專利名稱：虎眼萬年青皂甙osw-i口服抗癌制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域中，用虎眼萬年青提取的皂甙OSW-I藥用原料，制備口服抗癌制劑膠囊，口服液的組方制做方法。
背景技術(shù)：
虎眼萬年青植物提取的皂甙類化合物用作于臨床制藥，在國外已應(yīng)用臨床多年， 其抑癌效果特別顯著。我國是從2003年才開始對虎眼萬年青中皂甙類化合物的藥物研究， 所以起步較晚。但近幾年已有用皂甙化合物與中草藥配伍的口服抗癌藥物在國內(nèi)已先后上市，并應(yīng)用于臨床，其臨床抑癌效果與國外的產(chǎn)品基本相同，但所利用的虎眼萬年青皂甙類化合物均屬粗提物，含有大量的化學(xué)成分，是必會產(chǎn)生一定的毒副作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目地是向社會提供一種虎眼萬年青皂甙類化合物0SW-I，與其它植物提取物相組配，制成的口服抗癌制劑，為口服抗癌制劑和臨床用藥的安全性，提供科學(xué)的技術(shù)路線支撐，其方法是I、虎眼萬年青皂甙OSW-I化合物的作用機(jī)理傳統(tǒng)的植物提取抗癌藥物，雖作用溫和，但抑癌活性較低，無法抵抗特異性超強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞活性，化療藥物雖作用顯著，但大都因靶向識別性差，至使癌細(xì)胞與正常細(xì)胞一同毒殺，患者服用后的免疫防御機(jī)能遭受不同層度的破壞。超強(qiáng)抗癌活性的虎眼萬年青皂甙 OSW-I，具有親和性和識別性，與癌細(xì)胞過度聚合，攻擊和破壞癌細(xì)胞DNA的活性，阻斷癌細(xì)胞新生微毛細(xì)血管的供氧與擴(kuò)散的通路，誘導(dǎo)并殺傷癌細(xì)胞，其極強(qiáng)的靶向性，直接作用了腫瘤細(xì)胞微管蛋白，阻斷癌細(xì)胞有絲分裂，抑制癌細(xì)胞復(fù)制，破壞腫瘤細(xì)胞新生血管形成， 又不損傷正常細(xì)胞。OSff-I的超強(qiáng)識別性，能夠迅速識別T細(xì)胞，由于T細(xì)胞壁的電子分布高低、密度與OSW-I極性與非極性部位的拓?fù)鋵W(xué)特性相匹配，而且細(xì)胞膜的主體組成物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)與SOW-I有著驚人的相似之處，于是OSW-I的穿透力得到了最大程度的發(fā)揮，極易輕松進(jìn)入到T細(xì)胞核內(nèi)，脫掉糖苷和水分，生成新的物質(zhì)一有著高密度細(xì)胞毒活性的中間體、E-環(huán)氧碳稀離子(E-carbeniutn ions), E-環(huán)氧碳稀離子將直接刺激T細(xì)胞的抗癌活性反應(yīng),具體方式為(I) CD4+細(xì)胞的抗腫癌作用輔助T細(xì)胞的表面標(biāo)志物CD4+是以增生擴(kuò)散來激活其類的免疫細(xì)胞并產(chǎn)生直接免疫反應(yīng)。OSW-I能輔助CTL細(xì)胞的作用，能夠強(qiáng)化正常細(xì)胞的免疫功能，同時(shí)CD4+成為正常細(xì)胞厚厚的一層免疫保護(hù)層，對正常細(xì)胞直接產(chǎn)生免疫防御作用。(2)增強(qiáng)baT細(xì)胞的抗腫瘤作用baT細(xì)胞的表面標(biāo)志物是CD8+，能對產(chǎn)生特殊抗原反應(yīng)的目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行毒殺， OSff-I能將物化的CD8+激活和識別特異性抗原能力，被活化的CD8+像追擊導(dǎo)彈一樣，保持超靈敏的識別性和指向性，可迅速識別游離在淋巴液中游離態(tài)的病灶因子，當(dāng)CD8+和腫瘤細(xì)胞同歸于盡，破壞腫瘤營養(yǎng)庫經(jīng)脈組織，直接殺傷腫瘤細(xì)胞，直至分解、消失。