三唑并[4,5-d]嘧啶衍生物的制作方法
【專利摘要】式I的化合物：其中R1和R2具有權利要求1中所示的含義，是GCN2的抑制劑，并且可以用于，尤其用于治療癌癥。
【專利說明】三唑并[4, 5-d]嘧啶衍生物
[0001] 發(fā)明背景 本發(fā)明的目的是發(fā)現(xiàn)新的具有有價值特性的化合物，特別是可以用于制備藥物的那些 化合物。
[0002] 本發(fā)明涉及化合物和化合物在抑制、調(diào)控和/或調(diào)節(jié)由蛋白激酶（特別是免疫調(diào) 節(jié)或應激反應激酶）引起的信號轉(zhuǎn)導中的用途，此外，還涉及包含這些化合物的藥物組合 物和所述化合物用于治療激酶誘導的疾病的用途。
[0003] 因為蛋白激酶調(diào)節(jié)幾乎每種細胞過程，包括代謝、細胞增殖、細胞分化和細胞存 活，所以，它們是各種疾病狀態(tài)的治療干預的有吸引力的靶向。例如，蛋白激酶發(fā)揮關鍵作 用的細胞周期控制、免疫調(diào)節(jié)、應激反應和血管生成是與許多疾病狀況相關的細胞過程，諸 如但不限于：癌癥，炎癥性疾病,神經(jīng)變性疾病，慢性感染，異常血管生成和與其相關的疾 病，動脈粥樣硬化，黃斑變性，糖尿病，肥胖癥和疼痛。
[0004] 式I的化合物抑制被稱為通用控制蛋白2 (general control non derepressible 2) (GCN2)的應激反應eIF2激酶EIF2AK4。
[0005] 實體瘤的癌癥治療的許多策略集中于盡可能地手術除去腫瘤塊，隨后利用更具體 地靶向癌細胞途徑的細胞毒素藥劑或抑制劑進行放療和化療，根除任何殘留的腫瘤細胞。 然而，這種方法的成功受到限制，并且通常沒有持續(xù)效果。這主要是由于這種細胞毒素藥劑 的治療窗口狹窄（特異性和副作用）和癌細胞適應細胞毒素或其它抑制藥劑所產(chǎn)生的選擇 性壓力的能力。對初始治療獲得抗性的少量腫瘤（干）細胞的存活，可以足以為腫瘤再生提 供種子。在大多數(shù)情況下，相比于初始腫瘤的治療，這種復發(fā)更難以治療。因此，更成功靶向 腫瘤細胞需要并行地靶向腫瘤細胞的多重存活和逃避機制（Muller & Prendegast 2007)。
[0006] 惡性腫瘤的形成伴隨有細胞生理機能的較多積累（a major roll up)。在該過程 期間，基于無限增殖或?qū)ιL抑制信號不敏感而使癌細胞獲得一些特性。此外，腫瘤細胞 還改變與微環(huán)境和之外之間的相互作用。后者的區(qū)域包括腫瘤細胞逃脫免疫監(jiān)視的策略 (Muller & Prendegast 2007)。免疫監(jiān)視不但限制惡性生長，而且提供了引發(fā)對于逃避免疫 反應的機制的進化的選擇性壓力，如[Dunn等人2004]所綜述。實際上，常常觀察到的是， 消除T細胞免疫足以提高腫瘤發(fā)病率[Shankaran等人2001]，人們相信，免疫逃逸影響相對 于進程的腫瘤休眠、促進侵襲和轉(zhuǎn)移，并且負面地影響治療響應。
[0007] 幾項機理研究發(fā)現(xiàn)，在腫瘤微環(huán)境之內(nèi)，免疫逃逸與代謝變化具有重要的聯(lián)系。在 這里，在介導對抗原的免疫耐受性的過程中的重要作用與必需氨基酸色氨酸和精氨酸的分 解代謝有關，這種代謝分別是通過酶吲哚胺2, 3-雙加氧酶（ID0)和精氨酸酶I(ARG)進 行的（Bronte and Zanovello,2005; Muller 等人，2005b; Muller and Prendergast，2007; Munn and Mellor，2007; Popovic 等人，2007)。
[0008] IDO是催化色氨酸降解為犬尿氨酸的單鏈氧化還原酶。IDO不負責分解代謝過量 的飲食色氨酸，但調(diào)節(jié)局部環(huán)境的色氨酸水平。在癌癥患者中，色氨酸代謝的提高表明顯著 地改變了色氨酸或分解產(chǎn)物的血清濃度，并且這與在腫瘤和引流淋巴結(jié)中共同升高的ID0 相關。根據(jù)一些出版物，ID0過表達與癌癥的不良預后有關[Okamoto等人2005; Brandacher 等人2006]。
