專利名稱：一種銀杏葉中高純度黃酮組分的高效提取分離制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種銀杏葉中高純度黃酮組分的高效提取分離制備方法。
背景技術(shù)：
銀杏屬銀杏科裸子植物，又叫白果樹、公孫樹，是我國特有的珍貴樹種，也是世界上最古老的樹種，被稱做“活化石”，在我國有著廣泛的分布。銀杏在我國作為藥用已有5000多年的歷史，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)銀杏葉具有降血脂、清除氧自由基、增強神經(jīng)系統(tǒng)功能、調(diào)節(jié)急速水平、抗炎抗過敏等作用，近年來，銀杏葉用作保健食品和植物藥，廣泛用于防治記憶力下降、癡呆及心腦血管疾病。銀杏葉的化學(xué)成分較為復(fù)雜，其主要有效成分為黃酮和內(nèi)酯兩類。到目前為止，國內(nèi)外關(guān)于銀杏葉及其制劑的質(zhì)量監(jiān)控方法主要是測定黃酮醇苷和內(nèi)酯含量，國際標(biāo)準要求銀杏制劑中的銀杏黃酮含量大于24%，銀杏內(nèi)酯含量大于6%。關(guān)于銀杏葉及其制劑中黃酮含量的測定方法，目前都是在水解的基礎(chǔ)上，以槲皮素、山奈酚、異鼠李素三種黃酮苷元為對照，利用HPLC方法測定三種苷元的量，再乘以系數(shù)2.51計算得到的。這一系數(shù)是根據(jù)銀杏葉總黃酮苷中認為活性強的香豆?；S酮醇苷的平均分子量760與苷元的分子量進行換算，是 建立在假設(shè)銀杏葉中所有的黃酮醇苷分子量都是760的基礎(chǔ)上，而實際上它只占銀杏黃酮的一小部分。為了達到銀杏黃酮24%的含量，個別銀杏葉提取物會有人為添加蘆丁的現(xiàn)象。同時，利用水解的方法測定銀杏黃酮的含量，水解時間長，耗時費力，并且水解的條件如鹽酸的濃度與加熱時間會影響水解的程度，可能會出現(xiàn)水解不完全或水解過度，影響測定結(jié)果。為了提高銀杏葉及其制劑的質(zhì)量，同時能夠充分體現(xiàn)銀杏葉中黃酮醇苷的真實含量與成分，從而達到在生產(chǎn)和制劑過程中質(zhì)量均一性，需要發(fā)展一種銀杏葉提取制備方法，將銀杏黃酮有效組分制備出來，明確成分，不需要水解便能直接測得它的真實含量，以此為指標(biāo)，監(jiān)測生產(chǎn)中每一步銀杏黃酮的含量，可以提高產(chǎn)品的質(zhì)量及穩(wěn)定性。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述缺陷，本發(fā)明提供一種能夠?qū)y杏黃酮有效組分制備出來，明確成分，不需要水解便能直接測得它的真實含量，并且提高產(chǎn)品的質(zhì)量及穩(wěn)定性的銀杏葉中高純度黃酮組分的高效提取分離制備方法。為解決上述問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種銀杏葉中高純度黃酮組分的高效提取分離制備方法，其特征在于:步驟如下:1)、提取:稱取含水量為1%_10%的銀杏葉，加入其重量8-12倍，濃度為10%_50%乙醇，20-50°C浸泡提取2-5次，每次1-5天，合并提取液，將提取液濃縮得到相對密度為1.15-1.25 的浸膏；