令人嘆服的是，CD8+在毒殺腫瘤細(xì)胞的同時(shí),對正常細(xì)胞確沒有任何毒副作用。(3) dgT細(xì)胞的抗腫瘤作用OSff-I能增強(qiáng)dgT細(xì)胞抗腫瘤作用，促進(jìn)dgT細(xì)胞分泌多種Thl細(xì)胞因子并參與免疫調(diào)節(jié)及殺傷腫瘤，同時(shí)也增強(qiáng)了抑制腫瘤因子的數(shù)量，吞噬腫瘤細(xì)胞殘留物，清除細(xì)胞環(huán)境。dgT細(xì)胞被OSW-I極強(qiáng)誘導(dǎo)后，通過分泌IL-4、IL-b激活NK和ΜΦ的抗腫瘤活性， 并可誘導(dǎo)T細(xì)胞直接殺傷腫瘤細(xì)胞活性，促進(jìn)細(xì)胞毒TCL細(xì)胞和自然殺傷NK細(xì)胞的增殖與分化，TCL細(xì)胞的增殖反應(yīng)與分泌，大大增強(qiáng)了細(xì)胞毒TCL和NK細(xì)胞殺傷效應(yīng)。為了防止腫瘤細(xì)胞的生長、復(fù)制與轉(zhuǎn)移，T淋巴細(xì)胞亞群CD4和CD8亞群共同組建了機(jī)體免疫防御體系，對生長復(fù)制的癌細(xì)胞發(fā)揮著重要作用和抑制變異細(xì)胞轉(zhuǎn)癌的有效性。2、紫杉醇的藥物機(jī)理作用紫杉醇是從紅豆杉全株中無毒提取的一種強(qiáng)抗癌活性烷二萜類化合物-紫杉醇 (TaXOl)，紫杉醇與細(xì)胞受體后，釋方出的TNF-a抑制因子，通過腫瘤新生血管和胞膜進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，誘導(dǎo)并促進(jìn)微管的裝配和穩(wěn)定微管蛋白的作用，致使快速分裂的腫瘤細(xì)胞在有絲分裂G2/m階段被牢牢固定，免疫應(yīng)答及修復(fù)應(yīng)答信號失去攻能作用，破壞了端粒酶的活性，癌細(xì)胞中的DNA (脫氧核糖核酸)失去端粒酶的保護(hù)，則會停止分裂與復(fù)制而萎縮凋亡。紫杉醇的功能性作用是任何植物抗癌藥物和生物堿中抑癌活性最強(qiáng)、最有效的一種抗癌藥物，而且無毒處理后的紫杉醇對正常細(xì)胞無毒副作用，其抑癌活性極強(qiáng)。3、超氧化物歧化酶(SOD)的輔助抑癌作用SOD是人體內(nèi)過剩自由基的消除劑。自由基是人體需氧化物生命過程中的多種生化反應(yīng)中間代謝產(chǎn)物，是機(jī)體免疫防御系統(tǒng)中一種重要催化酶。當(dāng)人體因各種藥物、輻射、 煙酒、環(huán)境、食物和飲用水等因素產(chǎn)生過多自由基或因免疫力低下導(dǎo)致自由基清除過慢時(shí)， 過剩的氧自由基和羥自由基就會趁機(jī)直入，攻擊和氧化正常細(xì)胞膜及各細(xì)胞器官造成機(jī)體在分子水平、細(xì)胞水平以及組織水平的各種損傷，并誘發(fā)包括腫瘤在內(nèi)的各種疾病。自由基清除劑SOD是一類能夠清除機(jī)體中過多自由基活性物質(zhì)，也是超氧陰離子自由基(0_2)為底物的一種金屬酶，其摧化反應(yīng)為Ο、2+0-, 2. 2H+S0D, H202+02,即SOD能推化0_，2-歧化，并由此而得名。由于SOD能夠清除0_，所以在防御氧陰離子自由基毒性、抗輻射對細(xì)胞的損傷以及預(yù)防細(xì)胞衰老等方面起著極其重要的作用。它通過上述反應(yīng)可把機(jī)體內(nèi)有害的超氧陰離子自由基O2和羥自由基OH轉(zhuǎn)化為過氧化氫，盡管過氧化氫對正常細(xì)胞仍是有害的活性氧，但體內(nèi)活性極強(qiáng)的過氧化物氫酶(CAT)和過氧化物酶(PLD)會立即將其分解為安全無害的水。