癌癥的組合治療的制作方法
【專利摘要】一種試劑，其包含具有功能基因的載體、可被所述基因的表達(dá)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性試劑的前藥以及另外的細(xì)胞毒性試劑，其作為組合制品用于在癌癥或特征為受損的錯(cuò)配修復(fù)（MMR）途徑的疾病的治療中同時(shí)、順次或分開(kāi)使用，其中所述給藥方案包含在不晚于所述前藥治療完成后7天開(kāi)始所述另外的細(xì)胞毒性試劑治療。
【專利說(shuō)明】癌癥的組合治療
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及用于治療癌癥或特征為受損的錯(cuò)配修復(fù)(MMR)途徑的疾病的藥物組
口 ο
【背景技術(shù)】
[0002] I型單純皰疹病毒，胸苷激酶(HSV-tk)基因治療是基于可將非毒性化合物例如更昔洛韋(gancivlovir，GCV)轉(zhuǎn)化為毒性代謝物的前藥激活酶。HSV_tk/GCV造成的細(xì)胞破壞是細(xì)胞周期依賴性的，其中僅正在分裂的細(xì)胞受影響。這在腦癌癥基因治療中尤其有利，其中正在迅速分裂的腫瘤細(xì)胞被非分裂的正常腦細(xì)胞包圍。通過(guò)HSV-tk進(jìn)行的治療在EP1135513 中公開(kāi)。
[0003]替莫唑胺(Temozolomide，TMZ，咪唑四嗪酮)是可以穿過(guò)血腦屏障(BBB)的口服烷化劑。替莫唑胺是口服的烷化劑，其是達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)的衍生物。TMZ在生理pH下經(jīng)歷自發(fā)水解為其活性形式3-甲基-(三氮烯-1-基)咪唑-4羧酰胺(MTIC)。細(xì)胞毒性的主要模式是通過(guò)在鳥(niǎo)嘌呤的O6-位置上添加甲基(06-mG)。
[0004]O6-HiG自身對(duì)細(xì)胞是沒(méi)有毒性的。但是，由于通過(guò)錯(cuò)配修復(fù)(MMR)途徑進(jìn)行修復(fù)時(shí)無(wú)效的重復(fù)周期，O6-HiG將變?yōu)榧?xì)胞毒性的。這將最終導(dǎo)致DNA鏈斷裂。已知，當(dāng)不存在起作用的MGMT修復(fù)途徑時(shí)(在50%的惡性膠質(zhì)瘤中發(fā)生)，有功能的MMR途徑對(duì)于使細(xì)胞對(duì)TMZ敏感是必要的。此外，MMR途徑的缺陷可以導(dǎo)致對(duì)烷化劑例如TMZ幾乎100倍的抗性。
[0005]Rainov et al (Cancer Gene Therapy, Vol8, No9, 2001:pp662~668)的論文報(bào)告了一些關(guān)于HSV-tk/GCV基因治療和TMZ化學(xué)治療的組合的實(shí)驗(yàn)，但是其數(shù)據(jù)沒(méi)有顯示出任何令人信服的關(guān)于協(xié)同作用的證據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明是基于這樣的發(fā)現(xiàn)，即HSV-tk基因治療增加了關(guān)鍵錯(cuò)配修復(fù)(MMR)途徑蛋白即MSH2和MLHl的基因表達(dá)。這導(dǎo)致了以下發(fā)現(xiàn):HSV_tk/GCV基因治療使細(xì)胞對(duì)化學(xué)治療劑例如替莫唑胺(TMZ)敏感。
[0007]由本發(fā)明人設(shè)計(jì)的研究確認(rèn)了，載體/前藥基因治療(例如HSV-tk/GCV)和細(xì)胞毒性試劑(cytotoxic agent)的組合,與單獨(dú)使用各個(gè)組分，即使用化學(xué)治療或載體/前藥基因治療時(shí)相比，對(duì)某些疾病有增強(qiáng)的效力(測(cè)試了癌癥，但認(rèn)為這適用于所有特征為受損的MMR途徑的疾病)。
[0008]還發(fā)現(xiàn)，這些組分的給藥方案對(duì)于本發(fā)明中觀察到的令人驚奇的技術(shù)效果即協(xié)同作用是關(guān)鍵的。本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)由載體/前藥基因治療造成的MMR途徑的上調(diào)需要大約2天，并且在停止前藥治療后持續(xù)最多7天。因此，為了看到協(xié)同作用，有必要在不晚于完成前藥治療后7天開(kāi)始給予所述細(xì)胞毒性試劑。