[0009] T細胞似乎優(yōu)先對IDO激活敏感，從而使得，當缺乏色氨酸時，它們不能分離，并因 此不能被呈遞給它們的抗原活化。Munn和Mellor與他們的同事揭示，ID0通過抑制T細胞 激活和對腫瘤抗原形成周圍耐受性來調(diào)節(jié)免疫（Mellor and Munn,2004)。這些機理包括： 破壞被腫瘤細胞招募至它的瞬時微環(huán)境或腫瘤-引流淋巴結(jié)中的免疫細胞。本文中，被抗 原呈遞細胞清除的腫瘤抗原交叉呈遞至適應免疫系統(tǒng)。除了直接耐受性之外，成熟DC具有 擴增調(diào)控T細胞（Treg)的能力[Moser 2003]。
[0010] 除了色氨酸分解代謝之外，在腫瘤調(diào)節(jié)的微環(huán)境中也會增加精氨酸的轉(zhuǎn)化，并且 許多報道表明了精氨酸酶在腫瘤生長和發(fā)展期間的激活作用。在腫瘤浸潤骨髓細胞中， 精氨酸被精氨酸酶I (ARG1)、精氨酸酶II (ARG2)轉(zhuǎn)變?yōu)殡搴网B氨酸，并且被氧化氮合酶 (N0S2)的誘導形式氧化為瓜氨酸和一氧化氮（N0)。
[0011] 在結(jié)腸、乳房、肺和前列腺癌癥患者中常常觀察到ARG活性提高[Cederbaum 2004]，這與存在于前列腺癌癥中的ARG和N0S的過表達有關[Keskinege等人2001， Aaltoma等人2001，Wang等人2003]。已經(jīng)顯示，在浸潤巨噬細胞中，ARG活性削弱抗原特異 性T細胞反應和CD3受體的表達。此外，在腫瘤相關的骨髓細胞中，ARG和N0S的累積活性 可以對抗原特異性T淋巴細胞產(chǎn)生抑制信號，最終導致細胞凋亡[Bronte 2003 a ;2003b]。
[0012] ID0和ARG相關的機制都在感測相應氨基酸濃度的消耗濃度這一點處匯合。在氨 基酸缺失期間，稱為通用控制蛋白2 (general control nonderepressible 2 ;GCN2)的eIF2 激酶EIF2AK4與胞內(nèi)累積脫酰tRNA相互作用。因此，假定GCN2從自身抑制狀態(tài)改變?yōu)榧?活態(tài)構型，并通過自身磷酸化來進一步活化。然后，只有已知的底物蛋白eIF2a變成磷酸 化狀態(tài)，并因此使翻譯起始的復合體得到抑制[Harding等人2000]。這會削弱常規(guī)帽依賴 性（Cap-dependent)翻譯起始，以及通過其相應蛋白的生成。另一方面，這主要利用非帽依 賴性（Cap-incbpendent)引發(fā)（通過激活轉(zhuǎn)錄因子4(ATF4))來誘導應激相關的靶基因的 特異性表達。通過表達相應的應激響應蛋白，例如，在氨基酸代謝中的酶，細胞試圖補償具 體細胞應激[Wek等人2006]。如果應激持續(xù)，則通過促凋亡轉(zhuǎn)錄因子CCAAT/增強子-結(jié)合 蛋白同源蛋白（CHOP)的轉(zhuǎn)錄，該相同的途徑轉(zhuǎn)變成促進細胞死亡途徑[Oyadomari 2004]。 已經(jīng)表明，在eIF2 α磷酸化和導致細胞生長抑制的翻譯起始發(fā)生改變的T細胞中，色氨酸 饑餓引發(fā)GCN2依賴性應激信號傳導途徑（Munn等人2005)。Sharma等人[2007]公開了關 于直接ID0誘導的和GCN2依賴性的成熟型Treg的激活。類似地，F(xiàn)allarino等人[2006] 發(fā)現(xiàn)了 CD4+CD25-細胞的GCN2依賴性轉(zhuǎn)化為CD25+FoxP3+ Treg，產(chǎn)生IL-10和TGF β。 Rodriguez等人[2007]確定，在與TCR信號傳導的組合中，通過色氨酸或精氨酸耗竭來激活 GCN2途徑，可以導致CD3 ζ鏈下調(diào)、細胞周期停滯和無反應性。
[0013] 重要的是，GCN2途徑不僅對于腫瘤免疫逃逸重要，而且在直接調(diào)節(jié)腫瘤存活方面 發(fā)揮積極作用。Ye等人[2010]發(fā)現(xiàn)，在人實體瘤中，上述轉(zhuǎn)錄因子ATF4過表達，表明在腫瘤 進展中的重要功能。氨基酸和葡萄糖缺乏是在實體腫瘤中和上調(diào)ATF4靶基因的活化GCN2 途徑（參與氨基酸合成和轉(zhuǎn)移）中存在的典型應激。與正常組織相比，在人和小鼠腫瘤中， 觀察到GCN2激活/過表達和提高的磷酸eIF2 α，并且ATF4或GCN2表達的消除顯著地抑制 體內(nèi)腫瘤生長?？梢缘贸鼋Y(jié)論，在腫瘤細胞中，GCN2-eIF2a-ATF4途徑對于保持代謝體內(nèi) 平衡是關鍵的。
[0014] 總的說來，目前的生物學用ARG/ID0途徑進行干擾，這對于通過適應性機制阻礙 腫瘤免疫逃逸是有吸引力的。本文中，干擾GCN2功能是特別使人感興趣的，因為它是ID0 和ARG兩個途徑的匯合點，而且它還對直接妨礙腫瘤代謝提供其它機會。
