專(zhuān)利名稱(chēng)：一種由動(dòng)物肝臟水解得到的多肽的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療肝炎、肝硬化疾病的肝水解肽藥物組合物。
背景技術(shù)：
肝水解肽是由健康牛、豬的肝臟經(jīng)酶水解提取制得的含有多肽類(lèi)、氨基酸、核酸類(lèi)的物質(zhì)。肝水解肽有以下主要作用1、保肝、護(hù)肝作用苦參堿可減少肝細(xì)胞損傷，并促進(jìn)其再生，改善肝臟微循環(huán)，以利膽紅素的攝取、結(jié)合與排泄，從而達(dá)到抗炎、保肝護(hù)肝以及退黃降酶的功效，最終使肝病理組織學(xué)得到明顯改善；2、抗病毒苦參堿對(duì)HBV — DNA的復(fù)制有明顯的抑制作用；3、抗腫纖維化主要通過(guò)保護(hù)肝細(xì)胞膜，抑制纖維化因子的釋放，調(diào)控貯脂細(xì)胞(HSO)的功能等多個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)揮抗肝纖維化的作用；4、雙向調(diào)控免疫，有效改善病理性組織；5、抗腫瘤作用主要通過(guò)抑制細(xì)胞膜上Nak — ATP酶并激活腺苷酸環(huán)化酶，進(jìn)而 抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)作用；同時(shí)，苦參堿還可抑制腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附，從而減少腫瘤的轉(zhuǎn)移等；6、毒理試驗(yàn)證實(shí)苦參堿對(duì)動(dòng)物呼吸系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)無(wú)明顯影響，急性毒性LD50為64.4mg / kg。長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)有毒理上的病理?yè)p傷，致突變?cè)囼?yàn)均為陰性，表明本品沒(méi)有明顯毒性。本發(fā)明人研制了一種有效成分含量高的肝水解肽原液的制備方法、藥物質(zhì)量穩(wěn)定性高的肝水解肽藥物組合物及其制備方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種用于治療肝炎、肝硬化疾病、藥物質(zhì)量穩(wěn)定性高的肝水解肽藥物組合物。肝水解肽的治療作用主要取決于成份中的多肽，本發(fā)明藥物組合物的制備過(guò)程中肝水解肽原液的制備方法可以取得較高的多肽含量，肝水解肽原液具體制備方法如下
I、取健康的豬或牛的肝臟，去除非肝臟組織，先用0. 5%的氯化鈉溶液沖洗，洗凈血水，再用無(wú)菌注射用水沖洗3次后絞碎。將絞碎的肝臟與注射用水按I :1. 6 2. 2的質(zhì)量比混合，用高速組織搗碎機(jī)勻漿，將勻漿加熱至45 50°C，恒溫I小時(shí)。2、用KOH將上述勻漿調(diào)pH至7. 5 8. 0，加肝臟質(zhì)量的0. 4%的胰酶，保持45 500C，連續(xù)恒溫水解8小時(shí)，期間保持pH在7. 5 8. 0之間。用HCL將上述水解液調(diào)pH至
2.5 3. 0，按每IL水解液加入4g胃蛋白酶的比例加入胃蛋白酶，保持40 45°C，水解6小時(shí)，期間保持pH在2. 5 3. 0之間。3、往水解液中加入0. 1% (g/ml)的活性炭，邊攪拌邊加熱至90 95°C，保持30分鐘，迅速冷卻至室溫，用0. 45 y m濾膜過(guò)濾除炭，4000rpm離心25分鐘，取上清液，將上清液調(diào)pH至6. 2 6. 5之間，保持38 42°C放置12小時(shí)，用0. 22 y m濾膜過(guò)濾，10000分子量超濾膜超濾得肝水解肽原液，測(cè)定多肽含量。本發(fā)明還提供了肝水解肽藥物組合物，由肝水解肽原液、右旋糖酐40和羧甲基纖維素鈉按下述包括以下步驟的方法制備而成1.將上述肝水解肽原液配制成水溶液，使IOOmL水溶液含2000mg多肽，加入右旋糖酐40和羧甲基纖維素鈉，使右旋糖酐40的含量為10g/100mL和羧甲基纖維素鈉的含量為