[0009]此外，當(dāng)要治療的病癥的特征為受損的MMR途徑時(shí)，據(jù)認(rèn)為僅通過(guò)給予所述載體/前藥基因治療就可以達(dá)到治療益處。[0010]在第一方面，本發(fā)明的特征在于新的給藥方案。因此，根據(jù)第一方面，本發(fā)明為一種試劑，包含具有功能基因的載體、可被所述基因的表達(dá)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性試劑的前藥以及另外的細(xì)胞毒性試劑，所述試劑作為組合制品用于在癌癥或特征為受損的錯(cuò)配修復(fù)(MMR)途徑的疾病的治療中同時(shí)、順次或分開(kāi)使用，其中所述給藥方案包含在給予所述載體后開(kāi)始前藥治療，以及在不晚于所述前藥治療完成后7天開(kāi)始另外的細(xì)胞毒性試劑治療。
[0011]根據(jù)第二方面，本發(fā)明為一種試劑，包含具有功能基因的載體以及可被所述基因的表達(dá)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性試劑的前藥，所述試劑作為組合制品用于在特征為受損的錯(cuò)配修復(fù)(MMR)途徑的疾病的治療中同時(shí)、順次或分開(kāi)使用。
[0012]根據(jù)第三方面，一種治療多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤的方法，包括以下步驟:
[0013]a.在人患者中診斷多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤；
[0014]b.在所述患者中鑒定至少一個(gè)多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤腫瘤；
[0015]c.切除所述多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤腫瘤以除去至少一部分所述多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤腫瘤并暴露瘤床組織；
[0016]d.向所述瘤床組織給予具有編碼胸苷激酶的基因的AdHSV-tk腺病毒載體，籍此所述AdHSV-tk腺病毒載體轉(zhuǎn)染所述瘤床組織并且所述瘤床組織表達(dá)所述編碼胸苷激酶的基因;
[0017]e.在向所述人患者給予所述腺病毒載體后約5至約19天內(nèi)，還向所述人患者給予更昔洛韋；
[0018]f.經(jīng)口或通過(guò)靜脈輸注向所述人患者給予替莫唑胺。 【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0019]圖1示出了對(duì)于不同的HSV-tk/GCV和TMZ/給藥方案，在第28天和第42天時(shí)的平均腫瘤體積。
[0020]圖2示出了不同的HSV-tk/GCV和TMZ給藥方案的生存率。
【具體實(shí)施方式】
[0021]本發(fā)明需要給予具有功能基因的載體以及可被所述基因的表達(dá)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性試劑的前藥。優(yōu)選地，所述功能基因?yàn)楣δ苄孕剀占っ富?。?yōu)選地，所述前藥為更昔洛韋或其類似物。應(yīng)理解所述前藥治療應(yīng)在已經(jīng)給予所述載體后開(kāi)始。優(yōu)選地在給予所述載體后5-19天給予所述前藥。
[0022]或者，自殺基因例如胞嘧啶脫氨酶(deminase)、細(xì)胞色素P450、大腸桿菌嘌呤核苷磷酸化酶以及羧肽酶G2，適用于本發(fā)明。這些自殺基因可分別地與適合的前藥例如5-氟胞嘧唳、環(huán)磷酰胺、6-甲基嘌呤(methylepurine)或F-araAMP或4-苯甲酰基-L-谷氨酸(CMDA)或它們的化學(xué)類似物組合使用。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述自殺基因即所述載體為胞嘧啶脫氨酶，所述前藥為5-氟胞嘧啶，適用于本發(fā)明。
[0023]所述載體優(yōu)選局部給予。當(dāng)治療用于癌性腫瘤時(shí)，例如可將所述載體直接給予至該癌性腫瘤中。或者，優(yōu)選手術(shù)除去所述癌性腫瘤，然后將所述載體給予至所述腫瘤腔壁中。
[0024]本文使用的術(shù)語(yǔ)“腫瘤腔壁”意指除去腫瘤(或該腫瘤的一部分)后剩下的表觀健康組織(即在外科醫(yī)生看來(lái)是表觀健康的組織)區(qū)域。雖然所述組織表觀上健康，但其可能含有惡性細(xì)胞。術(shù)語(yǔ)“腫瘤腔壁”是指非腫瘤團(tuán)塊的區(qū)域。
[0025]優(yōu)選地，所述腫瘤切除盡可能是完全的，即多于90%、95%或98%。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過(guò)注射將所述載體給予至所述腫瘤腔壁約Icm (優(yōu)選0.5-5cm，更優(yōu)選0.8-3cm)深處。這確保了所述載體進(jìn)入健康組織，即靶向主要健康的細(xì)胞(但是應(yīng)理解一些惡性細(xì)胞可能位于所述表觀健康組織的區(qū)域)