因此，這三種酶也就構(gòu)成了一個(gè)完整的抗氧化防御鏈。SOD雖然沒有直接殺傷腫瘤細(xì)胞的功能，但輔助虎眼萬年青皂甙和紫杉醇烷二萜類化合物強(qiáng)抑癌活性的作用，能夠有效的減少正常細(xì)胞變異和變異細(xì)胞轉(zhuǎn)癌的機(jī)制，同時(shí)， 使體內(nèi)的過剩自由基消除掉，并隨體液而排除體外。4、虎眼萬年青皂甙OSW-I 口服抗癌制劑的組配方法(I)膠囊虎眼萬年青皂甙OSW-I結(jié)晶粉100g、含量為60%，紫杉醇結(jié)晶粉80%、含量為 10%，超氧化物歧化酶SOD粉60g、20000IU/g。
將其全部放進(jìn)三維藥物混合機(jī)內(nèi)，混合3min后取出，過篩100目，然后在放入膠囊機(jī)物料容器內(nèi)裝充硬膠囊，共計(jì)容裝600粒，每粒含虎眼萬年青皂甙O. 165g、紫杉醇 O. 135g、S0D0. lg，合計(jì)O. 4g/粒，成人每天口服3次，每次2粒。⑵口服液虎眼萬年青皂甙OSW-I結(jié)晶粉100g、含量為60 %，紫杉醇結(jié)晶粉80g、含量為 10 %，SOD 粉 60g、20000IU/g，蒸餾水 2300ml，聚乙二醇 400、24ml，蜂膠 600g,冰糖粉 150g， 異抗壞血酸鈉粉300mg。將蒸餾水2300ml放入一不銹鋼容器內(nèi)，間接加熱40°C，加入冰糖粉150g，異抗壞血酸鈉粉300mg，充分?jǐn)噭颍淙咳芙夂?，加入聚乙二?00、24ml，攪拌成微乳狀時(shí)， 再加入虎眼萬年青皂甙0SW-I、結(jié)晶粉100g，再攪拌lOmin，制成3000ml水紅色微乳狀時(shí)， 用吸管將其輸送到口服液灌裝機(jī)密封的物料容器內(nèi)，進(jìn)行自動(dòng)灌裝，共計(jì)灌裝300支，每支 10ml，每支內(nèi)含虎眼萬年青皂甙0SW-I、0. 333g，紫杉醇0. 27g，S0D0. 2g。成人每天口服3次， 每次I支。5、急性毒性試驗(yàn)⑴LD5tl 試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康厥怯^查虎眼萬年青皂甙OSW-I膠囊、口服液灌胃給藥后，對小鼠產(chǎn)生的急毒反應(yīng)，預(yù)測其臨床用藥的安全性。實(shí)驗(yàn)鼠為上海ICR種小鼠。A組用膠囊粉與聚乙二醇 400稀釋成2. 4g/kg，B組用口服液灌胃給藥30ml/kg。灌胃前停食10小時(shí)，所有實(shí)驗(yàn)組在給藥7d內(nèi)均未發(fā)現(xiàn)I只死亡，未測出LD5tl致死量。(2)最大耐受量試驗(yàn)A組用稀釋的膠囊粉給藥2. 4g/kg,B組用口服液灌胃給藥30ml/kg,—天內(nèi)灌胃2 次，總劑量為A組4. 8g/kg,B組60ml/kg,此劑量相當(dāng)于成人按60kg體重計(jì)算,是口服劑量
0.04g/kg的120倍，給藥后7d內(nèi)無一只鼠死亡和明顯的毒性反應(yīng)。因此，小鼠的最大耐受量為成人臨床擬日用劑量的120倍。6、長期毒性試驗(yàn)(I)虎眼萬年青皂甙OSW-I膠囊的長毒試驗(yàn)，小鼠按臨床劑量10倍的量灌胃3個(gè)月，結(jié)果給藥后90天內(nèi)進(jìn)食量，活動(dòng)量和體重與對照組相比均無明顯差異；所測定的生化、 血象等指標(biāo)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理也無明顯差異，對心、肝、脾、腎等器官進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀查，實(shí)驗(yàn)組與對照組均居正常，說明虎眼萬年青皂甙0SW-1膠囊灌胃給藥對小鼠無毒副作用，也未發(fā)現(xiàn)由藥物而引起的病理性改變，試驗(yàn)表明無長期性毒性。