[0015] 幾種途徑抑制劑已經(jīng)被認為是免疫調(diào)節(jié)劑。這些抑制劑主要解決ID0或ARG蛋 白的酶功能（Muller and Scherle，2006)。在小鼠中，應用精氨酸酶抑制劑N-輕基-去 甲-L-Arg，阻斷s. c. 3LL肺癌的生長[Rodriguez 2004]。據(jù)報道，提供N0的阿司匹林如NCX 4016(2-(乙酰氧基）苯甲酸3-(硝基氧基甲基）苯酯）可干擾骨髓細胞的抑制性酶活性。 口服施用的N0阿司匹林使攜帶腫瘤的宿主的免疫狀態(tài)正?；梢蕴岣吣[瘤抗原特異性T 淋巴細胞的數(shù)量與功能，并且提高癌癥接種引發(fā)的抗腫瘤免疫的預防和治療效果（DeSanto 2005)。
[0016] 在癌癥背景和其它環(huán)境中，已經(jīng)廣泛地使用底物類似物1甲基-色氨酸（1MT)和 相關的分子，以革巴向IDO。Friberg等人（2002)和Uyttenhove等人（2003)的研究證明，1MT 可以限制過表達ID0的腫瘤的生長。然而，在一些腫瘤模型中，1MT不能引起腫瘤退化，表明 當將ID0抑制用作單療法時，只顯示出適度的抗腫瘤效果。與此相反，1MT和各種細胞毒素 化學治療劑的聯(lián)合治療可以引起形成的MMTV-neu/HER2腫瘤的退化，這種腫瘤對任何單一 藥劑治療的響應很差[Muller等人2005a]。治療之前小鼠的⑶4+或⑶8+ T細胞的免疫耗 竭，消除了在該模型中觀察到的聯(lián)合效果，證明了 1MT間接地通過激活T細胞介導的抗腫瘤 免疫起作用的預期。通過證明1MT在小鼠中缺乏抗腫瘤活性（其對ID0是遺傳有缺陷的） 提供了重要證據(jù)，證明ID0靶向?qū)?MT作用是必要的[Hou等人，2007]。
[0017] 抑制GCN2能夠使氨基酸饑餓誘導的免疫編輯的兩個途徑分支合并，并且降低腫 瘤繞過任何一個分支的抑制作用的選擇。此外，如上面所詳述，GCN2抑制為同時干擾腫瘤 代謝提供了機會，同時這可以提高單療法的效果，或與其它抗癌方法聯(lián)合治療的效果。
[0018] 如上面所提到的，eIF2激酶GCN2通過與去?；膖RNA相互作用激活，其作為 營養(yǎng)剝奪應激的直接后果積累。其它細胞應激因素如UV照射、氧化還原應激或蛋白酶抑制 可以間接誘導GCN2激活[WEK等人，2006]。在所有已知情況下，eIF2a變得磷酸化，這主 要通過非帽依賴性（Cap-independent)引發(fā)（通過激活轉(zhuǎn)錄因子4(ATF4))來誘導應激相 關的靶基因的特異性表達。
[0019] Mitsuda等人（2007)顯示，早老素-1受由GCN2調(diào)節(jié)的激活轉(zhuǎn)錄因子4(ATF4)誘 導。在阿爾茨海默病中，淀粉樣蛋白-β(Αβ)(由γ-分泌酶從淀粉樣前體蛋白產(chǎn)生）在 大腦皮質(zhì)的積累是常見且關鍵的事件。具體地，早老素對于分泌酶活性是必需物質(zhì)。 Ohata等人（2010)描述了 GCN2_eIF2 a -ATF4信號傳導在自噬受損細胞中γ -分泌酶活性 的調(diào)節(jié)中的作用：自噬溶酶體系統(tǒng)的損傷可以引起細胞中的氨基酸失衡，因為自噬對于氨 基酸水平的維持是需要的。自噬溶酶體系統(tǒng)作為分泌酶活性通過GCN2的重要調(diào)節(jié)劑進 行討論，導致自噬惡化中的Αβ聚集，這可以是用于減少Αβ產(chǎn)生的可能治療目標。γ-分 泌酶在阿爾茨海默?。ˋD)的發(fā)展中起著重要作用。γ-分泌酶活性在自噬泡中富集，其增 強了 β淀粉樣蛋白（Αβ)合成。
[0020] 老年斑主要由衍生自淀粉樣前體蛋白（ΑΡΡ)的β-淀粉樣肽（Αβ)構成，所述 淀粉樣前體蛋白（ΑΡΡ)已經(jīng)經(jīng)歷由β-分泌酶（BACE-1)和γ-分泌酶的蛋白水解加工。 0' Connor等人（2008)發(fā)現(xiàn)，eIF2 α蛋白的磷酸化在翻譯上增加 BACE-1水平。
[0021] 在這種疾病狀況（其促進分泌酶的活化或BACE-1的誘導，并伴隨腦中Αβ的 聚集和斑塊形成）下GCN2的抑制可以為緩和或者甚至停止神經(jīng)變性疾病的進展提供有價 值的途徑。