[0026]用于轉(zhuǎn)移所述基因的載體可以是任何病毒載體。但是，優(yōu)選地，其源自腺病毒或慢病毒。更優(yōu)選地，其源自腺病毒。
[0027]本發(fā)明為組合治療，包括給予基因治療載體、前藥和細(xì)胞毒性試劑。所述細(xì)胞毒類試劑優(yōu)選地不同于由所述前藥轉(zhuǎn)化(例如更昔洛韋的轉(zhuǎn)化)產(chǎn)生的細(xì)胞毒性試劑，但是除此之外所述細(xì)胞毒性試劑的確切性質(zhì)是不重要的，但其應(yīng)該優(yōu)選地為其功能被受損的MMR途徑損害的藥物。一些優(yōu)選的細(xì)胞毒性試劑為:
[0028]a)氯乙基化試劑例如卡莫司汀、洛莫司汀、福莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀或鏈佐星；
[0029]b)非經(jīng)典的燒化劑例如丙卡巴肼(procarbazine);
[0030]c)甲基化三嗪例如替莫唑胺、達(dá)卡巴嗪、六甲蜜胺(altretamine)或二溴甘露醇；
[0031]d)DNA交聯(lián)劑例如順鉬、卡鉬、奈達(dá)鉬、奧沙利鉬、三鉬(triplatin)、四硝酸酯或沙鉬；
[0032]e)拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑例如多柔比星、表柔比星、阿柔比星、柔紅霉素、伊達(dá)比星、氨柔比星、吡柔比星、戍柔比星或佐柔比星、米托蒽醌或匹杉瓊(pixantrone)；
[0033]f)拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑例如托泊替康、喜樹(shù)堿、伊立替康、魯比替康(rubitecan)或貝洛替康(belotecan)；
[0034]g)抗代謝物(喃唳(pyrmidine)類似物)例如5_FU、卡培他濱、替加氟、卡莫氟、氟尿苷或阿糖胞苷；
[0035]h)抗代謝物(嘌呤類似物)例如6-硫鳥(niǎo)嘌呤或巰基嘌呤；或
[0036]i)細(xì)胞毒性DNA烷化劑。
[0037]最優(yōu)選的細(xì)胞毒性試劑為替莫唑胺(TMZ)。
[0038]為實(shí)現(xiàn)載體/前藥/細(xì)胞毒之間的協(xié)同作用，有必要使MMR途徑上調(diào)，因此給予方案/給藥方案是關(guān)鍵性的。
[0039]本文使用的“細(xì)胞毒性治療”和“前藥治療”意指細(xì)胞毒性和前藥的給藥方案、治療過(guò)程。這些治療持續(xù)指定的時(shí)間。但是所述載體僅需要給予一次。
[0040]優(yōu)選地，所述另外的細(xì)胞毒性試劑治療在不晚于前藥治療完成后7天開(kāi)始。更優(yōu)選地，所述細(xì)胞毒性試劑治療在不晚于前藥治療完成后6、5、4、3、2或I天開(kāi)始。優(yōu)選地，所述細(xì)胞毒性試劑治療在前藥治療完成后I天以內(nèi)開(kāi)始。
[0041]為了免生疑問(wèn)，細(xì)胞毒性治療在前藥治療完成后立即開(kāi)始的情況以及細(xì)胞毒性治療在前藥治療完成前開(kāi)始的情況(即存在同時(shí)給予的時(shí)期)都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
[0042]所述細(xì)胞毒性治療和前藥治療可以同時(shí)開(kāi)始。但是優(yōu)選地，所述細(xì)胞毒性試劑治療在不早于前藥治療開(kāi)始后2天開(kāi)始。這可實(shí)現(xiàn)最有效的給藥，因?yàn)樗黾?xì)胞毒性和前藥僅在MMR途徑已經(jīng)被上調(diào)后才組合。這是最有效的給藥方案。[0043]優(yōu)選地，所述前藥治療和另外的細(xì)胞毒性試劑治療重疊。更優(yōu)選地，所述治療重疊至少3天。更優(yōu)選地,它們重疊至少7、10、14或18天。
[0044]優(yōu)選地，所述前藥治療持續(xù)10-20天。更優(yōu)選地，其持續(xù)11-19天、12-18天或13-17天。優(yōu)選地，其持續(xù)14天。
[0045]在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述前藥治療在給予載體(基因轉(zhuǎn)移)后2-5天時(shí)開(kāi)始。更優(yōu)選地，所述前藥治療在基因轉(zhuǎn)移后5天時(shí)開(kāi)始。
[0046]優(yōu)選地，所述另外的細(xì)胞毒性治療應(yīng)該最早在開(kāi)始前藥治療后2天時(shí)開(kāi)始，并且最晚在停止前藥治療后7天時(shí)開(kāi)始。
[0047]所述另外的細(xì)胞毒性試劑治療應(yīng)該最早與前藥治療同時(shí)開(kāi)始。應(yīng)該理解，優(yōu)選地，所述另外的細(xì)胞毒性試劑治療在不早于前藥治療開(kāi)始后2天開(kāi)始。