7、特殊毒理試驗(yàn)(I)細(xì)胞遺傳毒性——微核及染色體畸變；按國家有關(guān)測試范圍進(jìn)行測試，虎眼萬年青OSW-I膠囊、口服液各給藥劑量組小鼠骨髓的微核及染色體數(shù)目、結(jié)構(gòu)均無異常。(2)誘變試驗(yàn)虎眼萬年青皂甙OSW-I膠囊、口服液用國家規(guī)定的全套菌株進(jìn)行誘變性析測(Ames試驗(yàn))，結(jié)果檢品對各菌株在各個(gè)劑量范圍內(nèi)的回變數(shù)均與其它自發(fā)回變數(shù)接近，均未達(dá)到可判斷的回變陽性標(biāo)準(zhǔn)，也無劑量效應(yīng)關(guān)系。因此，虎眼萬年青OSW-I膠囊口服液未見誘變作用。8、免疫試驗(yàn)用虎眼萬年青皂甙OSW-I膠囊進(jìn)行特異性和非特異性鼠體內(nèi)、外的體液與細(xì)胞免疫試驗(yàn)，證實(shí)虎眼萬年青皂甙OSW-I膠囊對ΜΦ巨噬細(xì)胞的吞噬功能有極為顯著的促進(jìn)作用，能增強(qiáng)T細(xì)胞免疫活性，對臍血活性花環(huán)形成試驗(yàn)(EaRFC)及移植物抗宿主反應(yīng)(GVHR) 有增進(jìn)影響，對a、r干擾素誘生以及a干擾素促NK細(xì)胞活性有協(xié)同作用，能夠提高特異性抗體產(chǎn)生，促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞DNA合成。說明它能較明顯的促進(jìn)機(jī)體免疫機(jī)能。還能提高血清中血紅蛋白含量，對紅血球生長有一定的作用。9、體外誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞凋亡對端粒酶活性的影響用2. 4g虎眼萬年青膠囊粉與聚乙二醇400、Iml稀釋后，處理SGC-2961細(xì)胞后，用 MTT法測定胃癌細(xì)胞株的生長與抑制率，通過形態(tài)學(xué)觀查及流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率。結(jié)果，虎眼萬年青皂甙OSW-I膠囊稀釋液對胃癌細(xì)胞具有極為強(qiáng)烈的抑制作用， 且呈時(shí)間依賴及劑量依賴性，光鏡及流式細(xì)胞術(shù)分析表明，2. 4g的OSW-I膠囊稀釋劑處理 72小時(shí)后觀查，細(xì)胞即出現(xiàn)極為明顯的凋亡形態(tài)特征及凋亡峰，對端粒酶活性的同步檢測結(jié)果顯示，在誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡的同時(shí)也伴隨著端粒酶活性的下調(diào)，且隨藥物濃度增加其抑制作用也逐漸增強(qiáng)。處理12小時(shí)為72-89%，處理24小時(shí)為76-91 %，處理48小時(shí)為 83-95%，處理72小時(shí)為89-98%，即起變?yōu)殛幮?。只要處理時(shí)間延長其抑制作用就會逐漸增強(qiáng)。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)還顯示出，只要時(shí)間足夠，即使偏小劑量或極小含量的虎眼萬年青皂甙OSW-I膠囊也能對SGC-2961細(xì)胞株增殖產(chǎn)生極強(qiáng)烈的抑制效果。其抑制率為100%，抑癌率為98%，通過藥效學(xué)研究統(tǒng)計(jì)表明，O. 04g的0SW-1對腫瘤轉(zhuǎn)移及抑制率高達(dá)98%，是環(huán)磷酰胺30mg的1000倍。10、臨床應(yīng)用(I)通過多名患有肺癌、淋巴癌、胃癌、乳腺癌、肝癌患者志愿服用虎眼萬年青皂甙 OSff-I膠囊、口服液，連服3個(gè)月后，抑癌效果極為顯著。尤其是一位肝癌患者，初檢瘤塊