2)、醇沉:將浸膏中加入乙醇使乙醇體積濃度達到50-70%，并充分攪拌，0-4°C冷藏靜置12-36小時，過濾，將濾液濃縮至相對密度為1.10-1.25的浸膏；再加入乙醇使乙醇體積濃度達到70-90%，并充分攪拌，0-4°C冷藏靜置12-48小時過濾，將濾液濃縮揮發(fā)除去乙醇，濃縮得到相對密度為1.15-1.25的浸膏；3)、水沉:將醇沉完的浸膏中按照1:5-1:10的體積比加入水，充分攪拌，0-4°C冷藏靜置24-240小時，過濾，樣品溶液經(jīng)過10000-25000轉(zhuǎn)/分鐘的高速離心機離心，樣品濃縮至相對密度為1.05-1.10的浸膏；4)、大孔樹脂分離:將水沉完的浸膏上樣于非極性大孔樹脂柱，上樣量與分離材料體積比為1:5-1:50，分別采用不同體積濃度的乙醇水溶液作為洗脫液，分別采用水、體積濃度10-30%乙醇、體積濃度30-60%乙醇和60-90%乙醇洗脫，每次洗脫的體積為3_6個柱體積，流速為1-3個柱體積/小時；收集10-30%乙醇和60-90%乙醇洗脫組分，合并洗脫液并濃縮至相對密度為1.10-1.20的浸膏；5)、新型硅膠基質(zhì)鍵合材料的二維液相色譜制備:以粒徑10-100微米的新型硅膠基質(zhì)鍵合材料為填料，以不同體積濃度的甲醇水溶液作為洗脫液，收集目標(biāo)洗脫組分為一維組分，再以粒徑為5-80微米的新型硅膠基質(zhì)鍵合材料為填料，以不同體積濃度的甲醇水溶液作為洗脫液，收集目標(biāo)洗脫組分為二維組分，干燥處理即為銀杏黃酮組分化合物。進一步地說:所述步驟3)中，提取物水沉工藝結(jié)束后，先通過轉(zhuǎn)速為10000-25000轉(zhuǎn)/分鐘的高速離心機離心，再進行大孔樹脂分離。更進一步地說:所述步驟4)中，大孔樹脂的型號為非極性聚苯乙烯型，大孔樹脂分離洗脫時，其目標(biāo)組分采用體積濃度為10 -30%乙醇和60-90%乙醇溶液洗脫，并將兩種洗脫液合并濃縮。更進一步地說:所述步驟5)中，一維制備采用的洗脫液為不同體積濃度的甲醇水溶液，甲醇的體積濃度變化范圍為15-60%，二維制備采用的洗脫液為不同體積濃度的甲醇水溶液，甲醇的體積濃度變化范圍為10-50%。更進一步地說:所述制備得到的銀杏葉黃酮組分為山奈酚-3-0-2”，6”_ 二鼠李糖基葡萄糖苷，蘆丁，槲皮素葡萄糖基鼠李糖苷，山奈酚-3-0-蕓香糖苷，異鼠李素-3-0-蕓香糖苷，槲皮素對香豆?；咸烟鞘罄钐擒找约吧侥畏訉ο愣辊；咸烟鞘罄钐擒?，其總含量占銀杏葉質(zhì)量的1.0-3.5%，得到的銀杏黃酮組分純度在70%以上，其中山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷占7-11%，蘆丁占8-12%，槲皮素葡萄糖基鼠李糖苷占12-16%，山奈酚-3-0-蕓香糖苷占13-15%，異鼠李素-3-0-蕓香糖苷占15-18%，，槲皮素對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷占9-11%，山奈酚對香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷占6-9%。 由于采用了上述技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下特
占-