[0022] 其描述了持續(xù)、非急性的寄生蟲或病毒感染與甚至具有免疫能力的宿主建立對于 感染性生物體或顆粒的免疫赦免狀況（immune privileged conditions)相關聯(lián)。這已經(jīng) 與 ID0 表達的局部誘導相關聯(lián)。Makala 等人（J Infect Dis. 2011 Mar 1; 203 (5) :715-25) 顯示，皮膚利什曼蟲皮膚感染刺激免疫調(diào)節(jié)酶吲哚胺2, 3雙加氧酶（ID0)在局部淋巴結(jié)中 的表達。誘導的ID0減弱樹突狀細胞的T細胞刺激功能并抑制對外源和名義寄生蟲抗原 的局部T細胞應答。ID0消除降低局部炎癥和寄生蟲負荷，就像在具有確立感染的小鼠中 ID0 的藥理學抑制一樣。de Souza Sales (Glin Exn Tmmunol. 2011 Aug; 165 (2) : 251-63)證 實了吲哚胺2, 3-雙加氧酶在瘤型麻風免疫抑制中的作用。Boasso等人(Blood. 2007 Apr 15; 109 (8) : 3351-9)發(fā)現(xiàn)，HIV抑制通過誘導漿細胞樣樹突細胞中的吲哚胺2, 3-雙加氧酶 而抑制⑶4+ T細胞增殖，并且ID0的體外抑制導致來自HIV感染患者的PBMC中的⑶4 (+) T細胞增殖反應增加。
[0023] ID0/GCN2途徑的抑制劑藥物可以用來增強針對慢性和持續(xù)感染的宿主免疫。 支獻： Aaftoma, S.H., P.K. Upponer?, and V.M. Kc^ma. 2001. Inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression and Its prognostic value in prostate cancer. Anttrancer Res. 21:3101-3106. 2. Brandacher, G.; Peraltioner, A.; Ladumer, R.; Schneeberier, S.; Obrist, P,; Winkter, C,; Werner, E. R.; Werner-Felmayer? G.; Weiss, H. Gobel, G,; Pargrefter,, R,; Konif srainer, A.; Fuchs, 0.; Ambeiger, A Prc^nostic value of indoleamine 2,3- dioxygenase expression in colorectal cancer: effect on luroorinlltrating T cells. Clin. Cant?rRes. 2006,12,1144-1151. 3. Bronte V? 2an〇￥elto P. (2005). Regulation of immyne responses by L-arginine metaijofem. Nat Rev Immunol 5; 641-€54, 4. Bronte, V.? P. Seraini, C. De Santo, I. Mango? V. Tosello, A. Mazzoni, D*M. Segal, €. Staib, M. Liawel, G. Sutler, et al. 2003a. li-4- induced arginase 1 suppresses allareadive 了 c*lis jn tumoiMtearinf mice· JJmimmDL 170:270- 278. 5. Bronte, V., P. Serafini, A. Mazzoni, D.M. 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[0024] 具體地，本發(fā)明涉及化合物和化合物的用途，其中抑制、調(diào)控和/或調(diào)節(jié)GCN2引起 的信號轉(zhuǎn)導發(fā)揮作用。
[0025] 因此，合成特異性地抑制、調(diào)控和/或調(diào)節(jié)免疫調(diào)節(jié)或應激反應激酶（特別是 GCN2)引起的信號轉(zhuǎn)導的小分子化合物是期望的，并且是本發(fā)明的目的。
[0026] 此外，本發(fā)明的目的是合成新化合物，所述新化合物用于預防和治療腫瘤性惡性 腫瘤，包括，但不限于，實體瘤癌癥，淋巴或血液系統(tǒng)的癌癥，神經(jīng)變性疾病和慢性感染的癌 癥。
[0027] 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，根據(jù)本發(fā)明的化合物和其鹽具有很有價值的藥理學特性，同時具有很 好的耐受性。