O.98-1. 63cm多塊大小不一的瘤塊，AFP陽性為7011，服用虎眼萬年青皂甙OSW-I膠囊I個(gè)月，AFP陽性降至1082，服用I個(gè)月降至69，服用3個(gè)月后檢查為AFP8. 7，CT檢查腫瘤全部消失，血樣檢查全為陰性，彩超造型病灶無活動(dòng)跡象，而且鎮(zhèn)痛作用較為突出。因此，本發(fā)明虎眼萬年青皂甙OSW-I膠囊可能會改變肝癌目前幾乎束手無策局面。(2)對治療乙型肝炎的作用經(jīng)乙型肝炎患者志愿服用2個(gè)月后，其血清干擾素的誘生作用明顯增強(qiáng)，對乙肝病毒DHBV在用藥后使用HBV-DNA水平顯著下降，3個(gè)月后HBeAg，陽性乙型肝炎患者的五項(xiàng)指標(biāo)全部轉(zhuǎn)陰，說明虎眼萬年青皂甙OSW-I膠囊對慢性乙型肝炎有極為顯著的治療效果。 OSW-I膠囊能夠較好的減輕肝區(qū)疼痛、消除腹脹乏力、改善黃膽、消退腹水、增加體重，無明顯毒副作用表現(xiàn)。另外還能夠阻斷乙肝患者的癌變，而且療效與療程呈正相關(guān)，極為明顯的高于對照組藥物甲基斑胺30倍以上。因此，本發(fā)明虎眼萬年青皂甙OSW-I膠囊、口服液組方科學(xué)，時(shí)間與劑量合理，其抑癌效果是其它植物抗癌藥物作用的30倍以上，而且對人體正常細(xì)胞無毒性，這就為今后的臨床制藥與應(yīng)用奠定了科學(xué)的技術(shù)工藝依據(jù)。
具體實(shí)施例方式虎眼萬年青皂甙OSW-I 口服抗癌制劑及其制備方法，其工藝是
I、虎眼萬年青皂甙OSW-I膠囊將虎眼萬年青皂甙OSW-I結(jié)晶粉100g，紫杉醇結(jié)晶粉80g，SOD粉60g，全部放進(jìn)三維藥物混合機(jī)內(nèi)，混合3min后取出，過篩100目，然后在放入膠囊機(jī)物料容器內(nèi)裝充硬膠
囊，每粒O. 4g。2、虎眼萬年青皂甙OSW-I 口服液將蒸餾水2300ml，放入一不銹鋼容器內(nèi)，間接加熱40°C，加入冰糖粉150g，異抗壞血酸鈉粉300mg，充分?jǐn)噭?，待其全部溶解后，加入聚乙二?00、24ml，攪拌成微乳狀時(shí)，再加入虎眼萬年青皂甙0SW-1結(jié)晶粉100g，紫杉醇粉80g，SOD粉60g，充分?jǐn)嚢鑜Omin，再加入蜂膠600g，再攪拌lOmin，制成3000ml，水紅色微乳狀時(shí)，用吸管將其輸送到口服液灌裝機(jī)密封的物料容器內(nèi)，進(jìn)行自動(dòng)灌裝300支，每支10ml。
權(quán)利要求
1.虎眼萬年青皂甙OSW-I結(jié)晶粉100g，紫杉醇結(jié)晶粉80g，SOD粉60g。
2.蒸餾水2300ml。
3.冰糖150g,異抗壞血酸鈉300mg。
4.聚乙二醇400、24ml。
5.蜂膠600g。
全文摘要
本發(fā)明提出了虎眼萬年青提取的皂甙OSW-I結(jié)晶粉與無毒提取的紫杉醇結(jié)晶粉，輔與SOD粉等為組方的口服抗癌制劑虎眼萬年青皂甙OSW-I膠囊的制備方法以及在臨床應(yīng)用方面，針對多種晚期及聯(lián)合化療失敗的晚后期癌患的應(yīng)用，顯示出了極為強(qiáng)烈的抑癌活性。這種組方的抗癌制劑，生產(chǎn)工藝簡單，理化性質(zhì)穩(wěn)定，抑癌活性極強(qiáng)，對正常細(xì)胞無細(xì)胞毒性。
文檔編號A61K31/337GK102580065SQ201210030339
公開日2012年7月18日 申請日期2012年2月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月13日
發(fā)明者林樹芳 申請人:林樹芳