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1.銀杏黃酮組分的含量高，成分和含量明確。由于本發(fā)明針對目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)特點，設(shè)計了系統(tǒng)的提取分離制備工藝流程，并使用了大孔樹脂和新型硅膠基鍵合材料，通過二維液相色譜分離制備，得到銀杏黃酮組分純度在70%以上，銀杏黃酮組分中各銀杏黃酮的成分和含量明確，可作為舒血寧注射原料。2.重現(xiàn)性好:本發(fā)明利用提取分離工藝的標(biāo)準化，特別是大孔樹脂柱層析分離的標(biāo)準化，以及新型硅膠基質(zhì)鍵合材料化學(xué)性能的穩(wěn)定性，可以保證分離制備的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性。3.方法簡單易行，操作簡便。本發(fā)明使用的儀器自動化程度高，操作方便、簡單，常溫常壓下就可進行，適合大規(guī)模生產(chǎn)的需要。4.有機殘留低。由于本發(fā)明摒棄了傳統(tǒng)工藝中溶劑萃取、硅膠柱層析等工藝，采用了有機溶劑使用量較少的大孔樹脂分離和新型分離材料，而且最終產(chǎn)品采用干燥處理，所以最終產(chǎn)品的有機溶劑殘留特別小。5.藥材來源廣，易獲得，價格便宜:銀杏是我國特有的珍貴樹種，占全世界資源的70%，銀杏葉的總產(chǎn)量每年在2 X 107kg以上，資源極大豐富。三九牌舒血寧注射液、銀杏葉酊劑作為應(yīng)用時間久、療效明確、使用安全的中藥注射劑，有著廣泛的應(yīng)用，而本發(fā)明制得的銀杏黃酮組分是三九牌舒血寧注射液、銀杏葉酊劑中一種重要的原料。而本發(fā)明提供的制備方法，過程重復(fù)性高，可操作性好，同時銀杏葉資源豐富，容易獲取，適合大規(guī)模生產(chǎn)的要求，可用于舒血寧注射液、銀杏葉酊劑原料銀杏黃酮組分的制備。
具體實施例方式實施例:下面結(jié)合實例，對本發(fā)明做進一步說明。實例僅限于說明本發(fā)明，而非對本發(fā)明的限定。 實施例1:將含水量為6%的銀杏葉原藥材粉碎，定量稱取10千克，置于200L提取罐加入重量100千克40%乙醇溶液，30°C浸泡提取3次，每次2天，合并提取液，將提取液濃縮得到相對密度為1.21的浸膏3.6L。將浸膏中加入乙醇使乙醇體積濃度達到60%，并攪拌30分鐘，4°C冷藏靜置24小時，過濾，將濾液濃縮至相對密度為1.15的浸膏；再加入乙醇使乙醇體積濃度達到80%，并充分攪拌30分鐘，4°C冷藏靜置48小時過濾，將濾液濃縮揮發(fā)除去乙醇，濃縮得到相對密度為1.17的浸膏2.8L。將醇沉完的浸膏中按照1:6的體積比加入水16.8L，充分攪拌30分鐘，4°C冷藏靜置72小時，過濾，樣品溶液經(jīng)過20000轉(zhuǎn)/分鐘的高速離心機離心，樣品濃縮至相對密度為1.07的浸膏2.5L.
將水沉完的浸膏上樣于XAD-4型非極性大孔樹脂柱，大孔樹脂分離材料體積為25L,分別采用150L水、120L體積濃度20%乙醇、90L體積濃度50%乙醇和90L 80%乙醇洗脫，流速為2個柱體積/小時；收集20%乙醇和80%乙醇洗脫組分，合并洗脫液并濃縮至相對密度為1.10的浸膏1.1L ；稱取粒徑40微米的新型娃膠基質(zhì)鍵合材料3千克,裝柱,柱徑100mm,柱長380mm,分別用10L15%甲醇水溶液、16L55%甲醇水溶液洗脫，收集55%洗脫組分，加熱濃縮為一維組分，稱取粒徑30微米的新型娃膠基質(zhì)鍵合材料3千克,裝柱,柱徑80mm,柱長300mm,分別用10L10%甲醇水溶液、20L30%甲醇水溶液洗脫，收集30%洗脫組分，加熱濃縮，真空干燥處理即為7種銀杏葉黃酮組分120克，純度為90%，約占銀杏葉質(zhì)量的1.2%。