[0028] 此外，式I的化合物可以用于分離GCN2和研究GCN2的活性或表達。此外，它們尤 其適合用于與未調(diào)節(jié)的或紊亂的GCN2活性有關的疾病的診斷方法。
[0029] 式I的化合物還可以抑制酪氨酸激酶FMS (CSF1R)、FLT3或FLT4或這些激酶的組 合，優(yōu)選地，除了針對GCN2的抑制活性之外。
[0030] Fms類酪氨酸激酶3 (FLT3)，也稱為FLK-2 (胎兒肝激酶2)和STK-I (干細胞激酶 1)，在造血干細胞的增殖和分化中起重要作用。FLT3受體激酶在80%以上的骨髓性患者的 細胞中和一部分急性淋巴母細胞性白血病細胞中以非常高的水平表達。此外，所述酶還可 以在淋巴原細胞危象（lymphoid blast crisis)慢性粒性白血病患者的細胞中發(fā)現(xiàn)。已經(jīng) 報道，在30%的急性骨髓性白血?。ˋML)中和同樣在急性淋巴母細胞性白血病（ALL)的亞 組中，F(xiàn)LT3 激酶發(fā)生突變（Gilliland 等人 Blood 100,1532-1542(2002) ; Stirewalt 等人， Nat. Rev. Cancer，3,650-665 (2003)。FLT3突變中的活化突變與不良預后相關（Malempati 等人，Blood，104,11 (2004)。正在開發(fā)FLT3抑制劑，其中一些已經(jīng)顯示有希望產(chǎn)生臨床上 抗 AML 的效果（Levis 等人 Int. J. Hematol，52,100-107 (2005)。
[0031] 已經(jīng)報道，一些小分子FLT3抑制劑在具有FLT3-活化突變的細胞系中可有效誘導 細胞凋亡，并且可使其骨髓細胞中表達突變FLT3的小鼠的存活時間有效延長（Levis等人， Blood, 99，3885-3891 (2002); Kelly 等人，Cancer Cell, 1，421-432 (2002); Weisberg 等人，Cancer Cell, 1，433-443 (2002); Yee 等人，Blood, 100, 2941-2949 (2002)。
[0032] 美國專利申請20090054358描述了用于免疫抑制，特別是用于治療免疫相關病癥 如器官排斥、骨髓移植排斥、非髓性抑制骨髓移植排斥、強直性脊柱炎、關節(jié)炎、再生障礙性 貧血、貝赫切特氏病、1型糖尿病、移植物抗宿主病、格雷夫斯病、自身免疫性溶血性貧血、韋 格納氏肉芽腫病、高IgE綜合征、特發(fā)性血小板減少性紫癜、類風濕性關節(jié)炎、Crohn氏病、 多發(fā)性硬化、重癥肌無力、銀屑病和狼瘡以及其它自身免疫性疾病的Flt3抑制劑。Flt3抑 制劑也可以用于治療神經(jīng)系統(tǒng)病癥，如神經(jīng)變性疾病，例如由軸突變性引起的疾病。神經(jīng)變 性疾病包括，例如，多發(fā)性硬化；脫髓鞘核病癥，諸如多發(fā)性硬化，急性橫貫性脊髓炎，但不 限于此。
[0033] Scott 等人（Bioorg. Med Chem Let. (2008) 18 (17) p4794)描述了用于治療癌癥的 CSF-1R抑制劑。CSF-1R是III類受體酪氨酸激酶的成員。細胞集落刺激因子1 (CSF-1)， 也稱為巨噬細胞/單核細胞集落刺激因子（M-CSF)，與CSF-1R結(jié)合，導致二聚化、自身磷酸 化和信號轉(zhuǎn)導的激活。1CSF-1/CSF-1R信號傳導對于正常單核細胞發(fā)展是必需的。在癌 癥中，促致瘤性巨噬細胞已經(jīng)得到鑒定，并且與乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌中的不良預后關 聯(lián)。升高水平的CSF-1和CSF-1R已經(jīng)在幾種腫瘤類型包括乳腺癌、卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌中 得到報道，并且也已經(jīng)與侵襲和轉(zhuǎn)移關聯(lián)。因此，CSF-1R活性的抑制可以通過降低腫瘤相關 巨噬細胞（ΤΑΜ)的水平對腫瘤具有多重效應，并且對腫瘤本身具有直接作用（C.E. Lewis， J.W. Pollard, Cancer Res·, 66 (2006)，第 605 頁；I. Bingle, Ν·等人，J. Pathol·, 196 (2002)，第 254 頁；Β·Μ· Kacinski, Ann. Med·，27 (1995)，第 79 頁；E. Garwood 等人· J Clin Oncol 26: 2008)。