[0048]MMR途徑的上調(diào)對(duì)于本發(fā)明是關(guān)鍵的。因此，應(yīng)該理解，本發(fā)明的試劑可用于治療許多病癥。這些病癥的實(shí)例為癌癥、光化性角化病、翼狀胬肉糖尿病視網(wǎng)膜病變、動(dòng)脈粥樣硬化、哮喘、慢性阻塞性肺疾病、結(jié)節(jié)病、特發(fā)性肺纖維化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、眼的假鱗片樣脫皮綜合征以及阿爾茨海默病。
[0049]最優(yōu)選的治療用于癌癥。優(yōu)選地，所述治療用于癌性腫瘤，例如惡性膠質(zhì)瘤或前列腺腫瘤。本發(fā)明的試劑可用于治療特征為正?；蚴軗p的MMR途徑的癌癥。
[0050]在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，當(dāng)用于治療癌性腫瘤時(shí)，本發(fā)明的試劑還包括給予輻射。所述輻射優(yōu)選地在給予所述載體和前藥后給予，并且輻射治療優(yōu)選地與細(xì)胞毒性化學(xué)治療試劑同時(shí)開(kāi)始(治療優(yōu)選地同時(shí)進(jìn)行)。
[0051]如下研究闡述了本發(fā)明。
[0052]班究
[0053]在大鼠膠質(zhì)瘤模型中進(jìn)行了關(guān)于腫瘤生長(zhǎng)速率的研究。有6個(gè)患者組。給予的試劑和給藥方案的詳情在下表1中示出。
[0054]表1
[0055]
【權(quán)利要求】
1.一種試劑，其包含具有功能基因的載體、可被所述基因的表達(dá)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性試劑的前藥以及另外的細(xì)胞毒性試劑，其作為組合制品在癌癥或特征為受損的錯(cuò)配修復(fù)(MMR)途徑的疾病的治療中同時(shí)、順次或分開(kāi)使用，其中所述給藥方案包含在不晚于所述前藥治療完成后7天開(kāi)始所述另外的細(xì)胞毒性試劑治療。
2.權(quán)利要求1的試劑，其中所述另外的細(xì)胞毒性試劑治療在不早于前藥治療開(kāi)始后2天開(kāi)始。
3.權(quán)利要求1或2的試劑，其中所述前藥治療和另外的細(xì)胞毒性試劑治療重疊。
4.權(quán)利要求3的試劑，其中所述治療重疊至少3天。
5.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的試劑，其中所述前藥治療持續(xù)10-20天。
6.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的試劑，其中所述另外的細(xì)胞毒性試劑治療持續(xù)最長(zhǎng)達(dá)50天。
7.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的試劑，其中所述特征為受損的錯(cuò)配修復(fù)途徑的疾病為光化性角化病、翼狀胬肉糖尿病視網(wǎng)膜病變、動(dòng)脈粥樣硬化、哮喘、慢性阻塞性肺疾病、結(jié)節(jié)病、特發(fā)性肺纖維化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、眼的假鱗片樣脫皮綜合征、阿爾茨海默病或癌癥。
8.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的試劑，其中所述治療用于癌癥。
9.權(quán)利要求8的試劑，其中所述治療用于癌性腫瘤例如惡性膠質(zhì)瘤或前列腺腫瘤。
10.權(quán)利要求8或9的試劑，其中將所述載體直接給予至所述腫瘤中，或給予至在至少部分切除腫瘤后形成腫瘤腔壁的健康組 織中。
11.權(quán)利要求10的試劑，其中所述切除為至少95%完全的。
12.權(quán)利要求8-11任一項(xiàng)的試劑，其中將所述載體給予至所述腫瘤腔壁中，優(yōu)選在約Icm的深度。
13.權(quán)利要求8-12任一項(xiàng)的試劑，其額外地包括向所述腫瘤給予輻射。
14.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的試劑，其中所述功能基因?yàn)樾剀占っ浮?br> 15.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的試劑，其中所述載體源自腺病毒或慢病毒。
16.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的試劑，其中所述前藥為更昔洛韋或其類似物。