銀杏黃酮組分含量分別山奈酚-3-0-2”，6”-二鼠李糖基葡萄糖苷12g，占組分的10%，蘆丁 14.4g，占組分的12%，槲皮素葡萄糖基鼠李糖苷18g，占組分的15%，山奈酚-3-0-蕓香糖苷占18g，占組分的15%，異鼠李素-3-0-蕓香糖苷21.6g，占組分的18%，，槲皮素對香豆?；咸烟鞘罄钐擒?br> 13.2g，占組分的11%，山奈酚對香豆?；咸烟鞘罄钐擒?0.Sg,占組分的9%。可制成舒血寧注射液25000支。實施例2:將含水量為2%的銀杏葉原藥材粉碎，定量稱取2千克，置于50L提取罐加入重量18千克20%乙醇溶液，45°C浸泡提取5次，每次I天，合并提取液，將提取液濃縮得到相對密度為1.15的浸膏1.1L。將浸膏中加入乙醇使乙醇體積濃度達到50%，并攪拌30分鐘，4°C冷藏靜置36小時，過濾，將濾液濃縮至相對密度為1.12的浸膏；再加入乙醇使乙醇體積濃度達到85%，并充分攪拌30分鐘，4°C冷藏靜置24小時過濾，將濾液濃縮揮發(fā)除去乙醇，濃縮得到相對密度為1.24的浸膏0.7L。將醇沉完的浸膏中按照1:10的體積比加入水7L，充分攪拌30分鐘，4°C冷藏靜置240小時，過濾，樣品溶液經(jīng)過25000轉(zhuǎn)/分鐘的高速離心機離心，樣品濃縮至相對密度為1.09 的浸膏 0.35L。

將水沉完的浸膏上樣于XAD-1600型非極性大孔樹脂柱，大孔樹脂分離材料體積為15L，分別采用60L水、50L體積濃度30%乙醇、60L體積濃度40%乙醇和80L 75%乙醇洗脫，流速為1.6個柱體積/小時；收集30%乙醇和75%乙醇洗脫組分，合并洗脫液并濃縮至相對密度為1.08的浸膏0.23L ；稱取粒徑10微米的新型硅膠基質(zhì)鍵合材料0.7千克，裝柱，柱徑70mm，柱長210mm，分別用3.5L12%甲醇水溶液、4L25%甲醇水溶液洗脫，收集25%洗脫組分，加熱濃縮得到一維組分，稱取粒徑5微米的新型娃膠基質(zhì)鍵合材料I千克，裝柱，柱徑100mm,柱長250mm,分別用3.5L12%甲醇水溶液、4L50%甲醇水溶液洗脫，收集50%洗脫組分，真空干燥處理即為7種銀杏葉黃酮組分，得到的銀杏黃酮組分31克，純度為92%，約占銀杏葉質(zhì)量的1.55%。銀杏黃酮組分含量分別山奈酚-3-0-2”，6”-二鼠李糖基葡萄糖苷3.4g，占組分的11%，蘆丁 3.72g，占組分的12%，槲皮素葡萄糖基鼠李糖苷4.96g，占組分的16%，山奈酚-3-0-蕓香糖苷占4.65g，占組分的15%，異鼠李素-3-0-蕓香糖苷5.58g，占組分的18%，槲皮素對香豆?；咸烟鞘罄钐擒?.41g，占組分的11%，山奈酚對香豆?；咸烟鞘罄钐擒?.79g，占組分的9%。可制成舒血寧注射液6500支。實施例3:將含水量為9%的銀杏葉原藥材粉碎，定量稱取25千克，置于500L提取罐加入重量300千克50%乙醇溶液，50°C浸泡提取2次，每次5天，合并提取液，將提取液濃縮得到相對密度為1.23的浸膏7.9L。將浸膏中加入乙醇使乙醇體積濃度達到70%，并攪拌30分鐘，4°C冷藏靜置15小時，過濾，將濾液濃縮至相對密度為1.14的浸膏；再加入乙醇使乙醇體積濃度達到85%，并充分攪拌30分鐘，4°C冷藏靜置40小時過濾，將濾液濃縮揮發(fā)除去乙醇，濃縮得到相對密度為1.19的浸膏4.6L。