[0034] Su JL 等人（Cancer Cell. 2006 Mar; 9 (3) :209-23)報道，VEGF-C/Flt-4 軸促進癌 細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。Flt-4(VEGF受體）被其特異性配體VEGF-C激活。所得信號傳導途徑 促進血管生成和/或淋巴管生成。VEGF-C/Flt-4軸增強癌細胞活動性和侵襲，并且有助于 促進癌細胞轉(zhuǎn)移。檢查來自各種類型癌癥的腫瘤組織揭示與臨床轉(zhuǎn)移和患者存活密切相關 的Flt-4和VEGF-C表達的高水平。Flt-4激酶的抑制可以降低不同類型癌癥中的侵襲能 力。
[0035] 組合針對GCN2的抑制特異性和針對FMS (CSF1R)、FLT3或FLT4或這些激酶的組 合的特異性對于治療不同疾病階段的腫瘤性惡性腫瘤可以是特別有優(yōu)勢的?？梢越M合刺激 針對癌癥/腫瘤細胞的免疫應答的影響，以降低腫瘤相關巨噬細胞的水平，以及癌癥對于 轉(zhuǎn)移形成的侵襲能力。在一個進一步方面，對GCN2的抑制活性特別與FLT3的抑制的組合 對于治療神經(jīng)變性病癥可以是有利的，因為它可以協(xié)同對腦中的炎癥過程和蛋白沉積物生 成的調(diào)節(jié)的抑制作用。在另一個方面，對GCN2的抑制活性特別與FLT3的抑制的組合可以 為調(diào)節(jié)免疫應答以治療免疫相關病癥和炎性或自身免疫性疾病提供優(yōu)勢。
[0036] 在一個進一步實施方案中，本發(fā)明特別涉及抑制、調(diào)控和/或調(diào)節(jié)GCN2、FMS (CSF1R)、FLT3或FLT4或這些激酶的組合的信號轉(zhuǎn)導的式I的化合物，包含這些化合物的 組合物，和使用其治療GCN2、FMS (CSF1R)、FLT3或FLT4或這些激酶的組合誘導或調(diào)節(jié)的疾 病和病癥的方法。
[0037] 本發(fā)明的進一步目的是合成新化合物，所述新化合物用于預防和治療腫瘤性惡性 腫瘤，包括，但不限于，實體瘤癌癥，淋巴或血液系統(tǒng)的癌癥，神經(jīng)變性疾病的癌癥，免疫相 關病癥，如關節(jié)炎，牛皮癬，狼瘡，多發(fā)性硬化或其它自身免疫性疾病以及慢性感染。
[0038] 此外，式I的化合物可以用于分離和研究SykGCN2、FMS (CSF1R)、FLT3或FLT4的 活性或表達。此外，它們尤其適合用于與未調(diào)節(jié)的或紊亂的SykGCN2、FMS (CSF1R)、FLT3或 FLT4活性有關的疾病的診斷方法。宿主或患者可以屬于任何哺乳動物物種，例如，靈長類物 種，特別是人；嚙齒類，包括小鼠、大鼠和倉鼠；兔；馬，牛，狗，貓，等等。動物模型對于實驗 研究是有益的，能夠提供治療人疾病的模型。
[0039] 可以通過體外試驗來測定具體細胞對用根據(jù)本發(fā)明化合物的治療的敏感性。典型 地，將細胞的培養(yǎng)物與各種濃度的根據(jù)本發(fā)明的化合物結(jié)合一段時間，結(jié)合時間足以使活 性劑（諸如抗IgM)誘導細胞響應，諸如表面標志物的表達，通常在大約一小時和一周之間。 可以使用來自血液或活檢樣品培養(yǎng)的細胞來進行體外試驗。使用能夠識別標志物的特異性 抗體，通過流式細胞術評價表達的表面標志物的數(shù)量。
[0040] 劑量根據(jù)使用的具體化合物、具體疾病、患者狀態(tài)等等而變化。治療劑量典型地足 以顯著地減少靶組織中的不希望的細胞群體，同時保持患者的生存能力。治療通常持續(xù)直 到細胞載荷（cell burden)出現(xiàn)相當大的減少，例如，減少至少約50%，并且可以持續(xù)直到身 體內(nèi)基本上不能檢出更多不希望的細胞。
[0041] 為了鑒定信號轉(zhuǎn)導途徑和檢測各種信號轉(zhuǎn)導途徑之間的相互作用，許多科學家已 經(jīng)開發(fā)了合適模型或模型系統(tǒng)，例如，細胞培養(yǎng)模型（例如Khwaja等人，ΕΜΒ0,1997,16， 2783-93)和轉(zhuǎn)基因動物的模型（例如White等人，Oncogene，2001，20, 7064-7072)。為了測 定信號轉(zhuǎn)導級聯(lián)中的某些階段，可以使用相互作用化合物，以便調(diào)節(jié)信號（例如Stephens 等人，Biochemical J.，2000,351，95-105)。根據(jù)本發(fā)明的化合物還可以在動物和/或細胞 培養(yǎng)模型中或在本申請?zhí)岬降呐R床疾病中用作檢測激酶依賴性信號轉(zhuǎn)導途徑的試劑。