0.05g/100mL，調(diào)節(jié)pH值為6. 0 7. 0，用超濾器過(guò)濾；
2.無(wú)菌分裝于西林瓶中；
3.冷凍干燥
①預(yù)凍將步驟2中分裝溶液半加塞置于預(yù)先降溫至一30°C 一 35°C冷凍箱內(nèi)，保持I小時(shí)，勻速降溫至一 52°C 一 47°C，保溫3小時(shí)；
②升華開(kāi)啟真空裝置，控制真空度14 16Pa，勻速升溫(彡I0C/min)至一 30°C 一260C ;在此溫度保持2小時(shí)，I小時(shí)內(nèi)勻速升溫至一 15°C 一 12°C，在此溫度保持10小時(shí)；
③干燥4小時(shí)內(nèi)，勻速升溫至25°C，干燥6小時(shí)，密塞軋蓋，包裝得肝水解肽藥物組合物。上述步驟3①中的勻速降溫速度彡I0C /min ;步驟3②中勻速升溫至一 30°C 一26°C的升溫速度彡I0C /min。發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)按照上述工藝制備肝水解肽原液跟現(xiàn)有技術(shù)相比具有較高的多肽含量。本發(fā)明提供以下試驗(yàn)及對(duì)比結(jié)果
I、樣品I (按照CN100542602C方法制備的肝水解肽原液)
2、樣品2(按照CN102228676A方法制備的肝水解肽原液)
3、樣品3(按照CN101091722A方法制備的肝水解肽原液)
4.樣品4(按照CN1903357B方法制備的肝水解肽原液)
5、樣品5 (本發(fā)明制備的肝水解肽原液)
以上樣品制備過(guò)程中的原料肝臟為同一來(lái)源，混合均勻的新鮮、健康肝臟。將樣品I 5分別按照福林酚法測(cè)定多肽含量，結(jié)果見(jiàn)表I :
表I多肽含量比較
權(quán)利要求
1.肝水解肽原液，由下法制得 (1)取健康的豬或牛的肝臟，去除非肝臟組織，先用O.5g/100ml的氯化鈉溶液沖洗，洗凈血水，再用無(wú)菌注射用水沖洗3次后絞碎；將絞碎的肝臟與注射用水按I :1. 6 2. 2的質(zhì)量比混合，用高速組織搗碎機(jī)勻漿，將勻漿加熱至45 50°C，恒溫I小時(shí)； (2)用KOH將上述勻漿調(diào)pH至7.5 8. 0，加肝臟質(zhì)量的O. 4%的胰酶，保持45 50°C，連續(xù)恒溫水解8小時(shí)，期間保持pH在7. 5 8. O之間，得水解液I ;用HCL將上述水解液I調(diào)pH至2. 5 3. 0，按每IL水解液I加入4g胃蛋白酶的比例加入胃蛋白酶，保持40 450C，水解6小時(shí)，期間保持pH在2. 5 3. O之間，得水解液II ； (3)往水解液II中加入O.lg/100ml的活性炭，邊攪拌邊加熱至90 95°C，保持30分鐘，迅速冷卻至室溫，用O. 45 μ m濾膜過(guò)濾除炭，4000rpm離心25分鐘，取上清液，將上清液調(diào)pH至6. 2 6. 5之間，保持38 42°C放置12小時(shí)，用O. 22 μ m濾膜過(guò)濾，10000分子量超濾膜超濾得肝水解肽原液。