將醇沉完的浸膏中按照1:8的體積比加入水36.8L，充分攪拌30分鐘，4°C冷藏靜置120小時，過濾，樣品溶液經(jīng)過20000轉(zhuǎn)/分鐘的高速離心機離心，樣品濃縮至相對密度為1.06的浸膏7.4L。將水沉完的浸膏上樣于X-5型非極性大孔樹脂柱，大孔樹脂分離材料體積為200L,分別采用1000L水、700L體積濃度25%乙醇、1100L體積濃度40%乙醇和600L 90%乙醇洗脫，流速為2個柱體積/小時；收集25%乙醇和90%乙醇洗脫組分，合并洗脫液并濃縮至相對密度為1.12的浸膏3.3L ；稱取粒徑100微米的新型硅膠基質(zhì)鍵合材料9千克，裝柱，柱徑200mm，柱長295mm，分別用30L16%甲醇水溶液、20L60%甲醇水溶液洗脫，收集60%洗脫組分，加熱濃縮為一維組分。稱取粒徑80微米的新型硅膠基質(zhì)鍵合材料10千克，裝柱，柱徑250mm，柱長300mm,分別用20L20%甲醇水溶液、25L50%甲醇水溶液洗脫，收集50%洗脫組分，真空干燥處理即為7種銀杏葉黃酮組分，得到的銀杏黃酮組分400克，純度為80%，約占銀杏葉質(zhì)量的1.6%。銀杏黃酮組分含量分別山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷32g，占組分的8%，蘆丁 40g，占組分的10%，槲皮素葡萄糖基鼠李糖苷52g，占組分的13%，山奈酚-3-0-蕓香糖苷占56g，占組分的14%，異鼠李素-3-0-蕓香糖苷64g，占組分的16%，槲皮素對香豆?；咸烟鞘罄钐擒?0g， 占組分的10%，山奈酚對香豆?；咸烟鞘罄钐擒?6g，占組分的9%?？芍瞥墒嫜獙幾⑸湟?6000支。實施例4:將含水量為8%的銀杏葉原藥材粉碎，定量稱取5千克，置于100L提取罐加入重量60千克30%乙醇溶液，30°C浸泡提取4次，每次5天，合并提取液，將提取液濃縮得到相對密度為1.17的浸膏2.3L。將浸膏中加入乙醇使乙醇體積濃度達到60%，并攪拌30分鐘，4°C冷藏靜置48小時，過濾，將濾液濃縮至相對密度為1.18的浸膏；再加入乙醇使乙醇體積濃度達到80%，并充分攪拌30分鐘，4°C冷藏靜置24小時過濾，將濾液濃縮揮發(fā)除去乙醇，濃縮得到相對密度為1.16的浸骨1.51L。將醇沉完的浸膏中按照1:9的體積比加入水13.6L，充分攪拌30分鐘，4°C冷藏靜置72小時，過濾，樣品溶液經(jīng)過15000轉(zhuǎn)/分鐘的高速離心機離心，樣品濃縮至相對密度為1.09的浸膏1.4L。將水沉完的浸膏上樣于HP-20型非極性大孔樹脂柱，大孔樹脂分離材料體積為50L,分別采用300L水、250L體積濃度15%乙醇、200L體積濃度55%乙醇和250L 75%乙醇洗脫,流速為I個柱體積/小時；收集15%乙醇和75%乙醇洗脫組分，合并洗脫液并濃縮至相對密度為1.11的浸膏0.57L ；稱取粒徑50微米的新型硅膠基質(zhì)鍵合材料1.6千克，裝柱，柱徑100mm，柱長205mm,分別用6L14%甲醇水溶液、10L55%甲醇水溶液洗脫，收集55%洗脫組分，加熱濃縮得一維組分，稱取粒徑60微米的新型硅膠基質(zhì)鍵合材料5千克，裝柱，柱徑150mm，柱長200mm,分別用8L10%甲醇水溶液、10L30%甲醇水溶液洗脫，收集30%洗脫組分，真空干燥處理即為7種銀杏葉黃酮組分，得到的銀杏黃酮組分50克，純度為75%，占銀杏葉質(zhì)量的