[0042] 激酶活性的測定是本領域技術人員眾所周知的技術。在文獻（例如 Campos-Gonzcilez，R. and Glenney，Jr.，J. R. 1992，J. Biol. Chem. 267，第 14535 頁） 中，描述了使用底物例如組蛋白（例如Alessi等人，F(xiàn)EBS Lett. 1996, 399, 3,第333-338 頁）或堿性髓鞘蛋白來測定激酶活性的一般測試系統(tǒng)。
[0043] 為了鑒定激酶抑制劑，許多測定系統(tǒng)是合適的。在閃爍近似測定（Sorg等人，J. of. Biomolecular Screening, 2002，7，11-19)和閃板（flashplate)測定中，測定作為底 物的蛋白或肽（含有YATP)的放射性磷酸化。在抑制性化合物的存在下，可檢測放射性 信號的降低，或檢測到完全沒有信號。此外，均相時間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移（HTR-FRET) 和突光偏振（FP)技術可合適地作為測定法（Sills等人，J. of Biomolecular Screening, 2002， 191-214)。
[0044] 其它非放射性的ELISA測定法使用特定磷酸抗體（磷酸-AB)。磷酸-AB只結(jié)合磷 酸化底物?？梢允褂玫诙^氧化酶綴合的抗綿羊抗體（Ross等人，2002, Biochem. J.)，通 過化學熒光來檢測這種結(jié)合。 現(xiàn)有技術
[0045] 其它三唑并嘧啶衍生物在W0 2005/012307 A1和W0 2006/075023 A2中被描述為用 于治療疾病如阿爾茨海默病或糖尿病的GSK3抑制劑。
[0046] 本發(fā)明概述 本發(fā)明涉及式I的化合物
【權利要求】
2. 根據(jù)權利要求1的化合物，其中 R2代表呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻二唑基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑 基、噻唑基、三唑基或四唑基，其未被取代或被A、[C(R3)2]pCyc、[C(R 3)2]pAr、[COajpHet1、 CN 或[C(R3)2]pC00R3 單取代， 和其藥學可接受的溶劑化物、鹽、互變異構體和立體異構體，包括其所有比例的混合 物。
3. 根據(jù)權利要求1或2的化合物，其中 Ar 代表苯基，其未被取代或被 Hal、A、[C (R3) 2] p0R3、NR3C0A、S (0) Jet1 和 / 或 0 [C (R3) 2] pHet1單取代、雙取代或三取代， 和其藥學可接受的溶劑化物、鹽、互變異構體和立體異構體，包括其所有比例的混合 物。
4. 根據(jù)權利要求1-3中一項或多項的化合物，其中 Het代表吡唑基、二氫吲哚基、喹喔啉基、苯并[1，2, 5]噻二唑基或吡啶基，其未被取代 或被A或[C (R3) 2] P0R3單取代， 和其藥學可接受的溶劑化物、鹽、互變異構體和立體異構體，包括其所有比例的混合 物。
5. 根據(jù)權利要求1-4中一項或多項的化合物，其中 Het1代表批略燒基、氣雜環(huán)丁燒基、氧雜環(huán)丁燒基、脈陡基、嗎琳基、批P坐基、批陡基或 四氫吡喃基，其未被取代或被A或=0單取代， 和其藥學可接受的溶劑化物、鹽、互變異構體和立體異構體，包括其所有比例的混合 物。