2.肝水解肽藥物組合物，其特征在于由權(quán)利要求I所述的肝水解肽原液、右旋糖酐40和羧甲基纖維素鈉按下述方法制備而成 (1)將權(quán)利要求I所述肝水解肽原液配制成水溶液，使IOOmL水溶液含2000mg多肽，加入右旋糖酐40和羧甲基纖維素鈉，使右旋糖酐40的含量為10g/100mL和羧甲基纖維素鈉的含量為O. 05g/100mL,調(diào)節(jié)pH值為6. O 7. 0，用超濾器過(guò)濾； (2)無(wú)菌分裝于西林瓶中； (3)冷凍干燥 ①預(yù)凍將(2)中分裝溶液半加塞置于預(yù)先降溫至一30°C 一 35°C冷凍箱內(nèi)，保持I小時(shí)，勻速降溫至一 52°C 一 47°C，保溫3小時(shí)； ②升華開(kāi)啟真空裝置，控制真空度14 16Pa，勻速升溫至一30°C 一 26°C ;在此溫度保持2小時(shí)，I小時(shí)內(nèi)勻速升溫至一 15°C 一 12°C，在此溫度保持10小時(shí)； ③干燥4小時(shí)內(nèi)，勻速升溫至25°C，干燥6小時(shí)，密塞軋蓋，包裝得肝水解肽藥物組合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的肝水解肽藥物組合物，其特征在于步驟(3)①中的勻速降溫速度彡I0C /min ;步驟(3)②中勻速升溫至一 30°C 一 26°C的升溫速度彡1°C /min。
4.權(quán)利要求2所述肝水解肽藥物組合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 (1)將權(quán)利要求I所述肝水解肽原液配制成水溶液，使IOOmL水溶液含2000mg多肽，加入右旋糖酐40和羧甲基纖維素鈉，使右旋糖酐40的含量為10g/100mL和羧甲基纖維素鈉的含量為O. 05g/100mL,調(diào)節(jié)pH值為6. O 7. 0，用超濾器過(guò)濾； (2)無(wú)菌分裝于西林瓶中； (3)冷凍干燥 ①預(yù)凍將(2)中分裝溶液半加塞置于預(yù)先降溫至一30°C 一 35°C冷凍箱內(nèi)，保持I小時(shí)，勻速降溫至一 52°C 一 47°C，保溫3小時(shí)； ②升華開(kāi)啟真空裝置，控制真空度14 16Pa，勻速升溫至一30°C 一 26°C ;在此溫度保持2小時(shí)，I小時(shí)內(nèi)勻速升溫至一 15°C 一 12°C，在此溫度保持10小時(shí)； ③干燥4小時(shí)內(nèi)，勻速升溫至25°C，干燥6小時(shí)，密塞軋蓋，包裝得肝水解肽藥物組合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于步驟(3)①中的勻速降溫速度(I0C /min ;步驟(3)②中勻速升溫至一30°C 一26°C的升溫速度彡1°C /min。
全文摘要
本發(fā)明提供一種由動(dòng)物肝臟水解得到的多肽的藥物組合物，該藥物組合物用于治療肝炎、肝硬化疾病。所述藥物組合物由肝水解肽原液、右旋糖酐40和羧甲基纖維素鈉制備而成將肝水解肽原液配制成水溶液，加入右旋糖酐40和羧甲基纖維素鈉，用超濾器過(guò)濾；冷凍干燥。所述肝水解肽原液由下法制得取健康的豬或牛的肝臟，沖洗后絞碎。將絞碎的肝臟與注射用水混合，勻漿，調(diào)pH，加胰酶，恒溫水解，調(diào)水解液pH，加入胃蛋白酶，水解。往水解液中加入活性炭，濾膜過(guò)濾除炭，離心，取上清液，調(diào)pH，過(guò)濾，超濾得肝水解肽原液。本發(fā)明肝水解肽原液具有較高的多肽含量。本發(fā)明的肝水解肽藥物組合物質(zhì)量好，具有較好的復(fù)溶性和穩(wěn)定性。
文檔編號(hào)A61P1/16GK102764423SQ20121029614
公開(kāi)日2012年11月7日 申請(qǐng)日期2012年8月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月20日
發(fā)明者曾藝, 胡成忠 申請(qǐng)人:湖北濟(jì)生醫(yī)藥有限公司