1.0%。銀杏黃酮組分含量分別山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷4.5g，占組分的9%，蘆丁 5.5g，占組分的11%，槲皮素葡萄糖基鼠李糖苷6g，占組分的12%，山奈酚-3-0-蕓香糖苷占6.5g，占組分的13%，異鼠李素-3-0-蕓香糖苷7.5g，占組分的15%，槲皮素對香豆?；咸烟鞘罄钐擒?.5g，占組分的9%，山奈酚對香豆?；咸烟鞘罄钐擒?g，占組分的6%ο，可制成舒血寧注射液9000支。三九牌舒血寧注射液、銀杏葉酊劑作為應(yīng)用時間久、療效明確、使用安全的中藥注射劑，有著廣泛的應(yīng)用，而本發(fā)明制得的銀杏黃酮組分是三九牌舒血寧注射液、銀杏葉酊劑中一種重要的原料。而本發(fā)明提供的制備方法，過程重復(fù)性高，可操作性好，同時銀杏葉資源豐富，容易獲取，適合大規(guī)模生產(chǎn)的要求，可用于舒血寧注射液、銀杏葉酊劑原料銀杏黃酮組分的制備。申請人:聲明，本發(fā)明通過上述實施例來說明本發(fā)明的詳細工藝流程，單本發(fā)明并不局限于上述詳細工藝流程，即不意味著本發(fā)明必須依賴上述詳細工藝流程才能實施。所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該明了，對本發(fā)明的任何改進，對本發(fā)明產(chǎn)品各原料的等效替換及輔助成分的添加，具體方式 的選擇等，均落在本發(fā)明的保護范圍和公開范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種銀杏葉中高純度黃酮組分的高效提取分離制備方法，其特征在于:步驟如下: 1)提取:稱取含水量為1%-10%的銀杏葉，加入其重量8-12倍，濃度為10%-50%乙醇，20-50°C浸泡提取2-5次，每次1-5天，合并提取液，將提取液濃縮得到相對密度為.1.15-1.25 的浸膏； 2)醇沉:將浸膏中加入乙醇使乙醇體積濃度達到50-70%，并充分攪拌，0-4°C冷藏靜置12-36小時，過濾，將濾液濃縮至相對密度為1.10-1.25的浸膏；再加入乙醇使乙醇體積濃度達到70-90%，并充分攪拌，0-4°C冷藏靜置12-48小時過濾，將濾液濃縮揮發(fā)除去乙醇，濃縮得到相對密度為1.15-1.25的浸膏； 3)水沉:將醇沉完的浸膏中按照1:5-1:10的體積比加入水，充分攪拌，0-4°C冷藏靜置24-240小時，過濾，樣品溶液經(jīng)過10000-25000轉(zhuǎn)/分鐘的高速離心機離心，樣品濃縮至相對密度為1.05-1.10的浸膏； 4)大孔樹脂分離:將水沉完的浸膏上樣于非極性大孔樹脂柱，上樣量與分離材料體積比為1:5-1:50，分別采用不同體積濃度的乙醇水溶液作為洗脫液，分別采用水、體積濃度10-30%乙醇、體積濃度30-60%乙醇和60-90%乙醇洗脫，每次洗脫的體積為3_6個柱體積，流速為1-3個柱體積/小時；收集10-30%乙醇和60-90%乙醇洗脫組分，合并洗脫液并濃縮至相對密度為1.10-1.20的浸膏； 5)新型硅膠基質(zhì)鍵合材料的二維液相色譜制備:以粒徑10-100微米的新型硅膠基質(zhì)鍵合材料為填料，以不同體積濃度的甲醇水溶液作為洗脫液，收集目標(biāo)洗脫組分為一維組分，再以粒徑為5-80微米的新型硅膠基質(zhì)鍵合材料為填料，以不同體積濃度的甲醇水溶液作為洗脫液，收集目標(biāo)洗脫組分為二維組分，干燥處理即為銀杏黃酮組分化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏葉中高純度黃酮組分的高效提取分離制備方法，其特征在于:所述步驟3)中，提取物水沉工藝結(jié)束后，先通過轉(zhuǎn)速為10000-25000轉(zhuǎn)/分鐘的高速離心機離心，再進行大孔樹脂分離。