6. 根據(jù)權利要求1-5中一項或多項的化合物，其中 R1代表Ar或Het， R2代表呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻二唑基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑 基、噻唑基、三唑基或四唑基，其未被取代或被A、[C(R3)2]pCyc、[C(R 3)2]pAr、[COajpHet1、 CN 或[C(R3)2]pC00R3 單取代， R3代表Η或甲基， Ar 代表苯基，其未被取代或被 Hal、A、[C (R3) 2] p0R3、NR3C0A、S (0) Jet1 和 / 或 0 [C (R3) 2] pHet1單取代、雙取代或三取代， Het代表吡唑基、二氫吲哚基、喹喔啉基、苯并[1，2, 5]噻二唑基或吡啶基，其未被取代 或被A或[C (R3) 2] P0R3單取代， Het1代表批略燒基、氣雜環(huán)丁燒基、氧雜環(huán)丁燒基、脈陡基、嗎琳基、批P坐基、批陡基或 四氫吡喃基，其未被取代或被A或=0單取代， A代表具有1-10個C-原子的非支鏈或支鏈烷基，其中一個或兩個非相鄰CH-和/或 CH2-基團可以被N-和/或0-原子替代，并且其中1-7個H-原子可以被F或C1替代， Cyc代表具有3-7個C原子的環(huán)烷基，其未被取代或被[C(R3)2]p0H單取代， Hal 代表 F、Cl、或 I， n代表0、1或2， m代表1、2或3， P 代表 〇、1、2、3 或 4， 和其藥學可接受的溶劑化物、鹽、互變異構體和立體異構體，包括其所有比例的混合 物。
7.根據(jù)權利要求1的化合物,其選自

其中R2具有權利要求1所示的含義， 和/或 式I的堿或酸轉(zhuǎn)變?yōu)樗囊环N鹽。
9. 包含至少一種式I化合物和/或其藥學可接受的鹽、溶劑化物、互變異構體和立體 異構體的藥物，包括其所有比例的混合物，以及任選包含藥學可接受的載體、賦形劑或媒介 物。
10. 式I化合物和其藥學可接受的鹽、溶劑化物、互變異構體和立體異構體，包括其所 有比例的混合物，其用于治療和/或預防炎癥性狀況、免疫狀況、自身免疫狀況、過敏性狀 況、風濕性狀況、血栓性狀況、癌癥、感染、神經(jīng)變性疾病、神經(jīng)炎性疾病、心血管疾病和代謝 性狀況，所述方法包括向有需要的受試者施用有效量的權利要求1的化合物。
11. 根據(jù)權利要求10的化合物，其用于治療和/或預防癌癥，其中待治療的癌癥是實體 瘤或血液和免疫系統(tǒng)的腫瘤。
12. 根據(jù)權利要求11的化合物，其中所述實體瘤源自以下的腫瘤：上皮，膀胱，胃，腎， 頭和頸，食管，宮頸，甲狀腺，腸，肝，腦，前列腺，泌尿生殖道，淋巴系統(tǒng)，胃，喉部，骨骼，包括 軟骨和尤因肉瘤，生殖細胞，包括胚胎組織腫瘤，和/或肺，源自單核細胞白血病，肺腺癌， 小細胞肺癌，胰腺癌，成膠質(zhì)細胞瘤，神經(jīng)纖維瘤，血管肉瘤，乳腺癌和/或惡性黑素瘤。
13. 根據(jù)權利要求10的化合物，其用于治療和/或預防疾病，所述疾病選自類風濕關節(jié) 炎、系統(tǒng)性狼瘡、哮喘、多發(fā)性硬化、骨關節(jié)炎、缺血性損傷、巨細胞動脈炎、炎癥性腸病、糖 尿病、囊胞性纖維癥、牛皮癬、Sj0grens綜合癥和移植器官排斥。
14. 根據(jù)權利要求10的化合物，其用于治療和/或預防疾病，所述疾病選自阿爾 茨海默氏病、唐氏綜合征、伴隨淀粉樣變-荷蘭型的遺傳性腦出血、腦淀粉樣血管病、 Creutzfeldt-Jakob病、額顳癡呆、亨廷頓氏病、帕金森氏病。
15. 根據(jù)權利要求10的化合物，其用于治療和/或預防疾病，所述疾病選自利什曼原 蟲、分枝桿菌，包括麻風分枝桿菌、結(jié)核分枝桿菌和/或鳥分枝桿菌、利什曼原蟲、痕原蟲、 人類免疫缺陷病毒、EB病毒、單純皰疫病毒、丙型肝炎病毒。
16. 藥物，其包含至少一種式I化合物和/或其藥學可接受的鹽、溶劑化物和立體異構 體，包括其所有比例的混合物，和至少一種其它藥物活性組分。
17. 套裝（藥盒），所述套裝（藥盒）由以下的獨立包裝組成： (a) 有效量的式I化合物和/或其藥學可接受的鹽、溶劑化物、鹽和立體異構體，包括 其所有比例的混合物， 和 (b) 有效量的其它藥物活性組分。
18. 化合物 [3-(4-甲氧基-苯基）-3Η-[1，2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基]-[4-甲基-5H-噁 唑-(2Z)-叉基]-胺（〃A12〃） 和其藥學可接受的溶劑化物、鹽、互變異構體和立體異構體，包括其所有比例的混合 物。
【文檔編號】A61K31/519GK104066734SQ201280068233
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2012年12月21日 優(yōu)先權日:2012年1月28日
【發(fā)明者】D.多奇, G.赫爾策曼, K.席曼, A.韋格納 申請人:默克專利股份公司