求65所述的載體。
全文摘要
本發(fā)明提供了新型抗癌劑，包括但不限于結(jié)合CD37的抗體和免疫綴合物。本發(fā)明還提供了使用所述制劑、抗體或免疫綴合物的方法，例如抑制腫瘤生長的方法。
文檔編號A61K39/395GK102971012SQ201180013661
公開日2013年3月13日 申請日期2011年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月12日
發(fā)明者尤塔·德克特, 彼得·帕克, 丹尼爾·塔瓦雷斯, 芮凌云 申請人:伊繆諾金公司