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏葉中高純度黃酮組分的高效提取分離制備方法，其特征在于:所述步驟4)中，大孔樹脂的型號為非極性聚苯乙烯型，大孔樹脂分離洗脫時，其目標(biāo)組分采用體積濃度為10-30%乙醇和60-90%乙醇溶液洗脫，并將兩種洗脫液合并濃縮。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏葉中高純度黃酮組分的高效提取分離制備方法，其特征在于:所述步驟5)中，一維制備采用的洗脫液為不同體積濃度的甲醇水溶液，甲醇的體積濃度變化范圍為15-60%，二維制備采用的洗脫液為不同體積濃度的甲醇水溶液，甲醇的體積濃度變化范圍為10-50%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏葉中高純度黃酮組分的高效提取分離制備方法，其特征在于:所述制備得到的銀杏葉黃酮組分為山奈酚-3-0-2”，6”- 二鼠李糖基葡萄糖苷，蘆丁，槲皮素葡萄糖基鼠李糖苷，山奈酚-3-0-蕓香糖苷，異鼠李素-3-0-蕓香糖苷，槲皮素對香豆?；咸烟鞘罄钐擒找约吧侥畏訉ο愣辊；咸烟鞘罄钐擒?，其總含量占銀杏葉質(zhì)量的.1.0-3.5%，得到的銀杏黃酮組分純度在70%以上，其中山奈酚-3-0-2”，6”-二鼠李糖基葡萄糖苷占7-11%，蘆丁占8-12%，槲皮素葡萄糖基鼠李糖苷占12-16%，山奈酚-3-0-蕓香糖苷占13-15%，異鼠李素-3-0-蕓香糖苷占15-18%，，槲皮素對香豆?；咸烟鞘罄钐擒照?-11%，山奈酚對香豆?；咸烟鞘罄钐擒照?-9%。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種銀杏葉中高純度黃酮組分的高效提取分離制備方法，其主要的成分是山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷，蘆丁，槲皮素葡萄糖基鼠李糖苷，山奈酚-3-O-蕓香糖苷，異鼠李素-3-O-蕓香糖苷，槲皮素對香豆?；咸烟鞘罄钐擒找约吧侥畏訉ο愣辊；咸烟鞘罄钐擒铡Ｆ渲苽浞椒閷y杏葉藥材粉碎后醇水溶液提取，濃縮后濾液經(jīng)非極性大孔吸附樹脂柱層析，再經(jīng)新型硅膠基質(zhì)鍵合材料進行二維分離，用甲醇溶液洗脫，收集洗脫液并濃縮干燥，獲得銀杏黃酮組分。本發(fā)明提高了目標(biāo)成分含量，黃酮組分含量確定。提取分離工藝過程重復(fù)性高、可操作性好，適用于自銀杏葉大規(guī)模分離制備黃酮組分，并可作為舒血寧注射液原料。
文檔編號A61P25/00GK103110670SQ201210407520
公開日2013年5月22日 申請日期2012年10月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月23日
發(fā)明者豐加濤, 付冬梅, 王海濤, 馮志瓊 申請人:北京華潤高科天然藥物有限公司