17.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的試劑，其中所述另外的細(xì)胞毒性試劑選自如下試劑: a)氯乙基化試劑例如卡莫司汀、洛莫司汀、福莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀或鏈佐星； b)非經(jīng)典的烷化劑例如丙卡巴肼； c)甲基化三嗪例如替莫唑胺、達(dá)卡巴嗪、六甲蜜胺或二溴甘露醇； d)DNA交聯(lián)劑例如順鉬、卡鉬、奈達(dá)鉬、奧沙利鉬、三鉬、四硝酸酯或沙鉬； e)拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑例如多柔比星、表柔比星、阿柔比星、柔紅霉素、伊達(dá)比星、氨柔比星、吡柔比星、戊柔比星或佐柔比星、米托蒽醌或或匹杉瓊； f)拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑例如托泊替康、喜樹(shù)堿、伊立替康、魯比替康或貝洛替康； g)抗代謝物(喃唳(pyrmidine)類似物)例如5-FU、卡培他濱、替加氟、卡莫氟、氟尿苷或阿糖胞苷； h)抗代謝物(嘌呤類似物)例如6-硫鳥(niǎo)嘌呤或巰基嘌呤；或 i)細(xì)胞毒性DNA烷化劑。
18.—種試劑，其包含具有功能基因的載體以及可被所述基因的表達(dá)產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性試劑的前藥，其作為組合制品用于在特征為受損的錯(cuò)配修復(fù)(MMR)途徑的疾病的治療中同時(shí)、順次或分開(kāi)使用。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的組合試劑，其還包含一個(gè)或多個(gè)權(quán)利要求1-16任一項(xiàng)的特征。
20.一種治療多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤的方法，所述方法包含以下步驟: a.在人患者中診斷多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤； b.在所述患者中鑒定至少一個(gè)多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤腫瘤； c.切除所述多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤腫瘤以除去至少一部分所述多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤腫瘤并暴露瘤床組織； d.向所述瘤床組織給予具有編碼胸苷激酶的基因的AdHSV-tk腺病毒載體，籍此所述AdHSV-tk腺病毒載體轉(zhuǎn)染所述瘤床組織并且所述瘤床組織表達(dá)所述編碼胸苷激酶的基因； e.在向所述人患者給予所述腺病毒載體后約5至約19天內(nèi)，還向所述人患者給予更昔洛韋； f.經(jīng)口或通過(guò)靜脈輸注向所述人患者給予替莫唑胺。
21.權(quán)利要求20的方法，其中所述多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤為復(fù)發(fā)性多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤。
22.權(quán)利要求20或21的方法，其中將所述替莫唑胺在數(shù)個(gè)28-天周期中給予，每個(gè)周期包含在所述28-天周期的第1-5天每天給予約150mg/m2/天的劑量,然后在所述28-天周期的第6-28天給予約Omg/m2/天的劑量。
23.權(quán)利要求22的方法，其中所述數(shù)個(gè)28-天周期之前有約42天的時(shí)期，其中以約75mg/m2/天的劑量給予替莫唑胺。
24.權(quán)利要求20-23任一項(xiàng)的方法，其中所述AdHSV-tk腺病毒載體和更昔洛韋各自以可有效誘導(dǎo)MMR途徑的量給予。
25.權(quán)利要求24的方法，其中所述替莫唑胺的給藥是在MMR途徑被誘導(dǎo)期間開(kāi)始。
26.權(quán)利要求25的方法，其中所述替莫唑胺的給藥是在開(kāi)始給予更昔洛韋后不超過(guò)約7天內(nèi)開(kāi)始。`
27.權(quán)利要求26的方法，其中所述替莫唑胺的給藥是與所述更昔洛韋的給藥約同時(shí)開(kāi)始。
28.根據(jù)權(quán)利要求1-19任一項(xiàng)的試劑或組合試劑，另外地包含權(quán)利要求20-27的特征的任一個(gè)。
【文檔編號(hào)】A61K38/45GK103491977SQ201280005772
【公開(kāi)日】2014年1月1日 申請(qǐng)日期:2012年1月18日 優(yōu)先權(quán)日:2011年1月18日
【發(fā)明者】安-瑪麗·瑪塔, H·薩姆拉納亞基, J·皮卡瑞內(nèi)恩, S·伊阿-赫特圖阿拉 申請(qǐng)人:Ark治療學(xué)有限公司